JPS6322600A - 非ペプチド結合を有するペプチド合成方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は非ペプチド結合を含有するポリペプチドの合成
およびポリペプチド鎖の化学的改質に関する。

ポリペプチド鎖内のアミノ酸は通常、式−ＣＱ−ＮＨ−
の共有ペプチド結合によって結合されている。種々な酵
素（プロテアーゼ）がこの結合に作用して、これを加水
分解し、ポリペプチド鎖を２個以上の７ラグメントに分
解する。

ツエルケ（Ｓｔａｌｋｍ　）等〔ネイチャー（Ｎａｔｕ
−ｒｇ）２９９：５５５］はポリペプチドアンギオテン
シノーゲン内のペプチド結合の化学的変更によるアンギ
オテンシノーゲン同族体の形成を述べている。変更され
た結合は式−ＣＨ２−ＮＨ−を有し、これらの結合を含
む同族体の幾つかは生のアンギオテンシノーゲンに比べ
て大きい効力を有スることが判明している。この効力増
加はプロテアーゼが非ペプチド結合を開裂できないこと
によると仮定されている。同族体の幾つかはＮαＣＮＢ
Ｈ３の存在下でのアミノアルデヒドによるアミノ酸の還
元アルキル化によって溶液中に形成されるジペプチドか
ら合成された。同族体の合成が完成する前に、ジペプチ
ドはグル濾過とイオン交換クロマトグラフィによって精
製されている。

本発明は第一態様では、非ペプチド結合を有するポリペ
プチドの固相合成方法に関する。この方法は次の段階： ・　次式： ％式％（１１ 〔式中、Ｘは保護基を含み、Ｒ１はアミノ酸の側鎖基で
ある〕 を有するアミノアルデヒドを形成する；・　次式： ％式％（２１ 〔式中、Ｙは固相を含み、Ｒ１はアミノ酸の側鎖基であ
る〕 を有する錯体を形成する；および ・　ナトリウムシアノボロヒドリドの存在下でアミノア
ルデヒドを錯体と反応させて次式の化合物： を形成する から成る。次に望ましい場合には、このペプチド鎖にさ
らに付加的なアミノ酸を加えることができる。次にペプ
チドを固相から切り離してポリペプチドを放出して精製
する。

本発明は第二態様では、ペプチドの固相化学的改質方法
を特色とする。この方法は次の段階：・　次式： ％式％（４１ 〔式中、Ｒ５と８４は独立的に水素、分枝鎖または直鎖
の低級（Ｃｔ〜Ｃｍ）アルキル基、例えばメチル基また
はアリール基、例えばフェニル、ｐ−クロロフェニル、
またはナフチル基を表す〕 を有するカルボニル含有化合物を形成する；・　次式： ％式％ 〔式中、Ｙは同相を含み、Ｒ３はアミノ酸の側鎖基であ
る〕 を有する錯体を形成する：および ・　ナトリウムシアノボロヒドリンの存在下でカルボニ
ル含有化合物と錯体とを反応させて、次式の化合物： Ｒう ■ ＮＨ−ＣＨ−Ｃｏ−Ｙ を形成する から成る。

次に望ましい場合には、さらに付加的なアミン酸をペプ
チド鎖に加えることができる。次にペプチドを固相から
切り離して、ペプチドを放出して、精製する。好ましい
実施態様では、カルボニル含有化合物はホルムアルデヒ
ド（Ｒｓ＝Ｒａ＝Ｈ）　テロる。

本発明は第３態様では、ＮＨ，含有側鎖基を含むアミノ
酸サブユニット含有ペプチドの固相化学的改質方法に関
する。この方法は次の段階：・　次式： ％式％ 〔式中、Ｒ８とＲ１は秒車的に水素、分枝鎖または直鎖
の低級（Ｃ＋〜Ｃａ）アルキル基、例えばメチル、また
はアリール基、例えばフェニル、ｐ−クロロフェニル、
またはナフチルを表す〕 を有するカルボニル含有化合物を形成する：・　次式： ％式％ 〔式中、Ｘは保護基を含み、Ｙは固相を含み、Ｒ，−Ｎ
Ｈ，はＬｌｌｍ、オルニチンまたはジアミノ酪酸の側鎖
基である〕 を有する錯体を形成する；°および ナトリウムシアノボロヒドリドの存在下でカルボニル含
有化合物と錯体とを反応させて、次式の化合物： を形成する； ・　固相を切り離してペプチドを放出する；および ・　ペプチドを精製する から成る。好ましい実施態様では、カルボニル含有化合
物はアセトンであり、Ｒ６＃Ｈ２側鎖基はＬｙｓＯ側鎚
基である。

上記式（２）、（５）および（８）において、Ｙは固相
例えば樹脂に連続的にすでに結合している幾つかのアミ
ノ酸を含みつるか、またはＹは単独の固相から成りつる
。換言すると、非ペプチド結合はペプチドの２個のアミ
ノ酸を連結することができ、同ペプチド内の１対以上の
アミノ酸を連結することもできる。同様に、式（１）と
（８）におけるＸは１個または２（１！のアミノ酸を含
みうるが、オートメーションを容易にするためには、Ｘ
が保護基のみから成ることが望ましい。

この方法を用いて、例えばＬ　１１　ＲＨおよびソマト
スタチンならびにその同族体の、ヒトホルモンのような
、有用な合成ペプチドの耐蛋白質加水分解性を高め、イ
ンビボ半減期を長くすることができる。この方法の収率
、速度および実施の容易さは液相合成を用いる先行技術
の方法よりもかなり大きい。さらに、この方法を用いて
ポリペプチドを本来の場所で化学的罠変更することがで
きるので、この方法は例えばソマトスタチン、Ｌ　ＩＩ
ＲＨおよびそれらの治療的に有効な同族体の、ホルモン
とホルモン同族体のような、有用な合成ポリペプチドに
種々なアルキル基およびアリール基を導入するための簡
単かつ迅速で費用のかからない手段を与える。

本発明の他の特徴と利点は、本発明の好ましい実施態様
の次の説明および特許請求の範囲から明らかになるであ
ろう。

構造 非ペプチド結合とは、ポリペプチド鎖中０２つ以上のア
ミノ酸の間の−ＣｌＩ２−Ｎ１１−　部分を意味する。

保護基 適当な標準的アミノ酸保礁基を用いることができる。こ
のよっな保護基の例はＦＭＯＣ（フルオレニルメチルオ
キシカルボニル）およびＢＯＣ（ブチルオキシカルボニ
ル）である。これらの基はポリペプチド鎖合成中のアミ
ノ酸の非特異的反応を阻止する。

固相 固相はアミノ酸またはポリペプチド鎖が化学的に可逆結
合して、そこでポリペプチドの合成が行われうるような
化合物である。このような固相の例は樹脂、例えばクロ
ロメチル樹脂およびベンズヒドリルアミン−ポリスチレ
ン樹脂〔ベガバイオケミカル社（Ｖａｇａ　Ｂｉｏｃｈ
ａｍｉｃａｔ　、　Ｉｎｃ、）　：）である。

Ｒ。

Ｘ−ＮＨ−ＣＨ−ＣＨＯ 〔式中、ＸとＲ，は上記した通りである）を有する。こ
れらの化合物は一般にフエーレンツ（Ｆａｈｒａｎｔｇ
　）等［１９８３年、シンセシス（５ｙｎｉｈａａｉｓ
）　６７６　］が述べているように合成される。

〔式中、Ｒ，、Ｒ４、Ｒ，およびＲ１は上記した通りで
ある〕 を有する。これらの化合物は市販されているか、または
通常の方法を用いて合成することができる。

ソマトスタチン同族体 ソマトスタチンとその同族体は成長ホルモン放出抑制活
性を有するポリペプチドである。幾つかのソマトスタチ
ン同族体はコイ（Ｃｏｙ）等の米国特許第４，４８５．
１０１号（ここに参考文献として関係する）および、本
出願と同じ嬢渡人に譲渡された、１９８５年９月１２日
出願のコイ等の米国特許出願力７７５．４８８号（ここ
に参考文献として関係する）Ｋ述べられている。

合成 −Ｈに、ポリペプチドの非ペプチド同族体の合成は樹脂
に結合して保護されたアミノ酸またはポリペプチド鎗の
合成、および保護さｒしたアミノアルデヒドの合成、な
らびにナトリウムシアノボロヒドリドの存在下でのこれ
らの反応を含む。反応終了時に、非ペプチド同族体をさ
らに成長させ続けるか、または樹脂支持体から切り離し
て標準方法によって精製することができる。

実施例１ 第１図に関連して説明すると、Ｈａ　ｅ　−Ｄ−Ｔデル
アルデヒド（Ｂａｔ−１）−Ｔｒｐ−ＣＨｏ、　　３８
７ａｙ　。

１．２５ミリモル）をフエーレンツ等（上記文献）の方
法によって製造しく反応段階ＩとＩＩ）、無水ＤＭＦ　
５−中に溶解した。簡単に説明すると、これはジシクロ
へキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）と４−ジメチルアミ
ノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下でのＢｏ６−Ｄ−Ｔｒ
ｐとＣＨ，Ｎ１１（ＯＣＨ，）　・ＨＣｌとの反応によ
る中間体の形成および次のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ
）中でのこの中間体とＬｔＡＬＨとの反応による目的の
アルデヒドの形成を含む＠Ｂａｃ−Ｌｙｓ　（Ｃ１−２
＞−Ｖａｌ−Ｃｙｇ　（ＭｍＥｔｌ　）−Ｔｈｒ（Ｂｔ
ｌ）−ベンズヒドリルアミン樹脂（０，５ミリモル）を
標準方法によって、ベックマン（Ｂａｃｋｍａｎ　）　
９９０　Ｂ自動ペプチド合成装置を用いて製造した。Ｂ
ｏｃ保獲保全基チレンクロリド中での３３％ＴＦＡによ
る処理によって除去し、樹脂ＴＦＡ塩［Ｔ　Ｆ　Ａ　、
　ＮＨ，Ｌｙｓ　（Ｃ１−Ｚ）−Ｖａｔ−Ｃｙｇ　（Ａ
ｆｅＢｔ　ｌ　＞−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　ｔ　）−ベンズヒ
ドリルアミン樹脂〕を酢酸（ＡｃＯＩＩ）　　１％含有
無水ジメチルホルムアミド中に懸濁させた。

上記アルデヒドと樹脂ＴＦＡ塩を混合し、ナトリウムシ
アノボロヒドリド１（１０■（２ミリモル）を加えたく
反応■）。１時間撹拌した後に、樹脂混合物がニンヒド
リン反応に対して陰性であることが判明した、このこと
は遊離アミン基の完全な訪専体化を示唆した。

ソマトスタチンオクタペプチドの残りのアミノＨ（Ｔｙ
ｒ　、ＣＨＨＬ・よびＰｈｅ）を次に、保護段階、カル
ボジイミド結合およびＴＦＡ脱保膿を含む標準方法によ
って結合させた（反応■）。

遊離ペプチドアミドを標準条件下でのフッ化水素（ＨＦ
）／アニソールによる処理によって支持体から切り離し
、９０％酢酸／水中でのやや過剰なヨウ素（Ｉ、）によ
る処理によって環化した（反応■）。溶媒を留去した後
に、セファデックス（Ｓａｐｈａｄａｔ　）ＴＭカラム
中Ｇ−２５上での２Ｍ酢酸への溶離および次の直線勾配
の１０〜３０％アセトニトリル１０．１％トリフルオロ
酢ｅｋ用いたＣ、、−７リカ上での逆相分配クロマトグ
ラフィによって、粗ペプチドを精製した。精製したペプ
チド（収ｉ６３．４■）を幾つかの溶媒系での分析用畠
圧液体クロマトグラフィ（ｎＰＬｃ）と薄層クロマトグ
ラフィ（ＴＬＣ）によって均質性にした。この物質はメ
タンスルホン酸／トリプタミン加水分解物のアミノ酸分
析後に予想通りの比を示した。正しい割合でのＤ−Ｔｒ
ｐ−ＣＩＩ２ＮＨ−ＬｙｓブンイドジペブチドのイＩ在
はアミノ酸分析装置ＶＣＳ−ｋするジペプチドの信用で
きるサンプルの俗離位置との比較によって実証された。

塩化物イオン形のベンズヒドリルアミン−ポリスチレン
ｍ脂（１，３０ｆ　、　０．５ミリモル）を次の反応サ
イクル＝（ａ）メチレンクロリド：（ｂ）メチレンクロ
リド中３３％トリフルオロ酢１Ｒ（１分間と２５分間の
２回）；１ｃ１メチレンクロリド；（ｄ）エタノール：
（−１メチレンクロリド；（ハククロホルム９１０％ト
リエチルアミンを実施するようにプログラムしたベック
マン９９０Ｂペプチド合成装置の反応器に装入した。

中和した樹脂にＥａｃ−０−ベンジル−Ｔｈｒ　　とジ
イソプロピルカルボジイミド（各１．５ミリモル）を加
えて、１時間撹拌し、生成したアミノ酸樹脂を次に上記
洗浄プログラムの（ａｌ〜（／１段階に通して循環させ
る。次のアミノ［（１，５ミｌＪモル）は同じ方法によ
って上首尾に結合した：Ｂｏｅ−８−メチルベンジルー
Ｃｙｓ、Ｂｏａ−Ｖａｌ、　　次に、Ｂａｃ基をＴＥＡ
（トリフルオロ酢酸）処理によって除去した。フエーレ
ンツ等の方法（上記文献）によって調製したＢａｃ−Ｌ
ｙｍ　（カルボベンゾキシ）−アルデヒド（１，２５ミ
リそル）を無水ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）Ｓｍｊ
中に溶解して、ｌｄ脂ＴＦＡ塩懸濁液に加え、次にナト
リウムシアノボロヒドリド１（１０Ｉｎ９（２ミリモル
）を加えた。１時間撹拌した後、反応混合物はニンヒド
リン反応（１分間）に対して陰性であることが判明した
、このことは遊離アミノ基の完全な誘導体化を示唆して
いた。

ソマトスタチンの残りのアミノ酸のＢｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ
、　Ｂｏｃ−Ｔｙｒ　、　Ｂｏｃ−８−メチルベンジル
−Ｃｙａ　、　Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｍ　＋ｔｌ−次に、カ
ルポジ・ｆミド結合とＴ　ＦＡ脱保ｆｉｋ含む標準方法
によって結合させた。ｆｃ浄し乾燥した後に、完成した
樹脂は１．８７ｔであった。

樹脂に０℃において、アニソール（４−）と無水フッ化
水素（３６ｍ）とを混合して、４５分間撹拌して、樹脂
支持体からペプチドを切り離した。

乾燥した窒素気流下で過剰なフッ化水素を迅速に蒸発さ
せ、遊離ペプチドを沈殿させ、エーテルで洗浄した。次
に粗ペプチドを９０％酢酸８０〇−中に溶解し、これに
メタノール中Ｉ、を持続的な褐色が認められるまで加え
ることＫよって環化した。溶媒を真空除去する前に、溶
液を１時間撹拌した。生成した油状物を最少量の５０％
酢酸に溶解し、セファデックスＧ−２５のカラム（２，
５Ｘ１（１０Ｍ）上で溶離した。紫外線（ＵＶ）吸収と
薄層クロマトグラフィによって決定した、主要成分を含
むフラクションをプールし、蒸発させて少量にし、ホワ
ットマン（Ｗｈａｔｍａｓ　）　Ｌ　ＲＰ　−１オクタ
デシルシラン（１５〜２０μｍ）のカラム（２，５ｘ５
０ｃＩＩＬ）に塗布し、水中０．１％トリフルオロ酢酸
中の直線勾配置０〜５０％アセトニトリルによって溶離
した。フラクションｆＴＬｃと分析用ＩＩ　Ｐ　Ｌ　Ｃ
によって検査し、最大純展を示すフラクションをプール
した。この浴液を水から凍結乾燥をくり返して、白色の
フワフワした粉末７８ｍｇを得た。

この生成物はＨＰＬＣとＴＬＣによって均質性であるこ
とが判明した。酸加水分解物のアミノ酸分析はオクタペ
プチドの組成を実証した。

このペプチドを実施例２に述べた条件によって。

Ｂｏｃ−０−ベンジル−Ｔｈｅ、　Ｈｏｅ　−Ｇ−メチ
ルベンジル−Ｃｙｓ、Ｂｏｃ−Ｖａ１％Ｂａｃ−Ｌｙｓ
％Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌｙａ、　Ｈｏｅ　
−Ｄ　−Ｔｒｔおよび２−ブロモカルボベンズオキシ−
Ｔｇｒを用いて、ベンズヒドリルアミン情脂に結合させ
た。

次にＢｏａ　−ＣＩ／＃　（メチルベンジル）アルデヒ
ドを実施例２におけるように、Ｎａ　ＣＮＢ　Ｈｓとと
もに、樹脂に加えた。次に、残留アミノ酸、Ｂｏｃ−ｔ
ａｒｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ　−Ｐｈ−を実施
例２におけるように、加えた。最終樹脂は１．８４Ｓ’
であった。

この樹脂に対して実施例２に述べたように、フッ化水素
開裂とＩ、環化とを行った。凍結乾燥した生成物の重量
は８９ｍ９であり、この生成物はＨＰＬＣとＴＬＣによ
って均質性であることが判明した。酸加水分解物のアミ
ノ酸分析はオクタペプチドの組成を実証した。

上記の還元的アミノ化方法はＴデルとＣｙａ残基を含む
ペプチドに特に適用可能であり、ＢｔｌおよびＣｂｔ型
側鎖保護基に対しても適合し得る。

一般に、ポリペプチドのα−Ｎ−Ｒ（Ｒはアルキル基ま
たはアリール基である）同族体の合成は、樹脂に結合し
て保護されたアミノ酸またはポリペプチド鎖およびカル
ボニル含有化合物の合成ならびにナトリウムシアノボロ
ヒドリド存在下でのそれらの反応を含む。反応の実際の
効果はカルボニはポリペプチドのα−アミノ基の窒素原
子に結合したＣＨ基に転化することである。例えば、カ
ルある場合には、反応によってα−Ｎ−メチル部分が生
成する。ナトリウムシアノボロヒドリド反応の終了時Ｋ
、変化したペプチドを成長させ続けるか、または樹脂支
持体から切り離して、標準方法によってｍ製することが
できる。

成 第２図に関連して説明すると、ベックマン９９０Ｂ自動
ペプチド合成装置を用いて標準方法によっＣＴＦＡ　、
ＮＨ，−Ｌａｓ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）　−Ｐｒｏ−Ｇｌ
ｙ−ベンズヒドリルアミン樹脂（０，５ミリモル）を調
製した。次に樹脂ＴＦＡ塩にホルムアルデヒド（３７チ
ホルマリン）２ｄ’を混合し、ＤＭＦ（ジメチルホルム
アミド）／１％ＡａＯＨ（酢酸）甲のすｌ−ＩＪウムシ
アノボロヒドリド１．５ミリモルを加えた。樹脂混合物
をニンヒドリン反応に対して陰性にな９、遊離アミン基
が完全に誘導体化されてＮ−メチルアばノ基を形成した
ことを示す１で、撹拌した。

ポリペプチドの残りのアミノ酸（Ｄ−Ａｌａ。

Ｔｙｒ、　Ｓａｙ、Ｔｒｐ、ＨｉｓおよびｐＧ　ｌ　ｓ
　）を、保全段階、カルボジイミド結合およびＴＦＡ脱
保護を含めた標準方法によって結合させた。

次に遊離ペプチドアミドｆＨＦ／アニンールによる処理
によって、支持体から切り離し、標準条件下で精製して
、目的のポリペプチドを得た。

Ｃ，ポリペプチドの側鎖基Ｎ−Ｒ同族体一般Ｋ、ポリペ
プチドの側鎖基Ｎ−Ｒ同族体（Ｒはアルキル基またはア
リール基）の合成は、遊離アミノ基を含む側鎖を特徴と
する、樹脂に結合して、保護されたアミノ酸またはこの
ようなアミノ酸サブユニットを含むポリペプチド鎖を、
ナトリウムシアノボロヒドリドの存在下で、カルボニル
含有化合物と反応させることを含む。遊離アミン基を含
む側鎖を特徴とするアミノ酸には、Ｌｙｓ、オルニチン
およびジアミノ酪酸がある。こ脂に結合したアミノ酸ま
たはポリペプチドの側鎖の遊離アミン基の窒素に結合し
たＣＨ基に転化てせることである。例えば、カルボニル
化合物がア鎖を有するアミノ酸がＬｔｔｓ　（側鎖−（
Ｃ７’７２）！−〇Ｈ，ＮＨ２）である場合には、反応
によってε−Ｎ−イソプロピル部分が生ずる。ナトリウ
ムシアノボロヒドリド反応の終了時に、変化したペプチ
ドをさらに成長させ続けるか、またはｍ脂支持体から切
り離して、標準方法によって精製することができる。

上記合成方法を用いて、下記に述べるように、また本出
願と同日に出願でれ、本出願と同じ譲渡人に壌渡された
、コイ等の米国特許出頌第号（ここに参考文献として関
係する）に述べられているように、ＬＨＲＨアンタゴニ
ストを製造することができる。

第３図に関連１−て説明すると、Ａｅ−Ｄ−Ｎα１−Ｄ
−Ｐｈａ−Ｄ−Ｐんｇ−８ａｙ（Ｂｚｌ　）−Ｔｙｒ（
Ｂｚ（）−Ｄ−Ｌｙｓ　（ＦＡ（ＱＣ）−Ｐｈｇ−Ｄ−
Ｌｙｓ（ＦＭＯＣ）　−Ｐｒｏ　−Ｄ−Ａｌａ−ベンズ
ヒドリルアミン（０，２５ミＩＪモル）１４１１？Ｔ　
ｔ−ベックマン９９０Ｂ自動ペプチド合成装置内で標準
方法によって合成し、ｏ−Ｂｏｃ保護基の除去のために
は３３％ＴＦＡを用いた。Ｌｙｓ残基上のε−ＦＭＯＣ
保護基はこのような酸性条件に対しておよび次のクロロ
ホルム９１０％トリエチルアミンによる中和段階に対し
て完全に安定であった。次に樹脂をＤＭＦ（ジメチルホ
ルムアミド）中ピペリジンの５０％溶液５０１によって
約１２時間処理して、ＦＭＯＣをＬ１／３残基から除去
した。

Ｌｙｓ残基の遊離ξ−アミノ基を反応させ不ために、樹
脂にアセトン５ｊｌＩｔを混合し、これにＤＭＦ７）％
酢酸中ナトリウムシアノボロヒドリド１ミリモルを加え
た。次に樹脂混合物ヲニンヒドリン反応に対して陰性に
なるまで（約３時間）撹拌した；陰性のニンヒドリン反
応は遊離ξ−アミノ基がＮ−イソプロピルアミノ基に転
化されたことを示す。

矢に樹脂ｆＨＦ／アニソールによる処理によつ″′Ｃ支
持体から切り駈し、標準条件下で精製して、目的のポリ
ペプチドを得た。

Ａａ−Ｄ−Ｍａｌ−Ｄ−Ｐｈａ−Ｄ−Ｐんｇ−Ｅａｒ−
Ｔｙｒ−Ｄ−Ｌｙｊ（ｔＰｒ）−Ｐｈａ−Ａｒｇ−Ｐｒ
ｏ−Ｄ−Ａｌａ−アミドを上記方法の適当な変更方法を
用いて同じｆり万で製造する。

用途 本発明の方法を用いて、治療的または獣へ学的に重要な
ペプチド、例えばＬＨＲＨ，ＴＲＨおよびソマトスタチ
ンのようなホルモンおよびそれらの同族体を改質するこ
とができる。このような改質によってペプチドの化学的
安定性と効力を高めることができる。さらに、Ｎ−アル
キル基またはＮ−アリール基を導入することによって、
非アルキル化または卵子り−ルイピペプチドをヒト対象
に投与する場合にしばしばみられる、例えば皮膚刺激の
ような、好１しくない副作用を最小にすることができる
。さらに、本発明はアミノ酸への側鎖基（例えば、イン
プロピル）の添加を、費用をかけて、予め誘導体化した
アミノ酸を用いる方法に比べて、安価な方法で可能にす
る。

他の実施態様は特許請求の範凹から明らかである。

【図面の簡単な説明】

第１図は非ペプチド結合を特徴とする本発明のペプチド
の合成方法の概略図である。 第２図はα−Ｎ−メチル基を特徴とする本発明の化学的
に改質したペプチドの合成法の概略図である。 第３図はξ−イソプロピル基を特徴とする本発明の化学
的に改質したペプチドの合成法の概略図である。 （外４名） 手続補正書 昭和６２年　８月１２−日 特許庁長官　　小　川　邦人　殿 ２、発明の名称 非ペプチド結合を有するペプチド合成方法３、補正をす
る者 事件との関係　　特許出願人 住所 名称　ジ・アドミニストレーターズ・オブ・ザ・ツーレ
イン・エデュケイショナルφファント４、代理人 住　所　　東京都千代田区大手町二丁目２番１号新大手
町ビル　２０６号室 ５、補正の対象

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. （１）次の段階： （ａ）次式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｘは保護基であり、Ｒ＿１はアミノ酸の側鎖基で
   ある〕 を有するアミノアルデヒドを調製する、 （ｂ）次式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｙは固相であり、Ｒ＿２はアミノ酸の側鎖基で
   ある〕 を有する錯体を形成する、および （ｃ）前記アミノアルデヒドをナトリウムシアノボロヒ
   ドリドの存在下で前記錯体と反応させて、次式の化合物 ▲数式、化学式、表等があります▼ を形成する、 から成る、非ペプチド結合を有するポリペプチドの固相
   合成方法。
2. （２）前記アミノアルデヒドがＴｒｐアルデヒド、Ｌｙ
   ｓアルデヒドまたはＣｙｓアルデヒドである、特許請求
   の範囲第１項記載の方法。
3. （３）前記固相が樹脂である特許請求の範囲第１項記載
   の方法。
4. （４）前記樹脂がクロロメチル樹脂またはベンズヒドリ
   ルアミン−ポリスチレン樹脂である特許請求の範囲第３
   項記載の方法。
5. （５）前記ポリペプチドを環化する段階をさらに含む、
   特許請求の範囲第１項記載の方法。
6. （６）２個のアミノ酸が特許請求の範囲第１項記載の方
   法によつて導入した非ペプチド結合によつて結合されて
   いるペプチド。
7. （７）前記ペプチドがソマトスタチン同族体である特許
   請求の範囲第６項記載のペプチド。
8. （８）次の段階： （ａ）次式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＿３とＲ＿４は独立的に水素、分枝鎖または
   直鎖の低級アルキル基またはアリール基である〕 を有するカルボニル含有化合物を形成する；（ｂ）次式
   ： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｙは固相であり、Ｒ＿５はアミノ酸の側鎖基で
   ある〕 を有する錯体を形成する；および （ｃ）前記カルボニル含有化合物をナトリウムシアノボ
   ロヒドリドの存在下で前記錯体と反応させて次式の化合
   物： ▲数式、化学式、表等があります▼ を形成する、 から成る、ペプチドの固相化学的改質方法。
9. （９）前記固相が樹脂である特許請求の範囲第８項記載
   の方法。
10. （１０）前記樹脂がクロロメチル樹脂またはベンズヒド
    リルアミン−ポリスチレン樹脂である、特許請求の範囲
    第９項記載の方法。
11. （１１）前記カルボニル含有化合物がホルムアルデヒド
    である特許請求の範囲第８項記載の方法。
12. （１２）特許請求の範囲第８項記載の方法によつて製造
    したペプチド。
13. （１３）前記ペプチドがＮ−メチルロイシン基を含有す
    る特許請求の範囲第１２項記載のペプチド。
14. （１４）次の段階： （ａ）次式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＿６とＲ＿７は独立的に、水素、分枝鎖また
    は直鎖の低級アルキル基またはアリール基である〕 を有するカルボニル含有化合物を形成する；（ｂ）次式
    ： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｘは保護基を含み、Ｙは固相を含み、Ｒ＿８−
    ＮＨ＿２はＬｙｓ、オルニチンまたはジアミノ酪酸の側
    鎖基である〕 を有する錯体を形成する： （ｃ）前記カルボニル含有化合物をナトリウムシアノボ
    ロヒドリドの存在下で前記錯体と反応させて、次式の化
    合物： ▲数式、化学式、表等があります▼ を形成する： （ｄ）前記固相を切り離して前記ペプチドを放出させる
    ；および （ｅ）前記ペプチドを精製する、 から成るペプチドの固相化学的改良方法。
15. （１５）前記固相が樹脂である特許請求の範囲第１４項
    記載の方法。
16. （１６）前記樹脂がクロロメチル樹脂またはベンズヒド
    リルアミン−ポリスチレン樹脂である特許請求の範囲第
    １５項記載の方法。
17. （１７）前記カルボニル含有化合物がアセトンである特
    許請求の範囲第１４項記載の方法。
18. （１８）前記Ｒ＿８−ＮＨ＿２側鎖基がＬｙｓの側鎖基
    である特許請求の範囲第１４項記載の方法。
19. （１９）特許請求の範囲第１４項記載の方法によつて製
    造したペプチド。
20. （２０）前記ポリペプチドがε−イソプロピルリシン基
    を含有する、特許請求の範囲第１９項記載のペプチド。