CN103063794B - 一种依帕司他片的含量检测控制方法 - Google Patents
一种依帕司他片的含量检测控制方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种依帕司他片的含量检测控制方法，该方法采用高效液相色谱法检测依帕司他片。本发明通过大量实验优选出最佳的内标化合物，流动相组成，洗脱程序、流速，检测波长和色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的依帕司他片的含量检测控制方法，稳定性和重复性好、分析效率高、分离度好，可以灵敏准确的定性、定量检测依帕司他，从而可以客观、全面、准确的评价依帕司他片的质量，对控制依帕司他片的质量和保证临床疗效具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物制剂的质量控制方法，具体涉及依帕司他片的质量控制方法。
背景技术
扬子江药业集团南京海陵药业有限公司生产的依帕司他片，临床广泛用于糖尿病神经病变。现有技术中的依帕司他片还未有准确可靠，灵敏度高，稳定性好的检测方法。因此为了控制好依帕司他片制剂的临床安全性，维护患者的利益，很有必要在现有技术的基础之上研究设计出能准确检测依帕司他片制剂中有效成分依帕司他片的检测方法。
发明内容
发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种分离效果好，检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确的评价依帕司他片的质量，对控制依帕司他片剂的质量和保证疗效具有重要意义。
技术方案：为了实现以上目的，本发明所提供的依帕司他片的含量检测控制方法，包括以下步骤：
(1)依帕司他片标准品溶液的制备：精密称取20mg依帕司他对照品，分别加入8mL N,N-二甲基甲酰胺和2mL内标液，振摇混匀，然后取2mL该溶液用于N,N-二甲基甲酰胺定容至20mL，即得标准溶液，备用；
以上所述的内标液制备：精密称取1g对羟基苯甲酸丙酯，用N,N-二甲基甲酰胺定容至100mL，即得；
(2)依帕司他片样品溶液的制备：避光条件下，取依帕司他片研磨成粉末，精密称取50mg依帕司他粉末，分别加入20mL N,N-二甲基甲酰胺和5mL内标液，振摇，使之完全溶解，然后吸取2mL该溶液用N,N-二甲基甲酰胺定容至20mL，即得供试品溶液，备用；所述的内标液制备：精密称取1g对羟基苯甲酸丙酯，用N,N-二甲基甲酰胺定容至100mL，即得；
(3)依帕司他片样品中依帕司他片的含量测定：分别精密吸取步骤(1)依帕司他片标准品溶液和步骤(2)依帕司他片样品溶液各3uL，分别注入高效液相进行色谱分析，按内标法计算依帕司他片样品中依帕司他的含量，色谱条件为检测波长：280～290nm，柱温：25～30℃，流动相：体积比为2:1的缓冲液：乙腈，所述的缓冲液为体积比为1：1的0.05mol/L磷酸二氢钾：0.05mol/L磷酸氢二钠，流速：0.7～1.0ml/min。
作为优选方案，本发明提供的依帕司他片的含量检测控制方法，步骤(3)中色谱条件为检测波长：280nm，柱温：25℃，流动相：体积比为2:1的缓冲液：乙腈，所述的缓冲液为体积比为1：1的0.05mol/L磷酸二氢钾：0.05mol/L磷酸氢二钠，用磷酸调缓冲液的pH值为6.5，流速：0.7ml/min。
作为优选方案，以上所述的依帕司他片的含量检测控制方法，步骤(3)所述的高效液相色谱仪为安捷伦1260。
作为优选方案，本发明所述的依帕司他片的含量检测控制方法，步骤(3)所述的反相C18柱为(Agilent)反相C18柱。
依帕司他片在化学结构不稳定，易变化会生成其它杂质，为了严格控制好依帕司他片的质量，制定检测依帕司他片含量的方法，本发明经过大量实验筛选合适的内标化合物，对流动相组成、流动相的洗脱程序、流速、检测波长及色谱柱进行筛选。
1、本发明根据依帕司他片的结构特点，通过大量实验筛选最佳的内标化合物，实验结果表明，对羟基苯甲酸丙酯和依帕司他片具有在相同波长下具有较高的吸收度，且峰不易叠加，分离效果更好。
2、本发明针对依帕司他和对羟基苯甲酸丙酯，通过全波长扫描和3D等高线观察，确定依帕司他片和对羟基苯甲酸丙酯在280nm处有较大的吸收，灵敏度高，因此本发明采用280nm作为检测波长，可以准确灵敏的检测到依帕司他片化合物和对羟基苯甲酸丙酯。
3、依帕司他容易电离成离子状态，导致分离和洗脱效果差，本发明根据依帕司他化学性质，对流动相的组成进行了大量筛选，确定采用体积比缓冲液：乙腈=2:1，所述的缓冲液为0.05mol/L磷酸二氢钾：0.05mol/L磷酸氢二钠=1:1（体积比），并用磷酸调pH值至6.5。，可以保证内标物和依帕司他在色谱柱上达到很好的分离效果，不会出现峰重叠或拖尾现象，而且能保证在色谱柱上有很好的分离度。
3、同时本发明还对流动相的流动速度进行了考察，如流速过快，分离度不够理想，因此本发明分别考察了1.5mL/min、1mL/min、0.8mL/min、0.6mL/min、0.5mL/min、0.4mL/min不同流速，实验结果表明，当流动相的流速为0.7mL/min时，依帕司他的峰形最好、分离度最好，理论塔板数最高，因此本发明采用流动相的流速为0.7mL/min。
4、同时本发明对色谱柱的柱温进行了筛选，考察了色谱柱在20℃、25℃、28℃、30℃和35℃条件下化合物的分离效果，实验结果表明，色谱柱在25℃条件下分离效果最好，分离重复性和稳定性最好。因此本发明采用色谱柱的柱温为25℃。
5、同时本发明对色谱柱也进行了筛选，分别考察了安捷伦(Agilent)反相C18、反相C8柱，Waters反相C18、反相C8柱，实验结果表明，以安捷伦(Agilent)反相C18柱的分离效果最好。因此，本发明以安捷伦(Agilent)反相C18柱作为分析柱。
有益效果：本发明提供的依帕司他片的含量检测控制方法和现有技术相比具有以下优点：
本发明根据依帕司他片注射剂中活性成分结构性质特点，通过大量实验筛选出最佳的内标化合物，最佳的流动相组成，洗脱程序、流速，检测波长、色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的依帕司他片的含量检测控制方法可以灵敏、准确的检测活性成分，因此具有很高的分析效率，可以克服现有检测方法中灵敏度低、准确度低、稳定性差等诸多缺点，且本发明提供的质量检测方法稳定性好，内标物和依帕司他及其它杂质的分离度好，可定性、定量检测分析依帕司他。因此，本发明提供的依帕司他片的含量检测控制方法可以客观、全面、准确的评价依帕司他片的质量，对控制依帕司他片的质量和保证临床疗效具有重要意义。
附图说明
图1为依帕司他片标准品和内标物的高效液相色谱检测分析图。
图2为依帕司他片样品和内标物的高效液相色谱检测分析图。
具体实施方式：
下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施列1依帕司他片的含量检测控制方法的方法学考察
1.1稳定性实验
取依帕司他片样品适量，精密称取20mg依帕司他对照品，分别加入8mLN,N-二甲基甲酰胺和2mL内标液，振摇混匀，然后取2mL该溶液用于N,N-二甲基甲酰胺定容至20mL，即得标准溶液，备用；内标液制备：精密称取1g对羟基苯甲酸丙酯，用N,N-二甲基甲酰胺定容至100mL，即得；分别在0，10，20，30，40，50分钟精密吸取标准液各3uL进行高效液相分析，色谱条件为检测波长：280nm，柱温：25℃，流动相：体积比为2:1的缓冲液：乙腈，所述的缓冲液为体积比为1：1的0.05mol/L磷酸二氢钾：0.05mol/L磷酸氢二钠，用磷酸调缓冲液的pH值为6.5，流速：0.7ml/min。计算峰面积（S）的相对标准偏差。具体实验结果如表1所示。
表1稳定性试验结果
以上稳定性实验结果表明，本发明提供的依帕司他片的含量检测控制方法，稳定性好。
1.2重复性实验
避光条件下，取批号12060601依帕司他片研磨成粉末，精密称取6份50mg依帕司他粉末，分别加入20mL N,N-二甲基甲酰胺和5mL内标液，振摇，使之完全溶解，然后分别吸取2mL该溶液用N,N-二甲基甲酰胺定容至20mL，即得6份供试品溶液，备用；所述的内标液制备：精密称取1g对羟基苯甲酸丙酯，用N,N-二甲基甲酰胺定容至100mL，即得；精密吸取6份供试品溶液各3uL进行高效液相分析，色谱条件为检测波长：280nm，柱温：25℃，流动相：体积比为2:1的缓冲液：乙腈，所述的缓冲液为体积比为1：1的0.05mol/L磷酸二氢钾：0.05mol/L磷酸氢二钠，用磷酸调缓冲液的pH值为6.5，流速：0.7ml/min。测量6份依帕司他片样品中依帕司他片的含量。具体实验结果如表2所示：
表2重复性试验结果
| 样品编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD（%） |
| 依帕司他 | 1075 | 1065 | 1070 | 1063 | 1017 | 1078 | <2.0% |
| 内标物（S） | 1185 | 1190 | 1188 | 1178 | 1184 | 1170 | <2.0% |
以上重复性实验结果表明，本发明提供的依帕司他片的检测方法的重复性好。
实施列2依帕司他片的含量检测控制方法，包括以下步骤：
(1)依帕司他片标准品溶液的制备：精密称取20mg依帕司他对照品，分别加入8mL N,N-二甲基甲酰胺和2mL内标液，振摇混匀，然后取2mL该溶液用于N,N-二甲基甲酰胺定容至20mL，即得标准溶液，备用；
以上所述的内标液制备：精密称取1g对羟基苯甲酸丙酯，用N,N-二甲基甲酰胺定容至100mL，即得；
(2)依帕司他片样品溶液的制备：分别精密取扬子江药业集团南京海陵药业有限公司生产的依帕司他片5批（12060601、12060701、12060801、12060902、12061003）内容物，分别研细，然后分别精密称取5批依帕司他粉末各50mg，分别加入20mL N,N-二甲基甲酰胺和5mL内标液，振摇，使之完全溶解，然后吸取2mL该溶液用N,N-二甲基甲酰胺定容至20mL，即得供试品溶液，备用；所述的内标液制备：精密称取1g对羟基苯甲酸丙酯，用N,N-二甲基甲酰胺定容至100mL，即得；
(3)依帕司他片样品中依帕司他片的含量测定：分别精密吸取步骤(1)依帕司他片标准品溶液和步骤(2)的5批依帕司他片样品溶液各3uL，分别注入高效液相进行色谱分析，色谱图分别如图1和图2所示，然后按内标法计算依帕司他片样品中依帕司他的含量，色谱条件为检测波长：280nm，柱温：25℃，流动相：体积比为2:1的缓冲液：乙腈，所述的缓冲液为体积比为1：1的0.05mol/L磷酸二氢钾：0.05mol/L磷酸氢二钠，流速：0.7ml/min。具体实验结果如表3所示。
表3依帕司他片中依帕司他片的检测结果
由表1、表2和表3的实验结果表明，本发明提供的依帕司他片的检测方法，内标物和依帕司他分离度高，灵敏度高，相比现有技术，本发明提供的依帕司他片的含量检测控制方法稳定性和重复性好，可以客观、全面、准确的评价依帕司他片的质量，对控制依帕司他片的质量和保证临床疗效具有重要意义。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种依帕司他片的含量检测控制方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)依帕司他片标准品溶液的制备：精密称取20mg依帕司他对照品，分别加入8mL N,N-二甲基甲酰胺和2mL内标液，振摇混匀，然后取2mL该溶液用于N,N-二甲基甲酰胺定容至20mL，即得标准溶液，备用；
以上所述的内标液制备：精密称取1g对羟基苯甲酸丙酯，用N,N-二甲基甲酰胺定容至100mL，即得；
(2)依帕司他片样品溶液的制备：避光条件下，取依帕司他片研磨成粉末，精密称取50mg依帕司他粉末，分别加入20mL N,N-二甲基甲酰胺和5mL内标液，振摇，使之完全溶解，然后吸取2mL该溶液用N,N-二甲基甲酰胺定容至20mL，即得供试品溶液，备用；所述的内标液制备：精密称取1g对羟基苯甲酸丙酯，用N,N-二甲基甲酰胺定容至100mL，即得；
(3)依帕司他片样品中依帕司他片的含量测定：分别精密吸取步骤(1)依帕司他片标准品溶液和步骤(2)依帕司他片样品溶液各3uL，分别注入高效液相进行色谱分析，按内标法计算依帕司他片样品中依帕司他的含量，色谱条件为检测波长：280～290nm，柱温：25～30℃，流动相：体积比为2:1的缓冲液：乙腈，所述的缓冲液为体积比为1：1的0.05mol/L磷酸二氢钾：0.05mol/L磷酸氢二钠，用磷酸调pH为6.5，流速：0.7～1.0ml/min，色谱柱：反相C18柱。
2.根据权利要求1所述的依帕司他片的含量检测控制方法，其特征在于，步骤(3)中色谱条件为检测波长：280nm，柱温：25℃，流动相：体积比为2:1的缓冲液：乙腈，所述的缓冲液为体积比为1：1的0.05mol/L磷酸二氢钾：0.05mol/L磷酸氢二钠，用磷酸调pH为6.5，流速：0.7ml/min。
3.根据权利要求1所述的依帕司他片的含量检测控制方法，其特征在于，步骤(3)所述的反相C18柱为安捷伦反相C18柱。
4.根据权利要求1所述的依帕司他片的含量检测控制方法，其特征在于，步骤(3)所述的高效液相色谱仪为安捷伦1260。
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