CN1058260C - Nα－2－(4－硝基苯磺酰)乙氧羰基－氨基酸 - Google Patents

Nα－2－(4－硝基苯磺酰)乙氧羰基－氨基酸 Download PDF

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Abstract

Nα-2-(4-硝基苯磺酰)乙氧羰基-氨基酸衍生物用分子式I表示：
式中：R1是氢原子，R2可为氢，甲基，异丙基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，叔-丁氧基甲基，1-叔-丁氧基乙基，2-甲基硫代乙基，苄基，酰胺基甲基，2-酰脘基乙基，叔-丁氧基羰基甲基，2-(叔-丁氧基羰基)乙基，4-(叔-丁氧基酰胺基)丁基，4-叔-丁氧基苄基，吲哚基-3-甲基，S-(三苯基甲基)硫代甲基，1-(三苯基甲基)咪唑基-4-甲基，(-3NG-莱磺酰基)胍基丙基，N-占吨基酰胺基甲基，2-(N-占吨基酰胺基)乙基或S-(乙酰胺甲基)硫代甲基；或者，R1和R2合为烯丙基团。该衍生物的制备方法及用该衍生物进行固相肽合成的过程。

Description

Nα-2-(4-硝基苯磺酰)乙氧羰基-氨基酸
本发明涉及一种被护氨基酸衍生物，该衍生物的合成法及利用该衍生物进行固相肽合成的反应过程。
具有生物活性的肽可以用于医学和生物学研究，也可以作为药学、兽医和诊断上的活性物质，目前其制备广泛采用固相肽合法的方法。
固相肽合成的实质可以概括为，由被附加到一不溶性载体上的第一个C一端氨基酸开始，通过反复循环的化学反应，逐步增长肽链。在这类合成路线中，多步反应的目标产生一直被链合在所用的载体上，而过多的反应物和副反应，则可以通过过滤和载体的洗涤被除去。
为了完成肽的固相合成，第一个带有被护α一氨基的氨基酸(目标氨基酸序列的C一端)，通过其与一个不溶性高分子载体上的自由α-羰基成酰键或酰胺键，共价键合到该载体。然后，Nα-保护基从所得到的Nα-被护氨酰基-高分子上选择性地被消除，于是得到具有自由的氨基的氨酰基-高分子。这个高分子进一步与下一个Nα-被护氨基酸酰化，子是得到Nα-被护二肽-高分子。这样合成的循环，即，消除Nα-保护基，接着这个自由的氨基与跟随的Nα-被护氨基酸酰化，不断重复，直到得到目标氨基酸序列的集合体。
在实际固相合成中，为了保证全部转化，酰化试剂通常需要大摩尔过量(2～10倍)，因此在氨基酸侧健上的所有活性基团，如胺基、羰基、羟基、巯基、胍基要用适当的保护基团封端。用于该目的的保护基团必须谨慎地选择，以使在肽-高分子酰化条件下和消除临时的Nα-保护过程中，这些侧键可靠永久地被保护。另外，这些侧链保护基团必须在一或两步反应中定量地不保护合成的肽，并且不破坏其结构。在大多数情况下，肽-高分子之间的链也会被同时消除。很明显，既要根据被护活性基团的性质，很大程度上也要根据所用的临时Nα-保护基团的化学性质和结构来确定氨基酸侧链永久保护基团的化学性质和结构。因此，临时Nα-保护是整个固相肽合成的关键要素。
在固相肽合成中广为人知和广泛应用的是由R.B.Merrified inBiochemistry，1964，V.3，p.1385报导的Nα-叔-丁氧基羰基氨基酸(Boc-氨基酸)。利用中等强度的酸性试剂，例如，三氟乙酸及它的氯代烷溶液，溶在有机溶剂中氯化氢溶液，三氟化硼/乙醚混合物和其它酸，可以消除叔-丁氧基(Boc)，同时生成异丁烯和二氧化碳。
用于侧链永久保护以及Nα-Boc保护的保护基团在Nα-Boc消除时是稳定的，但可为更强的酸消除，并伴随肽-高分子之间的键的断开。用于该目的的已知试剂有液态氟化氢、三氟甲基硫酸及它们与苯甲醚、硫代苯甲醚、硫酸二甲酯的混合物。使用临时的Nα-Boc-保护基的合成路线的主要缺陷是消除临时和永久性保护均用酸解，而它不能保证永久性保护的稳定性。伴随合成肽的增长，永久性保护基团在Boc消除阶段不断受到酸性试剂的进攻，这样能够引起这些基团的部分减少，而且增加副反应。除此之外，最终用超强酸对组织在一起的肽-高分子进行处理会引起目标肽的部分破坏。还值得注意的是，超强酸是极危险的，在操护过程中它需要特殊的设备和适当的安全检测。
为了避免在最终肽解保护时使用超强酸，目前有12种高酸性基团被用于临时Nα-保护，它们可以认为与利用中等强度酸消除所谓叔-丁基型的永久性保护相一致。例如，在Collect.Czech.Chem.Cokmmun.，1992，V.57，p.1707中描述了1-(3，5-二叔丁基苯基)-1-甲基-乙氧羰基(叔-Bumeoc)基团，该基团可以用1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液消除，并且可以与叔-丁基型永久性保护基团一起使用，后者可为纯三氟乙酸或其浓溶液所消除。这样就避免使用超强酸，但酸解差别的一般原则仍然保持不变。
R.B.Merrifield in Science，1986，V.232，p.341中提出了另一种固相肽合成路线，这种称之为″正交规则″的方法是根据临时和永久性保护可为相应于完全不同的化学机理的完全不同的试剂消除这一假定，即临时Nα-保护可以绝对选择性的消除，并保证永久性保护完全保留，反之亦然。目前，这种″正交规则″已作为发展固相肽合成有效路线的准则被普遍采用。
在Int.J.Peptide and Protein Res.，1987，V.30.p.740文献中报导，将Nα-二硫杂琥珀酰基氨基酸(Dts-氨基酸)应用于固相肽合成是″正交规则″的一个应用实例。Nα-二硫杂琥珀酰基(Dts)保护基团是非常耐中等强度的酸性试剂，却很容易在自然介质中为含硫代基试剂消除并释出氨基生成硫氧化碳(Carbonthiooxide)。由于Dts-氨基酸的合成缺乏有效的方法，因而限制了该方法的应用。
最广为人知且广泛应用的″正交规则″的固相肽合成路线是使用如C.D.Changand J.Meienhofer in lnt.J.Peptide and Protein Res.，1975，V.11，p.246所报导的Nα-9-芴基甲氧基羰基氨基酸(Fmoc-氨基酸)。Nα-9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)耐酸性试剂，却可在非质子性溶剂中用有机碱，例如，吗啉、二乙胺、哌嗪或哌啶在二甲基甲酰胺(DMF)或二氯甲烷根据β-消除机理除去。其氨基被释出，并且生成CO2与二苯并富烯，在固相合成中，将Nα-被护肽-高分子在含20～50％哌啶的DMF溶液中处理10～30分钟，Fmoc基团可以完全消除，该条件允许叔-丁基型永久酸的灵敏的保护与临时Nα-Fmoc-保护一起使用，因此提供了合成路线的″正交性″。
Nα-Fmoc-氨基酸被广泛用于手动固相肽合成，也可以用在多种类型的自动和半自动合成装置中。然而，应该注意，Nα-Fmoc-保护的极碱敏性及其在自然非质子性溶剂的略微的不稳定性，要求谨慎地控制酰化条件和所用药品的纯度，特别是用该氨基酸合成长度大子30的多肽。此外，产品相对高的价格限制了Fmoc-衍生物在大规模肽生产上的应用。
本发明的目的是开发出一种新型Nα-被护的氨基酸衍生物，它可以作为发展固相肽合成的有效路线。具体地说这种氨基酸衍生物是Nα-2-(4-硝基苯磺酰基)乙氧羰基-氨基酸(Nα-Nsc-氨基酸)，其分子式I为：
Figure C9619191300061
式中：R1是氢原子，R2可为氢，甲基，异丙基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，叔-丁氧基甲基，1-叔-丁氧基乙基，2-甲基硫代乙基，苄基，酰胺基甲基，2-酰脘基乙基，叔-丁氧基羰基甲基，2-(叔-丁氧基羰基)乙基，4-(叔-丁氧基酰胺基)丁基，4-叔-丁氧基苄基，吲哚基-3-甲基，S-(三苯基甲基)硫代甲基，1-(三苯基甲基)咪唑基-4-甲基，3-(NG-磺酰基)胍基丙基，N-呫吨基酰胺基甲基，2-(N-呫吨基酰胺基)乙基或S-(乙酰胺甲基)硫代甲基；或者，R1和R2合为烯丙基团。
上述化合物作为Nα-被护氨基酸衍生物，可以用于固相肽合成。
本发明的另一目的是提供制备该Nα-Nsc-氨基酸的方法。本发明的第三个目的是提供一种用该Nα-Nsc-氨基酸的固相肽合成的过程。上述目的及本发明的其它目的将在下面给予论述。
本发明的Nα-Nsc-氨基酸可以通过分子式如II所表示的氨基酸(式中R1和R2代表的意义与分子式1中相同)与2-(4-硝基苯磺酰)氯甲酸乙酯III，在水-有机混合溶剂中于0～40℃(最好为0～20℃)用碱处理得到，其反应如下式：
氯甲酸酯III以相对氨基酸0.5～1.5摩尔当量(最好为0.7～0.9)引入反应体系。所用的溶剂可以是任何能溶解酰化剂并能与水相混合的非质性溶剂，如乙腈，DMF，四氢呋喃或二噁烷。碱可以是有机或无机碱，例如，碳酸钠或钾、氧化镁或钙、三乙胺、N-甲基吗啉。
本发明的另-方法是，具有分子式II的氨基酸首先用已知方法转化为N，O-双-三甲基甲硅烷基衍生物IV，然后在无水溶剂中，如二氯甲烷，与氯甲酸酯III反应。中间产物三甲基甲硅烷基衍生物水解后，得到自由的欲制的Nα-Nsc-氨基酸I，其过程如下式：
Figure C9619191300072
如果分子式I的衍生物中R1是氢，R2是N-呫吨基酰胺基甲基或2-(N-呫吨基酰胺基)乙基时，那么在酸性存在下，利用分子式I的衍生物，这时R1为氢，而R2为酰胺基甲基或2-(酰胺基)乙基，与呫吨氢醇在非质子性溶剂中反应可以制得。在该反应中可以用DMF为溶剂，而比较好的酸是有机酸，例如三氟乙酸、甲基硫酸或对甲苯磺酸。
由分子式I可知，化合物I有一个不对称α-碳原子(除非R1＝R2＝H)，由于α-碳原子不参于制备化合物I的反应，所以存在于氨基酸II的这个手性碳的构型保持在所制Nα-Nsc-衍生物I中。因此很明显，本发明中的方法可以制备任何手性构型(L或D)，以及内消旋的Nα-Nsc-氨基酸I，这些构型取决于起始物II的构型。
本发明中分子式I型衍生物的R1和R2取代基与含有或不含有保护基团的天然氨基酸的侧链结构相同。这些保护基团为权-丁基型或消除条件与其相似，如表1如述。
很明显表1给出的分子式I型化合物是合成具有任意氨基酸组分的肽所需的被护蛋白基因的氨基酸衍生物总汇。此外，它尚有另一种基本保护类型的氨基酸Nα-Nsc-衍生物和非基因或特殊氨基酸的Nα-Nsc-衍生物也可以用该方法合成。
Nα-Nsc-氨基酸I是结晶化合物，不溶于或微溶于水，可溶于有机溶剂，在-10℃～25℃可以长时间保存。
本发明提出了用分子式I型的Nα-Nsc-氨基酸进行固相肽合成的过程。在这个过程中，第一个Nα-Nsc-氨基酸(目标氨基酸序列的碳端)通过其自由的α-羧基与不溶的高分子载体成酯链或酰胺键，共价键合到该载体，生成Nα-Nsc-氨基酸-高分子。可以用作高分子载体的高分子有交联或大孔聚苯乙烯，粒状或与硅藻土复合交联聚N，N-二甲基丙烯酰胺，交联葡聚糖，纤维，纸和其它在本领域中已知的高分子。
为了连接第一个Nα-Nsc-氨基酸，高分子载体应含有适当的锚定基团，在大量的示例中，这些锚定基团很完美。它们在与三氟乙酸或它的溶液或氯化氢的有机溶液之类酸性试剂作用下，可以使所合成的肽从高分子载体上分裂出来，释出碳端的羧基或酰胺基。用于成酯型的锚定基团可以是4-羟基甲基酚氧基、4-氯或4-溴甲基酚氧基烷基，α-羟基二酚基-甲基和其它己知基团。用于成酰胺型的锚定基团是二或三烷氧基二苯甲胺基，4-胺甲基-3，5-二甲氧基酚氧基烷基和其它可以用于此目的的已知基团。
将碳端Nα-Nsc-氨基酸连结到高分子载体的锚定基团上可以通过众所周知的方法实现。
为了将Nα-保护基团从所得到的Nα-Nsc-氨酰基-高分子上除去，用碱试制作用该被护氨酰基-高分子。用于此目的的碱试剂最好是含氮原子的碱基，例如氨、吗啉、哌啶、哌嗪、二乙胺、1，8-二氮杂二环[5，4，0]十一-7-烯、1，1，3，3-四甲基胍和它们在非质子性有机溶剂中，更理想的碱试剂是20～50％的DMF的哌啶溶液。本例中，Nsc-基团消除的同时，伴随N-[2-(4-硝基苯磺酰)乙基]哌啶和二氧化碳生成，释放出α-氨基。
这个带有自由α-氨基的氨基酰基-高分子与下一个Nα-Nsc-氨基酸进一步酰化，得出Nα-Nsc-二肽-高分子。如此，酰化时，可选用的试剂有4-硝基苯基，五氯化苯基，五氟化苯基，1-羟基苯并三唑基的Nα-Nsc-氨基酸酯和其它可用于固相肽合成的已知活泼酯，Nα-Nsc-氨基酸的对称酸酐。酰化也可以在已知的偶联剂如，双环已基二酰亚胺，二异丙基二酰亚胺，苯并三唑基-1-氧代-(三个-二甲胺基)鏻六氟磷酸盐中与Nα-Nsc-氨基酸反应实现。
包含Nα-Nsc-基团消除以及自由氨基与跟随的Nα-Nsc-氨基酸的酰化合成循环反应可以重复进行直到完成目标氨基酸的集合体为止。
在所需Nα-Nsc-肽-高分子的集合体完成之后，Nα一端保护基团可以用前面所述的方法除去。大量实验表明，目标肽从载体上的锚定基团上的分离不会引起永久性保护基团由氨基酸侧链的除去。为此，用于消除叔-丁基型保护基团的酸试剂可以利用如三氟乙酸、甲磺酸溶液或对甲苯磺酸，它们可以包含或不包含捕获生成正碳离子的已知添加剂，例如水、苯甲醚、苯甲硫醚、硫酸二甲酯、乙二硫赶-1，2-三异丙基硅烷。
目标肽能用任意方法封端而不会引起高分子载体的脱去。所以用于此类实验的锚定基团应该保证生成耐酸的肽-高分子键合。
与Fmoc相比，Nsc-基团更耐碱试剂，并且在相同条件下，其消除速度要慢很多。但是固相合成拟定除去Nα-保护基团的时间(15～20分钟)，足够用于将Nα-Nsc-基团，利用20～50％的哌啶DMF溶液之类的碱液从被护肽-高分子上定量消除。另外，Nsc-基团的耐碱性使其在中性和弱碱性介质中具有令入称适的稳定性，可以更好地实现酰化反应。
综上所述，利用碱试剂在有耐有机碱叔-丁基型保护基存在下，Nsc-基团可以被消除。此外，Nsc-基团非常耐通常用于消除叔-丁基型保护基团的酸试剂的进攻。因此，应用通式为分子式I的Nα-Nsc-氨基酸，其侧链会有非常好的叔-丁基型保护基团或在消除条件与它们类似的保护基团，可以开发出符合″正交规则″的固相肽合成。
下面将通过实例对本发明进行描述，这些实例只作为说明本发明而不是对本发明进行限制。在下述描述中除非另加注释之外，所有氨基酸均为L-构型的氨基酸。
实例1  Nα-Nsc-天冬酰胺(I-10)
将3.95g天冬酰胺与7.7g碳酸钾溶于100ml水-二噁烷(体积比为3∶1)混合溶剂中，将该溶液在冰浴中冷却。在不断搅拌下，于15分钟内，将7.5g2-(4-硝基苯磺酰基)氯甲酸乙酯III滴入溶于70ml二噁烷中，除去冰浴，将上述两溶液混合，并继续搅拌20分钟，然后减压浓缩成100ml后，转移到分液漏斗，加入100ml水，所得溶液用50mlo酸乙酯萃取二次。除去水层，用40％硫酸酸化，然后在冰浴中冰却。30分钟后，过滤出沉淀物，用大量冰冷却水洗涤，自然干燥，所得产物I-10是白色结晶粉末(71％)，其表征见表2(实例5)。
实例2  Nα-Nsc-白氨酸(I-5)
在装有四流冷凝管和滴液漏斗的250ml圆底烧瓶中加入4.92g白氨酸和90ml无水二氯甲烷。在剧烈搅拌下，9.5ml三甲基氯硅烷加入上面的悬浊液中，混合物加热沸腾1小时。所得溶液，用冰浴冷却，然后将9.1ml三乙胺和9.0g氯甲酸酯III在搅拌下加入。混合物在冰浴下搅拌20分钟，在室温继续搅拌1.5小时。减压除去溶剂，残余物在200ml乙酸乙酯与250ml 2.5％硫酸钠水溶液之间分配。除去水层，用50ml乙醚洗涤，然后用1N盐酸酸化到pH2，再用70ml乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，用已烷-乙酸乙酯重结晶残余物，得到白色粉末(80％)的产品I-5。其表征见表2(实例5)。
实例3  Nα-Nsc-天冬氨酸β-叔丁酯(I-12)
在装有四流冷凝管和滴液漏斗的250ml圆底烧瓶中加入7.09g天冬氨酸β-叔丁酯和90ml无水二氯甲烷。在剧烈搅拌下，向该混合物中加入12.7ml二异丙基乙基胺，再加入9.5ml三甲基氯硅烷。混合物加热沸腾1.5小时。用冰浴冷却反应混合物，立刻加入9.0g氯甲酸酯III，在室温搅拌1.5小时。减压除去溶剂，残余物在200ml乙酸乙酸和250ml 2.5％碳酸钠水溶液间分配。除去水层，用50ml乙醚洗涤，再用1N HCl酸化到pH2，然后用70ml乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂。残余物用乙烷-乙酸乙酯重结晶得到白色晶状粉末(86％)的产物I-12。其表征见表2(实例5)。
实例4  Nα-Nsc-N-呫吨基-天冬酰胺(I-20)
将3.98g Nα-Nsc-天冬酰胺(I-10)和2.6g呫吨醇溶于20ml干燥过的DMF中，向该溶液加入0.4ml甲基硫酸，该混合物在室混静置2天。然后在搅拌下将所得混合物倒入100ml冰冷水中，过滤沉淀物，用水洗再分别用乙酸乙酯和乙醚洗涤。粗产物渗入10ml DMF，过滤，用乙醚再沉淀。过滤收集沉淀物，用乙醚洗涤，在真空下干燥制得晶状粉末(74％)的产物I-20。其表征见表2(实例5)。
实例5  Nα-Nsc-氨基酸I的性质
表2列出了用实例1～4中详尽描述的方法制备的如分子式I型化合物。表中方法一栏中的数字对应于描述特殊方法的实例号。特性旋光度[a]D 25用10cm小池在DIP-320旋光度(JASCO，日本)测出，熔点用开放式量热器测定且来校正。色谱流动值R1由Alnfolien硅胶的F254(Merck，Darmstadt，德国)的薄层色谱条给出；氯仿/甲酸/乙酸，95∶5∶3(A)和苯/丙酮/乙酸，100∶50∶3(B)是所用淋洗溶剂。斑点用紫外吸收和/或茚满三酮反应进行检测。以Cf252辐射-促进解吸作用的MS-BC-1时间正行质谱仪(Electro SPA，Sumy，Vkraine)测定分子离子质量。
实例6  十二肽固相合成
Ala-Ser-Ser-Thr-Ile-Ile-Lys-Phe-Gly-lle-Asp-Lys
a)在多分子载体上嵌入锚定基团
向溶于3ml DMF的250mg胺甲基化的苯乙烯-1％二乙烯基苯的共聚物加入0.75mmol的2，4，5-三氯苯基-4-羟甲基苯氧基丙酸酯和0.75mmol 1-羟基苯并三唑，然后该悬浮液在室温震摇24小时。过滤出的高分子用DMF，乙酸，乙醚，最后用已烷洗涤，用五氧化磷在真空下干燥24小时。
b)Nsc-Lys(Boc)-OH与锚定基团键合
所得高分子在4ml 1，2-二氯甲烷/N-甲基吡咯烷(3∶1)混合溶剂中溶胀，将0.75mmol的Nsc-Lys(Boc)-OH(I-14)，0.1mmol 4-二甲基胺吡啶和0.75mmol的二环己烷碳化二亚胺加入。该悬浮液在室温震摇24小时。过滤出的高分子用氯仿，氯仿/甲醇(1∶1)混合溶剂，乙醇，乙醚，最后用已烷洗涤干燥后得400mg Nsc-Lys(Boc)-高分子。
c)肽集合体
Nsc-Lys(Boc)-高分子(200mg)盛于底部有聚丙烯玻璃的10ml聚丙烯注射器中，注射器中的高分子用DMF洗，然后进一步的合成循环按如下实验方案进行。
1.预先洗涤  33％  哌啶/DMF，4ml；0.5分钟。
2.去封端    33％  哌啶/DMF，4ml；15分钟。
3.洗涤      DMF   6×(4ml；1分钟)。
4.酰化      Nα-Nsc-氨基酸I，0.5mmol；苯异三唑基-1-氧-(三
            个二甲基胺)鏻六氟磷酸盐，0.5mmol；1-羟基苯三唑，
            0.5mmol；N-甲基-吗啉，0.75mmol；DMF，2ml；60
            分钟(对于Nsc-Ile-OH；90分钟)。
5.洗涤      DMF，5×(4ml；1分钟)。
Nα-Nsc-氨基酸按如下顺序被引入合成循环。
Nsc-Asp(OtBu)-OH，Nsc-Ile-OH，Nsc-Gly-OH，Nsc-Phe-OH，Nsc-Lys(Boc)-OH，Nsc-Ile-OH，Nsc-Ile-OH，Nsc-Thr(tBu)-OH，Nsc-Ser(tBu)-OH，Nsc-Ser(tBu)-OH，Nsc-Ala-OH。
目标氨基酸序列集合体完后，肽-多分子用33％哌啶/DMF 4ml处理20分钟，然后用DMF，二氯甲烷，乙醇，乙醚最后用已烷洗涤。
d)去端基
多肽-高分子在室温与5ml 50％的三氟乙酸的1，2-二氯乙烷溶液一起震摇。过滤出的多分子用5ml 50％的三氟乙酸的1，2-二氯乙烷洗涤，合并洗涤液用100ml冰冷的无水乙醚稀释。滤出的沉淀用乙醚洗涤，真空干燥后，得170mg粗十二肽(用反相高效液相色谱分析仪测得其纯度为70％)。将粗产物溶于30ml1M醋酸中，通过用TSKHW-40F(Merk，Darmstadt，德国)填充的1.5×70cm柱子分离，用相同的缓冲液平衡，洗提，含有纯肽部分被收集，冻干，最终得到目标多肽104mg(41％)，由反相高效液相色谱分析仪估计其纯度大于95％。氨基酸组分(6NHCl在110℃水解24和48小时后)：Asp 1.02(1)；Ser 1.84(2)；Thr 0.93(1)；Glu 0.94(1)；Gly 1.03(1)；Ala 1.00(1)；lle 2.78(3)；Lys 2.04(2)。
      表1  在化合物I中R1和R2表示的物质No     R1  R2                    氨基酸             缩写I-1    H    H                      甘氨酸             Nsc-Gly-OHI-2    H    甲基                   丙氨酸             Nsc-Ala-OHI-3    H    异丙基                 缬氨酸             Nsc-Val-OHI-4    H    1-甲基丙基             异白氨酸           Nsc-Ile-OHI-5    H    2-甲基丙基             白氨酸             Nsc-Leu-OHI-6    H    叔-丁氧基甲基          O-叔丁基-丝氨酸    Nsc-Ser(tBu)-OHI-7    H    1-叔-丁氧基甲基        O-叔丁基-苏氨酸    Nsc-Thr(tBu)-OHI-8    H    2-甲基硫代乙基         蛋氨酸             Nsc-Met-OHI-9    H    苄基                   苯基丙氨酸         Nsc-Phe-OHI-10   H    酰胺甲基               天冬酰胺           Nsc-Asn-OHI-11   H    2-酰胺乙基             谷酰胺             Nsc-Gln-OHI-12   H    叔-丁氧基羰基甲基      天冬氨酸β-叔丁酯  Nsc-Asp(OtBu)-OHI-13   H    2-(叔-丁氧基羰基)乙基  谷氨酸γ-叔丁酯    Nsc-Glu(OtBu)-OHI-14   H    4-(叔-丁氧基酰胺基)    Nε-叔-丁氧基     Nsc-Lys(Boc)-OH
        丁基                   羰基-赖氨酸I-15   H    4-叔-丁氧基苄基        O-叔丁基酪氨酸     Nsc-Tyr(tBu)-OHI-16   H    吲哚基-3-甲基          色氨酸             Nsc-Trp-OHI-17   H    S-(三苯基甲基)硫代甲基 S-三苯基甲基-半胱  Nsc-Cys(Trt)-OH
                               氨酸I-18   H    1-(三苯基甲基)咪唑基-  Nτ-三苯基甲基    Nsc-His(Trt)-OH
        4-甲基                 -组氨酸I-19   H    3-(NG-磺酰基)       NG-磺酰基-      Nsc-Arg(Mts)-OH
        -胍基丙基              精氨酸I-20   H    N-呫吨基酰胺基-甲基    N-呫吨基天冬酰胺   Nsc-Asn(Xan)-OHI-21   H    2-(N-呫吨基酰胺基)乙基 N-呫吨基-谷酰胺    Nsc-Gln(Xan)-OHI-22   H    S-(乙酰胺甲基)硫代甲基 S-乙酰胺甲基-半胱  Nsc-Cys(Acm)-OH
                               氨酸I-23   R1+R2＝烯丙基             脯氨酸             Nsc-Pro-OH
             表2    Nα-Nsc-氨基酸I的性质条目  化合物          方法  [a]D 25  熔点℃  Rf(A) Rf(B) 分子离子(M+H)+
                        (cl.DMF)
                                                         计算    实测1     2                3    4          5       6      7       8       9I-1   Nsc-Gly-OH       2    -       152-154  0.40   0.21    333.30  333.4I-2   Nsc-Ala-OH       2    -25.6°    134-136  0.53   0.35    347.32  347.4I-3   Nsc-Val-OH       2    -12.0°    72-74    0.62   0.50    375.38  375.4I-4   Nsc-Ile-OH       2    -13.0°    120-121  0.62   0.52    389.41  389.6I-5   Nsc-Leu-OH       2    -33.0°    160-162  0.68   0.42    389.41  389.7I-6   Nsc-Ser(tBu)-OH  3    +3.3°     109-111  0.68   0.46    419.43  418.9I-7   Nsc-Thr(tBu)-OH  3    -9.0°     64-66    0.68   0.50    433.46  433.2I-8   Nsc-Met-OH       2    -28.7°    88-90    0.65   0.37    407.47  406.9I-9   Nsc-Phe-OH       2    -23.0°    160-163  0.66   0.40    423.42  423.3I-10  Nsc-Asn-OH       1    -1.3°     205-207  0.05   0.05    390.35  390.2I-11  Nsc-Gln-OH       1    -9.7°     192-194  0.10   0.05    404.38  404.3I-12  Nsc-Asp(OtBu)-OH 3    -12.7°    72-75    0.64   0.38    447.44  447.2I-13  Nsc-Gln(OtBu)-OH 3    -17.0°    94-96    0.67   0.38    461.47  461.4I-14  Nsc-Lys(Boc)-OH  3    -11.8°    110-112  0.62   0.35    504.54  505.9I-15  Nsc-Tyr(tBu)-OH  3    -6.3°     82-84    0.68   0.44    495.53  495.2I-16  Nsc-Trp-OH       3    -14.7°    188-190  0.53   0.33    462.46  461.7I-17 Nsc-Cys(Trt)-OH   3    +22.3°    108-110  0.75   0.52    621.71  619.3I-18 Nsc-His(Trt)-OH   3    +5.0°     112-115  0.42   0.1     655.71  656.8I-19 Nsc-Arg(Mts)-OH   3    -4.0°     115-120  0.25   0.05    615.68  614.4I-20 Nsc-Asn(Xan)-OH   4    +2.7°     198-200  0.43   0.25    570.56  568.8I-21 Nsc-Gln(Xan)-OH   4    -13.7°    155-158  0.58   0.23    584.58  582.9I-22 Nsc-Cys(Acm)-OH   2    -31.0°    124-126  0.17   0.05    450.47  451.2I-23 Nsc-Pro-OH        2    -31.5°    115-117  0.53   0.37    371.35  371.3

Claims (7)

1.一种Nα-2-(4-硝基苯磺酰)乙氧羰基-氨基酸，其特征是分子式用下式表示：
Figure C9619191300021
式中，R1是氢原子，R2为异丙基，2-甲基丙基，2-甲基硫代乙基，苄基，酰胺基甲基2-酰胺基乙基，4-叔-丁氧基苄基，吲哚-3-甲基，S-(三苯基甲基)硫代甲基，1-(三苯基甲基)咪唑基-4-甲基，3-(NG-基磺酰)胍基丙基，N-呫吨基酰胺基甲基，2-(N-呫吨基酰胺基)乙基或S-(乙酰胺基甲基)硫代甲基；或者R1和R2合为烯丙基团。
2.一种用于权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于是由下分子式表示的氨基酸与2-(4-硝基苯磺酰)氯甲酸乙酯在永-有机混合溶剂中用碱处理而得到，
        HNR1-CHR2-COOH
式中R1和R2所表示的原子团与权利要求1R1和R2相同。
3.一种用于权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于是按下步骤：
a)下分子式表示的氨基酸首先转变成N，O-双-三甲基甲硅烷基衍生物
        HNR1-CHR2-COOH
式中R1和R2所表示的原子团与权利要求1R1和R2相同；
b)然后，N，O-双-三甲基甲硅烷基衍生物在非质子性溶剂中用碱处理与2-(4-硝基苯磺酰)氯甲酸乙酯反应，反应得到中间产物再进行水解得到产品。
4.一种用于权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于化合物中R1为氢原子，R2为N-呫吨基酰胺基甲基或2-(N-呫吨基酰胺基)乙基时，用化合物中R1为氢原子，R2为酰胺基甲基或2-(酰胺基)乙基与呫吨氢醇在非质子性溶剂中用酸处理制得。
5.一种用于以权利要求1所述的化合物作为被护氨基酸单体，通过该被护氨基酸单体被连续加成键合到增长的被护肽链上的方法制备肽的过程，而该肽链键合在不溶性高分子载体上，其特征在于按下步骤：
a)通过上述被护单体的自由羧基，使被护单体C端键合到锚定基团的氨基或羟基上，而该锚定基团已键合到上述高分子载体上，来制得被护氨酰基-高分子；
b)用碱性试剂处理，消除上述被护氨酰基-高分子得到带有自由α-氨基的氨酰基-高分子；
c)使跟随的被护氨基酸单体与上述氨酰基-高分子的自由α-氨基键合得到被护肽-高分子；
d)重复步骤b)和c)，直到最后被护氨基酸单体完全被键合，结束过程b)。
6.按照权利要求5所述的制备肽的过程，其特征在于所述碱性试剂为含氮的碱，其选用氨、吗啉、哌啶、哌嗪、二乙胺、1，8-二氮杂二环[5，4，0]十一-7-烯、1，1，3，3-四甲基胍和它们在非质子性有机溶剂中的溶液。
7.按照权利要求6所述的制备肽的过程，其特征在于所述的含氮的碱为哌啶，有机溶剂为二甲基甲酰胺。
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