CZ282881B6 - Způsob výroby peptidů - Google Patents

Způsob výroby peptidů Download PDF

Info

Publication number
CZ282881B6
CZ282881B6 CS912666A CS266691A CZ282881B6 CZ 282881 B6 CZ282881 B6 CZ 282881B6 CS 912666 A CS912666 A CS 912666A CS 266691 A CS266691 A CS 266691A CZ 282881 B6 CZ282881 B6 CZ 282881B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
ser
formula
compound
protecting group
arg
Prior art date
Application number
CS912666A
Other languages
English (en)
Inventor
Gerhard Dr. Breipohl
Jochen Dr. Knolle
Wolfgang Dr. König
Original Assignee
Hoechst Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Aktiengesellschaft filed Critical Hoechst Aktiengesellschaft
Publication of CS266691A3 publication Critical patent/CS266691A3/cs
Publication of CZ282881B6 publication Critical patent/CZ282881B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Řešení se týká způsobu výroby peptidů vzorce /X/.sub.n.n.- A - NH.sub.2 .n., ve kterém značí X přírodní nebo nepřírodní aminokyselinu, azaaminokyselinu nebo iminokyselinu, n celé číslo 1 až 50, výhodně 1 až 30 a A azaaminokyselinu, jakož i jejich fyziologicky neškodných solí, syntézou v pevné fázi, jehož podstata spočívá v tom, že se spacer převede na formu schopnou acylace, tato se potom nechá reagovat s vhodným derivátem kyseliny mravenčí a dále s odpovídajícím hydrazidem aminokyseliny, popřípadě se převede ochranná skupina na ochrannou skupinu labilní vůči basím nebo slabým kyselinám, takto získaný spacer se naváže na pryskyřici, postupně se sestrojí požadovaný peptid, potom se tento peptid z pryskyřice odštěpí a popřípadě se převede na fyziologicky neškodnou sůl.ŕ

Description

Oblast techniky
Vynález se týká způsobu výroby peptidů s C-terminálním amidem azaglycinu pomocí syntézy v pevné fázi.
Dosavadní stav techniky
Obdobná syntéza uvedených peptidů dosud nebyla popsána. Úkolem předloženého vynálezu tedy je vypracování bezracemizačního postupu výroby peptidů s C-terminálním amidem azaglycinu pomocí syntézy v pevné fázi.
Podstata vynálezu
Předmětem předloženého vynálezu tedy je způsob výroby peptidů obecného vzorce I /X/n-A-NH2 (I), ve kterém značí
X zbytek a-aminokyseliny ze skupiny, zahrnující ac-Nal(2), ac-D-Nal(2), p-Cl-Phe, p-Cl-D-Phe, Trp,
D-Trp, Ser, D-Ser, Tyr, D-Tyr, Ser(a-L-Rha),
D-Ser(a-L-Rha), Leu, D-Leu, Arg, D-Arg, Pro,
D-Pro, p-Glu, His a D-Ser(t-Bu), n celé číslo 3 až 10, a
A azaglycinový zbytek, jakož i jejich fyziologicky neškodných hydrochloridů aacetátů, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce II
(Π), ve kterém značí
Y1, Y2, Y3, Y4 a Y5 vodíkový atom, alkoxylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy nebo skupinu /CH2/n-COOH, přičemž tyto zbytky mohou být stejné nebo různé a alespoň jeden zbytek však značí skupinu -/CH2/n-COOH a n značí celé číslo 1 až 3 a
R1 vodíkový atom nebo 4-methoxyfenylovou skupinu,
- 1 CZ 282881 B6 nechá reagovat se silylačním činidlem ze skupiny, zahrnující terc.-butyldimethylsilylchlorid, terc.-butylfenylsilylchlorid, trimethylchlorsilan a bis-trimethylsilylacetamid v rozpouštědle a potom se silylovaná sloučenina převede s derivátem kyseliny chlormravenčí na sloučeninu obecného vzorce III o
Y Y2
(III), ve kterém mají R1, Y1, Y2, Y3, Y4, Y5 výše uvedený význam a
R2 značí fenylovou skupinu, která je substituována nitroskupinou a halogenem, takto získaná sloučenina obecného vzorce III se nechá reagovat s hydrazidem aminokyseliny obecného vzorce IV
R3-X-CO-NH-NH2.HC1 (IV), ve kterém značí
X výše uvedený zbytek α-aminokyseliny a
R3 ochrannou skupinu Fmoc-, Bpoc- nebo Boc, v rozpouštědle na sloučeniny obecného vzorce V
(V), ve kterém R1, R3 a Y1, Y2, Y3, Y4 a Y5 mají výše uvedený význam, přičemž pokud R3 představuje skupinu Boc-, tato ochranná skupina se hydrogenací na palladiovém katalyzátoru odstraní a před další reakcí se převede na Fmoc- nebo Bpoc-urethanovou ochrannou skupinu, potom se sloučenina obecného vzorce V, ve kterém mají R1, Y1, Y2, Y3, Y4 a Y5 výše uvedený význam a R3 značí Fmoc nebo Bpoc-urethanovou ochrannou skupinu, naváže za pomoci vazebných reagencií, běžných v chemii peptidů, přes skupiny -/CH2/n-COOH na pryskyřici, ochranná skupina R3 se odštěpí, postupně se naváží α-aminokyseliny, dočasně chráněné Bpocochrannými skupinami, popřípadě ve formě svých aktivovaných derivátů, a po ukončení konstrukce peptidu obecného vzorce I se zpracováním se středně silnou kyselinou z pryskyřice uvolní, přičemž se současně pomocí vhodného opatření zde potom dočasně zavedené ochranné skupiny postranních řetězců opět odštěpí.
Sloučenina obecného vzorce IV se vyrobí reakcí uvedených aminokyselin s odpovídajícími hydrazidy pomocí vazebných metod, běžných v chemii peptidů.
Uváděná alkoxylová skupina může být přímá nebo rozvětvená a výhodně obsahuje 1 a 4 uhlíkové atomy.
Pokud je to pro potlačení vedlejších reakcí nebo pro syntézu speciálních peptidů potřebné, jsou funkční skupiny v postranních řetězcích aminokyselin dodatečně chráněné pomocí vhodných ochranných skupin (viz například T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, New York; John Wiley a Sons, 1981; Hubbuch, Kontakte (Měrek) 1979 č. 3, str. 14 až 23; Biíllesbach, Kontakte (Měrek) 1980, č. 1, str. 23 až 35), přičemž v první řadě se použije Arg(Tos), Arg(Mts), Arg(Mtr), Arg(Pmc), Asp(OBzl), Asp(OtBu), Cys(4-MeBzl), Cys(Acm), Cys(StBu), Glu(OBzl), Glu(OtBu), His(Tos), His(Fmoc), His(Dnp), His(Trt), Lys(Boc), Met(O), Ser(Bzl), Ser(tBu), Thr(Bzl) a Thr(tBu). Dále se mohou funkční skupiny v postranních řetězcích také glykosylovat, jak je například popsáno v EP-A 263 521.
Pryskyřice, používané jako nosné materiály, jsou komerčně dostupné, nebo je možno si je vyrobit, jako například alkoxybenzylalkoholové pryskyřice, aminomethylové pryskyřice nebo benzhydrylaminopryskyřice. Výhodné jsou aminomethylové pryskyřice, benzhydrylaminopryskyřice /BHA/ a methylbenzhydrylaminopryskyřice /MBHA/. Nasycení se stanoví analýzou aminokyselin a/nebo elementární analýzou.
Pod pojmem vhodné spacery se rozumí například spacery, popsané v Atherton, Sheppard in Perspectives in Peptide Chemistry, str. 101 až 117 /Karger, Basel 1981/, v EP-A 264 802 /HOE 86/F 259/, EP-A 287 882 /HOE 87/F 101/ a EP-A 322 348 /HOE 87/F 386K/, jakož i od nich odvozené deriváty, jako například takové, u nichž je ochranná skupina odštěpena. Výhodný je 4karboxylátopropoxy-4'-methoxybenzhydrylamin a 5-karboxylátoethyl-2,4-dimethoxy-4'-methoxybenzhydrylamin.
Jako vazebné činidlo pro spacer obecného vzorce V a další deriváty aminokyselin se mohou použít všechna aktivační činidla, používaná v chemii peptidů /viz například Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, Band XV/2, Stuttgart 1974/, obzvláště ale karbodiimidy, jako je například N,N'-dicyklohexylkarbodiimid, Ν,Ν’-diisopropylkarbodiimid nebo N-ethyl-N'/3-dimethylaminopropyl/karbodiimid. Navázání se při tom může provést přímo adicí derivátu aminokyseliny s aktivačním činidlem a popřípadě za přídavku racemizaci potlačující přísady, jako je například 4-dimethylaminopyridin, 1-hydroxybenzotriazol /HOBt//W. Kónig, R. Geiger, Chem. Ber. 103 /1970/ 788 - 798/ nebo 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydrobenzotriazin /HOObt/ /W. Kónig, R. Geiger, Chem. Ber. 103 /1970/ 2034 - 2040/ na pryskyřici, nebo se ale také může provést předběžná aktivace derivátu aminokyseliny separátně jako symetrický anhydrid nebo HOBt-ester, popřípadě HOObt-ester, a roztok aktivované látky ve vhodném rozpouštědle se přivede do styku s pryskyřicí, schopnou vazby s peptidy.
Navázání, popřípadě aktivace spaceru obecného vzorce V a derivátu aminokyseliny pomocí výše uvedených aktivačních činidel, se může provádět v dimethylformamidu nebo methylenchloridu, nebo ve směsi těchto látek. Aktivovaný derivát aminokyseliny se běžně používá v 1,5 až čtyřnásobném přebytku. V případech, kdy dochází k neúplnému navázání, se vazebná reakce opakuje, bez toho, že by se provádělo odblokování alfa-aminoskupiny peptidové pryskyřice, nutné pro navázání následující aminokyseliny.
Úspěšný průběh vazebné reakce se může přezkušovat pomocí ninhydrinové reakce, jak je například popsáno v E. Kaiser a kol. /Anal. Biochem. 34 /1970/ 595/. Syntéza se může také provádět automaticky, například pomocí syntetizéru peptidů /Peptid-Synthetizer Model 430A Fa. Applied Biosystems/, přičemž se mohou použít programy, dodané výrobcem přístroje, nebo rovněž vypracované jeho využivatelem. Poslední se využijí obzvláště při použití derivátů
-3CZ 282881 B6 aminokyselin, chráněných Fmoc-skupinou.
Odštěpení peptidamidů od pryskyřice se provádí zpracováním se středně silnými kyselinami, jako je například kyselina trifluoroctová, jak je běžné při syntéze peptidů, přičemž se jako akceptor elektronů přidávají látky, jako je fenol, kresol, thiokresol, anisol, thioanisol, ethandithiol, dimethylsulfid, ethylmethylsulfid, které jsou pro tento postup v syntéze v pevné fázi běžné, jednotlivě nebo ve směsi dvou nebo více těchto pomocných činidel. Kyselina trifluoroctová se při tom může používat také zředěná vhodným rozpouštědlem, jako je například methylenchlorid.
Při odštěpení spaceru z pryskyřice probíhá současně odštěpení ochranných skupin postranních řetězců.
Čištění takto získaných surových peptidů se provádí pomocí chromatografie na Sephadexu, iontoměničových pryskyřicích nebo pomocí HPLC.
Výhodný je způsob syntézy v pevné fázi pro výrobu
Ac-D-Nal/2/-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser/alfa-L-Rha/-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2- a pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser/tBu/-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 /Zoladex/.
Přehled používaných zkratek:
BSA Cha Chg DCC DIC DMAP Fmoc HOBt HOObt Nal Npg Pmc Tbg THF Thia bis-trimethylsilylacetamid cyklohexylalanin cyklohexylglycin dicyklohexylkarbodiimid diisopropylkarbodiimid dimethylaminopyridin 9-fluorenylmethoxykarbonyl
-hydroxybenzotriazol
3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-1,2,3-benzotriazin naftylalanin neopentylglycin
2,2,5,7,8-pentamethy lchroman-6-sulfony 1 terc.-butylglycin tetrahydrofuran
2-thienylalanin
Následující příklady slouží k bližšímu objasnění vynálezu bez toho, že by jej nějak omezovaly.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 a! 5-karboxylátoethyl-2,4-dimethoxy-4'-methoxy-benzhydrylamin
17,5 g 5-karboxylátoethyl-2,4-dimethoxy-4'-methoxy-benzofenonoximu se rozpustí ve směsi ethylalkoholu a dimethylformamidu 1:1a smísí se se 2 ml koncentrovaného NHj. Po přídavku Pt/C katalyzátoru se při normálním tlaku hydrogenuje po dobu 5 dní. Po ukončení reakce se katalyzátor odsaje, filtrát se zahustí a produkt se vysráží diethyletherem. Jako takový se používá bez dalšího čištění.
-4CZ 282881 B6 b/N-/p-nitrofenyloxykarbonyl/-5-karboxylátoethyl-2,4-dimethoxy-4'-methoxy-benzhydrylamin g sloučeniny podle příkladu la/ se dá do 100 ml směsi tetrahydrofuranu a dimethylformamidu 4 : 1 apři teplotě místnosti se smísí se 2,1 ekvivalenty bis-trimethylsilylacetamidu /BSA/. Suspenze se během krátké doby úplně vyčiří a čirý roztok se míchá ještě po dobu dvou hodin. Potom se přidají 3 g nitrofenylesteru kyseliny chlormravenčí a reakční směs se míchá po dobu další hodiny. Po ukončení reakce se rozpouštědlo odstraní za vysokého vakua. Zbytek se smísí se 300 ml vody a vzniklá olejovitá fáze se extrahuje ethylesterem kyseliny octové. Ethylacetátová fáze se promyje 1 N roztokem hydrogensíranu draselného a vodou. Organická fáze se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a odpaří se do sucha. Zbytek /12 g/ se určí pomocí NMR, IR a MS.
Získaný N-/p-nitrofenyloxykarbonyl/-5-karboxylátoethyl-2,4-dimethoxy-4'-methoxy-benzhydrylamin se potom nechá zreagovat s hydrazidy aminokyselin na vhodné substituované ankery.
c/ Benzyloxykarbonyl-4-prolyl-azagIycyl-/5-karboxylátoethyl-2,4-dimethoxy-4'-methoxybenzhydryl/amid
3,27 g hydrochloridu benzyloxykarbonyl-prolylhydrazidu a 6,94 g sloučeniny podle příkladu lb/ se rozpustí ve 40 ml dimethylformamidu /DMF/ a smísí se se 3 ekvivalenty N-ethylmorfolinu a katalytickým množstvím dimethylaminopyridinu /DMAP/. Reakční směs se nechá po dobu 16 hodin reagovat. Po ukončení reakce se směs odpaří do sucha. Zbytek se vyjme do směsi ethylesteru kyseliny octové a butylalkoholu a organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 1 N roztokem hydrogensíranu draselného a vodou. Organická fáze se potom vysuší přes bezvodý síran hořečnatý a po filtraci se odpaří do sucha. Zbytek se nechá překrystalizovat z čistého ethylesteru kyseliny octové. Získá se takto 6,6 g v názvu uvedené sloučeniny.
FAB-MS: 641 /M + Li7
IR: CO 1695 cm’1 'H-NMR /DMSO/: delta = 3,7 s/6H, OCH3/ ppm.
d/ 9-fluorenylmethoxykarbonyl-L-prolyl-azaglycyl/5-karboxylátoethyl-2,4-dimethoxy-4'-methoxy-benzhydryl/amid
26,5 g sloučeniny podle příkladu lc/ se rozpustí ve 300 ml methylalkoholu a přidá se 2 g palladiového katalyzátoru. Po jedné hodině se hydrogenace ukončí. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahustí do sucha. Bez dalšího čištění se zbytek /17,5 g/ vyjme do směsi 80 ml vody a 80 ml dioxanu a smísí se s 8 g hydrogenuhličitanu sodného a 17 g 9-fluorenylmethoxykarbonyl-N-hydroxysukcinimidu /Fmoc-ONSu/. Reakční směs se ponechá po dobu jednoho dne reagovat. Po ukončení reakce se přefiltruje přes čiřící filtr. Hodnota pH filtrátu se upraví pomocí 2 N kyseliny sírové na hodnotu 6 a ve vakuu se objem zredukuje na 80 ml. Potom se směs zředí 100 ml vody a extrahuje se směsí ethylesteru kyseliny octové a n-butylalkoholu /8,5 : 1,5/. Organická fáze se promyje polonasyceným roztokem chloridu sodného a potom se odpaří do sucha. Zbytek se přefiltruje přes 500 g silikagelu s ethylesterem kyseliny octové. Získá se takto 20 g v názvu uvedené sloučeniny.
FAB-MS: 729 /M + Li7
IR: CO 1695 cm’1.
e/ Navázání sloučeniny podle příkladu ld/ na polystyrénovou pryskyřici
1,0 g aminomethylpolystyrenové pryskyřice /nasycení 1,07 mmol/ a 1,2 g sloučeniny podle příkladu ld/ se suspenduje v 10 ml dimethylformamidu a smísí se se 216 mg 1-hydroxy
-5 CZ 282881 B6 benzotriazolu /HOBt/ a 0,75 ml diisopropylkarbodiimidu /DIC/. Reakční směs se ponechá přes noc zreagovat, až ninhydrinový test ukáže úplnou reakci. Pryskyřice se odfiltruje a promyje se dimethylformamidem a methylenchloridem a ve vakuu se dokonale vysuší. Nasycení pryskyřice prolinem činí 0,51 mmol/g.
f/ Ac-D-Nal/2/-p-C 1-D-Phe-D-T rp-Ser-Tyr-D-Ser/alfa-L-Rha/-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2
9-fluorenylmethoxykarbonyl-Na-amino ochranná skupina sloučeniny podle příkladu le/ se odštěpí pomocí 20% roztoku piperidinu v dimethylformamidu /2x3 min, 2x8 ml/. Potom se pryskyřice promyje N-methylpyrrolidonem /5 x 10 ml/ a peptid se na pryskyřici /785 mg pryskyřice z příkladu lc// naváže, přičemž se cyklicky provádějí následující kroky:
- odštěpení Fmoc-ochranné skupiny pomocí 20% piperidinu v DMF,
- promytí pryskyřice směsí DMF/N-methylpyrrolidon,
- navázání Fmoc-aminokyseliny za in sítu aktivace jako HOBt-ester za použití diisopropylkarbodiimidu jako aktivačního činidla /1,5 mmol aminokyseliny, 2,25 mmol HOBt, 1,6 mmol diisopropylkarbodiimidu/.
Pokud bylo navázání neúplné /Kaiser-test/, navazovací stupeň se opakuje. Jako poslední aminokyselina se použije Fmoc-D-Nal/2/-OH. N-terminální acetylová skupina se zavede reakcí s acetanhydridem.
Po ukončení syntézy v pevné fázi se pryskyřice promyje /DMF, CH2CI2/ a řádně vysuší. Získá se takto 1,35 g substituované pryskyřice.
Vysušená pryskyřice se při teplotě místnosti suspenduje s 0,75 ml ethandithiolu. Po 15 minutách se přidá 7,5 ml kyseliny trifluoroctové a suspenze se míchá po dobu 1,5 hodiny. Po této době se pryskyřice odfiltruje a dobře se promyje 80% kyselinou trifluoroctovou. Filtrát se ve vakuu odpaří a vyjme se do 30 ml vody. Přídavkem hydrogenuhličitanu sodného se hodnota pH nastaví na 6 až 7 a peptid se vytřepe n-pentanolem /4 x 30 ml/. N-pentanolová fáze se odpaří, vyjme se do 10 ml směsi methylalkoholu a vody /9 : 1/ a smísí se s0,5 g uhličitanu draselného. Reakční směs se míchá po dobu 30 minut, přefiltruje se a filtrát se zahustí. Zbytek se vyjme do 100 ml npentanolu a organická fáze se promyje vodou. Po vysušení síranem hořečnatým a filtraci se organická fáze odpaří. Získá se takto 740 mg surového produktu. Po chromatografíí na sefadexu G 25 /1 M kyselina octová/ a na silikagelu se získá 185 mg čisté sloučeniny, uvedené v názvu.
FAB-MS: 1531 /M + H7
Sloučeniny z následujících příkladů 2 až 9 se získají stejně, jako je uvedeno v příkladě 1.
Příklad 2
Ac-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2
FAB-MS: 1531 (M+Ff).
Příklad 3
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2
FAB-MS: 1531 (M+H+).
-6CZ 282881 B6
Příklad 4
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2
FAB-MS: 1531 (M+Ff).
Příklad 5
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-D-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 FAB-MS: 1531 (M+H*).
Příklad 6
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-D-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2
FAB-MS: 1531 (M+řT).
Příklad 7
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2
FAB-MS: 1531 (Μ+1Γ).
Příklad 8
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-D-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2
FAB-MS: 1531 (M+lT).
Příklad 9
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-D-Arg-Pro-Azagly-NH2
FAB-MS: 1531 (M+řT).
Příklad 10
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-D-Pro-Azagly-NH2
a) Benzyloxykarbonyl-4-D-prolyl-azaglycyl-(5-karboxylátoethyl-2,4-dimethoxy-4'-methoxybenzylhydryl)amid
1,19 g hydrochloridu benzyloxykarbonyl-D-prolylhydrazidu se rozpustí v 15 ml dimethylformamidu a smísí se s 1,84 g sloučeniny, uvedené v názvu příkladu lb), s 1,5 ml N-ethylmorfolinu a s katalytickým množstvím dimethylaminopyridinu. Reakční směs se nechá míchat přes noc při teplotě místnosti, po ukončení reakce se dimethylformamid ve vakuu oddestiluje a získaný
-7CZ 282881 B6 zbytek se rozpustí v methylenchloridu. Organická fáze se promyje 15% roztokem směsi hydrogensíranu draselného a síranu draselného, vysuší se pomocí síranu hořečnatého a za vakua se odpaří. Získá se takto 3,4 g olejovité kapaliny, která se chromatografuje na silikagelu (gradient ethylacetát (500 ml) - ethylacetát/methylalkohol 60 : 2 (1000 ml)).
Výtěžek: 2,1 g
FAB-MS: 635 (Μ + FT).
b) H-D-prolyl-azaglycyl(5-karboxylátoethyl-2,4-dimethoxy-4'-methoxy-benzhydryl)amid
800 mg sloučeniny uvedené v názvu příkladu 10a) se rozpustí ve 20 ml methylalkoholu apod dusíkovou atmosférou se smísí s malým množstvím palladia na uhlí (10%), načež se začne přivádět vodík. Po 45 minutách se hydrogenace ukončí, reakční směs se přefiltruje a filtrát se za vakua zahustí. Získá se takto 500 mg v názvu uvedené sloučeniny.
c) 9-fluorenylmethoxykarbonyl-D-prolyl-azaglycyl-(5-karboxylátoethyl-2,4-dimethoxy-4'-methoxy-benzhydryl)amid g sloučeniny uvedené v názvu příkladu 10b) se rozpustí v 15 ml směsi dioxanu a vody (1:1) a smísí se se 336 mg hydrogenuhličitanu sodného a po částech se 674 mg 9-fluorenylmethoxykarbonyl-N-hydroxysukcinimidu (Fmoc-ONSu), načež se reakční směs míchá přes noc při teplotě místnosti. Po ukončení reakce se vše až na vodu ve vakuu oddestiluje a zbylá vodní fáze se okyselí pomocí 1 N kyseliny sírové. Produkt se dvakrát extrahuje ethylesterem kyseliny octové, organická fáze se jednou promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se pomocí síranu hořečnatého a rozpouštědlo se ve vakuu odpaří. Získá se takto 1,4 g surového produktu, který se chromatografuje na silikagelu (pohyblivá fáze methylenchlorid/methylalkohol/voda/kyselina octová = 95 : 5 : 0,5 : 0,5).
Výtěžek: 870 mg
FAB-MS: 745 (M + FT).
d) kopulace sloučeniny z příkladu 10c) na polystyrénovou pryskyřici
1,0 g aminomethylpolystyrenové pryskyřice (nasycení 1,07 mmol) a 1,2 g sloučeniny, uvedené v názvu příkladu 10c) se suspenduje v 15 ml dimethylformamidu a smísí se se 216 mg 1hydroxy-benzotriazolu (HOBt) a 0,75 ml diisopropylkarbodiimidu (DIC). Reakční směs se nechá reagovat přes noc při teplotě místnosti, dokud ninhydrinový test neprokáže úplnou reakci. Pryskyřice se odfiltruje a promyje se dimethylformamidem, methylenchloridem a methyl-terc.butyletherem.
Výtěžek pryskyřice: 1,5 g nasycení pryskyřice: 0,256 mmol/g.
Příklad 11 p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2
Tato sloučenina se získá stejně, jako je popsáno v příkladě 1.
FAB-MS: 1398 (M + Ff).
-8CZ 282881 B6
Příklad 12
Všeobecný předpis pro výrobu solí
100 mg sloučeniny podle příkladů 1 až 11 (trifluoracetátová forma) se rozpustí v 5 až 10 ml vody (pH 1,5-2) a smísí se s malým množstvím iontoměniče RAmberlite IRA 45 (acetátová forma, popřípadě chloridová forma). Iontoměnič se míchá a měří se hodnota pH. Pokud kyselina octová (pH 3,5-4), popřípadě kyselina chlorovodíková (pH 1-2) nedosáhne této oblasti, tak se přidá ještě další iontoměnič. Nakonec se iontoměnič odsaje a promyje se malým množstvím vody. Roztok peptidu se za vakua oddestiluje nebo se lyofilizuje.
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (5)

1. Způsob výroby peptidů obecného vzorce I /X/n-A-NH2 (I), ve kterém značí
X zbytek α-aminokyseliny ze skupiny, zahrnující ac-Nal(2), ac-D-Nal(2), p-Cl-Phe, p-Cl-DPhe, Trp, D-Trp, Ser, D-Ser, Tyr, D-Tyr, Ser(a-L-Rha), D-Ser(a-L-Rha), Leu, D-Leu, Arg, D-Arg, Pro, D-Pro, p-Glu, His a D-Ser(t-Bu), n celé číslo 3 až 10, a
A azaglycinový zbytek, jakož i jejich fyziologicky neškodných hydrochloridů a acetátů, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce Π (II), ve kterém značí
Y1, Y2, Y3, Y4 aY5 vodíkový atom, alkoxylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy nebo skupinu /CH2/n-COOH, přičemž tyto zbytky mohou být stejné nebo různé a alespoň jeden zbytek však značí skupinu -/CH2/n-COOH, n značí celé číslo 1 až 3 a
R1 vodíkový atom nebo 4-methoxyfenylovou skupinu,
-9CZ 282881 B6 nechá reagovat se silylačním činidlem ze skupiny, zahrnující terc.-butyldimethylsilylchlorid, terc.-butylfenylsilylchlorid, trimethylchlorsilan a bis-trimethylsilylacetamid v rozpouštědle a potom se silylovaná sloučenina převede s derivátem kyseliny chlormravenčí na sloučeninu obecného vzorce III
1 2
Y Y2 (ΙΠ), ve kterém mají R1, Y1, Y2, Y3, Y4 a Y5 výše uvedený význam a
R2 značí fenylovou skupinu, která je substituována nitroskupinou a halogenem, takto získaná sloučenina obecného vzorce III se nechá reagovat s hydrazidem aminokyseliny obecného vzorce IV
R3-X-CO-NH-NH2.HC1 (IV), ve kterém značí
X výše uvedený zbytek α-aminokyseliny a
R3 ochrannou skupinu Fmoc-, Bpoc- nebo Boc, v rozpouštědle na sloučeninu obecného vzorce V (V), ve kterém R1, R3 a Y1, Y2, Y3, Y4 a Y5 mají výše uvedený význam, přičemž pokud R3 představuje skupinu Boc-, tato ochranná skupina se hydrogenací na palladiovém katalyzátoru odstraní a před další reakcí se převede na Fmoc- nebo Bpoc-urethanovou ochrannou skupinu, potom se sloučenina obecného vzorce V, ve kterém mají R1, Y1, Y2, Y3, Y4 a Y5 výše uvedený význam a R3 značí Fmoc- nebo Bpoc-urethanovou ochrannou skupinu, naváže za pomoci vazebných reagencií, běžných v chemii peptidů, přes skupiny -/CH2/n-COOH na pryskyřici, ochranná skupina R3 se odštěpí postupně se naváží α-aminokyseliny, dočasně chráněné Bpocochrannými skupinami, popřípadě ve formě svých aktivovaných derivátů, a po ukončení konstrukce peptidu obecného vzorce I se zpracováním se středně silnou kyselinou z pryskyřice uvolní, přičemž se současně pomocí vhodného opatření zde potom dočasně zavedené ochranné skupiny postranních řetězců opět odštěpí.
- 10CZ 282881 B6
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se uvedený způsob použije pro výrobu Ac-D-Nal/2/-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser/a-L-Rha/-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2.
3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se uvedený způsob použije
5 pro výrobu pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser/tBu/-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2.
10 -------------------------
CS912666A 1990-08-30 1991-08-29 Způsob výroby peptidů CZ282881B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4027394 1990-08-30

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS266691A3 CS266691A3 (en) 1992-03-18
CZ282881B6 true CZ282881B6 (cs) 1997-11-12

Family

ID=6413202

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS912666A CZ282881B6 (cs) 1990-08-30 1991-08-29 Způsob výroby peptidů

Country Status (22)

Country Link
EP (1) EP0475184B1 (cs)
JP (1) JP3177269B2 (cs)
KR (1) KR100203548B1 (cs)
AU (1) AU646488B2 (cs)
CA (1) CA2050216C (cs)
CZ (1) CZ282881B6 (cs)
DE (1) DE59104538D1 (cs)
DK (1) DK0475184T3 (cs)
ES (1) ES2069148T3 (cs)
FI (1) FI102380B (cs)
GR (1) GR3015359T3 (cs)
HU (1) HU208838B (cs)
IE (1) IE66524B1 (cs)
IL (1) IL99338A (cs)
NO (1) NO300216B1 (cs)
NZ (1) NZ239575A (cs)
PL (1) PL167504B1 (cs)
PT (1) PT98813B (cs)
RU (1) RU2036200C1 (cs)
SK (1) SK280319B6 (cs)
TW (1) TW295589B (cs)
ZA (1) ZA916848B (cs)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9112825D0 (en) * 1991-06-14 1991-07-31 Ici Plc Process for making peptides
GB9727123D0 (en) * 1997-12-22 1998-02-25 Int Centre Genetic Eng & Bio Synthesis of diamines
ES2154590B1 (es) * 1999-05-20 2001-11-01 Lipotec Sa Procedimiento de sintesis de peptidos en fase solida
AU2006207325B2 (en) 2005-01-21 2012-08-16 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical compounds
JP5528806B2 (ja) 2006-10-12 2014-06-25 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 複合薬剤
US8883790B2 (en) 2006-10-12 2014-11-11 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
AU2014234400B2 (en) 2013-03-21 2017-11-16 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Synthesis of hydantoin containing peptide products
ES2624961T3 (es) 2013-03-21 2017-07-18 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Síntesis de productos de péptido que contienen imida cíclica

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0322348B1 (de) * 1987-12-22 1994-02-02 Hoechst Aktiengesellschaft Säurelabile Ankergruppen zur Synthese von Peptidamiden mittels Festphasenmethode

Also Published As

Publication number Publication date
KR920004421A (ko) 1992-03-27
FI102380B1 (fi) 1998-11-30
SK280319B6 (sk) 1999-11-08
FI914064L (fi) 1992-03-01
CA2050216A1 (en) 1992-03-01
PT98813B (pt) 1999-01-29
PT98813A (pt) 1992-07-31
IL99338A0 (en) 1992-07-15
NO913396L (no) 1992-03-02
NZ239575A (en) 1993-07-27
EP0475184B1 (de) 1995-02-08
NO300216B1 (no) 1997-04-28
KR100203548B1 (ko) 1999-06-15
ZA916848B (en) 1992-04-29
IL99338A (en) 1996-05-14
DE59104538D1 (de) 1995-03-23
AU646488B2 (en) 1994-02-24
HUT60749A (en) 1992-10-28
JP3177269B2 (ja) 2001-06-18
JPH04230697A (ja) 1992-08-19
CS266691A3 (en) 1992-03-18
PL291561A1 (en) 1992-07-13
DK0475184T3 (da) 1995-06-26
FI914064A0 (fi) 1991-08-28
HU208838B (en) 1994-01-28
CA2050216C (en) 2003-03-11
RU2036200C1 (ru) 1995-05-27
GR3015359T3 (en) 1995-06-30
PL167504B1 (pl) 1995-09-30
NO913396D0 (no) 1991-08-29
HU912825D0 (en) 1992-10-28
IE913051A1 (en) 1992-03-11
FI102380B (fi) 1998-11-30
IE66524B1 (en) 1996-01-10
EP0475184A1 (de) 1992-03-18
TW295589B (cs) 1997-01-11
AU8340291A (en) 1992-03-05
ES2069148T3 (es) 1995-05-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4786684A (en) Benzylthioether-linked solid support-bound thiol compounds and method for peptide synthesis
US5602231A (en) Process for making peptides
AU2014282839A1 (en) Peptide-resin conjugate and use thereof
CZ282881B6 (cs) Způsob výroby peptidů
US5117009A (en) Xanthenylamide handle for use in peptide synthesis
US5324833A (en) Protected amino acids and process for the preparation thereof
US4831084A (en) Resin-linker combination for the solid-phase synthesis of peptides and intermediates
US5994588A (en) Peptide purification method using novel linker and solid-phase ligand
EP1654280B1 (en) Preparation of somatostatin peptides
CZ289747B6 (cs) Nalfa-2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyseliny, způsob jejich přípravy a jejich pouľití
FI88031C (fi) 4-(substituerad aminokarbonyloximetyl)fenoxiaettiksyraderivat, foerfarande foer framstaellning av dessa och deras anvaendning i en fastfassyntes av peptid-aminoalkylamider
US8076299B2 (en) Method for producing peptide thioester
JP2725780B2 (ja) ペプチドアミドの合成
Lang et al. Chemoselectively addressable HCan building blocks in peptide synthesis: l‐homocanaline derivatives
WO2000005243A2 (en) Resin derivatization method and uses thereof
JPH10505077A (ja) 保護基又はアンカー基及びそれらの使用
JP2748897B2 (ja) 新規なアルギニン誘導体およびこれを用いるペプチドの製造方法
US4031070A (en) Tetrapeptides
KR100998175B1 (ko) 소마토스타틴의 제조방법
WO2003093301A2 (en) Process for the synthesis of peptides
JP2004277387A (ja) 新規セレニルリンカー及びその用途
HK1248724A1 (zh) 肽或其盐及其制备方法
CN107556363A (zh) 肽或其盐及其制备方法
CZ9902807A3 (cs) Způsob výroby organických látek, zejména karba analogů peptidů
HK1090065B (en) Preparation of somatostatin peptides

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20110829