DE3614904A1 - Cyclische peptide mit cytoprotektiver wirkung - Google Patents
Cyclische peptide mit cytoprotektiver wirkungInfo
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Description
Die Erfindung betrifft cyclische Hexapeptide der allgemeinen
Formel I und cyclische dimere Hexapeptide der allgemeinen
Formel II
in der
R Thr oder Val;
S Lys oder Orn;
T Trp;
U Phe oder Phe(p-NHZ);
V D-Pro oder D-Ala;
W Phe oder Phe(p-NHZ);
X H, Z, COC6H5 oder COC6H4(p-N3);
Y CO(CH2) n CO oder CO-O-(CH2-CH2-O) m -CO;
Z Benzyloxycarbonyl;
m eine ganze Zahl von 1-6 und
n eine ganze Zahl von 2-10
bedeuten,
sowie deren physiologisch verträglichen Salze.
R Thr oder Val;
S Lys oder Orn;
T Trp;
U Phe oder Phe(p-NHZ);
V D-Pro oder D-Ala;
W Phe oder Phe(p-NHZ);
X H, Z, COC6H5 oder COC6H4(p-N3);
Y CO(CH2) n CO oder CO-O-(CH2-CH2-O) m -CO;
Z Benzyloxycarbonyl;
m eine ganze Zahl von 1-6 und
n eine ganze Zahl von 2-10
bedeuten,
sowie deren physiologisch verträglichen Salze.
Verbindungen der Formel I, welche eine freie Aminogruppe
enthalten, bilden Salze mit anorganischen Säuren, wie z. B.
Salzsäure, Schwefelsäure oder Phosphorsäure und mit organischen
Carbon- oder Sulfonsäure, wie z. B. Essigsäure,
Citronensäure, Benzoesäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Weinsäure
und p-Toluolsulfonsäure.
Die Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zur Herstellung
einer Verbindung der Formel I und Formel II, das dadurch gekennzeichnet
ist, daß man ein lineares Hexapeptid einer der
allgemeinen Formel IIa-IIf
H-R-S(R1)-T-U-V-W-OH (IIa)
H-S(R1)-T-U-V-W-R-OH (IIb)
H-T-U-V-W-R-S(R1)-OH (IIc)
H-U-V-W-R-S(R1)-T-OH (IId)
H-V-W-R-S(R1)-T-U-OH (IIe)
H-W-R-S(R1)-T-U-V-OH (IIf)
H-S(R1)-T-U-V-W-R-OH (IIb)
H-T-U-V-W-R-S(R1)-OH (IIc)
H-U-V-W-R-S(R1)-T-OH (IId)
H-V-W-R-S(R1)-T-U-OH (IIe)
H-W-R-S(R1)-T-U-V-OH (IIf)
in denen R, S, T, U, V und W vorstehende Bedeutungen haben
und R1 für eine Schutzgruppe der δ- oder ε-Aminofunktion
steht, nach bekannten Verfahren der Peptidsynthese cyclisiert,
temperär eingeführte Schutzgruppen in geeigneter
Weise abspaltet und anschließend zur Herstellung einer Verbindung
der Formel II zwei solcherart erhaltene ungeschützte
cyclische Hexapeptide der Formel I über eine Gruppe Y dimerisiert
und die so erhaltenen Peptide der Formel I oder II
gegebenenfalls in ihre physiologisch verträglichen Salze
überführt.
Eine einfache Verfahrensvariante ist z. B. dadurch gekennzeichnet,
daß man ein lineares Peptidderivat einer der
Formeln IIIa-IIIf
Boc-R-S(R1)-T-U-V-W-NH-NH2 (IIIa)
Boc-S(R1)-T-U-V-W-R-NH-NH2 (IIIb)
Boc-T-U-V-W-R-S(R1)-NH-NH2 (IIIc)
Boc-U-V-W-R-S(R1)-T-NH-NH2 (IIId)
Boc-V-W-R-S(R1)-T-U-NH-NH2 (IIIe)
Boc-W-R-S(R1)-T-U-V-NH-NH2 (IIIf)
Boc-S(R1)-T-U-V-W-R-NH-NH2 (IIIb)
Boc-T-U-V-W-R-S(R1)-NH-NH2 (IIIc)
Boc-U-V-W-R-S(R1)-T-NH-NH2 (IIId)
Boc-V-W-R-S(R1)-T-U-NH-NH2 (IIIe)
Boc-W-R-S(R1)-T-U-V-NH-NH2 (IIIf)
worin R, S, T, U, V, W und R1 wie oben definiert sind, nach
Abspaltung der Boc-Gruppe über in situ hergestelltes Azid
cyclisiert und anschließend die restlichen temperär eingeführen
Schutzgruppen entfernt.
nach Abspaltung der Boc-Gruppe über in situ hergestelltes Azid cyclisiert und anschließend restliche Schutzgruppen entfernt.
nach Abspaltung der Boc-Gruppe über in situ hergestelltes Azid cyclisiert und anschließend restliche Schutzgruppen entfernt.
Die Erfindung betrifft auch allgemein Verbindungen der
Formeln IVa-IVf
R2-R-S(R4)-T-U-V-W-R3 (IVa)
R2-S(R4)-T-U-V-W-R-R3 (IVb)
R2-T-U-V-W-R-S(R4)-R3 (IVc)
R2-U-V-W-R-S(R4)-T-R3 (IVd)
R2-V-W-R-S(R4)-T-U-R3 (IVe)
R2-W-R-S(R4)-T-U-V-R3 (IVf)
R2-S(R4)-T-U-V-W-R-R3 (IVb)
R2-T-U-V-W-R-S(R4)-R3 (IVc)
R2-U-V-W-R-S(R4)-T-R3 (IVd)
R2-V-W-R-S(R4)-T-U-R3 (IVe)
R2-W-R-S(R4)-T-U-V-R3 (IVf)
in denen R, S, T, U, V und W vorstehende Bedeutung
haben,
R2 H, Z, Fmoc oder Boc,
R3 OH oder NH-NH2 bedeuten und
R4 im Falle R2 = H für Z oder Boc, im Falle R2 = Z oder Fmoc für Boc oder im Falle R2 = Boc für Z steht.
R2 H, Z, Fmoc oder Boc,
R3 OH oder NH-NH2 bedeuten und
R4 im Falle R2 = H für Z oder Boc, im Falle R2 = Z oder Fmoc für Boc oder im Falle R2 = Boc für Z steht.
Die linearen Peptide der Formeln IVa-IVf können sowohl
klassisch als auch mittels Festphasensynthese hergestellt
werden. Bei der Festphasensynthese (wie auch bei der klassischen)
ist es für das cyclische Endprodukt unwesentlich,
welche Aminosäure C-terminal steht, da dies nach der
Cyclisierung nicht mehr feststellbar ist.
Bei der klassischen Peptidsynthese dient beispielsweise der
durch katalytische Hydrierung abspaltbare Z-Rest oder der
durch sekundäre Amine abspaltbare 9-Fluorenylmethyloxycarbonylrest
(Fmoc) als Aminoschutzgruppe, während die δ-Aminogruppe
des Ornithins oder die ε-Aminogruppe des Lysins vorzugsweise
durch den Boc-Rest geschützt wird. Die Peptide der
allgemeinen Formel IVa-f können stufenweise oder über
vorgefertigte Segmente aufgebaut werden.
Folgende linearen Vorläufer eines erfindungsgemäßen Peptids
der Formel I führen z. B. alle zum gleichen Endprodukt:
Boc-Thr-Lys(Z)-Trp-Phe-D-Pro-Phe-NHNH2
Boc-Lys(Z)-Trp-Phe-D-Pro-Phe-Thr-NHNH2
Boc-Trp-Phe-D-Pro-Phe-Thr-Lys(Z)-NHNH2
Boc-Phe-D-Pro-Phe-Thr-Lys(Z)-Trp-NHNH2
Boc-D-Pro-Phe-Thr-Lys(Z)-Trp-Phe-NHNH2
Boc-Phe-Thr-Lys(Z)-Trp-Phe-D-Pro-NHNH2
Boc-Lys(Z)-Trp-Phe-D-Pro-Phe-Thr-NHNH2
Boc-Trp-Phe-D-Pro-Phe-Thr-Lys(Z)-NHNH2
Boc-Phe-D-Pro-Phe-Thr-Lys(Z)-Trp-NHNH2
Boc-D-Pro-Phe-Thr-Lys(Z)-Trp-Phe-NHNH2
Boc-Phe-Thr-Lys(Z)-Trp-Phe-D-Pro-NHNH2
Tryptophan nicht allzu früh in die Kette einzufügen, hat den
Vorteil, daß es bei Abspaltung der Boc-Schutzgruppen weniger
oft der Gefahr der tert.-Butylierung ausgesetzt ist. Wenn
Threonin direkt an den polymeren Träger angekuppelt werden
soll, muß die OH-Funktion geschützt werden (z. B. als Benzylether),
um Nebenreaktionen zu vermeiden.
Steht Threonin jedoch an zweiter bis sechster Stelle in der
linearen Peptidkette, kann in der Regel auf eine OH-Schutzgruppe
verzichtet werden.
Die Synthese der linearen Vorläufer erfolgt z. B. schrittweise
an hydroxymethyliertem Polystyrol-Harz. Das Polystyrol ist
mit beispielsweise 1% Divinylbenzol quervernetzt. Es liegt
gewöhnlich in Form kleiner Kügelchen vor.
Die Aminosäuren werden N-terminal geschützt eingesetzt. Die
erste N-geschützte Aminosäure wird per Esterbildung am Träger
angebracht. Nach Beseitigung der Aminoschutzgruppe wird
die nächste N-geschützte Aminosäure unter Verwendung eines
Kupplungsreagenzes wie Dicyclohexylcarbodiimid angeknüpft.
Entschützen und Zufügen weiterer Aminosäuren wird fortgesetzt,
bis der gewünschte lineare Vorläufer erreicht ist.
Die Auswahl der Schutzgruppen richtet sich nach den Aminosäuren
und Kupplungsmethoden.
Als Aminoschutzgruppen kommen z. B. die bekannten urethanischen
Schutzgruppen wie Benzyloxycarbonyl- (Z), p-Methoxycarbobenzoxy-,
p-Nitrocarbobenzoxy-, t-Butyloxycarbonyl-
(Boc) und ähnliche in Frage.
Die Boc-Gruppe wird bevorzugt, da sie durch relativ milde
Säuren (z. B. Trifluoressigsäure oder HCl in organischen
Lösungsmitteln) abspaltbar ist.
Threonin kann, wie bereits erwähnt, als Benzylether blockiert
werden und die δ-Aminofunktion des Ornithins und die ε-Aminofunktion
des Lysins als Z-Derivat. Diese beiden Schutzgruppen
sind gegen die Abspaltungsreagenzien für die Boc-Gruppe
weitestgehend resistent und können nach der Cyclisierung
hydrogenolytisch mit einem Hydrierkatalysator (Pd/Aktivkohle)
oder z. B. mit Natrium in flüssigem Ammoniak entfernt werden.
Das lineare geschützte Peptid kann mit Hydrazin vom Harz
genommen werden. Dabei entsteht das Hydrazid, welches mit
einem Reagenz, das in situ salpetrige Säure freigesetzt, in
das Azid überführt werden kann. Geeignete Reagenzien stellen
niedere Alkylnitrite (z. B. t-Butylnitrit, Isoamylnitrit)
oder Alkalinitrite (z. B. Natriumnitrit, Kaliumnitrit) in gegenwart
starker Säuren wie Salzsäure, Phosphorsäure, Sulfonsäuren
usw. dar. Diese Umsetzung kann in verschiedenen Lösungsmitteln
wie DMF, THF, Dioxan, Methylenchlorid, Chloroform
bei Temperaturen zwischen -20° und +30°C, bevorzugt
zwischen -15° und +10°C, erfolgen. Die saure Azidlösung
wird verdünnt und durch Zugabe von Base neutralisiert. Das
lineare Peptid cyclisiert zum cyclischen, geschützten Hexapeptid.
Das Hydrazid kann jedoch auch z. B mit N-Bromsuccinimid
nach Int. J. Pept. Prot. Research 17 (1981) 6-11 in die
freie Carbonsäure überführt werden. Dann ist nach dem
Deblockieren des N-terminalen Endes eine Cyclisierung mit
Reagenzien wie DCC möglich.
Nach der Cyclisierung werden die restlichen temporär eingeführten
Schutzgruppen beseitigt. Diese cyclischen ungeschützten
Peptide der Formel I stellen die Bausteine für
die Herstellung einer Verbindung der Formel II dar.
Die Reinigung der Cyclisierungsrohprodukte erfolgt vorzugsweise
chromatographisch, insbesondere durch Gelfiltration
(beispielsweise an Sephadex (®) / DMF).
Das gereinigte ungeschützte cyclische Peptid der Formel I
kann nun kann nun mit dem Anhydrid einer Dicarbonsäure -
beispielsweise Bernsteinsäureanhydrid - zur Reaktion gebracht
werden. Weitere Umsetzung des so erhaltenen modifizierten
Peptides mit anderen cyclischen ungeschützten
Peptiden der Formel I unter Zuhilfenahme von Kondensationsmitteln
wie DCC oder EDCI liefert dimere Verbindungen der
Formel II mit Y = CO(CH2) n CO.
Dimere der Formel II mit Y = CO-O-(CH2-CH2-O-) m -CO erhält
beispielsweise durch Dimerisierung eines ungeschützten
Peptids der Formel I mit dem Chlorameisensäureester
Cl-CO-(CH2-CH2-O-) m CO-Cl (erhältlich aus dem entsprechenden
Glykol oder Polyglykol und Phosgen) oder dem entsprechenden
Hydroxysuccinimidester.
Weiterhin kann man das ungeschützte cyclische Peptid der
Formel I mit Reagenzien, welche die Gruppen Z, COC6H5 oder
COC6H4(p-N3) übertragen (z. B. Benzyloxycarbonylchlorid,
Benzoylchlorid oder p-Azidobenzoylchlorid), in Gegenwart
von Basen in die entsprechenden geschützten Peptide der
Formel I überführen.
Die Reinigung der Produkte erfolgt vorzugsweise durch Gelfiltration
(beispielsweise an Sephadex (®) / DMF).
Die Erfindung betrifft ferner die Verwendung der Verbindungen
der Formeln I und II als Heilmittel, pharmazeutische Präparate,
die diese Verbindung enthalten, Verfahren zu deren
Herstellung und deren Verwendung als Heilmittel.
Die erfindungsgemäßen cyclischen Hexapeptide der Formel I
und cyclischen dimeren Hexapeptide der Formel II enthalten
die Retro-Sequenz eines Bereiches der Formel V von Somatostatin
(VI), der für die biologische Wirkung essentiell ist.
-Phe-Trp-Lys-Thr- (V)
Das Tetrapeptid V ist für sich allein unwirksam. Erst wenn
es in eine somatostatinähnliche Konformation gebracht wird,
z. B. durch Cyclisierung über ein geeignetes Dipeptid zu
einem Cyclohexapeptid der Formel VII analog Nature 292,
55-58 (1981) oder durch Cyclisierung über eine Disulfidbrücke
zu einem heterodet cyclischen Peptid der Formel VIII
analog Life Sci. 31, 1133-1140 (1982), erscheint die
biologische Wirkung.
Somatostatin und Analoga der Formeln VII und VIII inhibieren
die Ausschüttung zahlreicher Peptid- und Proteohormone.
Somatostatin schützt auch verschiedene Gewebe, z. B. Darmschleimhaut
oder Leberzellen gegen unterschiedliche Noxen.
Hier besteht eine Analogie zur protektiven Wirkung der
Prostaglandine. Der Intoxikation durch z. B. Cysteamin,
Alkohol oder Phalloidin steht eine "membranstabilisierende
Wirkung" des Somatostatins gegenüber.
Läsionen von Rattenleberzellen, die experimentell durch
Zellgifte hervorgerufen werden, konnten bei gleichzeitiger
Gabe oder nach Vorbehandlung mit Somatostatin beträchtlich
reduziert werden.
Überraschenderweise üben nun die erfindungsgemäßen Verbindungen
der Formeln I und II eine stärkere cytoprotektive
Wirkung aus als Somatostatin, während die für Somatostatine
charakteristische, aber häufig unerwünschte Inhibierung
der Hormonfreisetzung nur marginal oder nicht vorhanden ist.
Zur Prüfung der cytoprotektiven Wirkung wurde folgendes
Verfahren eingesetzt:
Somatostatin und hier beschriebene Analoga inhibieren die
Aufnahme von Phalloidin und Cholsäure in isolierte Rattenleberzellen.
Phalloidin- und Cholat-Aufnahmehemmung korrelieren
dabei in eindeutiger Weise. Isolierte Hepatocyten wurden nach
der Methode von Berry und Friend aus männlichen Wistar Ratten
gewonnen. Alle Experimente wurden innerhalb von 2 Stunden
nach Zellisolation durchgeführt. Der Zellvitalitätstest wurde
mit Trypan-Blau durchgeführt: 85-90% aller Zellen zeigten
keinen Eintritt des Farbstoffs ins Zellinnere. Zur Messung
der Aufnahmehemmung wurden 1 ml Hepatocytensuspension
(2 × 106 Zellen/ml, entsprechend 4 mg Zellprotein) 30 Sekunden
lang mit veränderten Konzentrationen der zu testenden Substanzen
inkubiert. 15, 45, 75, 105, 135 Sekunden, 5 und 10
Minuten nach Zugabe von 1 µM 14C-Cholsäure plus 6 µM Cholat
oder 0,1 µM 3H-DMP plus 6 µM Phalloidin wurden jeweils 100 µl
entnommen und analysiert. Zellassoziiertes radioaktives
Substrat wurde von freiem Liganden mit der Silikonöl-Mikrozentrifugen-
Methode abgetrennt. Die Radioaktivität im Zellpellet
wurde in Lipoluma/Lumasolve/Wasser (100/10/2 v/v) in
einem Szintillationszähler bestimmt. Es wurden diejenigen
Konzentrationen der getesteten Substanzen ermittelt, die eine
50% ige Hemmung der Phalloidin- bzw. Cholataufnahme bedingen.
Die neuen Peptide können als Arzneimittel intravenös, subcutan,
intranasal, sublingual oder peroral eingesetzt
werden. Sie sind besonders in der Behandlung von akuten
Läsionen der Leber, des exokrinen Pankreas oder des Verdauungstraktes
von großem Wert.
Wegen der lang anhaltenden Wirkung reichen bei einem normalgewichtigen
Erwachsenen täglich 2-3 subcutane Injektionen
von je 0,05-10 mg zur Behandlung der genannten Erkrankungen
aus. Sublingual ist mit der 5-50-fachen Dosierung zu rechnen,
peroral mit der 10-200-fachen Dosierung. Bei der
intranasalen Applikation sollte die 5-50-fache Menge der
jeweils subcutan wirksamen Dosis angewandt werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können oral oder parenteral
in entsprechender pharmazeutischer Zubereitung verabreicht
werden. Für eine orale Anwendungsform werden die
aktiven Verbindungen mit den dafür üblichen Zusatzstoffen
wie Trägerstoffen, Stabilisatoren oder inerten Verdünnungsmitteln
vermischt und durch übliche Methoden in geeignete
Darreichungsformen gebracht, wie Tabletten, Dragees, Steckkapseln,
wäßrige, alkoholische oder ölige Suspensionen oder
wäßrige, alkoholische oder ölige Lösungen. Als inerte Träger
können z. B. Gummi arabicum, Magnesiumcarbonat, Kaliumphosphat,
Milchzucker, Glucose oder Stärke, insbesondere
Maisstärke verwendet werden. Dabei kann die Zubereitung
sowohl als Trocken- oder Feuchtgranulat erfolgen. Als ölige
Trägerstoffe oder Lösungsmittel kommen beispielsweise
pflanzliche und tierische Öle in Betracht, wie Sonnenblumenöl
oder Lebertran.
Zur subkutanen oder intravenösen Applikation werden die
aktiven Verbindungen oder deren physiologisch verträgliche
Salze, gewünschtenfalls mit den dafür üblichen Substanzen
wie Lösungsvermittler, Emulgatoren, oder weitere Hilfsstoffe
in Lösung, Suspension oder Emulsion gebracht. Als Lösungsmittel
für die neuen aktiven Verbindungen und die entsprechend
physiologisch verträglichen Salze kommen z. B. in Frage:
Wasser, physiologische Kochsalzlösungen oder Alkohole, z. B.
Ethanol, Propandiol, oder Glycerin, daneben auch Zuckerlösungen
wie Glucose- oder Mannitlösungen, oder auch eine
Mischung aus den verschiedenen genannten Lösungsmitteln.
Die Anwendung kann auch durch kontinuierliche intravenöse Infusion
(wie z. B. Dauerinfusion, externe oder implantierte automatische
Dosiervorrichtungen) erfolgen.
Das folgende Synthesebeispiel dient ausschließlich der Illustration
und stellt keine Beschränkung der oben genannten Methoden
dar.
ASAminosäure
DCCDicyclohexylcarbodiimid
DMFDimethylformamid
DIPEADiisopropylethylamin
DMAP4-Dimethylaminopyridin
EDCI1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimidhydrochlorid
HOBT1-Hydroxybenzotriazol
MeOHMethanol
MSAMethansulfonsäure
TFATrifluoressigsäure
A n-Butanol/Essigsäure/Wasser 3/1/1
B CHCl3/MeOH/Essigsäure95/5/3
C CHCl3/MeOH/Essigsäure80/20/3
Die Herstellung des linearen Hexapeptides erfolgt am polymeren
Träger (Merrifield-Synthese).
Mit 1% Divinylbenzol quervernetztes Chloromethylpolystyrol
wird in bekannter Weise in das gewünschte Hydroxymethylpolystyrol
überführt.
Man setzt zunächst das Chloromethylpolystyrol mit Kaliumacetat
in Dimethylacetamid um. Das acetylierte Merrifieldharz wird
dann einer Hydrazinolyse in DMF unterworfen. Die Umsetzungen
verlaufen quantitativ.
Mit Methylenchlorid gewaschenes und vorgequollenes Hydroxymethylpolystyrol
(4 g), 3,8 g (10 mmol) Boc-Lys(Z)-OH, 2,1 g
(10 mmol) DCC, 1,23 g (10 mmol) DMAP werden in 60 ml CH2Cl2
in einem Schüttelgefäß aufgeschlämmt. Die Mischung wird bei
Raumtemperatur 5 h geschüttelt. Die Aufarbeitung ist im nachstehenden
Fließschema dargestellt.
Noch freie Hydroxylgruppen werden durch Veresterung mit Benzoylchlorid
unter Zusatz von Pyridin in Methylenchlorid blockiert.
Die Abspaltung der Boc-Schutzgruppe wird mit TFA/MSA in
Methylenchlorid durchgeführt. Nach der Neutralisation liefert
die Pikratbestimmung einen Wert (z. B.: 2,74 mmol/4 g Harz) für
den Gehalt an freiem Amin.
Die zweite und alle weiteren Boc-Aminosäuren (8 mmol), werden
mit äquimolaren Mengen DCC und HOBT in Methylenchlorid angekuppelt.
Das Ende der Umsetzung wird durch den sogenannten
Chloraniltest (Chloranil in Toluol, Acetanhydrid, Harz aus der
Reaktionsmischung) ermittelt. Die Reaktionszeiten variieren
zwischen 0,5 h und ca. 15 h.
Nach Anknüpfen der letzteren Aminosäure unterbleibt die Schutzgruppenabspaltung.
Sind die überschüssigen Reaktionspartner
und auch der Dicyclohexylharnstoff ausgewaschen, wird das
Peptidharz auf der Fritte scharf trockengesaugt, in DMF suspendiert
und mit 5 ml absolutem Hydrazin versetzt. Man rührt
über's Wochenende bei Raumtemperatur. Der lineare Vorläufer
liegt nun als Hydrazid in DMF gelöst vor. Das Harz wird
abfiltriert und die Lösung zur Trockene eingeengt. Der
feste Rückstand wird mit Wasser digeriert. Boc-Thr-Lys(Z)-Trp-
Phe-Phe-Phe-NHNH2 geht nicht in Lösung. Der Feststoff wird
abgenutscht und im Exsikkator über Phosphorpentoxid
getrocknet.
Ausbeute:2,71 g = 90% d. Th. bezgl. Boc-Lys(Z)-Harz
= 62,5% d. Th. bezgl. Cl-Harz
Smp.:82-85°C unter Zersetzung
2 mmol (2,18 g) Boc-Hexapeptid-Hydrazid werden in 9 ml
absoluter TFA suspendiert und bei Raumtemperatur 20
Minuten gerührt. Man gibt 100 ml absoluten Diethylether
dazu und saugt den ausfallenden weißen Feststoff über
eine Fritte ab. Nach mehrmaligem Waschen mit Diethylether
wird über P4O10 im Exsikkator getrocknet. Es handelt sich
hierbei um TFA · H-Trp-Phe-D-Pro-Phe-Thr-Lys(Z)-N2H3 · TFA.
Die Ausbeute ist quantitativ.
Die Cyclisierung wird nach der Azidmethode durchgeführt.
2 mmol H-Trp-Phe-D-Pro-Phe-Thr-Lys(Z)-N2H3 · 2 TFA werden
in 15 ml DMF gelöst, auf -18°C gekühlt, mit 10 mmol konz.
HCl (36%ig, 0,8 ml) und 3 mmol Isopentylnitrit (0,36 ml)
versetzt. Das Azid bildet sich bei -8°C bis -10°C. Der
Ansatz wird in 2 l -20°C kaltes DMF überführt und mit 3,1 ml
DIPEA neutralisiert. Es wird noch drei Stunden bei
tiefer Temperatur gerührt. Der gesamte Ansatz wird 3 Tage
bei +2°C bis +10°C belassen. Der nach dem Einengen verbleibende
ölige Rückstand wird über Nacht in Methanol/
Wasser mit Mischbettionenaustauscher gerührt. Das Rohprodukt
wird an Sephadex LH20 / DMF chromatographiert.
Ausbeute:940 mg = 50% d. Th.
Smp.:135-145°C
DC:R fA 0,89 R fB 0,10
R fC 0,86
FAB-MS (M+H)⁺:941
AS-Analyse:Pro 1,00 Thr 0,91 Phe 2,09 Lys 1,00
300 mg geschütztes cyclisches Hexapeptid werden unter Zusatz
von 140 mg Katalysator (Pd/Aktivkohle, 10%ig) und
300 mg Ammoniumformiat in MeOH als Lösungsmittel hydrogenolytisch
in die entsprechende Verbindung mit freier
Seitenketten-Aminogruppe überführt. Nach Beendigung der
Reaktion wird vom Katalysator abfiltriert, eingeengt und
getrocknet.
Ausbeute:quantitativ
Smp.:170-175°C
DC:R fB 0,01 R fC 0,15
100 mg des entschützten cyclischen Peptides (125 µmol)
werden in wenig DMF gelöst und mit 50 mg Bernsteinsäureanhydrid
(500 µmol) versetzt. Man rührt über Nacht bei
Raumtemperatur, engt zur Trockne ein und versetzt mit wenig
Wasser. Das modifizierte Peptid cyclo-(-D-Pro-Phe-Thr-
Lys(CO(CH2)2COOH)-Trp-Phe-) fällt aus und wird auf einer
Fritte gesammelt, mehrmals mit Wasser gewaschen und im
Exsikkator über P4O10 getrocknet.
Ausbeute:90,6 mg = 80% d. Th.
Smp.:137-142°C
DC:R fB 0,00 R fC 0,75
50 mg cyclo-(-D-Pro-Phe-Thr-Lys(CO(CH2)2COOH)-Trp-Phe-)
(55 µmol) werden in wenig DMF gelöst, mit 70 mg cyclo-(-
D-Pro-Phe-Thr-Lys-Trp-Phe-) (86.8 µmol) und 21 mg DCC
(100 µmol) versetzt. Man rührt 2 Tage bei Raumtemperatur.
Die etwas eingeengte Reaktionsmischung wird an Sephadex LH20
/ DMF chromatographiert.
Ausbeute:45 mg = 48,3% d. Th.
Smp.:176-180°C
DC:R fA 0,71 R fB 0,00
R fC 0,79
Claims (7)
1. Verbindung der Formel I oder II
in der
R Thr oder Val;
S Lys oder Orn;
T Trp;
U Phe oder Phe(p-NHZ);
V D-Pro oder D-Ala;
W Phe oder Phe(p-NHZ);
X H, Z, COC6H5 oder COC6H4(p-N3);
Y CO(CH2) n CO oder CO-O-(CH2CH2-O-) m -CO;
Z Benzyloxycarbonyl;
m eine ganze Zahl von 1-6 und
n eine ganze Zahl von 2-10
bedeuten,
sowie deren physiologisch verträglichen Salze.
R Thr oder Val;
S Lys oder Orn;
T Trp;
U Phe oder Phe(p-NHZ);
V D-Pro oder D-Ala;
W Phe oder Phe(p-NHZ);
X H, Z, COC6H5 oder COC6H4(p-N3);
Y CO(CH2) n CO oder CO-O-(CH2CH2-O-) m -CO;
Z Benzyloxycarbonyl;
m eine ganze Zahl von 1-6 und
n eine ganze Zahl von 2-10
bedeuten,
sowie deren physiologisch verträglichen Salze.
2. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I
und II gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
man ein lineares Hexapeptid einer der allgemeinen
Formeln IIa-IIf
H-R-S(R1)-T-U-V-W-OH,6(IIa)
H-S(R1)-T-U-V-W-R-OH,6(IIb)
H-T-U-V-W-R-S(R1)-OH,6(IIc)
H-U-V-W-R-S(R1)-T-OH,6(IId)
H-V-W-R-S(R1)-T-U-OH,6(IIe)
H-W-R-S(R1)-T-U-V-OH,6(IIf)in denen R, S, T, U, V und die in Anspruch 1 genannten
Bedeutungen haben und R1 für eine Schutzgruppe der δ-
oder ε-Aminofunktion steht, nach bekannten Verfahren
der Peptidsynthese cyclisiert, temporär eingeführte
Schutzgruppen in geeigneter Weise abspaltet und anschließend
zur Herstellung einer Verbindung der Formel II zwei
solcherart erhaltene ungeschützte cyclische Hexapeptide
der Formel I über eine Gruppe Y dimerisiert und das so
erhaltene Peptid der Formel I oder II gegebenenfalls
in sein physiologisch verträgliches Salz überführt.
3. Verfahren gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet,
daß man ein lineares Peptidderivat einer der Formel
IIIa-IIIf
Boc-R-S(R1)-T-U-V-W-NH-NH2,6(IIIa)
Boc-S(R1)-T-U-V-W-R-NH-NH2,6(IIIb)
Boc-T-U-V-W-R-S(R1)-NH-NH2,6(IIIc)
Boc-U-V-W-R-S(R1)-T-NH-NH2,6(IIId)
Boc-V-W-R-S(R1)-T-U-NH-NH2,6(IIIe)
Boc-W-R-S(R1)-T-U-V-NH-NH2,6(IIIf)worin R, S, T, U, V, W und R1 wie im Anspruch 2 definiert
sind, nach Abspaltung der Boc-Gruppe über in situ hergestelltes
Azid cyclisiert und anschließend die restlichen
temporär eingeführten Schutzgruppen entfernt.
4. Verbindung einer der Formeln IVa-IVf
R2-R-S(R4)-T-U-V-W-R3,6(IVa)
R2-S(R4)-T-U-V-W-R-R3,6(IVb)
R2-T-U-V-W-R-S(R4)-R3,6(IVc)
R2-U-V-W-R-S(R4)-T-R3,6(IVd)
R2-V-W-R-S(R4)-T-U-R3,6(IVe)
R2-W-R-S(R4)-T-U-V-R3,6(IVf)in denen R, S, T, U, V und W die in Anspruch 1 genannten
Bedeutungen haben,
R2 H, Z, Fmoc oder Boc,
R3 OH oder NH-NH2 bedeuten und
R4 im Falle R2 = H für Z oder Boc, im Falle R2 = Z oder Fmoc für Boc oder im Falle R2 = Boc für Z steht.
R2 H, Z, Fmoc oder Boc,
R3 OH oder NH-NH2 bedeuten und
R4 im Falle R2 = H für Z oder Boc, im Falle R2 = Z oder Fmoc für Boc oder im Falle R2 = Boc für Z steht.
5. Verwendung einer Verbindung der Formel I oder Formel II
gemäß Anspruch 1 als Heilmittel.
6. Verbindung der Formel I oder Formel II gemäß Anspruch 1
zur Verwendung als Heilmittel.
7. Heilmittel enthaltend eine Verbindung der Formel I oder
Formel II gemäß Anspruch 1.
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19863614904 DE3614904A1 (de) | 1986-05-02 | 1986-05-02 | Cyclische peptide mit cytoprotektiver wirkung |
EP87106224A EP0248209A3 (de) | 1986-05-02 | 1987-04-29 | Cyclische Peptide mit cytoprotektiver Wirkung |
PT8479887A PT84798B (de) | 1986-05-02 | 1987-04-30 | Cyclische peptide mit cytoprotektiver wirkung |
DK224187A DK224187A (da) | 1986-05-02 | 1987-05-01 | Cycliske peptider, deres fremstilling og anvendelse |
JP62106472A JPS62263198A (ja) | 1986-05-02 | 1987-05-01 | 細胞保護作用を有する環状ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19863614904 DE3614904A1 (de) | 1986-05-02 | 1986-05-02 | Cyclische peptide mit cytoprotektiver wirkung |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE3614904A1 true DE3614904A1 (de) | 1987-11-05 |
Family
ID=6300032
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19863614904 Withdrawn DE3614904A1 (de) | 1986-05-02 | 1986-05-02 | Cyclische peptide mit cytoprotektiver wirkung |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS62263198A (de) |
DE (1) | DE3614904A1 (de) |
-
1986
- 1986-05-02 DE DE19863614904 patent/DE3614904A1/de not_active Withdrawn
-
1987
- 1987-05-01 JP JP62106472A patent/JPS62263198A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS62263198A (ja) | 1987-11-16 |
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8130 | Withdrawal |