DK175126B1 - Peptid-aminoalkylamider, deres fremstilling og anvendelse til fremstilling af peptid-hydrazider - Google Patents
Peptid-aminoalkylamider, deres fremstilling og anvendelse til fremstilling af peptid-hydrazider Download PDFInfo
- Publication number
- DK175126B1 DK175126B1 DK198705482A DK548287A DK175126B1 DK 175126 B1 DK175126 B1 DK 175126B1 DK 198705482 A DK198705482 A DK 198705482A DK 548287 A DK548287 A DK 548287A DK 175126 B1 DK175126 B1 DK 175126B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- formula
- compound
- hydrogen
- peptide
- labile
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/58—Atrial natriuretic factor complex; Atriopeptin; Atrial natriuretic peptide [ANP]; Cardionatrin; Cardiodilatin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
- C07K1/042—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers characterised by the nature of the carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
Description
i DK 175126 B1
Opfindelsen angår hidtil ukendte peptid-aminoalkylamider, deres fremstilling og anvendelse til fremstilling af peptid-hydrazider.
Indforingen af et aminoalkylamid i C-terminalenden 5 af et biologisk aktivt peptid har i nogle tilfælde virket positivt på den metaboliske stabilitet og aktiviteten. Ved , fremstillingen af de således modificerede peptider har man anvendt den klassiske fragmentkobling i oplosning, jfr. EP--A-179.332.
10 Ved fastfasesyntesen af peptider (jfr. Patchornik,
Cohen i Perspectives in Peptide Chemistry, side 118-128 (Karger, Basel 1981)) podes de reaktive - kæder ofte ikke direkte på kunststofharpikslegemet, men de forbindes med bærematerialet ved hjælp af såkaldte spacere eller bindeled.
15 Fra litteraturen (f. eks. Atherton, Sheppard i Peptide Chemistry, side 101-117 (Karger, Basel 1981) kendes f.eks. sådanne spacere (såkaldte "linkage agents"), der har formlerne VI, VII og VIII.
20 H0CH2-f>CH2 - CH2 - C02H HOCH^^Q- 0CH2-C02H C02H
(VI) (VII) (VIII) 1 I Chemical Abstracts 2JJ, 126602q beskrives der syrela bile spacere med formlen
CH20H
\ (r = H' 0CH3) (Vila) OCH2COOH .
Ved hjælp af disse spacere kan der i fastfasen direkte kun syntetiseres peptider, som C-terminalt udviser en fri car- 35 boxylsyregruppe. Efter fraspaltning af peptidet foreligger spaceren uændret, dvs. at der ikke har fundet nogen spacer- DK 175126 B1 2 fragmentoverførsel sted.
C-terminalt med aminoalkylamid eller hydrazid modificerede peptider er ved hjælp af de i Chemical Abstracts 98.
126602q beskrevne spacere under anvendelse af fast fasemetoden 5 ikke direkte tilgængelige, men kun gennem en kombineret flertrinsproces, idet der skal tilkobles en diaminoalkylgruppe til det i fastfasen fremstillede peptid i opløsning.
Formålet med opfindelsen er at tilvejebringe spacere, der gør det muligt direkte ved fastfasesyntese at fremstille 10 C-terminalt med aminoalkylamid eller hydrazid modificerede peptider. Dette formål opnås med forbindelserne med formlen I.
Den foreliggende opfindelse angår således forbindelser med formlen I 15 yi v2
(I) A-[B]p-NH-[X]m-NH.C0-0-CH2 W-C02-V
Y3 y4 20 i hvilken A betyder hydrogen eller en baselabil eller en over for svage syrer labil aminobeskyttelsesgruppe, B betyder ens eliler forskellige rester af aminosyrer, X betyder C!_12-alkylen eller Cg^Q-aryl-Ci-C^-alkylen, 25 Y3, Y2, Y3 og Y4 er ens eller forskellige og betyder hydro gen, methyl, methoxy eller nitro, hvor mindst ét af disse symboler betyder hydrogen, V betyder hydrogen eller en carboxylbeskyttelsesgruppe, W betyder -[CH2]n- eller -0-ICH2]n-, 30 m betyder 0 eller 1, r n betyder et helt tal fra o til 6, og p betyder et helt tal fra 0 til 5.
Der foretrækkes sådanne forbindelser med formlen I, hvor p = 0, 1 eller 2, især 0, og/eller hvor m = 1.
35 X er fortrinsvis -[CH2]q-, hvor q er 1-12, fortrinsvis 1-8.
DK 175126 B1 3
Fortrinsvis mindst 2, især mindst 3 af symbolerne Y1, Y2, Y3 og Y4 betyder hydrogen.
Baselabile eller over for svage syrer labile beskyttelsesgrupper er især urethanbeskyttelsesgrupper, såsom Rnoc, 5 Ddz, Bpoc, Msc, Peoc, Pse og Tse, fortrinsvis Fmoc (jfr. Hubbuch, Kontakte (Merck) 1979. nr. 3, side 14-23).
B betyder en rest af en aminosyre, fortrinsvis en α-aminosyre, der, såfremt den er chiral, kan forekomme i D-eller L-formen. Foretrukne er rester af naturligt forekom-10 mende aminosyrer, enantiomerene heraf, homologe, derivater og enkle metabolitter (jfr. f.eks. Wunsch et al., Houben--Weyl 15/1 og 2, Stuttgart, Thieme 1974). I betragtning kommer eksempelvis således:
Aad, Abu, -rAbu, ABz, 2ABz, eAca, Ach, Acp, Adpd, Ahb, Aib, 15 /9Aib, Ala, ØAla, ÅAla, Alg, All, Ama, Amt, Ape, Apm, Apr,
Arg, Asn, Asp, Asu, Aze, Azi, Bai, Bph, Can, Cit, Cys, Cyta,
Daad, Dab, Dadd, Dap, Dapm, Dasu, Djen, Dpa, Dtc, Fel, Gin,
Glu, Gly, Guv, hCys, His, hSer, Hyl, Hyp, 3Hyp, Ile, Ise,
Iva, Kyn, Lånt, Len, Leu, Lsg, Lys, /?Lys, ALys, Met, Mim, 20 Min, nArg, Nle, Nva, Oly, Orn, Pan, Pec, Pen, Phe, Phg,
Pic, Pro, APro, Pse, Pya, Pyr, Pza, Qin, Ros, Sar, Sec,
Sem, Ser, Thi, 0Thi, Thr, Thy, Thx, Tia, Tie, Tly, Trp,
Trta, Tyr, Val samt resterne af de tilsvarende enatiomere D-aminosyrer.
25 Funktionelle grupper i sidekæderne af de nævnte amino- syrerester kan være beskyttede. Egnede beskyttelsesgrupper er beskrevet af Hubbuch, Kontakte (Merck) 1979. nr. 3, side 14-23 og af Bullesbach, Kontakte (Merck) 1980. nr. 1, side 23-35. Foretrukne er sådanne grupper, der er stabile over for 30 baser og svage syrer, og som kan fraspaltes ved hjælp af stærke syrer.
Alkylen kan være ligekædet eller forgrenet. Ved Cg_ _10-aryl forstås f.eks. phenyl, tolyl eller naphthyl, fortrinsvis phenyl.
35 En carboxylbeskyttelsesgruppe V er f.eks. C^.g-alkyl eller Cy.n-aralkyl, idet methyl, ethyl, tert.butyl, benzyl 4 vi\ i f w i v i og modificeret benzyl, såsom p-chlor-, p-brom-, p-nitro- og p-methoxybenzyl samt det N-analoge picolyl foretrækkes. I videre forstand forstås ved sådanne beskyttelsesgrupper aktiverede estergrupper, såsom ONSu, OBt, OObt eller p-nitro-5 phenoxy.
Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne med den almene formel I, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at
a) en forbindelse med formlen II
10 ylv2 R-C0-0-CH2^_3-W-C02-V (II) γ3 Y* 15 i hvilken R betyder en nucleophil fraspaltelig gruppe, som kan fjernes,
V betyder en carboxylbeskyttelsesgruppe, og 20 W, Y1, Y2, Y3 og Y4 er som defineret i krav l, omsættes med en forbindelse med formlen III
A-[B]p-NH-[X]η”ΝΗ2 (III), 25 i hvilken A betyder en baselabil eller en over for svage syrer labil aminobeskyttelsesgruppe, og B, X, p og m er defineret som i krav l, og i den fremkomne beskyttede forbindelse med formlen I fraspaltes eventuelt én eller begge beskyttelsesgrupperne A og/eller V under dannelse af de(n) 30 fri(e) ΝΗ2- og/eller C02H-gruppe(r), idet de fremgangsmåder foretrækkes, ved hvilke V selektivt fraspaltes, f.eks. ved reduktiv spaltning med Zn/iseddikesyre, eller b) en forbindelse med formlen I, i hvilken A betyder hydrogen, og B, X, Y1, Y2, Y3, Y4, V, W, m, n og p er defineret
35 som i krav 1, omsættes med en forbindelse med formlen IV
A[B)5.p-OH (IV) DK 175126 B1 5 i hvilken A, B og p er defineret som ovenfor, idet A dog ikke betyder hydrogen, eller dens aktivester, halogenid eller azid, og, såfremt V ikke er hydrogen, fraspaltes eventuelt en carboxylbeskyttelsesgruppe V under dannelse af 5 carboxylgruppen.
En nucleophil fraspaltelig gruppe R, der kan fjernes, er f.eks. halogen, såsom chlor, brom og iod, eller aktiveret aryloxy, såsom p-nitrophenoxy.
Omsætningen af en forbindelse med formlen II med en 10 forbindelse med formlen III udføres fortrinsvis i et aprotisk opløsningsmiddel, såsom THF, DMF, CHC13 eller CH2CI2, fortrinsvis i nærværelse af en base, såsom en tertiær amin, f.eks. ethyltriisopropylamin, triethylamin eller pyridin, idet der opnås en fordel ved tilsætning af en acyleringska-15 talysator, såsom DMAP, HOObt eller HOBt, ved en temperatur mellem 0*C og reaktionsblandingens kogepunkt, fortrinsvis mellem 0*C og 40*C.
Forbindelser med den almene formel I (A = H) omsættes med forbindelser med formlen IV, eller aktivestere, halo-20 genider eller azider heraf, fortrinsvis i et organisk opløsningsmiddel, såsom DMF, fordelagtigt i nærværelse af en base, såsom en tertiær amin, ved en temperatur mellem -10eC og reaktionsblandingens kogepunkt, fortrinsvis ved stuetemperatur. Egnede aktivestere er f.eks. ONSu-, OBt-, OObt- og 25 p-nitrophenoxy-forbindelserne.
Foretrukne halogenderivater er chloriderne. Til forbedring af opløseligheden kan der tilsættes pyridiniumper-chlorat.
Forbindelser med formlen II fremstilles eksempelvis 30 ved, at en ester med formlen IX
γΐ Y2
ho- ch2-v~\y W- C02- V
γ3 γ4 35 ix (IX)
Lm 1/9UODI
6 i hvilken Y1, Y2, Y3, Y4, W og V er defineret son ovenfor, men V dog ikke betyder hydrogen, omsættes med phosgen eller phosgenderivater, såsom chlormyresyrenitrophenylester, i et aprotisk polært opløsningsmiddel, f.eks. THF eller DMF, i 5 blanding med en tertiær base, såsom en tertiær amin, f.eks. pyridin, fortrinsvis i forholdet 1:1, ved en temperatur mellem -40*C og stuetemperatur, fortrinsvis mellem -20’C og 0*C.
Opfindelsen angår endvidere anvendelsen af en forbin-10 delse med formlen I, i hvilken V betyder hydrogen, og A ikke betyder hydrogen, ved fastfasesyntesen af forbindelser med formlen V
P-NH-[X]m-NH2 (V) 15 i hvilken P betyder en peptidrest q < p+1 α-aminosyrer, og X, m og p er som ovenfor defineret, samt en fremgangsmåde til fremstilling af et peptid med formlen V, i hvilken P, X, m og p er som ovenfor defineret, ved fastfasesyntese, 20 hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at en forbindelse med den almene formel I, i hvilken A ikke betyder hydrogen, og V betyder hydrogen, kobles til en harpiks, hvorefter beskyttelsesgruppen A fraspaltes, og trinvis q-p sammenkobles ved hjælp af baselabile eller over for svage 25 syrer labile aminobeskyttelsesgrupper midlertidigt beskyttede α-aminosyrer, eventuelt i form af deres aktiverede derivater, og efter afsluttet opbygning af peptidet med formlen V frigøres det fra harpiksen ved behandling med en middel stærk til stærk syre, idet midlertidigt indførte sidekædebeskyttel-30 sesgrupper derefter igen fraspaltes samtidigt eller ved egnede foranstaltninger.
Om nødvendigt til hindring af sidereaktioner eller til syntesen af specielle peptider er de funktionelle grupper i aminosyrernes sidekæder yderligere beskyttet med egnede 35 beskyttelsesgrupper (jfr. f.eks. T.W. Greene, «Protective Groups in Organic Syntheses", New York, John Wiley & Sons, DK 175126 B1 7 19Bl), idet der ferst og fremmest anvendes Arg(Tos), Arg-(Mts), Arg(Mtr), Asp(OBzl), Asp(OBut), Cys(4-MeBzl), Cys-(Acm), Cys(SBut), Glu(OBzl), Glu(OBut), His(Tos), His(Fmoc), His(Dnp), His(Trt), Lys(Cl-2), Lys(Boc), Met(O), Ser(Bzl), 5 Ser(But), Thr(Bzl), Thr(But).
De som bæremateriale anvendte harpikser kan fås kommercielt. BHA- og MBHA-harpikser foretrækkes.
Fraspaltningen af peptidet med formlen V udføres herefter ved behandling med i peptidsyntesen almindeligt 10 anvendte middelstærke til stærke syrer (f.eks. trifluored-dikesyre eller HF), hvorved den i spaceren indeholdte ure-thanbeskyttelsesgruppe spaltes.
Som koblingsreagens til forbindelsen med formlen I (V = H) og til de yderligere aminosyrederivater kan der 15 anvendes alle mulige i peptidsyntesen anvendte aktiverings--reagenser, jfr. Houben-Weyl, Methoden der Organischen Che-mie, bind 15/2, dog især carbodiimider, såsom Ν,Ν'-dicyclo-hexylcarbodiimid, Ν,Ν'-diisopropylcarbodiimid eller N-ethyl--N'-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid. Koblingen kan derved 20 gennemføres direkte ved tilsætning af et aminosyrederivat med aktiveringsreagenset og eventuelt et tilsætningsstof, der undertrykker racemisering, såsom 1-hydroxybenzotriazol (HOBt) (W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber. 103 r 708 (1970)) eller 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydrobenzotriazin. (HOObt) (W.
25 Konig, R. Geiger, Chem. Ber. 103. 2054 (1970)), til harpiksen, eller også kan foraktiveringen af aminosyrederivatet udføres separat som et symmetrisk anhydrid eller en HOBt-eller HOObt-ester, og opløsningen af de aktiverede materialer i et egnet opløsningsmiddel sættes til en koblingsdyg-30 tig peptidharpiks.
Koblingen eller aktiveringen af forbindelsen med formlen 1 (V = H) og af aminosyrederivaterne med et af de ovenfor nævnte aktiveringsreagenser kan gennemføres i dimethyl formamid eller methylenchlorid eller en blanding af 35 begge. Det aktiverede aminosyrederivat anvendes i almindelighed i et overskud på 1,5 til 4 gange, såfremt der ind- DK 175126 B1 8 trader en ufuldstændig kobling, gentages koblingsreaktionen uden forst at gennemføre den for koblingen af den derefter følgende aminosyre nødvendige afblokering af peptidharpiksens α-aroinogruppe.
5 Det vellykkede forløb af koblingsreaktionen kan kon trolleres ved hjælp af ninhydrin-reaktionen, som beskrevet af E. Kaiser et al., Anal. Biochem 2±, 595 (1970). Syntesen kan også gennemføres automatisk, f.eks. med et peptidsyn-teseapparat, model 430Ά, Fa. Applied Biosystems, idet der 10 enten kan anvendes de fra apparatfremstilleren fastlagte synteseprogrammer eller også benyttes selvfremstillede programmer. Sidstnævnte anvendes især ved anvendelse af amino-syrederivater, der er beskyttede med Fmoc-gruppen.
Ved fraspaltningen af peptidamiderne fra harpiksen 15 ved hjælp af hydrogenfluorid og trifluoreddikesyre tilsættes som kationopfangere i almindelighed stoffer, såsom phenol, cresol, thiocresol, thioanisol, anisol, ethandithiol, dimethyl sulfid, ethylmethylsulfid eller en blanding af to eller flere af disse hjælpestoffer. Her kan trifluoreddikesyre også 20 anvendes fortyndet med et egnet opløsningsmiddel, såsom methylenchlorid.
Anvendte forkortelser:
Fmoc 9-fluorenylmethyloxycarbonyl
Ddz α,a-dimethyl-3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl 25 Bpoc 2-[biphenylyl-(4)]-propyl-(2)-oxycarbonyl
Msc methy1sulfonylethyloxycarbonyl
Peoc pyridyl-ethyloxycarbonyl
Pse phenylsulfony1-ethyloxycarbonyl
Tse tolylsulfonyl-ethyloxycarbonyl 30 HONSu N-hydroxy-succinimid HOBt 1-hydroxybenzotriazol HOObt 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydrobenzotriazin THF tetrahydrofuran DMF dimethylformamid 35 DMAP dimethylaminopyridin DK 175126 B1 9
De felgende eksempler tjener til illustration af den foreliggende opfindelse.
Eksempel 1: 5 4-HvdroxvmethvlPhenoxveddikesvremethvlester.
18,2 g 4-hydroxymethylphenoxyeddikesyre opløses sammen med 17,1 ml Ν,Ν-diisopropylethylamin i 50 ml DMF, og til den omrørte opløsning sættes 6,1 ml methyliodid. Herved opvarmes blandingen svagt. Efter 3 timer er reaktionen af-10 sluttet. Opløsningsmidlet fjernes. Remanensen optages i ether, og der ekstraheres én gang med 0,5 N saltsyre. Den vandige fase ekstraheres endnu tre gange med ether, hvorefter de samlede etherfaser vaskes med en vandig natrium-hydrogencarbonat-opløsning, og der koncentreres. Remanensen 15 opløses i ethylacetat, og der filtreres over en kort søjle med kiselgel. Den efter koncentrering fremkomne svagt gullige olie krystalliserer ved henstand.
NMR og massespektroskopi stemmer overens med den angivne struktur.
20
Eksempel 2:
Fmoc-NH- (CH2)4-NH-CO-O-CH2 O-CH2-COOCH3.
25 9,8 g 4-hydroxymethylphenoxyeddikesyremethylester opløses i 200 ml tørret CH2CI2, hvorefter der hertil sættes 10,1 g chlormyresyre-p-nitrophenylester og 7 ml triethylamin. Blandingen koges under tilbagesvaling i ca. 6 timer, til 30 adduktet er fuldstændigt omsat. Herefter sættes hertil en suspension af 15,5 Fmoc-NH-(CH2)4-NH2 (fremstillet ved omsætning Boc-NH-(CH2)4-NH2 med Fmoc-ONSu, og derefter fraspaltes Boc) i 100 ml tørret CH2Cl2 samt yderligere 7 ml triethylamin, og blandingen koges under tilbagesvaling. Efter afslut-35 tet reaktion fjernes opløsningsmidlet, og remanensen dige-reres med ether, hvorefter der frafiltreres ved sugning.
DK 175126 B1 10
Filterremanensen vaskes med en vandig 1 N Na2C03-opløsning og herefter med varmt vand, hvorefter der tørres under høj-vakuum i en eksikator.
Smp.: 122-124 ’C, NMR og massespektrum stemmer overens 5 med den angivne struktur.
Eksempel 3: H2N- ( CH2 ) 4-NH- CO- 0- CH2 °~ *3*2· C00H· 10 5,2 g af den ifølge eksempel 2 fremkomne ester suspenderes i 100 ml ethanol, og hertil sættes 6 ækvivalenter af en vandig 1 N NaOH-opløsning. Efter afsluttet reaktion 15 indstilles pH på 3 med en vandig 1 N HC1, og methanolen fjernes. Udfældningen frafiltreres ved sugning, og der vaskes med lidt Η20, hvorefter der digereres i ether, og der frafiltreres på ny ved sugning.
Smp.: fra 196*C (sønderdeling), NMR og massespektrum 20 er i overensstemmelse med den angivne struktur.
Eksempel 4:
Fmoc-Phe-NH- (CH2 ) 4-NH- CO- O- CH2 V O- CH2-COOH.
25 \=J
\ 1,5 g af det ifølge eksempel 3 fremkomne produkt suspenderes i 50 ml tørret DMF. Hertil sættes herefter efter hinanden 0,9 g pyridiniumperchlorat (til forbedring af op-30 løseligheden), 2,6 g Fmoc-Phe-OObt og 0,5 ml triethylamin. Blandingen omrøres ved stuetemperatur. Efter afsluttet reaktion fjernes opløsningsmidlet, og remanensen fordeles mellem ethylacetat og H20. Vandfasen ekstraheres én gang til med ethylacetat, og de samlede organiske faser tørres og kon-35 centreres. Remanensen digereres med lidt CHCI3, og der frafiltreres ved sugning. Filterremanensen eftervaskes med lidt DK 175126 B1 11 ether, og der tørres.
Snip.: fra 140'C (sønderdeling), NMR og massespektro-skopi er i overensstemmelse med den angivne struktur.
5 Eksempel 5:
Fmoc-Phe-NH- (CH2) 4-NH- CO- O- CH2 -/ V 0-CH2-C0- (4-methylbenzhydrylaminharpiks) .
10 1,4 g af den ifølge eksempel 4 fremkomne Fmoc-phenyl- alaninspacersyre opløses sammen med 350 mg HOBt i 40 ml tør DMF, og blandingen sættes til 3,66 g 4-methylbenzhydrylamin-harpiks (Nova Biochem, belastning 0,4 mmol pr. g). Derefter sættes hertil 0,6 ml diisopropylcarbodiimid, og man lader 15 reaktionen løbe til ende under en vedvarende blanding. Efter afsluttet reaktion frafiltreres der ved sugning, og der eftervaskes med DMF, isopropanol, CH2CI2 og tert.butylmethyl-ether, hvorefter der tørres under højvakuum. Belastning ifølge elementaranalyse (N-bestemmelse): 0,3 mmol pr. g.
20
Eksempel 6:
Syntese af rdes-Tvr^.. des-Ara^ll-r-atriopeptin-III-M-ami-nolbutvlamid. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Peptidsyntesen udføres på 1 g af den ovenfor nævnte 2 harpiks under anvendelse af Fmoc-aminosyre-oOBt-estere ved 3 hjælp af et automatisk peptidsynteseapparat model 430A, fra 4
Fa. Applied Biosystems og selvmodificerede synteseprogrammer.
5
Hertil afvej es hver gang l mmol af det tilsvarende 6 aminosyrederivat i den af fremstilleren leverede patron, 7
Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Asn-OH og Fmoc-Gln-OH afvejes sammen 8 med 1,5 mmol HOBt i patronen. Forakt iver ingen af disse amino 9
syrer udføres direkte i patronen ved opløsning i 4 ml DMF
10 og ved tilsætning af 2 ml af en 0,55 M opløsning af diisopro- 11 pylcarbodiimid i DMF. HOObt-esteren opløses i 6 ml DMF, og herefter pumpes den ligeledes som de in situ foraktiverede DK 175126 B1 12 aminosyrer arginin, asparagin og glutamin på den forud med 2 Ot piper idin i DMF af blokkede harpiks. De in situ aktiverede aminosyrer kobles dobbelt.
Efter afsluttet syntese spaltes peptid-butylamidet 5 fra harpiksen under samtidig fjernelse af sidekcdebeskyttel-sesgrupperne med trifluoreddikesyre, thioanisol og m-cresol som kationopfangere. Den efter fjernelse af trifluoreddikesyren fremkomne remanens digereres flere gange med ethylace-tat, og der centrifugeres. Det resterende rå peptid behandles 10 til fjernelse af cysteinbeskyttelsesgruppen med tributyl-phosphin i trifluorethanol. Efter fjernelse af opløsningsmidlet digereres endnu engang med ethy1acetat, og der centrifugeres. Det reducerede rå peptid oxideres straks herefter med iod i en 80%·s vandig eddikesyreopløsning, og l2~over-15 skuddet fjernes med ascorbinsyre, og reaktionsblandingen afsaltes efter koncentrering til et lille volumen på ®Sepha-dex G25 med vandig 1 N eddikesyre. De fraktioner, der indeholder det rene peptid, koncentreres, og der frysetørres.
Peptidet svarer ifølge aminosyreanalyse til aminosyre-20 sammensætningen af den angivne formel.
Eksempel 7: 4-Hvdroxvmethvlpheoxveddikesvrephenacvlester. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 182 g 4-hydroxymethylphenoxyeddikesyre og 199 g a- 2 bromacetophenon opløses i 600 ml tørret DMF, og hertil dryp 3 pes herefter hurtigt ved 0*C 138 ml triethylamin. Det til 4 lades at opvarme til stuetemperatur, og der omrøres natten 5 over. DMF-opløsningen hældes i 3,5 liter vand, og den vandige 6 fase ekstraheres med ethylacetat. Den organiske fase vaskes 7 med vand, hvorefter der tørres over natriumsulfat, og der 8 koncentreres. Ved inddampning udfælder produktet. Det frafil- 9 treres ved sugning hvorefter der vaskes med ethylacetat/n- 10 -hexan 1:1, og der tørres under højvakuum.
11
Smp.: 94-95*0, NMR stemmer overens med den angivne struktur.
DK 175126 B1
Eksempel 8; 13
°2K ~C3" °~C0~ °~°- CH2-C02-CH2-orO
5 30 g 4-hydroxymethylphenoxyeddikesyrephenacy lester opløses under beskyttelsesgas i 500 ml af en blanding af THF/pyridin 1:1, og der afkøles til -20*C. Herefter dryppes hertil 21 g chlormyresyre-p-nitrophenylester opløst i 100 10 ml THF. Efter 30 minutters omrøring ved denne temperatur opvarmes der til 0*C, og blandingen røres i 1 liter af en halvmættet vandig NaCl-opløsning på 0*C, og der efteromrøres i 30 minutter. Udfældningen frafiltreres ved sugning, og der vaskes med isvand, og efter tørring udrives der med n-15 -hexan.
Smp.: 142-145‘C, NMR stemmer overens med den angivne struktur.
Eksempel 9: 20
Fmoc-Phe-NH- {CH2)8**®'CO-O-CH2 O-CH2-C02-CH2-CO-(? 9,3 g af den i eksempel 8 fremstillede forbindelse, 25 12,25 g Fmoc-Phe-NH-(CH2)g-NH2“trifluoracetat og 3,26 g HOObt sættes som fast materiale til en kolbe, og herefter overhældes der med en blanding af 2,58 g ethyl di isopropylamin i 100 ml tørret DMF. Blandingen omrøres derefter i endnu 3,5 timer ved 40*C, hvorefter den røres i 500 ml af en halv-30 mættet vandig NaCl-opløsning. Den udfældende udfældning frafiltreres ved sugning, og der vaskes med isvand, og efter tørringen udrives der med ether/ethylacetat.
Smp.: 147-150*C, NMR og MS stemmer overens med den angivne formel.
35 Følgende forbindelser (eksemplerne 10-14) fremstilles analogt med eksempel 9: LM\ 1 /9120 Dl 14
Eksempel io;
Fmoc-Phe-NH- (CH2)4-NH-C0-0-CH2 0-CH2-C02-CH2-C0-^~“^ 5
Smp.: 144-147*0, HMR og MS svarer til den angivne formel.
Eksempel 11; 10 Fmoc-Ala-NH- (CH2) 8-NH-CO-O-CH2 0- CH2-CO2-CH2- CO^"^) ^
Smp.: 179-181*0, NMR og MS svarer til den angivne formel.
15 Eksempel 12:
Fmoc-NH- (CH2) 8-NH-CO-O-CH2 0-CH2~C02-CH2-C0-^ ^ t 20 Smp.: 144-145*0, NMR og MS svarer til den angivne formel. Eksempel 13:
Fmoc- NH- ( CH2) 5- NH- CO- O- CHZ 0-CH2-C02-ra2-C0-^^)
Smp.: 172-175*0, NMR svarer til den angivne formel.
Eksempel 14: 30
Fmoc-NH- (CH2)4-NH-C0-0-CH2 0-CT2-C02-CH2-C0~(^>
Smp.: 165-166*0, nmr svarer til den angivne formel.
Eksempel 15; DK 175126 B1 15
Fmoc-Phe-NH- (CH2)8-NH-C0-0-CH2 0-CH2-C02H.
5
8,4 g Fmoc-Phe-NH-(CH2)8-NH-CO-0-CH2-^^-0-CH2-C02-CH2-CO
0 10 suspenderes i en blanding af 150 ml iseddikesyre og 50 ml dichlormethan, og hertil sættes portionsvis 12 g zinkpulver, der forud er aktiveret ved vask med 1 N HC1 og tørret ethanol. Efter få minutter bliver suspensionen under svag varme-toning tykkkere og vanskelig at omrøre. Derfor sættes der 15 hertil yderligere 80 ml iseddikesyre og 50 ml dichlormethan, og der omrøres yderligere natten over. Herefter frafiltreres der ved sugning over et klarlagsfilter, og der eftervaskes med iseddikesyre og dichlormethan. Filtratet koncentreres, og den som remanens resterende olie optages i lidt dichlor-20 methan, og der røres sammen med ethylacetat og ether. Det udfældende produkt frafiltreres ved sugning, og det tørres under højvakuum.
Smp.: fra 160*C, sønderdeling, NMR og MS svarer til den angivne formel.
25 Efter den i eksempel 15 beskrevne metode fremstilles også forbindelserne i eksemplerne 16 til 18:
Eksempel 16: 30 Fmoc-Phe-NH-(CH2)4-KH-CO-O-CH2-^J^-O-CH2-CQ2H.
Smp.: fra 150*C, sønderdeling, NMR og MS svarer til den angivne formel.
35
fc/l\ I I V IfaV V I
16
Eksempel 17i
Fmoc-Phe-NH- (CH2 >8-NH-CO-O-CH2-^^)-0-CH2-C02H 5
Smp.: fra 160‘C, sønderdeling, NMR og MS svarer til den angivne formel.
Eksempel 18! 10
Fmoc-NH- (CH2) 8-NH- CO- 0- CH2- C02H.
Smp.: fra 154*C, sønderdeling, NMR og MS svarer til 15 den angivne formel.
Eksempel 19:
Fmoc-NH- (CH2)6-NH-C0-0-CH2-/ Vo-CH2-C02CH3.
20
Syntesen sker analogt med eksempel 2.
Smp.: 115-118*C, NMR og MS svarer til den angivne formel.
25
Eksempel 20: NH2- (CH2) 6-NH-CO-O-CH2-^3~°~CH2-C02H.
30 fremstilles efter den i eksempel 3 beskrevne fremgangsmåde.
Smp.: 184-187*C, sønderdeling, NMR og MS svarer til den angivne formel.
35
Eksempel 21: 17 DK 175126 B1
Frr.oc- Phe- NH- (CH2) 6- NH- CO- O- CH2-^~^-0- CH2- C02H.
5
Syntesen sker analogt med eksempel 4.
Smp.: fra 120*C, sønderdeling, NMR og MS svarer til den angivne formel.
Claims (8)
1. Forbindelse, kendetegnet ved, at den har den almene formel 5 yV_X2 (I) A- [B]p-NH- [X]m-NH-C0-0-CH2 W-C02-V Y3 γ4 10 i hvilken A betyder hydrogen eller en baselabil eller over for svage syrer labil aminobeskyttelsesgruppe, B betyder ens eller forskellige rester af aminosyrer, 15. betyder Ci_22-alkylen eller Cg_iø-aryl-Ci_i2-alkylen, Y1, Y2, Y3 og Y4 er ens eller forskellige og betyder hydrogen, methyl, methoxy eller nitro, idet mindst ét af disse symboler betyder hydrogen, V betyder hydrogen eller en carboxylbeskyttelsesgruppe, 20. betyder ”[CH2}n- eller -0-[CH2]n-, m betyder 0 eller 1, n betyder et helt tal fra 0 til 6, og p betyder et helt tal fra 0 til 5.
2. Forbindelse med den almene formel 1 ifølge krav 25 1, kendetegnet ved, at p - o, 1 eller 2.
3. Forbindelse med formlen I ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at m * 1.
4. Forbindelse med den almene formel I ifølge et af kravene 1-3, kendetegnet ved, at X betyder 30 -[CH2 Jq-, og g betyder et helt tal fra 1 til 12.
5. Forbindelse med formlen I ifølge et af kravene l--4, kendetegnet ved, at mindst to af symbolerne Y1, Y2, Y3 og Y4 betyder hydrogen.
6. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse 35 ifølge et af kravene 1-5, kendetegnet ved, at a) en forbindelse med formlen II DK 175126 B1 γΐ γ2 R- CO- O- CH2^W- C02- V (11 > 5 γ3γ4 i i hvilken R betyder en nucleophil fraspaltelig gruppe, der kan fjernes, V betyder en carboxylbeskyttelsesgruppe, og 10 w, Y1, Y2, Y3 og Y4 er defineret i krav 1, omsættes med en forbindelse med formlen III A-CBJp-NH-IXDm-NHs (III), 15. hvilken A betyder en baselabil eller en over for svage syrer labil aminobeskyttelsesgruppe, og B, X, p og m er defineret som i krav 1, og i den fremkomne beskyttede forbindelse med formlen I fraspaltes eventuelt én eller begge beskyttelsesgrupperne A og/eller V under dannelse af de/den 20 frie NH2-og/eller C02H-gruppe(r), eller b) en forbindelse med formlen I, i hvilken A betyder hydrogen, og B, X, Y1, Y2, Y3, Y4, V, W, m, n og p er defineret som i krav l, omsættes med en forbindelse med formlen IV
25 A[B)5_p-OH (IV) hvilken A, B og p er som ovenfor defineret, idet A dog 2 ikke betyder hydrogen, eller dens aktivester, halogenid eller azid, og, såfremt V ikke er hydrogen, fraspaltes even-30 tuelt en carboxylbeskyttelsesgruppe V under dannelse af carboxylgruppen. 3
7. Anvendelse af en forbindelse med formlen I ifølge et af kravene 1-5, i hvilken V betyder hydrogen og A ikke betyder hydrogen, ved fastfasesyntesen af forbindelser med 35 formlen V 4 P-NH-[X]m-NH2 (V) Ul\ Ί /0120 bl i hvilken P betyder en peptidrest af g S p+1 o-aminosyrer, og X, n og p er defineret som i krav 1.
8. Fremgangsmåde til fremstilling af et peptid med formlen V, i hvilken P, X, m og p er defineret som i krav 5 7, ved hjælp af en fastfasesyntese, kendetegnet ved, at en forbindelse med formlen I ifølge et af kravene 1-5, i hvilken A ikke betyder hydrogen, og V betyder hydro- « gen, kobles til en harpiks, beskyttelsesgruppen A fraspaltes, trinvis g-p påkobles ved hjælp af baselabile eller over for 10 svagt syrelabile aminobeskyttelsesgrupper midlertidigt beskyttede o-aminosyrer, eventuelt i form af deres aktiverede derivater, og efter endt opbygning frigøres peptidet med formlen V ved behandling med en middelstærk til stærk syre fra harpiksen, idet midlertidigt indførte sidekædebeskyt-15 telsesgrupper derefter igen fraspaltes samtidigt eller ved hjælp af egnede foranstaltninger.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3635670 | 1986-10-21 | ||
| DE19863635670 DE3635670A1 (de) | 1986-10-21 | 1986-10-21 | Synthese von peptid-aminoalkylamiden und peptidhydraziden mittels festphasenmethode |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK548287D0 DK548287D0 (da) | 1987-10-20 |
| DK548287A DK548287A (da) | 1988-04-22 |
| DK175126B1 true DK175126B1 (da) | 2004-06-07 |
Family
ID=6312082
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK198705482A DK175126B1 (da) | 1986-10-21 | 1987-10-20 | Peptid-aminoalkylamider, deres fremstilling og anvendelse til fremstilling af peptid-hydrazider |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0264802B1 (da) |
| JP (1) | JP2540564B2 (da) |
| KR (1) | KR960013073B1 (da) |
| AT (1) | ATE83244T1 (da) |
| AU (1) | AU595390B2 (da) |
| CA (1) | CA1340421C (da) |
| DE (2) | DE3635670A1 (da) |
| DK (1) | DK175126B1 (da) |
| ES (1) | ES2052535T3 (da) |
| FI (1) | FI88031C (da) |
| GR (1) | GR3007231T3 (da) |
| HU (1) | HU197719B (da) |
| IE (1) | IE60864B1 (da) |
| IL (1) | IL84195A (da) |
| NO (1) | NO172895C (da) |
| NZ (1) | NZ222204A (da) |
| PT (1) | PT85952B (da) |
| ZA (1) | ZA877862B (da) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3926822A1 (de) | 1989-08-14 | 1991-02-21 | Hoechst Ag | Peptide mit bradykinin-antagonistischer wirkung |
| EP0376218B1 (en) * | 1988-12-27 | 1999-02-24 | Perseptive Biosystems, Inc. | Racemization free attachment of amino acids to solid phase |
| DE4408533A1 (de) | 1994-03-14 | 1995-09-28 | Hoechst Ag | PNA-Synthese unter Verwendung einer basenlabilen Amino-Schutzgruppe |
| SI0946478T1 (sl) * | 1996-12-19 | 2007-06-30 | Aventis Pharma Inc | Postopek za sintezo v trdni fazi aldehidov, ketonov in spojin hidroksamske kisline |
| GB9727123D0 (en) * | 1997-12-22 | 1998-02-25 | Int Centre Genetic Eng & Bio | Synthesis of diamines |
| US6852789B2 (en) * | 2002-02-15 | 2005-02-08 | Degussa - Ag | Glycols starting materials containing dispersed superfine ceramic powder coagulates capable of forming polyester molded bodies having high mechanical strength and transparency |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4108846A (en) * | 1977-02-01 | 1978-08-22 | Hoffmann-La Roche Inc. | Solid phase synthesis with base N alpha-protecting group cleavage |
-
1986
- 1986-10-21 DE DE19863635670 patent/DE3635670A1/de not_active Withdrawn
-
1987
- 1987-10-14 AT AT87114992T patent/ATE83244T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-10-14 ES ES87114992T patent/ES2052535T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-10-14 EP EP87114992A patent/EP0264802B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-10-14 DE DE87114992T patent/DE3783009D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-10-18 IL IL84195A patent/IL84195A/xx not_active IP Right Cessation
- 1987-10-19 FI FI874586A patent/FI88031C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-10-19 NZ NZ222204A patent/NZ222204A/xx unknown
- 1987-10-20 DK DK198705482A patent/DK175126B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-10-20 CA CA000549680A patent/CA1340421C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-10-20 NO NO874374A patent/NO172895C/no not_active IP Right Cessation
- 1987-10-20 ZA ZA877862A patent/ZA877862B/xx unknown
- 1987-10-20 KR KR1019870011632A patent/KR960013073B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1987-10-20 PT PT85952A patent/PT85952B/pt unknown
- 1987-10-20 AU AU79935/87A patent/AU595390B2/en not_active Expired
- 1987-10-20 HU HU874713A patent/HU197719B/hu unknown
- 1987-10-20 IE IE282187A patent/IE60864B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-10-20 JP JP62262950A patent/JP2540564B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-03-05 GR GR920402952T patent/GR3007231T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK548287A (da) | 1988-04-22 |
| PT85952A (de) | 1987-11-01 |
| IL84195A (en) | 1992-08-18 |
| EP0264802A2 (de) | 1988-04-27 |
| DE3635670A1 (de) | 1988-04-28 |
| HU197719B (en) | 1989-05-29 |
| KR880005147A (ko) | 1988-06-28 |
| DE3783009D1 (da) | 1993-01-21 |
| DK548287D0 (da) | 1987-10-20 |
| PT85952B (pt) | 1990-07-31 |
| ZA877862B (en) | 1988-04-22 |
| AU7993587A (en) | 1988-04-28 |
| NO874374D0 (no) | 1987-10-20 |
| IL84195A0 (en) | 1988-03-31 |
| NZ222204A (en) | 1989-10-27 |
| CA1340421C (en) | 1999-03-09 |
| HUT46706A (en) | 1988-11-28 |
| EP0264802B1 (de) | 1992-12-09 |
| JP2540564B2 (ja) | 1996-10-02 |
| GR3007231T3 (da) | 1993-07-30 |
| FI88031C (fi) | 1993-03-25 |
| FI874586A (fi) | 1988-04-22 |
| NO172895B (no) | 1993-06-14 |
| ES2052535T3 (es) | 1994-07-16 |
| NO172895C (no) | 1993-09-22 |
| EP0264802A3 (en) | 1989-07-26 |
| IE872821L (en) | 1988-04-21 |
| NO874374L (no) | 1988-04-22 |
| FI874586A0 (fi) | 1987-10-19 |
| KR960013073B1 (ko) | 1996-09-30 |
| ATE83244T1 (de) | 1992-12-15 |
| IE60864B1 (en) | 1994-08-24 |
| FI88031B (fi) | 1992-12-15 |
| JPS63104951A (ja) | 1988-05-10 |
| AU595390B2 (en) | 1990-03-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106749613B (zh) | 一种索玛鲁肽的合成方法 | |
| EP3398960B1 (en) | Method for preparing semaglutide | |
| Pillai et al. | New, easily removable poly (ethylene glycol) supports for the liquid-phase method of peptide synthesis | |
| JPH0161120B2 (da) | ||
| JP7063408B1 (ja) | 液相ペプチド製造方法 | |
| US8377891B2 (en) | Process for synthesis of cyclic octapeptide | |
| DK175126B1 (da) | Peptid-aminoalkylamider, deres fremstilling og anvendelse til fremstilling af peptid-hydrazider | |
| CN109180803A (zh) | 生长抑素及其制备方法和药物组合物 | |
| WO2023033017A1 (ja) | ガニレリクス又はその塩の製造法 | |
| US5536815A (en) | Cyclopropyl based O- and N- and S-protecting groups | |
| JP7154513B1 (ja) | 液相ペプチド製造方法 | |
| US6277958B1 (en) | Method for preparing peptide thiol ester | |
| IE903511A1 (en) | Process for the solubilization of peptides and process for peptide synthesis | |
| Wolters et al. | Synthesis of the A14-21 sequence of ovine insulin by the solid-phase technique | |
| CZ282881B6 (cs) | Způsob výroby peptidů | |
| EP0056274B1 (en) | Indole derivatives and a method for production of peptides | |
| US5942601A (en) | Peptide synthesis with sulfonyl protecting groups | |
| IE46462B1 (en) | Somatostatin peptide analogues | |
| US5565606A (en) | Synthesis of peptide aminoalkylamides and peptide hydrazides by the solid-phase method | |
| WO2024134676A1 (en) | Process for the preparation of tirzepatide | |
| US20040192888A1 (en) | Method of preparing peptide with high yield and high purity using2-(4-nitrophenylsulfonyl) ethoxycarbonyl-amino acids | |
| WO1999014238A1 (en) | Process for the preparation of calcitonin | |
| CN115433266A (zh) | 一种特立帕肽的固相合成方法 | |
| CN114945580A (zh) | 用于合成南吉博肽的方法 | |
| GB1578402A (en) | Somatostatin peptide analogues |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |