PL184205B1 - Nowe Nalfa-2-(4-nitrofenylosulfonylo)etoksykarbonyloaminokwasy i sposób wytwarzania nowych Nalfa-2-(4-nitrofenylosulfonylo) etoksykarbonyloaminokwasów - Google Patents
Nowe Nalfa-2-(4-nitrofenylosulfonylo)etoksykarbonyloaminokwasy i sposób wytwarzania nowych Nalfa-2-(4-nitrofenylosulfonylo) etoksykarbonyloaminokwasówInfo
- Publication number
- PL184205B1 PL184205B1 PL96321864A PL32186496A PL184205B1 PL 184205 B1 PL184205 B1 PL 184205B1 PL 96321864 A PL96321864 A PL 96321864A PL 32186496 A PL32186496 A PL 32186496A PL 184205 B1 PL184205 B1 PL 184205B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- ethyl
- nsc
- general formula
- nitrophenylsulfonyl
- thiomethyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
- C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
- C07C323/57—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
- C07C323/58—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton
- C07C323/59—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton with acylated amino groups bound to the carbon skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
- C07C317/16—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
- C07C317/18—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with sulfone or sulfoxide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
- C07C317/44—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C317/48—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by singly-bound nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
- C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
- C07D473/04—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two oxygen atoms
- C07D473/06—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two oxygen atoms with radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached in position 1 or 3
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
- C07K1/063—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups for alpha-amino functions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
1 N ow e Na -2-(4-nitrofenylosulfonylo) etoksykarbonyloam inokwasy o ogólnym wzorze I w którym R 1 oznacza atom wodoru, a R 2 oznacza izopropyl, 2-m ety lopropy 1,2-m etylotioetyl, benzyl, karboksyam idornetvl,2-kar- boksyam idoetyl, 4-t-butoksybenzyl, indolilo-3-m etyl, S-(trifenylom etylo)tiom etyl, 1-(trifenylom etylo)im idazolilo-4-m etyl, 3-(N -m ezy- tylenosulfonylo)guanidynopropyl, N-ksantylokarboksyam idom etyl, 2-(N-ksantylokarboksyam ido)etyl lub S-(acetam idom etylo)tiom etyl; w zglednie R 1 i R 2 razem oznaczaja grape propylenowa. 2. Sposób w ytwarzania now ych N a -2-(4-nitrofenylosulfonylo)etoksykarbonyloam inokwasow o ogóln ym w zorze I w którym R 1 oznacza atom wodoru, a R 2 oznacza izopropyl, 2-m etylopropyl, 2-m etylotioetyl, benzyl, karboksyam idom etyl , 2-kar- boksyam idoetyl, 4-t-butoksybenzyl, indolilo-3-m etyl, S--(trifenylom etylo)tiom etyl, 1-( trifenylom etylo)im idazolilo-4-m etyl,3-(N -m ezy- tylenosulfonylo)guam dynopropyl, N-ksantylokarboksyamidometyl, 2-(N-ksantylokarboksyam ido)etyl lub S-( acetam idom etylo)tiom etyl, w zglednie R 1 i R 2 razem oznaczaja grupe propylenowa, zn am ien n y tym , Ze am inokwas o ogólnym wzorze H N R 1-CHR2 -COOH PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku są nowe Na-2-(4-nitrofenylosulfonylo)etoksykarbonyloaminokwasy i sposób wytwarzania nowych Na-2-(4-nitrafenylosulfonylo)etoksykarbonyloaminokwasów, użytecznych jako pochodne aminokwasów o zabezpieczonym atomie Na do syntezy peptydów w fazie stałej.
Synteza peptydów w fazie stałej jest powszechnie stosowana do wytwarzania biologicznie czynnych peptydów użytecznych w medycznych i biologicznych pracach badawczych, a także jako substancje czynne w farmacji, weterynarii i diagnostyce.
Istotę syntezy peptydów w fazie stałej można przedstawić jako stopniowe wydłużanie łańcucha peptydu drogą powtarzania cykli reakcji chemicznych, począwszy od przyłączenia pierwszego C-końcowego aminokwasu do nierozpuszczalnego nośnika. Podczas przebiegu syntezy żądane produkty wszystkich reakcji pozostają związane z nośnikiem, podczas gdy nadmiar reagentów i produkty uboczne usuwa się drogą filtracji i przemywania nośnika.
W celu przeprowadzenia syntezy peptydu w fazie stałej, pierwszy aminokwas (C-końcowy aminokwas żądanej sekwencji aminokwasów) z zabezpieczonągrupąa-aminowąkowalencyjnie łączy się z nierozpuszczalnym nośnikiem polimerowym poprzez wolną grupę a-karboksylową z utworzeniem wiązania estrowego lub amidowego. Następnie od tak otrzymanego Na-zabezpieczonego aminoacylo-polimeru selektywnie odszczepia się grupę zabezpieczającą atom Na i otrzymuje się aminoacylo-polimer o wolnej grupie a-aminowej. Ten polimer dalej acyluje się następnym aminokwasem o zabezpieczonym atomie Na i tak otrzymuje się dipeptydylo-polimer o zabezpieczonym atomie Na. Takie cykle syntezy, obejmujące odszczepianie grupy zabezpieczającej atom Na i następnie acylowanie wolnej grupy aminowej następnym aminokwasem o zabezpieczonym atomie Na, powtarza się aż do złożenia kompletnej docelowej sekwencji aminokwasów.
184 205
W praktycznej syntezie peptydów w fazie stałej, dla osiągnięcia pełnej przemiany, zwykle stosuje się duży nadmiar molowy (2 - 10-krotny) środków acylujących, tak więc wszystkie reaktywne grupy w łańcuchach bocznych aminokwasów, takie jak grupa aminowa, karboksylowa, hydroksylowa, tiolowa i guanidynowa, powinno się zablokować odpowiednimi grupami zabezpieczającymi. Te grupy zabezpieczające trzeba w tym celu starannie wybrać dla pewnego i trwałego zabezpieczenia tych łańcuchów bocznych w warunkach acylowania peptydylo-polimeru i podczas odbezpieczania czasowo zabezpieczonego atomu No. Jednakże musi istnieć możliwość ilościowego odbezpieczenia syntetyzowanego peptydu z grupami zabezpieczającymi łańcuchy boczne w jednym lub dwóch etapach nie niszcząc jego struktury. W większości przypadków jednocześnie także powinno rozszczepiać się wiązanie peptydyl-polimer. Jest oczywiste, że struktura i właściwości chemiczne grup całkowicie zabezpieczających łańcuchy boczne aminokwasów są nie tylko określone przez charakter reaktywnego działania zabezpieczającego, lecz również w dużej mierze przez strukturę i właściwości chemiczne stosowanej czasowo grupy zabezpieczającej atom Na.Tak więc czasowe zabezpieczanie atomu No jest kluczowym zagadnieniem całej strategii syntezy peptydów w fazie stałej.
Dobrze znane i szeroko stosowane w syntezie peptydów w fazie stałej są Nrt-butoksykarbonylo-aminokwasy (Boc-aminokwasy), opisane dla takich celów przez R. B. Menifielda w Biochemistry, 1964, V. 3, str. 1385. Grupę t-butoksykarbonylową (Boc) można odszczepiać działając reagentami kwasowymi o średniej mocy, takimi jak kwas trifluorooctowy i jego roztwory w chlorowanych węglowodorach, roztwory chlorowodoru w rozpuszczalnikach organicznych, kompleks fluorku borowego/eteru dietylowego i kilka innych kwasów, z wytworzeniem izobutylenu i ditlenku węgla.
Razem z czasowo zabezpieczającą atom Na grupą Boc, w celu trwałego zablokowania łańcuchów bocznych stosuje się grupy zabezpieczające, które są trwałe podczas odszczepiania zabezpieczającej atom Na grupy Boc, ale mogą być odszczepiane przez mocniejsze reagenty kwasowe z równoczesnym rozszczepieniem wiązania peptydyl-polimer. Znanymi reagentami używanymi do tego celu są ciekły fluorowodór, kwas trifluorometanosulfonowy i ich mieszaniny z anizolem, tioanizolem i dimetylosiarczkiem. Główną wadą tej strategii syntezy z użyciem czasowo zabezpieczającej atom Na grupy Boc jest stosowanie reakcji acydolizy w celu odszczepienia obu grup czasowo i trwale zabezpieczających, co nie zapewnia całkowitej stałości trwałego zabezpieczenia. W miarę wzrostu długości syntetyzowanego peptydu, trwale zabezpieczające grupy ulegają łącznemu działaniu reagentów kwasowych podczas etapów odszczepiania grupy Boc, co może kończyć się częściową utratą tych grup i nagromadzeniem się produktów ubocznych. Poza tym końcowe podziałanie na tak zbudowany peptydylo-polimer reagentami silnie kwasowymi może prowadzić do częściowej destrukcji żądanego peptydu. Należy także wspomnieć, że niezwykle niebezpieczne właściwości silnych kwasów wymagają specjalnego sprzętu i odpowiednich środków bezpieczeństwa podczas manipulowania.
Dla uniknięcia stosowania reagentów silnie kwasowych do końcowego odbezpieczania peptydu, ostatnio zaproponowano kilka wysoce wrażliwych na kwasy grup do czasowej ochrony atomu Na, uważanych za kompatybilne z pełną ochroną bocznego łańcucha, tak zwanego typu t-butylu, odszczepialnych z użyciem reagentów kwasowych o średniej mocy. Przykładem takiej grupy zabezpieczającej atom Na jest grupa 1-(3,5-di-t-butylofenylo)-1-metyloetoksykarbonylowa (t-Bumeoc), opisana w Collect. Czech. Chem. Commun., 1992, V. 57, str. 1707. Grupę t-Bumeoc zabezpieczającą atom Na odszczepia się 1% kwasem trifluorooctowym w dichlorometanie i można ją stosować razem z trwale zabezpieczającymi grupami typu t-butylu odszczepialnymi za pomocą czystego kwasu trifluorooctowego lub jego stężonych roztworów. W tym przypadku wyklucza się stosowanie silnych kwasów, ale ogólne zasady różnicowej acydolizy pozostają wciąż niezmienione.
Inne podejście do strategii syntezy peptydów w fezie stałej przedstawił R B. Merrifield w Science, 1986, V 232, str. 341. Sposób ten zwany „zasacdąortogonalności” opiera się na założeniu, że czasowo i trwale zabezpieczające grupy powinny być usuwalne z użyciem całkowicie różnych
184 205 reagentów według zupełnie odmiennych mechanizmów chemicznych, tak więc grupę czasowo zabezpieczającą atom Na można usunąć z całkowitą selektywnością dostarczającą pełnego zachowania trwałej ochrony i vice versa. Obecnie „zasadę ortogonalności” przyjmuje się za podstawę dla rozwoju skutecznych strategii syntezy peptydów w fazie stałej.
W Int. J. Peptide and Protein Res, 1987, V. 30, str. 740 opisano jako przykład uwzględniający „zasadę ortogonalności” zastosowanie Na-ditiasukcynylo-aminokwasów w syntezie peptydów w fazie stałej. Zabezpieczająca atom Na grupa ditiasukcynylowa (Dts) jest całkowicie odporna na reagenty kwasowe o średniej m^' i łatwo odszczepia sięjąreagentami tiolowymi w środowisku obojętnym z uwolnieniem grupy aminowej i utworzeniem tiotlenku węgla. Zastosowanie Dts-aminokwasów w praktycznej syntezie jest wciąż ograniczone ze względu na brak skutecznych sposobów ich wytwarzania.
Najbardziej znana i szeroko stosowana strategia syntezy peptydów w fazie stałej, zgodna z „zasadą ortogonalności”, opiera się na użyciu Na-9-fluorenylometoksykarbonyloamino-kwasów (Fmoc-aminokwasów), opisanych przez C.D. Changa i J. Meienhofera w Int. J. Peptide and Protein Res, 1975, V. 11, str. 246. Zabezpieczająca atom Na grupa 9-fluorenylo-metoksykarbonylowa (Fmoc) jest odporna na reagenty kwasowe i odszczepia się ją według mechanizmu β eliminacji z użyciem zasad organicznych w rozpuszczalnikach aprotonowych, np. morfoliny, dietyloaminy, piperazyny lub piperydyny w dimetyloformamidzie (DMF) lub dichlorometanie, z uwolnieniem grupy aminowej i powstaniem dibenzofulwenu i CO2. W syntezie w fazie stałej odszczepianie grupy Fmoc korzystnie prowadzi się działając na peptydylo-polimer o zabezpieczonym atomie Na 20 - 50 % roztworem piperydyny w DMF w ciągu 10-30 minut. Warunki te pozwalają na zastosowanie trwałego zabezpieczenia grupą typu t-butylu wrażliwą na kwasy razem z czasowym zabezpieczeniem atomu Na grupą Fmoc, tak więc zapewniając „ortogonalność” strategii syntetycznej.
Na-Fmac-aminokwasy powszechnie stosuje się w manualnej syntezie peptydów w fazie stałej, jak również we wszelkiego typu automatycznych i półautomatycznych syntetyzatorach. Jednakże należy zauważyć, że wyjątkowa podstawowa wrażliwość zabezpieczenia atomu Na grupą Fmoc i pewna jego nietrwałość w obojętnych rozpuszczalnikach aprotonowych wymaga dokładnej kontroli warunków acylowania, a także czystości stosowanych rozpuszczalników. Szczególnie należy uważać podczas stosowania Na-Fmoc-aminokwasów w syntezie peptydów o długości powyżej 30 reszt aminokwasów. Poza tym, stosunkowo wysoki koszt wytwarzania ogranicza użycie Fmoc-pochodnych do wytwarzania peptydów na szeroką skalę.
Zatem istniała potrzeba dostarczenia nowych pochodnych aminokwasów o zabezpieczonym atomie Na, które mogą być użyteczne w rozwoju skutecznych strategii syntezy peptydów w fazie stałej. Obecnie nieoczekiwanie stwierdzono, że nowa grupa pochodnych aminokwasów doskonale nadaje się do stosowania w syntezie peptydów w fazie stałej.
Wynalazek dotyczy nowych Na-2-(4-nitrofenylosulfony'o)eeoksykrur>onyloaminokwasów o ogólnym wzorze I
II
II
-S-CH2—ch2-o-c-nr, -chr2 COOH o w którym R, oznacza atom wodoru, a R2 oznacza izopropyl, 2-metylopropyl, 2-metylotioetyl, benzyl, karboksyamidometyl, 2-karboksyamidoetyl, 4-t-butoksybenzyl, indolilo-3-metyl, S-(trifenylometylo)tiometyl, 1-(trifenylometylo)imidazolilo-4-metyl, 3-(NG-mezytylenosulfonylo)guanidynopropyl, N-ksαntylokjrboksyjmidometyl, 2-(N-ksantylok03okąyamido)etyl lub S-(acetamidometylo)tiometyl; względnie R1 i R2 razem oznaczają grupę propylenową.
184 205
Sposób wytwarzania nowych Na-2-(4-nitrofenylosulfonylo)etoksykarbonyloaminokwasów o ogólnym wzorze I, w którym Rt i R2 mająwyżej podane znaczenie, polega na tym, że aminokwas o ogólnym wzorze
HNR1-CHR2-COOH w którym R, i R2 mająwyżej podane znaczenie, poddaje się reakcji z chloromrówczanem 2-(4-nitrofenylosulfonylo)etylu w mieszaninie rozpuszczalnika organicznego i wody w obecności zasady, temperaturze 0 - 4o°C, względnie
a) aminokwas o ogólnym wzorze
HNR,-CHR2-COOH w którym R, i R2 mają wyżej podane znaczenie, przeprowadza się w pochodne O,N-tnmetylosililowane;
b) te pochopnc Ο,Ν-tometyloselilowane poddaje się reakęj i ea chloromrówczanem a-(4-nitrofenyIosulfonylo)etylu w bezwodnym rozpuszczalniku organicznym w obecności zasady, a następnie prowadzi się hydrolizę.
Sposób wytwarzania nowych Na-2-(4-nitrofenylnsulfonyln)etoksykarbnnylnaminokwasów o ogólnym wzorze I, w którym R, oznacza atom wodoru, a R2 oznacza N-ksantylokarbnksyamidometyl lub 2-(N-ks2ntyloCαaboCsy2midn)elyr, polega na tym, że związek o ogólnym wzorze I, w którym R, oznacza atom wodoru, a R2 oznacza k2aboksyamldomelyl lub 2-(kαaboCsy2mido)elyl, poddaje się reakcji z 9-hydroksyksa.ntenem w rozpuszczalniku organicznym w obecności kwasu.
Na-Nsc-aminokwasy o wzorze I można wytwarzać działając na aminokwasy o ogólnym wzorze II, w którym R, i R2 mają znaczenie podane dla wzoru I, chloromrówczanem 2-(nitaofenylosulfonylo)etylu o wzorze III w mieszaninie rozpuszczalnika organicznego i wody w obecności zasady i w temperaturze 0 - 40°C, korzystnie 0 - 20°C (schemat 1).
HNR1-CHR2-COOH + O2N II
O O
II II s—ch2-ch2-o-c-ci
Schemat 1
W reakcji stosuje się chloromaówhran 2-(nilrofenylosulfonyro) etylu o wzorze III w ilości 0,5 -1,5, korzystnie 0,7 - 0,9 równoważników molowych w stosunku do aminokwasu. Jako organiczny składnik rozpuszczalnika można stosować dowolny organiczny rozpuszczalnik aprotonowy, zdolny do rozpuszczania środków acylujących i mieszający się z wodą np. acetonitayl, DMF, tetrahydrofuran lub dioksan. Zasadą może być organiczna lub nieorganiczna zasada, np. węglan sodowy lub magnezowy, tlenek magnezowy lub wapniowy, trietyloamina i N-metylomorfolina.
Zgodnie z innym sposobem według wynalazku, aminokwasy o ogólnym wzorze II najpierw przeprowadza się stosując znane sposoby w pochodne N,O-bis-1a^metylosllllnwe o ogólnym wzorze IV, po czym działa się na nie chloromrówcrαnem 2-(nitrofenylosulfonylo)etylu o wzorze III w bezwodnym rozpuszczalniku organicznym, np. dichlorometanie, w obecności zasady. Po wodnej hydrolizie parelśclowych pochodnych trimetylosililowych otrzymuje się żądane Na-Nsc-aminokwasy o wzorze 1 w wolnej postaci (schemat 2).
184 205
1) III
II -► (CH3).3Si NR1-^CHR2 COO-SKCHr,).i -> |
2) H2O IV
Schemat 2
Pochodne o ogólnym wzorze I, w którym Rj oznacza atom wodoru, a R2 oznacza N-ksantylokarboksyamidometyl lub 2-(N-ksantylokarboksyamido)etyl, można wytwarzać w reakcji pochodnych o ogólnym wzorze I, w którym R, oznacza atom wodoru, a R2 oznacza karboksyamidometyl lub 2-(karboksyamido)etyl, z 9-hydroksyksantenem w aprotonowym rozpuszczalniku organicznym w obecności kwasu. Jako rozpuszczalnik można stosować DMF, a korzystnymi kwasami są kwasy organiczne, np. kwas trifluorooctowy, kwas metanosulfonowy lub kwas p-tohienosulfonowy.
Ze wzoru cząsteczkowego widać, że związki o wzorze I mają asymetryczny atom węgla a (z wyjątkiem gdy R = R=H). Atom węgla a nie bierze udziału w reakcjach stosowanych do wytwarzania związków o wzorze I, toteż istniejąca w wyjściowych aminokwasach konfiguracja tego centrum chiralności pozostaje w otrzymanych Na-Nsc-pochodnych o wzorze I. Tak więcjest oczywiste, że sposoby według wynalazku można stosować do wytwarzania Na-Nsc-aminokwasów o wzorze I w dowolnej postaci chiralnej (L lub D) oraz w postaci racematów, w zależności od konfiguracji związku wyjściowego o wzorze Π.
Znaczenia podstawników Rj R2 w pochodnych o ogólnym wzorze I odnoszą się do struktur łańcuchów bocznych naturalnie występujących aminokwasów zawierających znane grupy zabezpieczające, lub nie zawierające ich, w większości typu t-butylu lub podobne do nich pod względem warunków odszczepiania (tabela 1).
Tabela 1
Znacznie podstawników Rji R2 w związkach o wzorze I
| Nr | Ri | R2 | Aminokwas | Skrót |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 1-3 | H | Izopropyl | Walina | Nsc-Val-PH |
| 1-5 | H | 2-Metylopropyl | Leucyna | Nsc-Leu-OH |
| 1-6 | H | t-Butoksymetyl | O-t-Butyloseryna | Nsc-Ser(tBu)-OH |
| 1-7 | H | 1 -t-Butoksymety1 | O-t-Butylotreonina | Nsc-Thr(tBu)-OH |
| 1-8 | H | 2-Metylotioetyl | Metionina | Nsc-Met-OH |
| 1-9 | H | Benzyl | Fenyloalanina | Nsc-Phe-OH |
| 110 | H | Karboksyamidoetyl | Asparagina | Nsc-Asn-OH |
| 111 | H | 2-Karboksyamidoetyl | Glutamina | Nsc-Gln-OH |
| 1-15 | H | 4-t-Butoksybenzyl | O-t-Butylotyrozyna | Nsc-Tyr(tBu)-OH |
| 1-16 | H | Indolilo-3-metyl | Tryptofan | Nsc-Trp-OH |
| 117 | H | S-(Trifenylometylo)tiometyl | S-Trifenylometylocysteina | Nsc-Cys(Trt)-OH |
| 1-18 | H | 1-(Trifenylometylo)imida- zolilo-4-metyl | Nt-Trifenylometylohistydyna | Nsc-His(Trt)-OH |
184 205
c.d. tabeli 1
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 1-19 | H | 3-(N°-Mezytyleno- sulfonylo)guanidynopropyl | NG-Mezytylenosulfonyloarginina | Nsc-Arg(Mts)-OH |
| 1-20 | H | N-Ksantylokarboksy- amidometyl | N-Ksantyloasparagina | Nsc-Asn(Xan)-OH |
| 1-21 | H | 2-(N-Ksantylokarboksy- amido)etyl | N-Ksantyloglutamina | Nsc-Gln(Xan)-OH |
| 1-22 | H | S-(Acetamidometylo)tiometyl | S-Acetamidometylocysteina | Nsc-Cys(Acm)-OH |
| 1-23 | Ri+R2=Propylen | Prolina | Nsc-Pro-OH |
Jak widać związki o wzorze I przedstawione w tabeli 1 reprezentująpełny zestaw zabezpieczonych proteogennych pochodnych aminokwasowych potrzebnych do syntezy peptydu o dowolnym składzie aminokwasów. Jest także oczywiste, że w taki sposób można syntetyzować Na-Nsc-pochodne aminokwasów, w których łańcuch główny jest zabezpieczony innymi grupami,jak również Na-Nsc-pochodne nieproteogennych lub rzadko występujących aminokwasów.
Na-Nsc-aminokwasy o wzorze I są związkami krystalicznymi, nierozpuszczalnymi lub słabo rozpuszczalnymi w wodzie i rozpuszczalnymi w rozpuszczalnikach organicznych, trwałymi podczas długoterminowego przechowywania w temperaturze 10 - 25°C.
Na-Nsc-aminokwasy o wzorze I stosuje się w sposobie syntezy peptydów w fazie stałej.
Zgodnie z tym sposobem pierwszy aminokwas (C-końcowy aminokwas żądanej sekwencji aminokwasów) łączy się kowalencyjne z nierozpuszczalnym nośnikiem polimerowym poprzez wolną grupę a-karboksylową drogą utworzenia wiązania estrowego lub amidowego, z wytworzeniem Na-Nsc-aminoacylo-polimeru. Jako nośniki polimerowe można stosować różne polimery, takiejak usieciowany lub makroporowaty polistyren, usieciowany poli-N,N-dimetyloakryloamid w postaci granulatu lub jako kompozyt z ziemią okrzemkowa, usieciowane dekstrany, celulozę, bibuły lub inne znane i stosowane do tego celu polimery.
W celu przyłączenia łego pierwszego · Na-Nsc-aminokwasu ten nośnik polimerowy powinien zawierać odpowiednie grupy kotwiczące. W większości przypadków korzystnymi grupami kotwiczącymi są grupy umożliwiające odszczepienie zsyntetyzowanego peptydu od nośnika polimerowego z uwolnieniem C-końcowej grupy karboksylowej lub karboksyamidowej podczas działania na peptydylo-polimer reagentami kwasowymi, takimi jak kwas trifluorooctowy i jego roztwory lub roztwory chlorowodoru w rozpuszczalniku organicznym. Takimi grupami kotwiczącymi zapewniającymi przyłączenie typu estrowego są4-hydroksymetylofenoksyalkil,
4-chloro- lub 4-bromometylofenoksyalkil lub a-hydroksydifenylometyl lub inne znane grupy; dla zapewnienia przyłączenia typu karboksyamidowego znane są grupy di- i trialkoksybenzhydryloaminowa i 4-aminometylo-3,5-dimetoksy-fenoksyalkilowa lub także inne znane grupy stosowane w tym celu.
Reakcję przyłączenia tych C-końcowych Na-Nsc-aminokwasów do grup kotwiczących nośnika polimerowego można przeprowadzić znanymi sposobami.
W celu odszczepienia grup zabezpieczających atom Na od otrzymanego Na-Nsc-aminoacylopolimeru, działa się na niego reagentem zasadowym. Korzystnymi reagentami zasadowymi stosowanymi w tym celu są zasady azotowe, np. amoniak, morfoliną, piperydyna, piperazyna, dietyloamina, 1,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-en, 1,1,3,3-tetrametyloguanidyna i ich roztwory w aprotonowych rozpuszczalnikach organicznych. Korzystniejszym reagentem zasadowym jest 20 - 50% roztwór piperydyny w DMF. W tym przypadku grupę Nsc odszczepia się z wytworzeniem N-[2-(4-nitrofenylosulfonylo)etylo]piperydyny i ditlenku węgla, z uwolnieniem grupy a-aminowej.
Następnie ten aminoacylo-polimer z wolną grupą a-aminową acyluje się następnym Na-Nsc-aminokwasem, w wyniku czego otrzymuje się Na-Nsc-dipeptydylo-polimer. W tym celu stosuje się znane i zazwyczaj wykorzystywane do tego sposoby. Jako środki acylujące można
184 205 stosować np. 4-nitrofenyl, pentachlorofenyl, pentafluorofenyl, 1-hydroksybenztriazolilowe estry Na-Nsc-aminokwasów i inne znane rodzaje aktywnych estrów używanych do syntezy peptydów w fazie stałej; symetryczne bezwodniki Na-Nsc-aminokwasów. Acylowanie Na-Nsc-aminokwasów można także prowadzić w obecności znanych środków sprzęgających, np. dicykloheksylokarbodiimidu, diizopropylokarbodiimidu i heksafluorofosforanu benzotriazolilo-1-oksy-(trisdimetyloamino)fosfoniowego.
Syntetyczne cykle, obejmujące odszczepianie zabezpieczającej atom Na grupy Nsc i następnie acylowanie wolnej grupy aminowej z następnym Na-Nsc-aminokwasem, powtarza się aż do złożenia żądanej kompletnej sekwencji aminokwasów-.
Po złożeniu żądanego Na-Nsc-peptydylo-polime.ru Na-końcową grupę zabezpieczającą odszczepia się z zastosowaniem opisanych powyżej sposobów, przy czym w większości przypadków tenże żądany peptyd odłącza się od grupy kotwiczącej nośnika z równoczesnym odszczepieniem grup trwale zabezpieczających od łańcuchów bocznych aminokwasów. W tym celu można stosować znane reagenty kwasowe, używane do odszczepiania zabezpieczających grup typu t-butylu, np. kwas trifluorooctowy, roztwory kwasów metanosulfonowego i p-toluenosulfonowego, zawierające znane dodatki wychwytujące powstające jony karboniowe, lub nie zawierające ich, np. wodę, anizol, tioanizol, dimetylosiarczek i etanoditiolo-1,2-triizopropylosilan.
Ewentualnie, żądany peptyd można odblokować bez odszczepiania od nośnika polimerowego. W takich przypadkach powinno używać się znanych grup kotwiczących, które są w stanie dostarczyć odpornego na działanie kwasów wiązania peptydylopolimer.
W porównaniu z grupąFmoc, grupaNscjest bardziej odporna na reagenty zasadowe i szybkość jej odszczepianiajest znacznie mniejsza w podobnych warunkach, ale czas, zazwyczaj przeznaczony na odszczepienie grupy zabezpieczającej atom Na zgodnie z protokołami syntezy w fazie stałej (15 - 20 min) jest wystarczający dla ilościowego odszczepienia zabezpieczającej atom Na grupy Nsc od zabezpieczonego peptydylo-polimeru przez taki reagent zasadowy jak 20 - 50% roztwór piperydyny w DMF. Ponadto wzrost odporności grupy Nsc na reagenty zasadowe zapewnia lepsząjej trwałość w obojętnym lub słabo zasadowym środowisku, korzystnie stosowanym dla przeprowadzenia etapów acylowania.
Jak opisano powyżej, grupę Nsc można ilościowo odszczepiać z użyciem reagentów zasadowych w obecności grup zabezpieczających typu t-butylu, które są odporne na zasady organiczne. Jednak grupaNscjest bardzo odporna na działanie reagentów kwasowych zwykle stosowanych do odszczepiania grup zabezpieczających typu t-butylu. Tak więc użycie Na-Nsc-aminokwasów o ogólnym wzorze I, zawierających w łańcuchach bocznych grupę zabezpieczającą korzystnie typu t-butylu bądź podobną do niej pod względem warunków odszczepiania, pozwala rozwinąć nowe strategie syntezy peptydów w fazie stałej zgodnie z „zasadą ortogonalności”.
Wynalazek ilustrują poniższe przykłady, w których wszystkie aminokwasy mają konfigurację L, o ile nie wskazano inaczej.
Przykład 1. Na-Nsc-asparagina (1^10)
W100 ml mieszaniny wody/dioksanu (3:1, objętościowo) rozpuszczono 3,95 g asparaginy
17,7 g węglanu potasowego, mieszaninę ochłodzono na łaźni z lodem, po czym w trakcie mieszania w ciągu 15 minut wkroplono roztwór 7,5 g chloromrówczanu 2-(4-nitrofenylosulfonylo)etylu w 70 ml dioksanu. Łaźnię chłodzącą usunięto i mieszaninę mieszano przez dodatkowe 20 minut, po czym odparowano ją do około 100 ml pod zmniejszonym ciśnieniem i przeniesiono do rozdzielacza. Dodano 100 ml wody i otrzymany roztwór wyekstrahowano octanem etylu (2 x 50 ml). Następnie oddzielono warstwę wodną zakwaszono ją 40% kwasem siarkowym do pH 2 i ochłodzono na łaźni z lodem. Po 30 minutach powstały osad odsączono, dokładnie przemyto lodowatą wodą, wysuszono na powietrzu i otrzymano żądany związek 1-10 w postaci krystalicznego proszku (71%). Charakterystykę tego produktu podano w tabeli 2 (przykład 5).
Przykład 2. Na-Nsc-leucyna ( 1-5)
W kolbie okrągłodennej o pojemności 250 ml, wyposażonej w chłodnicę zwrotną i wkraplacz, umieszczono 4,92 g leucyny i 90 ml bezwodnego dichlorometanu. W trakcie intensywnego mieszania do zawiesiny dodano 9,5 ml chlorotrimetylosilanu, po czym mieszaninę ogrzewano do
184 205 wrzenia przez 1 godzinę. Powstały roztwór ochłodzono na łaźni z lodem i w trakcie mieszania dodano 9,1 ml trietyloaminy i 9,0 g chloromrówczanu 2-(4-nitrofenylosulfonylo)etylu. Mieszaninę mieszano przez 20 minut na łaźni z lodem, a następnie w temperaturze pokojowej przez dodatkowe 1,5 godziny. Rozpuszczalnik odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozdzielono pomiędzy 200 ml octanu etylu i 250 ml 2,5% wodnego roztworu wodorowęglanu sodowego. Warstwę wodną oddzielono, przemyto 50 ml eteru, zakwaszono do pH 1N kwasem solnym, po czym wyekstrahowano 3 x 70 ml octanu etylu. Połączone ekstrakty wysuszono nad bezwodnym siarczanem sodowym i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po rekrystalizacji pozostałości z heksanu-octanu etylu otrzymano żądany produkt 1-5 w postaci białego krystalicznego proszku (80%). Charakterystykę tego produktu podano w tabeli 2 (przykład 5).
Przykład 3. Ester β-t-butylowy kwasu Na-Nsc-asparaginowego (^^12)
W kolbie okrągłodennej o pojemności 250 ml, wyposażonej w chłodnicę zwrotną i wkraplacz, umieszczono 7,09 g estru (-ttbuty'owego kwasu asparaginowego i 90 ml bezwodnego dichlorometanu. W trakcie intensywnego mieszania do mieszaniny dodano 12,7 ml diizopropyloetyloaminy, a następnie 9,5 ml chlorotrimetylosilanu, po czym mieszaninę ogrzewano do wrzenia przez
1,5 godziny. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono na łaźni z lodem, dodano naraz 9,0 g chloromrówczanu 2-(nitrofenylosulfonylo)etylu, po czym mieszanie kontynuowano przez 1,5 godziny w temperaturze pokojowej. Rozpuszczalnik odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozdzielono pomiędzy 200 ml octanu etylu i 250 ml 2,5% wodnego roztworu wodorowęglanu sodowego. Warstwę wodną oddzielono, przemyto 50 ml eteru, zakwaszono do pH 2 1N kwasem solnym, po czym wyekstrahowano 3 x 70 ml octanu etylu. Połączone ekstrakty wysuszono nad bezwodnym siarczanem sodowym i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po rekrystalizacji pozostałości z heksanu-octanu etylu otrzymano żądany produkt 1-12 w postaci białego krystalicznego proszku (86%). Charakterystykę tego produktu podano w tabeli 2 (przykład 12).
Przykład 4. NjtNsCtN-ksantylotaspαrαginα (1-20)
W 20 ml bezwodnego DMF rozpuszczono 3,89 g Na-Nsc-asparaginy (1-10) i 2,6 g 9-hydroksyksantenu. Do roztworu dodano 0,4 ml kwasu metanosulfonowego i mieszaninę pozostawiono na 2 dni w temperaturze pokojowej. Otrzymaną mieszaninę wlano do 100 ml lodowatej wody, powstały osad odsączono, przemyto wodą, a następnie octanem etylu i eterem. Surowy produkt rozpuszczono w 10 ml ciepłego DMF, roztwór przesączono i produkt powtórnie strącono eterem. Osad odsączono, przemyto eterem i wysuszono pod próżnią, w wyniku czego otrzymano żądany związek 1-20 w postaci krystalicznego proszku (74%). Charakterystykę tego produktu podano w tabeli 2 (przykład 20).
Przykład 5. Właściwości Na-Nsc-aminokwasów o wzorze I
Związki o ogólnym wzorze I, przedstawione w tabeli 2, wytworzono zgodnie ze sposobami szczegółowo opisanymi w przykładach 1-4. Cyfry w kolumnie „Sposób” odnoszą się do numerów przykładów przedstawiających poszczególne sposoby. Skręcalność właściwą [aJD mierzono za pomocą polarymetru DlP-320 (JASCO, Japonia) w 10 cm kuwetach. Temperaturę topnienia oznaczano w kapilarze otwartej i jej nie korygowano. Wartości chromatograficznych współczynników opóźnienia Rfprzedstawiono dla chromatografii cienkowarstwowej z użyciem folii Autofolien Kiselgel 60 F254 (Merck, Darmstadt, Niemcy); jako rozpuszczalników rozwijających użyto: chloroformu/metanolu/kwasu octowego, 95:5:3, (A) i benzenu/acetonu/kwasu octowego, 100:50:3, (B), plamy wykrywano drogą absorpcji promieniowania UV i/lub reakcji z ninhydryną. Masęjonów molekularnych (M+H)+mierzono z użyciem spektrometru masowego TOF MS-BC-1 z desorpcją aktywowanąpromieniowaniem Cf2^ (Electron SPA, Sumy, Ukraina).
184 205
CM .2
Χΐ (U
CM
W
O
CM
O
Ό
CG
CO λ:
o c
•rl
I
U
CG
I a
u
MG o 3 ·<—I u
'W rH
| Jon molekularny (M+H) + | Wartość stwierdzona | σ> | •^•^^ror-cncMChocMmcM mr-incnchoomiomo^rro^rr~-coao.—icoocmoom' cocOcomm^r^^r^rm''^''! |
| Wartość obliczona | 00 | oojooT-łT-łfntor^ojLDco’^ ΓΌΓΌΓΌ^^Τ^’^^Γ^ΤΓΟΓΩ’^ ror-mchcncrimr-cOo^r- cnsro-cocor-icoooioo^r | |
| (9) | r- | i-tmocNCMCDor^ocn^ai ojrOLnm^srmcn-śroom oooooooooooo | |
| iw cd | oncMCNoooocotncDioO’^’ TTinCOCOCOCOCOCDCDOi-CCO oooooooooooo | ||
| T.t. (°C) | lO | *r<£> r-łoji-i ro LOfO^OJ^Ot-łkOOkOOCPiLf) T-łrHr^i-lt-ItHkOCTłt-HOjr-łr·''· 1 t 1 J 1 1 ! 1 1 1 1 1 OJ^OlOOCTi^CDOLOOJOJ mror-oj^ookocDkDocnrx—ł 1—1 X—ł 1—ł τΗ X—ł 04 X—ł | |
| CT) CM Q Ή | OOOOOOOOOOO koooorOor^ocor-r^ 1 cncMonocnoooT-icncM CM r-C r-1 O + | CM CM 1 1 —1 1 1 1 1 II 1 | ||
| Sposób | m | CMCMCMCMCMOP7CMCM.—t<—ICO | |
| Związek | OJ | -X -k + X XX O O O l —. — 2 -n -χ -χ p p £0 χχχχχχχχχχχχ OOOOO-WWOOOOO lilii — — II II — ^CCrHCUpWl-i-l-ICUCCO, .—1·—1(0·—<φβ>Χ<1>,£5(0>—ICO O<>nxcnE->SXftO< 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 υυυυυυυυυυυυ cGcococncGcncocGcncGcncG 222222222222 | |
| Nr | ł—H | O t—1 OJ x-fOICOsrLT)V£>r-CO<T>r-1 I—ł .—1 1 1 1 1 i ł 1 1 1 1 1 1 H-ł ł—ł H-ł f—ł 1—i ł—1 ł—1 t—1 t—1 h—1 ł—» ł—1 |
184 205
c.d. tabeii 2
| στ | 'TcncNr-moo^oocncMtn -imiOtMCnO^COCslT-li-t lootnuJr-łin.-iiocoint'·- |
| co | r~^rmv0.-tr-icov£>cor-~Ln «Tirjio^rr-r-ioiom^rtn r-i^mcsii-iinLno^Oi-i ν£>οσιν0<\ιιη,-ΐΓ-·αοΐΩΓ~ |
| coin^cocM.tntncotnr- mm^mtn^ocMCMOrn ooooo ooooo | |
| ko | r-cMoonmcMLncocor-ro tokOkDinr-^cN^tni-iLn ooooooooooo |
| tn | CM OOlDOOCOkOO kOr-ł^OTMMCNOLOCMM OT M 00 r—i r—1 «—1 t—1 CM t—1 r-H r—1 i i i i i i i i i i i ^rocMCococMincom^rm OT i—ł 00 CO O r-1 M GT LO CM M <—1 t—ł »—ł r—1 <—| t—1 χ—ł r—1 t—I |
| *3* | OOOOOOOOOOO occmr-cooor-r-OLD r-T-H^O-^CMin^CMCOt-IM M M | M CM + 1 + Μ ΓΩ CO II 1 + III |
| co | ncOcncncocnn-^^pcMCM |
| CM | Nsc-Glu(OtBu)-OH* Nsc-Lys(Boc)-OH* Nsc-Tyr(tBu)-OH Nsc-Trp-OH Nsc-Cys(Trt)-OH Nsc-His(Trt)-OH Nsc-Arg(Mts)-OH Nsc-Asn(Xan)-OH Nsc-Gln(Xan)-OH Nsc-Cys(Acm)-OH Nsc-Pro-OH |
| 1-1 | m^rLnkor^cocTiOT-iCNfO r—I ł—1 i—1 M i—ł «—1 M CM CM CM CM 1 I 1 1 i 1 1 1 1 1 1 MMMMMMMMMMM |
184 205
1. Wstępne przemycie:
2. Odblokowanie:
3. Przemycie:
4. Acylowanie:
Przykład 6. Synteza dodekapeptydu w fazie stałej
Ala-Ser-Ser-Thr-Ile-Iłe-Lys-Phe-Gyl-Ile-Asp-Lys
a) Wprowadzenie grupy kotwiczącej do nośnika polimeru.
Do 250 mg kopolimeru aminometylowanego styrenu-1% diwinylobenzenu (1,0 równoważnika NHj/g) w 3 ml DMF dodano 0,75 mmola 4-hydroksymetylofenoksypropionianu 2,4,5-trichlorofenylu i 0,75 mmola 1-hy<droksybenzotriazolu, po czym zawiesinę wytrząsano przez 24 godziny w temperaturze pokojowej. Polimer odsączono, przemyto DMF, etanolem, eterem i na końcu heksanem, po czym wysuszono pod próżnią nad pięciotlenkiem fosforu przez 24 godziny.
b) Przyłączenie Nsc-Lys(Boc)-OH do grupy kotwiczącej.
Otrzymany polimer spęczniono w 4 ml mieszaniny 1,2-dichloroetanu/N-metylopirolidyny (3:1), po czym dodano 0,75 mmola Nsc-Lys(Boc)-OH (I-14), 0,1 mmola 4-dimetyloamino-pirydyny i 0,75 mmola dicykloheksylokarbodiimidu. Zawiesinę wstrząsano przez 24 godziny w temperaturze pokojowej. Polimer odsączono, dobrze przemyto chlorofomem, mieszaniną chloroformu/metanolu (1:1), etanolem, eterem i ostatecznie heksanem, po czym wysuszono i otrzymano 400 mg Nsc-Lys(Boc)-polimeru.
c) Składanie peptydu
200 mg Nsc-Lys(Boc)-polimeru umieszczono w strzykawce z polipropylenu o pojemności 10 ml wyposażoną na dnie w polipropylenowy spiek. Polimer ten przemywano dMf w strzykawce, po czym cykle syntetyczne przeprowadzono zgodnie z następującym protokołem operacyjnym:
33% piperydyna/DMF, 4 ml; 0,5 min 33% pipeiydynaDW, 4 ml; 15 min DMF,6 x (4mi ; 1 mm)
Na-Nsc-aminokwas owzoize I, 0,5 nmiola; heksafluorofosforan benzotnazolilo-1-oksy(trisdimetyloamino)fos.foniowy, 0,5 -mmola:
1-hydroksybenzotriazol, 0,5 mmola; N-metylomorfolina, 0,75 mmola; DMf, 2 ml;
min (90 min dla Nsc-Ile-OH).
5. Przemycie: DMF, 5 x (4 ml; lmin)
Na-Nsc-aminokwasy wprowadzono do cyklów syntetycznych w następującej kolejności: Nsc-Asp(OtBu)-OH, Nsc-Ile-OH, Nsc-Gly-OH, Nsc-Phe-OH, Nsc-Lys(Boc)-OH, Nsc-He-OH, Nsc-Ile-OH, Nsc-Thr(tBu)-OH, Nsc-Ser(tBu)-OH, Nsc-Ser(tBu)-OH, Nsc-Ala-OH.
Po złożeniu żądanej sekwencji aminokwasów podziałano na ten peptydylo-polimer 33% piperydyną/DMF (4 ml) przez 20 minut, po czym przemyto DMF, dichlorometanem, etanolem, eterem i ostatecznie heksanem.
d) Odblokowanie i oczyszczanie.
Peptydylo-polimer wytrząsano z 5 ml 50% kwasu trifluorooctowego w 1,2-di.chloroetanie przez 60 minut w temperaturze pokojowej. Polimer odsączono, przemyto 5 ml 50% kwasu trifluorooctowego w 1,^-c^iid^ll^i^<^^^anie i rozcieńczono połączone ciecze z przemywania 100 ml bezwodnego lodowatego eteru. Osad odsączono, przemyto eterem i wysuszono pod próżnią, w wyniku czego otrzymano 170 mg surowego dodekapeptydu (czystość 70%, określona metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami).
Surowy dodekapeptyd rozpuszczono w 3 ml IM wodnego kwasu octowego i oznaczono chromatograficznie w kolumnach z TSK HW-40F (Merck, Darmstadt, Niemcy), skalibrowano i wyeluowano tym samym buforem. Frakcje zawierające czysty peptyd połączono i zliofilizowano. Końcowa wydajność żądanego dodekapeptydu wynosiła 104 mg (41%), a czystość powyżej 95%, jak określono metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami. Skład aminokwasów (po hydrolizie 6 N HC1,110°C, 24 i 48 godzin): Asp 1,02 (1); Ser 1,84 (2); Thr 0,93 (1); Glu 0,94 (1); Gly 1,03 (1); Ala 1,00 (1); Ile 2,78 (3); Lys 2,04 (2).
184 205
Departament Wydawnictw ΠΡ RP. Nakład 70 egz. Cena 4,00 zł.
Claims (4)
- Zastrzeżenia patentowe1. Nowe Na -2-(4-nitrofenylosulfonylo) etoksykarbonyloaminokwasy o ogólnym wzorze IO2N ,-V o oS-CH2—CH2-O—C-NR., -CHR2 COOH K' O w którym R oznacza atom wodoru, a R2 oznacza izopropyl, 2-metylopropyl, 2-metylotioetyl, benzyl, karboksyamidometyl, 2-karboksyamidoetyl, 4-t-butoksybenzyl, indolilo-3-metyl,S-(trifenylometylo)tiometyl, 1 -(trifenylometylo)imidazolilo-4-metyl, 3-(N°-mezytylenosulfonylo)guanidynopropyl, N-ksantylokarboksyamidometyl, 2-(N-ksantylokarboksyamido)etyl lubS-(acetamidometylo)tiometyl; względnie Rj i R2 razem oznaczają grupę propylenową.
- 2. Sposób wytwarzania nowych Na-2-(4-nitrofenylosulfonylo)etoksykarbonyloaminokwasów o ogólnym wzorze I /-\ θ θ °2N/Q/ S-CH^CH^O-C-NR^CHRyCOOH w którym Rj oznacza atom wodoru, a R2 oznacza izopropyl, 2-metylopropyl, 2-metylotioetyl, benzyl, karboksyamidometyl, 2-karboksyamidoetyl, 4-t-butoksybenzyl, indolilo-3-metyl,S-(trifenylometylo)tiometyl, 1 -(trifenylometylo)imidazolilo-4-metyl, 3-(N°-mezytylenosulfonylo)guanidynopropyl, N-ksantylokarboksyamidometyl, 2-(N-ksantylokarboksyamido)etyl lubS-(acetamidometylo)tiometyl; względnie Rj i R2 razem oznaczajągrupę propylenową, znamienny tym, że aminokwas o ogólnym wzorzeHNRj-CHRz-COOH w którym Rj i R2 mają wyżej podane znaczenie, poddaje się reakcji z chloromrówczanem 2-(4-nitrofenylosulfonylo)etylu w mieszaninie rozpuszczalnika organicznego i wody w obecności zasady, w temperaturze 0 - 40°C.
- 3. Sposób wytwarzania nowych Na-2-(4-nitrofenylosulfonylo)etoksykarbonyloaminokwasów o ogólnym wzorze IO o11 IIS-CH2—CH2-O—C—NR, -CHRó-COOH II O184 205 w którym R, oznacza atom wodoru, a R2 oznacza izopropyl, 2-metylopropyl, 2-metylotioetyl, benzyl, karboksyamidometyl, 2-karboksyamidoetyl, 4-t-butoksybenzyl, indolilo-3-metyl, S-(trifenylometylo)tiometyl, 1 -(trifenylometylo)imidazolilo-4-mety1, 3 -(NG-mezytylenosulfonylo)guanidynopropyl, N-ksantylokarboksyamidometyl, 2-(N-ksantylokarboksyamido)etyl lub S-(acetamidometylo)tiometyl; względnie R1 i R2 razem oznaczają grupę propylenową, znamienny tym, że a) aminokwas o ogólnym wzorzeHNR1-CHR2-COOH w którym R, i R2 mają wyżej podane znaczenie, przeprowadza się w pochodne O,N-trimetylosililowane;b) te pochodne 0,N-tnmetylosililowane poddaje się reakcji z chloromrówczanem 2-(4-nitrofenylosulfonylo)etylu w bezwodnym rozpuszczalniku organicznym w obecności zasady, a następnie prowadzi się hydrolizę.
- 4. Sposób wytwarzania nowych Na-2-(4-nitrofenylosulfonylo)etoksykarbonyloaminokwasów o ogólnym wzorze I °KQS-CH2-CH2-O—C—NR, -CHR2-COOH O w którym R, oznacza atom wodoru, a R2 oznacza N-ksantylokarboksyamidometyl lub 2-(N-ksantylokarboksyamido)etyl, znamienny tym, że związek o ogólnym wzorze I, w którym Rj oznacza atom wodoru, a R2 oznacza karboksyamidometyl lub 2-(karboksyamido)etyl, poddaje się reakcji z 9-hydroksyksantenem w rozpuszczalniku organicznym w obecności kwasu.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU9595102102A RU2079491C1 (ru) | 1995-02-15 | 1995-02-15 | Nα -2-(4-НИТРОФЕНИЛСУЛЬФОНИЛ)ЭТОКСИКАРБОНИЛ-АМИНОКИСЛОТЫ В КАЧЕСТВЕ Nα -ЗАЩИЩЕННЫХ АМИНОКИСЛОТ ДЛЯ ТВЕРДОФАЗНОГО СИНТЕЗА ПЕПТИДОВ |
| PCT/KR1996/000012 WO1996025394A1 (en) | 1995-02-15 | 1996-01-27 | Nα-2-(4-NITROPHENULSULFONYL)ETHOXYCARBONYL-AMINO ACIDS |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL321864A1 PL321864A1 (en) | 1997-12-22 |
| PL184205B1 true PL184205B1 (pl) | 2002-09-30 |
Family
ID=20164784
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL96321864A PL184205B1 (pl) | 1995-02-15 | 1996-01-27 | Nowe Nalfa-2-(4-nitrofenylosulfonylo)etoksykarbonyloaminokwasy i sposób wytwarzania nowych Nalfa-2-(4-nitrofenylosulfonylo) etoksykarbonyloaminokwasów |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5616788A (pl) |
| EP (1) | EP0765307B1 (pl) |
| JP (1) | JP2888991B2 (pl) |
| KR (1) | KR100241948B1 (pl) |
| CN (1) | CN1058260C (pl) |
| AT (1) | ATE185796T1 (pl) |
| AU (1) | AU705716B2 (pl) |
| CA (1) | CA2212052C (pl) |
| CZ (1) | CZ289747B6 (pl) |
| DE (1) | DE69604759T2 (pl) |
| DK (1) | DK0765307T3 (pl) |
| ES (1) | ES2140061T3 (pl) |
| FI (1) | FI973338L (pl) |
| GR (1) | GR3031832T3 (pl) |
| HU (1) | HUP9801150A3 (pl) |
| NO (1) | NO309142B1 (pl) |
| PL (1) | PL184205B1 (pl) |
| RU (1) | RU2079491C1 (pl) |
| WO (1) | WO1996025394A1 (pl) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1090615C (zh) * | 1996-10-19 | 2002-09-11 | Hyundai药物工业株式会社 | Nα－2－(4－硝基苯基磺酰基)乙氧羰基氨基酸 |
| EP0934260A1 (en) * | 1996-10-19 | 1999-08-11 | Hyundai Pharm. Ind. Co., Ltd. | N alpha-2-(4-nitrophenylsulfonyl)ethoxycarbonyl-amino acids |
| KR100378252B1 (ko) * | 1999-11-12 | 2003-03-29 | 학교법인 포항공과대학교 | 니트로술포닐에톡시카르보닐-아미노산을 이용한 합성테트라펩티드 라이브러리의 제조방법 |
| WO2001051505A1 (en) * | 1999-12-24 | 2001-07-19 | Hyundai Pharmaceutical Ind. Co., Ltd. | Nα-2-(4-NITROPHENYLSULFONYL)ETHOXYCARBONYL-AMINO ACID FLUORIDES AND PROCESS FOR THE PREPARATION THEREOF |
| KR100418962B1 (ko) * | 2001-06-07 | 2004-02-14 | 김학주 | 2-(4-나이트로페닐설포닐)에톡시카르보닐-아미노산류를사용하여 펩티드를 고수율 및 고순도로 제조하는 방법 |
| RU2214416C2 (ru) * | 2001-12-10 | 2003-10-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Rgd-содержащие пептиды |
| WO2009014177A1 (ja) * | 2007-07-25 | 2009-01-29 | Ajinomoto Co., Inc. | ジベンゾフルベン誘導体の淘汰方法 |
| CN103421087A (zh) * | 2013-04-12 | 2013-12-04 | 上海捌加壹医药科技有限公司 | 一种多肽的液相合成方法 |
| WO2024079043A1 (en) | 2022-10-10 | 2024-04-18 | Bachem Holding Ag | Method of manufacturing a peptide with a lysine derivative |
| WO2025078040A1 (en) | 2023-10-09 | 2025-04-17 | Bachem Holding Ag | Lysine salt and method of manufacturing a lysine derivative |
-
1995
- 1995-02-15 RU RU9595102102A patent/RU2079491C1/ru active
-
1996
- 1996-01-27 HU HU9801150A patent/HUP9801150A3/hu unknown
- 1996-01-27 CA CA002212052A patent/CA2212052C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-27 WO PCT/KR1996/000012 patent/WO1996025394A1/en not_active Ceased
- 1996-01-27 AT AT96901556T patent/ATE185796T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-01-27 FI FI973338A patent/FI973338L/fi unknown
- 1996-01-27 PL PL96321864A patent/PL184205B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-01-27 JP JP8524843A patent/JP2888991B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-27 KR KR1019970705664A patent/KR100241948B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-27 AU AU45496/96A patent/AU705716B2/en not_active Ceased
- 1996-01-27 EP EP96901556A patent/EP0765307B1/en not_active Revoked
- 1996-01-27 CN CN96191913A patent/CN1058260C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-27 DK DK96901556T patent/DK0765307T3/da active
- 1996-01-27 ES ES96901556T patent/ES2140061T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-27 CZ CZ19972477A patent/CZ289747B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-01-27 DE DE69604759T patent/DE69604759T2/de not_active Revoked
- 1996-02-01 US US08/595,381 patent/US5616788A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-08-14 NO NO973752A patent/NO309142B1/no unknown
-
1999
- 1999-11-12 GR GR990402922T patent/GR3031832T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUP9801150A2 (hu) | 1998-09-28 |
| US5616788A (en) | 1997-04-01 |
| CZ247797A3 (cs) | 1998-02-18 |
| JPH10503216A (ja) | 1998-03-24 |
| NO973752D0 (no) | 1997-08-14 |
| ES2140061T3 (es) | 2000-02-16 |
| NO973752L (no) | 1997-10-14 |
| NO309142B1 (no) | 2000-12-18 |
| FI973338A7 (fi) | 1997-10-14 |
| EP0765307B1 (en) | 1999-10-20 |
| RU2079491C1 (ru) | 1997-05-20 |
| DE69604759T2 (de) | 2000-06-21 |
| ATE185796T1 (de) | 1999-11-15 |
| CZ289747B6 (cs) | 2002-03-13 |
| CA2212052C (en) | 2002-09-03 |
| FI973338A0 (fi) | 1997-08-14 |
| EP0765307A1 (en) | 1997-04-02 |
| PL321864A1 (en) | 1997-12-22 |
| DK0765307T3 (da) | 1999-12-27 |
| RU95102102A (ru) | 1996-11-20 |
| CN1173865A (zh) | 1998-02-18 |
| AU4549696A (en) | 1996-09-04 |
| KR19980702267A (ko) | 1998-07-15 |
| HUP9801150A3 (en) | 2000-07-28 |
| JP2888991B2 (ja) | 1999-05-10 |
| KR100241948B1 (ko) | 2000-02-01 |
| DE69604759D1 (de) | 1999-11-25 |
| AU705716B2 (en) | 1999-05-27 |
| GR3031832T3 (en) | 2000-02-29 |
| CN1058260C (zh) | 2000-11-08 |
| FI973338L (fi) | 1997-10-14 |
| CA2212052A1 (en) | 1996-08-22 |
| WO1996025394A1 (en) | 1996-08-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI90780B (fi) | Tekohartsi | |
| JP2758988B2 (ja) | ペプチド核酸 | |
| US5428128A (en) | Site specific synthesis of conjugated peptides | |
| JP5908478B2 (ja) | ｈ「Ｇｌｙ２」ＧＬＰ−２の固相合成 | |
| JP2002525376A (ja) | アミド結合形成のための補助基 | |
| US6897289B1 (en) | Peptide synthesis procedure in solid phase | |
| PL184205B1 (pl) | Nowe Nalfa-2-(4-nitrofenylosulfonylo)etoksykarbonyloaminokwasy i sposób wytwarzania nowych Nalfa-2-(4-nitrofenylosulfonylo) etoksykarbonyloaminokwasów | |
| HU189757B (en) | Process for producing peptides of psichopharmaceutical activity | |
| US5166394A (en) | Coupling reagent for peptide synthesis | |
| EP0273895A2 (en) | Solid phase peptide synthesis | |
| JP2003508408A (ja) | 環状偽ペプチッドの製造方法 | |
| JPH02292245A (ja) | 保護されたアミノ酸及びその製造方法 | |
| US4764595A (en) | Resin support for solid phase peptide synthesis | |
| US4301045A (en) | Synthesis of peptides | |
| KR100418962B1 (ko) | 2-(4-나이트로페닐설포닐)에톡시카르보닐-아미노산류를사용하여 펩티드를 고수율 및 고순도로 제조하는 방법 | |
| US4801665A (en) | Resin method for making sulfoxide for solid phase peptide synthesis | |
| JP2002521364A (ja) | アミノ−アルデヒド固相支持体、そのためのリンカー並びにそれを製造する方法およびその用途 | |
| US4879371A (en) | Solid phase peptide synthesis | |
| KR100385096B1 (ko) | 고체상반응을통한아자펩티드유도체의제조방법 | |
| JPS62286978A (ja) | アミノ酸のｏｏｂｔエステルおよびそれらの製法 | |
| WO2001051505A1 (en) | Nα-2-(4-NITROPHENYLSULFONYL)ETHOXYCARBONYL-AMINO ACID FLUORIDES AND PROCESS FOR THE PREPARATION THEREOF |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20060127 |