KR960013073B1 - 펩티드 아미노알킬아미드 및 펩티드 하이드라지드 및 고상법에 의한 이들의 제조방법 - Google Patents

펩티드 아미노알킬아미드 및 펩티드 하이드라지드 및 고상법에 의한 이들의 제조방법 Download PDF

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Abstract

없음

Description

펩티드 아미노알킬아미드 및 펩티드 하이드라지드 및 고상법에 의한 이들의 제조방법
본 발명은 일반식(I)의 화합물에 관한 것이다.
Figure kpo00001
상기식에서, A는 수소이거나 염기 또는 약산에 불안정한 아미노 보호그룹을 나타내고, B는 동일하거나 상이한 아미노산 잔기를 나타내며, X는 C1내지 C12알킬렌 또는 C6내지 C10-아릴-C1내지 C12-알킬렌을 나타내고, Y1, Y2, Y3및 Y4는 동일하거나 상이하며, 수소, 메틸, 메톡시 또는 니트로이고, 이들 라디칼 중의 하나 이상은 수소를 나타내며, V는 수소이거나 카복실 보호 그룹을 나타내고, W는 -[CH2]n- 또는 -O-[CH2]n-을 나타내며, m은 0 또는 1이고, n은 0 내지 6의 정수이며, p는 0 내지 5의 정수이다.
아미노알킬아미드를 생물학적으로 활성인 펩티드의 C-말단부에 도입시키면 일부 경우에는 신진대사 안정성과 활성에 유익한 효과를 가져온다(참조:EP-A 제179 332호).
이러한 방식으로 개질시킨 펩티드의 제조는 용액내에서의 단편들의 통상적인 커플링 반응을 사용하여 수행한다.
펩티드의 고상합성법[참조:Patchornik, Cohen in Perspectives in Peptide Chemistry, pages 118-128(Karger, Basle 1981)]의 경우, 종종, 반응쇄들은 통상 합성수지 물질에 직접 그래프팅(grafting)되는 것이 아니라, 스페이서(spacer) 또는 링크(link)라 부르는 것에 의해 담체물질에 결합된다.
예를들면, 일반식(VI), (VII) 및 (VIII)로 나타낸 이러한 스페이서를 도입시키기 위한 시약 [결합제(binder)라고 함]은 문헌[참조:Atherton, Sheppard in Perspectives in Peptide Chemistry, pages 101-117(Karger, Basle 1981)]에 기술되어 있다.
Figure kpo00002
본 발명에 따라, C-말단 아미노알킬아미드 또는 하이드라지드에 의해 개질된 펩티드의 고상 합성법에 의한 결합을 가능하게 하는 신규한 결합제를 밝혀내었다.
따라서, 본 발명은 일반식(I)의 화합물에 관한 것이며, 일반식(I)의 화합물 중에서 바람직한 화합물은 p가 0, 1 또는 2, 특히 0이고/이거나 m이 1인 화합물이다.
X는 바람직하게는 -[(CH2)q- (여기서, q는 1 내지 12, 바람직하게는 1 내지 8일 수 있다)이다.
라디칼, Y1, Y2, Y3및 Y4중의 바람직하게는 둘 이상, 특히 바람직하게는 셋 이상의 수소를 나타낸다.
염기 또는 약산에 불안정한 보호 그룹은 특히 Fmoc, Ddz, Bpoc, Msc, Peoc, Pse 및 Tse, 바람직하게는 Fmoc와 같은 우레탄 보호 그룹이다(참조:Hubbuch, Kontakte(Merck)1979, No. 3, pages 14-23).
B는 아미노산 잔기, 바람직하게는 α-아미노산의 잔기를 나타내며 이는 키랄형인 경우 D 또는 L형태로 존재할 수 있다. 천연 아미노산, 이의 거울상 이성체, 동족체, 유도체 및 단순 대사산물의 잔기가 바람직하다. (참조:Wunsch 등, Houben-Weyl 15/1 and 2, Stuttgart, Thieme 1974). 따라서, 예를들면, 다음과 같은 잔기들이 적합하다:
Aad, Abu, γAbu, ABz, 2ABx, εAca, Ach, Acp, Adpd, Ahb, Aib, βAib, ALa, βAla, △ALa, ALL, Ama, Amt, Ape, Apm, Apr, Arg, Asn, Asp, Asu, Aze, Azi, Bai, Bph, Can, Cit, Cys, Cyta, Daad, Dab, Dadd, Dap, Dapm, Dasu, Djen, Dpa, Dtc, FeL, GLn, GLu, GLy, Guv, hCys, His, hSer, HyL, Hyp, 3Hyp, ILe, Ise, Iva, Kyn, Lant, Lcn, Leu, Lsg, Lys, βLys, △Lys, Met, Mim, Min, nArg, NLe, Nva, OLy, Orn, Pan, Pec, Pen, Phe, Phg, Pic, Pro, △Pro, Pse, Pya, Pyr, Pza, Qin, Ros, Sar, Sec, Sem, Ser, Thi, βThi, Thr, Thy, Thx, Tia, TLe, TLy, Trp, Trta, Tyr, VaL 및 상응하는 거울상 이성체성 D-아미노산의 잔기.
위에서 언급된 아미노산 잔기의 측쇄의 작용 그룹을 보호된 형태일 수 있다. 문헌[참조:Hubbuch, Kontakte(Merck) 1979, No. 3, pages 14-23, 및 Bullesbach, Kontakte(Merck)1980, No, 1, pages 23-35)에는 적합한 보호 그룹들이 기술되어 있다. 바람직한 그룹들은 염기 및 약산에 안정하고 강산을 사용하여 제거시킬 수 있는 그룹들이다.
알킬렌은 직쇄 또는 측쇄일 수 있다. C6내지 C10-아릴의 예는 페닐, 톨릴 또는 나프틸이고, 페닐이 바람직하다.
카복실 보호 그룹 V는, 예를들면 C1내지 C6-알킬 또는 C7내지 C11-아르알킬이고, 메틸, 에틸, 3급 부틸, 벤질, 및 p-클로로-, p-브로모-, p-니트로- 및 p-메톡시벤질과 같은 개질과 벤질 및 질소 동조 피콜릴이 바람직하다. 광의로는, 이러한 보호 그룹들에 ONSu, OBt, OObt 또는 p-니트로 페녹시와 같은 불활성화 에스테르 그룹이 포함된다.
또한, 본 발명은,
(a) 일반식(II)의 화합물을 일반식(III)의 화합물과 반응시키고, 필요한 경우, 생성된 일반식(I)의 보호된 화합물내의 보호 그룹 A 및/또는 V의 하나 또는 둘 다를 제거하여 유리 NH2및/또는 CO2H 그룹을 형성(바람직한 방법은 그룹 V를, 예를들면, Zn/빙초산을 사용하여 환원 절단시킴으로써 선택적으로 제거하는 것이다)시키거나, b) A가 수소이고, B, X, Y1, Y2, Y3, Y4, V, w, m, n 및 p가 위에서 정의한 바와 같은 일반식(I)의 화합물을 일반식(IV)의 화합물 또는 이의 활성 에스테르, 할라이드 또는 아지드와 반응시키고, V가 수소가 아닌 경우, 필요에 따라, 카복실 보호 그룹 V를 제거하여 카복실 그룹을 형성시킴을 포함하는, 일반식(I)의 화합물의 제조방법에 관한 것이다.
Figure kpo00003
A-[B]p-NH--[X]m-NH2(III)
A-[B]5-p-OH(IV)
상기식에서, R은 친핵적으로 분리될 수 있는 이탈 그룹이고; V는 카복실 보호 그룹이며; A는 염기 또는 약산에 불안정한 아미노 보호 그룹이고; W, Y1, Y2, Y3, Y4, B, X, p 및 m은 위에서 정의한 바와 같으며, 단, 일반식(IV)에서 A는 수소가 아니다.
친핵적으로 분리될 수 있는 이탈 그룹 R은, 예를들면, 염소, 브롬 및 요요드와 같은 할로겐, 또는 p-니트로페녹시와 같은 활성화 아릴옥시이다.
일반식(II)의 화합물과 일반식(III)의 화합물과의 반응은 비양자성 용매(예:THF, DMF, CHCl3또는 CH2Cl2)에서, 상당히 효과 아실화 반응 촉매(예:DMAP, HOObt 또는 HOBt) 를 첨가하면서 0℃ 내지 반응 혼합물의 비점, 바람직하게는 0℃ 내지 40℃의 온도에서, 유리하게는 3급아민(예: 에티트리이소프로필아민, 트리에틸아민 또는 피리딘)과 같은 염기의 존재하에 수행하는 것이 바람직하다.
일반식(I)(A는 수소)의 화합물을 DMF와 같은 DMF와 같은 유기용매에서, -10℃ 내지 반응 혼합물의 비점의 온도, 바람직하게는 실온에서 유리하게는 3급 아민과 같은 염기의 존재하에 일반식(IV)의 화합물, 이의 활성 에스테르, 할라이드 또는 아지드와 반응시키는 것이 바람직하다. 적절한 활성에스테르의 예를 ONSu, OBt, OObt 및 p-니트로페녹시 화합물이다. 바람직한 할로겐 유도체는 염화물이다. 과염소산피리디늄을 기하여 용해도를 증가시킬 수 있다.
일반식(II)의 화합물은, 예를들면, 일반식(IX)의 에스테르를 -40℃ 내지 실온, 바람직하게는 -20℃ 내지 0℃의 온도에서, 3급 아민(예:피리딘)과 같은 3급 여기와 혼합시킨 비양자성 극성 용매(예:THF 또는 DMF)중에서 포스겐 또는 포스겐 유도체(예:니트로페닐 클로로포르메이트)와 1:1의 비율로 반응시킴으로써 제조한다.
Figure kpo00004
상기식에서, Y1, Y2, Y3, Y4, W 및 V는 위에서 정의한 바와 같으며, 단 V는 수소가 아니다.
또한, 본 발명은 일반식(V)의 화합물의 고상 합성법에 있어서의 일반식(I) (여기서, V는 수소이고 A는 수소가 아니다)의 화합물의 용도, 및 이들 일반식(I)의 화합물을 수지에 커플링시키고, 부호 A를 제거한 후, 필요에 따라, 활성화 유도체 형태로 존재하며 염기 또는 약산에 불안정한 아미노 보호 그룹에 의해 일시적으로 보호된 q-p α-아미노산에 단계적으로 커플링시키고, 커플링 반응을 완결시킨 후, 강중산 내지 강산으로 처리하여 펩티드를 수지로부터 유리(여기서, 일시적으로 도입된 측쇄 보호 그룹을 동시에 또는 적합한 수단을 사용하여 이후에 다시 제거한다)시킴을 포함하는, 고상합성법에 의한 일반식(V)의 펩티드 제조방법에 관한 것이다.
P-NH-[X]m-NH2(V)
상기식에서 P는 q가 p+1 이하인 α-아미노산을 포함하는 펩티드 잔기를 나타내고, X, m 및 p는 위에서 정의한 바와 같다.
필요한 경우, 부반응을 방지시키거나 특정 펩티드를 합성하기 위해, 아미노산 축쇄의 작용기들을 적절한 보호 그룹, 통상적으로 Arg(Tos), Arg(Mts), Arg(Mtr), Asp(OBzl), Asp(OBut), Cys(4-MeBzl), Cys(Acm), Cys(SBut), Glu(OBzl), Glu(OBut), His(Tos), His(Fmoc), Hic(Dnp), His(Trt), Lys(Cl-2), Lys(Boc), Met(O), Ser(Bzl), Ser(But), Thr(Bzl) 또는 Thr(But)를 사용하여 추가로 보호시킨다[참조:T. W. Greene, Protective Groups in Organic Syntheses, New York, John Wiley Sons, 1981].
담체물질로서 사용하는 수지들은 시판되고 있다. BHA 및 MBHA 수지들의 바람직하다.
이어서, 일반식(V)의 펩티드를 펩티드 합성시 통상적으로 사용하는 강중산 내지 강산(예:트리플루오로아세트산 및 HF)을 사용하여 처리함으로써 분해시키면, 스페이서(spacer) 내에 함유된 우레탄 보호 그룹이 분해된다.
일반식(I)(여기서, V는 H이다)의 화합물 및 기타 아미노산 유도체를 커플링제로서 펩티드 합성시 사용가능한 모든 활성화제[참조:Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie(Methods of Orgaznic Chemistry), Volume 15/2], 특히 카보디이미드[예: N, N'-디시클로헥실카보디이미드, N, N'-디이소프로필카보디이미드 또는 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드]를 사용할 수 있다. 이러한 커플링 반응은 활성화제 및, 필요한 경우, 라세미화 반응을 억제하는 첨가제[예:1-하이드록시벤조트리아졸(HOBt)][참조:W. K
Figure kpo00005
nig, R. Geiger, Chem. Ber, 102, 708(1970)] 또는 3-하이드록시-4-옥소-3, 4-디하이드록시벤조트리아진(HOOBt)[참조:W. K
Figure kpo00006
nig, R, Geiger, Chem, Ber. 103, 2054(1970)]]과 함께 아미노산 유도체를 수지에 가함으로써 직접적으로 수행할 수 있거나, 또는 아미노산 유도체의 예비활성화를 대칭 무수물 또는 HOBt 또는 HOObt 에스테르를 사용하여 별도로 수행할 수 있으며, 적합한 용매중의 활성화 종의 용액을 커플링시키려는 펩티드 수지에 가하여 수행할 수 있다.
위에서 기술한 활성화제 중의 하나의 활성화제의 존재하의 일반식(I)의 화합물(여기서, V는 H이다)의 및 아미노산 유도체의 커플링 반응 및 활성화 반응은 디메틸포름아미드 또는 메틸렌 클로라이드 또는 이들의 혼합물 중에서 수행할 수 있다. 활성화된 아미노산 유도체는 통상적으로 1.5 내지 4배 과량으로 사용한다. 커플링 반응이 불완전한 경우에는, 서열상 후속 아미노산 커플링 반응에 필요한 펩티드 수지의 α-아미노 그룹의 탈차단화 반응을 미리 수행하지 않고, 커플링 반응을 반복한다.
커플링 반응의 완결 여부는 난하이드린 반응[참조:E. Kaiser 등, Anal. Biochem. 34, 595(1970)을 이용하여 검정할 수 있다.
또한, 합성은, 예를들면, 어플라이드 바이오시스템즈 모델(Applied Biosystems model) 430A 펩티드 합성기를 사용하여 자동적으로 수행할 수도 있으며, 기기 제작업체가 제공한 합성 프로그램 또는 사용자 자신이 고안한 합성 프로그램을 사용할 수 있다. 사용자 자신이 고안한 합성 프로그램은 특히, Fmoc그룹에 의해 보호된 아미노산 유도체를 사용하는 경우에 이용한다.
불화수소 및 트리프루오로아세트산을 사용하여 수지로부터 펩티드 아미드를 분리시키는 경우, 양이온 트랩으로서 페놀, 크레졸, 티오크레졸, 티오아니졸, 아니졸, 에탄디티올, 디메틸 설파이드, 에틸, 메틸 설파이드 또는 이들 보조제들 중의 둘 이상의 혼합물과 같은 물질들을 가하는 것이 통상적이다.
이점에 있어서, 트리플루오로아세트산을 메틸렌 클로라이드와 같은 적합한 용매로 희석시켜 사용할 수도 있다.
다음과 같이 약자를 사용한다:
Fmoc9-플루오레닐메틸옥시카보닐
Ddzα, α-디메틸-3, 5-디메톡시벤질옥시카보닐
Bpoc2-[4-비페닐릴]-2-프로필옥시카보닐
Msc메틸설포닐에틸옥시카보닐
Peoc피리딜에틸옥시카보닐
Pse페닐설포닐에틸옥시카보닐
Tse톨릴설포닐에틸옥시카보닐
HONSuN-하이드록시숙신이미드
HOBt1-하이드록시벤조트리아졸
HOObt3-하이드록시-4-옥소-3, 4-디하이드로벤조트리아진
THF테트라하이드로푸란
DMF디메틸포름아미드
DMAP디메틸아미노피리딘
다음 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것이며, 이로써 본 발명을 제한하려는 것은 아니다.
실시예 1
메틸 4-하이드록시에틸페녹시아세테이트
4-하이드록시메틸페녹시아세트산 18.2g을 N, N-디이소프로필에틸아민 17.1ml와 함께 DMF 50ml에 용해시킨 다음, 요오드화메틸 6.1ml를 교반 용액에 가한다. 이때 혼합물은 약간 따뜻해진다. 반응은 3시간 후에 완결된다. 용매를 진공하에 제거한다. 잔사를 에테르에 용해시키고, 용액을 0.5N 염산으로 1회 추출한다. 이어서, 수선 상을 에테르로 3회 추출시키고, 합한 에테르 상을 중탄산나트륨 수용액으로 세척하여 농축시킨다. 잔사를 에틸 아세테이트에 용해시키고 짧은 실리카 겔 컬럼을 통해 여과시킨다. 농축시킨 후 수득된 담황색 오일은 정치시켜 결정화한다.
NMR 및 질량 스펙트럼은 나타낸 구조에 부합한다.
Figure kpo00007
메틸 4-하이드로시메틸페녹시아세테이트 9.8g을 무수 CH2Cl2200ml에 용해시킨 다음, p-니트로페닐클로로 포르메이트 10.1g 및 트리에틸아민 7ml를 가한다. 전구체가 완전히 반응할때까지 혼합물을 약 6시간 동안 환류하에 비등시킨다. 이어서, 무수 CH2Cl2100ml 중의 Fmoc-NH-(CH2)4-NH2[이 물질은 Boc-NH-(CH2)4-NH2를 Fmoc-ONSu와 반응시킨 후 Boc를 제거하으로써 제조한다]현탁액 15.5g 및 추가로 트리에틸아민 7ml를 가하고, 혼합물을 환류하에 비등시킨다. 반응이 완료된 후, 용매를 진공하에 제거시키고, 잔사를 에테르로 처리한 후 흡인 여과시킨다. 여과기상의 잔사를 1 N Na2CO3수용액으로 세척한 다음 가열수로 세척하고, 건조기 속에서 고진공하에 건조시킨다.
융점은 122 내지 124℃이고, NMR 및 질량 스펙트럼은 제시된 구조에 부합한다.
Figure kpo00008
실시예 2에서와 같이 수득한 에스테르 5.2g을 메탄올 100ml에 현탁시키고, 6당량의 1N NaOH 수용액을 가한다. 반응이 완결된 후, 수성 1N HCl을 사용하여 pH를 3으로 조정하고, 메탄올을 진공하에 제거시킨다. 침전물을 흡인 여과시키고, 소량의 H2O로 세척한 다음, 에테르로 처리하고 다시 흡인여과시킨다.
융점은 196℃(분해)이며, NMR 및 질량 스펙트럼은 제시된 구조에 부합한다.
실시예 4
Figure kpo00009
실시예 3에서와 같이 수득한 생성물 1.5g을 무수 DMF 500ml에 현탁시킨다. 이어서, 후속적으로 과염소산피리디늄(용해도를 증가시키기 위함) 0.9g 및 Fmoc-Phe-OObt 2.6g 및 트리에틸아민 0.5ml를 가한다. 혼합물을 실온에서 교반한다. 반응이 완결된 후 용매를 진공하에 제거시키고, 잔사를 에틸 아세테이트와 H2O 사이에 분배한다. 수성 상을 에틸 아세테이트로 한번 더 추출시키고, 합한 유기상을 건조시키고 농축시킨다. 잔사를 소량의 CHCl3로 처리하고 흡인여과시킨다. 여과기상의 잔사를 소량의 에테르로 세척하고 건조시킨다.
융점은 140℃(분해)이며, NMR 및 질량 스페트럼은 제시된 구조에 부합한다.
실시예 5
Figure kpo00010
(4-메틸벤즈하이드릴아민 수지)
실시예 4에서와 같이 수득한 Fmoc-페닐알라닌 스페이서 산 1.4g을 HOBt 350mg과 함께 무수 DMF 40ml에 용해시키고, 이 용액을 4-메틸밴즈하이드릴 아민 수지(Nova Biochem, 0.4mmol/g 부하) 3.66g에 가한다. 이어서, 디이소프로필 카보디이미드 0.6ml를 가하고, 계속해서 혼합하여 반응을 완결시킨다. 반응이 완료된 후, 생성물을 흡인여과시키고, DMF, 이소프로판올, CH2Cl2및 3급-부틸 메틸 에테르로 세척하고, 고진공하에 건조시킨다. 원소분석(질소 측정)에 따른 부하량은 0.3mmol/g이다.
실시예 6
[des-Tyr24, des-Arg23]-r-아트리오펩틴 III-(4-아미노)부틸 아미드의 합성
Fmoc-아미노산의 OOBt 에스테르를 사용하여 위에서 언급한 수지 1g에서 어플라이드 바이오시스템즈 모델 430A 자동 펩티드 합성기 및 본 발명자에 의해 개조된 합성 프로그램을 사용하여 펩티드 합성을 수행한다.
이를 위하여, 적합한 아미노산 유도체 각각 1mmol을 제조업체가 시판하는 카트리지(cartridge)에 부가하고, Fmoc Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Asn-OH 및 Fmoc-Gln-OH를 HOBt 1.5mmol과 함께 카트리지에 부가한다. 이들 아미노산들을 DMF 4ml에 용해시키고 DMF 중의 디이소프로필 카보디이미드의 0.55M 용액 2ml를 가함으로써 카트리지 내에서 직접 예비활성화시킨다. HOObt 에스테르를 DMF 6ml에 용해시킨 다음, 동일 반응계 내에서 예비활성화시킨, 아미노산 아르기닌, 아스파라진 및 글루타민과 동일한 방법으로, DMF 중의 20% 피페리딘을 사용하여 미리 탈차단시킨 수지 위에 펌핑(pumping)시킨다. 동일 반응계 내에서 활성화시킨 아미노산을 2회 커플링시킨다.
합성이 완료된 후, 펩티드 부틸아미드를 수지로부터 분리시키고, 동시에 양이온 트랩으로서 티오아니졸 및 m-크레졸을 함유하는 트리플루오로아세트산을 사용하여 측쇄 보호 그룹을 분리시킨다. 진공하에 트리플루오로아세트산을 제거시킨 후 수득한 잔사를 에틸 아세테이트로 처리하고 수회에 걸쳐 원심분리시킨다. 나머지 조 펩티드를 트리플루오로메탄올 중의 트리부틸포스핀으로 처리하여 시스테인 보호 그룹을 제거시킨다.
용매를 제거시킨 후, 잔사를 다시 메틸 아세테이트로 처리하고 원심분리시킨다. 환원된 조 펩티드를 즉시 80% 수성 아세트산 중의 요오드로 산화시키고, 과량의 I2를 아스코르브산을 사용하여 제거시키고, 반응 혼합물을 소량이 되도록 농축시킨 다음 염을 세파댁스
Figure kpo00011
(Sephadex) G25에서 1N 수성 아세트산을 사용하여 분리시킨다. 순수한 펩티드를 함유하는 분획을 합하여 동결건조시킨다.
아미노산 분석법에 따르면, 펩티드의 아미노산 조성은 제시된 구조에 부합한다.
실시예 7
펜아실 4-하이드록시메틸페녹시아세테이트
4-하이드록시메틸페녹시아세트산 182g 및 α-브로모 아세토페논 199g을 무수 DMF 600ml에 용해시킨 다음, 0℃에서 트리에틸아민 138ml를 급속히 적가한다. 혼합물을 실온에 도달하도록 하고, 밤새도록 교반한다. DMF 용액을 3.5l의 물 속에 주입시키고, 수성 상을 에틸 아세테이트를 사용하여 추출시킨다. 유기상을 물로 세척하고 황산나트륨을 사용하여 건조시키고 농축시킨다. 생생물은 증발시킴으로써 침전시킨다.
이것을 흡인여과하고 1:1의 에틸 아세테이트/n-헥산으로 세척하고 고진공하에 건조시킨다.
융점은 94 내지 95℃이며 NMR은 제시된 구조에 부합한다.
실시예 8
Figure kpo00012
펜아실 4-하이드록시메틸페녹시아세테이트 30g을 보호기체하에서, THF 및 피리딘의 1:1 혼합물 500ml에 용해시키고 용액은 -20℃로 냉각시킨다. 이어서, THF 100ml에 용해된 p-니트로페닐 클로로포르메이트 21g을 적가한다. 혼합물을 이 온도에서 30분 동안 교반한 후, 0℃로 승온시키고 0℃의 반포화된 NaCl 수용액 1l 속에 교반한 다음, 혼합물을 30분 동안 교반한다. 침전물을 흡인여과시키고, 빙수로 세척하고, 건조시킨 후, n-헥산을 사용하는 연마한다.
융점은 142 내지 145℃이고, NMR은 제시된 구조에 부합한다.
실시예 9
Figure kpo00013
실시예 8에서 제조한 화합물 9.3g, Fmoc-Phe-NH-(CH2)8-NH2트리플루오로아세테이트 12.25g 및 HOObt 3.26g 을 플라스크에 고체 물질로서 주입한 다음, 무수 DMF 100ml 중의 에틸 디이소프로필아민 2.58g의 혼합물을 주입한다. 이어서, 혼합물을 40℃에서 3.5시간 동안 교반한 다음 반포화된 NaCl 수용액 500ml 속에 교반한다. 분리된 침전물을 흡인여과하고, 빙수로 세척하고, 건조시킨 다음, 에테르/에틸 아세테이트를 사용하는 연마한다.
융점은 147 내지 150℃이고, NMR 및 MS는 제시된 구조에 부합한다.
실시예 9와 유사한 방법으로 다음 화합물들(실시예 10 내지 14)을 제조한다.
실시예 10
Figure kpo00014
융점은 144 내지 147℃이고, NMR 및 MS는 제시된 구조에 부합한다.
실시예 11
Figure kpo00015
융점은 179 내지 181℃이고, NMR 및 MS는 제시된 구조에 부합한다.
실시예 12
Figure kpo00016
융점은 144 내지 145℃, NMR 및 MS는 제시된 구조에 부합한다.
실시예 13
Figure kpo00017
융점은 172 내지 175℃이고, NMR은 제시된 구조에 부합한다.
실시예 14
Figure kpo00018
융점은 165 내지 166℃이고, NMR은 제시된 구조에 부합한다.
실시예 15
Figure kpo00019
8.4g을 빙초산 150ml와 디클로로메탄 50ml의 혼합물에 현탁시키고, 1N HCl로 세척하여 미리 활성화시킨 아연 분말 12g 및 무수 에탄올을 분획으로 가한다. 수분 후에, 약간의 발열이 있으면서, 현탁액은 점성이 더욱 높아지고 교반하기 힘들게 된다.
따라서, 추가로 빙초산 80ml 및 디클로로메탄 50ml를 가하고, 밤새도록 교반을 계속한다. 이어서, 혼합물을 빙초산 및 디클로로메탄으로 세척하면 장착된 여과를 통하여 흡인 여과시켜 맑은 층을 생성한다. 여액을 농축시키고 잔사로서 남아있는 오일을 소량의 디클로로메탄에 용해시키고 에틸 아세테이트 및 에테르와 함께 교반한다. 침전된 생성물을 흡인 여과하고 고진공하에 건조시킨다. 융점:160℃ 이상에서 분해; NMR 및 MS는 제시된 구조에 부합한다.
또한, 실시예 16 내지 18의 화합물들은 실시예 15에 기술된 설명한 방법으로 제조한다.
실시예 16
Figure kpo00020
융점:150℃ 이상에서 분해:NMR 및 MS는 제시된 구조에 부합한다.
실시예 17
Figure kpo00021
융점:160℃ 이상에서 분해:NMR 및 MS는 제시된 구조에 부합한다.
실시예 18
Figure kpo00022
융점:154℃ 이상에서 분해:NMR 및 MS는 제시된 구조에 부합한다.
실시예 19
Figure kpo00023
표제 화합물은 실시예 2와 유사한 방법으로 합성한다.
융점:115 내지 118℃ 이고, NMR 및 MS는 제시된 구조에 부합한다.
실시예 20
Figure kpo00024
표제 화합물은 실시예 3에 기술된 방법으로 제조한다.
융점은 184 내지 187℃ 이고, NMR 및 MS는 제시된 구조에 부합한다.
실시예 21
Figure kpo00025
표제 화합물은 실시예 4의 유사한 방법으로 합성한다.
융점:150℃ 이상에서 분해:NMR 및 MS는 제시된 구조에 부합한다.

Claims (6)

  1. 일반식(I)의 화합물.
    Figure kpo00026
    상기식에서, A는 수소이거나, 염기 또는 약산에 불안정한 아미노 보호 그룹을 나타내고, B는 아미노산 잔기를 나타내며, X는 C1내지 C12알킬렌 또는 C6내지 C10-아릴-C1내지 C12-알킬렌을 나타내고, Y1, Y2, Y3및 Y4는 각각 수소이고, V는 수소 또는 카복실 보호 그룹을 나타내고, W는 -[CH2]n- 또는 -O-[CH2]n-을 나타내며, m은 0 또는 1이고, n은 0 내지 6의 정수이며, p는 0 내지 5의 정수이다.
  2. 제1항에 있어서, p가 0, 1 또는 2인 일반식(I)의 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, m이 1인 일반식(I)의 화합물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, X가 -[CH2]q-이고, q가 1 내지 12의 정수인 일반식(I)의 화합물.
  5. (a) 일반식(II)의 화합물을 일반식(III)의 화합물과 반응시키고, 생성된 일반식(I)의 보호된 화합물에 존재할 수 있는 보호 그룹 A, V 또는 A 및 V를 제거함으로써 유리 NH2그룹, CO2H 그룹, 또는 NH2및 CO2H 그룹을 형성시키거나, b) A가 수소이고, B, X, Y1, Y2, Y3, Y4, V, W, m, n 및 p가 제1항에서 정의한 바와 같은 일반식(I)의 화합물을 일반식(IV)의 화합물 또는 이의 활성 에스테르, 할라이드 또는 아지드와 반응시키고, 존재할 수 있는 카복실 보호 그룹 V를 제거하여 카복실 그룹을 형성시킴을 포함하여, 제1항 내지 제4항 중의 어느 한항에 따르는 화합물을 제조하는 방법.
    Figure kpo00027
    A-[B]p-NH--[X]m-NH2(III)
    A-[B]5-p-OH(IV)
    상기식에서, R은 친핵적으로 분리될 수 있는 이탈 그룹이고, V는 카복실 보호 그룹이며, A는 염기 또는 약산에 불안정한 아미노 보호 그룹이고, W, Y1, Y2, Y3, Y4, B, X, p 및 m은 제1항에서 정의한 바와 같고, 단 일반식(IV)에서 A는 수소가 아니다.
  6. A가 수소가 아니고 V가 수소인 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 따르는 일반식(I)의 화합물을 수지에 커플링시키고, 보호 그룹 A를 제거한 다음, 염기 또는 약산에 불안정한 아미노 보호 그룹에 의해 일시적으로 보호된, q-p α-아미노산 또는 이의 활성화 유도체에 단계적으로 커플링시키고, 커플링 반응이 완료된 후, 강중산 내지 강산으로 처리함으로써 일반식(V)의 펩티드를 수지로부터 분리(여기서, 일시적으로 도입된 측쇄 보호 그룹은 동시에 또는 적합한 수단을 사용하여 이후에 다시 제거하다)시킴을 포함하여, 고상 합성법으로 일반식(V)의 펩티드를 제조하는 방법.
    P-NH-[X]m-NH2(V)
    상기식에서, P q≤p+1 α-아미노산을 함유하는 펩티드 잔기를 나타내고, X, m 및 p는 제1항에서 정의한 바와 같다.
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