JPH02503923A

JPH02503923A - ウレタン保護アミノ酸‐ｎ‐カルボキシ無水物

Info

Publication number: JPH02503923A
Application number: JP1503158A
Authority: JP
Inventors: フラー，ウイリアム，デイ．; コーエン，マイケル，フイリツプ; ナイダー，フレツド，アール．; マレイ・グツドマン
Original assignee: バイオリサーチ・インコーポレイテツド
Priority date: 1988-03-11
Filing date: 1989-03-03
Publication date: 1990-11-15
Anticipated expiration: 2014-03-31
Also published as: WO1989008643A1; CN1022412C; PT89961A; DD280322A5; JP2875834B2; NZ228282A; EP0357750B1; CN1040793A; NO306304B1; ATE108438T1; FI102379B1; DE68916722T2; HK1007744A1; IL89541A0; NO894503D0; EP0357750A1; IE890778L; DE68916722D1; HUT52488A; NO894503L

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

ウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物発明の背景 ■）全里■肢歪分… 本発明は、新規な種類のＮ−保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物及びチオカルボキシ無水物、すなわちＮ−ウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物及びＮ−ウレタン保護アミノ酸−Ｎ−チオカルボキシ無水物、それらの製造法並びにペプチド合成、ポリペプチド合成及びタンパク質合成におけるそれらの使用に関する。 ■）先ｊ」Ｌ血古典的には、特定された配列を有するポリペプチドが、各々のアミノ酸部分（ｍｏｉｅｔいを付加させた後毎に中間体を単離するという極めて面倒な方法で製造されている。この方法は合成を複雑にし、しかも収率が低く、ラセミ化が起こり、及び／又は別の種々の副反応が起こるために、長鎖状ポリペプチド及びタンパク質の合成をほとんど不可能にしていた。　１９６３年に、Ｍｅｒｒｔｆｉｅｌｄ　（Ｊ、　Ａｍ。Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、、４旦、５．、２１４９）　や、　ＬｅｔｓｉｎｇｅｒとＫｏｒｎｅｔ　（Ｊ。Ａｍ、Ｃｈｅｍ、　ＳＯＣ，、、＋３．ｌ、２０４５）らは、伸長しつつある（ｇｒｏｗｉｎｇ）ペプチド鎖を保持するために不溶性の重合体状支持体の使用を提案した。この方法は、一般に固相ペプチド合成法と呼ばれ、中間体を単離せずに伸長中のペプチド鎖の“精製”を可能にした。従来、古典的（液相）ポリペプチド合成法と固相ポリペプチド合成法の２つの広く一般に容認されている方法は、別のＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基と反応させてカルボキシル基が活性化されであるＮ−保護アミノ酸を得るために連結（ｃｏｕｐｌｉｎｇ）剤又は活性化剤の使用を必要とした。更にまた、上記活性化された化合物（すなわちカルボキシ基が活性化されであるＮ−保護アミノ酸）は、ペプチド結合の形成を促進するために幾つかの方法でよく使用されていた０例えば、活性化された保護アミノ酸は、アミノ酸、アミノ酸エステル又はアミノ酸アミドの遊離アミノ基と直接反応してペプチド結合を生成させる。この方法は、長年の間ペプチドを合成するためのより抜きの方法であった。この活性化方法（ｓｔｅｐ）は、多Ｃと略記する）である場合には、前記の活性な分子が不活性なＮ−アシル尿素に“転位する”ことがある。上記カルボジイミド法の別の欠点は、不溶性尿素類を生成することである。これは固相合成法においては特にやっかいであり、固相流れ系（ｆｌｏｗ　ｓｙｓｔｅｍ）においては事実上許容できない、上記尿素類はまた、溶液相反応においては難しい精製の問題を生起する。研究者達は、ＤＣＣで活性化されたＮ−保護アミノ酸をアルコール又はフェノール（例えばＰ−二トロフェノール、ペンタクロロフェノール、Ｎ−ヒドロキシ− コハク酸イミド等）とまず反応させて、単離し且つ精製し得る“活性エステル” を生成させ、次いでその次の（ｎｅｘｔ）アミノ酸のａａチアミン連結させる（ｃｏｕｐｌｅ）ことによって、活性化自体に関連した問題のうちの幾つかを軽減した。しかしながら、このアプローチの手法は、遊離したアルコール又はフェノールが中に含有され得るか、あるいは別の種々の副反応を促進するかもしれず、しかも活性エステルの連結が緩慢であり、長い反応時間を必要とする傾向があるという理由で、その諸欠点を伴わなくなったわけではない。別の慣用法は、２当量のＮ−保護アミノ酸を１当量のＤＣＣと反応させ、生成したＤＣＵを濾過することによって“対称型無水物”を生成させ、次いでこの“対称型無水物”を、その次のアミノ酸の遊離アミノ基と連結させる方法である。この方法は高価なＮ−保護アミノ酸を２倍程多く使用することが必要であるのに加えて、尿素生成の問題を育する。最近、連結した後に可溶性の尿素類を生成するカルボジイミド類を使用し始めた研究者らもいるが、該カルボジイミド類はまだＮ−アシル尿素に転位する傾向がある。ペプチド合成に使用するために、種々のタイプのＮ−保護基が提案されているが、最も広範囲に受は入れている種類のＮ−保護基はウレタン類である。ウレタン類は高度の保護を与え、ラセミ化を最小にすることが広く一般に認められており、製造が容易であり、しかも貯蔵に対して安定である。ウレタン型の保護基として、弱酸により脱離できるもの（ｔなわち、Ｌ−ブチルオキシカルボニル）、強酸により脱離できるものくすなわち、ペンジルオキシ力ルボニルン、極端な弱酸により脱離できるもの、すなわち２−（ｐ−ビフェニリル）−イソプロピルオキシカルボニル、無水の塩基により脱離できるもの（すなわち、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）等の如きウレタン型の保護基を作り得る。ウレタン型で保護されたアミノ酸は一般に、水性溶媒／有機溶媒混合系中でアルカリ金属水酸化物又は炭酸塩の存在下（ずなわち、ＳｃｈｏＬｔｅｎ−Ｂａｕｍａｎｎ条件）にアルキルクロロホルメート、アリールクロロホルメート又はアラルキルクロロホルメート（あるいは別の適当に活性化されたギ酸エステル又は炭酸エステル）とアミノ酸との反応によって合成される０反応混合物を酸性にした後に、ウレタン保護アミ、ノ酸を有機溶媒中に抽出し、副生成物は全て水性相に残す、結晶化させた後に、得られたウレタン保護アミノ酸を前記のペプチド結合の形成に使用する。ペプチド結合の形成に使用する特に興味深い型のアミノ酸の反応性誘導体は、いわゆるＮ−カルボン酸無水物又はＮ−チオカルボン酸無水物、例えば〔式中、Ｒ，Ｒ’は、代表的には水素原子又は通常のアミノ酸類の側鎖（あるいは保護側鎖）であり、そして２は酸素原子又は硫黄原子である〕である。アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物類〔本明細書及び添付の請求の範囲におけるＮ −カルボン酸無水物（Ｎ−カルボキシ無水物ともいう）という用語はＮ−チオカルボんどの遊離アミン類と容易に反応する。ペプチド結合の形成に使用するＮ−カルボン酸無水物類（ＮＣＡ類と略記する）及び保護ＮＣＡ類の主な利点は、それらが有力なアシル化剤である（　ｒ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　Ｊ　。第９巻、第８３頁参照）ということである、それらはまた−ｉに、ＤＣＣ連結法又はＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（Ｏｓｕと略記する）エステル連結法よりも高収率で制御又は制限する能力を欠くために、ポリペプチド合成において一般的に使用されていなかった。ＮＣＡがアミノ酸の遊離アミンと反応すると、直ちに二酸化炭素が遊離し、ジペプチドが生成する。そして生成された該ジペプチドもまたＭＭアミンを含有する。このジペプチドの遊離アミンは、その後、別のＮＣＡと反応してトリペプチド等を生成する。この反応は、アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物がポリα−アミノ酸の形成に広範な用途を見出されることを可能にしたが、連続的なポリペプチド形成にはその使用は事実上不可能であった。　Ｈｉｒｓｃｈｍａｎｎら〔「水性媒体中におけるペプチドの制御合成、■）新規α−アミノ酸−Ｎ−力ルボキシ無水物の合成と用途」という題名の論文、　Ｊ、　Ａ、　Ｃ，Ｓ、、井（１１）、　２７４６−２７７４（１９７１）　）は、反応混合物の温度、ｐＨ５塩及び有機溶媒を注意深く制御することによって水性溶媒−有機溶媒系におけるジー及びトリペプチドの合成にアミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物を使用することに成功した。しかしながら、この方法は、前記のＮＣＡ類の化学的性質のために小さなペプチド類に限定される。また、上記溶液相反応から得られる生成物は、より大きなペプチドの合成に使用する前に広範にわたって精製しなければならない。種々のＮ−Ｘ盗アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物、例えばＮ−メチル、Ｎ−ベンジル、Ｎ−アセチル、Ｎ−ニトロフェニルスルフェニル、Ｎ−キサンチル、　４．４’　−ジメチルベンズヒドリル、トリチル等のＮ−置換アミノ酸−Ｎ−力ルボキシ無水物が文献に報告されている。これらのｎ−ＮＣＡ類は逐次（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ）ペプチド合成に、特に固相ペプチド合成法に使用することが提案されているが、ペプチド化学者には、一般的な使用が受は入れられていない。Ｋｒｆｃｈｅｌｄｏｒｆ　（Ａｎｇｅｗ、Ｃｈｅｉａ、Ａｃｔａ、８５＋　８６ −８７（１９７Ｂ））は逐次ペプチド合成法に使用するためにσ−ニトロフェニルスルフェニル（ＮＦＳと略記する）置換ＮＣＡ類の使用を提案した。上記σ− ニトロフェニルスルフェニル置換ＮＣＡ類は、トリエチルアミンの存在下でσ− ニトロフェニルスルフェニルクロリドをＮ−カルボン酸無水物と反応させることによって製造される。その後、トリエチルアミンがＮＦＳ−ＮＣＡ類のラセミ化を促進することが、示された。更に、ＮＣＡに対するトリエチルアミンの作用のために、オリゴマー化は、ＮＦＳ−ＮＣＡ合成の間極めて厳重な反応条件（すなわち、〈０°Ｃの温度及び反応混合物に対するトリエチルアミンの極めてゆっくりとした添加）を用いなければならないことを必要とする。従って、Ｈａｌｓｔｒｏｍら（Ｚ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　Ｃｈｅａ＋、を影鋒−，８２−８４（１，９７４））は、ホスゲンとＮＦＳ−アミノ酸との反応によるＮＦＳ−ＮＣＡ類の合成法を提案したが、収率が極めて低かった（約２０％）。ＮＰＳ−ＮＣＡｆｉはいったん製造されると貯蔵することが困難であり、縮合反応の間に保護基が“ 脱離する（ｂｌｅｅｄ　ｏｆｆ）”傾向があり、多段連結反応や他の副反応を起こす傾向がある。また、生成したＮＦＳ保護ペプチドの窒素原子は、かなりの求核性を有し、付加縮合反応を行なう。ＢｌｏｃｋとＣｏｘ　（ｒＰｅｐｔｉｄｅｓ、　Ｐｒｏｃ、　ｏｆ　ｔｈｅ　５ｔｈ　Ｅｕｒｏｐ。Ｓｙｍｐ、、　０ｘｆｏｒｄ、　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　１９６２　Ｊ　、　Ｐｅｒｇａｍｏｎ　Ｐｒｅｓｓ１９６３、　Ｇ、　Ｔ、　Ｙｏｕｎｇ［、第８４〜８７頁）は、ペプチド合成に使用するためのＮ−）リチルアミノ酸−Ｎ−力ルボキシ無水物の使用を提案したが、彼らは最も簡単なＮ−トリチルアミノ酸−ＮＣＡ類（すなわち、グリシン及びアラニン）を合成できただけであった。Ｎ−）リチルアミノ酸−Ｎ−力ルボキシ無水物はＮ−トリチル−アミノ酸とホスゲンとの反応で製造される。この方法で、彼らはまた、Ｎ−アセチル−グリシン−ＮＣＡを製造できた。ＢｌｏｃｋとＢｏｘは、ｔ−ブチルオキシカルボニルグリシン−Ｎ−カルボキシ無水物とベンジルオキシカルボニルグリシン−Ｎ−カルボキシ無水物の潜在的なを用件を理解したが、それらを合成しようとする彼らの試みは不成功に終り、ウレタン−保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物は合成できないと結論づけた。たとえＮ−）リチルーＮＣＡ類全部が合成できたとしても、トリチル基に基づくかなりの立体障害のために、種々の縮合法においてアミノ酸のトリチル保護法を使用することは低収率を生じることは、周知である。トリチル基はまた、酸に極めて感応性であり、トリチル−ＮＣＡの合成を困難にし、しかも通常の固相操作（＋ａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｓ）の間に°°脱離する”傾向がある。）１ａｌｓｔｒｏｅｍとＫｏｖａｃｓ　（Ａｃｔａ　Ｃｈｅｍｉｃａ　５ｃａｎｄｉｎａｖｉａユＳｅｒ、Ｂ　１９８６　　ＢＹＯ６４６２−４６５及び米国特許第４，２６７゜３４４号明細書）もまた、Ｎ−保護アミノ酸−Ｎ−力ルボキシ無水物の利点と潜在的な有用性を理解し、Ｎ−置換ＮＣＡ類の幾つかを合成することができた。彼らはペプチド合成に使用するのに必要な要件を全て満たしたと考えた。彼らは多数の９−キサンチル（及び関連）置換アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物を製造できた。これらの化合物は還流ベンゼン、トルエン、キシレン又は他のアルキルベンゼン中でキサントヒトロールと適当なＮＣＡとを直接反応させることによって製造できることを特許請求した。縮合する間に生成した水は共沸除去された。この方法は、熱及び水に対するＮＣＡ類の不安定性を招き、結果として、低収率を生起し、しかも潜在的に可能性のある純度の低い生成物を生起する。前記化合物もまた、ホスゲン（又はホスゲン同等物）と対応する９−キサンチル−アミノ酸との反応によって製造し得、事実この種の置換ＮＣＡ類のほとんどがこの方法で製造されている。９−キサンチル−ＮＣＡ類は、ペプチド合成に使用した場合、溶液中では５０℃ で５時間、また固相合成法では２５°Ｃで２４時間と長時間を要してゆっくりと反応することがわかっている。これは９−キサンチル基の立体障害及び／又は失活効果によるものらしい、アミノ基の９−キサンチル保護に関連した別の問題は、連結反応の後に生成した９−キサンチルアミノ酸の窒素原子が末だ求核性であり、しかも次後の縮合反応を行なうことができるということである。上記の９− キサンチル基もまた、操作の間に脱離する傾向がある。従って、現在迄、このタイプの又は任意の他のタイプの置換アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物は、ペプチド合成、特に固相ペプチド合成法においては広範な使用は見出されていない。Ｋｒ１ｃｈｅｌｄｏｒｆ　（ＭａｋｒｏＩＩｌｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　、ｕＬ、９０５−９３９（１９７７））はメトキシカルボニルグリシンＮＣＡとエトキシカルボニルグリシンＮＣＡの製造法を記載している。しかしながら、Ｋｒ１ｃｈｅｌｄｏｒｆ　もまた、この方法では立体障害のために、水素原子以外の側鎖を有するアミノ酸のウレタン保護ＮＣＡ類を製造することができなかったと報告している。従って、本発明の目的は、従来得ることができなかった高級アミノ酸のウレタン保護Ｎ−カルボン酸無水物及びＮ−チオカルボン酸無水物を提供することにある。本発明の別の目的は、純粋で、結晶性で、安定なウレタン保護アミノ酸Ｎ−カルボキシ無水物及びウレタン保護Ｎ−チオカルボキシ無水物の製造法を提供することにある。本発明の更に別の目的は、純粋で、結晶性のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−力ルボキシ無水物を利用したポリペプチドの合成法を提供することにある。該合成法は慣用のポリペプチド合成法に対して以下の主要な利点を提供する。すなわち、１）連結すべきカルボキシル基のプレ活性化は必要がなく、従って従来の活性化分子によって生成される副生成物をなくする。２）ラセミ化を防止するために、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールのような添加剤を必要としない。３）連結反応に由来する唯一の共生酸物（併産物）は二酸化炭素である。４）前記Ｎ−保護力ルボキシル活性化アミノ酸は、安定で、貯蔵でき、結晶性の物質であり、それ故に、ペプチド結合の形成反応に先立つ活性化、濾過及び連結反応の必要性を取り除くことによって固相ペプチド合成法及び液相ペプチド合成法の両方を、特に自動ペプチド合成装置において、容易にし、簡略化する。溶液中で製造したペプチドの精製は、連結剤によって生成される副生成物がないために、前記の新規化合物を使用することによって極めて楽になる。５）この方法は、連結反応の後に、伸長中のペプチド鎖のアミノ官能基に対して広く受は入れられるウレタン保護基を付与するであろう、該ペプチド鎖は、次いで慣用の方法で取扱い得る。光凱■要貨前記の諸口的は、次の構造：（式中、Ｒ及びＲ′はス（素、アルキル、シクロアルキル。置換アルキル、置換シクロアルキル、アリール又は置換アリールであるが、Ｒ及びＲ′の少なくとも１つは水素ではなくｌ″はアルキル、アリール、置換アルキル又は置換アリールであり；Ｚは酸素又は硫黄であり：そしてｎは０．１又は２である）を有するウレタン保護されたアミノ酸−Ｎ−力ルボキシ無水物又はＮ− チオカルボキシ無水物によって達成される。好適なＲ，Ｒ’及びＲ＃の各基は、シクロアルキル基も含めて１〜１２個の炭素原子又はそれ以上の炭素原子を有するアルキル基；アラルキル基を含めて、６〜２０個の炭素原子又はそれ以上の炭素原子を有するアリール基；及び７〜２０個の炭素原子又はそれ以上の炭素原子を有するアルカリール基である。適当なアルキル基の代表例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イゾプチル。ブチル、ｔ−ブチル、ヘキシル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ヘプチル、オクチル等である。適当なアリール基の具体例は、フェニル５メチルフエニル、エチルフェニル、ナフチル、メチルナフチル、アントラニル等である。適当なアラルキル基の例としては、ベンジル。ｐ−メトキシベンジル、９−フルオレニルメチル、フェニルエチル等が上げられる。適当なアルカリール（ａｌｋａｒｙｌ）基としては、トリル、エチルフェニル、イソプロピルフェニル等が挙げられる。基Ｒ，Ｒ’及びＲ＃はまた、非障害性の基例えばフッ素（ｆｌｕｏｒｏ）、メトキシ、ｔ−ブトキシ、カルボキシルｊアミド、ベンジルオキシ、ヒドロキシ、置換アミノ、置換ヒドロキシ、硫黄、置換硫黄。塩素（ｃｈｌｏｒｏ）、臭素（ｂ’ｒｏｍｏ）等で置換されていてもよい。Ｒ及びＲ′は、代表的には、アミノ酸又はその類縁体のα−炭素原子に結合した保護された基又は保護されていない基（側鎖）である。はとんどの場合、Ｒ又はＲ′の一方は通常Ｈであり、他方はアミノ酸、例え：ｆリシン、ロイシン、アルギニン。セリン、アルバラギン酸、アラニン、アスパラギン、システィン、シスチン、グルタミン酸、ヒスチジン、グルタミン、イソロイシン１メチオニン、ノルロイシン、オルニチン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、β−アラニン、ホモセリンン等のα−炭素原子上の側鎖である９代表的な前記側鎖としては次のものが挙げられる。 −（Ｃ）１２）４−Ｎ）＋２　　　　　　　−１ｃ）１２＞２−Ｃ０ＯＨＨ３ −Ｃ）１２−Ｃｏｏ）（ −ＣＨ３−Ｃ８４−Ｃ）Ｉ２−５−Ｃ８゜−１ｃＨ２１３−ＮＯ３ −Ｃ）＋２−Ｃ）１２−ＯＨ上記側鎖は、所望ならば、当業者に周知の慣用の方法及び、保護基、例えば通− ミ、暫使用されているアミノ保護基。ヒドロキシ保護基、チ＋Ｆ−ル保護基及びカルボキシ保護基を用いて保護されていてもよい。本発明の化合物はまた、例えばＲ又はＲ′の一方が−ＣＨＩＣＨｆｆであり、他方が、パチルであるイソバリンの場合のように、Ｒ及びＲ′の両方がアミノ酸の α−炭素に結合した側鎖である場合も包含する。本発明の化合物はまた、例えば１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸の場合のように、Ｒ及びＲ′が環状環の構造の一部分である場合も包含する。本発明の化合物はまた、前記の基Ｒ又はＲ′由来の炭素原子が環状の環の一部分であるオルソ−アミノ安息香酸又はｌ−アミノ−２カルボキシシクロヘキサンのような例も包含する。本発明の別の要旨によれば、Ｎ−保護アミノ酸成分を脱保護させ、そしてそのように脱保護されたアミノ酸成分を第２の類イ以又は非頃似の活性化されたＮ−保護アミノ酸成分と反応させ、１１つ所望のポリペプチドが得られる迄前記反応を反復することから成るポリペプチド鎖の合成法において、前記の諸反応の少なくとも１つにおいて前記の活性化されたＩ４−保護アミノ酸成分として次の構造：（式中、Ｒ，Ｒ’、Ｒ”、Ｚ及びｎは前記の意義を有する）を使用することを特徴とする前記ポリペプチド鎖の改良された合成法が包１′ｔされる。本発明の更に別の要旨によれば、１つのＮ−保護されたアミノ酸成分を、前記アミノ酸成分の末端カルボキシルと反応性である置換基を含をする不溶性の固体支持体上に縮合反応させることによって連結し、このように連結したＮ−保護アミノ酸成分を脱保護し、次いでこの脱保護されたアミノ酸化合物に第２の類似又は非類似の活性化されたＮ−保護アミノ酸成分を連結し、かつ所望のポリペプチドが得られる迄前記の工程を反復することからなる不溶性の支持体０．ヒてのポリペプチド鎖の固相合成法において、前記の諸反応の少なくとも１つにおいて前記の活性化されたＮ−保護アミノ酸成分として、次の構造：有する化合物を使用す、５ことを特徴とする、可溶性又は不溶性支持体上でのポリペプチド鎖の改良された固相合成法が包含される。本発明の別の要旨と（７て、次の構造：（式中、Ｒ，Ｒ’　、Ｚ支びｎは前記の意義を有する）を有するアミノ酸−Ｎ−；５ルボキシ無水物と、次の構造：（式中、Ｘは塩素、臭素、フッ素、アジド等であり、Ｒ′はアルキル、アリール又はアラルキルである）を有するハロギ酸エステル（又は他の適当な反応性ギ酸エステル、例えばギ酸アジド）とを不活性希釈剤中、無水条件下で且つＮ−メチルモルホリンの存在下で反応させることを特徴とする、本発明のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物の製造法が挙げられる。上記反応において、不活性希釈剤、無水条件を使用し且つ塩基としてＮ−メチルモルホリンを選択すると、Ｎ−カルボン酸無水物の重合を回避し、しかも従来得られていない、高級アミノ酸のウレタン保ｇｌＮｃＡ類及びＮＴＡ類の製造を可能にすることが意外にも知見された。発１匡υｕ〔

【線肌アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物類ＣＮＣＡ類）及びＮ−チオカルボキシ無水物類（ＮＴＡ頻）は、本発明のＮ−ウレタン保護Ｎ　ＣＡ類及びＮＴＡ類を製造するための出発原料として役立）″）、当業者に周知の多数の方法で製造し得る０例えば、ＦｕｌｌｅｒらのＢｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ＋１５．　Ｎｏ、９＋１８６９−１８７０１９７６）　；　　にｒｉｃｈｅｌｄｏｒｆのＣｈｅｓ＋、　Ｂｅｒ、、利Ｌ＋８７−９１（１９７１）　；及びＨａｌ、ｓｔｒｏｍとＫｏｖａｃｓのＡｃｔａ　Ｃｈｅｗｉｃａ　５ｃａｎｄｉｎａｖｉａ、旦４０．４６．２− ４６５（１９８６）参照。 −ａにウレタン類は求核性原子用の保護基として使用し得るが、はんのわずかのウレタン、例えばＬ−ブチルｔ＋’ｉカルボニル（Ｂｏｃと略記する〕　；ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚと略記する）及び９−フルオレノメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣと略記する）、がペプチド合成に広く使用されている。従ってこれらの保護基で置換されたアミノ酸−Ｎ−力ルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物が特に重要である。従って、前記の保護基の１つで保護されたし一α−アミノ酸のＮＣＡ類、例えば：（式中、Ｒはα−アミノ酸の側鎖であり、Ｚは０又はＳであり、Ｘはメトキシ、塩素（クロロ）等である）がペプチド合成に非常に有用な分子である。前記したように、本発明のＮ−ウレタン保護ＮＣＡ類は、ＢｌｏｃｋとＣｏｘによって記載されたＮ−ウレタン保護アミノ酸とホスゲンとの反応（ｒＰｅｐｔｉｄｅｓ、　Ｐｒｏｃ、　ｏｆｔｈｅ　５ｔｈ　Ｅｕｒｏｐ、　５ｙａｐ、、　０ｘｆｏｒｄ、　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　１９６２Ｊ　。Ｐｅｒｇａｍｏｎ　Ｐｒｅｓｓ　１９６３．　Ｇ、　Ｔ、　Ｙｏｕｎｇ＆Ｗ、第８４〜８７頁）では得られず；またＫｒ１ｃｈｅｌｄｏｒｆ　［Ｍａｋｒｏｍｏｌ、　Ｃｈｅｍ、＋ｕＬ＋９０５〜９３９　（１９７７）　）によって記載された合成法で得られる高級アミノ酸のＮ−保護ＮＣＡ類でもない。今般、無水の、不活性溶媒中で、塩基として第３級アミンを用いて、先に合成されたＮＣＡ又はＮＴＡと、適当なハロギ酸エステルとの反応によりウレタン保ＩＮＣＡ類及びＮＴＡ類を製造し得ることが知見された。前記反応は室温より低い温度で行なうのが好ましい、前記反応に有用な溶媒は、テトラヒドロフラン、酢酸エチル９塩化メチレン。トルエン、ベンゼン、ジオキサン等である。このようにして、本発明の新規なウレタン保護アミノ酸−Ｎ〜カルボキシ無水物及びＮ−チオカルボキシ無水物は、不活性溶媒（例えばトルエン）中にＮＣＡを溶解し、生成溶液を攪拌しながら冷却することにより製造し得る。次いで所望のハロギ酸エステル（例えばクロロギ酸ベンジル）を１度に全量を加える。この混合物に、第３級アミン塩基（例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン等）を加える。該第３級アミン塩基は縮合反応を促進し且つ該反応の間に生成した塩酸を除去する。意外にも、ある種の第３級アミン塩基例えばＮ−メチルモルホリン及びＮ−エチルモルホリンがＮＣＡ類の重合を促進しないということを本発明者らは知見した。上記の好ましい塩基は、ＮＣＡの重合を促進しないように十分低いが、ＮＣＡとハロギ酸エステルとの反応を促進させる（ｃａ　ｔａ　１ｙｚｅ）のに十分高いｐＨをもつものである。従って、上記の好ましい塩基の１種を縮合反応に使用すると、重合が起こらない。重合する恐れがないので、前記の塩基は過剰に使用でき、しかも生成したウレタン保ＩＮｃＡ類を結晶化により容易に単離し得る。上記の知見の結果として、実質的には任意のウレタン保護ＮＣＡ　（又はＮＴＡ）が、水分を除外する最小の予防措置のみで、高収率で容易に製造できる。該方法は容易にスケールアップされ、高結晶質の生成物を与える。該生成物は簡単な方法（すなわち、結晶化法）で容易に精製でき、しかも貯蔵に対して安定である（２５°Ｃで少な（とも６か月そして恐らくはもっと長く完全に安定である。）従って、上記物質は、分解の恐れもなく、ペプチド合成に使用するために秤量され、船積みされ且つ貯蔵される。本発明のウレタン保護ＮＣＡ類が他のＮ−置換ＮＣＡ類に対して示す主な利点は、それらを使用してペプチド結合を形成した後に、生成したペプチドが、ペプチド合成に一般に使用される、広く受は入れているウレタン保護基の１つでＮ−末端上を保護されるということである。上記保護基は当業者には周知であり、増大したペプチド鎖のアミノ基に対して最も役立つ保護を与える。このような次第で、ウレタン保ＩＮ−カルボン酸無水物を使用すると、未置換ＮＣＡ類の利点（高反応性であること、所望しない転位生成物の生成がないこと、及び唯一の副生成物としてはＣＯ□のみであること）の全部を示すが、その使用が注意深く調整された水性条件に限定されている未置換ＮＣＡ類の諸欠点（すなわち、不安定であること、重合すること、及び多Ｎ縮合すること）を示さない。従って、本発明によれば、貯蔵可能な、しかも高反応性の、予じめ活性化された試剤を提供され、該試剤はペプチド結合を生成する開極くわずかの副生成物しか生成しない０本発明によればまた、縮合反応の後に得られたペプチドのＮ−末端の窒素に対して広く受は入れられ、十分に知られたウレタン保護が提供される。本発明のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物は、一連の脱保護反応及び連結反応を使用して古典的な方法によりポリペプチドの合成に使用できるが、該Ｎ−カルボキシ無水物は、確かに、面相ポリペプチド合成に使用するにはかなり高価である。本明細書及び付属の請求の範囲で使用する用語“ポリペプチド” はペプチド及びタンパク賞を包含することを意味すると理解される八”きである、また、本発明は、ウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物以外のＮ−保護アミノ酸並びに本発明のウレタン保ｇｉＮｃＡの少なくとも１種を使用する逐次ペプチド合成を意図することが理解されるべきである。しかしながら、実際には、各連ｔＪｆ　（ｓｅｑｕｅｎｃｅ）に使用されるＮ−保護アミノ酸成分は、本発明のウレタン保護ＮＣＡ類であることがより好ましい。固相ポリペプチド合成法においては、不溶性の固体支持体又はマトリックス（ｍａｔｒｉｘ）が、都合よくはビーズ形状で使用される。上記固体支持体は、ポリペプチドの合成に慣用的に使用されている任意の固相重合体状の支持体（ｓｕｂｓ　ｔｒａｒｅ）であり得る０代表的な上記重合体状樹脂は、架橋ポリエスチレン樹脂、ガラスピーズ、粘土、セライト２．架橋デキストラン、ポリアクリルアミド、ポリ同様の不溶性の固体支持体である。所望ならば、本発明の固相ポリペプチド合成法は、米国特許第４．１９２．７９８号明細書に記載の圧力下でフロー反応器（ｆｌｏｗ　ｒｅａｃｔｏｒ）中で実施し得るが、過圧の使用は必須ではない。ない、これは当業者に公知の多数の方法のいずれかによって達成される０種々の固体支持体に結合した上記Ｎ−保護アミノ酸の多くは、市販品であり、所望ならば購入し得る。所望のポリペプチド配列を形成するだめの残りの合成は、次のように行なわれる。第２のアミノ酸残基（ｒｅｓｉ−ｄｕｅ）の連結を行ない得る前に、既に支持体上にある第１の残基を脱保護しなければならない。樹脂上の前記の第１のアミノ酸残基の脱保護並びに次後に連結されたアミノ酸残基の各々の脱保護は、上記保護アミノ酸残基を適当な脱保護剤と接触させることによって行なうことができる。この目的に用いられる脱保護剤は、ペプチド合成の当業者には周知であり、任意の所定の場合に用いられる特定の脱保護剤は、もちろん、アミノ酸／樹脂上の保護基に依存するであろう。例えば保護基がｔ−ブチルオキシカルボニルである場合には、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸又は適当な溶媒例えばジオキサン中の塩酸が使用し得る。他方、保護基が９−フルオレニルメトキシカルボニルである場合には、塩基性条件例えばＤＭＦ中のピペリジンが好適な方法である。溶媒中の特定の脱保護基の濃度は、用いられる特定の保護基に依って変わるが、通常は約５〜５０容量％の範囲にわたる。脱保護工程の後、樹脂は、過剰の脱保護剤を除去するために適当な溶媒で洗滌される。脱保護が酸である場合には、樹脂上のペプチドは、ジクロロメタンの如き溶媒中で、トリエチルアミンの如き適当な塩基で洗滌することによって中和しなければならない。任意の過剰のトリエチルアミン及び生成したトリエチルアンモニウムクロリド又はトリフルオロ酢酸は、適当な溶媒、例えばジクロロメタン中はジメチルホルムアミドで繰り返し洗滌することによって除去し得る。このようにして調整された遊離アミンは、その次のＮ−保護アミノ酸と連結させる用意が整う。その次のＮ−保護アミノ酸が、本発明のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−力ルボキシ無水物である場合には、該Ｎ−保護アミノ酸は活性化する必要はなく、直ちに保護されず且つ樹脂に結合されたアミノ酸を含有する支持体と直接反応させ得る。しかしながら、前記Ｎ−保護アミノ酸成分をより慣用的な方法で連結させるべきである場合には、それはまず活性化する必要がある、すなわち例えば該アミノ酸を無水物に転化させることによって、又はジシクロへキシルカルボジイミド、カルボニルジイミダゾールもしくは他の活性化剤で活性化することによって、該アミノ酸を反応性の形態（ｒｅａｃｔｉνｅ　ｆｏｒｍ）に転化する必要がある。一般に、前記反応には過剰の活性化されたＮ−保護アミノ酸成分が使用される。第１のアミノ酸成分に第２の保護アミノ酸成分を連結した後に、次いで結合された保護ジペプチドを脱保護し、必要ならば中和し、次いで前記のようにして洗滌した後に、その次のアミノ酸誘導体の連結を行なう。この方法は、アミノ酸の所望の配列が不溶性支持体上において組み上げられる迄反復される。前記のウレタン保護ＮＣＡの連結においては、望ましくない副反応や副生成物（Ｃｏ□が唯一の副生成物である）がないために、またその安定性のために、連結反応に使用された過剰のウレタン保護ＮＣＡは容易に回収し、再結晶し、再使用し得、このような次第で上記物質の原価効率を著しく向上させる。完成したペプチドは、例えば無水フン化水素、エステル交換、アミツリシス等を用いる開裂によるような、標準法のいずれかによって、不溶性支持体から分離し得る。不溶性支持体から引き離した後に、得られたペプチドは極めて均質であり、しかも精製を必要としないか又は最小限度の精製しか必要としないことが認められる。副生成物の混成（ｃｏｎｔａ＋５ｉｎａｔｉｏｎ）が非常に低いので、全収率が極めて高いことが認められ、しかも必要などんな精製でも比較的容易に行なうことができる。前記精製は分配クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー又は両方の組み合わせによって行なうのが好ましい、前記方法はペプチド合成の当業者には周知である。裏旌■土く　　した　人のＮ−カルボン　紐　　の　”Ａ、バリン−Ｎ−カルボキシ無水物（７２■）を無水の蒸留テトラヒドロフラン（２ｏ＋Ｌ）に溶解し、次いでトリエチルアミン（３０μ２）を加えた。上記ＮＣＡの消失を赤外分光分析によって追跡した。Ｂ、バリン−Ｎ−カルボキシ無水物（７２■）をテトラヒドロフラン（２＋ｎＬ）に溶解し、次いでＮ−メチルモルホリン（２５μりを加えた。上記ＮＣＡの消失を赤外分光分析によって追跡した。Ａ３［Ｂの結果を図１のグラフに示す。１崖［１Ｎ−−フルオレニルメ　ルオキシカルボニル　−し−−エン−Ｎ−力ルボキシ缶Ａ、Ｌ−アラニン（４０，３ｇ、　０．４５モル）とホスゲン（３゜３Ｍテトラヒドロフラン溶液２７５ｍＬ、　０．９０モル）との混合物を６２〜６４°Ｃで４時間攪拌した。得られた溶液を室温迄放置して冷却し、濾過し、次いで揮発物を減圧下で除去した。得られた油状物をテトラヒドロフラン１００ｍＬに溶解し、次いで攪拌しなからヘキサン３０ｍを加えた後に一２０°Ｃ迄冷却した。Ｌ− アラニン−Ｎ−力ルボキシ無水物の収量は３５．７９ｇ　（６９％）であった。Ｂ、）ルエン（２０抛Ｌ）に溶解したし一アラニンーＮ−カルボキシ無水物（８，８４ｇ、　７６．８ミリモル）と９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（１９，９ｇ。７６．８ミリモル）のＯ″Ｃの混合物に、トルエン（５０抛Ｌ）に溶解したＮ− メチルモルホリン（８，１５ｇ、　８０．５ミリモル）の溶液を加えた。この反応混合物を０℃で２時間攪拌し、次いで濾過した。溶媒の容量を２０＋ｏＬ迄減らし、次いでヘキサン１００ｍＬを加えることによって結晶化が起こり、粗製９ −フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｌ−アラニン−Ｎ−カルボキシ無水物２１．４　ｇを得た。この生成物を冷ジイソプロピルエーテルで磨砕（ｔｒｉｔｕｒａｔｉｏｎ）　Ｌ、次いで酢酸エチル／ヘキサンがら再結晶することによって精製した。ｍｐ１０６−１０７°Ｃ：ＩＲ（ＣＩ（ｚ（／２ｚ）　１８７０．１８０１．１７４００１−’；　ＮＭＲ（ＣＤＣｆｉ）δ６．９０−７．８０（ａ＋、　８Ｈ）、　３．９５−４．５５（ｍ、　４）１）、　１．３５（ｄ。Ｊ　＝７Ｈｚ、　３Ｈ）。元素分析値ｉ　Ｃ＋　９ＨＩ　５ＮＯｓの計算値：　Ｃ，６７，６５；　）１，４．４８；Ｎ、　４．１５．実測値Ｃ，６７，７３；　Ｈ，４，６５；　　１１．４．１９゜災施勇ｌＮ−−フルオレニル　　ルオキシヵルボニル　−Ｌ−ロイシンーＮ−力ルボキシ笹Ａ、実施例ｎＡに概説した方法により、Ｌ−ロイシンからし一ロイシンーＮ−力ルボキシ無水物を収率７８％で製造した。Ｂ、ｌ−ルエン（１２５ｍｌりに溶解したし一ロイシンーＮ−カルボキシ無水物　（９，２ｇ、　５８．４ミリモル）と９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（１５，１ｇ。５８．４ミリモル）との混合物をｏ′ｃに冷却し、次いでトルエン２０社に溶解したＮ−メチルモルホリン（６，５ｇ。６４ミリモル）の溶液を滴加した。この反応混合物を０℃で２．５時間攪拌し、濾過し、次いで溶媒の容量を２０社に減らした。ヘキサン（４８０Ｉｄ）を加え、次いで得られた溶液を一２０°Ｃに１夜冷却し、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−Ｌ−ロイシン−Ｎ−カルボキシ無水物１８．８ｇ　（８５％）を得た。エーテル／塩化メチレン／ヘキサンから再結晶することにより分析試料を得た。　ｍｐ　１１８−１２０″Ｃ；　ＮＭＲ（ＣｃＩ！４）６７．３５−７．９Ｈｍ、　　８Ｈ）、　　４．７２（ｔ、　　Ｊ＝７Ｈｚ、　　２Ｈ）；　４．５８（ｍ、　　３Ｈ）；４．３７（ｔ、Ｊ＝７Ｆｌｚ、　　１ｔｌ）；　　２．０５（ｍ、　　２Ｈ）；　　１．０９（ｔ、　　Ｊ−６）１ｚ。６Ｈ）０元素分析値；　ＣｔｚＨｚｌＮＯｓの計算値：　Ｃ，６９，ｆＦ６４；　Ｈ。５．５８；　　Ｎ、　　３．６９．実測イ直　Ｃ，６９，０８，Ｈ，５，９７；　　Ｎ、　　３．７０゜実１１１ＭＮ−α−−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−も一ブ　ルオキシカルボニルーし　１シン−Ｎ−力シボキシ法Ａ、テトラヒドロン（５０＋ｍＬ）に溶解したＮ−ε−ｔ−ブチルオキシカルボニル−し−リジン（１，２３ｇ　、　　５．０ミリモル）とクロロトリメチルシラン（１，０８ｇ、　１０．０ミリモル）の混合物を０°Ｃに冷却し、次いでテトラヒドロフラン５ｏ＋Ｌに熔解したトリエチルアミン（１，０１ｇ　。１０．０ミリモル）の溶液を滴加した。得られた混合物を０°Ｃで２．５時間攪拌し、濾過し、次いでテトラヒドロフラン１５ｍＬに溶解したホスゲン（１０ミリモル）の溶液に加えた。温度を６０°Ｃ迄上昇させ、溶液を２．０時間攪拌し、次いで周囲温度で１夜攪拌した。揮発物をロータリーエバポレーターで蒸発させることによって除去し、Ｎ−ε−ｔ−ブチルオキシカルボニル−し−リシン− Ｌ−Ｎ−カルボキシ無水物０．７９ｇ　（５８％）を得た。ＩＲ（Ｃ）ＩｚＣｆ　ｔ）１８６０．１７９５．１７１０ｃ＋ｎ−’。Ｂ、）ルエン（２５ｍ）に溶解したＮ−ε−ｔ−ブチルオキシカルボニル−し− リシン−Ｎ−力ルボキシ無水物（０，７９ｇ、　２．９０ミリモル）と９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（０，７５ｇ、　２．９０ミリモル）の混合物を０°Ｃに冷却し、次いでトルエン（５ｄ）に溶解したＮ−メチルモルホリン（０，３２ｇ　、　　３．２ミリモル）の溶液を滴加した。実施例ｍＢに記載のようにして反応を行ないＮ−α−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−ｔ−ブチルオキシカルボニル−し−リシン−Ｎ＝カルボキシ無水物０．８８ｇ　（６６％）を得た。ｍｐ　８１−８５’Ｃ；　（酢酸エチル／ヘキサン）；ＮＭＲ（ＣＤＣ１，、５）６７．３−７．７（ｍ、　８Ｈ）、　４．１１−４．５８（＋ｗ、　５Ｈ）：２．９５−３．２０（ｍ、　２Ｈ）；　１．９０−１．９８（ｍ、　２Ｈ）；　０．９−１．４（＋ｍ。１．３）１）、元素分析値；　Ｃｚ、Ｎ３゜Ｎ２０７の計算価：　Ｃ，６５，５７；Ｈ，６，１１；　　Ｎ、　　５．６７、　　実測イ直　Ｃ，６６，３３；　　Ｌ　　６．３８；Ｎ、　５．６７゜実施ＩＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−−ニンーＬ−左ｎｔＭ４ヨｄｉ源虹酢酸エチル（８０ｄ）に溶解したし一アラニンーＮ−カルボキシ無水物（ＩＩ［Ａから）　　（０，８１ｇ、　　７．０ミリモル）とベンジルオキシカルボニルクロリド（１，８９ｇ、　１０．５ミリモル）の混合物に、酢酸エチル（２０ｄ）に溶解したＮ−メチルモルホリン（１，０６ｇ、　１０．５ミリモル）の溶液を０°Ｃで滴加した。この反応混合物をＯ″Ｃで１．５時間攪拌し、濾過し、次いで溶液の容量を７５ａ＋Ｌに減らした。攪拌しなからヘキサン（７５ｍ）を加え、次いで一２０°Ｃ迄冷却しＮ−ベンジルオキシ−し−アラニン−Ｎ−力ルボキシ無水物１゜２０ｇ　（７１％）を得た。　ｍｐ　１０１−１０４°Ｃ，ＮＭＲ（ＣＤＣｊ！　３）δ　７．３３（ｓ、　　５８）、　　５．２７（３，２Ｈ）；　４．６０（Ｑ、Ｊ−７８２゜ＩＨ）、　１．６１（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ、　３Ｈ）、元素分析値；　Ｃ＋　ＩＨＩ　ｌＮＯ３の計算値：Ｃ，５７，８３；　）Ｉ＋　４．４５；　Ｎ、　５．６２．実測値Ｃ，５７，６０；）１．　４．５０；　　Ｎ、　　５．５３゜実】ｌ吐■ Ｎ−ベンジルオキシカルボニル　−し一ロイシンーーカルボキシ慨酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解したし一ロイシンーＮ−カルポキ・シ無水物（０，７９ｇ　、　　５．０ミリモル）（Ｉ［ｒＡから）とベンジルオキシカルボニルクロリド（１，３５ｇ、　７．５０ミリモル）との溶液に、酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解したＮ−メチルモルホリン（０，７６ｇ、　７．５０ミリモル）の溶液を０℃で滴加した。この反応混合物を０℃で１．２５時間攪拌サン（５ｈＬ）を加え、次いで一２０’Ｃ迄冷却し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−し−ロイシン−Ｎ−カルボキシ無水物０．８９ｇ　（６１％）を得た。　ｍｐ　７２− ７３．５°Ｃ（エーテル／ヘキサン）　；　ＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）δ７．４０（ｓ、　５Ｈ）、　５．３３（ｓ。２Ｈ）；　４．７Ｈｔ、　Ｊ−６Ｈｚ、　ＩＨ）；　１．８０−２．０４（ｍ、　３８）；　０．９１（膓。６Ｈ）０元素分析値；　Ｃ＋ｓＨ＋ｔＮＯｓの計算値：　Ｃ，６１，８４；Ｈ，５，８８；　Ｎ、　４．８１．実測値Ｃ，６１，６４；　Ｈ，６，０２；　Ｎ、４．９０゜裏施斑距Ｎ−フェニルオキシカルボニル−し−バ１ンーＮ−力上土土之里人隻Ａ、実施例ＩｆＡに記載の方法によりＬ−バリンからＬ−バリンＮ−カルボキシ無水物を収率７５％で製造した。Ｂ、クロルギ酸ベンジルをクロルギ酸フェニルに代え、且つロイシン−Ｎ−カルボキシ無水物をバリン−Ｎ−カルボキシ無水物に代えて実施例Ｖを反復した。その結Ｌ　Ｎ−フェニルオキシカルボニル−Ｌ−バリン−Ｎ−カルボキシ無水物が収率７８％で得られた。　ｍｐ　１０５−１０６°Ｃ；（クロロホルム／ヘキサン）；　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ　ｘ）６７．３０（ｏ＋＋　５８）、　４．７０（（１，Ｊ＝３．５８Ｚ、　１）１）、　２．６０（ｍ、　ＬＨ）。１．２２（ｄ、　Ｊ　＝７Ｈｚ、　３Ｈ）、　１．０７（ｄ、　Ｊ　＝７）１ｚ、　３Ｈ）、　１．０７（ｄ、　棲Ｊ　−７Ｈｚ、　３Ｈ”）−元素分析値；　Ｃ＋　ＺＨＩ　３ＮＯ５の計算値：　Ｃ，５９，３１；　Ｈ，４，９８；　Ｎ、　５．３２．実測値Ｃ，５９，０９゜Ｈ，４，９１；　Ｎ、　５．４９゜災施皿■ Ｎ−エ　ルオキシカルボニルーし一アーニンーＮ−力２ｙボ１展」ＬＫ批クロルギ酸ベンジルをクロルギ酸エチルに代えて実施例Ｖを反復した。その結果、Ｎ−エチルオキシカルボニル−し−アラニン−Ｎ−力ルボキシ無水物が６２％の収率で得られた。　ｍｐ　７２−７３．５°Ｃ（酢酸エチル／ヘキサン）；ＮＭＲ（ＣＤＣＡ　ｓ”）６４．７３（ｑ、Ｊ−７Ｈｚ、　２）１）；　４．３３（ｑ、Ｊ−７Ｈｚ。ＩＨ）、　１．７０（ｄ、　Ｊ＝７Ｈｚ、　３Ｈ）、　１．３３（ｔ、　Ｊ　＝７Ｈｚ、３Ｈ）。元素分析値；　ＣＪｑＮＯｓの計算値：Ｃ，４４，９２；　）！、　　４．８５；Ｎ、　７．４９．　　実測値Ｃ，４５，０８；　Ｈ，５，０３；　Ｎ、　？、３３、災施孤■ Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−し−フエニルアーニンーＮ−カルボキシ缶Ｌ−フェニルアラニン−Ｎ−力ルボキシ無水物を収率５３％で製造した。Ｂ、酢酸エチル（１３０＋ｏＬ）に熔解したし一フェニルアラニンーＮ−カルボキシ無水物（２，５ｇ、１３ミリモル）とクロルギ酸ベンジル（３，４ｇ、２０ミリモル）との溶液に、酢酸エチル（１０＋ａＬ）に溶解したＮ−メチルモルホリン（２，０ｇ、２０ミリモル）の溶液を０°Ｃで滴加した。得られた混合物をＯ″Ｃで２．５時間攪拌し、次いで実施例Ｖに記載のように行ないＮ−ベンジルオキシカルボニル−し−フェニルアラニン−Ｎ−カルボキシ無水物２．０　ｇ　（４８％）を得た。ｍｐ　１０８−１０９°Ｃ；　Ｎ？ＩＲ（ＣＤＣｊ２３）δ７．３５（ｓ、　５Ｈ）、　７．００（ｍ、　５Ｈ）、　５．３Ｈｓ＋　２Ｈ）、　４．８３（ｍ。ＬＨ）、　３．２８（隣、　２８）、元素分析値ｉ　Ｃ＋　ＩＨＩ　？ＮＯ５の計算値：Ｃ，６８，１３；　　Ｈ，５，４０，Ｎ、　　４．４２．　　実測イ直　Ｃ，６８，１１；　　Ｈ。５．３８；　Ｎ、　４．２０゜実施土Ｘｌ工上寿ｊまシ重」二］＝しじ什ヨｙ−＋、を友にダ吏之里水隻Ａ、Ｏ−エチル−８−メチルキサンテート水（５０ａ＋Ｌ）に溶解したエチルキサントゲン酸カリウム（１６，０ｇ　、　　１００ミリモル）の溶液に硫酸ジメチル（１２，６ｇ　、　　１００ミリモル）を４±１°Ｃで滴加した。滴加が完結したらすぐに、反応混合物をジクロロメタン（２ｘ４０ｄ）で洗滌し、有機層を一緒にし、乾燥（ＭｇＳＯ４）　　Ｌ、次いで濃縮した。油状の残留物をメタノールに溶解し、次いで濃縮し、次工程に使用するのに十分純粋な０−エチル− ８−メチルキサンテートを得た。Ｂ、エトキシカルボニル−し−アラニン上記で製造した０−エチル−８−メチルキサンテートに、水（１００ａｆ）に溶解したし一アラニン（８，９ｇ。１００ミリモル）とＮａＯＨ（４，０ｇ　、　１００　ミリモル）との溶液を加えた。得られた溶液を４５゛Ｃで２．３時間加熱した。Ｎ：でパージしながら、メタノール（５０ｄ）を加え、次いで混合物を４５℃で更に０，７時間攪拌した０反応混合物を放置したまま室温迄冷却し、ジクロロメタン（３ｘ２５ｍ）で洗滌し、濃塩酸でｐＨ２，５迄酸性化し、次いで酢酸エチル（２Ｘ５０ｍ）で抽出した。有機溶液を一緒にし、乾燥（ＭｇＳＯ４）　シ、次いで濃縮した。得られた油状物にヘキサンを加えて、７４〜８０°Ｃで溶融する無色固体としてエチルオキシチオカルボニル−し−アラニン９．５ｇ　（５４％）を得た。この物質はエーテル／ヘキサンから再結晶させることによって更に精製した。ａｌｐ　７７−７９°Ｃ：　ＩＲ（ＣＣｆ、）３３９７．１７１６ｃｍ−’。Ｃ，Ｌ−アラニン−Ｎ−チオカルボキシ無水物ＴＨＦ　（２０ａｄ）に熔解したエチルオキシチオカルボニル−し−アラニン（３，０ｇ、　１７ミリモル）とイミダゾール（１，２ｇ、１７ミリモル）との溶液にＰＢｒｓ（５，４ｇ　。２０ミリモル）を２０°Ｃで滴加した。固体の塊りが微細懸濁物に粉砕される迄攪拌を続けた。この反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｄ）と酢酸エチル（１５０ｍＬ）との混合物に性別した。有機層を分液し、ＩＭＨＣｊ２（２ｘ１００　ｄ）　、飽和ＮａＨＣＯｚ溶液（１００ａｄ）及び食塩水（１００−）それぞれで洗滌し、乾燥（ＭｇＳＯａ）　　シ、次いでｖＡ縮した。得られた油状物を放置して固化させた。得られた固体を再結晶することによりＬ −アラニン−Ｎ−チオカルボキシ無水物０．７５ｇ　（３４％）を得た。ｍｐ　９１−９２°Ｃ；ＩＲ（ＣＣｌ　ａ）　１７５０．１６９５ｃｍ−’。Ｄ、フェニルオキシカルボニル−Ｌ−アラニン−Ｎ−チオカルボキシ無水物酢酸エチル５０ｍに溶解したし一アラニンーＮ−チオカルボキシ無水物（０，４９ｇ　、　　３．８ミリモル）の溶液に、クロルギ酸フェニル（０，９５ｇ　、　　６．１ミリモル）を０°Ｃで加え、次いで酢酸エチル（１０＃１１りに溶解したＮ−メチルモルホリン（０，５７ｇ　、　　５．６ミリモル）の溶液を０° Ｃで滴加した。得られた混合物を０°Ｃで３時間攪拌し、濾過し、次いで濃縮し白色の半固体を得た。この白色半固体を酢酸エチル２０ｄに溶解し、ヘキサン（１５０ｄ）を加え、次いで混合物を一２０°Ｃ迄冷却しフェニルオキシカルボニル−し−アラニン−Ｎ−チオカルボキシ無水物０．５５ｇ　（６２％）を得た。ａｌｐ　１１０−１１１°にＩＩＭＲ（ＣＤＣｌ　２＞δ７．１８（ｍ、　５Ｈ）、４．８３（ｑ、　ＩＨ，Ｊ＝７Ｈｚ）：　１．７１（ｄ、　３Ｌ　Ｊ　＝７Ｈｚ）；　ｒＲ（ｃＨｚｃＬ）　１８１０．１７４０　（２重線）　１７１５　（ショルダー）０元素分析値；　　Ｃ１ＨｑＮＯａＳの計算値：　Ｃ，５２，５８；Ｈ，３，６１；　Ｎ　５．５８；　Ｓ、　１２．７６゜実測値：　Ｃ，５２，７５；　Ｈ，３，７２；　Ｎ、　５．３６；　Ｓ、　１２．９８゜実施Ｕ土１−　ルオレニルメ　ルオキシカルボニル　０−ｔ−７’チル−Ｌ−スレオニン −Ｎ−カルボキシ鉦Ａ、実施例ＩＶＡに記載のトリメチルシリル法を用いて〇− ｔ−ブチル−し一スレオニンから０−１−ブチル−し−スレオニン−Ｎ−カルキシ無水物を収率５７％で製造した。Ｂ、）ルエン（５０ｄ）に溶解した０−１−ブチル−し−スレオニンーＮ−カルボキシ無水物（０，８０ｇ　、　　４．０ミリモル）と９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（１，０ｇ、４．０ミリモル）との溶液に、トルエン８−に溶解したＮ−メチルモルホリン（０，４９ｇ　。４．８ミリモル）の溶液をＯ″Ｃで滴加した。この反応混合物を０℃で３時間攪拌し、濾過し、次いで揮発物を減圧下で除去した。得られた残留物をエーテル／ヘキサンから結晶しＮ−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−０−１ −ブチル−し−スレオニン１．０ｇ（６０％）を得た。　ｍｐ　１２４−１２７ °Ｃ；　ＩＪＭＲ（ＣＤＣＬ）６７．０８−７．７８（ｍ、　８Ｈ）、　４．０５−４．６１（ｍ、　４８）、　１゜１８（ｓ、　９Ｈ）。１．１６（ｄ、　３ｔ（、Ｊ　＝７Ｈｚ）、元素分析値；　ＣｚａＨｔｓＮＯｂの計測値：　Ｃ，６８，０７；　Ｈ，５，９５；　Ｎ　３．３１．実測値：　Ｃ，６７，８９；Ｈ，５，９６；　　Ｎ、　　３．２８゜実讃」しくｉエ　ルオキシ力ルポニルーα−アミノ　　−Ｎ−カルー汎ま］」Ｌ源払Ａ、実施例ＩＩＡに記載の方法によりα−アミノ酪酸−Ｎ−カルボキシ無水物を収率６７％で製造した。Ｂ、Ｌ−アラニン−Ｎ−カルボキシ無水物をα−アミノ酪酸−Ｎ−カルボキシ無水物に代えて、実施例■Ｂを反復し、収率１６％でエチルオキシカルボニル−α −アミノ酪酸−Ｎ−力ルポキシ無水物を得た。ｍｐ　６８−７０°Ｃ（クロロホルム／ヘキサン）　、　ｌＪ？ＩＲ（ＣＣｊ２４）δ４．５９（ｑ。２Ｈ，Ｊ　＝７Ｈｚ）、　２．００（ｓ、　６Ｈ）、　１．６５（ｔ、　３Ｂ、　Ｊ＝　７Ｈｚ）。元素分析値；　　ＣｅＨ＋＋ＮＯｓの計算値：　Ｃ，４７，７６；　Ｈ。５．５１　；Ｎ　６．９６．実測値：Ｃ，４７，６７；　）Ｉ、　５．５１；　１１．７．１４゜実１１ＸｉＮ−ｔ−ブ　ルオキシカルボニルーし一アーニン　Ｎ−カルボキシ紐酢酸エチル８０＋ａＬに溶解したｔ−ブチルアルコール（１，２５ｇ、　１６．９ミリモル）とホスゲン（５Ｍジオキサン溶液３．４　ｄ、　１７ミリモル）の溶液に、Ｎ−メチルモルホリン（３，４ｇ、３４ミリモル）を−５０°Ｃで滴加した。この反応混合物を０．５時間攪拌した。酢酸エチル（１０ｄ）に溶解したし一アラニンーＮ−力ルボキシ無水物（０，２３ｇ　。２．０　ミリモル）を加え、この混合物を一５０°Ｃで更に０．７５時間攪拌した。Ｎ−メチルモルホリン（１，０ｇ、１０ミリモル）を加え、更に攪拌を一５０°Ｃで０．７５時間続けた。固体を濾過することによって除去し、得られた溶液を濃縮し、次いでヘキサンで磨砕した後に生成物を得た。トルエンから再結晶し、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−アラニン−Ｎ−カルボキシ無水物０．２８ｇ　（６５％）を得た。ｍｐ　１０３−１０４．５°Ｃ；　ＮＭＲ（ＣＤＣＥ　３）６４．７１（ｑ、　ｉｔ（、Ｊ＝７Ｈｚ）。１．８０（ｄ、　３Ｈ，Ｊ　−７Ｈｚ）、　１．７０（ｓ、　９Ｈ）、元素分析値；ＣＩＩＨＩ３ＮＯ，の計測値：　Ｃ，５０，２３；　Ｈ，６，０９，Ｎ　６．５１．　　実測値：Ｃ，５０，６６；　）Ｉ、　６．３６：　Ｎ、　６．３Ｂ。尖ｌ■ｘ髭Ｎ−ｔ−プ　ルオキシカルポニル　−〇−ベンジルーし一セ１ンーＮ−カルボキシ話Ａ、実施例ＩＩＡの方法によりＯ−ベンジル−し−セリン−Ｎ−力ルボキシ無水物を収率６８％で製造した。Ｂ、Ｌ−アラニン−Ｎ−カルボキシ無水物に代えて〇−ベンジルーし一セリンーＮ−カルボキシ無水物を用いて実施例Ｘ■を反復し、収率５２％でＮ−（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−〇−ベンジルーし一セリンーＮ−カルボキシ無水物を得た。　ｍｐ　９８−９９．５°Ｃ；ＮＭＲ（ＣＣｆ　ａ）６７．３０（ｍ、　５Ｂ）、　４．６４（＋ｍ、　３Ｈ，ベンジルのＣＨ２ａｎｄＮＣＡ環のプロトン）、　４．０９（ｄｄ、　１Ｍ、　Ｊ　＝　１５．５Ｈ２）。３．８８（ｄｄ、　ＩＨ，Ｊ　＝　１５．５Ｈｚ）、　１．６５（ｓ、　９Ｈ）、元素分析値；　Ｃ＋ｓＬ　ｑＮＯｂの計算値：　Ｃ，５９，８０；　Ｈ，５，９６；　Ｎ　４．３６゜実測値：　Ｃ，５９，，７１，Ｈ，６，２５；　Ｎ、　４．０５゜実施■ｘＭ −アミノー　−シ　ロヘキ　ンカルボン　−Ｎ−カルボキシ鉦　　のフェニルオキシカルボキシ量禾Ａ、実施例ＩｒＡに記載の方法で、１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸から１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸−Ｎ−カルボキシ無水物を収率５０％で製造した。Ｂ、酢酸エチル（３０ｄ）に上記Ａで製造した上記Ｎ−カルボキシ無水物（０，８５ｇ　、　　５．０ミリモル）とクロルギ酸フェニル（１，２ｇ、　　７．５ミリモル）とを溶解した溶液に、０゛Ｃで、酢酸エチル８ｍＬにＮ−メチルモルホリン（０，７６ｇ　、　　７．５ミリモル）を溶解した溶液を加えた。反応混合物を０°Ｃで２時間攪拌し、濾過し、次いで濃縮した。得られた白色の半固体状残留物をエチルエーテル／塩化メチレン／ヘキサンから再結晶し、標記Ｎ−カルボキシ無水物０．９２ｇ　（６６％）を得た。　ｍｐ　１５６．５１５８　°Ｃ；　　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ　ｓ）　δ　７．２８（ｍ、　　５Ｈ）、　　１．２０−３．１０（ｍ。１０Ｈ）、元素分析値ｉ　Ｃ＋ｓＨ＋５ＮＯｓの計算値：　Ｃ，６２，２’７；Ｈ，５，２３；　Ｎ　４．８４．　　実測値：　Ｃ，６２，０３；　）１．５．２２；　Ｎ。４．７７゜夫施班１１Ｎ−９−フルオレニル　　ルオキシカルポニル　−Ｌ−ロイシンーＮ−力ルボキシ怪Ａ、実施例ｎＡに概説した方法でＬ−ロイシンからＬ−ロイシン−Ｎ−力ルポキシ無水物を収率７８％で製造した。Ｂ、乾燥した、蒸留酢酸（１５０ｄ）に溶解したし一ロイシンーＮ−カルボキシ無水物（９，２ｇ　、　５８．４ミリモル）の混合物を一１０°Ｃ迄冷却し、酢酸エチル２０ｄにトリエチルアミン（９ｍ、６４ミリモル）を溶解した溶液を５分間にわたって滴加した。冷却を中止し、反応混合物を放置したまま１５分間攪拌した。トリエチルアミンの全量を中和することを確実にするために、ジオキサンに溶解した少量の無水塩化水素（４，４Ｍ、５ｄ）を加えた。反応混合物を濾過し、次いで溶媒を真空中で除去した。得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解し、濾過し、次いでヘキサンを加えた後に結晶させることにより生成物を得た。注意深く３回結晶化させた後にＮ−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−り一ロイシンーＮ−カルボキシ無水物を収率１６％（３，６ｇ　）で得た。分析データは実施例■で得られた分析データと本質的に同じであった。災旌旦ＸユＬ−ロイシル−し−バ１ンＰ−アルコキシベンジルアルコールで誘導した２％架橋スチレンにエステル化させた９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｌ−バリン（０，２５ｇ、　０．１３ミリモルバリン）を固相ペプチド合成容器に入れた。ジメチルホルムアミド（５−）を加え、次いで得られたスラリーを３０　分間ｔｉ盪した。ジメチルホルムアミドを除去し、次いで膨潤した樹脂をジメチルホルムアミドに溶解した１０％ピペリジンで２回（５ｍ２で５分間、次いで５１ＩＩＬで１５分間）処理し、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル保護基を除去した。前記樹脂をジメチルホルムアミド（４Ｘ５ｄ）で洗滌し、次いでジメチルホルムアミド（６雌）に溶解した９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシン−Ｎ−力ルボキシ無水物（１４５■、　０．３８ミリモル）と４５分間反応させた。フルオレニルメチルオキシカルボニル保護基を上記のようにして除去し、次いで樹脂をジメチルホルムアミド（３Ｘ５ｄ）と塩化メチレン（３Ｘ５ｄ）で洗滌した。塩化メチレン／トリフルオロ酢酸（６−１１／１）で４５分間処理することによって、樹脂から、生成したジペプチドを引き離した（ｃｌｅａｖａｇｅ）。溶液を除去し、次いで樹脂を塩化メチレン（３ｘ５＋ｄ）、次いでメタノール（２Ｘ５ｄ）で洗滌した。−緒にした溶液と洗液とを真空中で蒸発させ半固体を得、該半固体を蒸留水に溶解し、次いで濾過した。得られた水溶液を凍結乾燥し、得られた固体をエーテル（３×）で磨砕し樹脂の関連の不純物（ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔｓ）を除去し、次いで減圧下で乾燥し収率〉９０％でＬ−ロイシン−し−バリンを得た。このジペプチドの同定はＨＰＬＣ分析（流量１．５ｄ／分、　２１５ｎｍで検出、　　０．５Ｍ過塩素酸に溶解した３０％メタノール）により既知標準（保持時間８，４９分）を用いて共溶出させることによって確認した。純度は〉９７％であると決定された。不純物全部は樹脂に起因するものであった。Ｄ−ロイシル−し−バリン（保持時間３２分）は検出されなかった（検出限界＜０．１％）。裏隻旦Ｘ■ Ｌ−ロイシル−し−バ１ン溶媒としてジメチルホルムアミドの代わりに塩化メチレン（５ｍ）を用いて９− フルオレニルメチルオキシカルボニル−し−ロイシン−Ｎ−力ルボキシ無水ｙｃ樹脂上のし一バリンの遊離アミンと反応させた以外は実施例ＸＶＩを反復した。得られた結果は実施例ＸＶＩに相当する。裏旌五ｌ１ｌＬ−口イシル−Ｌ−アーニルーＬ−バ■ン　Ｆ員ＯＣ゛実施例ＸＶＩの方法を使用してＬ−口イシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリンを製造した。樹脂から引き離し、次いでエーテルで洗滌した後に白色固体として上記トリペプチドを収率〉８８％で得た。実施例ＸＶＩに記載の条件を使用して、ＨＰＬＣ分析により生成物を既知標準と一緒に溶出し、生成物の同一性を確認した。削除配列（ｄｅｌｅｔｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅ）　　（保持時間１６．２８分）例えばＬ−口イシル−Ｌ −バリン及びＬ−アラニル−Ｌ−バリンは検出されなかった（検出限界＜０．１％）。裏旅五１ｍＬ−口イシル−Ｌ−アーニルーＬ−バ１ン　ＢＯＣ′メチル化した２％架橋ポリスチレン（例えばＭｅｒｒｙｆ　ｆｅｌｄ樹脂）にエステル化したｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−バリン（０，５０ｇ、　０．２３ミリモルバリン）を固相ペプチド合成容器に入れた。塩化メチレン（５ｊｌ！ｌりを加え、次いで得られたスラリーを３０分間振盪した。溶媒を除去し、次いで樹脂を塩化メチレン／トリフルオロ酢酸（６ｄ、　１／ｉ　）で３０分間処理し、ｔ−ブチルオキシカルボニル保護基を除去した。樹脂を塩化メチレン（３Ｘ５ｄ）で洗滌し、塩化メチレンに熔解した１０％トリエチルアミン（５ｄ）で中和し、塩化メチレン（３ｘ５ｄ）で洗滌し、次いで塩化メチレン（５ｔａｉｌ　）に溶解したｔ−ブチルオキシカルボニル−し−アラニン−Ｎ−カルボキシ無水物（２００■、１．０ミリモル）と４５分間反応させた。得られた保護ジペプチド樹脂を塩化メチレン（３Ｘ５ｄ）で洗滌した。樹脂を再び脱保護しくｄｅｂｌｏｃｋ）　、洗滌し、中和し、次いで前記のように洗滌した。塩化メチレン（６ｄ）に熔解したｔ−ブチルオキシカルボニル−し−ロイシン−Ｎ−カルボキシ無水物（２４０■、１．０ミリモル）を樹脂に加え、この混合物を４５分間振盪した。溶液を除去し、樹脂を塩化メチレン（３ｘ５４）、メタノール（３×５ｄ）及び塩化メチレン（３Ｘ５．ｄ）で洗滌し、次いで高真空下で乾燥した。得られたｔ−ブチルオキシカルボニル保護トリペプチド樹脂を液体フン化水素とＯ″Ｃで３００分間反応せた。フン化水素を除去し、次いで残留物を高真空下で乾燥した。得られたペプチドを水に溶解し、樹脂を濾過により除去した。得られた溶液を凍結し、はとんど定量的収率でＬ−ロイシル−し−アラニル−し−バリンを得た。　ＨＰＬＣ分析結果は実施例Ｘ■に匹適していた。宴ｌｌ連ｎｕＬ−−二ルーＬ−エニル　−ニン　″　　Ｔ゛に１五とＡ、テトラヒドロフラン（２０ｄ）に溶解したし一フェニルアラニンペンシルエステル・ｐ−トルエンスルホン酸（１，０７ｇ　、　　２．５ミリモル）に、０ °ＣでＮ−メチルモルホリン（０，２５ｇ　、　　２．５ミリモル）を加えた。この混合物を０°Ｃで０．５時間攪拌し、次いでＮ−ベンジルオキシカルボニル −し−アラニン−Ｎ−力ルボキシ無水物（０，５０ｇ　、　　２．０ミリモル）を加えた。この反応混合物をＯ′Ｃで２時間攪拌し、次いで水（２０ｄ）とジクロロメタン（５０ｄ）とを加えた。分液し、水層をジクロロメタン（２５ｄ）で洗滌した。有機層を一緒にし、０．５　Ｍ　　Ｈ（４（２Ｘ５０成）、１０％炭酸水素ナトリウム（５０ｄ）及び水（ｚｘ５０ｍ）で洗滌し、乾燥（ＭｇＳＯａ）し、次いで濃縮した。ヘキサンを加えることによって生じた結晶化によりＮ− ベンジルオキシカルボニル−し−アラニル−し−フェニルアラニンベンジルエステル０．６６ｇ　（７２％）を得た。　ｍｐ　１１８．５−１１９°ＣＡＮとＲ ’ｋｃＬ）６７．６４（ｓ、　１）１）、　６．８２−７．３９（＋ａ、　６Ｈ）、　５．０４（ｓ。２Ｂ）、　　５．００（ｓ、　２Ｈ）、　４．５８−４．９２（ｍ、　２Ｂ）、　３．０７（ｄ、　Ｊ＝６Ｈｚ、　２Ｈ）、　１．２９（ｄ、　Ｊ　＝７Ｈｚ、　３Ｈ）。Ｂ、エチルアルコール（１５０＋ｎＬ）中のＮ−ベンジルオキシカルボニル−し −アラニル−し−フェニルアラニンベンジルエステル（０，５０ｇ　、　　１．１ミリモル）と炭素に担持させた１０％Ｐｂ　（パラジウム）（０，１ｇ）の混合物をＰａｒｒ水素化装置で２０゛ｃで６．５時間振盪した。反応混合物を濾過し、濾液を水（１００ｍ）ですすいだ。この溶液を濃縮しＬ−アラニル−し−フェニルアラニン０．２６ｇ（１００％）を得た。ＨＰＬＣ分析は純度〉９９％を示し、ラセミ化の形跡は示されなかった。災旅医ＩＬ工Ｌ−アーニルーし一フェニルアーニン　　ゝ　−′によ五ＬＡ、０．２０Ｍ炭酸カリウム（２０ｄ）とアセトニトリル（３０ｍ）とに溶解したし一フェニルアラニン（０，３３ｇ、　２．０ミリモル）の溶液に、アセトニトリル（５Ｉｉ）に溶解したＮ−ベンジルオキシカルボニル−し−アラニンＮ− カルボキシ無水物（０，４５ｇ　、　　１．８ミリモル）の溶液をＯ″Ｃで滴加した。この混合物を０°Ｃで４０分攪拌し、次いで酢酸エチル（５Ｍ）と１Ｍ塩酸（１０ｄ）で希釈した０分液し、水層を酢酸エチル（２Ｘ３５ｉ１）で抽出した。を機層を一緒にし、食塩水（３０ｍｌり　、　０．５　Ｍ塩酸（２Ｘ５０ｄ）及び水（２Ｘ５０ｍ）で洗滌し、乾燥（ＭｇＳＯ＜）　　シ、次いで濃縮した。得られた残留物をクロロホルム／ヘキサンから再結晶しＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−アラニル−し−フェニルアラニン０．２６ｇ　（３９％）を得た。　ｍｐ　１２１−１２２°Ｃ；　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）δ１２．７Ｈｓ、　ＩＨ）、　８．０６（ｎ＋、　ＩＨ）、　７．３０（ｍ、　５Ｈ）、　５．０１（ｓ、　２）１）、　４．４３（ｍ、　　ＩＨ）、　４．０６（＋Ｉｌ、　　ＩＨ）、　２．９９（ｍ、　２Ｈ）。１１．１９　　（ｄ、　　２）１．　　Ｊ　　＝７Ｈｚ）。Ｂ、９５％エチルアルコール（５０ｄ）中のＮ−ベンジルオキシカルボニル−し −アラニル−し−フェニルアラニン（０，２０８ｇ、　０．５６２　ミリモル）と炭素担持１０％Ｐｄ（０，１ｇ）との混合物をＰａｒｒ水素化装置で２０°Ｃで１６時間振盪した。反応混合物を濾過し、濾液を水（１００ｄ）ですすいだ、溶液を一緒にし、濃縮して白色固体としてＬ−アラニル−し−フェニルアラニン０．１２２ｇ　（９２％）ヲ得た。　ＨＰＬＣ分析は純度＞９９．５％を示し、ラセミ化の形跡は示されなかった。ＩＭＥＥＧＥＮＤ＠　＝　Ａ　　／　ＴＲＩＥＴＨＹＬＡＭＩＮＥ）ｏ　＝Ｂ　　（Ｎ−ＭＥＴＨＹＬｋｌＯＲＰＨＯＬＩＮＥ／国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．次の構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ及びＲ′は水素，アルキル，シクロアルキル，置換アルキル，置換シクロアルキル，アリール又は置換アリールであるが、Ｒ及びＲ′の少なくとも１つは水素ではなく；Ｒ′′はアルキル，アリール，置換アルキル又は置換アリールであり；Ｚは酸素又は硫黄であり；そしてｎは０，１又は２である）を有するウレタン保護されたアミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
２．Ｒ′′が１〜２０個の炭素原子を有するアルキルである請求の範囲第１項記載のウレタン保護されたアミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
３．Ｒ′′が低級アルキル、又は置換低級アルキルである請求の範囲第２項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
４．Ｒ′′がｔ−ブチルである請求の範囲第３項のウレタン保証アミノ酸−Ｎ− カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
５．Ｒ′′がアリール又は置換アリールである請求の範囲第１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
６．Ｒ′′がフェニル又は置換フェニルである請求の範囲第５項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
７．Ｒ′′がアラルキル又は置換アラルキルである請求の範囲第１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
８．Ｒ′′がベンジル又は置換ベンジルである請求の範囲第７項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
９．Ｒ′′がｐ−メトキシベンジルである請求の範囲第８項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
１０．Ｒ′′が９−フルオレニルメチル又は置換９−フルオレニルメチルである請求の範囲第７項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ− チオカルボキシ無水物。
１１．Ｒ又はＲ′の少なくとも１つが保護又は無保護アミノ酸の側鎖である請求の範囲第１項〜第１０項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
１２．Ｒ又はＲ′がアラニンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
１３．Ｒ又はＲ′がアルギニン又は適当な保護アルギニンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
１４．Ｒ又はＲ′が、アスパラギン酸又は適当な保護アルパラギン酸の側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
１５．Ｒ又はＲ′が、アスパラギン又は適当な保護アスパラギンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ− チオカルボキシ無水物。
１６．Ｒ又はＲ′が、シスチン又は適当な保護シスチンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
１７．Ｒ又はＲ′がシスチンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
１８．Ｒ又はＲ′が、グルタミン酸又は適当な保護グルタミン酸の側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ− チオカルボキシ無水物。
１９．Ｒ又はＲ′が、グルタミン又は適当な保護グルタミンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
２０．Ｒ又はＲ′がヒスチジン又は適当な保護ヒスチジンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
２１．Ｒ又はＲ′がイソロイシンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
２２．Ｒ又はＲ′が適当な保護リシンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
２３．Ｒ又はＲ′がロイシンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
２４．Ｒ又はＲ′がメチオニンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
２５．Ｒ又はＲ′がノルロイシンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
２６．Ｒ又はＲ′が適当な保護オルニチンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
２７．Ｒ又はＲ′がフェニルアラニンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
２８．Ｒ又はＲ′が、セリン又は適当な保護セリンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
２９．Ｒ又はＲ′が、スレオニン又は適当な保護スレオニンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
３０．Ｒ又はＲ′が、トリプトファン又は適当な保護トリプトファンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
３１．Ｒ又はＲ′がチロシン又は適当な保護チロシンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
３２．Ｒ又はＲ′がバリンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
３３．Ｒ又はＲ′がホモセリン又は適当な保護ホモセリンの側鎖である請求の範囲第１１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物。
３４．Ｎ−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシン−Ｎ−カルボキシ無水物。
３５．Ｎ−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｌ−アラニン−Ｎ−カルボキシ無水物。
３６．Ｎ−α−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−リシン−Ｎ−カルボキシ無水物。
３７．Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−アラニン−Ｎ−カルボキシ無水物。
３８．Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシン−Ｎ−カルボキシ無水物。
３９．Ｎ−フェニルオキシカルボニル−Ｌ−バリン−Ｎ−カルボキシ無水物。
４０．Ｎ−エチルオキシカルボニル−Ｌ−アラニン−Ｎ−カルボキシ無水物。
４１．Ｎ−ベソジルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニン−Ｎ−カルボキシ無水物。
４２．Ｎ−フェニルオキシカルボニル−Ｌ−アラニン−Ｎ−チオカルボキシ無水物。
４３．Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ −スレオニン−Ｎ−カルボキシ無水物。
４４．Ｎ−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−β−アラニン−Ｎ−カルボキシ無水物。
４５．Ｎ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−アラニン−カルボキシ無水物。
４６．Ｎ−（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−〇−ベンジル−Ｌ−セリン−Ｎ− カルボキシ無水物。
４７．Ｎ−フェニルオキシカルボニル−１−アミノ−１−カルボキシシクロヘキサン−Ｎ−カルボキシ無水物。
４８．Ｎ−エチルオキシカルボニル−α−アミノイソ酪酸−Ｎ−カルボキシ無水物。
４９．アミノ酸成分を第２の類似又は非類似のアミノ酸成分と反応させ且つ所望のポリペプチドが得られる迄前記反応を反復することから成るポリペプチド鎖の合成法において、前記の諸反応の少なくとも１つで、保護されたアミノ酸成分として次の構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ及びＲ′は水素，アルキル，アリール，置換アルキル又は置換アリールであり；Ｒ′′はアルキル，アリール，置換アルキル又は置換アリールであり；Ｚは酸素又は硫黄であり；そしてｎは０，１又は２である）を有する化合物を使用することを特徴とする前記ポリペプチド鎖の合成法。
５０．前記保護アミノ酸成分が、Ｒ′′が１〜２０個の炭素原子を有するアルキル又は置換アルキルである請求の範囲第１項記載のウレタン保護アミノ酸−Ｎ− カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物である請求の範囲第４９項記載の方法。
５１．Ｒ′′か低級アルキル又は置換低級アルキルである請求の範囲第５０項記載の方法。
５２．Ｒ′′がｔ−ブチルである請求の範囲第５０項記載の方法。
５３．Ｒ′′がアリール又は置換アリールである請求の範囲第４９項記載の方法。
５４．Ｒ′′がフェニル又は置換フェニルである請求の範囲第５３項記載の方法。
５５．Ｒ′′がアラルキル又は置換アラルキルである請求の範囲第４９項記載の方法。
５６．Ｒ′′がベンジル又は置換ベンジルである請求の範囲第５５項記載の方法。
５７．Ｒ′′がｐ−メトキシベンジルである請求の範囲第５５項記載の方法。
５８．Ｒ′′が９−フルオレニルメチル又は置換９−フルオレニルである請求の範囲第５５項記載の方法。
５９．Ｒ又はＲ′の少なくとも１つが保護又は無保護のアミノ酸の側鎖である請求の範囲第４９項〜第５７項記載の方法。
６０．１つの保護されたアミノ酸成分を、前記アミノ酸成分の末端カルボキシルと反応性である置換基を含有する支持体上に縮合反応により連結し、このように連結した保護アミノ酸成分を脱保護し、必要ならば中和し、次いでその脱保護されたアミノ酸成分に第２の類似又は非類似の保護アミノ酸成分を連結し、且つ所望のポリペプチドが得られる迄前記の工程を反復することから成る可溶性又は不溶性の支持体上でのポリペプチド鎖の固相合成法において、前記の諸反応の少なくとも１つにおいて前記保護されたアミノ酸成分として次の構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ及びＲ′は水素，アルキル，シクロアルキル，置換アルキル，置換シクロアルキル，アリール又は置換アリールであり；Ｒ′′はアルキル，アリール，置換アルキル又は置換アリールであり；Ｚは酸素又は硫黄であり；そしてｎは０，１又は２である）を有する化合物を使用することを特徴とする、前記の可溶性又は不溶性支持体上でのポリペプチド鎖の改良された固相合成法。
６１．Ｒ′′が１〜２０個の炭素原子を有するアルキル又は置換アルキルである請求の範囲第６０項記載の方法。
６２．Ｒ′′が低級アルキル又は置換低級アルキルである請求の範囲第６１項記載の方法。
６３．Ｒ′′がｔ−ブチルである請求の範囲第６２項記載の方法。
６４．Ｒ′′がアリール又は置換アリールである請求の範囲第６０項記載の方法。
６５．Ｒ′′がフェニル又は置換フェニルである請求の範囲第６４項記載の方法。
６６．Ｒ′′がアラルキル又は置換アラルキルである請求の範囲第６０項記載の方法。
６７．Ｒ′′がベンジル又は置換ベンジルである請求の範囲第６６項記載の方法。
６８．Ｒ′′がｐ−メトキシベンジルである請求の範囲第６６項記載の方法。
６９．Ｒ′′が９−フルオレニルメチル又は置換９−フルオレニルメチルである請求の範囲第６６項記載の方法。
７０．Ｒ又はＲ′の少なくとも１つが保護又は無保護アミノ酸の側鎖である請求の範囲第６０項〜第６９項記載の方法。
７１．次の構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中，Ｒ，Ｒ′，Ｚ及びｎは後記の意義を有する）を有するアミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物と、次の構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘはハロゲンであり、Ｒ′′は後記の意義を有する）を有するハロギ酸エステルとを不活性希釈剤中で、無水条件下で且つ第３級アミン塩基の存在下で反応させることを特徴とする、次の構造：▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ及びＲ′は水素，アルキル，シクロアルキル，置換アルキル，置換シクロアルキル，アリール又は置換アリールであり；Ｒ′′はアルキル，アリール，置換アルキル又は置換アリールであり；Ｚは酸素又は硫黄であり；そしてｎは０，１又は２である）を有するウレタン保護アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物又はＮ−チオカルボキシ無水物の製造法。
７２．前記の第３級アミン塩基がＮ−メチルモルホリンである請求の範囲第７１頃記載の方法。
７３．前記のウレタン保護アミノ酸Ｎ−カルボキシ無水物反応生成物が結晶化により回収される請求の範囲第７１項記載の方法。