CZ289747B6 - Nalfa-2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyseliny, způsob jejich přípravy a jejich pouľití - Google Patents
Nalfa-2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyseliny, způsob jejich přípravy a jejich pouľití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ289747B6 CZ289747B6 CZ19972477A CZ247797A CZ289747B6 CZ 289747 B6 CZ289747 B6 CZ 289747B6 CZ 19972477 A CZ19972477 A CZ 19972477A CZ 247797 A CZ247797 A CZ 247797A CZ 289747 B6 CZ289747 B6 CZ 289747B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- amino acids
- nsc
- nitrophenylsulfonyl
- ethoxycarbonyl
- amino acid
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
- C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
- C07C323/57—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
- C07C323/58—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton
- C07C323/59—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton with acylated amino groups bound to the carbon skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
- C07C317/16—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
- C07C317/18—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with sulfone or sulfoxide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
- C07C317/44—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C317/48—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by singly-bound nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
- C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
- C07D473/04—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two oxygen atoms
- C07D473/06—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two oxygen atoms with radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached in position 1 or 3
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
- C07K1/063—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups for alpha-amino functions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Aminokyseliny obecn ho vzorce I, v n m R.sub.1.n. zna atom vod ku a R.sub.2.n. zna izopropyl, 2-methylpropyl, 2-methylthioethyl, benzyl, karboxamidomethyl, 2-karboxamidoethyl, terc.butoxybenzyl, indolyl-3-methyl, S- (trifenylmethyl)thiomethyl, 1-(trifenylmethyl)imidazolyl-4-methyl, 3-(N.sup.G.n.-mesitylensulfonyl)guanidinopropyl, N-xantylkarboxamidomethyl, 2-(N-xanthylkarboxamido)ethyl nebo S-(acetamidomethyl)thiomethyl, nebo R.sub.1.n. a R.sub.2.n. tvo° spole n propylenovou skupinu. P°i jejich p° prav se v²choz aminokyselina nech reagovat s 2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-chlorformi tem ve sm sn m vodn -organick m rozpou t dle v p° tomnosti b ze a p°i teplot 0 a 40 .degree.C. Pou it N.alfa.-2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyselin pro synt zu peptid sekvenci ln adic chr n n²ch aminokyselinov²ch monomer na rostouc peptidov² °et zec, napojen² na nerozpustn² polymern podklad.\
Description
Na-2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aniinokyseliny, způsob jejich přípravy a jejich použití
Oblast techniky
Vynález se týká Na-2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyselin, způsobu jejich přípravy a jejich použití.
Dosavadní stav techniky
Syntéza peptidů v tuhé fázi se často používá pro přípravu biologicky aktivních peptidů, jež se používají v lékařském a biologickém výzkumu a rovněž jako aktivní látky ve farmacii, veterinářství a diagnostice.
Podstatu syntézy peptidů v tuhé fázi lze vyjádřit jako postupné prodlužování peptidového řetězce pomocí opakovaných cyklů chemických reakcí, vyjitím z první C-terminální aminokyseliny napojené na nerozpustný nosič. V průběhu syntézy zůstávají cílové produkty ze všech reakcí vázány na nosič, zatímco přebytečné reaktanty a vedlejší produkty se odstraňují filtrací a promytím nosiče.
Aby se provedla syntéza peptidů v tuhé fázi, spojí se první aminokyselina (C-terminál cílové sekvence aminokyseliny) s chráněnou aminoskupinou kovalentně s nerozpustným polymemím nosičem pomocí volné α-karboxylové skupiny vytvoření esterové nebo amidové vazby. Potom se Να-chránicí skupina selektivně odštěpí z takto získaného Να-chráněného aminoacylového polymeru a vytvoří se aminoacylový polymer s volnou α-aminoacylovou skupinou. Tento polymer se dále acyluje příští Να-chráněnou aminokyselinou, takže se získá Να-chráněný dipeptidyl-polymer. Takové syntetické cykly, které spočívají ve štěpení Να-ochrany a v následné acylaci volné aminoskupiny s další Not-chráněnou aminokyselinou, se opakují, až je celek cílové sekvence aminokyseliny dokončen.
Při syntéze v tuhé fázi se v praxi obvykle používá velkého molámího nadbytku (2 až lOnásobného) acylačních činidel, aby se zajistila kompletní konverze. Proto se všechny reaktivní skupiny v postranních řetězcích aminokyselin, jako jsou aminové, karboxylové, hydroxylové, thiolové a guanidinové skupiny, musí blokovat vhodnými chránícími skupinami. Chrániči skupiny pro tento účel se musí vybírat pečlivě, aby se dosáhlo spolehlivé a trvalé ochrany postranních řetězců za podmínek existujících při acylacích peptidyl-polymerů a během štěpení dočasné Na-ochrany. Na druhé straně musí tyto chránící skupiny v postranních řetězcích umožňovat odstranit kvantitativně ochranu ze syntetizovaného peptidu v jednom nebo dvou stupních bez poškození jeho struktury. Ve většině případů se má současně rozštěpit také spojení peptidyl-polymer. Je zřejmé, že struktura a chemické vlastnosti trvale chránících skupin pro postranní řetězce aminokyselin jsou dány natoliko povahou reaktivní skupiny, jež se má chránit, ale ve velkém rozsahu i strukturou a chemickými vlastnostmi použité trvale Να-chránicí skupiny. Trvalá Να-ochrana je proto klíčovým prvkem celé strategie syntézy peptidů v tuhé fázi.
Dobře známy a široce používané při syntéze peptidů v tuhé fázi jsou Na-terc-butoxykarbonylaminokyseliny (Boc-aminokyseliny), jež popsal k tomuto účelu R. B. Merrifield v Biochemistry, sv. 3, str. 1385. terc-Butoxycarbonylovou (Boc) skupinu lze odštěpit působením kyselinových reagentů o střední síle, jako je například trifluoroctová kyselina a její roztoky v chlorovaných uhlovodících, roztoky chlorovodíku v organických rozpouštědlech, trifluorid/diethyletherový komplex boru a některé jiné kyseliny, za tvorby izobutylenu a oxidu uhličitého.
-1 CZ 289747 B6
Společně s dočasnou Να-Boc-ochranou se pro trvalé blokování postranních řetězců používají chránící skupiny, které jsou stálé během Να-Boc štěpení, mohou se však odštěpit silnějšími kyselinovými reagenty za současného štěpení vazby peptidyl-polymer. Mezi známé reagenty používané k tomuto účelu patří kapalný fluorovodík, trifluormethansulfonová kyselina a jejich 5 směsi s anisolem, thioanisolem a dimethylsulfidem. Hlavním nedostatkem syntézy za použití přechodné Να-Boc ochrany je aplikace acidolýzy pro štěpení jak dočasných, tak i trvalých chránících skupin, čímž se nedosáhne úplné stálosti trvalé ochrany. Jelikož délka syntetizovaného peptidů roste, podléhají permanentní chránící skupiny hromadnému působení kyselinových reagentů během Boc štěpných stupňů, což může mít za následek částečnou ztrátu těchto skupin 10 a hromadění vedlejších produktů. Nehledě ktomu může konečné zpracování sestavovaného peptidyl-polymeru velmi silnými kyselinovými reagenty způsobovat částečnou destrukci cílového peptidů. Je třeba také uvést, že extrémně hazardní vlastnosti silných kyselin vyžadují speciální zařízení a příslušná bezpečnostní opatření během postupu.
Aby bylo možné vyhnout se použití velmi silných kyselinových reagentů pro konečné odstranění ochrany, bylo nedávno navrženo několik skupin vysoce citlivých na kyselinu jako trvalá Naochrana, o nichž se předpokládá, že jsou kompatibilní s trvalou ochrannou bočních řetězců tak zvaných terc-butylového typu, štěpitelných kyselinovými reagenty o střední síle. Příkladem takové Να-chránicí skupiny je l-(3,5-di-terc-butylfenyl)-l-methyl-ethoxykarbonyl(t-Bume20 oc) skupina, která je popsána v Collect. Czech. Chem. Commun., 1992, sv. 57, str. 1707. Na-tBumeoc-skupina se štěpí 1% kyselinou trifluoroctovou v dichlormethanu a lze ji používat s trvale chránícími skupinami t-butylového typu štěpitelnými nezředěnou kyselinou trifluoroctovou nebo její koncentrovanými roztoky. V tomto případě je vyloučeno použití silných kyselin, ale obecný princip diferenciální acidolýzy ještě zůstává nezměněn.
Odlišný přístup ke strategii syntézy peptidů v tuhé fázi je uveden autorem R. B. Merrifield v Science, 1986, sv. 232, str. 341. Tento přístup, zvaný „princip orthogonality“, se zakládá na předpokladu, že přechodné a trvalé chránící skupiny mají být odstranitelné zcela odlišnými reagenty podle zcela odlišného chemického mechanismu, takže dočasnou Να-ochranu lze 30 odštěpit s naprostou selektivitou za předpokladu plného uchování trvalé ochrany a vice versa.
Tohoto času je „princip orthogonality“ obecně akceptován jako vůdčí postup pro rozvíjení účinných syntéz peptidů v tuhé fázi.
Příkladem postupu podle „principu orthogonality“ je použití Na-dithiasukcinylaminokyselin 35 (Dts-aminokyselin) při syntéze v tuhé fázi, jak je popsáno v Int. J. Peptide and Protein
Res., 1987, sv. 30, str. 740. Να-Dithiasukcinyl (Dts) chránící skupina je zcela odolná proti středně silným kyselinovým reagentům a snadno se štěpí thiolovými reagenty v neutrálním prostředí za uvolňování aminoskupiny a tvorby oxidu uhličitého. Aplikace Dts-aminokyselin je v praktické syntéze ještě omezeno vzhledem k nedostatku účinných metod pro jejich přípravu.
Nejznámější a široce používaná strategie při syntéze v tuhé fázi, která odpovídá „principu orthogonality“, se zakládá na použití Να-9-fluorenylmethoxykarbonylaminokyselin (Fmoc-aminokyselin), jak popisují C. D. Chang a J. Meienhofer v Int. J. Peptide and Protein Res., 1975, sv. 11, str. 246. Να-9-Fluorenylmethoxykarbonylová (Fmoc) skupina je odolná proti kyselinovým 45 reagentům a štěpí se podle β-eliminačního mechanismu organickými bázemi vaprotických rozpouštědlech, například morfolindiethylaminem, piperazinem nebo piperidinem v dimethylformamidu (DMF) nebo dichlormethanu, přičemž se uvolňuje aminoskupina a tvoří se dibenzofulven společně sCO2. Při syntéze v tuhé fázi se štěpení Fmoc skupiny provádí s výhodou působením Να-chráněného peptidyl-polymeru s 20 až 50% piperidinem v DMF v průběhu 10 až 50 30 minut. Uvedené podmínky umožňují používat trvalé ochrany citlivé na kyselinu t-butylového typu spolu s dočasnou Να-Fmoc-ochranou za dodržení takto „orthogonality“ strategie syntézy.
Να-Fmoc-aminokyseliny se často používají při manuální syntéze peptidů v tuhé fázi, jakož i v automatických a poloautomatických syntetizátorech všech typů. Je však třeba poznamenat, že
-2CZ 289747 B6 extrémní citlivost Να-Fmoc-ochrany proti zásadám a jistá její nestálost v neutrálních aprotických rozpouštědlech vyžadují pečlivou kontrolu acylačních podmínek a také čistotu použitých rozpouštědel. Je třeba dbát na toto zejména tehdy, používají-li se Na-Fmoc-aminokyseliny pro syntézu peptidů přesahujících 30 zbytků v délce. Kromě toho brání vysoká cena produkce použití F-moc-derivátů v široké škále příprav peptidů.
Je proto žádoucí vyvinout nové deriváty Να-chráněných aminokyselin, které by byly vhodné pro vyvinutí účinných strategií syntézy peptidů v tuhé fázi.
Uvedené nedostatky jsou z převážné části odstraněny u způsobu podle tohoto vynálezu.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou Na-2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyseliny (Na-Nsc-aminokyseliny) obecného vzorce I
v němž
Ri značí atom vodíku a
R2 značí izopropyl, 2-methylpropyl, 2-methylthioethyl, benzyl, karboxamidomethyl, 2karboxamidoethyl, terc.butoxybenzyl, indolyl-3-methyl, S-(trifenylmethyl)thiomethyl, 1—(trifenylmethyl)imidazolyl-4-methyl, 3-(NG-mesitylensulfonyl)guanidinopropyl, N-xanthylkarboxamidomethyl, 2-(N-xanthylkarboxamido)ethyl nebo S-(acetamidomethyl)thiomethyl, nebo
Ri a R2 tvoří společně propylenovou skupinu.
Předmětem vynálezu je též způsob přípravy aminokyselin uvedeného obecného vzorce I, v němž Ri a R2 jsou jako shora, při němž se aminokyselina obecného vzorce II
HNR!-CHR2-COOH (Π) v němž R] a R2 jsou jako shora, nechá reagovat s 2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylchlorformiátem ve směsném vodně-organickém rozpouštědle v přítomnosti báze a při teplotě 0 až 40 °C.
Při způsobu přípravy aminokyselin podle vynálezu, obecného vzorce I, v němž Ri a R2 jsou jako shora, se
a) aminokyseliny shora uvedeného obecného vzorce II, v němž Ri a R2 mají významy definované shora, přemění na N,O-bis-trimethylsilylderiváty,
b) které se nechají reagovat s 2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylchlorformiátem v přítomnosti báze v bezvodém organickém rozpouštědle s následnou hydrolýzou ve vodě.
-3CZ 289747 B6
Způsob přípravy aminokyselin podle vynálezu, obecného vzorce I, v němž Ri je vodík a R2 je N-xanthylkarboxamidomethyl nebo 2-(N-xanthylkarboxamido)ethyl, spočívá vtom, že se aminokyseliny obecného vzorce I, v němž Ri je vodíku a R2 znamená karboxamidomethyl nebo 2-(karboxamido)ethyl, nechají reagovat s xanthydrolem v organickém rozpouštědle v přítomnosti kyseliny.
Způsob podle vynálezu se s výhodou provádí v přítomnosti dusíkaté báze vybraná ze skupiny zahrnující amoniak, morfolin, piperidin, piperazin, diethylamin, l,8-diazabicyklo[5,4,0]undec7-en, 1,1,3,3-tetramethylguanidin a jejich roztoky v aprotických organických rozpouštědlech.
Způsob podle vynálezu se s výhodou provádí s piperidinem jakožto dusíkatou bází a s dimethylPředmětem tohoto vynálezu je rovněž použití Na-2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylaminokyselin podle vynálezu, obecného vzorce I, pro syntézu peptidů sekvenciální adicí chráněných aminokyselinových monomerů na rostoucí peptidový řetězec, napojený na nerozpustný polymemí podklad.
Να-Nsc-aminokyseliny podle tohoto vynálezu, shora uvedeného obecného vzorce I, lze připravovat reakcí aminokyselin dále uvedeného obecného vzorce II, v němž Ri a R2 mají významy uvedené u shora uvedeného obecného vzorce I, s 2-(nitrofenylsulfonyl)chlorformiátem dále uvedeného vzorce III ve směsném vodněorganickém rozpouštědle v přítomnosti báze a při teplotě 0 až 40 °C, s výhodou při 0 až 20 °C (schéma 1)
(I) (II) w (III)
Chlorformiát vzorce ΠΙ se uvádí do reakce v množství 0,5 až 1,5 molámích ekvivalentů, s výhodou 0,7 až 0,9, vztaženo na aminokyselinu. Jako organickou komponentu rozpouštědla lze používat kterékoliv aprotické organické rozpouštědlo, které je schopné rozpouštět acylační činidlo a je mísitelné s vodou, například acetonitril, DMF, tetrahydrofuran nebo dioxan. Bází může být organická či anorganická báze, například uhličitan sodný nebo draselný, oxid hořečnatý nebo vápenatý, triethylamin nebo N-methylmorfolin.
Podle jiného způsobu podle tohoto vynálezu se aminokyseliny obecného vzorce II nejprve přemění v Ν,Ο-bis-trimethylsilylderiváty dále uvedeného obecného vzorce IV, v němž R( a R2 mají shora uvedené významy, známými postupy a potom se na ně působí chlorformiátem ΠΙ v přítomnosti báze v bezvodém organickém rozpouštědle, například dichlormethanu. Po vodné hydrolýze trimethylsilylderivátů jakožto meziproduktů získají se požadované Na-Nsc-aminokyseliny ve volné formě (schéma 2).
z tt x i)ω (H)---· _^(i) (IV)
Deriváty vzorce I, v němž Rj je vodík a R2 značí N-xanthylkarboxamidomethyl nebo 2-(Nxanthylkarboxamido)ethyl, lze připravovat reakcí derivátu vzorce I, v němž R] je vodík a R2 značí karboxamidomethyl nebo 2-(karboxyamido)ethyl, s xanthydrolem v aprotickém organickém rozpouštědle v přítomnosti kyseliny. Jako rozpouštědlo lze používat DMF a vhodnou kyselinou je organická kyselina, například trifluoroctová, methansulfonová nebo p-toluensulfonová kyselina.
-4CZ 289747 B6
Z molekulárního vzorce je zřejmé, že sloučeniny I mají asymetrický α-uhlíkový atom (s výjimkou sloučenin, v nichž Rj = R2 = H). Protože se α-uhlíkový atom neúčastní reakcí používaných pro přípravu sloučenin I, zachová se konfigurace tohoto chirálního centra, existujícího ve výchozích aminokyselinách II, ve výsledných Να-Nsc-derivátech. Je tudíž jasné, že způsoby podle tohoto vynálezu se mohou používat pro přípravu Na-Nsc-aminokyselin I v jakékoliv chirální podobě (L nebo D), jakož i racemických sloučenin, což závisí na konfiguraci výchozí sloučeniny II.
Významy substituentů Ri a R2 v derivátech vzorce I podle tohoto vynálezu odpovídají strukturám postranních řetězců přirozeně se vyskytujících aminokyselin, které obsahují či neobsahují chránící skupiny známé v boru, povětšinou skupiny terc-butylového typu nebo jim podobné vzhledem k podmínkám štěpení (tabulka 1).
Tabulka 1
Významy substituentů Rj a R2 ve sloučeninách I
| č. | Ri | r2 | Aminokyselina | Zkratka |
| 1-3 | H | izopropyl | valin | Nsc-Val-OH |
| 1-5 | H | 2-methylpropyl | leucin | Nsc-Leu-OH |
| 1-8 | H | 2-methylthioethyl | methionin | Nsc-Met-OH |
| 1-9 | H | benzyl | fenylalanin | Nsc-Phe-OH |
| 1-10 | H | karboxamidomethyl | asparagin | Nsc-Asn-OH |
| 1-11 | H | 2-karboxamidoethyl | glutamin | Nsc-Gln-OH |
| 1-15 | H | 4-t-butoxybenzyl | O-t-butyl-tyrosin | Nsc-Tyr(tBu)-OH |
| 1-16 | H | indolyl-3-methyl | tryptofan | Nsc-Trp-OH |
| 1-17 | H | S-(trifenylmethyl) thiomethyl | S-trifenylmethylcystein | Nsc-Cys(Trt)-OH |
| 1-18 | U | 1 -(trifenylmethy 1) imidazolyl-4-methyl | Ντ-trifenylmethylhistidin | Nsc-His(Trt)-OH |
| 1-19 | H | 3-(NG-mesitilensulfonylguanidinopropyl | J 1 N -mesitylensulfonyl-arginin | N sc-Arg(Mts)-OH |
| 1-20 | H | N-xanthylkarboxamidomethyl | N-xanthyl-asparagin | Nsc-Asn(Xan)-OH |
| 1-21 | H | 2-(N-xanthylkarboxamido)ethyl | N-xanthyl-glutamin | Nsc-Gln(Xan)-OH |
| 1-22 | H | S-(acetamidomethyl)thiomethyl | S-acetamidomethylcystein | Nsc-Cys(Acm)-OH |
| 1-23 | Rj+J | <2 = propylen | prolin | Nsc-Pro-OH |
Sloučeniny vzorce I uvedené v tabulce 1 představují zřejmě plnou sadu chráněných proteogenických derivátů aminokyselin potřebných pro syntézu peptidu kterékoliv směsi aminokyselin. Je rovněž zřejmé, že Να-Nsc-deriváty aminokyselin nesoucí jiný typ ochrany základního řetězce, jakož i Να-Nsc-deriváty neproteogenních nebo neobvyklých aminokyselin, lze syntetizovat způsobem podle vynálezu.
Na-Nsc-aminokyseliny I jsou krystalické sloučeniny nerozpustné nebo málo rozpustné ve vodě a rozpustné v polárních rozpouštědlech a jsou stálé při dlouhodobém skladování při -10 až 25 °C.
Způsob podle tohoto vynálezu poskytuje postup pro syntézu peptidů v tuhé fázi za použití NaNsc-aminokyselin vzorce I.
-5CZ 289747 B6
Tímto způsobem se první Να-Nsc-aminoskupina (C-terminál cílové aminosekvence) napojí kovalentně na nerozpustný polymemí nosič přes volnou α-karboxylovou skupinu vytvořením esterové nebo amidové vazby, čímž se získá Na-Nsc-aminoacyl-polymer. Mohou se používat různé polymery jakožto polymemí nosiče, jako jsou zesítěný nebo makroporovitý polystyren, 5 zesítěný poly-N,N-dimethylakrylamid v granulované formě nebo jako směs skřemelinou, zesítěné dextrany, celulózy, papíry a jiné polymery známé v oboru a používané k tomuto účelu.
Pro napojení první Na-Nsc-aminokyseliny má polymemí nosič obsahovat vhodné kotevní skupiny. Ve většině případů jsou kotevními skupinami takové skupiny, jež poskytují možnost 10 odštěpení syntetizovaného peptidu od polymemího nosiče za uvolnění C-terminální karboxylové nebo karboxamidové skupiny během zpracování peptidyl-polymeru kyselými reagenty, jako je trifluoroctová kyselina a její roztoky nebo roztoky chlorovodíku v organických rozpouštědlech. Takovými kotevními skupinami pro napojení esterového typu mohou být 4-hydroxymethylfenoxyalkyl, 4-chlor- nebo 4-brommethylfenoxyalkyl, α-hydroxydifenylmethyl a jiné skupiny 15 známé v tomto oboru. Pro napojení karboxamidového typu jsou známé di- a trialkoxylbenzhydrylaminové skupiny, 4-aminomethyl-3,5-dimethoxyfenoxyalkylová skupina a také jiné známé skupiny používané k tomuto účelu.
Připojení C-terminální Na-Nsc-aminokyseliny ke kotevním skupinám polymemího nosiče se 20 může uskutečňovat metodami, jež jsou v tomto oboru známé.
Aby se Να-chránicí skupina odštěpila ze získaného Na-Nsc-aminoacyl-polymeru, působí se na ni zásaditým činidlem. Vhodnými zásaditými činidly pro tento účel jsou dusíkaté báze, např. amoniak, morfolin, piperidin, piperazin, diethylamin, l,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-en, 25 1,1,3,3-tetramethylguanidin a jejich roztoky vaprotických organických rozpouštědlech. Zvlášť vhodným zásaditým činidlem je 20 až 50% roztok piperidinu v DMF. V tomto případě se Nscskupina odštěpí za vzniku N-[2-(4—nitrofenylsulfonyl)ethyl]piperidinu a oxidu uhličitého, přičemž se uvolní a-aminoskupina.
Potom se aminoacyl-polymer s volnou α-aminoskupinou acyluje další Na-Nsc-aminokyselinou za vzniku Να-Nsc-dipeptidyl-polymeru. K tomuto účelu se používají v oboru známé metody, požívané obvykle k tomuto účelu. Jako acylační činidla lze používat například 4-nitrofenyl, pentachlorfenyl, pentafluorfenyl, 1-hydroxybenzotriazolylestery Να-Nsc-aminokyselin a jiné známé typy aktivních esterů používané v syntéze peptidů v tuhé fázi, jakož i symetrické 35 anhydridy Να-Nsc-aminokyselin. Acylaci lze provádět také Na-Nsc-aminokyselinami v přítomnosti známých kopulačních činidel, např. dicyklohexylkarbodiimidu, diizopropylkarbodiimidu, benzotriazolyl-l-oxy(tris-dimethylamino)fosfonium-hexafluorfosfátu.
Syntetické cykly, které spočívají v odštěpení Να-Nsc-skupiny a následné acylaci volné amino40 skupiny následující Na-Nsc-aminokyselinou, se opakují, až se dosáhne sestavení cílové aminokyselinové sekvence.
Po sestavení požadovaného Na-Nsc-peptidylyl-polymeru se Na-terminální chránící skupina odštěpí shora uvedenými postupy a potom se cílový peptid ve většině případů odpojí od kotevní 45 skupiny nosiče za současného odštěpení trvalé ochrany od postranních řetězců aminokyselin.
K tomuto účelu lze používat kyselých reagentů, známých v oboru pro odštěpování chránících skupin terc-butylového typu, např. trifluoroctové kyseliny, roztoků methansulfonové nebo p-toluensulfonové kyseliny, obsahujících nebo neobsahujících známá aditiva k zachycování vyvíjejících se karboniových iontů, například vodu, anisol, thioanisol, dimethylsulfid nebo ethan50 dithiol-l,2-triizopropylsilan.
Popřípadě se může cílový peptid odblokovat bez odštěpení od polymemího nosiče. V takových případech je třeba používat známé kotevní skupiny, které mohou poskytovat vazbu peptidylpolymer, odolnou proti kyselinám.
-6CZ 289747 B6
Ve srovnání s Fmoc je Nsc-skupina odolnější proti zásaditým činidlům a rychlost jejího odštěpení je znatelně pomalejší za stejných podmínek, avšak doba, která se obvykle přisuzuje pro odštěpení Να-ochrany podle protokolů syntézy v tuhé fázi (15 až 20 min), dostačuje pro kvantitativní odštěpení Να-Nsc-skupiny od chráněného peptidyl-polymeru takovými zásaditými činidly, jako je 20 až 50% roztok piperidinu v DMF. Na druhé straně skýtá zvýšená odolnost Nsc-skupiny k zásaditým činidlům větší její stabilitu v neutrálních a slabě zásaditých prostředcích, které se s výhodou používají k provedení acylačních stupňů.
Jak je shora popsáno, může se Nsc-skupina odštěpovat kvantitativně zásaditými činidly v přítomnosti chránících skupin terc-butylového typu, jež jsou odolné proti organickým zásadám. Na druhé straně je Nsc-skupina úplně odolná proti působení kyselých činidel používaných obvykle ke štěpení chránící skupiny terc-butylového typu. Použitím Na-Nsc-aminokyselin obecného vzorce I, které obsahují v postranních řetězcích chránící skupinu s výhodou tercbutylového typu nebo ji podobnou vzhledem k štěpným podmínkám, umožňuje se tudíž vývoj nové strategie syntézy peptidů v tuhé fázi ve shodě s „principem orthogonality“.
Vynález bude nyní blíže popsán pomocí příkladů, jež mají vynález blíže objasňovat, aniž by měly omezující význam. Všechny aminokyseliny v následující příkladové části popisu mají L-konfiguraci, není-li uvedeno jinak.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 Να-Nsc-asparagin (I—10)
3,95 g asparaginu a 7,7 g uhličitanu draselného se rozpustí ve 100 ml směsi voda-dioxan (3:1 hmotnostně) a ochladí v ledové lázni, potom se po kapkách v průběhu 15 minut přidá za míchání roztok 7,5 g 2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethyl-chlorformiátu III v 70 ml dioxanu. Chladicí lázeň se odstraní a směs se míchá dalších 20 minut, potom se odpaří na asi 100 ml za sníženého tlaku a nalije se do dělicí nálevky. Přidá se 100 ml vody a výsledný roztok se extrahuje 2krát 50 ml ethylacetátu. Vodná vrstva se oddělí, okyselí na pH 2 přidáním 40% kyseliny sírové a ochladí v ledové lázni. Po 30 minutách se vzniklá sraženina odfiltruje, promyje důkladně ledovou vodou a vysuší na vzduchu. Získá se požadovaná sloučenina I—10 v podobě bílého krystalického prášku. Její charakteristiku viz v tabulce 2 (příklad 5).
Příklad 2 Na-Nsc-leucin (1-5)
Do 250 ml baňky s kulatým dnem, vybavené zpětným chladičem a kapací nálevkou, se vloží 4,92 g leucinu a 90 ml bezvodého dichlormethanu. K suspenzi se přidá 9,5 ml chlortrimethylsilanu za intenzivního míchání a směs se zahřívá při teplotě varu 1 hodinu. Výsledný roztok se ochladí v ledové lázni a potom se kněmu přidá za míchání 9,1 ml triethylaminu a 9,0 g chlorformiátu ΙΠ. Směs se míchá 20 minut v ledové lázni a potom další 1,5 hodinu při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi 200 ml ethylacetátu a 250 ml 2,5% vodného kyselého uhličitanu sodného. Vodná vrstva se oddělí, promyje 50 ml etheru, okyselí na pH 2 IN chlorovodíkovou kyselinou a potom extrahuje 3krát vždy 70 ml ethylacetátu. Spojené extrakty se vysuší bezvodým síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Rekrystalizací zbytku z hexan-ethylacetátu se získá požadovaný produkt 1-5 ve formě bílého krystalického prášku (80 %). Jeho vlastnosti jsou uvedeny v tabulce 2 (příklad 5).
Příklad 3 β-terc-Butylester kyseliny Na-Nsc-aspartové
Do 250 ml baňky s kulatým dnem opatřené zpětným chladičem a kapací nálevkou se vloží 7,09 g β-ter-butylesteru kyseliny aspartové a 90 ml bezvodého dichlormethanu. Ke směsi se přidá za intenzivního míchání 12,7 ml diizopropylethylenaminu a potom 9,5 ml chlortrimethylsilanu a směs se zahřívá za teploty varu 1,5 hodinu. Reakční směs se potom ochladí v ledové lázni, najednou se přidá 9,0 g chlorformiátu III a vmíchání se pokračuje 1,5 hodinu při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se distribuuje mezi 200 ml ethylacetátu a 250 ml 2,5% vodného bikarbonátu sodného. Vodná vrstva se oddělí, promyje 50 ml etheru, okyselí na pH2 přidáním IN kyseliny chlorovodíkové a potom extrahuje 3krát vždy 70 ml ethylacetátu. Spojené extrakty se vysuší bezvodým síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Překrystalizováním zbytku z hexan-ethylacetátu se získá požadovaný produkt 1-12 ve formě bílého krystalického prášku (86%). Jeho vlastnosti jsou uvedeny v tabulce 2 (příklad 5).
Příklad 4 Na-Nsc-N-Xanthyl-asparagin (1-20)
3,89 g Na-Nsc-asparaginu (1-10) a 2,6 g xanthydrolu se rozpustí ve 20 ml suchého DMF. K roztoku se přidá 0,4 ml methansulfonové kyseliny a směs nechá stát 2 dny při teplotě místnosti. Výsledná směs se potom vlije za míchání do 100 ml ledové vody a vzniklá sraženina se odfiltruje, promyje vodou a potom ethylacetátem a etherem. Surový produkt se rozpustí v 10 ml teplého DMF, zfíltruje a znovu vysráží etherem. Sraženina se odfiltruje, promyje etherem a vysuší ve vakuu. Získá se požadovaná sloučenina 1-20 jako krystalický prášek (74 %). Její vlastnosti jsou uvedeny v tabulce 2 v příkladu 5.
Příklad 5 Vlastnosti Να-Nsc-aminokyselin I
V tabulce 2 jsou uvedeny sloučeniny vzorce I, které se připravují postupy popsanými podrobně v příkladech 1 až 4. Čísla ve sloupci „Metoda“ značí příklady, v nichž jednotlivé metody jsou popsány. Specifické optické rotace [a]D 25 byly měřeny polarimetrem DIP-320 (JASCO, Japonsko) v 10 cm kyvetách Teploty tání se stanovují v otevřených kapilárách a nejsou korigovány. Chromatografícká pohyblivost hodnot Ri je udávána pro tenkovrstvé chromatografícké fólie (Alufolien Kieselgel 60 F254, Měrek, Darmstadt, Německo); chloroform/methanol/octová kyselina, 95:5:3, (A) benzen/aceton/octová kyselina 100:50:3 a (B) se používají jako vyvíjející rozpouštědla, skvrny se detekuje UV-absorbancí a/nebo ninhydrinovou reakcí. Hmotnosti molekulového iontu (M+H)+ se měří použitím hmotového spektrometru MS-BC-1 (time-of-flight) s Cf252 radiačně-promotovanou desorpcí (Electron SPA, Sumy, Ukrajina).
-8CZ 289747 B6
Tabulka 2
Vlastnosti Na-Nsc-aminokyselin I
| č. | Sloučenina | Metoda dle príkl. | [α]25ο (cl,DMF) (°) | T.t. °C | RKA) | RKB) | Molekul, ion (M+H) | |
| Vypočteno | Nalezeno | |||||||
| 1-1 | Nsc-Gly-OH* | 2 | 152-154 | 0,40 | 0,21 | 333,30 | 333,4 | |
| 1-2 | Nsc-Ala-OH* | 2 | -25,6 | 134-136 | 0,53 | 0,35 | 347,32 | 347,4 |
| 1-3 | Nac-Val-OH | 2 | -12,0 | 72-74 | 0,62 | 0,50 | 375,38 | 375,4 |
| 1-4 | Nsc-Ile-OH* | 2 | -13,0 | 120-121 | 0,62 | 0,52 | 389,41 | 389,6 |
| 1-5 | Nsc-Leu-OH | 2 | -33,0 | 160-162 | 0,68 | 0,42 | 389,41 | 389,7 |
| 1-6 | Nsc-Ser(tBu)-OH* | 3 | +3,3 | 109-111 | 0,68 | 0,46 | 419,43 | 418,9 |
| 1-7 | Nsc-Thr(tBu)-OH* | 3 | -9,0 | 64-66 | 0,68 | 0,50 | 433,46 | 433,2 |
| 1-8 | Nsc-Met-OH | 2 | -28,7 | 88-90 | 0,65 | 0,37 | 407,47 | 406,9 |
| 1-9 | Nsc-Phe-OH | 2 | -23,0 | 160-163 | 0,66 | 0,40 | 423,42 | 423,3 |
| 1-10 | Nsc-Asn-OH | 1 | -1,3 | 205-207 | 0,05 | 0,05 | 390,35 | 390,2 |
| 1-11 | Nsc-Gln-OH | 1 | -9,7 | 192-194 | 0,10 | 0,05 | 404,38 | 404,3 |
| 1-12 | Nsc-Asp(OtBu)-OH* | 3 | -12,7 | 72-75 | 0,64 | 0,38 | 447,44 | 447,2 |
| 1-13 | Nsc-Glu(OtBu)-OH* | 3 | -17,0 | 94-96 | 0,67 | 0,38 | 461,47 | 461,4 |
| 1-14 | Nsc-Lys(Boc)-OH* | 3 | -11,8 | 110-112 | 0,62 | 0,35 | 504,54 | 505,9 |
| 1-15 | Nsc-Tyr(tBu)-OH | 3 | -6,3 | 82-84 | 0,68 | 0,44 | 495,53 | 495,2 |
| 1-16 | Nsc-Trp-OH | 3 | -14,7 | 188-190 | 0,53 | 0,33 | 462,46 | 461,7 |
| 1-17 | Nsc-Cys(Trt)-OH | 3 | +22,3 | 108-110 | 0,75 | 0,52 | 621,71 | 619,3 |
| 1-18 | Nsc-His(Trt)-OH | 3 | +5,0 | 112-115 | 0,42 | 0,1 | 655,71 | 656,8 |
| 1-19 | Nsc-Arg(Mts)-OH | 3 | ^1,0 | 115-120 | 0,25 | 0,05 | 615,68 | 614,4 |
| 1-20 | Nsc-Asn(Xan)-OH | 4 | +2,7 | 198-200 | 0,43 | 0,25 | 570,56 | 568,8 |
| 1-21 | Nsc-Gln(Xan)-OH | 4 | -13,7 | 155-158 | 0,58 | 0,23 | 584,58 | 582,9 |
| 1-22 | Nsc-Cys(Acm)-OH | 2 | -31,0 | 124-126 | 0,17 | 0,05 | 450,47 | 451,2 |
| 1-23 | Nsc-Pro-OH | 2 | -31,5 | 115-117 | 0,53 | 0,37 | 371,35 | 371,3 |
* nejsou v rozsahu nároku 1.
io Příklad 6 Syntéza v tuhé fázi dodekapeptidu
Ala-Ser-Ser-Thr-Ile-Ile-Lys-Phe-Gly-Ile-Asp-Lys
a) Inserce kotevní skupiny do polymemího nosiče
Ke 250 mg aminomethylovaného kopolymeru styren-1% divinylbenzen (l,0mekv. NH2/g) ve ml DMF se přidá 0,75 mmol 2,4,5-trichlorfenyl-4-hydroxymethylfenoxypropionátu a 0,75 mmol 1-hydroxybenzotriazolu a suspenze se třepe 24 hodin při teplotě místnosti. Polymer se odfiltruje, promyje DMF, ethanolem, etherem a nakonec hexanem a suší ve vakuu nad oxidem 20 fosforečným 24 hodin.
b) Napojení Nsc-Lys(Boc)-OH na kotevní skupinu
Získaný polymer se nechá nabobtnat ve 4 ml směsi 1,2-dichlorethanu a N-methylpyrrolidinu 25 (3:1) a potom se přidá 0,75 mmol Nsc-Lys(Boc)-OH (1-14), 0,1 mmol 4-dimethylaminopyridinu a 0,75 mmol dicyklohexylkarbodiimidu. Suspenze se třepe 24 hodin při teplotě místnosti. Polymer se odfiltruje, promyje důkladně chloroformem, směsí chloroform/methanol (1:1), ethanolem, etherem a nakonec hexanem a po vysušení se získá 400 mg Nsc-Lys(Boc)-polymeru.
-9CZ 289747 B6
c) Sestavení peptidů
Nsc-Lys(Boc)-polymer (200 mg) se vloží do polypropylenové injekční stříkačky opatřené vespod polypropylenovou fritou. Polymer se ve stříkačce promyje DMF a další syntetické cykly se uskuteční podle následujícího operačního protokolu:
1. Předběžné promytí: 33% piperidin/DMF, 4 ml, 0,5 min
| 2. Odblokování: | 33% piperidin/DMF, 4 ml, 15 min |
| 3. Promytí 4. Acylace | DMF 6x (4 ml, 1 min) Να-Nsc-aminokyselina I, 0,5 mmol; benzotriazolyl-l-oxy-(trisdimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfát, 0,5 mmol; 1-hydroxybenzotriazol, 0,5 mmol; N-methyl-morfolin, 0,75 mmol, DMF, 2 ml; (90 min pro Nsc-Ile-OH) |
| 5. Promytí | DMF 5x (4 ml, 1 min) |
Νά-Nsc-aminokyseliny se přivádějí do syntetických cyklů v pořadí: Nsc-Asp(OtBu)-OH, Nsc-Ile-OH, Nsc-Gly-OH, Nsc-Phe-OH, Nsc-Lys(Boc)-OH. Nsc-Ile-OH, Nsc-Ile-OH, Nsc-Thr-(tBu)-OH, Nsc-Ser(tBu)-OH, Nsc-Ser(tBu)-OH, Nsc-Ala-OH.
Po sestavení cílové sekvence aminokyseliny se na peptidyl-polymer působí 20 minut 4 ml 33% piperidinem/DMF, potom se promyje DMF, dichlormethanem, ethanolem, etherem a nakonec hexanem.
d) Odblokování a čištění
Peptidyl-polymer se třepe s 5 ml 50% kyseliny trifluoroctové v 1,2-dichlorethanu 60 minut při teplotě místnosti. Polymer se odfiltruje, promyje 5 ml 50% kyseliny trifluoroctové v 1,2-dichlorethanu a spojené promývací roztoky se zředí 100 ml bezvodého ledového etheru. Sraženina se odfiltruje, promyje etherem a vysuší ve vakuu. Získá se 170 mg surového dodekapeptidu (čistota 70 % stanoveno reverzní vysoce výkonnou chromatografií v kapalné fázi).
Surový dodekapeptid se rozpustí ve 3 ml IM vodné kyseliny octové a chromatografuje na sloupci 1,5x70 cm naplněném přípravkem TSK HW-40F (Měrek, Darmstadt, Německo), ekvilibrovaném a promytém stejným pufrem. Frakce obsahující čistý peptid se spojí a lyofilizují. Výsledný výtěžek cílového dodekapeptidu je 104 mg (41 %), čistota více než 95% stanoveno analýzou reverzní vysoce výkonnou chromatografií v kapalné fázi. Složení aminokyseliny (po hydrolýze 6N HCI, 110°C, 24 a 48 hodin): Asp 1,02(1); Ser 1,84(2); Thr 0,93(1); Glu 0,94(1); Gly 1,03(1); Ala 1,00(1); lle 2,78(3); Lys 2,04(2).
Claims (7)
- PATENTOVÉ NÁROKY (I),1. Na-2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyseliny obecného vzorce I v němžRi značí atom vodíku aR2 značí izopropyl, 2-methylpropyl, 2-methylthioethyl, benzyl, karboxamidomethyl, 2karboxamidoethyl, terc.butoxybenzyl, indolyl-3-methyl, S-(trifenylmethyl)thiomethyl, 1-{trifenylmethyl)imidazolyl-4-methyl, 3-(NG-mesitylensulfonyl)guanidinopropyl, N-xanthylkarboxamidomethyl, 2-(N-xanthylkarboxamido)ethyl nebo S-(acetamidomethyl)thiomethyl, nebo Ri a R2 tvoří společně propylenovou skupinu.
- 2. Způsob přípravy aminokyselin podle nároku 1, uvedeného obecného vzorce I, v němž Ri aR2 mají význam uvedený v nároku 1, vyznačující se tím, že se aminokyselina obecného vzorce IIHNRi-CHR2-COOH (Π) v němž R] a R2 mají význam uvedený v nároku 1, nechá reagovat s 2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylchlorformiátem ve směsném vodně-organickém rozpouštědle v přítomnosti báze a při teplotě 0 až 40 °C.
- 3. Způsob přípravy aminokyselin podle nároku 1, obecného vzorce I, v němž R] a R2 mají význam uvedený v nároku 1, vyznačuj ící se tím, že sea) aminokyselina shora uvedeného obecného vzorce Π, v němž Rj a R2 mají významy uvedené v nároku 1, přemění naN,O-bis-trimethylsilylderivát,b) který se nechá reagovat s 2--(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylchlorformiátem v přítomnosti báze v bezvodém organickém rozpouštědle s následnou hydrolýzou ve vodě.
- 4. Způsob přípravy aminokyselin podle nároku 1, obecného vzorce I, v němž Ri je vodík a R2 je N-xanthylkarboxamidomethyl nebo 2-(N-xanthylkarboxamido)ethyl, vyznačující se t í m, že se aminokyseliny podle nároku 1, obecného vzorce I, v němž Rj je atom vodíku a R2 znamená karboxamidomethyl nebo 2-(karboxamido)ethyl, nechají reagovat s xanthydrolem v organickém rozpouštědle v přítomnosti kyseliny.
- 5. Způsob podle nároků 2 až 4, vyznačující se tím, že se provádí v přítomnosti dusíkaté báze vybrané ze skupiny zahrnující amoniak, morfolin, piperidin, piperazin, diethylamin, l,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-en, 1,1,3,3-tetramethylguanidin a jejich roztoky v aprotických organických rozpouštědlech.
- 6. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že se provádí spiperidinem jakožto dusíkatou bází a s dimethylformamidem jakožto organickým rozpouštědlem.-11 CZ 289747 B6
- 7. Použití Na-2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyselin podle nároku 1, obecného vzorce I, pro syntézu peptidů sekvenciální adicí chráněných aminokyselinových monomerů na rostoucí peptidový řetězec napojený na nerozpustný polymerní podklad.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU9595102102A RU2079491C1 (ru) | 1995-02-15 | 1995-02-15 | Nα -2-(4-НИТРОФЕНИЛСУЛЬФОНИЛ)ЭТОКСИКАРБОНИЛ-АМИНОКИСЛОТЫ В КАЧЕСТВЕ Nα -ЗАЩИЩЕННЫХ АМИНОКИСЛОТ ДЛЯ ТВЕРДОФАЗНОГО СИНТЕЗА ПЕПТИДОВ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ247797A3 CZ247797A3 (cs) | 1998-02-18 |
| CZ289747B6 true CZ289747B6 (cs) | 2002-03-13 |
Family
ID=20164784
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19972477A CZ289747B6 (cs) | 1995-02-15 | 1996-01-27 | Nalfa-2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyseliny, způsob jejich přípravy a jejich pouľití |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5616788A (cs) |
| EP (1) | EP0765307B1 (cs) |
| JP (1) | JP2888991B2 (cs) |
| KR (1) | KR100241948B1 (cs) |
| CN (1) | CN1058260C (cs) |
| AT (1) | ATE185796T1 (cs) |
| AU (1) | AU705716B2 (cs) |
| CA (1) | CA2212052C (cs) |
| CZ (1) | CZ289747B6 (cs) |
| DE (1) | DE69604759T2 (cs) |
| DK (1) | DK0765307T3 (cs) |
| ES (1) | ES2140061T3 (cs) |
| FI (1) | FI973338A7 (cs) |
| GR (1) | GR3031832T3 (cs) |
| HU (1) | HUP9801150A3 (cs) |
| NO (1) | NO309142B1 (cs) |
| PL (1) | PL184205B1 (cs) |
| RU (1) | RU2079491C1 (cs) |
| WO (1) | WO1996025394A1 (cs) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998017638A1 (en) * | 1996-10-19 | 1998-04-30 | Hyundai Pharm. Ind. Co., Ltd. | Nα-2-(4-NITROPHENYLSULFONYL)ETHOXYCARBONYL-AMINO ACIDS |
| CN1090615C (zh) * | 1996-10-19 | 2002-09-11 | Hyundai药物工业株式会社 | Nα－2－(4－硝基苯基磺酰基)乙氧羰基氨基酸 |
| KR100378252B1 (ko) * | 1999-11-12 | 2003-03-29 | 학교법인 포항공과대학교 | 니트로술포닐에톡시카르보닐-아미노산을 이용한 합성테트라펩티드 라이브러리의 제조방법 |
| AU1894000A (en) * | 1999-12-24 | 2001-07-24 | Hyundai Pharmaceutical Ind. Co., Ltd. | Nalpha-2-(4-nitrophenylsulfonyl)ethoxycarbonyl-amino acid fluorides and process for the preparation thereof |
| KR100418962B1 (ko) * | 2001-06-07 | 2004-02-14 | 김학주 | 2-(4-나이트로페닐설포닐)에톡시카르보닐-아미노산류를사용하여 펩티드를 고수율 및 고순도로 제조하는 방법 |
| RU2214416C2 (ru) * | 2001-12-10 | 2003-10-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Rgd-содержащие пептиды |
| JP5515738B2 (ja) * | 2007-07-25 | 2014-06-11 | 味の素株式会社 | ジベンゾフルベン誘導体の淘汰方法 |
| CN103421087A (zh) * | 2013-04-12 | 2013-12-04 | 上海捌加壹医药科技有限公司 | 一种多肽的液相合成方法 |
| WO2024079043A1 (en) | 2022-10-10 | 2024-04-18 | Bachem Holding Ag | Method of manufacturing a peptide with a lysine derivative |
| WO2025078040A1 (en) | 2023-10-09 | 2025-04-17 | Bachem Holding Ag | Lysine salt and method of manufacturing a lysine derivative |
-
1995
- 1995-02-15 RU RU9595102102A patent/RU2079491C1/ru active
-
1996
- 1996-01-27 AT AT96901556T patent/ATE185796T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-01-27 WO PCT/KR1996/000012 patent/WO1996025394A1/en not_active Application Discontinuation
- 1996-01-27 AU AU45496/96A patent/AU705716B2/en not_active Ceased
- 1996-01-27 HU HU9801150A patent/HUP9801150A3/hu unknown
- 1996-01-27 CZ CZ19972477A patent/CZ289747B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-01-27 CN CN96191913A patent/CN1058260C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-27 FI FI973338A patent/FI973338A7/fi unknown
- 1996-01-27 PL PL96321864A patent/PL184205B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-01-27 DK DK96901556T patent/DK0765307T3/da active
- 1996-01-27 DE DE69604759T patent/DE69604759T2/de not_active Revoked
- 1996-01-27 ES ES96901556T patent/ES2140061T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-27 EP EP96901556A patent/EP0765307B1/en not_active Revoked
- 1996-01-27 CA CA002212052A patent/CA2212052C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-27 JP JP8524843A patent/JP2888991B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-27 KR KR1019970705664A patent/KR100241948B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1996-02-01 US US08/595,381 patent/US5616788A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-08-14 NO NO973752A patent/NO309142B1/no unknown
-
1999
- 1999-11-12 GR GR990402922T patent/GR3031832T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUP9801150A3 (en) | 2000-07-28 |
| JPH10503216A (ja) | 1998-03-24 |
| CA2212052A1 (en) | 1996-08-22 |
| NO309142B1 (no) | 2000-12-18 |
| EP0765307A1 (en) | 1997-04-02 |
| WO1996025394A1 (en) | 1996-08-22 |
| CA2212052C (en) | 2002-09-03 |
| AU705716B2 (en) | 1999-05-27 |
| FI973338L (fi) | 1997-10-14 |
| GR3031832T3 (en) | 2000-02-29 |
| AU4549696A (en) | 1996-09-04 |
| US5616788A (en) | 1997-04-01 |
| PL184205B1 (pl) | 2002-09-30 |
| CZ247797A3 (cs) | 1998-02-18 |
| KR19980702267A (ko) | 1998-07-15 |
| DE69604759D1 (de) | 1999-11-25 |
| DE69604759T2 (de) | 2000-06-21 |
| FI973338A0 (fi) | 1997-08-14 |
| PL321864A1 (en) | 1997-12-22 |
| JP2888991B2 (ja) | 1999-05-10 |
| FI973338A7 (fi) | 1997-10-14 |
| HUP9801150A2 (hu) | 1998-09-28 |
| NO973752D0 (no) | 1997-08-14 |
| CN1173865A (zh) | 1998-02-18 |
| RU95102102A (ru) | 1996-11-20 |
| ATE185796T1 (de) | 1999-11-15 |
| ES2140061T3 (es) | 2000-02-16 |
| DK0765307T3 (da) | 1999-12-27 |
| NO973752L (no) | 1997-10-14 |
| EP0765307B1 (en) | 1999-10-20 |
| CN1058260C (zh) | 2000-11-08 |
| RU2079491C1 (ru) | 1997-05-20 |
| KR100241948B1 (ko) | 2000-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI90780B (fi) | Tekohartsi | |
| HU205091B (en) | Process for producing amino acid-n-carboxyanhydrides protected with urethane group | |
| JP2002525376A (ja) | アミド結合形成のための補助基 | |
| WO2011098999A2 (en) | Chemical preparation of ubiquitin thioesters and modifications thereof | |
| CZ289747B6 (cs) | Nalfa-2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyseliny, způsob jejich přípravy a jejich pouľití | |
| NO166532B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av peptidet h-arg-x-z-y-tyr-r. | |
| WO2000005243A2 (en) | Resin derivatization method and uses thereof | |
| JP5014148B2 (ja) | ペプチドチオエステルの製造方法 | |
| AU2001288937B2 (en) | Extended native chemical ligation | |
| CZ282881B6 (cs) | Způsob výroby peptidů | |
| US7645858B2 (en) | Method of peptide synthesis of peptides containing a proline residue or hydroxyproline residue at or adjacent to the C-terminal end of the peptide | |
| KR100418962B1 (ko) | 2-(4-나이트로페닐설포닐)에톡시카르보닐-아미노산류를사용하여 펩티드를 고수율 및 고순도로 제조하는 방법 | |
| JP2002521364A (ja) | アミノ−アルデヒド固相支持体、そのためのリンカー並びにそれを製造する方法およびその用途 | |
| JP4016104B2 (ja) | 新規セレニルリンカー及びその用途 | |
| JP2748897B2 (ja) | 新規なアルギニン誘導体およびこれを用いるペプチドの製造方法 | |
| KR100385096B1 (ko) | 고체상반응을통한아자펩티드유도체의제조방법 | |
| JPS62286978A (ja) | アミノ酸のｏｏｂｔエステルおよびそれらの製法 | |
| Camarero et al. | A Fmoc-compatible Method for the Solid-Phase Synthesis of Peptide C-Terminal (alpha)-Thioesters based on the Safety-Catch Hydrazine Linker | |
| WO1995034314A1 (en) | A resin for use in solid phase synthesis for the preparation of peptide hydrazides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20070127 |