JP2011513456A - N−カルボン酸無水物(unca)を使用するペプチド合成方法 - Google Patents
N−カルボン酸無水物(unca)を使用するペプチド合成方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011513456A JP2011513456A JP2010550148A JP2010550148A JP2011513456A JP 2011513456 A JP2011513456 A JP 2011513456A JP 2010550148 A JP2010550148 A JP 2010550148A JP 2010550148 A JP2010550148 A JP 2010550148A JP 2011513456 A JP2011513456 A JP 2011513456A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- free
- peptide
- solvent
- unca
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/02—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length in solution
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Description
ペプチド合成は、一般に、使用前に保護されしかも活性化されているアミノ酸の使用を必要とする。このストラテジーは、最も簡単なものでもなく最も経済的なものでもない。
任意選択で保護されるアミノ酸N−カルボン酸無水物(以下ではNCAまたはロイヒ(Leuch)無水物と称する)は、従来のペプチドカップリングの有利な代替手段である。一般にアミノ酸のホスゲン化により得られるNCAは、非常に反応性のある化合物であって、二次生成物を特に再配列によって形成しない化合物であり、その唯一の反応副生成物は二酸化炭素である。ウレタン基で置換されているアミノ酸N−カルボン酸無水物(UNCA)は、文献に、特にペプチド合成の分野において記載されている。
ウィリアムD.フラーらは、(Urethane−protected alpha−amino acid N−carboxyanhydrides and peptide synthesis、バイオポリマーズ、1996、40、183〜205において)固相と液相の双方でのペプチド合成におけるUNCAの種々の適用を概説し、UNCAの使用に関連する利点および欠点について解説した。
著者のジュ(Zhu)およびフラーは、エステル保護またはアミド保護されたカルボキシル官能基を有するジペプチド断片からのトリペプチドの迅速合成について記載している(テトラへドロンレターズ(Tetrahedron Letters)、Vol.36、No.6、807〜810、1995)。
したがって、本発明は、遊離アミノ酸または遊離ペプチドとウレタン保護アミノ酸N−カルボン酸無水物(UNCA)溶液とを反応させる少なくとも1つの工程を含む、ペプチドまたはペプチド誘導体の調製方法に関する。
加えて、すべてのペプチド配列は、配向が通常の方向にある、左から右までに及ぶ、すなわちアミン末端からカルボキシル末端までに及ぶ式によって表される。
本発明による方法において得られるペプチドおよびペプチド誘導体が一般に示す、所望のジアステレオマー重量含有率として定義されるジアステレオマー純度は、98%以上である。しばしば、ジアステレオマー純度は99%以上である。ジアステレオマー純度は、99.5%以上であることが好ましい。ジアステレオマー純度は、99.9%以上であることが特に好ましい。
したがって、本発明による方法は、UNCA形態の1つのアミノ酸と、もう一つの遊離アミノ酸または遊離ペプチドとのカップリングを可能にする。
本発明の場合、用語「C末端」は、カルボキシル(−COOH)基により終端されているペプチドのアミノ酸鎖の末端または末端を示す。加えて、用語「N末端」は、アミノ(−NH2)基により終端されているペプチドのアミノ酸鎖の終端部または末端を指す。本発明の場合、遊離アミノ酸または遊離ペプチドは、−COOHの形態である少なくとも1つのカルボキシル基、適当な場合C末端基、を有するアミノ酸またはペプチドを示す。より特には、遊離アミノ酸または遊離ペプチドでは、アミノ基、適当な場合N末端基は、−NH2の形態である。さらにより特には、「遊離アミノ酸」または「遊離ペプチド」は、非保護アミノ酸または非保護ペプチドを示す。遊離のアミノ酸またはペプチドの内部塩も、適当な場合、この定義に含まれることが理解される。
本発明の文脈では、略語「NCA」はアミノ酸N−カルボン酸無水物を示し、「UNCA」はウレタン保護アミノ酸N−カルボン酸無水物を示す。
本発明による方法に使用されるUNCAは、Boc、FmocまたはZの基を含むUNCAであることが好ましい。UNCAは、Boc基を含むことがより特に好ましい。
保護UNCAが使用される際に得られる保護ペプチドは、脱保護されていてもよく、所望によっては、本発明による方法に従って特に行われる後続のペプチド合成工程用の出発生成物として使用されてもよい。
本発明による方法では、溶媒は、遊離アミノ酸または遊離ペプチドが、反応を開始するために溶媒中で十分な溶解性を有するように選択されることが好ましい。溶液中に存在するUNCAの、カップリング生成物への転化が、24時間以下の反応時間内で少なくとも50%達成されるのを可能にする溶媒が好ましい。より特には、溶媒は、12時間以下または6時間以下でさえもの反応時間内でこの転化が達成されるのを可能にする。
溶媒として、イオン液体、例えばアルキル化イミダゾールの液体塩を使用することも可能である。
液体媒体は、実質的に無水であることが好ましい。一般に、液体媒体中の水分含量は液体媒体1kg当たり最大で水1000mgに維持される。しばしば、この含量は液体媒体1kg当たり最大で水500mgである。この含量は液体媒体1kg当たり最大で水250mgであることが好ましい。しばしば、液体媒体中の水分含量は、液体媒体1kg当たり水10mg以上または液体媒体1kg当たり水50mg以上さえもある。
本方法によって遊離ペプチドとUNCA溶液とを反応させる場合、98%以上のジアステレオ純度を特徴とするジアステレオ純粋な(diastereomerically pure)遊離ペプチドが一般に使用される。しばしば、ジアステレオ純度は99%以上である。ジアステレオ純度は、99.5%以上であることが好ましい。ジアステレオ純度は、99.9%以上であることが特に好ましい。
本発明による方法により得られるペプチドおよびペプチド誘導体が一般に示す、所望のジアステレオマー重量含有率として定義されるジアステレオマー純度は、98%以上である。しばしば、ジアステレオマー純度は99%以上である。ジアステレオマー純度は、99.5%以上であることが好ましい。ジアステレオマー純度は、99.9%以上であることが特に好ましい。
一実施形態によれば、大気圧(約101.3kPa)および大気圧より高い圧力は、特に適切である。
別の実施形態によれば、大気圧未満の圧力が使用される。しばしば、この実施形態では、圧力は400mbar(40kPa)以上である。しばしば、圧力は500mbar(50kPa)以下である。
大気圧(約101.3kPa)およびとりわけ大気圧未満の圧力は、反応により形成される二酸化炭素を排除するのに特に適する。
反応の終了時に、未反応の遊離アミノ酸または未反応の遊離ペプチドは、一般に、固液分離操作、例えば遠心分離によって、または好ましくはろ過によって回収することができる。必要ならば、この実施形態では、反応媒体中に存在する溶媒または溶媒の混合物より極性の低い第二の有機溶媒で反応媒体を希釈することが有利となり得る。適切な第二の溶媒の例として、アルキルエステル、例えば酢酸エチル、または好ましくは酢酸イソプロピルを挙げることができる。
必要ならば、遊離アミノ酸または遊離ペプチドの回収後、反応媒体は一般に水で処理され、得られるペプチドまたはペプチド誘導体は抽出により回収することができる。
本発明による方法は、典型的に80%超である収率でペプチドおよびペプチド誘導体を得ることを可能にする。
実施例1:Boc−Ile−Leu−OHの合成
45mlのDMSO、さらには6.30g(1.2当量)のH−Leu−OHを、懸濁物を得るために250mlの丸底フラスコ中に導入した。反応媒体を60℃にしてから10.29g(1.0当量)のBoc−Ile UNCAをそれに添加した。2時間反応させた後、反応媒体からの試料をHPLCで分析した。反応媒体を、周囲温度に冷却してから360mlの酢酸イソプロピルで希釈した。
0.1当量のジメチルアミノプロピルアミン(DMAPA)を添加し、約10分間反応媒体を周囲温度で撹拌した。
1.0当量のKHSO4(5.45g)を含有する300mlの5%NaCl水溶液、
300mlの5%NaCl水溶液、および
300mlの脱塩水
で洗浄した。
有機相を蒸発により濃縮し、酢酸イソプロピルで共沸乾燥操作を行った(全部で300ml)。冷却の過程で、ジペプチドは結晶化し始めた。これを150mlのシクロヘキサンで希釈し、蒸発を続けた。懸濁物を、0±5℃に冷却した。ろ過し、得られた固体を70mlのシクロヘキサンで洗浄し、乾燥した後、12.8gの所望のペプチドを得た。
(NMRに基づく)収率=93%。
一連の化合物を、実施例1に類似する方法に従って合成した。以下の表は、Boc−Ile UNCAに関して行われる一連の試験について得られた結果を概略する。
Claims (13)
- 遊離アミノ酸または遊離ペプチドとウレタン保護アミノ酸N−カルボン酸無水物(UNCA)溶液とを反応させる少なくとも1つの工程を含む、ペプチドまたはペプチド誘導体の調製方法。
- 前記遊離アミノ酸または前記遊離ペプチドが少なくとも部分的に可溶性である溶媒中で、前記遊離アミノ酸または前記遊離ペプチドと前記UNCA溶液とを反応させる、請求項1に記載の方法。
- 前記溶媒が、前記遊離アミノ酸または前記遊離ペプチドがその溶媒において溶解性を有する溶媒であって、それによって、前記溶液中に存在するUNCAの、カップリング生成物への転化が24時間以下の反応時間内で少なくとも50%達成され得る溶媒である、請求項2に記載の方法。
- 前記溶媒が非プロトン性極性溶媒である、請求項3に記載の方法。
- 前記非プロトン性極性溶媒が、ジメチルスルホキシド(DMSO)、N,N−ジメチルホルムアミド(DMF)、N,N−ジメチルアセトアミド(DMA)、N−メチル−2−ピロリドン(NMP)、ホルムアミドおよびスルホラン、テトラヒドロフラン(THF)、ならびにアセトニトリルから選択される、請求項4に記載の方法。
- 前記溶媒がDMSOである、請求項5に記載の方法。
- 15〜90℃の温度で前記遊離アミノ酸または前記遊離ペプチドと前記UNCA溶液とを反応させる、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記UNCAがBoc、FmocまたはZの基を含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 形成された二酸化炭素が取り除かれる、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記遊離アミノ酸または前記遊離ペプチドが固体形態で使用される、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記反応媒体が前記UNCA溶液中の遊離アミノ酸または遊離ペプチドの懸濁物である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 未反応の遊離アミノ酸または遊離ペプチドが前記反応の終了時に固液分離操作によって回収される、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記固液分離の前に、前記反応媒体が、前記反応媒体中に存在する溶媒または溶媒の混合物より極性の低い第二の有機溶媒で希釈される、請求項12に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR0851513A FR2928372B1 (fr) | 2008-03-10 | 2008-03-10 | Procede de synthese peptidique |
PCT/EP2009/052677 WO2009112437A1 (en) | 2008-03-10 | 2009-03-06 | Peptide synthesis method using n-carboxyanhydride (unca) |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011513456A true JP2011513456A (ja) | 2011-04-28 |
Family
ID=39970965
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010550148A Pending JP2011513456A (ja) | 2008-03-10 | 2009-03-06 | N−カルボン酸無水物(unca)を使用するペプチド合成方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20110105722A1 (ja) |
EP (1) | EP2262824A1 (ja) |
JP (1) | JP2011513456A (ja) |
CN (1) | CN101970453A (ja) |
AU (1) | AU2009224802C1 (ja) |
CA (1) | CA2717186A1 (ja) |
FR (1) | FR2928372B1 (ja) |
WO (1) | WO2009112437A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10961273B2 (en) | 2016-08-16 | 2021-03-30 | Stealth Biotherapeutics Corp. | N-carboxyanhydride-based-scale synthesis of elamipretide |
CN109422797B (zh) * | 2017-08-30 | 2023-12-19 | 上海科胜药物研发有限公司 | 一种赖诺普利中间体的制备方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02503923A (ja) * | 1988-03-11 | 1990-11-15 | バイオリサーチ・インコーポレイテツド | ウレタン保護アミノ酸‐n‐カルボキシ無水物 |
JP2003509437A (ja) * | 1999-09-15 | 2003-03-11 | アストラゼネカ・アクチエボラーグ | H−tyr−d−ala−phe(f)−phe−nh2の製造方法 |
JP2007503419A (ja) * | 2003-08-22 | 2007-02-22 | イソケム | α−アミノ酸のウレタン保護N−無水カルボン酸の製造法 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2815962B1 (fr) * | 2000-10-30 | 2003-03-07 | Isochem Sa | Procede de preparation des n-carboxyanhydrides |
FR2828195B1 (fr) * | 2001-05-31 | 2003-12-26 | Isochem Sa | Procede de preparation des n-carboxyanhydrides |
FR2846326A1 (fr) * | 2002-10-29 | 2004-04-30 | Isochem Sa | Procede de purification des n-carboxyanhydrides |
-
2008
- 2008-03-10 FR FR0851513A patent/FR2928372B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-03-06 EP EP09720836A patent/EP2262824A1/en not_active Withdrawn
- 2009-03-06 AU AU2009224802A patent/AU2009224802C1/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-03-06 JP JP2010550148A patent/JP2011513456A/ja active Pending
- 2009-03-06 WO PCT/EP2009/052677 patent/WO2009112437A1/en active Application Filing
- 2009-03-06 US US12/921,413 patent/US20110105722A1/en not_active Abandoned
- 2009-03-06 CN CN2009801083992A patent/CN101970453A/zh active Pending
- 2009-03-06 CA CA2717186A patent/CA2717186A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02503923A (ja) * | 1988-03-11 | 1990-11-15 | バイオリサーチ・インコーポレイテツド | ウレタン保護アミノ酸‐n‐カルボキシ無水物 |
JP2003509437A (ja) * | 1999-09-15 | 2003-03-11 | アストラゼネカ・アクチエボラーグ | H−tyr−d−ala−phe(f)−phe−nh2の製造方法 |
JP2007503419A (ja) * | 2003-08-22 | 2007-02-22 | イソケム | α−アミノ酸のウレタン保護N−無水カルボン酸の製造法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6013054336; Romoff and Goodman: Journal of Peptide Research Vol.49, p.281-292,1997 * |
JPN6013054338; Fuller et al: Biopolymers Vol.40, p.183-205,1996 * |
JPN6013054341; Loffet: Reactive Polymers Vol.22, p.165-170,1994 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2009224802A1 (en) | 2009-09-17 |
WO2009112437A1 (en) | 2009-09-17 |
FR2928372A1 (fr) | 2009-09-11 |
AU2009224802B2 (en) | 2014-07-31 |
FR2928372B1 (fr) | 2010-12-31 |
CA2717186A1 (en) | 2009-09-17 |
EP2262824A1 (en) | 2010-12-22 |
US20110105722A1 (en) | 2011-05-05 |
CN101970453A (zh) | 2011-02-09 |
AU2009224802C1 (en) | 2014-11-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9963483B2 (en) | Process for producing self-assembling peptide derivatives | |
CN111971293A (zh) | 肽合成方法 | |
HU205091B (en) | Process for producing amino acid-n-carboxyanhydrides protected with urethane group | |
JP6703669B2 (ja) | リュープロレリンの製造方法 | |
WO2016047794A1 (ja) | 疎水性ペプチドの製造法 | |
NO164245B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av peptidet h-arg-x-z-y-tyr-r. | |
CN111770930A (zh) | 制备肽的方法 | |
JP2011513456A (ja) | N−カルボン酸無水物(unca)を使用するペプチド合成方法 | |
JP2003073396A (ja) | ペプチドの製造方法 | |
CA2721644C (en) | Indolesulfonyl protecting groups for protection of guanidino and amino groups | |
WO2010016551A1 (ja) | ジベンゾフルベンの除去方法 | |
US9409946B2 (en) | Peptide manufacturing process | |
WO2017092689A1 (en) | Method for preparation of rada-16 | |
EP0540626A1 (en) | Process for synthesizing peptides | |
WO2021026800A1 (zh) | 醋酸地加瑞克的合成方法 | |
US8404804B2 (en) | Methods and intermediates for chemical synthesis of polypeptides and proteins | |
JPH0717941A (ja) | N−アルコキシカルボニルアミノ酸の製造方法 | |
US5942601A (en) | Peptide synthesis with sulfonyl protecting groups | |
WO2013057736A2 (en) | Preparation of eptifibatide peptide | |
WO2021132336A1 (ja) | ペプチドの製造方法 | |
US7371867B2 (en) | Non-racemic trifluoroleucine, and methods of making and using | |
KR20160147235A (ko) | 선별적 용해도를 갖는 트리페닐메탄 유도체 및 그의 용도 | |
WO2022149612A1 (ja) | ペプチドの製造方法 | |
WO2015033781A1 (ja) | 二置換アミノ酸残基を含むジペプチド誘導体の製造方法 | |
WO2021192488A1 (ja) | アミド結合含有化合物の製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120306 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20131009 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20131107 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140206 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140214 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140502 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140602 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20141027 |