JPS63104951A - 固相法によるペプチドアミノアルキルアミドおよびペプチドヒドラジドの合成 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 生物学的に活性なはプテドのＣ−末端中へのアミノアル
キルアミドの導入は、ある場合には代謝安定性および活
性（＝有利な効果を有していた（ヨーロッパ特許出＃ｌ
！第１７９３３２号ＥＪＡ細書参照）。この方法で調製
されるペプチド製造には、溶液状態での古典的な断片結
合法が利用されている。

はゾテドの固相合成において［Ｐａｔｃｈｏｒｎｉｋ氏
およびＣｏｈｅｎ氏著ｒＰｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ　ｉ
ｎ　ＰｅｐｔｉｄｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　第１１８〜
１２８頁（Ｋａｒｇｅｒ　、　Ｂａ５ｌｅ１９８１　）
］反応性の連鎖は、しばしば合成樹脂物質上に直接グラ
フトされないでスペーサー（ｓｐａｃｅｒ）またはリン
ク（ｌ　１ｎｋ）と呼ばれるもの１＝よって担体物質に
結合される。文献〔例えばＡｔｈｅｒｔＯｎ氏および５
ｈｅｐｐａｒｄ氏著ｒＰｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ　１ｎ
Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙｊ第１０１〜１１
７頁（Ｋａｒｇｅｒ＋Ｂａ５ｌｅ　１９８１））　ｉ二
は例えば式％式％ を有する、前記スペーサー導入試薬（「結合剤」（ｌｉ
ｎｋａｇｅ　ａｇｅｎｔ）と称する）が開示されている
。

本発明によれば、Ｃ−末端アミノアルキルアミドまたは
ヒドラジド（＝より調製されるはプテドを固相合成で直
接組み立てることを可能にする新規な結合剤が見出され
た。

即ち本発明は式Ｉ （式中、 Ａは水素であるかまたは塩基もしくは弱酸に対して不安
定であるアミノ保護基を示し、Ｂは同一または相異なる
アミノ酸残基な表し、Ｘ　）ｉ　（Ｃ１＜１２）−アル
キレンまたは（０６〜Ｃｌ０）−アリール−（０１〜Ｃ
ｌ２）−アルキレンを示し、Ｙｌ、￥２、Ｙ５およびＹ
４は同一または相異なっていて、水素、メチル、メトキ
シまたはニトロを示すが、これら基のうちの少なくとも
１個は水素を示し、 ■は水素またはカルボキシル保護基を示し、Ｗは−ＣＣ
Ｈ）。−または−ｏ−（ｃＨ２）。−を示し、ｍは０ま
たは１であり、 ｎは０〜６の整数でありそして ｐはＯ〜５の整数である）で表される化合物に関する。

式Ｉの好ましい化合物はｐが０．１または２特に０であ
りモして／またはｍが１である化合物である。

Ｘは−［：ＣＨ２］９−　（ここでｑが１〜１２好適に
は１〜８である）であるのが好ましい。

基Ｙ１．ｙ２　、Ｙ”およびＹ４のうちの少なくとも２
個、とりわけ少なくとも６個が水素を示すのが好ましい
。

塩基もしくは弱ｄｉ二対して不安定である保護基は、特
（＝ウレタン保護基例えばＦｍｏｃ　、　Ｄｄｚ　。

Ｂｐｏｃ　％Ｍｓｃ　、　Ｐｅｏｃ　、　Ｐｓｅおよび
Ｔｓｅ好ましくはＦｍＯｃである（例えばＨｕｂｂｕｃ
ｈ氏著ｒＫｏｎｔａｋｔｅ　Ｊ（Ｍｅｒｃｋ）　１９７
９年１．糸３、第１４〜２３頁を参照）。

Ｂはアミノ酸好ましくはα−アミノ酸の残基であり、そ
れらはキラルである場合にはＤもしくはＬ型で存在する
ことができる。天然産のアミノ酸、それらのエナンチオ
マー、同族体、誘導体並びに単純な代謝産物の残基が好
ましい（例えばＷｕｎｓｃｈ氏等著ｒＨｏｕｂｅｎ−Ｗ
ｅｙｌ　１５／１　ａｎｄ　２　。

５ｔｕｔｔＦａｒｔ、Ｔｈ１ｅｒｎｅ、１９７４年参照
）。即ち例えば以下のものが適当である。

Ａｎｄ、Ａｂｕ、　７”Ａｂｕ、ＡＢｚ、２ＡＢｚ、　
ｇＡｃａ、Ａｃｈ、Ａｃｐ＋Ａｄｐｄ＋Ａｈｌ）、Ａｉ
ｂ、βＡｉ　ｂ　、　Ａｌａ　＋βＡｌａ、ΔＡｌａ、
Ａ１ｇ＋Ａ１１．Ａｍａ。

Ａｎｎｔ、Ａｐｅ、Ａｐｍ、Ａｐｒ＊Ａｒｇ、Ａｓｎ、
Ａｓｐ、Ａｓｕ、Ａｚｅ、Ａｚｉ　＋Ｂａｉ、Ｂｐｈ、
Ｃａｎ、Ｃ１ｔ、Ｃｙｓ、Ｃｙｔａ、Ｄａａｄ、Ｄａｂ
、Ｄａｄｄ。

Ｄａｐ　＋　Ｄａｐｍ　＋　Ｄａ　Ｓ　ｕ　ｒ　Ｄｊ　
ｅｎ　ｒ　Ｄｐａ　＊　Ｄｔ　Ｃ＃　Ｆｅ　１　＠　Ｇ
ｌｎ　＊　Ｇｌｕ　＊　Ｇ１７＊ＧｕＶ　、ｈＣｙＲｓ
　Ｈｌ　Ｓ　＊　ｈＳ８　ｒ　＊　Ｈ”／　ｌ　＊　Ｈ
”／ｐ　＋　５Ｈ７ｐ　＊　Ｉ　ｌ　ｅ　ｅ　Ｉ　Ｓ　
ｅ＃　ＩＶａ　ｒＫｙｎ　、　Ｌａｎ　ｔ＊　ＬＣｎ　
＋　Ｌｅｕ　ａ　ＬＳ　ｇ＠　Ｌｙ　Ｓ　、βＬｙｓ　
、ΔＬｙｓ、Ｍｅｔ。

Ｍｌ　ｍ　＋　Ｍｌ　ｎ　＋　ｎＡｒｆＪ　１　Ｎｌ　
ｅ　ｅ　Ｎｖａ　１０１ｙＨＯｒｎ　ａ　Ｐａｎ　ｌＰ
ｅ　ＣＩ　Ｐｅｎ　＋Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｐｉｅ、Ｐｒｏ
、ΔＰｒｏ、Ｐｓｅ＋Ｐｙａ、Ｐｙｒ＋Ｐｚａ、Ｑｉｎ
。

Ｒｏｓ、Ｓａｒ、Ｓｓｃ、Ｓｅｔ＋ｂＳｅｒ、Ｔｈ１ｎ
βＴｈｉ、Ｔｈｒ、Ｔｈｙ、Ｔｈｘ。

Ｔｉａ、Ｔｉｅ、Ｔｌｙ、Ｔｒｐ、Ｔｒｔａ、Ｔｙｒ、
Ｖａｌおよび対応するエナンチオマーＤ−アミノ酸の残
基。

上記アミノ酸残基の側鎖にある官能基は保護された形態
で存在することができる。適当な保護基はＨｕｂｂｕＣ
ｈ氏著ｒＫｏｎｔａｋｔｅＪ（Ｍｅｒｃｋ）　１９７９
年、＆６、第１４〜２５頁およびＢｕｌｌｅｓｂａｃｈ
氏著ｒＫｏｎｔａｋｔｅＪ（Ｍｅｒｃｋ）　１９８０年
、厘１、第２３〜５５頁（二記載されている。好ましい
基は塩基および弱酸に対して安定でありしかも強酸を用
いて除去されうる基である。

アルキレンは直鎖もしくは分枝鎖状であることができる
。（Ｃ６〜Ｃ１ｏ）−アリールの定義の例としてはフェ
ニル、トリルまたはナフチルを挙げることができ゛るが
、フェニルが好ましい。

カルボキシル保護基Ｖは例えば（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキ
ルまたは（Ｃ７〜Ｃ１１）−アルアルキルであり、好ま
しい基としてはメチル、エチル、第三ブチル、ベンジル
および修飾されたベンジル例えばｐ−グロロー、ｐ−ブ
ロモ−１ｐ−ニトロお上びｐ−メトキシベンジル並び（
二窒素同族体ピコリルを挙げることができる。より広い
意味においてこのような保護基は活性化されたエステル
基例えば０ＮＳｕ　、　ＯＢｔ　、　０Ｏｂｔもしくは
ニトロフェノキシを包含する。

本発明はまた式ｌの化合物の製造方法（二関するが、そ
れは ａ）式■ （式中 Ｒは求核的に分離されうる離脱基を表し、■はカルボキ
シル保護基を表しそして Ｗ、Ｙｌ　、’Ｙ２　、ｙ５およびＹ４は前述の定義を
有する）の化合物を弐■ Ａ−（Ｂ）、−ＮＨ−〔Ｘ）、−ＮＨ２（１■）（式中
Ａは塩基または弱酸に対して不安定なアミノ保護基であ
りそしてＢ、　Ｘ、　ｐおよびｍは前述の定４を有する
）の化合物と反応させ、次いで適切ならば得られた式■
を有する保護化合物中の保護基Ａおよび／またはＶの一
方もしくは両方を除去して遊離Ｎｆ（２および／または
Ｃ０２Ｈ基を生成させる（その際好ましい方法は１１を
例えばＺｎ／氷酢酸での還元分解によって選択的に除去
する方法である）か、または ｂ）式■においてＡが水素を示しそしてＢ％Ｘ。

Ｙｌ、Ｙ２．Ｙ３．Ｙ４．Ｖ、Ｗ、　ｍ、　ｎおよびｐ
が前述の定義を有する化合物を式■ Ａ−（ＢＥ　５−ｐ−ｏＨ（ｆＶ） （式中Ａ、Ｂおよびｐは前述の定義を有するが、しかし
Ａは水素ではない）の化合物またはその活性エステル、
ハライドもしくはアジドと反応させ、次いで■が水素で
ない場合（二は適切ならばカルボキシル保護基■を除去
してカルボキシル基を生成させることからなる。

求核的に除去されつる離脱基は、例えばハロゲン（例え
ば塩素、臭素および沃素）または活性アリールオキシ（
例えばｐ−ニトロフェノキシ）である。

式■の化合物と弐■の化合物との反応は、非プロトン性
溶媒例えばＴＨＦ　、　ＤＭＦ　５ＣＨ（Ｊ５またはｃ
Ｈ２ｃｇ２中、有利には塩基例えば第三アミン（例えば
トリイソプロピルアミン、トリエチルアミンまたはピリ
ジン）の存在下、有利な効果を有する例えばＤｌａＰ　
、　ＨＯＯｂｔまたはＨＯ［３ｔのようなアシル化触媒
を添加して、ＯＣと反応混合物の沸点との間（＝ある温
度好適（二は０℃〜４０℃で行うのが好ましい。

式１（Ａ＝水素）の化合物と式■の化合物、それらの活
性エステル、パライトもしくはアジドとを好ましくは有
機溶媒例えばＤＭＦ’中、有利には塩基例えば第三アミ
ンの存在下、−１０℃と反応混合物の沸点との間（二あ
る温度好適（＝は室温で反応させる。適当な活性エステ
ルの例としては０ＮＳｕ　、　ＯＢｔ　、　０Ｏｂｔお
よびｐ−ニトロフェノキシ化合物を挙げることができる
。好ましいハロケ゛ン誘導体はクロライドである。過塩
素酸ピリジニウムは、溶解度改善のために添加すること
ができる。

式■の化合物は、例えば式（ＩＸ） （式中Ｙ１　、ｙ２　、ｙ５　、ｙ４　、ｗおよびＶ　
ハｇＭ　述（７）定義を有するが、しかし■は水素を示
さない）のエステルとホスゲンもしくはホスゲン訪導体
例えばニトロフェニルクロロホルメートとを、第三塩基
例えばピリジンのような第三アミンな好適（二は１：１
の割合で混合した非プロトン性極性溶媒例えばＴＨＦも
しくはＤＭＦ中において一４０℃と室温との間の温度、
好適（；は−２０℃〜０℃で反応させることにより製造
される。

本発明はまた、式［（二おいてＶが水素を示しそしてＡ
が水素を示さない化合物を式■Ｐ−ＮＨ−ＣＸ］ｍ−Ｎ
Ｈｚ　　　　　（Ｖ）（式中Ｐはｑ≦ｐ＋１α−アミノ
ｒ褒からなるはプテド残基を表しそしてＸ、ｍおよびｐ
は前述の定義を有する）で表される化合物の固相合成（
二おいて使用することおよび固相合成による上記式（′
Ｖ）のペプチドの製造方法（二関する。その方法は式■
（＝おいてＡが水素を示さずモしてＶが水素を表す化合
物を樹脂（；結合し、保」基Ａを除去し次（＝適切なら
ば、活性誘導体の形態（二あり、かつ塩基もしくは弱酸
（二対して不安定なアミノ保護基によって一時的に保護
されたｑ−ｐα−アミノ酸を順次連結し、組み立ての完
了後そのペプチドを強度が中〜強の酸で処理することに
上り冑脂から単温し、その際再び、一時的に導入した側
鎖保護基を同時（＝あるいは適当な手段でその後に除去
することからなる。

副反応を防止する必要がある場合即ち特定はプテドを合
成する場合、アミノ酸の側鎖中の官能基は適当な保護基
（例えばＴ、Ｗ、（）ｒｅｅｎｅ氏著ｒＰｒｏｔｅｃｔ
ｉｖｓ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｔｃ　５ｙｎ
ｔｈｅｓｉｓ’。

ニューヨーク、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ、
１９８１年参照）によってさらに保護される。主に用い
られる保護基の例としてはＡｒｇ（Ｔｏｓ）　、Ａｒｇ
（Ｍｔｓ）　、Ａｒｇ（Ｍｔｒ）　、Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
）　、Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）　、Ｃｙｓ（４−ＭｅＢｚｌ
）　。

Ｃｙｓ（Ａｃｍ）　、Ｃｙｓ（ＳＢｕｔ）　、（）ｌｕ
（ＯＢｚｌ）　、Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）　。

Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）　、Ｈｌｓ（Ｆｍｏｃ）　、ｌ１ｉｓ
（Ｄｎｐ）　、Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）　＋Ｌｙｓ（Ｃ１−２
）　、ＬＹＳ（ＢＯＣ）　、Ｍｅｔ（０）、５ｅｒ（Ｂ
ｚｌ）　、５ｅｔ（Ｂｕｔ）。

・ｒｈｒ（Ｂｚｌ）、・ｒｈｒ（Ｐｕｔ）がある。

担体物質として用いられる樹脂は商業的に入手しうる。

ＢＨＡおよびＭＢＨＡ樹脂が好ましい。

次いで式Ｖのペプチド１は、はプチド合成で慣用的に用
いられている強度が中〜強の酸（例えばトリフルオロ酢
酸およびＨＦ　）での処理により完全に分裂され、即ち
スペーサー中に含有されたウレタン保護基が分裂される
。

式１　（Ｖ＝Ｈ）の化合物およびその他のアミノ＃１．
誘導体のための結合試薬としてはプチド合成に用いられ
る可能な活性試薬の全て（例えばＨｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙ
ｌ著自ＪｅｔｈＯｄｆ３ｎ　ｄｅｒ　　Ｏｒｇａｎｉｓ
ｃｈｅｎＣｈｅｒｎｉｅＪ第１５／２巻参照）を用いる
ことができるが、しかし特（二カルボジイミド類例えば
Ｎ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド、Ｎ、Ｎ′
−ジイソプロピルカルボジイミドもしくは呵−エチル−
マー（６−シメチルアミノプロピル）カルボジイミドが
よい。この結合は、活性化試薬および適切ならばラセミ
化抑制のための添加剤例えば１−ヒドロキシベンゾトリ
アゾール（ＨＯＢｔ）（Ｗ、に６ｎｉｇ氏等著ｒｃｈｅ
ｍ、Ｂａｒ、ｊ　１０２，７０８（１９７０年）参照）
もしくは６−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒド
ロキシベンゾトリアジン（ｓｏｏｂｔ）（Ｗ、Ｋｉ：ｉ
ｎｉｇ氏等ｆｒｃｈｅｍ、’Ｂｅｒ、Ｊ　ＩＣｌ３，２
０５４（１９７０年）参照）とともにアミノ酸誘導体を
樹脂に加えることにより直接遂行されつるかまたはアミ
ノ酸誘導体（二対するあらかじめの活性化を対称無水物
もしくはＨＯＢｔもしくはＨＯＯｂｔエステルとして別
個に行いそしてそれらの活性化された種類を適当な溶媒
に溶解した溶液を結合の準備のできたペプチド−樹脂（
＝加えることができる。

前記活性化試薬の１種を用いて行う式１　（Ｖ＝Ｈ）の
化合物およびアミノ酸誘導体の結合並び（二活性化は、
ジメチルホルムアミドもしくはメデレンクロライドもし
くは両者の混合物中で遂行されうる。活性化されたアミ
ノ酸誘導体は通常１５〜４倍の過剰量で用いられる。不
完全な結合が起る場合（ユは、配列中において次のアミ
ノ酸を結合するに必要なペプチド−樹脂のα−アミノ基
の非ブロック化をあらかじめ行わずにその結合反応を繰
り返す。

該結合反応の十分な完成は、例えばＥ、Ｋａｉｓｅｒ氏
等著ｒＡｎａ１．Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ　３４，５９５
（１９７０）Ｅ記載のようにニンヒドリン反応を用いて
チェックされうる。

この合成はまた、例えばアプライドバイオシステムズモ
デル（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　ｍｏｄ
ｅｌ）４５０Ａペプチドシンセサイザーを用いて自動的
に実施することもでき、その際には該装置の製造者より
提供のシンセシスプログラムあるいはまたユーザ自身の
作成したプログラムのいずれかを用いることができる。

後者は、Ｆｍｏｃ基で保護したアミノ酸誘導体を１吏用
する場合に特に用いられる。

ｋブチドアミドを弗化水素およびトリフルオロ酢酸で樹
脂から完全に分裂させる場合には例えばフェノール、ク
レゾール、チオクレゾール、チオアニソール、アニソー
ル、エタンジチオール、ジメチルスルフィド、エチルメ
チルスルフィドまたはこれら補助剤の２種以上からなる
混合物のような物質をカチオントラップとして加えるの
が常套である。この点（−関して上記トリフルオロ酢酸
はまた、例えばメチレンクロライドのような適当な溶媒
により希釈されて用いられる。

本明細書中で使用の省略形は以下の意味を有する。

Ｆｍｏｃ　　　９−フルオレニルメチルオキシカルボニ
ルＤｄｚ　　　　α、α−ジメチルー５．５−ジメトキ
シベンジルオキシカルボニル ＰＩ）ＱＣ２−Ｃ４−ビフェニリルツー２−プロピルオ
キシカルボニル Ｍｓｃ　　　　メブールスルホニルエチルオキシカルボ
ニルＰｅｏｃ　　　ヒリ’；ルエｔルオキシカルボニル
Ｐ８ｅ　　　　フェニルスルホニルエチルオキシカルボ
ニルＴｓｅ　　　　）リルスルホニルエチルオキシカル
ボニルＨＯＮＳｕ　　　Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ＨＯＢｔ　　　　１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＨ
ＯＯｂｔ　　　３−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−
ジヒドロベンゾトリアジン ＴＨＦ　　　テトラヒドロフラン ＤＭＦ　　　ジメチルボルムアミド ＤＭＡＰ　　　ジメチルアミノピリジン以下に本発明を
実施例（：より説明するが、本発明はそれら（：限定さ
れるものではない。

実施例　１ メチル４−ヒドロキフエテルフエノキシアセテート ４−ヒドロキンメチルフェノキシ酢酸１８．２　ｙ　ヲ
Ｎ、！・エージイノプロビルエチルアミン１７．１　ｍ
とともにＤＭＦ　５０−中に溶解し、次いでその攪拌溶
液に沃化メチル６、１　ｆｎｔを加える。混合物はこの
間僅か（＝暖まる。反応は３時間後（＝完了する。溶媒
を真空中で除去する。残留物をエーテル中に取り入れ、
そのｆ溶液を０．５Ｎ塩酸で１回抽出する。

次いで水性相をエーテルで３回抽出し、合一したエーテ
ル相を炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄しそして濃縮す
る。残留物を酢酸エチルに溶解し、短いシリカゲルカラ
ム（−通して濾過する。

濃縮後に得られる淡黄色の油状物は放置すると結晶化す
る。

懇および質量スペクトルは標記化合物の構造に一致する
。

実施列　２ Ｆｍｏｃ−ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＮＨ−ＣＯ−０−ＣＨ
２−Ｑ−０−ＣＨ２−Ｃｏ○ＣＨ５メチル４−ヒドロキ
シメチルフェノキシアセテート９８ｔを乾燥ＣＨ２Ｃｌ
２中（−溶解し、次いでｐ−二トロフェニルク口口ホル
メート１０．１？およびトリエチルアミン７ｄを加える
。この混合物を約６時間還流下に煮沸してプレカーサを
完全に反応させた。次いで乾燥ＣＨ２Ｃｌ２１０　ＣＪ
ｒｌに懸濁したＦｉ’ｕ＞ｏｃ−ＮＨ−（ＣＨ２）４−
Ｎ’Ｈ２（Ｂｏｃ−ｔＮ−（ＣＨ２）　４−ｊｒＨ２を
Ｆｍｏｃ−ＯＮＳｕと反応させ、次いでＢｏｃを除去す
ること（二より製造される）１５．５Ｆの懸濁液および
さらに別のトリエチルアミン７、？Ｉｔを加え、その混
合物を還流下（；煮沸する。反応の完了後溶媒を真空中
で除去しそして残留物をエーテルで蒸解し次いで吸引Ｐ
去する。フィルター上の残留物をＩＮ　Ｎａ２ＣＯ３水
溶液次いで熱水で洗浄しそしてデシケータ−中で高真空
の下に乾燥する。

融点１２２〜１２４ＣｏＮＭＲおよび質量スペクトルは
標記化合物の構造（ニ一致する。

実施例　３ Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）　４−ＮＨ−ｃｏ−０−ＣＨ２（）
０−Ｃ’Ｈ２−Ｃ’０Ｏｆ（実施例２で得たエステル５
．２ｔをメタノール１００ｄ中に懸濁し、それにＩＮ　
ＮａＯＨ水溶液６当量を加える。反応完了後、　ＩＮ　
ＨＣＩ水溶液で〆１を３に調整し、メタノールを真空中
で除去する。

沈殿を吸引戸去し、少量のｇ２ｏで洗浄し次いでニーデ
ル中で蒸解しそして再び吸引濾過する。

融点１９６℃（分解）。ＮＭＲおよび！ｉ＆スペクトル
は標記化合物の構造に一致する。

実施例　４ Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ｆＧ（−（ＣＨ２）４−ＮＨ−ＣＯ
−０−ＣＨ２−ｏ−ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ実施例３で得
た生成＠　１．５　ｒを乾燥ＤＭＦ’　５０ｄ中に懸濁
する。次いで過塩素酸ピリジニウム（溶解度改善のため
）　０．９　ＦおよびＦｒｙ：Ｉｃ−Ｐｈｅ−００ｂｔ
２．６？およびトリエチルアミン０．５　ｍｌを順次加
える。混合物を室温で攪拌する。反応完了後、溶謀を真
空中で除去しそして残留物を酢酸エチルと）（２０との
間に分配する。水性相を酢酸エチルでもう一度抽出し、
合一した有機相を乾燥し次いで濃縮する。残留物を少量
のＣＨＣｌ　５で蒸解し、吸引戸去する。フィルター上
の残留物を少量のエーテルで洗浄し、乾燥する。

融点１４０℃（分解）。ＮＭＲおよび質量スはクトルは
標記化合物の構造に一致する。

実施例　５ Ｆｍｏ　ｃ　−Ｐｈｅ−ＮＨ−（ＣＨ２）　４−　ＮＨ
−Ｃｏ　−０−ＯＨ８ｏ−ＣＨ２−Ｃｏ−（４−メチル
ベンズヒドリルアミン樹脂）実施例４で得たＦｍｏｃ−
フェニルアラニンスペーサーｆｉｔ４ＰをＨＯＢｔ　３
５０１１９とともに乾燥ＤｂＡＦ　４０　ｄ中に溶解し
、その溶液を４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（Ｎ
ｏｖａ　Ｂｉｏｃｈｅｍ社製、負荷０．４ミリモル／？
）′５．６６１に加える。次いでジイソプロピルカルボ
ジイミド０．６Ｔｎｔを加え、連続的に混合しながら反
応を遂行し、完了させる。反応完了後、生成物を吸引Ｐ
去し、ＤＭＦ　。

イソプロパツール、ｃａ２ｃｚ２およびｔ−ブチルメチ
ルエーテルで洗浄し次いで高真空下（；乾燥する。

元素分析（窒素測定）Ｃ二よる負荷：０．３ミ！ｊモｎ
／ｌ。

実施例　６ 〔デスーＴｙｒ２４．デス−Ａｒｇ２５］　−ｒ−アト
リオベプチン１ｌｌ−（４−アミノ）ブチルアミドの合
成標記ペプチド合成は、アプライドバイオシステムズモ
デル４３０Ａの自動にプチドシンセサイザーおよび本発
明者等が修正したシンセシスプログラムでＦｍｏ　ｃ−
アミノ酸のＨＯＢｔエステルを用いて前記樹脂１？上で
実施される。

このため：：は、適当なアミノ酸誘導体の各々１ミリモ
ルを検量して、製造者が供給したカートリッジ中に入れ
る。即ちＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−ＯＨ。

Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＨ
をＨＯ１’３ｔ１．５ミリモルと一緒に検量してカート
リッジ中に入れる。これらのアミノ酸は該カートリッジ
中でＤＭＦ　４　ｄに溶解しそしてＤＭＦに溶解したジ
イソプロピルカルボジイミドの０．５５Ｍ溶液２ゴを加
えることによって直接的にあらかじめ活性化されている
。それらのＨＯＢｔエステルを、あらかじめ反応系中（
二おいて活性化される前記アミノ酸のアルギニン、アス
パラギンおよびグルタミンと同じよう（−シてＤＭＦ　
６　ｍｌ中（−溶解し次いで汲み取って、あらかじめＤ
ＭＦ中（＝おいて２０チビぼりジンで非ブロック化した
樹脂上に注ぐ。反応系中で活性化されているこれらアミ
ノ酸は２倍増しで結合する。

合成完了後ペプチドブチルアミドを、カチオントラップ
としてチオアニンールおよびｍ−クレゾールを含有する
トリフルオロ酢酸を用いて（封脂から分裂させ、その際
同時に側鎖保護基をも除去する。真空中でトリフルオロ
酢酸を除去した後に得た残留物を酢酸エチルで蒸解し次
いで数回遠心分離にかける。残留している粗にプテドを
トリフルオロエタノール中においてトリブチルホスフィ
ンで処理してシスティン保護基を除去する。溶媒の除去
後、残留物を再び酢酸エチルで蒸解し次いで遠心分離す
る。還元した粗にプテドな直ちに８０％酢酸水溶液中、
沃素で酸化し、過剰のＩ２をアスコルビン酸で除去し、
その反応混合物を濃縮して容量を少なくし、次いで塩を
１Ｎ酢酸水溶液を用いてセファデックス（Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ　、登録商標）Ｇ２５上（二取り出す。純粋なにプ
テドを含有する各フラクションを合一し、凍結乾燥する
。

アミノ宜分析（二よれば、該にプチドのアミノ酸組成は
標記式（二相当する。

実施例　７ フエナシル４−ヒドロキシメチルフェノキシアセテート ４−ヒドロキシメチルフェノキシ酢７１８２９およびα
−ブロモアセトフェノン１９９？を乾燥ＤＭＦ　６００
−中（二溶解し次いで０℃でトリエチルアミン１３８−
を迅速に滴加する。混合物を室温にし、−夜攪拌する。

そのＤＭＦ溶液を水３．５ノ中に注ぎそして水性相を酢
酸エチルで抽出する。有機相を水況し、硫酸ナトリクム
で乾燥し次いで濃縮する。生成物を蒸発（二より完全Ｃ
二沈殿させる。沈殿を吸引Ｆ去し、酢酸エチル／ｎ−ヘ
キサン１：１で洗浄し次いで高真空下：二乾燥する。融
点：９４〜９５℃。ＮＭＲは標記化合物の構造（ニ一致
する。

実施列°８ ｏ２ＮＧｏ−ｃｏ−ｏ−ａＨ，（３−ｏ−ａＨ２−ｃｏ
２−ａＨ２−ｃｏ（３フェナシル４−ヒドロキシメチル
フェノキシアセテ−）５０９を保護ガスの下、ＴＨＦと
ピリジンの１：１混合物５００ゴ中に溶解し、その溶液
を一２０℃に冷却する。次いでＴＨＦ　１００　ｄに溶
解したｐ−ニトロフェニルクロロホルメート２１９を滴
加する。混合物を上記温度で３０分間攪拌した後（二〇
℃（二加温し、半飽和ＮａＣ１水溶液１〕中（二人れて
０℃で攪拌しそして混合物を３０分間攪拌する。沈、股
を吸引戸去し、氷水で洗浄し、乾燥し次いでｎｏ−へキ
チンで摩砕する。

融点１４２〜１４５℃、弧は標記構造に一致する。

実施例　９ 実施例８で製造した化合物９．６２、Ｆ１′ｎｏｃ−Ｐ
ｈｅ−ＮＨ−（ＣＨ２）８−ＮＨ２）リフルオロアセテ
−）１２．２５ｆおよびＨＯＯｂｔ　５．２６　ｔを固
形物質としてフラスコ中に入れ、次（＝乾燥ＤＭＦ中に
入れたエテルジイソプロビルアミン２．５８ｔの混合物
を注ぐ。次いで混合物を４０℃で３．５時間１拌し次（
二手飽和ＮａＣ１水溶液５００ｎｌｔ中に入れて撹拌す
る。分離する沈殿を吸引炉去し、氷水で洗浄し、乾燥し
次いでエーテル／酢酸エチルで摩砕する。融点：１４７
〜１５０℃。ＮＭＲおよびＭＥＩは標記式に一致する。

以下の化合物（実施例１０〜１４）は実施例９と類似の
方法で製造される。

実施例　１０ 融点１４４〜１４７℃、ＮＭＲおよびＭＳは上記式に一
致。

実施例　１１ 融点１７９〜１８１℃、　ＮＭＲおよびＭＳは上記式（
ニ一致。

実施例　１２ 融点１４４〜１４５Ｃ，ＮＭＲおよび上、ＡＳは上記式
（：％式％ 融点１７２〜１７５Ｃ，ＮＭＲは上記式に一致。

実施例　１４ 融点１６５〜１６６℃、ＮＭＲは上記式に一致。

実施例　１５ ８．４２を氷酢酸１５０−とジクロロメタン５０ｎ！と
の混合物中（二懸濁し、あらかじめＩＮＨＣＪおよび乾
燥エタノールでの洗浄により活性化された亜鉛粉末１２
Ｐを少しずつ加える。２．３分後この懸濁液は僅かに熱
の発生を伴うが、より粘稠性；二なりそして攪拌するの
がより困難（二なる。そこでさら（＝別の氷酢酸８０　
、ｎｌとジクロロメタン５０−を加えて攪拌を一夜、続
ける。次いで混合物を１個の清澄層を有するフィルター
（二連して吸引濾過し、氷酢酸およびジクロロメタンで
洗浄する。Ｆ液を濃縮し、残留物として残存している油
状物を少量のジクロロメタン中（ユ取り入れ、酢酸エチ
ルおよびエーテルととも（＝攪拌する。沈殿した生成吻
を吸引ヂ去し、高真空下（：乾燥する。融点：１６０Ｃ
（分解）。トひ、但およびλ（Ｓは標記式（ニ一致する
。

さら（−５！施例１５に記載の方法（−よって実施例１
６〜１８の化合物が製造される。

実施例　１６ ＦｍｏＣ−Ｐｈｅ−ＮＨ−（ＣＨ２）４−１ｎ■−ＣＯ
−０−ＣＨ２ｕＯ−ＣＨ２−Ｃｏ２Ｈ融点＝１５０℃（
分解）、ＮＭＲおよびＭＳは上記、　式に一致。

実施例　１７ Ｆｒｏｏｃ−Ｐｈｅ−ＩＧ（−（ＣＨ２）Ｂ−Ｎ’Ｈ−
Ｃｏ−０−ＣＨ２（ｙＯ−ＣＨ２−Ｃｏ２Ｆ（融点＝１
６０℃（分解）　、　ＮＭＲおよびＭＳは上記式（ニ一
致。

実施例　１８ Ｆ′ｍｏｃ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｅ−ＮＨ−Ｃｏ−０−Ｃ
Ｈ２−Ｃ）−０−ＣＨ２−Ｃｏ２Ｈ融点：１５４Ｃ（分
解）、凪ｉＲおよびＭＳは上記式に一致。

実施例　１９ Ｆｍｏｃ−ｈＪＨ−（ＣＨ２）６−ＮＨ−ＣＯ−０−Ｃ
Ｈ２−Ｃ）−０−ＣＨ２−Ｃｏ２ＣＨ５合成は実施例２
と類似の方法で実施される。

融点＝１１５〜１１８℃、ＮＭＲおよびＭＳは上記式に
一致。

実施例　２Ｏ ＮＨ２−（ＣＨ２）６−ＮＨ−Ｃｏ−０−ＣＨ２（３−
０−ＣＨ２−Ｃｏ２Ｈ標記化合物は実施例６に記載の方
法（：より製造された。融点：１８４〜１８７℃（分解
）、ＮＭＲおよびＭＳは上記式（ニ一致。

実施例　２１ Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ　−ｈＪＴ（−（ＣＨ２）　６−ＮＨ
−Ｃｏ−○−Ｃ’Ｈ２ＱＯ−ＣＨ２−Ｃ’０２Ｈ合成は
実施例４と類似の方法で実施される。

融点：　１２０′ｃ（分ｉ４！り　、ＮＭＲオよびＭＳ
ハ上記式特許出願人　　ヘキスト・アクチェンゲセルシ
ャフト外２名 手続補正書 昭和６３年　１月１８日 特許庁長官　　小　川　邦　夫　　殿 １、事件の表示 昭和６２年特許願第２６２９５０号 ２、発明の名称 固相法によるペプチドアミノアルキルアミドおよびペプ
チドヒドラジドの合成 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 名称　ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト４、代理人 ５、補正命令の日付　（自発） Ｚ補正の内容 １）第１６頁第１０行の「トリイソプロピルアミン」を
「エチルジインプロピルアミン」と補正します。

２）第２９頁下がら第５行ノｒＨＯＢｔＪを［０Ｏｂｔ
Ｊと補正します。

６）第３０頁第７行の「ＨＯＢｔ」を「Ｈｏｏｂｔ」と
補正します。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式 I ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、 Ａは水素であるかまたは塩基もしくは弱酸に対して不安
   定であるアミノ保護基を示し、 Ｂは同一または相異なるアミノ酸残基を表し、 Ｘは（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿２）−アルキレンまたは（Ｃ＿
   ６〜Ｃ＿１＿０）−アリール−（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿２）
   −アルキレンを示し、 Ｙ＾１、Ｙ＾２、Ｙ＾３およびＹ＾４は同一または相異
   なっていて、水素、メチル、メトキシまたはニトロを示
   すが、これら基のうちの少なくとも１個は水素を示し、 Ｖは水素またはカルボキシル保護基を示し、 Ｗは−〔ＣＨ＿２〕＿ｎ−または−Ｏ−〔ＣＨ＿２〕＿
   ｎ−を示し、 ｍは０または１であり、 ｎは０〜６の整数でありそして ｐは０〜５の整数である）で表される化合物。 ２）ｐが０、１または２である特許請求の範囲第１項記
   載の式 I の化合物。 ３）ｍが１である特許請求の範囲第１項または第２項記
   載の式 I の化合物。 ４）Ｘが−〔ＣＨ＿２〕＿ｑ−を示しそしてｑが１〜１
   ２の整数を示す特許請求の範囲第１〜３項のうちの１項
   に記載の式 I の化合物。 ５）基Ｙ＾１、Ｙ＾２、Ｙ＾３およびＹ＾４のうちの少
   なくとも２個が水素を示す特許請求の範囲第１〜４項の
   うちの１項に記載の式 I の化合物。 ６）式 I ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、 Ａは水素であるかまたは塩基もしくは弱酸に対して不安
   定であるアミノ保護基を示し、 Ｂは同一または相異なるアミノ酸残基を表し、 Ｘは（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿２）−アルキレンまたは（Ｃ＿
   ６−Ｃ＿１＿０）−アリール−（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿２）
   −アルキレンを示し、 Ｙ＾１、Ｙ＾２、Ｙ＾３およびＹ＾４は同一または相異
   なっていて、水素、メチル、メトキシまたはニトロを示
   すが、これら基のうちの少なくとも１個は水素を示し、 Ｖは水素またはカルボキシル保護基を示し、 Ｗは−〔ＣＨ＿２〕＿ｎ−または−Ｏ−〔ＣＨ＿２〕＿
   ｎ−を示し、 ｍは０または１であり、 ｎは０〜６の整数でありそして ｐは０〜５の整数である）で表される化合物の製造にお
   いて ａ）式II ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、 Ｒは求核的に除去されうる離脱基を表し、 Ｖはカルボキシル保護基を表しそして Ｗ、Ｙ＾１、Ｙ＾２、Ｙ＾３およびＹ＾４は前述の定義
   を有する）の化合物を式III Ａ−〔Ｂ〕＿ｐ−ＮＨ−〔Ｘ〕＿ｍ−ＮＨ＿２（III） （式中Ａは塩基または弱酸に対して不安定なアミノ保護
   基でありそしてＢ、Ｘ、ｐおよびｍは前述の定義を有す
   る）の化合物と反応させ次いで適切な場合において、得
   られた式 I を有する保護化合物中の保護基Ａおよび／
   またはＶの一方もしくは両方を除去して遊離ＮＨ＿２お
   よび／またはＣＯ＿２Ｈ基を生成させるか、または ｂ）式 I においてＡが水素を示しそしてＢ、Ｘ、Ｙ＾
   １、Ｙ＾２、Ｙ＾３、Ｙ＾４、Ｖ、Ｗ、ｍ、ｎおよびｐ
   が前述の定義を有する化合物を式IV Ａ−〔Ｂ〕＿５＿−＿ｐ−ＯＨ（IV） （式中Ａ、Ｂおよびｐは前述の定義を有するが、しかし
   Ａは水素ではない）の化合物またはその活性エステル、
   ハライドもしくはアジドと反応させ次いでＶが水素では
   ないとして適切な場合において、カルボキシル保護基Ｖ
   を除去してカルボキシル基を生成させる、 ことからなる式 I の化合物の製造方法。 ７）式Ｖ Ｐ−ＮＨ−〔Ｘ〕＿ｍ−ＮＨ＿２（Ｖ） （式中Ｐはｑ≦ｐ＋１α−アミノ酸からなるペプチド残
   基を表し、Ｘは（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿２）−アルキレンま
   たは（Ｃ＿６〜Ｃ＿１＿０）−アリール−（Ｃ＿１〜Ｃ
   ＿１＿２）アルキレンを示し、ｍは０または１であり、
   ｐは０〜５の整数である）で表される化合物の固相合成
   における、特許請求の範囲第１項記載の式 I （式中Ｖ
   は水素を示しそしてＡは水素を示さない）の化合物の使
   用。 ８）式Ｖ Ｐ−ＮＨ−〔Ｘ〕＿ｍ−ＮＨ＿２（Ｖ） （式中Ｐはｑ＜ｐ＋１α−アミノを酸からなるペプチド
   残基を表し、Ｘは（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿２）−アルキレン
   または（Ｃ＿６〜Ｃ＿１＿０）−アリール−（Ｃ＿１〜
   Ｃ＿１＿２）−アルキレンを示し、ｍは０または１であ
   りそしてｐは０〜５の整数である）で表されるペプチド
   の固相合成による製造において、式 I ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、 Ａは塩基もしくは弱酸に対して不安定であるアミノ保護
   基を示し、 Ｂは同一または相異なるアミノ酸残基を表し、 Ｙ＾１、Ｙ＾２、Ｙ＾３およびＹ＾４は同一または相異
   なっていて、水素、メチル、メトキシまたはニトロを示
   すが、これら基のうちの少なくとも１個は水素を示し、 Ｖは水素を示し、 Ｗは−〔ＣＨ＿２〕＿ｎ−もしくは−Ｏ−〔ＣＨ＿２〕
   ＿ｎ−を示し、 ｎは０〜６の整数でありそして ｘ、ｍおよびｐは前述の定義を有する）で表される化合
   物を樹脂に結合させ、保護基Ａを除去し、次に適切な場
   合において活性誘導体の形態にあり、かつ塩基もしくは
   弱酸に対して不安定なアミノ保護基によって一時的に保
   護されたｑ−ｐα−アミノ酸を順次結合させ、組み立て
   の完了後式Ｖのペプチドを中程度に強い酸から強酸で処
   理することにより樹脂から単離し、その際再び、一時的
   に導入した側鎖保護基を同時にあるいは適当な手段でそ
   の後に除去することからなる製造方法。