JPS62263198A - 細胞保護作用を有する環状ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は６般式Ｉを有する環状ヘキサペプチドおよび一
般式…を有する環状二量体へキサペプチドならびにその
生理学的に受容されうる塩に関する。

（ＩＩ） ここで上式監および■中、 ＲはＴｈｒ、　Ｖａｌ、Ａｌａ、　Ｐｈｅまたは場合に
よりエステル化されていてもよいＴｈｒであり、 ８はＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｃａ５Ｃ−ＣＨ２−ＮＨ２，ＣＨ
２−ＣｍＣ−ＣＨ２−ＮＨ２、ＣＯ−（ＣＨ２）２−Ｃ
Ｏ−ｏ−（ｃＨ２−Ｃａ２−０）ｍ−ｃＨｓ　またはＣ
Ｏ−（ＣＯ２）ｚ−ＣＯ−ｏ−（ＣＯ２−ｃＨ２−ｏ）
ｍ−ａであり、ＴはＴｒｐであり、 ＵはＰｈｅ　、　Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨ２）または場合によ
りエステル化されていてもよいＴｙｒであり、 ＶはＤ−ＰｒｏまたはＤ−Ａｌａであり、ＷはＰｈｅま
たはＰｈｅ（ｐ−ＮＨ２）であり、ＸはＨ，Ｚ％ＣＯ−
Ｃ６Ｈ５、ＣＯ−Ｃ６Ｈ４（ｐ−Ｎｓ）またはＣＯ−（
ＣＯ２）ｎ−ｃ６ｎａ（ｐ−ｏｓｏｇＮａ）であり、Ｙ
はＣＯ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ　（ここで最高３個のＣＨ
２基が０により置換されていることができる）　、ＣＯ
。

ＣＯ−ＣｓＨａ（ｐ−ＣＯ）、ＣＯ−ＣＨ２−０−（Ｃ
Ｈ２−ＣＨ２−０−）ｍ−ＣＯ２−ｃ。

またはＣＯ−Ｃｍｃ−ＣＯ、　ＣＯ−（ＣＨ＝Ｃ）ｉ）
ｎ−ＣＯであり、Ｚはベンジルオキシカルボニルであり
、ｍは１〜１５の整数であり、そして ｎは１〜１６の整数である。。

置換基または記号の少くとも１つが下記の意味を有する
式！および式■の化合物が好ましい。

すなわち ＲがＶａｌまたはＴｈｒ（Ｏ８Ｏ３Ｎａ）であり、Ｕが
Ｔｙｒ（Ｏ８Ｏ３Ｎａ）であり、 ＹがＣＯ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ、ＣＯ−ＣＨ２−ＣＯ、
ＣＯｏ−ＣＨ２−０−（ＣＨ２−ＣＨ２−０）またはＣ
Ｏ−ＣミＣ−ＣＯであり、ｍが１０〜１２の整数であり
そして ｎが４を意味するものとする。

遊離のアミノ基を含有する式■の化合物は例えは塩酸、
硫酸または燐酸のような無機酸と、訃よび例えば酢酸、
クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル醗、酒石酸お
よびｐ−トルエンスルホン醗のような有機カルボン酸ま
たはスルホン酸と塩を形成する。

本発明はまた、式ｌおよび式ｎを有する化合物を製造す
るにあたり、一般式ｎａ−ｙｒｉｆＨ−Ｒ−８（１１）
−Ｔ−Ｕ−Ｖ−ｗ−ＯＨ（ｎ　ａ　）Ｈ−８（Ｒ１）−
Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−０）！　　　　　　（Ｉｌｌ：＋
）Ｈ−Ｔ−Ｕ−ｖ−ｗ−Ｒ−ｓ（Ｒ１）−ＯＨ（ＩＩＣ
）Ｈ−Ｕ　−Ｖ−Ｗ−Ｒ−８（Ｒ１）−Ｔ−ＯＨ（ＩＩ
　ｄ　）Ｈ−Ｖ　Ｊ−Ｒ−８（Ｒ’　）−Ｔ−Ｕ−ＯＨ
（ｎ　ｅ　）Ｈ−Ｗ−Ｒ−８（Ｒ１）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｏ
Ｈ（ｎ　ｆ）（式中Ｒ，８，Ｔ％Ｕ、　ＶおよびＷは前
記した意味を有しセしてＲ１はδ−または１−アミン基
の保護基を表わす）の一つを有する線状へキサペプチド
を知られたペプチド合成法に従い積比させ、一時的に導
入された保護基を適当な方法で除去し、そして次に弐■
の化合物を製造するためにはかくして得られた式Ｉを有
する未保ｉａ壊状ヘキサペプチド２個を基Ｙを介して二
量化させ、そしてかくして得られた弐ＩまたはＩＩを有
するペプチドを場合によりそれらの生理学的に受容され
うる塩に変換することからなる方法にも関する（Ｗｉｉ
ｎｓｃｈ氏他、Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ、　Ｂｄ　１５
／１ｔ２Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ：　Ｔｈｉｅｍｅ出版１９
７４年およびＢｏｄａｎａｋｙ氏他、　ｒＴｈｅ　Ｐｒ
ａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｓＪ８ｐｒｉｎｇｅｒ出版、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１
９８４参照）。

簡単な方法の一つは例えば式１１１ａ−ｙｎｌｆＢＯＣ
−Ｒ−８（Ｒ１）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−ＮＨ−ＮＨ２（Ｉ
ＩＩａ）Ｂｏｃ−Ｓ（Ｒ１）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−Ｎ
Ｈ−ＮＨ２（ＩＩＩｂ）Ｂｏｃ−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−
Ｓ（Ｒ１）−ＮＨ−ＮＨ２（Ｉｃ→Ｂｏｃ−Ｕ−Ｖ−Ｗ
−Ｒ−Ｓ（Ｒ１）−Ｔ−ＮＨ−ＮＨ２（ｆｆｌｄ）ＢＯ
Ｃ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−８（ＲＦ）−Ｔ−Ｕ−ＮＨ−ＮＨ２（
ｌｅｔ）Ｂｏｃ−Ｗ−Ｒ−Ｓ（Ｒ１）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｎ
Ｈ−ＮＨ２＜ｍｆ’）（式中Ｒ，Ｓ、　Ｔ、　Ｕ、　Ｖ
、　Ｗオ！びＲ１ハ前記定義のとおりである）の一つを
有する線状５プチド誘導体なりｏａ基を除去したのちそ
の場で調製されたアジドを介して環化させそして次に一
時的に導入された残りの保護基を除去することからなる
。

本発明にさらに式Ｗａ〜ＩＶｆ Ｒ２−Ｒ−ｓ　（Ｒ’　）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−ＲＡ　　
　　　　（ＩＩ／ａ　）Ｒ２−８（Ｒ４）−Ｔ−Ｕ−’
／−Ｗ−Ｒ−Ｒ”　　　　　（ＩＶｂ）Ｒ２−Ｔ−Ｕ−
Ｖ−Ｗ−Ｒ−８（Ｒ４）−Ｒｓ　　　　　（Ｆ／ｃ）Ｒ
２−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−８（Ｒ４）−’ｒ−Ｒｓ　　　　
　　（＋ｖｄ）Ｒ２−Ｖ−ｗ−Ｒ−８（Ｒ’　）−Ｔ−
Ｕ−Ｒ３（ｆＶｅ　）Ｒ２−Ｗ−Ｒ−８（Ｒ４）−’ｒ
−Ｕ−Ｖ−Ｒｓ　　　　　　（ｊＶｒ）（式中Ｒ，Ｓ、
　Ｔ、　Ｕ％ＶおよびＷは前記した意味を有し、 Ｒ２はＨ，Ｚ、　Ｆｍｏｃ　４たはＢｏｃであり、Ｒ５
ハＯＨ１タ＃ｉ　ＮＨ−ＮＨ２であり、そＬ−ＣＲ４は
Ｒ２＝　Ｈである場合は２またはＢｏａｓＲ２＝　Ｚま
たはＦｍｏｃである場合はＢｏｃ、または Ｒ２ｚ　Ｂｏｃである場合は２を表わす）を有する化合
物にも関する。

式Ｎａ〜ＩＩ／ｆを有する線状５プチドは古典的方法（
ｗｉｉｎｓｃｈ氏他、Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗ’ｅｙｌ、　Ｂ
ｄ　１５／１，２Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ：　Ｔｈｉｅｍｅ
出版１９７４年およびＢｏｄａｎｓｋｙ氏他、ｒＴｈｅ
　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　８ｙｎｔ
ｈｅａｉｓＪ８ｐｒｉｎｇｅｒ出版、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ
、　１９８４参照）のみならず固相合成法（例えばＥ、
　Ｗｉｉｎｓｃｈ氏、　ｒＡｎｇｅｗ。

Ｃｈｅｍ、Ｊ　８３　（１９７１）　７７３およびＦｅ
ｌｉｘ氏他、「Ｊ。

Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、Ｊ　９２　（１９７０）
　１３８５参照）を用いても製造されうる。（古典的方
法におけると同様に）固相合成においてはどのアミノ酸
がＣ−末端に存在するかは環状最終生成物にとって大し
た問題ではない、何故ならそれらは環化後には最早や確
認できないからである。

古典的なペプチド合成法に訃いては例えば接触水素添加
により除去されうる２−基または第二アミンにより除去
されうる９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基（
Ｆｍｏｃ基）がアミノ保ａ基として用いられ、一方オル
ニチンのａ−アミノ基またはリジンのε−アミノ基はＢ
ｏｃ基により保護されるのが好ましい。一般式■ａ〜Ｉ
Ｖｆを有するペプチドは段階的にまたは予め調製された
セグメントを介して合成されうる。

例えば本発明による式°！のペプチドの下記線状前駆物
質からすべて同じ最終生成物を生ずる。

Ｂｏｃ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｄ−
Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＮＨＮＨ２ＢＯＣ−ＬｙＩ３（Ｚ　）
　−Ｔｒｐ　−Ｐｈｅ　−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｐｈａ−Ｔｈｒ
−ＮＨＮＨ２Ｂｏａ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｈｅ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＮＨＮＨ２Ｂｏｃ−Ｐｈ
ｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｔｒ
ｐ−ＮＨＮＨ２Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−
Ｌｙｅ（Ｚ）−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨＮＨ２Ｂｏｃ−Ｐ
ｈｅ−Ｔｈｒ−Ｌｙ８（Ｚ）−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐ
ｒｏ−ＮＨＮＨ２トリプトファンをあまりに早期に鎖中
に導入しないということは、Ｂｏｃ保護基の除去に際し
て第三ブチル化の危険にさらされる度合いが少なくなる
という長所を有する。トレオニンが重合体担体に直接結
合すべき場合は、副反応を回避するためにＯＨ基は保護
する必要がある（例えばベンジルエーテルとして）。

しかしながらトレオニンが線状ペプチド鎖内で第２〜第
６位にある場合は、大抵はＯＨ保ｊ基は不要とされうる
。

線状前駆物質は例えばヒドロキシメチル化されたポリス
チレン樹脂で段階的に合成される。

このポリスチレンは例えば１％ジビニルベンゼンを用い
て架橋されている。これは通常小さな球状粒子の形態を
している。

アミノ酸はＮ−末端で保護されて使用される。

第１番目のＮ−保題されたアミノ酸がエステル形成によ
り支持体に結合される。アミノ保護基を除去したのち次
のＮ−保護されたアミノ酸をジシクロへキシルカルボジ
イミドのような結合試薬を用いて結合させる。所望の線
状前駆物質が得られるまでさらにアミノ酸の脱保護およ
び結合を続行する。

保膜基の選択はアミノ酸および結合法の如何による。

アミノ保護基としては例えばベンジルオキシカルボニル
（Ｚ）、ｐ−メトキシカルボベンゾキシ、ｐ−ニトロカ
ルボベンゾキシ、第三ブチルオキシカルボニル（Ｂｏａ
）等のような知られたウレタン保護基が適当である。

比較的緩和な酸（例えば有機溶媒中のトリフルオロ酢ｔ
ＲまたはＨＣｌ　）により除去されうるのでＢｏａ基が
好ましい。

トレオニンはすでに記載したようにベンジルエーテルと
して保護でき、そしてオルニチンのδ−アミノ基および
リジンの８−アミノ基は２−Ｍ導体として保護されうる
。これら２種の保護基はＢｏａ基に対する除去試薬に対
して最も広範な抵抗性を有しそして環化後に水素株化触
媒（Ｐｄ／活性炭）または例えば液体アン４ニア中のナ
トリウムを用いて水素添加分解することにより除去され
うる。

線状の保護されたはブチドはヒドラジンを用いて樹脂か
らとり外されうる。その場合ヒドラジドが生成し、この
ものはその場で亜硝酸を遊離する試薬を用いてアジドに
変換されうる。適当な試薬は塩酸、燐酸、スルホン酸等
のような強酸の存在下における亜硝酸低級アルキル（例
えば亜硝酸第三ブチルまたは亜硝酸イソアミル）または
亜硝酸アルカリ（例えば亜硝酸ナトリウムまたは亜硝酸
カリウム）である。この反応は種々の溶媒例えはＤＭＦ
％ＴＨＦ　、ジオキサン、メチレンクロライドまたはク
ロロホルム中−２０℃〜＋５００好ましくは一１５Ｃ〜
＋１００で行われうへ酸性アジド溶液を希釈しそして塩
基の添加により中和する。線状ペプチドは積比して環状
の、保護されたヘキサペプチドを生成する。

しかしながらヒドラジドはまたｒＩｎｔ、Ｊ。

Ｐｅｐｔ、　Ｐｒｏｔ、　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｊ　１７
　（１９８１）　６〜１１記載の方法に従い例えばＮ−
ブロモスクシンイミドを用いて遊離のカルボン酸に変換
されることもできる。従ってＮ−末端を脱保護したのち
にＤＣＣのような試薬を用いて環化することが可能であ
る。

環化後に一時的に導入された残りの保護基を除去する。

式Ｉを有するこの環状の未保護ペプチドは弐■の化合物
製造のための成分である。

環化粗生成物は好ましくはクロマトグラフィー特にゲル
濾過（例えばセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ６）　
／　ＤＭＦ使用）により精製される。

式Ｉの精製された未保＠壌状ペプチドをここでジカルボ
ン酸の無水物例えば無水コハク酸と反応させることがで
きる。かくして得られた修飾されたペプチドをさらに式
夏を有する他の環状の未保護ペプチドとＤＣＣまたはＨ
ＤＣＩ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミド塩酸塩）のような縮合剤を用いるこ
とにより反応させると弐ｉ（式中Ｙ−ＣＯ（ＣＩ（２）
ｎＣＯ）を有する二量体化合物が得られる。

弐ｎ（式中ｙ　＝　ＣＯ−ＣＨ２−０−ＣＯ−ＣＨ２−
０−（ＣＨ２−ＣＨ２−０−）を有する二量体は例えば
式Ｉを有する未保護ペプチドをジ５１　Ｈ（−ＱＣ−Ｃ
Ｈ２−０−（ＣＨ２−ＣＨ２−０）Ｉｎ−ＣＨ２−ＣＯ
ＱＨ（相当するグリ；−ルまたはポリグリー−ルから酸
化により得られる）を用いて二量化することにより得ら
れる。

さらに、式Ｉを有する未保ａｌｌ状ペプチドは基Ｚ　、
　ＣＯＣ４Ｈ５’またはＣＯＣ！４Ｈ４（ｐ−Ｎ３）を
運搬する試薬（例えばベンジルオキシカルボエルクロラ
イド、ベンゾイルクロライドまたはｐ−アジドベンゾイ
ルクロライド）を用い、塩基の存在下に相当する弐１の
保護されたペプチドに変換されうる。

生成物は好ましくはゲル濾過（例えばセファデックス／
　ＤＭＦ’　）により精製される。

本発明はまた医薬としての式ｌおよびｎを有する化合物
の使用、それら化合物を含有する医薬製剤、その農法お
よび医薬としてのそれらの使用にも関する。

本発明による式Ｉの環状ヘキサペプチドおよび弐…の壌
状二童体へキサペプチドはソマトスタチン（Ｍ）の生物
学的作用に必須である式Ｖを有する領域のレトロ配列を
含有している。

−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−（Ｖ）（Ｖｌ） テトラペプチドＶそれ自体は不活性である。

そのものが例えばｒＮａｔｕｒｅＪ　２９２．５５〜５
８　（１９８１）の記載と同様にして適当なジペプチド
を介して式纏のシクロヘキサにプチドに環化させること
によるかまたはｒＬｉｆｅ　Ｓｃｉ、Ｊ　５Ｌ　１１３
３〜１１４０（１９８２）記載の方法と同様にしてジス
ルフイツド橋を介して式■の異種環状ペプチドに環化さ
せることによりソマトスタチン類似配座にとり入れられ
てはじめて生物学的活性が出現する。

（■） ソマトスタチンおよび式■および■を有する類似体は多
数のはブチドホルモンおよびプロテオホルモンの分泌を
抑制する。

ソマトスタチンはまた種々の組織、例えば腸粘膜または
肝臓細胞を種々の有害因子から保護する。そこにプロス
タグランジンの保護作用と同様のものが存在する。例え
ばシステアミン、アルコールまたはファロイジンによる
中毒はソマトスタチンの「膜安定化作用」と対立する。

細胞毒により実験的に惹起されたラット肝細胞の病変は
ソマトスタチンを同時投与するかまたはソマトスタチン
で予め処理することによりかなり減少できた。

驚くべきことに、ソマトスタチン６〜１１の修飾された
レトロ配列を含有する式Ｉおよび皿を有する本発明によ
る化合物はソマトスタチンよりも強いＪａ１ｍ保護作用
を及ぼし、一方ソマドスタチンに特徴的な、しかししば
しば望ましからぬホル倚ン放出抑制が何ら存在しない。

細胞保護作用を検査するには下記方法が用いられる。

単離されたラット肝細胞でのコν一トおよびファロイジ
ン吸収の抑制 ソマトスタチンおよびここに記載される類似体は単離さ
れたラット肝細胞中におけるファロイジンおよびコール
酸の吸収を抑制する。その上ファロイジン吸収抑制とコ
レート吸収抑制は明らかに相関している。単離された肝
細胞はベリー（Ｂｅｒｒｙ）およびフレンド（Ｆｒｉｅ
ｎ４）氏による方法により誰のウィスター系ラットから
得られた。すべての実験は細胞の単離２時間以内に実施
された。細胞生命力試験はトリバンプルーを用いて実施
された。全細胞の８５〜９０％が細胞内部への染料の浸
透を何ら示さなかった。吸収抑制を測定するには、肝細
胞懸濁液（細胞２×１０６個／ｌｌｌ１ｇ、細胞蛋白質
４　ｍｇに相当）１−を試験すべき物質の種々の濃度と
３０秒間インキエベーションした。１４Ｃ−コール酸１
μモルシよびコレート６μモル、またはＡＨ−ＤＭＰ　
０．１モルおよびファロイジン６μモルを添加して１５
．４５．７５．１０５および１５５秒後、および５およ
び１０分後にそれぞれ試料１００μＬを採取して分析し
た。細胞と会合した放射性基質を遊離の配位子からシリ
コーン油ミクロ遠心法を用いて分離した。細胞ペレット
中の放射能をシンチレーションカウンターでリボルマ（
ｌｉｐｏｌｕｍａ）／ルマソルプ（ｌｕｍａｓｏｌｖｅ
）　／水（１００／　１０／２　ｖ／ｖ　）中で測定し
た。ファロイシン吸収またはコレート吸収の５０係抑制
を惹起する試験化合物の濃度を調べた。

ソマトスタチン　　　　　　　１０９ ｃｍ（−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｆｈｅ−’Ｉｈｒ−Ｌｙａ（Ｚ）
−Ｔ？ｐ−Ｆｍ−）　　　１　　　１５ｃｍ（−Ｄ−Ｐ
ｒｏ−Ｆｈｅ−’Ｉｈｒ−Ｌｙａ−Ｔｒｐ−Ｆｈｅ−）
醤 （ＣＨ２）２ ｃｍ（−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−’Ｉｈｒ−Ｌｙｓ令ｐ−
ｈ？）　　　　　　α１４〜０．１８単離されたラット
肝細胞におけるコレート吸収の５０係抑制 新規ペプチドは医薬として静脈、皮下、鼻内、舌下また
は経口により使用されうる。特にこれらは肝臓、膵臓外
分泌腺または消化管の急性病変の治療に大いに価値があ
る。

長期持続性作用を有するゆえに正常な体重を有する成人
には１日２〜３回α０５〜１（１１９ずつ皮下注射すれ
ば前記疾患の治療に充分である。舌下ではその５〜５０
倍量と見積られ、経口では１０〜２００倍鷲とされる。

鼻内適用では皮下で有効な量の５〜５０倍量を使用すべ
きである。

本発明による化合物は適当な医薬製剤中にて経口または
非経口で投与されうる。経口使用形態となすＫは、活性
化合物をその目的に慣用の添加剤例えば付形剤、安定剤
または不活性希釈剤と混合しそして慣用の方法により適
当な投与形態例えば錠剤、被覆錠、硬質ゼラチンカプセ
ル、水性、アルコール性または油性の懸濁液または水性
、アルコール性または油性の溶液となす。不活性の付形
剤としては例えばアラビアゴム、炭酸マグネシウム、燐
酸カリウム、乳糖、グルコースまたは殿粉特にコーンス
ターチが使用されうる。その際製剤化は乾式または湿式
顆粒として行われうる。油性付膨剤または溶媒としては
例えばヒマワリ油または魚類肝油のような植物油および
動物油が適当である。

皮下または静脈投与するには、活性化合物またはその生
理学的に受容されうる塩を所望の場合はそれに慣用の物
質例えば可溶化剤、乳化剤または他の助剤を用いて溶液
、懸濁液または乳濁液となす。新規な活性化合物および
相当する生理学的に受容されうる塩に対する溶媒として
は、例えば水、生理食塩溶液またはアルコール例えばエ
タノール、プロパンジオールまたはグリセリン、それら
と並んで糖溶液例えばグルコースまたはマンニトール溶
液、または前記した種々の溶媒の混合物が適当である。

継続的に静脈注入することにより（例えば連続点滴、ま
たは外部のまたは埋め込み自動計量装置）使用すること
もできる。

下記合成例により本発明を説明するが本発明はそれらに
限定されるものではない。

薄層クロマトグラフィー用の移動相の記号Ａ。

ＢおよびＣは下記の組成を有するものとする。

Ａｎ−ブタノール／酢＠／水　　　　　　３／１／ＩＢ
　　ＣＨＣＬ３／ＭｅＯＨ／酢酸　　　　９５１５１５
ＣＣＨ（／ｓ／ＭｅＯＨ／酢ｆｌ！　　　　　８０／２
０ＡＢｏｃ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔ
ｈｒ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−Ｎ２Ｈ３この線状ヘキサにプチ
ドの調製は重合体状支持体で行われる（メリフィールド
（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）合成）。

重合体状支持体の調製 １％ジビニルベンゼンを用いて架橋させたクロロメチル
ポリスチレンを知られた方法で所望のヒドロキシメチル
ポリスチレンに変換する。

はじめにクロロメチルポリスチレンをジメチルアセトア
ミド中で酢酸カリウムと反応させる。

このアセチル化されたメリフィールド樹脂を次にＤＭＦ
　（ジメチルホルムアミド）中でのヒドラジツリシスに
かける。この反応は定量的に進行する。

樹脂への第１番目のアミノ酸の縮合 メチレンクロライドで洗浄しそして予め膨潤されたヒド
ロキシメチルポリスチレン（４ｔ）、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（
Ｚ）−ＯＨｉ８　ｔ　（１０ミリモル）、ＤＣＣ（ジシ
クロへキシルカルボジイミド）２．１（１０ミリモル）
およびＤＭＡＰ　（４−ジメチルアミノピリジン）１２
５２（１０ミリモル）を振盪容器中でＣ１（２Ｃ２２６
０−中に懸濁する。この混合物を室温で５時間振盪する
。後処理は下記フローシートに示す。

また遊離のヒドロキシル基はメチレンクロライド中ピリ
ジンを添加してベンゾイルクロライドでエステル化する
ことにより保護する。

Ｂｏｃ保護基はメチレンクロ、？ｆ）’中ＴＦＡ（）リ
フルオロ酢酸）７Ｍ８Ａ（メタンスルホンＷＲ）を用い
て除去する。中和後にビクラート測定すると遊離アミン
含量についての値（例えば樹脂４２当り２．７４ミリそ
ル）が得られる。

同相合成用フローチャート １　　３　　　５　　　　６０　　　ＣＨ２Ｃ２，樹脂
５　　４　　２　　　５０　　　ＣＨ２ＣＬ２／ＭｅＯ
Ｈ１：　１４　　２　　２　　　５０　　　ＣＨ２Ｃ２
６５２５ＣＯ、ＣＯＨ２Ｃ２ ８２５５ＣＯ、ＣＯＨ２Ｃ２ゐ／ジオキサン１：１９　
　２　　３　　　５０　　　ＣＨ２ＣＬｚ／ＭｅＯＨ１
：１１０　　２　　３５０　　　ＣＨ２Ｃ２１１２５５
０２５ｄ　ＤＩＰＥＡ、　　１２５＋ｄＨ２ＣＡ２ １２　　５　　２　　　５０　　　ＣＨ２Ｃ２２１！Ｓ
　　　　　　　１　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　６０　　　　　　　ＣＨ２Ｃ２２，８ミリ４シレＢ
ｏｃ−鮎、　ＤＣＣ，ＨＯＢＴ １４　　４　　２　　　５０　　　ＣＨ２Ｃ２２／Ｍｅ
ＯＨ１：１１５　　２　　２　　　５０　　　ＣＨ２Ｃ
Ｌ２Ｈ２Ｃ風降反復 表中の略語は次のとおりである。

晶　　　アミノ酸 ＤＩＰＥＡ　　ジイソプロピルエチルアミンＤＭＡＰ　
　　４−ジメチルアミノピリジンＭｅ　ＯＨメタノール ＭＳＡ　　　メタンスルホン酸 樹脂でのペプチド鎖の延長 第２のおよびすべての後続のＢｏｃ−アミノ酸（８ミリ
七ル）をメチレンクロライド中等モル量のＤＣＣおよび
ＨＯＢＴ　（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）を用
いて結合させる。反応の終りにいわゆるクロ２ニル試験
（トルエン中のクロラニル、無水酢酸、反し６混合物か
ら得られる樹脂）で調べる。反応時間はａ５時時間的１
５時間でるる。

重合体からの線状前駆物質の分離 最後のアミノ酸を結合させたのち、保護基の除去は行わ
れない。過剰の反応体およびジシクロヘキシル尿素をも
洗い去ったのち、ペプチド樹脂をフリット上はげしく吸
引乾燥し、ＤＭＦ中に懸濁しそして無水ヒドラジン５−
を加える。

この混合物を室温で週末中攪拌する。線状前駆物質はこ
こでＤＭＦ中に溶解されたヒドラジドとして存在する。

樹脂を一過しそしてこの溶液を蒸発乾固させる。固形残
留物を水で浸漬する。

Ｂｏｃ−Ｔｈｒ−Ｌｙｅ（Ｚ）−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｐｈ
ｅ−Ｐｈｅ−ＮＨＮＨ２は溶解しない。固形物質を吸引
濾過し、デシケータ中Ｐ２Ｏ５で乾燥する。

収量：２．７１Ｐ＝理論量の９０　％（Ｂｏｃ−Ｌｙｓ
（Ｚ）−樹脂基準）＝理論量の６２．５％（Ｃｔ−樹脂
基準）融点：８２〜８５Ｃ（分解） Ｂｏａ保護基の除去 ＢｏＣ−へキサペプチド−ヒドラジド２ミリそル（２，
１８ｆ）を無水ＴＩＰＡ　（）リフルオロ酢Ｒ）９−中
に懸濁させそしてこの混合物を室温で２０分間攪拌する
。これに無水ジエチルエーテル１００−を加えそして析
出した白色固形物をフリット上で吸引Ｆ遇する。生成物
をジエチルエーテルで数回洗ったのちデシケータ中Ｐ４
０１ｏで乾燥する。これはＴＦＡ−Ｈ−Ｔｒｐ　−Ｐｈ
ｅ　−Ｄ−Ｐｒ　ｏ−Ｐｈｅ　−Ｔｈｒ　−Ｌｙｓ（Ｚ
）−Ｎ２Ｈ３・ＴＦＡである。収量は定量的である。

シフｏ　（−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｌｙｅ（Ｚ
）−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−）への環化 との環化はアジド法により行われる。２ミリモルのＨ−
Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｌｙｅ
　（Ｚ）−Ｎ２Ｈ３・２ＴＦＡをＤＭＦ　１５−中に溶
解させ、この溶液を−１８０に冷却しそして濃ＨＣＬ（
３６僑、αＥ３ｓｗｊ）　１０ミリモルおよび亜硝酸イ
ソインチル３ミリモル（α３６−）を加える。アジドが
一り℃〜−１００で生成する。この反応混合物を一２０
℃の冷ＤＭＦ　２　を中に移しそしてＤＩＰＥＡＳ、１
−で中和する。次にこの混合物を低温でさらに５時間攪
拌する。反応混合物全体を＋２Ｃ〜＋１０℃で３日間放
置する。濃縮後に残留する油状残留物をメタノール／水
中でイオン交換樹脂混合体と一夜攪拌する。粗生成物を
セファデックスＬＨ２０／ＤＭＦでクロマトグラフィー
する。

収量：　９４０ｍｙ＝理論ｊ？Ｄ　５　ｏ　Ｓ融点：１
３５〜１４５℃ ＴＬＣ：ＲｆＡｌ１８９ＲｆＢ０．１０ＲｆｃＩｌｌＬ
８６ＦＡＢ−ＭＳ　（Ｍ−１（（）＋：　９４１晶−分
析：　Ｐｒｏ　ｔｏｏ　　Ｔｈｒ　Ｏ，９１Ｐｈｅ　２
ｆ）９　　Ｌｙｓ２−保護基の除去 保護された環状ヘキサペプチド５００１９を溶媒として
のＭｅＯＨ中で触媒（１０％Ｐｄ／活性炭）１４０■お
よび蟻駿アンモニウム３００叩を添加して水素添加分解
することにより遊離の側鎖アミノ基を有する対応する化
合物に変換する。反応終了後触媒なＰ去し、Ｆ液を蒸発
させそして生成物を乾燥させる。

収量：定量的 融点：１７０〜１７５℃ ＴＬＣ：　ＲｆＢ　Ｏ，０１Ｒｆｃα１５無水コハク酸
との反応 脱保護された環状ペプチド１００８９（１２５μモル）
を少量のＤＭＦ中に溶解させそして無水コハク酸５０■
（５００μモル）を加える。この混合物を室温で一夜攪
拌し、蒸発乾固させ、そして少量の水を加える。修飾さ
れたペプチドであるシフｏ　（−０７Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−
Ｔｈｒ−Ｌｙｓ（ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＩ（）−Ｔｒ
ｐ−ｐｈｅ−）が沈殿し、これをフリット上に集め、数
回水洗しそしてデシケータ中でＰ４Ｏ１０で乾燥する。

収ｔ：９α６■＝理論量の８０％ 融点：１３７〜１４２℃ ＴＬＣ：　　ａｆＢα００　　Ｒｆｑ　Ｑ、７５二量化 ５（ｌｙのシクロ−（−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−
Ｌｙｓ（ＣＯ（ＣＨ２）ｚＣＯＯＨ）−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ
−）　（５５ｓモル）を少量のＤＭＦ中に溶解させ、７
０■のシクロ−（−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｌｙ
ａ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−）（８６，８μモル）および２１
■のＤＣＣ（１００μモル）を加える。この混合物を室
温で２日間攪拌する。幾分濃縮された反応混合物をセフ
ァデックスＬＨ２０／ＤＭＦでクロマトグラフィーする
。

収量：４５罵ｇ；理論量の４８．３係 融点：１７６〜１８ＣＯ、ＣＯ ＴＬＣ：　ＲｆＡ　Ｏ，７１ＦＬｆＢα００　　Ｒｆｃ
α７９二量体ペプチドの調製 Ｉ　　ＣＯ橋 リジンが脱保護された環状ペプチド０．１ミリモルをジ
メチルアセトアミド１−中に溶解させそしてこの溶液を
−２００に冷却する。これに攪拌下に１２．２冨９（０
，４当量）のビス（４−ニトロフェニル）カルボネート
を加え、この反応混合物を放置して温めそして室温でさ
らに２日間攪拌する。次にこれを濃縮しセしてペプチド
混合物を水で沈殿させる。濾過し、ｐ２ｏ５で乾燥させ
そしてセファデックスＬＨ２０でのゲルー過により単量
体および二量体を分離する。

収率：約５０％ ｎ　ジ酸による架橋 ジｌは　０．０４ミリモル（１当量）をジメチルアセト
アミド１−中に溶解させる。この溶液なＯＣに冷却しそ
してこれに攪拌下に５当量のＮ−エチル−Ｎ’−（Ｎ、
Ｎ−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（
２３■）、２．２当量のヒドロキシスクシンイミド（Ｉ
Ｑ、１重ｇ）および２．２当量のＮ、Ｎ−ジメチルアミ
ノピリジン（１１７１９）を加える。ＯＣ〜室温で１時
間攪拌後２．４当量のペプチドな好ましくは約−１０℃
で加える。冷却浴を放置して温めたのちこの混合物をさ
らに２〜３日間室温で攪拌する。後処理は前記１項記載
と同様にするかまたは反応混合物をセファデックス！、
１２０で直接分離することにより行なう。

収率ニジ酸の如何に応じ４０〜８０ｓ（ジ酸基準）単量
体フラクションは再循環されうる。

チロシン含有ペプチド中へのスルヘート導入（−ｏｓｏ
ｇＮａ） リジンが保護されたペプチド０．１ミリモルを室温で無
水ピリジン１−中に溶解させる。これに５００１１９の
ピリジン−８０３複合物を加えそしてこの混合物を２４
時間攪拌する。加水分解するために２０−の蒸留水を加
える。この懸濁液をイオン交換体カラム（Ｍｅｒｃｋ＠
　Ｌｅｗａｔｉｔ　ＣＰ　３０５０、Ｎａ形、を５ｆ含
有）に適用し圧縮空気をかけへ得られる帯黄色溶液を同
じイオン交換体でこんどは圧をかけずに再び処理する。

次に室温でこの溶媒混合物を完全に留去する。残留物か
ら硫酸化されたペプチドな無水メタノールを用いて抽出
しうる。しかしながら無機塩を完全に除去するには濾過
および遠心分離を伴なう第二の抽出段階が必要である。

粗収率：９２チ、ＨＰＬＣにより最終精製チロシン含有
ペプチド中へのホスヘート導入（−０ＰＯｓＮａｚ　ま
たは一０ＰＯｓＨＮ４）リジンが保護されたペプチド０
．１ミリモルを無水ピリジン２＋ｄ中に溶解させる。−
２ＣＯ、ＣＯでＰＯＣＬｓ　４６１９　（３当量）を加
える。この混合物を放置して０℃まで加温し、そしてこ
の温度で３時間、終りに室温で１０分間攪拌する。総反
応時間は４．５時間である。前記と同様にして加水分解
および後処理する。しかしながら抽出は無水エタノール
を用いて実施せねばならない。

粗収軍＝７５饅、ＨＰＬＣにより最終精製。

特許出願人　　へキスト・アクチェンゲゼルシャフト外
２名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式 I またはII ▲数式、化学式、表等があります▼ I ▲数式、化学式
   、表等があります▼II 〔式中、 ＲはＴｈｒ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｐｈｅまたは場合により
   エステル化されていてもよいＴｈｒであり、 ＳはＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｃ≡−ＣＨ＿２−ＮＨ＿２、ＣＨ
   ＿２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ＿２−ＮＨ＿２、ＣＯ−（ＣＨ＿２
   ）＿２−ＣＯ−Ｏ−（ＣＨ＿２−ＣＨ＿２−Ｏ）＿ｍ−
   ＣＨ＿３またはＣＯ−（ＣＨ＿２）＿２−ＣＯ−Ｏ−（
   ＣＨ＿２−ＣＨ＿２−Ｏ）＿ｍ−Ｈであり、ＴはＴｒｐ
   であり、 ＵはＰｈｅ、Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨＺ）または場合によりエ
   ステル化されていてもよいＴｙｒであり、 ＶはＤ−ＰｒｏまたはＤ−Ａｌａであり、 ＷはＰｈｅまたはＰｈｅ（ｐ−ＮＨＺ）であり、ＸはＨ
   、Ｚ、ＣＯ−Ｃ＿６Ｈ＿５、ＣＯ−Ｃ＿６Ｈ＿４（Ｐ−
   Ｎ＿３）またはＣＯ−（ＣＨ＿２）＿ｎ−Ｃ＿６Ｈ＿４
   （ｐ−ＯＳＯ＿３Ｎａ）であり、ＹはＣＯ−（ＣＨ＿２
   ）＿ｎ−ＣＯ（ここで最高３個のＣＨ＿２基がＯにより
   置換されていることができる）、ＣＯ、ＣＯ−Ｃ＿６Ｈ
   ＿４（Ｐ−ＣＯ）、ＣＯ−ＣＨ＿２−Ｏ−（ＣＨ＿２−
   ＣＨ＿２−Ｏ−）＿ｍ−ＣＨ＿２−ＣＯまたはＣＯ−Ｃ
   ≡Ｃ−ＣＯ、ＣＯ−（ＣＨ≡ＣＨ）＿ｎ−ＣＯであり、 Ｚはベンジルオキシカルボニルであり、 ｍは１〜１５の整数であり、そして ｎは１〜１６の整数である〕 を有する化合物ならびにその生理学的に受容されうる塩
   。 ２）ＲがＶａｌまたはＴｈｒ（ＯＳＯ＿３Ｎａ）であり
   、ＵがＴｙｒ（ＯＳＯ＿３Ｎａ）であり、 ＹがＣＯ−（ＣＨ＿２）＿ｎ−ＣＯ、ＣＯ−ＣＨ＿２−
   Ｏ−（ＣＨ＿２−ＣＨ＿２−Ｏ）＿ｍ−ＣＨ＿２−ＣＯ
   またはＣＯ−Ｃ≡Ｃ−ＣＯであり、 ｍが１０〜１２の整数でありそして、 ｎが４である ことからなる特許請求の範囲第１項記載の式 I または
   IIを有する化合物。 ３）特許請求の範囲第１項記載の式 I およびIIを有す
   る化合物を製造するにあたり、一般式IIａ〜IIｆ Ｈ−Ｒ−Ｓ（Ｒ＾１）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−ＯＨ（IIａ）
   Ｈ−Ｓ（Ｒ＾１）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−ＯＨ（IIｂ）
   Ｈ−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｖ−Ｒ−Ｓ（Ｒ＾１）−ＯＨ（IIｃ）
   Ｈ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−Ｓ（Ｒ＾１）−Ｔ−ＯＨ（IIｄ）
   Ｈ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−Ｓ（Ｒ＾１）−Ｔ−Ｕ−ＯＨ（IIｅ）
   Ｈ−Ｗ−Ｒ−Ｓ（Ｒ＾１）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−ＯＨ（IIｆ）
   （式中Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、ＶおよびＷは特許請求の範囲第
   １項記載の意味を有しそしてＲ＾１はδ−またはδ−ア
   ミノ基の保護基を表わす）の一つを有する線状ヘキサペ
   プチドを知られたペプチド合成法に従い環化させ、一時
   的に導入された保護基を適当な方法で除去し、そして次
   に式IIの化合物を製造するためにはかくして得られた式
   I を有する未保護環状ヘキサペプチド２個を基Ｙを介
   して二量化させ、そしてかくして得られた式 I または
   IIを有するペプチドを場合によりそれらの生理学的に受
   容されうる塩に変換することからなる方法。 ４）式IIIａ〜IIIｆ Ｂｏｃ−Ｒ−Ｓ（Ｒ＾１）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−ＮＨ−Ｎ
   Ｈ＿２（IIIａ）Ｂｏｃ−Ｓ（Ｒ＾１）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−
   Ｗ−Ｒ−ＮＨ−ＮＨ＿２（IIIｂ）Ｂｏｃ−Ｔ−Ｕ−Ｖ
   −Ｗ−Ｒ−Ｓ（Ｒ＾１）−ＮＨ−ＮＨ＿２（IIIｃ）Ｂ
   ｏｃ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−Ｓ（Ｒ＾１）−Ｔ−ＮＨ−ＮＨ
   ＿２（IIIｄ）Ｂｏｃ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−Ｓ（Ｒ＾１）−Ｔ
   −Ｕ−ＮＨ−ＮＨ＿２（IIIｅ）Ｂｏｃ−Ｗ−Ｒ−Ｓ（
   Ｒ＾１）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−ＮＨ−ＮＨ＿２（IIIｆ）（式
   中Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、ＷおよびＲ＾１は特許請求の範
   囲第３項に定義されたとおりである）の一つを有する線
   状ペプチド誘導体をＢｏｃ基を除去したのちその場で調
   製されたアジドを介して環化させそして次に一時的に導
   入された残りの保護基を除去することからなる特許請求
   の範囲第３項記載の方法。 ５）式IVａ〜IVｆ Ｒ＾２−Ｒ−Ｓ（Ｒ＾４）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｒ＾３（
   IVａ）Ｒ＾２−Ｓ（Ｒ＾４）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−Ｒ
   ＾３（IVｂ）Ｒ＾２−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−Ｓ（Ｒ＾４
   ）−Ｒ＾３（IVｃ）Ｒ＾２−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｒ−Ｓ（Ｒ＾
   ４）−Ｔ−Ｒ＾３（IVｄ）Ｒ＾２−Ｖ−Ｗ−Ｒ−Ｓ（Ｒ
   ＾４）−Ｔ−Ｕ−Ｒ＾３（IVｅ）Ｒ＾２−Ｗ−Ｒ−Ｓ（
   Ｒ＾４）−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｒ＾３（IVｆ）（式中Ｒ、Ｓ、
   Ｔ、Ｕ、ＶおよびＷは特許請求の範囲第１項記載の意味
   を有し、 Ｒ＾２はＨ、Ｚ、ＦｍｏｃまたはＢｏｃであり、Ｒ＾３
   はＯＨまたはＮＨ−ＮＨ＿２であり、そしてＲ＾４はＲ
   ＾２＝Ｈである場合はＺまたはＢｏｃ、Ｒ＾２＝Ｚまた
   はＦｍｏｃである場合はＢｏｃ、または Ｒ＾２＝Ｂｏｃである場合はＺを表わす）の一つを有す
   る化合物。 ６）特許請求の範囲第１項または第２項記載の式 I ま
   たはIIを有する化合物の医薬としての使用。 ７）医薬として使用するための特許請求の範囲第１項ま
   たは第２項記載の式 I または式IIを有する化合物。 ８）特許請求の範囲第１項または第２項記載の式 I ま
   たは式IIを有する化合物を含有する医薬。 ９）特許請求の範囲第１項記載の式 I または式IIを有
   する化合物またはその生理学的に受容されうる塩の有効
   量を製剤上適する付形剤と共に投与することからなる肝
   臓の急性病変の治療法。 １０）特許請求の範囲第１項記載の式 I または式IIを
   有する化合物またはその生理学的に受容されうる塩の有
   効量を製剤上適する付形剤と共に投与することからなる
   膵臓外分泌腺の急性病変の治療法。 １１）特許請求の範囲第１項記載の式 I または式IIを
   有する化合物またはその生理学的に受容されうる塩の有
   効量を製剤上適する付形剤と共に投与することからなる
   消化管の急性病変の治療法。