JPH0314549A - アミノ酸をラセミ化せずに固相に結合させるのに有用な新規な化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、一般式（１） Ｒ， を有する固体担体に共有結合された保護アミノ酸に関す
る。式中、ＺはＮα保護基である。Ｂは、保護又は未保
護側鎖を有する１個以上のアミノ基である。好ましくは
、Ｂは１個のアミノ基である。

Ｒ，及びＲ，は、同種又は異種であり、そして水素、線
状又は分枝状の飽和又は不飽和アルキル、アリール及び
ベンジルよりなる群から選択される。好ましくは、Ｒ，
及びＲ，は両方とも水素である。Ａは、置換又は非置換
芳香族環である。好ましくは、芳香族環は置換又は非置
換ベンゼン環であり、この場合にベンゼン基はそのパラ
位置においてＣ及びＹに結合されそして置換基はアリー
ル、アルキル、ハロ、ニトロ、アルコキン及びこれらの
組み合わせよりなる群から遺択される。Ｙは、線状又は
分技状の飽和又は不飽和アルキル、アリール又はアラル
キル基を有する炭化水素鎖であり、そしてエーテル結合
を介してＡに結合されることができる。

好ましくは、Ｙは−（Ｏ）ｍｌｃＩＩ．）ｎ　（ここで
、ｍはｌ又はＯでありそしてｎは０〜１２の整数である
）である。Ｄは、固体担体上にある官能基であって、担
体をカルボニルに結合させるものである。

好ましくは、Ｄは、線状又は分枝状の飽和又は不飽和ア
ルキル、ア．リール又はアラルキル基を有する１個以上
の炭化水素鎖又は天然及び非天然アミノ酸よりなる群か
ら選択されるスベーサーに結合されることができる酸素
又は一Ｈ■−であり、しかしてスベーサーは酸素又は一
Ｎト結合を介してカルボニルに結合される。ＳＳは、官
能基Ｄを介してカルボニル基に結合される固体担体であ
る。好ましい固体担体は、Ｐ　ｅ　ｐ　ｓ　ｙ　ｎ　”
　，　Ｐ　ｅ　ｐ　ｓ　ｙ　ｎ　Ｋ−及びボリスチレン
樹脂である。

本発明の方法は、固相ベプチド合戊に使用することがで
きる誘導体化固体担体の経済的な製造手段を提供するも
のである。本法は、安価でしかも急速な反応速度で反応
する出発材料を利用するものである。更に、本発明は、
ミソチェル法で使用するようなＢｏｃ−アミノ酸−０−
Ｃｓ＋の如きＮα保護アミノ酸のセリウム塩又はコラン
ボ法で使用するようなｌ８−クラウン−６の如き高価で
しかも毒性の添加剤を使用する必要性を排除するもので
ある。

本発明の方法は、Ｃ一末端アミノ酸をそのラセミ化を招
くことなしに固体担体に固定させるための実用的で制御
した効率的な手段を提供するものである。かくして、本
発明の固相結合アミノ酸を使用して製造されるベブチド
は、従来の固相担体を使用して製造されるペブチドより
も良好な収率及び純度で製造される。

上記の化合物は、以下で詳細に記載する２つの経路によ
って合成することができる。また、これらの合或の中間
体も新規な化合物である。これらの合戊に好適な反応剤
については以下で更に詳細に説明する。

経路Ｉ 第一の経路では、離脱基Ｘを持つカルボン酸（ＩＩ）は
、縮合剤の存在下にアルコール、フェノール、チオール
、チオフェノール又は複素環式均等物と縮合反応を受け
て化合物（ＩＩＩ）を生成する。

Ｒｔ　　　　　　　　　　　　　　　　Ｒｔ■　　　　
　　　　　　　　　　　■ Ａ，Ｒ．、Ｒ，及びＹは、先に定義した如くである。

Ｘは、後続の合戊工程においてカルポキンレートによっ
て容易に置換され得る離脱基である。ここで規定する如
き離脱基は、それが結合された炭素原子を求電子性にし
これによってその炭素での求核性置換反応を容易にする
任意の電子吸引性置換基である。好ましい離脱基は任意
のハロゲンであるが、しかしメタンスルホニル、トリフ
ルオルメチルスルホニル又はｐ一トルエンスルホニルの
如きスルホニル基であってもよい。好ましい具体例では
、化合物（ｎ）は、４−プロムメチルフェノキン酢酸又
は４−ヨードメチルフエノキシ酢酸である。Ｗは、硫黄
原子か又は酸素原子のどちらかである。Ｒ，は、アルコ
ール、フェノール、チオール、チオフェノール又は復素
環式均等物に類似の基を表わす。Ｒ３がカルボニル保護
基として作用する限り、任意のアルコール、フェノール
、チオール、チオフェノール又は複素環式均等物を反応
剤として使用することができる。Ｒ，は、求核性作用に
対してカルボキシル基を活性化してもよく又はそうしな
くてもよい。もしＲ１がかような活性化基であるならば
、それは、Ｒ３が後続の合成工程において使用されるア
ミノ酸のカルボニル基に移動されない程に十分な安定性
を持つ化合物（Ｉｆｆ）を生成しなければならず、しか
もそれは式Ｉの化合物を生戊するように固体担体に結合
されたＤ原子による求核性置換に対して化合物（ＩＶ）
を感受性にするのに十分なだけ反応性でなければならな
い。Ｒ，がカルボニル活性化基でない場合には、それは
、Ｎα及び側鎖保護基に影響を及ぼさない条件下に除去
できなければならない。

Ｎα保護アミノ酸は、次いで、置換芳香族エステル（［
ｌＩ）に直接エステル化されて次の式（ＩＶ）Ｒ，　　
　　　０ 目 Ｚ−Ｂ−Ｃ−Ａ−Ｙ−Ｃ−Ｙ−Ｒ，　　　　　　　（１
’ｌ／　）Ｒｔ 〔式中、ＲＩ，　Ｒｔ、Ｙ，Ａ，Ｗ及びＲ３は先に規定
された如くである〕 の化合物を生戊する。Ｂは、カルボキシル基を介してこ
の化合物のベンジル性炭素に結合されたアミノ酸又はベ
ブチドを表わす。アミノ酸は、天然産アミノ酸又はその
変性種であってよい。Ｂは単一のアミノ酸として示され
ているけれども、ＢはＩ個よりも多くのアミノ酸を表わ
すことができることを理解すべきである。アミノ酸側鎖
は、側鎖保護基で任意に又は必然的に保護されることが
できる。Ｚは、Ｎα保護基である。用語「Ｎα保護基」
は、α窒素原子を介してアミノ酸に結合しかくしてアミ
ノ基を非反応性にすることができる構造を意味する。ま
た、Ｎ（ｘ保護基は、本発明の方法によって形成される
ペブチド結合を破断せずに除去することができるべきで
ある。好ましくは、２は、９−フルオレニルメチルオキ
シカルボニル保護基（ＦＩＩＩＯＣ）の如き塩基不安定
性保護基である。

エステル化工程では、Ｎα保護アミノ酸カルボキ／レー
ト陰イオンは、溶液状態で発生されそしてそのままで求
核剤として作用する。次いで、アミノ酸カルポキシレー
トの求核作用によって置換芳香族エステル（ＩＩＩ）の
ベンジル性炭素と共にエステル結合が形成される。

合戊の最終工程では、Ｎα保護アミノ酸エステル（ＩＶ
）は、先に記載の如き式（＋）の化合物を生戊するため
に触媒を使用して固体担体に直接結合される。

好ましい具体例では、ハロゲン化又はスルホン化カルポ
ン酸（Ｖ）が縮合剤の存在下に２．４−ジクロルフェノ
ールと縮合反応を受けて化合物（Ｖｌ）を生戊する。

Ｃ１２ 式中、ｍはＯ又はｌであり、そしてｎは０〜１２の整数
である。次いで、（Ｖｌ）の化合物はＮａ保護アミノ酸
にエステル化されて次の式 ０ ＣＱ の化合物を生成する。式中、Ｚ，Ｂ，ｍ及びｎは先に規
定した通りである。次いで、化合物（■）は、固体担体
に直接結合されて次の式 の化合物を生成する。ここで、各変数は先に規定した通
りである。

出発反応体として、置換芳香族カルボン酸である４−メ
チルフエノキシ酢酸が使用される。しかしながら、他の
置換芳香族カルボン酸を使用することもできる。第１図
で使用される略語については以下で説明する。

第一工程において、水酸化ナトリウムの如き適当な塩基
の存在下にｐ−クレゾールをクロル酢酸でアルキル化す
ることによって４−メチルフエノキシ酢酸（ａ）が製造
される。０−クレゾール又はｍ−クレゾールを使用して
４−メチルフェノキシ酢酸の他の異性体を得ることもで
きる。ヨード酢酸、ブロム酢酸又はこれらの均等物の如
き別のアルキル化剤を用いることもできる。反応は水性
若しくは適当な有機溶剤又はそれらの混合物中において
実施することができ、そして水酸化カリウム、水酸化リ
チウム、炭酸カリウム、炭酸セリウム、水酸化ナトリウ
ム、水素化ナトリウム、水素化カリウム又はこれらの均
等物を用いて反応に必要なタレゾレート陰イオンを形成
することができる。

生成物の分離のための反応混合物の酸性化は、水性塩酸
、硫酸、硫酸水素カリウム又はそれらの均等プロトン源
を用いて行われる。

後続の合戊工程では、溶剤としてクロロホルム又は四塩
化炭素を使用して４−メチルフェノキシ酢酸（ａ）がＮ
−プロムスクシンイミド（ＮＢＳ）によって臭素化され
て４−プロムメチルフェノキシ酢酸（ｂ）を生成する。

反応は、ペンゾイルペルオキシド又はその均等物の如き
遊離基開始剤の存在下に還流溶剤中で実施される。別法
として、反応は、Ｎ−プロムアセトアミド又はその均等
物の如き池の臭素化剤を使用して実施することができ、
そして光によって開始させることができる。同様に、ア
ルカン、プロモホルム、四塩化炭素又はこれらの均等物
を溶剤として用いることもできる。

次の合或工程において、４−プロムメチルフェノキン酢
酸（ｂ）の適当な活性エステルが形成される。この工程
は、縮合剤としてジシクロへキシルカルボジイミド（Ｄ
ＣＣ）を使用して（ｂ）の化合物を２，４−ジクロルフ
ェ／−ルと縮合させることによって行われる。反応は、
酢酸エチル、塩化メチレン、クロロホルム、ジオキサン
、テトラヒドロフラン、ジメチルホルミド又はこれらの
均等物の如き様々な有機溶剤中で実施することができる
。ペンタフルオル、ペンタクロル、２−ニトロ、２，４
−ジニトロ、４−ニトロ、２−クロル、４クロル、２，
　４．　５−　トリクロル、２−ブロム、４−ブロム、
これらのものの異性体又はこれらの均等物の如き他の置
換フェノールを用いて２．４−ジクロルフェニル−４−
プロムメチルフェノキシアセテート（ｃ）に類似の活性
エステル誘導体を提供することができる。この反応にお
いて２．４−ジクロルフェノールの代わりにトリクロル
エタノール、フェナシルアルコールの如き適当に置換さ
れたアルコール、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドの如き
Ｎ−ヒドロキン化合物、ヒドロキンル置換腹素環状物又
はこれらの均等物を用いることによって他の類似エステ
ルを得ることもできる。加えて、（ｂ）の化合物を適当
に置換されたチオールと縮合させることによって（Ｃ）
のチオエステル類似体を得ることもできる。（ｂ）から
（Ｃ）又は（ｂ）から（Ｃ）の上記類似体への転化につ
いて言えば、別の縮合剤又は縮合化学を用いることもで
きる。例えば、ジインプロビルカルボジイミド又はその
均等物の如き他のカルボジイミドを用いることができる
。

同様に、（ｂ）のカルボキシル活性化は、チオニルクロ
リド若しくはその均等物を経て（ｂ）をその酸クロリド
に転化させることによって、又はイソブチルクロルホル
メート、ピバロイルクロリド若しくはこれらの均等物を
経て混成無水物へ転化させることによって達戊すること
ができる。カルボキシル基活性化の池の公知法を用いる
こともできる。

ある場合には、第１図に示される後続の化学反応を実施
する前に、（Ｃ）をその沃化物誘導体である２．４−ジ
クロルフェニル−４−ヨードメチルフェ／キシアセテー
ト（ｄ）に転化させるのが有益になる場合がある。ハロ
ゲン交換反応は、アセトン中に入れた飽和無水沃化ナト
リウムをプロムメチル活性エステル（ｃ）に添加するこ
とによって実施される。この反応に対して、沃化ナトリ
ウムの代わりに、沃化カリウム又は均等沃化物を用いる
ことができ、そして溶剤としてアセトンの代わりにテト
ラヒドロフラン又はその均等物を用いることができる。

合或経路の次の工程において、ジイソプロビルエチルア
ミン（ＤＩＥＡ）の如き第三アミン塩基での中和によっ
て溶液状態で形成されるＦｍｏｃ−アミノ酸カルボキシ
レート陰イオンをアルキル化するのに臭化物（Ｃ）又は
沃化物（ｄ）誘導体のどちらかが使用される。Ｆｍｏｃ
は９−フルオレニルメチルオキシカルボニル保護基を意
味し、そしてＲはアミノ酸側鎖の構造を表わし、しかし
て選択した特定のアミノ酸に依存する。例えば、Ｒ＝Ｃ
Ｈ３のときにはアミノ酸はアラニン（ＡＱａ）であり、
そしてＲ　＝　ＣＨ（ＣＩ１３）−のときにはアミノ酸
はバリン（　ＶａＱ）である。アミノ酸側鎖であるＲは
、必要に応じて保護基の構造を含むことができる。この
原子をキラル中心として表わすのにα一炭素において星
しるしが使用される。かくして、この反応に対して各ア
ミノ酸のＤ又はＬエナンチオマーを用いることができる
。ハライド（Ｃ）又は（ｄ）を生或物であるＮα−９−
フルオレニルメチルオ牛シカルポニルアミノアシル−４
−オキシメチルフェノキシ酢酸−２．４−ジクロルフェ
ニルエステル（ｅ）に転化させる間には立体化学が完全
に維持される。かくして、光学的に純粋なＦｍｏｃ一保
護し−アミノ酸をエステル化で用いるときには、得られ
る生成物（ｅ）は、Ｌ一形のものでありそしてＤ異性体
で汚染されていない。

エステル化は、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルム
アミド、Ｎ−メチルビロリドン、アセトン及びこれらの
均等物を含めた様々な溶剤又は溶剤混合物中で実施する
ことができる。有効な保護アミノ酸カルボキシレートを
形成するのに別の塩基又は水素結合化学剤を用いること
ができる。

これらの例としては、トリエチルアミン、トリブチルア
ミン、炭酸セリウム若しくはカリウム、徂炭酸セリウム
若しくはカリウム、Ｎ−メチルモルホリン、弗化カリウ
ム又はこれらの均等物が挙げられる。好ましくは、Ｆｍ
ｏｃｂ＜Ｎα一保護基として使用される。しかしながら
、ペブチド合或に対して、ｔ−ブチルオキシカルボニル
（Ｂｏｃ）　、ジチオスクシニル（ＤＬｓ）　、カルボ
ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）　、２−−ニトロ
ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）　、｝リフルオルア
セチル、２−ｐ−ビフエニルイソブロビルオキシカルボ
ニル（Ｂｐｏｃ）、４−メトキシベンジルオキシカルボ
ニル（　Ｐｍｚ）、トンル、トリチル、メトキシ置換ト
リチル、９ーフェニルフルオレニル、２−ニトロフェニ
ルスルフェニル（Ｎｐｓ）　、ベンジル、ｐ−ニトロ力
ルポベンジルオキシ力ルボニル（　Ｐ−ＮＯｔＣｂｚ）
　、ｔ−アミルオキシカルボニル（＾ｏｃ）　、２　−
　（３．５−ジメチルオキシフエニル）一ブロビル−（
２）一オキシカルボニル（Ｄｄｚ）　、２．２　−　［
ビス（４−ニトロフェニル）〕−エチルオキシカルボニ
ル（　Ｂｎｐｅｏｃ）、アダマンチルオキシカルボニル
（Ａｄｏｃ）　、２，　２．　２−トリクロルエチルオ
キシカルボニル（　Ｔｒｏｃ）、並びに種々の置換類似
体及び異性体並びにこれらの均等物の如き他の保護基を
用いることができる。

表１は、第１図に示すように沃化物（ｄ）又は臭化物（
Ｃ）誘導体及び適当なＮα−Ｆｍｏｃ−アミノ酸を経て
製造された種々のカルボキシ官能化ＮαＦＩ１ｏｃ保護
アミノ酸（ｅ）を示している。表ｌに記載した誘導体の
すべてのプロトンＮＭＲスペクトルは、予想構造と一致
した。プロセスは、ベプチド合成に有用な側鎖保護基の
完全な範囲に適合する。表１　（使用する略語について
は表１の註書を参照されたい）に示す側鎖保護基の他に
、プロセスを他の側鎖保護基に対して、例えばＣｂｚ、
種々のクロル、ブロム及びメチル置換Ｃｂｚ基、Ｐｍｚ
，　ｐ−ＮＯｔＣｂｚ，Ａｏｃ，　Ａｄｏｃ，　Ｂｐｏ
ｃ，　　！−リフルオルアセチル、Ｎｐｓ，Ｎｌ）ｙｓ
，　　トシル、種々の置換トシル、Ｄｔｓ，　Ｄｄｚ，
Ｂｎｐｅｏｃ，　ヘンジル及ヒ種々のクロル、ブロム、
ニトロ及びメトキシ置換ベンジル、ジニトロフェニル（
Ｄｎｐ）　、ｔ−ブチルオキシメチル（Ｂｕｍ）　、ベ
ンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）　、置換トリチル、９フ
ェニルフルオレニル、Ｅ換ｔ−ブチル、トリクロルエチ
ル、ニトロベンジル、Ｔｒｏｃ，フェナシル、２．　２
，　５，　７．　８−ペンタメチルクロマン−６−スル
ホニル（Ｐｍｃ）　、べ冫ジドリルアミン（ＢＨ＾）、
メチルベンジドリルアミン（　Ｍｂｈａ）　、キサンチ
ル（Ｘａｎ）　、２，４．６−　トリメトキシベンジル
（　Ｔｇ＋ｏｂ）並びに種々の置換類似体、異性体又は
これらの均等基に対して用いることもできる。

Ｆ會Ｏｅ−アミノ酸誘導体（ｅ） （ｔＢｕ） （ｔＢｕ） （ｔＢｕ） （Ｔｒｔ） （Ｍｔｒ） （Ｍｂｈ） （Ｍｂｈ） （Ｂｏａ） （ｔＢｕ） （ｔＢｕ） （ｔＢｕ） （八ａｍ） 表 ■ ｍ．ｐ．　（’Ｃ） １２０−２ ７５−８１ ７４−７ ６２−５ １３６−９ ９２−５ ７５−８ １０１−３ ６１−５ ９０−９５ 無定形固体ｂ 無定形固体ｂ 無定形固体ｂ １２０−５ １９３−５ １．５９−６５ 無定形固体ｂ ８５−９ ＋１０−９０ １０９−１１ ９５−８ 無定形固体 無定形固体 無定形固体 ａ．　粗収率 ｂ．　これらの物質は高減圧下に“フォーム”を生成し
、このフォームは容易に取り扱われ見掛け上安定な粉末
を生成するために物理的に破断することができるＣ．　
側鎖保護基に対して用いた略語（カツコ内）は次の通り
である Ｂｏｃ−　ｔ　−　プチルオキシカルボニル；ＬＢｕ＝
ブチル； Ｔｒｔ＝トリミノレ； Ｍｔｒ＝　４−メトキシー２，３．６−トリメチルベン
ゼンスルホニル； Ｍｂｈ＝　４．　４’−ジメトキシベンゾヒドリル；Ａ
ｃｍ−アセトアミドメチル 最終工程（第１図）において、官能化Ｎα−Ｆｍｏｃア
ミノ酸エステル（ｅ）はＤ−ＳＳ　（ここで、Ｄはある
求核性基である）によって表わされる固体担体に直接結
合されるが、これは化合物（ｆ）を生戊するアミノ又は
ヒドロキシルのどちらであってもよい。担体への結合は
、触媒の使用によって促進される。触媒は、ピリジン、
４−ジメチルアミノピリジン（Ｄ！ＪＡＰ）　、Ｎ−メ
チルイミダゾール、１一ヒド口キシベンゾトリアゾール
（ＩＩＯＢＴ）又はこれらの均等物であってよい。結合
反応は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）　、ジメチル
アセトアミド（ＤＭＡ）　、Ｎ−メチルピロリドン（Ｎ
ＭＰ）　、塩化メチレン、又はこれらの混合物又はこれ
らの均等物を使用して実施することができる。この方法
によって官能化される固体担体は、ベプチド合或に現在
広く使用されている物質に基づくもの、例えばｌ％ジビ
ニルベンゼン（１％ＤＶＢ）一架橋ボリスチレン、架橋
ポリジメチルアクリルアミド（市場で人手できるＰｅｐ
ｓｙｎ及びＰｅｐｓｙｎＫ樹脂）、様々な架橋度及び官
能化度を有するそれらの均等物、官能化され制御された
孔を持つガラス、並びに官能化ポリビニリジンジフルオ
リド又はポリプロピレン基材膜の如き実験室的重合体、
官能化シリカ又はアルミナ及びセラミック物質、又は求
核性基を組み込むことができる他の不溶性物質であって
よい。

経路■ 式１の固体担体結合アミノ酸は、別の経路を用いて合成
することができる。この経路では、アミノ酸のエステル
化に先立って結合体（　ｅｉｎｋｅｒ）が固体担体に結
合される。本明細書で用いる用語「結合体」は、アミノ
酸と固体担体との間にあって両者を結合する化合物の一
部分を表わす。エステル化の間、ヘンジル仕離脱基は、
アミノ酸のカルボキシレートによって求核性作用を受け
る。また、このエステル化によって、アミノ酸はラセミ
化を起こさずに固体担体に結合される。

第二経路では、化合物■は、Ｘをヒドロキシル基に転化
させるために水酸化物源で処理される。

次いで、得られた化合物は、任意としての触媒の存在下
に、式（ＩＸ） Ｒ，　　　０ ２ ＨＯ−Ｃ−Ａ−Ｙ−Ｃ−Ｄ−ＳＳ　　　　　（ＩＸ　）
Ｒ之 の固体担体結合化合物を形成するために固体担体と縮合
される。

次いで、化合物■のヒドロキシル基は、ハロゲン又はス
ルホニルの如き離脱基に転化される。得られた化合物は
、先に記載の如く式ｌの化合物又は好ましい化合物（■
）を生戊するためにＮａ保護アミノ酸による離脱基の置
換を受ける。

好ましくは、ハロゲン化芳香族カルボン酸類似体が水酸
化源と反応されてヒドロキシ置換芳香族カルボン酸（Ｘ
）を生成する。

０ 化合物（Ｘ）は、次いで、官能化担体に縮合されて式（
ＸＩ）の化合物を生或する。

０ 化合物（Ｘ［）のヒドロキシル基は、次いで、離脱基に
よって置換される。後続工程において、離脱基は、Ｎα
保護アミノ酸によって置換されて式■の化合物を生成す
る。

経路■では、第２図のフローシ一トに示されるように、
ラセミ化を招かずにアミノ酸をベプチド合成固体担体に
結合させるのを促進するために出発材料としてブロム酸
（ｂ）が使用された。

最終工程において、水性ＮａｌｌＣＯ，の作用によって
ブロム酸（ｂ）がヒドロキシ酸（ｇ）に転化される。

この転化に対して、適当なｐｎに緩衝された他の水性塩
基（水酸化物源）を用いることもできる。これらの例と
しては、水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩又はこれらの均等
物のリチウム、ナトリウム、カリウム、セリウム、マグ
ネシウム、カルシウム及びバリウム塩が挙げられる。後
続工程において、ヒドロキシ酸（ｇ）は、ある求核性官
能基Ｄ（これはヒドロキシル又はアミノであってよい）
を有する固体担体と縮合される。縮合は、触媒として１
−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＩＩＯＢＴ）を用い
て又は用いずにジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣ
Ｃ）の如きカルボジイミドを使用して実施することがで
きる。Ｎ−ヒドロキ７スクシンイミド又はその均等物の
如き他のアシル化触媒を用いることもできる。また、官
能化担体（ｈ）を製造するために（ｇ）の活性エステル
誘導体を固体担体との縮合に用いることができる。第１
図の経路に関連して先に説明したようにカルボキンル活
性化の他の公知法を用いて誘導体（ｈ）を製造すること
ができる。この方法における重要な工程は、ヒドロキシ
メチル担体（ｈ）をクロルメチル担体（ｉ）に転化させ
ることである。これは、ジオキサン中において（ｈ）を
４Ｎ−１１ｃ１２と室温で反応させることによって達成
された。この塩素化に対して、酢酸エチル、テトラヒド
ロフラン、酢酸、塩化メチレン、エーテル、水又はこれ
らの溶剤の混合物又はこれらの均等物の如きジオキサン
以外の溶剤を用いることもできる。ハロゲン又は他の離
脱基によるヒドロキシル基の置換のための池の公知反応
剤及び方法を用いることもできる。かかる反応剤として
は、ＣＣ１２．又はＣＢｒｉ中に入れたＰＣＩ２，、Ｐ
ＣＱｓ、ｐｏｃＱ．、トリフェニルホスフィン、適当な
溶剤中に入れたＩＩ　Ｂ　ｒ、ピリジン又はジイソブ口
ピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）の如き適当な塩基と溶液
状にしたＰＢｒ３、アリール及びアルキルスルホニルク
ロリド若しくはブロミド又はこれらの均等物が挙げられ
る。最終工程において、保護アミノ酸は、先に組み込ん
だ離脱基の求核性置換によって樹脂にエステル化される
。この場合に、（ｉ）のクロルメチル基は、ＤＩＥＡ及
びＮａｌを含有するジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中
においてＦｍｏｃ−アミノ酸と室温において反応された
。Ｆｎ＋ｏｃ−アラニンの場合には、これらの条件下で
の結合収率は理論量の〉９８％であり、そしてかくして
組み込まれたＦａ＋ｏｃ−アラニンはトリフルオル酢酸
での処理によって定量的に離脱された。（ｉ）の（ｆ）
への転化におけるようにカルボキシレートによる離脱基
の求核性置換反応を経てエステル化を達或するために他
の公知法を用いることができる。これについては、経路
Ｉにおいて用いた化学についての記載で先に説明されて
いる。

同様に、経路Ｉに関連して先に記載した如き他の保護ア
ミノ酸をエステル化の出発材料として使用することがで
きる。

ラセミ化分析 ここに記載の方法によって製造された固体担体結合アミ
ノ酸の光学的純度を例示するために、キラル誘導体化剤
である２，　３，　４．　６−テトラーＯ−アセチルー
β−Ｄ−グルコビラノシルイソチオシアネー｝　（ＧＩ
ＴＣ）　　（エヌ・ニムラ氏外のＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，　２０２、３７５−７
　（１９８０）　、ティー・キノシタ氏外のＪｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｒＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，　２１Ｇ，
７７−８１　（１９８１〕）　（これは、ＤＬアミノ酸
混合物を逆相ＨＰＬＣ分解性ジアステレオマーの混合物
に転化できるものである）を用いた。これらの実験では
、ここに記載の新規な方法によって製造したＰｅｐｓｙ
ｎ一Ｋ基材樹脂を、従来技術の方法（イー・アサートン
氏外のＪ．　Ｃ．　Ｓ．　Ｃｈｅｗ．　Ｃｏｍｍｕｎ．
、３３６−３３７　（１９８１）　）によって製造され
た市場で入手可能な樹脂及び市販のＤＬ−アミノ酸標準
混合物（米国ミゾリー州セントルイス所在のシグマ・ケ
ミカル・カンパニー）と比較した。ＤＭＦ中の２０％ビ
ベリジン（　ｖ／ｖ）でＦｍｏｃ−アミノ酸−Ｐｅｐｓ
ｙｎＫ樹脂からＦ＋ｏｃ基を除去し次いで過剰の反応剤
をＤＭＦ次いでＣＨｔＣＱｔで洗い落した後、純トリフ
ルオル酢酸（ＴＦ＾）を用いて樹脂から遊離アミノ酸を
開裂させた。樹脂からＴＦＡを分離しそしてそれを蒸発
乾固させてｉｆ！離アミノ酸を乾燥ＴＦ人塩として得た
。この遊離アミノ酸をｇｒａｐｈｙ，　２０２、３７５
−９　Ｃ　１９８０）　、及びティー・キノシタ氏外の
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
，　２１０、７７８１　［１９８１〕）に記載の如くし
てＧＩＴＣ反応剤で誘導体化した。この態様で本発明の
方法によって製造されたＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｐｅｐｓｙ
ｎＫ樹脂及び市販Ｆｍｏｃ　−Ｐｈｅ−ＰｅｐｓｙｎＫ
生成物（イー・アサートン氏外のＪ，　Ｃ，　Ｓ，　Ｃ
ｈｅｍ．　Ｃｏｍｒｉｕｎ．、３３６−３３７　［１９
８１））から得たアミノ酸のＨＰＬＣ分析（Ｃ−１８カ
ラム、０．　１％のＴＦＡを含有する水中の２０〜４０
％アセトニトリルの１５分線分配）の結果を第３及び４
図に示す。

本発明の方法によって製造した樹脂から得たフエニルア
ラニン誘導体は、Ｄ一異性体汚染物を本質上含まず、そ
れ故にラセミ化の欠如を示す。これとは対照をなして、
市販フェニルアラニン誘導体は、ピークの積分によって
定量されるようにかなりの量（２％）のＤ異性体汚染物
を含有することが分かった。第３ｂ図は１８．４３分に
おいて溶離する小さいピークを示しているが、これは、
アサ一トン氏外の方法によって製造された市販製品中の
Ｄ′Ａ性体による２％汚染に相当する。

ペブチド合成 式ｌの固体担体結合アミノ酸は、特定のべブチド序列の
合成に使用される。固体担体は、第一ベブチド構成ブロ
ックを固定するために化学的に官能化される。特定のべ
ブチド序列の合成は、手工的に又は自動的合戊によって
行われる。ベブチドの段階的構成のための標準化学的手
順を用いることができる。このような方法の例は、ビー
・カッティ及びアール・ビー・メリフィールド両氏の（
１９７ｇ）　、ティー・ダブリュー・ワング及びアール
・ビー・メリフィールド両氏のＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ，ｌ９、３２３３−３２３８　（１９８０）　、アー
ル・アーシャデイム・ステワート及びジエイ・ディー・
ヤング両氏のＳｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ
　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第二版（米国イリノイ州ロノク
フィールド所在のヒアースケミカル・カンパニー）及び
イー・アサートン・アール・シー・シェパード及びビー
・ウオード三氏のＪ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉ
ｎ　Ｔｒａｎｓ．　［，　２０６５−２０７３（　＋９
８５）である。所望の特定の序列の集或後、保護基を除
去して生物学的に官能性の分子を形成することができる
。

固体担体への結合に依存して、合成されたべブチドは後
続の特定決定及び（又は）同定のために開裂させること
ができ、又はそれを固体担体上に未保護の形態にしてお
くこともできる。

ここで本発明を次の実施例によって例示するが、これら
はいかなる面でも本発明を限定するものと解釈すべきで
ない。

例　　ｌ ４−プロムメチルフエノキシ酢酸（ｂ　　の製造４−メ
チルフェノキシ酢酸（８７．　３ｇ、０．　５２５モル
）及びＮ−プロムスクシンイミド（１１２．２９、０．
６３モル）に９００＋＋ｌの脱水ＣＦＩＣ（２．及びｔ
ｏＯＭｇのペンゾイルペルオキシドを加え、そしてこの
混合物を２．５時間還流させた。混合物を冷却させ、そ
して４℃において一晩貯蔵した。形或した結晶を減圧炉
過によって集め、そして５０ｘＱの氷一冷ＣｔｌＣＱｓ
で２回洗浄し、次いで５０ｙｔＱの水で洗浄した。減圧
下にＰ　＝Ｏｓで一定重量まで乾燥させた後、５２．　
９９の白色生成物（ａｐ１２２〜１２４℃）が得られた
。追加的な生成物を得るために、有機母液を水（３Ｘｌ
５１９）でそして１５０ｍ１２のブラインで洗浄した。

ＮａｔＳＯ４で脱水しそして炉過した後、減圧下で溶剤
を除去しそして残留物を９０１（ｌの沸騰ＣＦｉＣＱｓ
から晶出させた。結晶を減圧炉過によって集め、２０＊
Ｑのｃｎｃｅ３／ヘキサン（１　：　１）で３回洗浄し
、そして減圧下で乾燥させて１７．　６９の追加的な生
成物（ＩＩｐ＝１２１〜１２２℃）を得た。全収量は、
７０．　５ｇ（　５５％）であった。生戊物は、９５　
：　５　　ｃｎｃｉ＞ｓ　：酢酸で展開させたＴＬＣ　
（　シリカゲル６０）　テＲｆ＝０．３３を示した。

’Ｈ　ＮＭＲ（３０ＯＭＨｚ％ＣＤＣＱｓ，テトラメチ
ルシランと比較したｐｐｆｆｉδ）　　：　４．４１　
（ｓ，２Ｈ）　、４．６２　（ｓ，２Ｈ）、６．２４（
広幅ｓ，　ＩＨ）　、６．　８２　（ｄ，　Ｊ＝Ｌ　７
Ｈｚ，　２＋１）、７．２８　（ｄ，　Ｊ＝８．７Ｈｚ
，　２８）例　　２ ２，４−ジクロルフェニル−４−プロムメチルフエ１０
０Ｎ（！の酢酸エチル中に０℃で懸濁させた４ープロム
メチルフェノキシ酢酸（２０９、８１．６モル）及び２
，４−ジクロルフェノール（１４９、８５．７モル）に
、撹拌しながら固体ジシクロへキシルカルボジイミド（
１７．　７９、８５．　８モル）を少しずつ加えた。

０℃で２時間後、得られた濃厚な懸濁液に２０１Ｑの酢
酸エチルを加え、そして混合物を室温に温めながら撹拌
を３０分間行なった。炉過によって不溶性ジシクロヘキ
シル尿素を除去し、そして酢酸エチル（　３　Ｘ　３　
０　ＭＱ＞で洗浄した。一緒にした炉液及び洗液を減圧
下で濃縮させ、そして残留物を３５ｘ１２の沸騰酢酸エ
チル中に溶解させた。室温に冷却すると、結晶質生戊物
が生成した。混合しながら１５５１１２のヘキサンを少
しずつ添加した後、生成物を減圧炉過によって集め、ヘ
キサン／酢酸エチル（９：１）で洗浄し、そして減圧下
に乾燥させて２６．８ｇ（　８　５％）の結晶質生或物
（＋１１１）＝１１４〜１１６℃）を得た。生成物は、
ＴＬＣ　（シリカゲル６０）によって均質であり、そし
てヘキサン：酢酸エチル（８　：　２）で展開させると
Ｒｒ＝　０．　５０を有していた。

’ＩＩ　ＮｋｌＲ（３００ＭＨｚ，　ＣＤＣＩ２ｓ、テ
トラメチルシランと比較してｐｐｒａδ）　　：　４．
５１　（ｓ，２Ｂ）　、４．９８　（ｓ，２Ｈ）、６．
９７　（ｄ，Ｊ＝　ＩＯ．２Ｈｚ，２８）　　、７．１
２　（ｄ，Ｊ＝　１０．２Ｈｚ，ＬＨ），７．２１７．
４　　（＋ｍ，３ｔｌ，ｄＳ　Ｊ＝１０．２Ｈｚ，２Ｈ
）　、７．４８　（ｄ，Ｊ−３．４Ｈｚ，ＩＨ）１００
１（！のアセトン中に溶解させた無水沃化ナトリウム（
　２．　９６９、１９．７ミリモル）の溶液に、２．４
−ジクロルフエニル−４−プロムメチルフェノキシアセ
テート（７．２１ｇ、１８．４８ミリモル）を加えた。

混合物を室温で３０分間撹拌した。生戊した不溶性臭化
ナトリウムを減圧が過によって取り出し、そして５１１
９部分のア七トンで３回洗浄した。一緒にした炉液及び
洗液から溶剤を減圧下に除去すると、僅かに黄色の結晶
質固体（　ｍｐ＝　１２１〜１２２℃）が８．１９　（
ｔｏｏ％）得られた。これは、更に精製せずに合成に使
用された。生成物は、ヘキサン：酢酸エチル（１：ｌ）
で展開したＴＬＣ　（シリカゲル６０）でＲｆ＝　０．
　５９を示した。

４〜５ｍＱのジメチルアセトアミド：アセトン（１　：
　１）中に溶解又は懸濁させた４−ヨードメチル活性エ
ステル（ｄ）　（１．０９、２．３ミリモル）及び適当
なＮａ−Ｆｍｏｃ−アミノ酸（２．５ミリモル）に、ジ
イソブロビルエチルアミン（Ｏ，　４５ｘＱ，　２．　
６ミリモル）を室温で撹拌しながら滴下した。一般には
、溶液は１時間内で生成しそして反応はＴＬＣでの（ｄ
）の消失によって判断すると２時間内で完了する。反応
混合物に２０ｚＱのエーテル：酢酸エチル（１　：　ｌ
）を加え、そして有機相を水、５％水性重炭酸ナトリウ
ム、５％水性チオ硫酸ナトリウム、水、ブラインの１０
１９部分で連続的に洗浄し、そして無水ＭｇＳＯ４で脱
水した。炉過によって乾燥剤を除去した後、溶剤の除去
及び減圧乾燥によって生成物を得た。可能なときに、生
成物を適当な溶剤又は溶剤混液から晶出させた。（：ｙ
ｓ（Ａｃｍ）、Ａｓｎ及びＧＱｎ誘導体の場合には、反
応は、同様に４一プロムメチル活性エステル（Ｃ）で出
発して実施されそして溶剤として純ジメチルホルムアミ
ドを使用して行われた。Ａｓｎ及びＧｅｎ誘導体の場合
には、生成物は、通常の水洗間に有機相から沈殿した。

これらの生或物を炉過によって集め、エーテルで洗浄し
、次いで幾つかの部分の水で洗浄し、そして減圧下にＰ
ａｓｓで乾燥させた。

市販“ＰｅｐｓｙｎＫ”　（２５０モルサルコシンメチ
ルエステル／ｇ）樹脂（２５ｙ）を室温において６０ｚ
（ｌのエチレンジアミンで一晩処理した。炉過によって
エチレンジアミンを除去し、そして樹脂をジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で６回、ＣＨ．ＣＱｆｆｉで６回、
エーテルで３回連続的に洗浄し、そして減圧下に乾燥さ
せた。得られたアミン置換レベルを調べるために、エチ
レンジアミン誘導体化樹脂の少部分をｌ当量の１−ヒド
ロキシベンゾトリアゾールの存在下に多過剰のＦ＠ｏｃ
−アラニンペンタフルオルフェニルエステル（　ＤＭＦ
中で０．　３Ｍ　）で処理した。室温において１時間後
、樹脂に組み込まれたアミ７基は、その樹脂が二冫ヒド
リン反応剤と反応しないことによって証明されるように
Ｆｓｏｃーアラニンに完全に結合されていた。この樹脂
をＤＩＰ，　ＣＨ．ＣＱ．，エーテルでそれぞれ６回連
続的に洗浄し、そして減圧下に乾燥させた。ＣＨ，ＣＱ
．中においてビベリジンで開裂した後に、Ｆ＋ｏｃ基の
結合を吸光分光分析によって定量した。結合したＦｍｏ
ｃーアラニンの重量増加について補外すると、出発エチ
レンジアミン誘導体化ＰｅｐｓｙＨＫは０．２４ミリモ
ルアミノ基／ｇの置換度を有することが示された。

このアミノＰｅｐｓｙｎＫ誘導体を用いて表２に記載の
結果を得た。

典型的な固体担体誘導体化実験において、０．５〜１．
５９のエチレンジアミン誘導体化Ｐｅｐｓｙｎ　Ｋ　樹
脂を用いた。樹脂を完全に膨潤且っ湿潤させるのに丁度
十分な量のＤＭＦ　（約２．　５＋ｔｆ２／９樹脂）中
に適当なＦｍｏｃ−アミノ酸誘導体（ｅ）を溶解させ、
そしてそれを４−ジメチルアミノピリジンと一緒に樹脂
に加えた（各反応体の正確な量を表２に示す）。

おだやかに混合してすべての連行空気バップルを除いた
後に、混合物を室温において３時間放置させた。一般に
は、樹脂生成物がニンヒドリン反応体と反応しないこと
によって示されるように、樹脂結合アミ７基の全部を完
全に又はほとんど完全に結合させるのに３時間の反応時
間で十分であった。結合反応後に、出発エチレンジアミ
ン誘導体化ＰｅｐｓｙｎＫの処理について先に記載の如
くして樹脂を連続的に洗浄した。減圧下に一定重量に乾
燥させた後に、樹脂の試料に、ＣＨ　ｔ　ＣＱ　ｔ中に
おいてピペリジンで処理したときに離脱するＦｍｏｃ一
発色団の発光分光分析を施こした。得られた結果を表２
に示す。

ＶａＱ　　　　　　　（３．　０） Ｐｈｅ　　　　　　　（３．　０） Ｔｒｐ（３．　０） ＡＱａ　　　　　　　（３．　０） ＩＱｅ　　　　　　　（２．　０） Ｇ１２ｕ　　　　　　　（２．　０） ＧＱｎ　（ＭｂｈＦ　　　（２．　５）＾ｒｇ　（Ｍｔ
ｒ）　　　（２．　５）１｛ｉｓ　（［３ｏｃ）　　　
（２．５）ｎｅｔ　　　　　　　（２．　５） Ｃｙｓ　（Ｔｒｔ）　　　（３．　０）Ｌｙｓ　（Ｂｏ
ａ）　　　（２．　５）Ｓｅｔ　（ｔＢｕ）　　　（２
．　５）Ｔｈｒ　（ｔＢｕ）　　　（２．　５）Ａｓｎ
　（Ｍｂｈ）　　　（２．　５）Ｐｒｏ　　　　　　　
（２．　５） ＾ｓｐ　（ｔＢｕ）　　　　（２．　５）ＧＱｙ　　　
　　　　（２．　５） Ｔｒｙ　（ｔＢｕ）　　　（２．　５）Ｌｅｕ　　　　
　　　（２．　０） Ｃｙｓ　（Ａｃａ＋）　　　（２．５）表 ２ ０．　７　（ＤＭＡＰ）ａ０．　１８４０．　７　（Ｄ
ＭＡＰ）　　　　　　　　０．　１９６Ｇ．　７　（Ｄ
ＭＡＰ）　　　　　　　　０．　１７５０．　７　（Ｄ
ＭＡＰ）　　　　　　　　０．　１８７０．　７　（Ｄ
ＭＡＰ）　　　　　　　　０．　１７１０．　７　（Ｄ
ＭＡＰ）　　　　　　　　Ｑ．　１６６０．　７　（Ｄ
ＭＡＰ）　　　　　　　　０．　１７００．　７　（Ｄ
ＭＡＰ）　　　　　　　　０．　１８１０．　７　（Ｄ
ＭＡＰ）　　　　　　　　０．　１６００．　７　（Ｄ
ＭＡＰ）　　　　　　　　０．　１６６２．　６　（Ｄ
ＭＡＰ）　　　　　　　０．　１５０’２．　２　（Ｄ
ＭＡＰ）　　　　　　　　０．　１９１２．２（Ｄ鮎？
）　　　　　　　　０．　１７７２．　２　（ＤＭＡＰ
）　　　　　　　　０．　１７１２．　２　（ＤＭＡＰ
）　　　　　　　　０．　１９００．　７　（ＤＭＡＰ
）　　　　　　　　０．　２１３０．　７　（ＤＭＡＰ
）　　　　　　　　０．　１７８０．　７　（ＤＭＡＰ
）　　　　　　　　０．　１８６０．　７　（ＤＭＡＰ
）　　　　　　　　０．　１９００．　７５（ＤＭＡＰ
）　　　　　　　　０．１９５０．　７　（ＤＭＡＰ）
　　　　　　　　０．　１８４ａ，　　ＤＭＡＰは４−
ジメチルアミノピリジンに対する略語である。側鎖保護
基の略語は表１に記載したと同じである。

ｂ．　結合時間は３時間である。

ｃ．　　２．５当量のＦｍｏｃ−Ｃｙｓ　（Ｔｒｔ）誘
導体を使用しそしてＤＭＡＰの代わりに３．０当量のピ
リジンを用いたときに０、１９ミリモルＦｓｏｃ／ｇの
置換レベルが達成された。

例　　７ ラセミ　のない結合についての　析 １６ＸＩＯＯｚｍガラス製試験管にＰｍｏｃ−アミノ酸
誘導体化ＰｅｐｓｙｎＫ”樹脂（１００３＋９）　　（
Ｍｉｌｌｉｇｅｎ）を入れた。この樹脂を１０＊ｆ２の
ＣＨ＊Ｃ１２ｇ及びＩＯＩＱのジメチルホルムアミドで
洗浄した。沈降樹脂カラ注意深いデカンテーション後に
洗液を棄てた。樹脂をジメチルホルムアミド中の５１（
１２０％ピペリジン（Ｖ／Ｖ）とｌＯ分間反応させるこ
とによってＦ■ｏｃ一保護基を除去した。樹脂をＤＭＦ
　（　３ｘ　１Ｇｇ（２）及びＣＨｔＣＩ２ｔ　（　６
　Ｘ　１０翼０で洗浄した。樹脂を５１１２の純トリフ
ルオル酢酸で２０分間処理することによって樹脂からア
ミノ酸を開裂させた。かくして開裂したアミノ酸のトリ
フルオル酢酸溶液を乾燥窒素の流れによって蒸発させ、
そして減圧下に固体ＫＯＨで更に乾燥させた。かくして
得られた樹脂を、０．４％のトリエチルアミンを含有す
る０．４１ｉ２の５０％水性アセトニトリル（Ｖ／Ｖ）
中に溶解させた。アミノ酸溶液（　０．　０５ｘＱ）を
ＣＩ，　１０ｊｌＱのＧＩＴＣ溶液〔アセトニトリル中
の０．２％ＧＩＴＣ　（　ｗ／　ｖ）　）に加えた。最
低３０分の反応後、ＧＩＴＣ誘導体のアリコート（２ミ
クロＱ）にＨＰＬＣ分析を施こした。かくして製造した
ＧＩＴＣ誘導体は、この溶液中において室温で約１２時
間まで安定であった。０．４％のトリエチルアミンを含
有する５０％水性アセトニトリル（ｖ／ｖ）中の標準物
の５　ｚ９／　ｘ（ｌ溶液で出発して先に記載の如くし
てＤＬアミノ酸標準物をＧＩＴＣ溶液で誘導体化した。

注入量は５ミクロＱであった。

２２０ｎｍ，　Ｉ　　ＡＵＰＳに設定したウォーターズ
・ランブダ・マックス・モデル４８１検出４と共にウォ
ーターズ・６００グラジエントＩＩ　Ｐ　Ｌ　Ｃ系を使
用してＩＩ　Ｐ　Ｌ　Ｃ分析を行なった。カラムは、１
１ａＬｅｒｓ　Ｄｅ１２ｔａ　Ｉ’ａｋ”Ｃ−１８−３
００＾（　３．９ｚｚｘ　１５ｃｍ）であった。二成分
系勾配溶ｉｌ！緩衝液は、（ａ）水中の０．１％トリフ
ルオル酢酸及び（ｂ）アセトニトリル中の０．０７％ト
リフルオル酢酸であった。

１　ｆｆｉ！２／分の流量において１５分間にわたって
２０〜４０％緩衝液の線勾配を使用した。その後に、４
０％緩衝液Ｂで更にｌ分間線勾配を使用した。次いで、
次の試料の注入前に２０％緩衝液Ｂを少なくとも６分間
ポンプ送りすることによってカラムを再平衡させた。

例　　８ ４−プロムメチルフェノキシ酢酸（２．　５０９、１０
．２ミリモル）に、約７０ｘＱの５％水性ＮａＨＣＯｓ
を徐々に加えた。あわ立ちが生じた。得られた曇った溶
岐を室温において２時間撹拌した。炉過後、溶液を水浴
中で冷却し、そして５Ｍ−Ｈｅ（２でｐ｝１２まで注意
深く酸性化した。生成物を酢酸エチル（３Ｘ５０ｌＯで
抽出した。一緒にした有機相をブラインで洗浄し、Ｍｇ
ＳＯａで脱水し、炉過し、そして回転蒸発によって溶剤
を除去した。減圧下に乾燥した後、１．　５３９　（８
２．　５％）の粗白色生戊物が得られた。酢酸エチル（
　１　０　１１２）とへキサン（　１　０　ｘｃ）との
混合物から再結晶化後、１．　２３９　（６６％）の精
製白色結晶質生成物が得られた。ｔａｐ＝　１１２〜Ｎ
５℃（Ｉｎｋ．　Ｊ．　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ　Ｒｅｓ．　　’Ｉ　Ｑ−、４５１〜４５４（　１９
８２）においてアール・シー・シェパード及ヒビー・ジ
ェイ・ウィリアムズ両氏が１１４〜１１６℃を報告）。

２００１９のＰｅｐｓｙｎ　ＫＡ”樹脂（　Ｍｉｌｌｉ
Ｇｅｎ）　　（　０．　２ミリモルのヒドロキシメチル
基／９）に、ジオキサン中に溶解させた１１１２の４Ｎ
−ＨＣ１２を加えた。室温において２時間後、加えたジ
メチルホルムアミド（　９　５　Ｘ　４　１１（１’）
のデカンテーションによって樹脂を十分に洗浄した。得
られたジメチルホルムアミ｝’湿７［脂のスラリーにＦ
ｍｏｃ−アラニン（１ｏ０ｘｇ、０．　３２　ミリモル
）、ジイソブ口ビルエチルアミン（Ｏ．　０６１３！１
２、０．３５ミリモル）、無水沃化ナトリウム（４０，
ｗｙ、０．　２７　ミリモル）を加え、そして混合物を
手で定期的に振とうすることによって静かに混合した。

混合物を室温において２０分間反応させ、その後に樹脂
をジメチルホルムアミド（３Ｘ４ＭＱ）、水（３Ｘｌ１
２）、メタノール（３　Ｘ　４　ｘＱ＞及びエーテル（
　３　Ｘ　４　ｘＱ”）で洗浄した。樹脂を減圧下に乾
燥させ、そして陥。Ｃ−置換について分析した。樹脂生
成物は、０．　１８６　ミリモルのＦ＋ｍｏｃ−アラニ
ン／９（理論量の９８．４％）を含有することが分かっ
た。生戊物の一部分を純トリフルオル酢酸で室温におい
て、１．５時間処理し次いでＦｍｏｃ一置換について分
析すると、かくして組み込まれたＦｍｏｃ一アラニンが
定量的に開裂されたことが示された。

本発明の方法によって製造した樹脂（表２）のべブチド
合成利用を例示するために、先に記載の如くして製造し
たＦｓｏｃ−Ｖａ（ｌ−（ｉｎｋｅｒ−ＰｅｐｓｙｎＫ
樹脂で出発して９一残基ペプチド（Ａ１２ａ−＾ｓｎ−
Ｌｙｓ−　Ｏｆ２ｙ　−　Ｐｈｅ　−　Ｌｅｕ　−　Ｇ
Ｉ２ｕ　−　Ｇｆ２ｕ　−　Ｖａ１２）を合成した。

比較のための対照として、従来技術の方法（イー・アサ
ートン氏外、Ｊ．Ｃ．Ｓ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｓｍｕｎ．　
　３３６−３３７　（１９８１））によって製造された
市場で人手できるＦａｏａ−ＶａＱ−Ｑｉｎｋｅｒ−Ｐ
ｅｐｓｙｎＫ樹脂（英国ケンブリッジ所在のケンブリッ
ジ・リサーチ・バイオケミカルズ・インコーポレーテノ
ド）で出発して同じペプチドを合成した。予備活性化単
量体として市販（米国マサチューセッツ州バーリントン
所在のｌｊｉｌｌｉＧｅｎ／　Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ）　
Ｆｍｏｃ−アミノ酸−ベンタフルオルフェニルエステル
及びＭｉｌｌｉＧｅｎ／Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ　　Ｅｘｐ
ｒｅｓｓ”ペプチド合或ソフトウエア（Ｖｅｒｓｉｏｎ
　１．２）によって特定される標準操作手順を使用して
”ＭｉｌｌｉＧｅｎ／　Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ　Ｍｏｄｅ
ｌ　９０５０″連続流動式自動化ベプチド合成器で両方
の合成を行なった。また、同じ反応剤又は溶剤が両方の
合成において同時に使用されるように２つの別個のカラ
ム反応器を使用して同じ装置で両方の合或が同時に行わ
れた。両方のべブチドを脱保護しそして単離した。両方
の合戊とも、高性能液体クロマトグラフィ−（ｌｉＰＬ
ｃ）のクロマトグラム（第３図）によって証明されるよ
うに目標とするベブチドを匹敵する高い純度で且つ＞８
０％の粗収率でもたらした。第３ａ図は、本発明の固体
担体結合アミノ酸を使用して製造した９一残基ペプチド
についてのクロマトグラムを示す。第３ｂ図は、市場で
入手できる固体担体結合アミノ酸樹脂を使用してＨａし
た類似の９一残基ペブチドについてのクロマトグラムを
示す。Ｄｅｌｔａ−Ｆａｋ”　Ｃ−１８カラム（　１０
０Ａボア、５　μｍ．　０．　３９Ｘ　１５ｃＪＩ）及
び１．　ａｘＱ／分の流量を使用して分離を行なった。

生或物は、２２０ｎｍでの吸収によって検出された。勾
配溶離：　（溶離剤Ａ５水中に溶解した０．　１％（ｖ
／ｖ）　　トリフルオル酢酸；溶離剤Ｂ，５％の水を含
有する９５％アセトニトリル中に溶解した０．　１％（
ｖ／ｖ）　　トリフルオル酢酸）３０分で６％〜６２％
８０両方の生成物の同定は、アミノ酸分析及び質量スペ
クトルデータによって確認された（　Ｍ　＝　１００５
±２、理論値１００６）　　。

均等物 当業者は、ここに記載した本発明の特定の具体例につい
て多くの均等物を認識するだろうし、又は日常試験を使
用してかかる均等物を確認することができよう。

【図面の簡単な説明】 第１図は、ベブチド合戊のための固体担体にＣ〜末端ア
ミノ酸をラセミ化のない態様で結合させるための概略フ
ローシ一トである。 第２図は、ベプチド合成のための固体担体にＣ一末端ア
ミノ酸をラセミ化のない態様で結合させるための別の概
略フローシ一トである。 第３ａ図は、フェニルアラニンの標準ＤＬ混合物のＧＩ
ＴＣ誘導体のＩ｛ＰＬＣクロマトグラムを示す。 第３ｂ図は、アサートン氏の方法（　Ｊ，　Ｃ，　Ｓ．
　Ｃｈｅｗ．Ｃｏｍｓｕｎ．、３３６−３３７　［１９
８１）　）によって製造された樹脂から得られたＧＩＴ
Ｃ誘導体の■ＰＬＣクロマトグラムを示す。 第３ｃ図は、本発明の方法によって製造された樹脂から
得られたＧＩＴＣ誘導体のＨＰＬＣクロマトグラムを示
す。 第４ａ図は、コンピューターによって拡張したときの第
３ｂ図のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 第４ｂ図は、コンピューターによって拡張したときの第
３ｃ図のＩ｛ＰＬＣクロマトグラムを示す。 第５ａ図は、本発明の方法によって製造されたＦｍｏｃ
−Ｖａ（１−Ｌｉｎｋｅｒ−ＰｅｐｓｙｎＫ樹脂で出発
して製造したベプチドＡＱａ　−　Ａｓｎ　−　Ｌｙｓ
　−　ＧＱｙ　−　Ｐｈｅ　−　Ｌｅｕ　−Ｇｆｆｕ　
−　Ｇ４ｕ　−　ＶａＱのｌ｛ＰＬＣク０７トグラムを
示す。 第５ｂ図は、アール・シー・シェパード及びビー・ジェ
イ・ウィリアムズ両氏の結合体（　Ｉｎｔ．　Ｊ．Ｐｅ
ｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ．、■、４５１−
４５４　［１９ｇ２］）及びイー・アサートン氏外のカ
ルボキシル基活性化法（　Ｊ，　Ｃ．　Ｓ，　Ｃｈｅｗ
．　Ｃｏｍｍｕｎ．、３３６−３３７　１：　１９８１
））を使用してＦｍｏｃ−Ｖａｎ−Ｌｉｎｋｅｒ−Ｐｅ
ｐｓｙｎＫ樹脂で出発して製造した第５ｂ図に示すもの
と同じペプチドのＨ　Ｐ　Ｌ　Ｃクロマトグラムを示す
。 ０ ０ ｆ Ｏ１ Ｄ１ ＣＬ−ＣＨ２　＋ＯＣＨ２ＣＯ−一 ×１０−１ボルト ｘｌＯ’弁 ＦＩＧ．３ｃ 手糸売冫甫正書（方式） ６　２９ 平成２年版月瓢＼日

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、 ＺはＮα保護基であり、 Ｂは保護又は未保護側鎖を有する１個以上のアミノ酸で
   あり、 Ｒ＿１及びＲ＿２は、同種又は異種であって、水素、線
   状又は分枝状の飽和又は不飽和アルキル、アリール及び
   ベンジルよりなる群から選択され、 Ａは置換又は非置換芳香族環であり、 Ｙは、エーテル結合を介してＡに結合されることができ
   る線状又は分枝状の飽和又は不飽和アルキル、アリール
   又はアラルキルを有する炭化水素鎖であり、 Ｄは、線状又は分枝状の飽和又は不飽和アルキル、アリ
   ール又はアラルキル基を有する１個以上の炭化水素鎖又
   は天然及び非天然アミノ酸よりなる群から選択されるス
   ペーサーに結合され得る酸素又は−ＮＨ−であり、しか
   してスペーサーは酸素又は−ＮＨ−結合を介してカルボ
   ニルに結合され、そして ＳＳは、Ｄを介してカルボニル基に結合される固体担体
   である〕を有する化合物。
2. （２）Ａが非置換ベンゼン環又は置換ベンゼン環（ここ
   で、置換基はアリール、アルキル、ハロ、ニトロ、アル
   コキシ及びこれらの組み合わせよりなる群から選択され
   る）である特許請求の範囲第１項記載の化合物。
3. （３）Ｙが−（Ｏ）ｍ・（ＣＨ＿２）ｎ−（ここで、ｍ
   は０又は１であり、そしてｎは０−１２の整数である）
   である特許請求の範囲第１項記載の化合物。
4. （４）固体担体が、ジビニルベンゼンで架橋されたポリ
   スチレン、架橋ポリジメチルアクリルアミド、ガラス、
   制御多孔質ガラス、ポリビニリジンジフルオリド、ポリ
   プロピレン、ポリエチレン、セラミック、シリカ及びア
   ルミナよりなる群から選択される特許請求の範囲第１項
   記載の化合物。
5. （５）Ｎα保護基及びアミノ酸側鎖保護基が、９−フル
   オレニルメチルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカ
   ルボニル、ｔ−ブチル、トリチル、４−メトキシ−２，
   ３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、４，４′−ジ
   メトキシベンゾヒドリル、チオ−ｔ−ブチルアセトアミ
   ドメチル、ジチオスクシニル、カルボベンジルオキシカ
   ルボニル、２−ニトロピリジンスルフェニル、トリフル
   オルアセチル、２−（ｐ−ビフェニルイソプロピルオキ
   シカルボニル）、４−メトキシベンジルオキシカルボニ
   ル、トシル、９−フェニルフルオレニル、２−ニトロフ
   ェニルスルフェニル、ベンジル、ｐ−ニトロカルボベン
   ジルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル、
   ２，２−〔ビス（４−ニトロフェニル）〕−エチルオキ
   シカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、２，２
   ，２−トリクロルエチルオキシカルボニル、ジニトロフ
   ェニル、ｔ−ブチルオキシメチル、ベンジルオキシメチ
   ル、トリクロルエチル、ニトロベンジル、フェナシル、
   ２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スル
   ホニル、ベンジドリルアミン、メチルベンジドリルアミ
   ン、キサンチル及び２，４，６−トリメトキシベンジル
   よりなる群から選択される特許請求の範囲第１項記載の
   化合物。
6. （６）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、 ＺはＮα保護基であり、 Ｂは保護又は未保護側鎖を有する１個以上のアミノ酸で
   あり、 Ｒ＿１及びＲ＿２は、同種又は異種であって、水素、線
   状又は分枝状の飽和又は不飽和アルキル、アリール又は
   ベンジルよりなる群から選択され、 Ａは置換又は非置換芳香族環であり、 Ｙは、エーテル結合を介してＡに結合され得る線状又は
   分枝状の飽和又は不飽和アルキル、アリール又はアラル
   キルを有する炭化水素鎖であり、Ｗは硫黄又は酸素であ
   り、そして Ｒ＿３は、カルボキシル基を活性化することができる又
   はそうでなくてもよい除去可能なカルボキシル保護基で
   ある〕の化合物。
7. （７）Ｒ＿３が、ジクロルフェニル、ペンタフルオルフ
   ェニル、ペンタクロルフェニル、２−ニトロフェニル、
   ２，４−ジニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２−
   クロルフェニル、２，４，５−トリクロルフェニル、２
   −ブロムフェニル、４−ブロムフェニル、トリクロルエ
   チル、フェナシル、１個以上の窒素原子を含有する炭素
   原子数３〜１２個の複素環、硫黄原子、酸素原子又はこ
   れらの組み合わせよりなる群から選択され、Ａが非置換
   ベンゼン環又は置換ベンゼン環（ここで、置換基はアリ
   ール、アルキル、ハロ、ニトロ、アルコキシ及びこれら
   の組み合わせよりなる群から選択される）であり、そし
   てＹが−（Ｏ）ｍ・（ＣＨ＿２）ｎ−（ここで、ｍは０
   又は１であり、そしてｎは０〜１２の整数である）であ
   る特許請求の範囲第６項記載の化合物。
8. （８）Ｎα保護基及びアミノ酸側鎖保護基が、９−フル
   オレニルメチルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカ
   ルボニル、ｔ−ブチル、トリチル、チオ−ｔ−ブチル、
   ４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホ
   ニル、４，４′−ジメトキシベンズヒドリル、アセトア
   ミドメチル、ジチオスクシニル、カルボベンジルオキシ
   カルボニル、２−ニトロピリジンスルフェニル、トリフ
   ルオルアセチル、２−（ｐ−ビフェニルイソプロピルオ
   キシカルボニル）、４−メトキシベンジルオキシカルボ
   ニル、トシル、９−フェニルフルオレニル、２−ニトロ
   フェニルスルフェニル、ベンジル、ｐ−ニトロカルボベ
   ンジルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル
   、２，２−〔ビス（４−ニトロフェニル）〕−エチルオ
   キシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、２，
   ２，２−トリクロルエチルオキシカルボニル、ジニトロ
   フェニル、ｔ−ブチルオキシメチル、ベンジルオキシメ
   チル、トリクロルエチル、ニトロベンジル、フェナシル
   、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−ス
   ルホニル、ベンズヒドリルアミン、メチルベンズヒドリ
   ルアミン、キサンチル及び２，４，６−トリメトキシベ
   ンジルよりなる群から選択される特許請求の範囲第６項
   記載の化合物。
9. （９）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、 ＺはＮα保護基であり、 Ｂは保護又は未保護側鎖を有する１個以上のアミノ酸で
   あり、そして ｍは０又は１、ｎは０〜１２の整数である〕を有する特
   許請求の範囲第６項記載の化合物。
10. （１０）Ｎα保護基及びアミノ酸側鎖保護基が、９−フ
    ルオレニルメチルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシ
    カルボニル、ｔ−ブチル、トリチル、チオ−ｔ−ブチル
    、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスル
    ホニル、４，４′−ジメトキシベンズヒドリル、アセト
    アミドメチル、ジチオスクシニル、カルボベンジルオキ
    シカルボニル、２−ニトロピリジンスルフェニル、トリ
    フルオルアセチル、２−（ｐ−ビフェニルイソプロピル
    オキシカルボニル）、４−メトキシベンジルオキシカル
    ボニル、トシル、９−フェニルフルオレニル、２−ニト
    ロフェニルスルフェニル、ベンジル、ｐ−ニトロカルボ
    ベンジルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニ
    ル、２，２−〔ビス（４−ニトロフェニル）〕−エチル
    オキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、２
    ，２，２−トリクロルエチルオキシカルボニル、ジニト
    ロフェニル、ｔ−ブチルオキシメチル、ベンジルオキシ
    メチル、トリクロルエチル、ニトロベンジル、フェナシ
    ル、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−
    スルホニル、ベンズヒドリルアミン、メチルベンズヒド
    リルアミン、キサンチル及び２，４，６−トリメトキシ
    ベンジルよりなる群から選択される特許請求の範囲第９
    項記載の化合物。
11. （１１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、 ＺはＮα保護基であり、 Ｂは保護又は未保護側鎖を有する１個以上のアミノ酸で
    あり、 Ｒ＿１及びＲ＿２は、同種又は異種であって、水素、線
    状又は分枝状の飽和又は不飽和アルキル、アリール又は
    ベンジルよりなる群から選択され、 Ａは置換又は非置換芳香族環であり、 Ｙは、エーテル結合を介してＡに結合され得る線状又は
    分枝状の飽和又は不飽和アルキル、アリール又はアラル
    キルを有する炭化水素鎖であり、Ｄは、線状若しくは分
    枝状の飽和若しくは不飽和アルキル、アリール若しくは
    アラルキル基を有する１個以上の炭化水素鎖又は天然及
    び非天然アミノ酸よりなる群から選択されるスペーサー
    に結合され得る酸素又は−ＮＨ−基であり、しかしてス
    ペーサーは酸素又は−ＮＨ−結合を介してカルボニルに
    結合され、そして ＳＳはＤを介してカルボニル基に結合される固体担体で
    ある〕の化合物の製造法であって、 （ａ）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｘは離脱基でありそしてＡ、Ｒ＿１、Ｒ＿２及
    びＹは先に規定した如くである〕を有する化合物を準備
    し、 （ｂ）工程（ａ）の化合物を縮合剤の存在下にアルコー
    ル、フェノール、チオール又はチオフェノールと反応さ
    せて式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｘ、Ｒ＿１、Ｒ＿２、Ａ及びＹは先に規定した
    如くであり、Ｗは硫黄又は酸素原子であり、そしてＲ＿
    ３はアルコール、フェノール、チオール若しくはチオフ
    ェノールに類似の基又は類似の複素環式アルコール若し
    くはチオールである〕の縮合生成物を形成し、 （ｃ）工程（ｂ）の生成物を保護アミノ酸と、Ｘを置換
    させ且つエステル結合を介してアミノ酸を化合物に結合
    させるのに十分な条件下に反応させ、そして （ｄ）工程（ｃ）の生成物を官能化固体担体と、ＷＲ＿
    ３を除去し且つ官能化固体担体と結合させるのに好適な
    条件下に反応させる、 各工程からなる製造法。
12. （１２）アルコール、フェノール、チオール又はチオフ
    ェノールが、置換フェノール、２，４−ジクロルフェノ
    ール、トリクロルエタノール、フェナシルアルコール、
    Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ヒドロキシル置換複素
    環式化合物及び置換チオールよりなる群から選択される
    特許請求の範囲第１１項記載の方法。
13. （１３）製造された化合物が、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、 ＺはＮα保護基であり、 Ｂは、保護又は未保護側鎖を有する１個以上のアミノ酸
    であり、 Ｄは、線状若しくは分枝状の飽和若しくは不飽和アルキ
    ル、アリール若しくはアラルキル基を有する１個以上の
    炭化水素鎖又は天然及び非天然アミノ酸よりなる群から
    選択されるスペーサーに結合され得る酸素又は−ＮＨ−
    であり、しかしてスペーサーは酸素又は−ＮＨ−結合を
    介してカルボニルに結合され、 ＳＳは、Ｄを介してカルボニル基に結合される固体担体
    であり、そして ｍは０又は１であり、ｎは０〜１２の整数である〕を有
    する特許請求の範囲第１１項記載の方法。