SK280319B6 - Spôsob výroby peptidov - Google Patents

Spôsob výroby peptidov Download PDF

Info

Publication number
SK280319B6
SK280319B6 SK2666-91A SK266691A SK280319B6 SK 280319 B6 SK280319 B6 SK 280319B6 SK 266691 A SK266691 A SK 266691A SK 280319 B6 SK280319 B6 SK 280319B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
acid
group
labile
carbon atoms
cooh
Prior art date
Application number
SK2666-91A
Other languages
English (en)
Inventor
Gerhard Breipohl
Jochen Knolle
Wolfgang K�Nig
Original Assignee
Hoechst Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Aktiengesellschaft filed Critical Hoechst Aktiengesellschaft
Publication of SK280319B6 publication Critical patent/SK280319B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka spôsobu výroby peptidov pomocou syntézy v pevnej fáze, pričom tieto peptidy majú C-terminálne azaaminokyseliny.
Doterajší stav techniky
Bezracemizačný postup výroby peptidov s C-terminálnymi amidmi azaaminokyselín pomocou syntézy v pevnej fáze doteraz nebol opísaný.
Podstata vynálezu
Predmetom vynálezu je spôsob výroby peptidov všeobecného vzorca (I) (X)n-A-NH2 (I), v ktorom znamená
X prírodnú alebo neprírodnú aminokyselinu, azaaminokyselinu alebo iminokyselinu, n celé číslo 1 až 50, výhodne 1 až 30 a
A azaaminokyselinu, ako aj ich fyziologicky neškodných solí, ktorého podstata spočíva v tom, že sa spacer prevedie na acylovateľnú formu, táto sa nechá reagovať s vhodným derivátom kyseliny mravčej a potom so zodpovedajúcim hydrazidom aminokyseliny, prípadne sa prevedie ochranná skupina na ochrannú skupinu labilnú v zásaditom prostredí alebo stabilnú proti slabým kyselinám, takto získaný spacer sa naviaže na živicu, požadovaný peptid sa postupne tvorí od C-terminálneho konca a nakoniec sa peptid od živice odštiepi a prípadne sa prevedie na svoje fyziologicky neškodné soli.
Prírodné alebo neprírodné aminokyseliny sa môžu, pokiaľ sú opticky aktívne, vyskytovať v D- alebo L-forme. Výhodné sú alfa-aminokyseliny. Ako príklady jc možné menovať:
Aad, Abu, gamaAbu, Abz, 2Abz, epsilonAca, Ach, Acp, Adpd, Ahb, Aib, betaAib, Ala, betaAla, deltaAla, Alg, AH, Ama, Amt, Ape, Apm, Apr, Arg, Asn, Asp, Asu, Aze, Azi, Bai, Bph, Can, Cit, Cys, (Cysty. Cyta, Daad, Dab, Dadd, Dap, Dapm, Dasu, Djen, DPa, Dtc, Fel, Gin, Glu, Gly, Guv, hAla, hArg, hCys, hGln, hGlu, His, hlle, hLeu, hLys, hMct, hPhe, hPro, hSer, hThr, hTrp, hTyr, Hyl, Hyp, 3Hyp, íle, Ise, Iva, Kyn, Lant, Len, Leu, Lsg, Lys, betaLys, deltaLys, Met, Mim, Min, nArg, Nie, Nva, Oly, Om, Pan, Pac, Pen, Phe, Phg, Pie, Pro, deltaPro, Pse, Pya, Pyr, Pza, Qin, Ros, Sar, Sec, Sem, Ser, Thi, betaThi, Thr, Thy, Thx, Tia, Tie, Tly, Trp, Trta, Tyr, Val, Nal, Tbg, Npg, Cha, Chg, Thia (pozri napríklad Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, diel XV/1 a 2, Stuttgart, 1974).
Azaaminokyseliny sú odvodené od prírodných a neprírodných aminokyselín, pričom základný stavebný kameň -CHR-, prípadne -CH2- je nahradený -NR-, pripadne -NH2-. Napríklad je možné uviesť azaglycín, azavalín, azaleucín, azaizoleucín a azafenylalanin.
Pod pojmom iminokyseliny sa chápu všeobecne prírodné alebo neprírodné aminokyseliny, ktorých aminoskupina je monosubstituovaná. Obzvlášť sa v tejto súvislosti uvažujú zlúčeniny, ktoré sú substituované alkylovou skupinou s 1 až 8 uhlíkovými atómami, ktorá môže byť raz alebo dvakrát nenasýtená a ktorá môže byť substituovaná až troma rovnakými alebo rôznymi zvyškami zo skupiny zahrnujúcej merkaptoskupinu, hydroxylovú skupinu, alkoxyskupinu s 1 až 7 uhlíkovými atómami, karbamoylovú sku pinu, alkanoyloxyskupinu s 1 až 8 uhlíkovými atómami, karboxyskupinu, alkoxykarbonylovú skupinu s 1 až 7 uhlíkovými atómami, fluór, chlór, bróm, jód, aminoskupinu, amidinoskupinu, ktorá prípadne môže byť substituovaná jedným alebo dvoma, alebo troma alkylovými zvyškami s 1 až 8 uhlíkovými atómami, guanidínoskupinu, ktorá prípadne môže byť substituovaná jedným alebo dvoma benzyloxykarbonylovými zvyškami alebo jedným, dvoma, tromi alebo štyrmi alkylovými zvyškami s 1 až 8 uhlíkovými atómami, alkylaminoskupinu s 1 až 7 uhlíkovými atómami, dialkylaminoskupinu vždy s 1 až 7 uhlíkovými atómami, alkoxykarbonylaminoskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, aralkoxykarbonylovú skupinu so 7 až 15 uhlíkovými atómami, aralkoxykarbonylaminoskupinu so 7 až 15 uhlíkovými atómami, fenylalkoxyskupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómami v alkoxylovej časti, 9-fluorenylmetoxykarbonylaminoskupinu, alkylsulfonylovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkylsulfinylovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkyltioskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, hydroxyaminoskupinu, hydroxyiminoskupinu a sulfamoylovú skupinu.
Ďalej prichádzajú do úvahy heterocykly, vybrané z nasledujúcej skupiny: kyselina pyrolidín-2-karboxylová, kyselina piperidín-2-karboxylová, kyselina l,2,3,4-tetrahydroizochinolín-3-karboxylová, kyselina dekahydroizochinolín-3-karboxylová, kyselina oktahydroindol-2-karboxylová, kyselina dekahydrochinolín-2-karboxylová, kyselina oktahydrocyklopenta[b]-pyrol-2-karboxylová, kyselina 2-azabicyklo[2.2.2]oktán-3-karboxylová, kyselina 2-azabicyklo[2.2.1Jheptán-3-karboxylová, kyselina 2-azabicyklo[3.1.0]-hexán-3-karboxylová, kyselina 2-azaspiro[4.4]nonán-3-karboxylová, kyselina 2-azaspiro[4.5]dekán-3-karboxylová, kyselina spiro(bicyklo[2.2.1]heptán)-2,3-pyrolidín-5-karboxylová, kyselina spiro(bicyklo[2.2.2]oktán)-2,3-pyrolidin-5-karboxylová, kyselina 2-azatricyklo[4.3.0.1^^]dekán-3-karboxylová, kyselina dekahydro-cyklohepta[b]pyrol-2-karboxylová, kyselina oktahydrocyklopenta[c]pyrol-2-karboxylová, kyselina oktahydroizoindol-1-karboxylová, kyselina 2,3,3a,4,6a-hexahydrocyklopenta[b]pyrol-2-karboxylová, kyselina 2,3,3a,4,5,7a-hexahydroindol-2-karboxylová, kyselina tetrahydrotiazol-4-karboxylová, kyselina izoxazolidín-3-karboxylová, kyselina pyrazolidín-3-karboxylová a kyselina hydroxyprolín-2-karboxylová, ktoré všetky môžu byť substituované:
COT CCT CO- COco- , co-- ofL, <>-’
SK 280319 Β6
Ako soli zlúčenín všeobecného vzorca (I) sa chápu obzvlášť farmaceutický použiteľné alebo netoxické soli. Do úvahy prichádzajú najmä soli alkalických kovov alebo kovov alkalických zemín, soli s fyziologicky prijateľnými amínmi ako sú napríklad metylamín a dimetylamín a soli s anorganickými alebo organickými kyselinami, ako je napríklad kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná, kyselina maleínová, kyselina fumarová, kyselina citrónová, kyselina vínna a kyselina octová.
Spôsob sa výhodne vykonáva tak, že sa zlúčenina všeobecného vzorca (II)
R3 proti bázickým látkam labilnú alebo proti slabým kyselinám, prípadne hydrogenáciou labilnú ochrannú skupinu, ako je napríklad uretánová ochranná skupina (pozri napríklad Hubbuch, Kontakte (MERCK) 1979, č. 3, str. 14 až 23) a
R4 alkylovú skupinu s 1 až 8 uhlíkovými atómami, cykloalkylovú skupinu s 3 až 8 uhlíkovými atómami, arylovú skupinu so 6 až 12 uhlíkovými atómami, arylalkylovú skupinu so 6 až 12 uhlíkovými atómami v arylovej časti a 1 až 8 uhlíkovými atómami v alkylovej časti, heteroarylovú skupinu, heteroarylalkylovú skupinu s 1 až 8 uhlíkovými atómami v alkylovej časti alebo vodíkový atóm, v rozpúšťadle, v ktorom sú zlúčeniny všeobecného vzorca (III) a (IV) rozpustné, ako je napríklad dimetylformamid, na zlúčeninu všeobecného vzorca v ktorom znamená γΐ, X2, X2, Y4 a Y3 vodíkový atóm, alkylovú skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómami, alkoxyskupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómami alebo skupinu -O-(CH2)n-COOH, skupinu, -(CH2)n-COOH alebo skupinu -NH-CO-(CH2)n-COOH, pričom tieto zvyšky môžu byť rovnaké alebo rozdielne, ale aspoň jeden zo zvyškov znamená skupinu -0-(CH2)n-COOH, skupinu -(CH2)n-COOH alebo skupinu -NH-CO(CH2)n-COOH, pričom n je celé číslo 1 až 6, výhodne 1 až 3 a
R* vodíkový atóm alebo alkoxyarylovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami v alkoxylovej časti a so 6 až 12 uhlíkovými atómami v arylovej časti, výhodne 4-metoxyfenyl, nechá reagovať so silylačným činidlom, ako je napríklad terc, -butyldimetylsilylchlorid, terc.-butylfenylsilylchlorid alebo trimetylchlórsilán, výhodne trimetylchlórsilán, vo vhodnom rozpúšťadle, ako je napríklad tetrahydrofurán, acetonitril, metylénchlorid, dimetylformamid alebo ich zmesi a potom sa silylovaná zlúčenina prevedie pomocou derivátov kyseliny chlórmravčej, obzvlášť substituovaného esterového derivátu, na zlúčeninu všeobecného vzorca (III)
v ktorom majú R^, YÚ X2, Y3, Y4, Y3 a Y^ uvedený význam a znamená arylovú skupinu so 6 až 12 uhlíkovými atómami, ktorá je substituovaná substituentmi priťahujúcimi elektróny, výhodne nitroskupinami alebo halogénmi, napríklad fluórom alebo chlórom, takto získaná zlúčenina všeobecného vzorca (111) sa nechá reagovať s hydrazidom aminokyseliny všeobecného vzorca (IV)
R3 - X - CO - NH - NH - R4 (IV), v ktorom znamená
Y prírodnú alebo neprírodnú aminokyselinu alebo iminokyselinu, ako je definované,
v ktorom majú R ú R3, R4 a Y^, X2, Y3, Y4 a Y3 uvedený význam, pričom pokiaľ R3 predstavuje proti hydrogenácii labilnú ochrannú skupinu, výhodne benzyloxykarbonylovú skupinu, táto ochranná skupina sa hydrogenáciou na paládiovom katalyzátore odstráni a pred ďalšou reakciou sa prevedie na proti bázam labilnú uretánovú ochrannú skupinu, výhodne fmoc, alebo na proti slabým kyselinám labilnú uretánovú ochrannú skupinu, výhodne bpoc, potom sa táto zlúčenina všeobecného vzorca (V), v ktorom majú R*, R4, Y1, X2, Y3, Y4 a Y3 uvedený význam a R3 znamená proti bázam, pripadne slabým kyselinám labilnú uretánovú ochrannú skupinu, naviaže s pomocou v peptidovej chémii bežných väzobných reagencií cez skupiny -O-(CH2)n-COOH, -(CH2)n-COOH alebo -NH-CO-(CH2)n-COOH na živicu, ochranná skupina R3 sa odštiepi, postupne sa naviažu prírodné alebo neprírodné aminokyseliny, iminokyseliny alebo azaaminokyseliny, temporárne chránené aminoochrannými skupinami, labilnými proti bázam alebo slabým kyselinám, prípadne vo forme svojich aktivovaných derivátov, a po skončení syntézy peptidu všeobecného vzorca (I) sa spracovaním so stredne silnou kyselinou zo živice uvoľnia, pričom sa súčasne pomocou vhodného opatrenia temporárne zavedené ochranné skupiny bočných reťazcov opäť odštiepia.
Zlúčenina všeobecného vzorca (IV) sa vyrobí reakciou prírodných alebo neprírodných aminokyselín, prípadne iminokyselín so zodpovedajúcimi hydrazidmi pomocou väzobných metód bežných v chémii peptidov.
Alkylová skupina môže byť priama alebo rozvetvená. To isté platí pre odvodené zvyšky, ako je napríklad alkoxyskupina, alkyltioskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina a alkanoylová skupina. Obzvlášť obsahuje alkylová skupina 1 až 4 uhlíkové atómy.
Pod pojmom cykloalkylová skupina sa chápu tiež alkylsubstituované zvyšky, ako je napríklad 4-metylcyklohexylová skupina alebo 2,3-dimetylcyklopentylová skupina.
Pod pojmom halogén sa rozumie fluór, chlór, bróm alebo jód, obzvlášť však fluór alebo chlór.
Arylová skupina so 6 až 12 uhlíkovými atómami je obzvlášť fenylová skupina alebo naftylová skupina, výhodná je fenylová skupina. Heteroarylová skupina predstavuje zvyšok päť alebo sedemčlenného monocyklického alebo osem až desaťčlenného bicyklického aromatického kruhového systému, ktorý môže byť substituovaný benzénom, ktorý ako heteroelementy môže obsahovať jeden, dva alebo tri rôzne zvyšky, vybrané zo skupiny zahrňujúcej N, O, S, MO, SO, SO2, pričom môže byť substituovaná jednou až šiestimi hydroxyskupinami alebo jedným, dvoma alebo troma rovnakými alebo rôznymi zvyškami zo skupiny zahrnujúcej fluór, chlór, bróm, jód, hydroxyskupinu, monohydroxyalkylovú skupinu, dihydroxyalkylovú skupinu alebo trihydroxyalkylovú skupinu, vždy s 1 až 4 uhlíkovými atómami, trifluórmetylovú skupinu, formylovú skupinu, karboxyamidovú skupinu, monoalkylaminokarbonylovú alebo dialkylaminokarbonylovú skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómami, nitroskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 7 uhlíkovými atómami, alkylovú skupinu s 1 až 7 uhlíkovými atómami, alkoxykarbonylovú skupinu s 1 až 7 uhlíkovými atómami, aminoskupinu, alkylaminoskupinu s 1 až 7 uhlíkovými atómami, dialkylaminoskupinu s 1 až 7 uhlíkovými atómami v alkylových častiach, karboxyskupinu, karboxymetyloxyskupinu, aminoalkylovú skupinu s 1 až 7 uhlíkovými atómami, alkylaminoalkylovú skupinu vždy s 1 až 7 uhlíkovými atómami v alkylových častiach, dialkylaminoalkylovú skupinu vždy s 1 až 7 uhlíkovými atómami v alkylových častiach, alkoxykarbonyletoxyskupinu s 1 až 7 uhlíkovými atómami v alkoxylovej časti, karbamoylovú skupinu, sulfamoylovú skupinu, alkoxysulfonylovú skupinu s 1 až 7 uhlíkovými atómami, alkylsulfonylovú skupinu s 1 až 8 uhlíkovými atómami, sulfoalkylovú skupinu s 1 až 8 uhlíkovými atómami, guanidínoalkylovú skupinu s 1 až 8 uhlíkovými atómami v alkylovej časti a alkoxykarbonylovú skupinu s 1 až 8 uhlíkovými atómami a/alebo je substituovaný raz alebo dvakrát oxoskupinau. Obzvlášť je možné menovať furylovú skupinu, tienylovú skupinu, imidazolylovú skupinu, pyrazolylovú skupinu, oxazolylovú skupinu, izoazolylovú skupinu, tiazolylovú skupinu, izotiazolylovú skupinu, tetrazolylovú skupinu, pyridylovú skupinu, pyrazinylovú skupinu, pyrimidinylovú skupinu, indolylovú skupinu, izoindolylovú skupinu, indazolylovú skupinu, ftalazinylovú skupinu, chinolylovú skupinu, izochinolylovú skupinu, chinoxalinylovú skupinu, chinazolinylovú skupinu, chinolinylovú skupinu, beta-karbolinylovú skupinu alebo benzderiváty týchto zvyškov.
Pokiaľ je to kvôli potlačeniu vedľajších reakcií alebo kvôli syntéze špeciálnych peptidov potrebné, sú funkčné skupiny v bočných reťazcoch aminokyselín, azaaminokyselin, prípadne iminokyselin, dodatočne chránené pomocou vhodných ochranných skupín (pozri napríklad T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, New York, John Wiley a Sons, 1981, Hubbuch, Kontakte (Merck)
1979, č. 3, str. 14 až 23, Bullesbach, Kontakte (Merck)
1980, č. 1, str. 23 až 35), pričom v prvom rade sa použije Arg(Tos), Arg(Mts), Arg(Mtr), Arg(Pmc), Asp(OBzl), Asp(OtBu), Cys(4-MeBzl), Cys(Acm), Cys(StBu), Glu(OBzl), Glu(OtBu), His(Tos), His(Fmoc), His(Dnp), His(Trt), Lys(Boc), Met(O), Ser(Bzl), Ser(tBu), Thr(Bzl), Thr(tBu). Ďalej sa môžu funkčné skupiny v bočných reťazcoch tiež glykozylovať, ako je napríklad opísané v EP-A 263 521 (IIOE 86/F 253).
Živice, používané ako nosné materiály, sú komerčne dostupné, alebo je možné ich vyrobiť ako napríklad alkoxybenzylalkoholové živice, aminometylové živice alebo benzhydrylaminoživice. Výhodné sú aminometylové živice, benzhydrylaminoživice (BHA) a metylbenzhydrylami noživice (MBHA). Nasýtenie sa stanoví analýzou aminokyselín a/alebo elementárnou analýzou.
Pod pojmom vhodné spacery sa chápu napríklad spacery, opísané v Atherton, Sheppard in Perspectives in Peptide Chemistry, str. 101 až 117 (Karger, Basel 1981), v EP-A 264 802 (HOE 86/F 259), EP-A 287 882 (HOE 87/F 101) a EP-A 322 348 (HOE 87/F 386K), ako i od nich odvodené deriváty, ako napríklad také, pri ktorých je ochranná skupina odštiepená. Výhodný je 4- karboxylátpropoxy-4'-metoxybenzhydrylamín a 5-karboxylátetyl- 2,4-dimetoxy-4'-metoxybcnzhydrylamín.
Ako väzobné činidlo pre spacer všeobecného vzorca (V) a ďalšie deriváty aminokyselín sa môžu použiť všetky aktivačné činidlá, používané v chémii peptidov (pozri napríklad Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Bánd XV/2, Stuttgart 1974), obzvlášť ale karbodiimidy, ako je napríklad N,N'- dicyklohexylkarbodiimid, N,N'-diizopropylkarbodiimid alebo N-etyl-N'-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimid. Naviazanie sa pritom môže vykonať priamo adíciou derivátu aminokyseliny s aktivačným činidlom a prípadne za prídavku racemizáciu potlačujúcej prísady, ako je napríklad 4-dimetylaminopyridin, 1-hydroxy-benzotriazol (HOBt) (W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber. 103 (1970), 788 - 798) alebo 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydrobenzotriazín (HOObt) (W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber. 103 (1970), 2034 - 2040) na živicu, alebo sa ale tiež môže vykonať predbežná aktivácia derivátu aminokyseliny separátne ako symetrický anhydrid alebo HOBt-ester, prípadne HOObt-ester, a roztok aktivovanej látky vo vhodnom rozpúšťadle sa privedie do styku so živicou, schopnou väzby s peptidmi.
Naviazanie, prípadne aktivácia spaceru všeobecného vzorca (V) a derivátu aminokyseliny pomocou uvedených aktivačných činidiel sa môže vykonávať v dimetylformamide alebo metylénchloride, alebo v zmesi týchto látok. Aktivovaný derivát aminokyseliny sa bežne používa v 1,5 až štvornásobnom prebytku. V prípadoch, kedy dochádza k neúplnému naväzovaniu, sa väzobná reakcia opakuje bez toho, že by sa vykonávalo odblokovanie alfa-aminoskupiny peptidovej živice, nevyhnutnej na naviazanie nasledujúcej aminokyseliny.
Úspešný priebeh väzobnej reakcie sa môže preskúšavať pomocou ninhydrínovej reakcie, ako je napríklad opísané v E. Kaiser a kol. (Anál. Biochem. 34 (1970) 595). Syntéza sa môže tiež vykonávať automaticky, napríklad pomocou syntetizéra peptidov (Peptid-Synthetizer Model 430A Fa. Applied Biosystems), pričom sa môžu použiť programy dodané výrobcom prístroja alebo rovnako vypracované jeho využívateľom. Posledné sa využijú najmä pri použití derivátov aminokyselín, chránených Fmoc-skupinou.
Odštiepenie peptidamidov od živice sa vykonáva spracovaním so stredne silnými kyselinami, ako jc napríklad kyselina trifluóroctová, ako je bežné pri syntéze peptidov, pričom sa ako akceptor elektrónov pridávajú látky, ako je fenol, krezol, tiokrezol, anizol, tioanizol, etánditiol, dimetylsulfid, etylmetylsulfid, ktoré sú pre tento postup v syntéze v pevnej fáze bežné, jednotlivo alebo v zmesi dvoch alebo viacerých týchto pomocných činidiel. Kyselina trifluóroctová sa pritom môže používať tiež zriedená vhodným rozpúšťadlom, ako je napríklad metylénchlorid.
Pri odštiepení spaceru zo živice prebieha súčasne odštiepenie ochranných skupín bočných reťazcov.
Čistenie takto získaných surových peptidov sa vykonáva pomocou chromatografie na Sephadexe, iónomeničových živiciach alebo pomocou HPLC.
Výhodný je spôsob syntézy v pevnej fáze na výrobu
SK 280319 Β6
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(alfa-L-Rhaj-Leu-Arg-Pro-Azagly-NHj a pGlu-His-Trp-Ser-Tvr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 (Zoladex).
Prehľad používaných skratiek: BSA bis-trimetylsilylacetamid
Cha cyklohexylalanín
Chg cyklohexylglycín
DCC dicyklohexylkarbodiimid
DIC diizopropylkarbodiimid
DMAP dimetylaminopyridín
Bpoc benzylpropoxykarbonyl
Fmoc 3-fluorenylmetoxykarbonyl
HOBt 1 -hydroxybenzotriazol
HOObt 3 -hydroxy-4-oxo-3,4-dihy dro-1,2,3-benzotriazín
Nal naftylalanín
Npg neopentylglycín
Pmc 2,2,5,7,8-pentaetylchroman-6-sulfonyl
Tbg terc.-butylglycín
THF tetrahydrofurán
Thia 2-tienylalanín
Nasledujúce príklady slúžia na bližšie objasnenie vynálezu bez toho, aby ho nejako obmedzovali.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
a) 5-Karboxylátoetyl-2,4-dimetoxy-4'-metoxybenzhydrylamín
17,5 g 5-karboxylátoetyl-2,4-dimetoxy-4'-metoxybenzofenónoximu sa rozpustí v zmesi etylalkoholu a dimetylformamidu 1:1a zmieša sa s 2 ml koncentrovaného NHy Po prídavku Pt/C katalyzátora sa pri normálnom tlaku hydrogenuje počas 5 dní. Po skončení reakcie sa katalyzátor odsaje, fíltrát sa zahustí a produkt sa vyzráža dietyléterom. Sám osebe sa používa bez ďalšieho čistenia.
b) N-(p-nitrofenyloxykarbonyl)-5-karboxylátoetyl-2,4-dimetoxy-4'-metoxy-benzhydrylamín g zlúčeniny podľa príkladu la) sa dá do 100 ml zmesi tetrahydrofuránu a dimetylformamidu 4 : 1 a pri teplote miestnosti zmieša s 2,1 ekvivalentmi bis-trimetylsilylacetamidu (BSA). Suspenzia sa počas krátkeho času úplne vyčíri a číry roztok sa mieša ešte počas dvoch hodín. Potom sa pridajú 3 g nitrofenylesteru kyseliny chlórmravčej a reakčná zmes sa mieša počas ďalšej hodiny. Po skončení reakcie sa rozpúšťadlo odstráni za vysokého vákua. Zvyšok sa zmieša s 300 ml vody a vzniknutá olejovitá fáza sa extrahuje etylesterom kyseliny octovej. Etylacetátová fáza sa premyje 1 N roztokom hydrogensíranu draselného a vodou. Organická fáza sa vysuší bezvodým síranom horečnatým a odparí sa do sucha. Zvyšok (12 g) sa určí pomocou NHR, IR a MS.
Získaný N-(p-nitrofenyloxykarbonyl)-5-karboxylátoetyl-2,4-dimetoxy-4'-metoxy-ben7.hydrylanún sa potom nechá zreagovať s hydrazidmi aminokyselín na vhodné substituované ankery.
c) Benzyloxykarbonyl-4-prolyl-azaglycyl-(5-karboxylátoetyl-2,4-dimetoxy-4'-metoxybenzhydryl)-amid
3,27 g hydrochloridu benzyloxykarbonyl-prolylhydrazidu a 6,94 g zlúčeniny podľa príkladu lb) sa rozpustí v 40 ml dimetylformamidu (DMF) a zmieša sa s 3 ekviva lentmi N-etylmorfolínu a katalytickým množstvom dimetylaminopyridínu (DMAP). Reakčná zmes sa nechá počas hodín reagovať. Po skončení reakcie sa zmes odparí do sucha. Zvyšok sa vyberie do zmesi etylesteru kyseliny octovej a butylalkoholu a organická fáza sa premyje nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, 1 N roztokom hydrogensíranu draselného a vodou. Organická fáza sa potom vysuší cez bezvodý síran horečnatý a po filtrácii sa odparí do sucha. Zvyšok sa nechá prekryštalizovať z čistého etylesteru kyseliny octovej. Získa sa takto 6,6 g v názve uvedenej zlúčeniny.
FAB-MS: 641 (M + Li+)
IR: CO 1695 cm’1 1 H-NMR (DMSO): delta = 3,7 s (6H, OCH3) ppm.
d) 9-Fluorenylmetoxykarbonyl-L-prolyl-azaglycyl-(5-karboxylátoetyl-2,4-dimetoxy-4'-metoxybenzhydryl)amid
26,5 g zlúčeniny podľa príkladu lc) sa rozpustí v 300 ml metylalkoholu a pridá sa 2 g paládiového katalyzátora. Po jednej hodine sa hydrogenácia skončí. Katalyzátor sa odfiltruje a fíltrát sa zahustí do sucha. Bez ďalšieho čistenia sa zvyšok (17,5 g) vyberie do zmesi 80 ml vody a 80 ml dioxánu a zmieša sa s 8 g hydrogenuhličitanu sodného a g 9-fluorenylmetoxykarbonyl-N-hydroxysukcínimidu (Fmoc-CNSu). Reakčná zmes sa nechá počas jedného dňa reagovať. Po skončení reakcie sa prefiltruje cez číriaci filter. Hodnota pH filtrátu sa upraví pomocou 2 N kyseliny sírovej na hodnotu 6 a vo vákuu sa objem zredukuje na 80 ml. Potom sa zmes zriedi 100 ml vody a extrahuje sa zmesou etylesteru kyseliny octovej a n-butylalkoholu (8,5 : 1,5). Organická fáza sa premyje polonasýteným roztokom chloridu sodného a potom sa odparí do sucha. Zvyšok sa prefiltruje cez 500 g silikagélu s etylesterom kyseliny octovej. Získa sa takto 20 g v názve uvedenej zlúčeniny. FAB-MS: 729 (M + Li+)
IR: CO 1695 cm·'.
e) Naviazanie zlúčeniny podľa príkladu ld) na polystyrénovú živicu
1,0 g aminometylpolystyrénovej živice (nasýtenie 1,07 mmól) a 1,2 g zlúčeniny podľa príkladu ld) sa suspenduje v 10 ml dimetylformamidu a zmieša sa s 216 mg 1-hydroxybenzotriazolu (HOBt) a 0,75 ml diizopropylkarbodiimidu (DIC). Reakčná zmes sa nechá cez noc zreagovať, až ninhydrínový test ukáže úplnú reakciu. Živica sa odfiltruje a premyje sa dimetylformamidom a metylénchloridom a vo vákuu sa dokonale vysuší. Nasýtenie živice prolínomje 0,51 mmól/g.
f) Ac-D-Na(2)-p-Gl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (alfa-L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2
9-Fluorenylmetoxykarbonyl-N-amino ochranná skupina zlúčeniny podľa príkladu lc) sa odštiepi pomocou 20 % roztoku piperidínu v dimetylformamide (2x3 min., 2x8 ml). Potom sa živica premyje N-metylpyrolidónom (5x10 ml) a peptid sa na živicu (785 mg živice z príkladu lc)) naviaže, pričom sa cyklicky vykonávajú nasledujúce kroky:
- odštiepenie Fmoc-ochrannej skupiny pomocou 20 % piperidínu v DMP,
- premytie živice zmesou DMP/N-metylpyrolidón,
- naviazanie Fmoc-aminokyseliny za in situ aktivácie ako HOBt-ester s použitím diizopropylkarbodiimidu ako aktivačného činidla (1,5 mmól aminokyseliny, 2,25 mmól HOBt, 1,6 mmól diizopropylkarbodiimidu).
Pokiaľ bolo naviazanie neúplné (Kaiser-test), nadväzovací stupeň sa opakuje. Ako posledná aminokyselina sa použije Fmoc-D-Nal(2)-OH. N-terminálna acetylová skupina sa zavedie reakciou s acetanhydridom.
Po skončení syntézy v pevnej fáze sa živica premyje (DMF, CIljCH a poriadne vysuší. Získa sa takto 1,35 g substituovanej živice.
Vysušená živica sa pri teplote miestnosti suspenduje s 0,75 ml etánditiolu. Po 15 minútach sa pridá 7,5 ml kyseliny trifluóroctovej a suspenzia sa mieša počas 1,5 hodiny. Po tomto čase sa živica odfiltruje a dobre sa premyje 80 % kyselinou trifluóroctovou.
Fíltrát sa vo vákuu odparí a vyberie sa do 30 ml vody. Prídavkom hydrogenuhličitanu sodného sa hodnota pH nastaví na 6 až 7 a peptid sa vytrepe n-pentanolom (4 x 30 ml). N-pentanolová fáza sa odparí, vyberie sa do 10 ml zmesi metylalkoholu a vody (9 : 1) a zmieša sa s 0,5 g uhličitanu draselného. Reakčná zmes sa mieša počas 30 minút, prefiltruje sa a fíltrát sa zahustí. Zvyšok sa vyberie do 100 ml n-pcntanolu a organická fáza sa premyje vodou. Po vysušení síranom horečnatým a filtrácii sa organická fáza odparí. Získa sa takto 740 mg surového produktu. Po chromatografii na sefadexe G 25 (1 M kyselina octová) a na silikagéli sa získa 185 mg čistej zlúčeniny uvedenej v názve. FAB-MS: 1531 (M + H+).

Claims (2)

PATENTOVÉ NÁROKY
1. Spôsob výroby peptidov všeobecného vzorca (I) (X)n-A-NH2 (I), v ktorom znamená
X prírodnú alebo neprírodnú aminokyselinu, azaaminokyselinu alebo iminokyselinu, n celé číslo 1 až 50, výhodne 1 až 30 a
A azaaminokyselinu, ako i ich fyziologicky neškodné soli, vyznačujúci sa tým, že sa spacer prevedie na formu schopnú acylácie, táto sa nechá reagovať s vhodným derivátom kyseliny mravčej a potom so zodpovedajúcim hydrazidom aminokyseliny, prípadne sa ochranná skupina prevedie na ochrannú skupinu labilnú proti bázam alebo proti slabým kyselinám, takto získaný spacer sa naviaže na živicu, požadovaný peptid sa skonštruuje od C-terminálneho konca, potom sa peptid zo živice odštiepi a prípadne sa prevedie na svoju fyziologicky prijateľnú soľ.
2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčenina všeobecného vzorca (II) v ktorom znamená
Y k Y2, Y3, Y4 a Y3 vodíkový atóm, alkylovú skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómami, alkoxylovú skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómami alebo skupinu -O-(CH2)n-COOH, -(CH2)n-COOH alebo -NH-CO-(CH2)n-COOH, pričom tieto zvyšky môžu byť rovnaké alebo rôzne a aspoň jeden zo zvyškov však znamená skupinu -O-(CH2)n-COOH, -(CH2)n-COOH alebo -NH-CO(CH2)n-COOH a n znamená celé číslo 1 až 6 a
R* vodíkový atóm alebo alkoxyarylovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami v alkoxylovej časti a so 6 až 12 uhlíkovými atómami v arylovej časti, nechá reagovať so silylačným činidlom vo vhodnom rozpúšťadle a potom sa silylovaná zlúčenina prevedie s derivátom kyseliny chlórmravčej na zlúčeninu všeobecného vzorca (III) v ktorom majú R^, γΐ, Y2, Y3, Y4 a Y3 uvedený význam a g
R znamená arylovú skupinu so 6 až 12 uhlíkovými atómami, ktorá je substituovaná substituentmi priťahujúcimi elektróny, výhodne nitroskupinami alebo halogénmi, takto získaná zlúčenina všeobecného vzorca (III) sa nechá reagovať s hydrazidom aminokyseliny všeobecného vzorca (IV)
R3-X-CO-NH-NH-R4 (IV), v ktorom znamená
X prírodnú alebo neprírodnú aminokyselinu alebo iminokyselinu, ako je definované,
R3 proti bázickým látkam labilnú alebo proti slabým kyselinám, prípadne hydrogenácii labilnú ochrannú skupinu, a R4 alkylovú skupinu s 1 až 8 uhlíkovými atómami, cykloalkylovú skupinu s 3 až 8 uhlíkovými atómami, arylovú skupinu so 6 až 12 uhlíkovými atómami, arylalkylovú skupinu so 6 až 12 uhlíkovými atómami v arylovej časti a 1 až 8 uhlíkovými atómami v alkylovej časti, heteroarylovú skupinu, heteroarylalkylovú skupinu s 1 až 8 uhlíkovými atómami v alkylovej časti alebo vodíkový atóm, vo vhodnom rozpúšťadle na zlúčeniny všeobecného vzorca (V)
X---R3 v ktorom majú R1, R3, R4 a γΐ, Y2, Y3, Y4 a Y3 uvedený význam, pričom pokiaľ R3 predstavuje proti hydrogenácii labilnú ochrannú skupinu, táto ochranná skupina sa hydrogenáciou na paládiovom katalyzátore odstráni a pred ďalšou reakciou sa prevedie na proti bázam labilnú alebo proti slabým kyselinám labilnú uretánovú ochrannú skupinu, potom sa táto zlúčenina všeobecného vzorca (V), v ktorom majú R^, R4, γΐ, Y2, Y3, Y4 a Y3 uvedený význam a R3 znamená proti bázam, pripadne slabým kyselinám labilnú
SK 280319 Β6 uretánovú ochrannú skupinu, naviaže pomocou väzobných reagencií, bežných v chémii peptidov, cez skupiny -0-(CH2)n-COOH. -(CH2)n-COOII alebo -NH-CO-(CH2)n-COOH na živicu, ochranná skupina R^ sa odštiepi, postupne sa naviažu prírodné alebo neprírodné aminokyseliny, iminokyseliny alebo azaaminokyseliny, temporárne chránené aminoochrannými skupinami, labilnými proti bázam alebo slabým kyselinám, prípadne vo forme svojich aktivovaných derivátov, a po skončení syntézy peptidu všeobecného vzorca (I) sa spracovaním so stredne silnou kyselinou zo živice uvoľnia, pričom sa súčasne pomocou vhodného opatrenia tu potom temporárne zavedené ochranné skupiny bočných reťazcov opäť odštiepia.
SK2666-91A 1990-08-30 1991-08-29 Spôsob výroby peptidov SK280319B6 (sk)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4027394 1990-08-30

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK280319B6 true SK280319B6 (sk) 1999-11-08

Family

ID=6413202

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK2666-91A SK280319B6 (sk) 1990-08-30 1991-08-29 Spôsob výroby peptidov

Country Status (22)

Country Link
EP (1) EP0475184B1 (sk)
JP (1) JP3177269B2 (sk)
KR (1) KR100203548B1 (sk)
AU (1) AU646488B2 (sk)
CA (1) CA2050216C (sk)
CZ (1) CZ282881B6 (sk)
DE (1) DE59104538D1 (sk)
DK (1) DK0475184T3 (sk)
ES (1) ES2069148T3 (sk)
FI (1) FI102380B1 (sk)
GR (1) GR3015359T3 (sk)
HU (1) HU208838B (sk)
IE (1) IE66524B1 (sk)
IL (1) IL99338A (sk)
NO (1) NO300216B1 (sk)
NZ (1) NZ239575A (sk)
PL (1) PL167504B1 (sk)
PT (1) PT98813B (sk)
RU (1) RU2036200C1 (sk)
SK (1) SK280319B6 (sk)
TW (1) TW295589B (sk)
ZA (1) ZA916848B (sk)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9112825D0 (en) * 1991-06-14 1991-07-31 Ici Plc Process for making peptides
GB9727123D0 (en) * 1997-12-22 1998-02-25 Int Centre Genetic Eng & Bio Synthesis of diamines
ES2154590B1 (es) 1999-05-20 2001-11-01 Lipotec Sa Procedimiento de sintesis de peptidos en fase solida
EP1845973B1 (en) 2005-01-21 2015-08-12 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical compounds
US8916552B2 (en) 2006-10-12 2014-12-23 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
WO2008044045A1 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
WO2014147124A1 (en) 2013-03-21 2014-09-25 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Synthesis of hydantoin containing peptide products
US10450343B2 (en) 2013-03-21 2019-10-22 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Synthesis of cyclic imide containing peptide products

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0322348B1 (de) * 1987-12-22 1994-02-02 Hoechst Aktiengesellschaft Säurelabile Ankergruppen zur Synthese von Peptidamiden mittels Festphasenmethode

Also Published As

Publication number Publication date
IL99338A (en) 1996-05-14
KR100203548B1 (ko) 1999-06-15
TW295589B (sk) 1997-01-11
JP3177269B2 (ja) 2001-06-18
IL99338A0 (en) 1992-07-15
NO300216B1 (no) 1997-04-28
EP0475184A1 (de) 1992-03-18
ES2069148T3 (es) 1995-05-01
DE59104538D1 (de) 1995-03-23
PL291561A1 (en) 1992-07-13
CS266691A3 (en) 1992-03-18
NO913396L (no) 1992-03-02
EP0475184B1 (de) 1995-02-08
PT98813A (pt) 1992-07-31
FI914064A (fi) 1992-03-01
AU646488B2 (en) 1994-02-24
RU2036200C1 (ru) 1995-05-27
HU912825D0 (en) 1992-10-28
CA2050216C (en) 2003-03-11
FI102380B (fi) 1998-11-30
CZ282881B6 (cs) 1997-11-12
AU8340291A (en) 1992-03-05
GR3015359T3 (en) 1995-06-30
FI102380B1 (fi) 1998-11-30
DK0475184T3 (da) 1995-06-26
HUT60749A (en) 1992-10-28
PT98813B (pt) 1999-01-29
IE66524B1 (en) 1996-01-10
FI914064A0 (fi) 1991-08-28
ZA916848B (en) 1992-04-29
CA2050216A1 (en) 1992-03-01
NO913396D0 (no) 1991-08-29
JPH04230697A (ja) 1992-08-19
IE913051A1 (en) 1992-03-11
NZ239575A (en) 1993-07-27
HU208838B (en) 1994-01-28
PL167504B1 (pl) 1995-09-30
KR920004421A (ko) 1992-03-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9346850B2 (en) Method of producing peptide
IL91298A (en) Peptides with antagonistic activity to bradykinin, their preparation and use
SK280319B6 (sk) Spôsob výroby peptidov
IE57747B1 (en) New peptide derivatives and salts thereof,pharmaceutical preparations containing them,and process and intermediates for their manufacture
US4491541A (en) Peptides
KR960013073B1 (ko) 펩티드 아미노알킬아미드 및 펩티드 하이드라지드 및 고상법에 의한 이들의 제조방법
US5965770A (en) N-aryloxycarbonyl amino acids and peptides and their derivatives
JP2725780B2 (ja) ペプチドアミドの合成
NZ544961A (en) Preparation of somatostatin peptides
GB2130590A (en) Peptides
IE47448B1 (en) Analogs of somatostatin and process for the manufacture thereof
US5326875A (en) Alkylation of azaglycine derivatives
US4031069A (en) Tetrapeptides
NO131543B (sk)
US4031070A (en) Tetrapeptides
US4101537A (en) Octapeptides and methods for their production
US4035348A (en) Tetrapeptides and methods for their production
Procházka et al. Analogs of Deamino Carba Oxytocin with Inhibitory Properties; Synthesis and Biological Activities
KR910004867B1 (ko) 펩티드의 제조방법
GB2118190A (en) Peptides with sauvagine-like activity

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Expiry of patent

Expiry date: 20110829