CZ247797A3 - N alfa -2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyseliny, způsob jejich přípravy, jakož i způsob syntézy peptidů - Google Patents
N alfa -2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyseliny, způsob jejich přípravy, jakož i způsob syntézy peptidů Download PDFInfo
- Publication number
- CZ247797A3 CZ247797A3 CZ972477A CZ247797A CZ247797A3 CZ 247797 A3 CZ247797 A3 CZ 247797A3 CZ 972477 A CZ972477 A CZ 972477A CZ 247797 A CZ247797 A CZ 247797A CZ 247797 A3 CZ247797 A3 CZ 247797A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- nsc
- amino acid
- amino acids
- tert
- protected
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title description 8
- 125000006627 ethoxycarbonylamino group Chemical group 0.000 title 1
- -1 tert-butoxymethyl Chemical group 0.000 claims abstract description 42
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 9
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 7
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims abstract description 7
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 5
- 125000000066 S-methyl group Chemical group [H]C([H])([H])S* 0.000 claims abstract description 4
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 4
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims abstract description 4
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 35
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 30
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 18
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 13
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 10
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000000266 alpha-aminoacyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 2
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- JFRMYMMIJXLMBB-UHFFFAOYSA-N xanthydrol Chemical compound C1=CC=C2C(O)C3=CC=CC=C3OC2=C1 JFRMYMMIJXLMBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- YZCKVEUIGOORGS-IGMARMGPSA-N Protium Chemical compound [1H] YZCKVEUIGOORGS-IGMARMGPSA-N 0.000 claims 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims 1
- ZSOGBNYKSJURBJ-UHFFFAOYSA-N carbonochloridoyl ethyl carbonate Chemical compound CCOC(=O)OC(Cl)=O ZSOGBNYKSJURBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000005518 carboxamido group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims 1
- JABYJIQOLGWMQW-UHFFFAOYSA-N undec-4-ene Chemical compound CCCCCCC=CCCC JABYJIQOLGWMQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 16
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 abstract description 16
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 abstract description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 abstract description 4
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 abstract description 3
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 abstract description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 40
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 19
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 19
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 13
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N hexane Substances CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 6
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 6
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N chlorotrimethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)Cl IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 3
- FZFAMSAMCHXGEF-UHFFFAOYSA-N chloro formate Chemical compound ClOC=O FZFAMSAMCHXGEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- JDTOWOURWBDELG-QHCPKHFHSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-tritylsulfanylpropanoic acid Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(SC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 JDTOWOURWBDELG-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- SJOMENJFVROUPW-ZETCQYMHSA-N (2s)-4-methylsulfanyl-2-(2-methylsulfanylethylamino)butanoic acid Chemical compound CSCCN[C@H](C(O)=O)CCSC SJOMENJFVROUPW-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RNHDAKUGFHSZEV-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane;hydrate Chemical compound O.C1COCCO1 RNHDAKUGFHSZEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQXCQTAELHSNAT-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-3-nitro-5-(trifluoromethyl)benzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC(Cl)=CC(C(F)(F)F)=C1 ZQXCQTAELHSNAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVFZOVWCLRSYKC-UHFFFAOYSA-N 1-methylpyrrolidine Chemical compound CN1CCCC1 AVFZOVWCLRSYKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZENKESXKWBIZCV-UHFFFAOYSA-N 2,2,4,4-tetrafluoro-1,3-benzodioxin-6-amine Chemical group O1C(F)(F)OC(F)(F)C2=CC(N)=CC=C21 ZENKESXKWBIZCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISAQBYHVYXCWAV-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-2-(propan-2-ylazaniumyl)butanoate Chemical compound CC(C)NC(C(C)C)C(O)=O ISAQBYHVYXCWAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPOFVIQSTJBICA-UHFFFAOYSA-N CC(C1=CC(=C(C=C1Cl)Cl)Cl)(C(=O)O)OC2=CC=C(C=C2)CO Chemical compound CC(C1=CC(=C(C=C1Cl)Cl)Cl)(C(=O)O)OC2=CC=C(C=C2)CO VPOFVIQSTJBICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRSHXJFUUPIBHX-UHFFFAOYSA-N COc1ccc(cc1)N1N=CC2C=NC(Nc3cc(OC)c(OC)c(OCCCN4CCN(C)CC4)c3)=NC12 Chemical compound COc1ccc(cc1)N1N=CC2C=NC(Nc3cc(OC)c(OC)c(OCCCN4CCN(C)CC4)c3)=NC12 DRSHXJFUUPIBHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTLZVHNRZJPSMI-UHFFFAOYSA-N N-ethylpiperidine Chemical compound CCN1CCCCC1 HTLZVHNRZJPSMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-pyrrolidine Natural products CN1CC=CC1 AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVEVCDRYQJLSRX-UHFFFAOYSA-N NCCC1COCCN1CCN Chemical compound NCCC1COCCN1CCN PVEVCDRYQJLSRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Chemical compound [O-2].[Ca+2] BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000292 calcium oxide Substances 0.000 description 1
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Inorganic materials [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003857 carboxamides Chemical group 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000008280 chlorinated hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- RMXVHZFHSKRNJN-UHFFFAOYSA-N chlorourea Chemical compound NC(=O)NCl RMXVHZFHSKRNJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N diphosphonate Chemical compound O=P(=O)OP(=O)=O YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100001261 hazardous Toxicity 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229960004717 insulin aspart Drugs 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004460 liquid liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 1
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- PBMIETCUUSQZCG-UHFFFAOYSA-N n'-cyclohexylmethanediimine Chemical compound N=C=NC1CCCCC1 PBMIETCUUSQZCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088644 n,n-dimethylacrylamide Drugs 0.000 description 1
- YLGYACDQVQQZSW-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylprop-2-enamide Chemical compound CN(C)C(=O)C=C YLGYACDQVQQZSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 125000000538 pentafluorophenyl group Chemical group FC1=C(F)C(F)=C(*)C(F)=C1F 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentoxide Inorganic materials O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010094 polymer processing Methods 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 238000005245 sintering Methods 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003774 sulfhydryl reagent Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
- C07C317/16—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
- C07C317/18—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with sulfone or sulfoxide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
- C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
- C07C323/57—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
- C07C323/58—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton
- C07C323/59—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton with acylated amino groups bound to the carbon skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
- C07C317/44—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C317/48—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by singly-bound nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
- C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
- C07D473/04—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two oxygen atoms
- C07D473/06—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two oxygen atoms with radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached in position 1 or 3
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
- C07K1/063—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups for alpha-amino functions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
> ca 01 2 C ro' 1 05 —1 ; o r~ ** c o — tne r“ ' oc < m to. o = .j si 05 Γ)< způ sob jejich přípravy, jakož i způsob syntézy peptidů
Ob1asi. techniky
Vynález se týká chráněných derivátů aminokyselin pro syntézu peptidů v tuhé fázi, t j . Ha-2-(4-nitrofenylsulfonyl)-ethoxykarbonyl-amínokyselin obecného vzorce I
O O
02N‘-^^-|^HíCHfO^-NŘ-ČHRiC00H
O v němž
Ri značí atom vodíku a
Rz značí vodík, methyl, isopropyl, 1-methylpropyl, 2-methyl-propyl, teřc-butóxymethyl, 1-terč-butoxyéthýl, 2-methylthioet-hyl, benzyl, karboxýmidomethyl, 2-karboxyamidoethyl, terc-but-oxykarbonylmethyl, 2- ( tererbutóxykarbotíýl) ethyl, 4- (terč-btifoxy-kárbam i dolbutyl, 4-terc-butoxýbenzýl, indblyl-3-methyl, S-(tri fenýlmethyl)thiomethyl, 1-< trifénylmethylXimidažolyl-4-methyl, 3-(N®-mesi tylensulfonyl)guanidinopropyl, N-xanthy1-kařboxamidomethyl, 2-(N-xanthylkarboxamido)ethyl nebo S-(acet-am i domethýl)thi omethy1, nebo
Ri a ftá tvoří společně propylenový radikál, používané jako Not-chráněné deriváty aminokyselin pro syntézu pept i dŮ v tuhé fázi.
Dosavadní stav techniky
Syntéza peptidů v tuhé fázi.se často používá pro přípravu .biologicky aktivních peptidů, jež se používají v lékařském a biologickém výzkumu a rovněž jako aktivní látky ve farmacii, veterinářství a diagnostice.
Rodstatu syntézy peptidů v tuhé fázi lze vyjádřit jako postupné prodlužováni peptidového řetězce pomocí opakovaných cyklů chemických reakcí., vyjitím .z první C-terminální 2 aminokyseliny napojené na nerozpustný nosič. V průběhu syntézy zůstávají cílové produkty Ze všech reakci vázány na nosič, zatímco přebytečné réaktanty a vedlejší produkty se odstraňují filtrací a přomýtfm nosiče.
Aby se provedla syntéza peptidů v tuhé fázi, spojí se první aminokyselina (C-terminál cílové sekvence aminokyseliny) s chráněnou aminoskupinou kovalentně s nerozpustným polymerním nosičem pomocí volné d-karboxylpvé skupiny vytvořením.esterové nebo amidová vazby. Potom se Ha-chránicl Skupina selektivně Odštěpí z takto získaného N-ct-chráněného aminoacylového polymeru a vytvoří se aminoacylový polymer s volnou oí-amínoáCylovou skupinou. Tento polymer sé dále acyluje při št í Not-chráněnou aminokyselinou, takže se získá Ncf-chráněný dipeptidyl-polymer. Takové syntetické cykly, které spočívají ve štěpení N«-očhřany a v následné acyláci volné aminoskupiny s další Na-chráněnou aminokyselinou, se opakují., až je celek cílové sekvence aminokyseliny dokončen. Při syntéze v tuhé fázi se v praxi obvykle používá velkého molárního nadbytku (2 až lOnásobného) acylačnich činidel, aby se zajistila kompletní konverze. Proto se všechny'reaktivní skupiny v postranních řetězcích aminokyselin, jako jsou amino vé, karboxylové, hydroxylové, thiolóvé a guanidinové skupiny, musí blokovat vhodnými chránícími skupinami. Chránící skupiny pro tento účel še musí vybírat pečlivě, aby se dosáhlo spolehlivé a trvalé, ochrany postranních řetězců za podmínek existujících při adylacích peptídyl-polymerů a během štěpení dočasné Ne-ochrany. Na druhé straně musí tyto chránící skupiny v postranních řetězcích umožňovat odstranit kvantitativně ochranu Ze syntetizovaného peptidů v jednom nebo dvou Stupních bež poškození jeho struktury. Ve většině případů se má současně rozštěpit také spojení peptidyl-polymer. Je zřejmé, že struktura a chemické vlastnosti trvale chránících skupin pro postranní řetězce aminokyselin jsou dány netoliko povahou reaktivní funkce, jež se má chránit, ale ve velkém rozsahu i strukturou a chemickými vlastnostmi -použité trvale Nef-chránicí skupiny. Trvalá Not-ochrana je proto klíčovým prvkem celé strategie syntézy peptidů v tuhé 3 fázi.
Dobře známy a široce používané při .syntéze peptidů v tuhé fázi jsou Ne- terc-butoxykarbonylamirtokysel iny ( Boc-aminokyseliny), jež popsal k tomuto účelu R.B.Merrifield v Bioche-mistry, sv. 3, stř. 1385. terc-ButoxycarbónyloV.oU (Boc) skupinu lze odštěpit působením kyselinových reagentů O Střední šíle, jako je například triflúoroctová kysellna a její roztoky v chlorovaných uhlovodících, roztoky chlorovodíku v organických rozpouštědlech, tr i f1uor i d/d i ethyletherový komplex boru a některé jiné kyseliny, za tvorby išobutyíenu a oxidu uhličitého.
Společně s dočasnou Ncí-Boc-ochranou se pro trvalé blokování postranních řetězců používají chránící Skupiny, které jsou stálé během Na-Boc štěpení, mohou se však odštěpit Silnějšími kyselinovými reagenty za současného Štěpení vázby peptidyl-polymer. Mezi známé reagénty používané k tomuto účelu patří kapalhý fluorovodík. trifluormethansulfonová kyselina a jejich Směsi s anisolem, thioanišolem a dimethyl-sulfidem. Hlavním nedostatkem syntézy Za použití přechodné Nct-Boc ochrany je aplikace acidolýzy pro Štěpeni jak dočasných, tak i trvalých chráničích skupin, čímž se nedosáhne úplné stálosti trvalé ochrany. Jelikož délka syntetizovaného peptidu roste, podléhají permanentní chránící skupiny hromadnému působeni kyselinových reagentů během Boc štěpných stupňů, což může mít za následek částečnou ztrátu těchto skupin a hromadění vedléjších produktů. Nehledě k tomu může konečné zkracování sestavovaného peptidyl-polymeru velmi silnými kyselinovými reagénty způsobovat částečnou destrukci cílového péptidu. Je třeba také uvést, že extremně hazardní vlastnosti silných kyselin vyžadují spéci lni zařízení a příslušná bezpečnostní opatření během postupu.
Aby bylo možné vyhnout se použití velmi silných kyselinových reagentů pro konečné odstranění ochrany, bylo nedávno navrženo několik skupin vysoce citlivých na kyselinu jako trvalá Ne-ochrana, o nichž se předpokládá, že jsou kompatibilní s trvalou ochrannou bočních řetězců tak zvaných terc-butylového typu, štěpitelných kyselinovými reagenty .o 4 střední síle.. Přikladen takové Na-chránicí skupiny je 1-í 3,5-di-terc-butyí fenyl )-1-methyl-ethoxykarbonylí t-Bumeoc) skupina, které je popsána v Collect. Czéch. Chem. Commun., 1992, sv. 57, str. 1707. Na-t-BUmeoc-skuplna se štěpí 1¾ kyselinou tr i f 1 uoroctovou v dichl omet hanu a lze li používat s trvale ohřáničími skupinami t-butylOvého typu štěpí te lnými nezředěnou kyselinou trifluoroctovóu nebo její koncentrovanými roztoky. V tomto případě je vyloučeno použití silných kyselin, ale obecný princip diferenciální acidolýzy ještě zůstává nezměněn.
Od1 išný přístup ke strategii syntézy peptídů v tuhé fázi je uveden autorem R.B. Merrifield v Science, 1986, sy. 232, str. 341. Tento přistup, zvaný "princip ořthogonality", se zakládá na předpokladu, žě přechodné a trvalé chránící skupiny mají být odstranitelné zcela odlišnými reagenty podle zcela Odlišného chemického mechanismu, takže dočasnou Not-ochranu lze odštěpit s naprostou selektivitou za předpokladu plného Uchováni trvalé ochrany á vice versa. Tohoto času je "princip Ořthogonality“ obecně akceptován jako vůdčí postup pro rozvíjení účinných syntéz peptídů v tuhé fázi. ' Příkladem postupu podle ~principu ořthogonalíty" je použiti N«-dithiasukcinylaminokyselin (Dts-aminókyselin) při syntéze v tuhé ifázi, jak je popsáno v Int. J. Peptide and Protein Res., 1987, sv. 30, str. 740. Nd-Dithiasúkcinyl (Dts) chránící skupina je zcela odolná proti středně silným kyselinovým reagentům a snadno se štěpí thiolovými reagenty v neutrálním prostředí za uvolňování aminoskupiny a tvorby oxidu uhličitého. Aplikace Dts-aminokyselin je v praktické syntéze ještě omezeno vzhledem k nedostatku účinných metod pro jejich přípravu.
Nejznámější a široce používaná Strategie při syntéze v tuhé fázi, která odpovídá "principu Ořthogonalitý", se zakládá na použiti Nct-9-fluorenylmethoxykarbonylaminokyselin (Fmoc-aminokyselin), jak popisuji C.D.Chang a J. Neíenhofer v Int. J. Peptide and Protein Res., 1975, sv. 11, str. 246. N«-9-F1uorenylmethoxykarbonylo vá (Fmoc) skupina je odolná proti kyselinovým reagentům a štěpí se podle /3 - e li * i načni ho 5 mechanismu organickými bázemi v aprotických rozpouštědlech, například morfolIndiethylaminem, piperazinem nebo piperidinem v dímethylformamidú (DříF) nebo dichlormethanu, př i čemž se uvolňuje am tnoskup i na a tvoři se dibenzofulven společně s COz- Při syntéze v tuhé fázi se štěpení Fmoc Skupiny provádí s. výhodou působením Noc-chráněného peptidyl-polymeru s 20 až 50% piperidinem v DMF v průběhu 10 až 30 minut. Uvedené podmínky umožňují používat trvalé ochrany citlivé ha kyselinu t-butylového typu spolu s dočasnou Ne-Fmoc-ochranou za dodrženi takto "orthogonali ty" strategie syntézy.
Not - Fmoc - am i nokysé líny se často používají při manuální syntéze peptidů v tuhé fázi, jakož i v automatických a poloautomatických syntetizátorech všech typů. Je však třeba poznamenat, že extremní citlivost Noc-Fmoc-ochrany proti zásadám a jistá její nestálost v neutrálních aprotičkých rozpouštědlech vyžadují pečlivou kontrolu acylač^ních podmínek a také čistotu použitých rozpouštědel. Je třeba dbát na toto zejména tehdy, používajl-li se Noc - Fmoc - am i nokyse-liny pro syntézu peptidů přesahujících 30 zbytků v .délce. Kromě toho bráni vysoká cena produkce použití F-moc-derivátů v široké Škále příprav peptidů.
Je proto žádouc í vyvinout nové deriváty Noc-chráněných aminokyselin, které by bylý vhodné pro vyvinuti účinných strategií syntézy peptidů v tuhé fázi.
Uvedené nedostatky jsou z převážné části odstraněny u Způsobu podle tohoto vynálezu.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou nové deriváty aminokyselin, zejména Ne-2-(4-nitrofehylsulfony1)ethoxykarbonyl-aminokyselin (Ne-NSc-aminokýselin) obecného vzorce I
O O
O (I) 6 v němž
Ri značí atom vodíku a
Sz značí vodík, methyl, isopropyl, 1 -methylpropyl., 2-methyl-přopyl, terc-b.Utoxyměthyl, 1 -terc-butoxyethyl, 2-methylthioet-hyl , benzyl, karboxymidomethyl, 2-karboxyamídoethyl, térc-but~ oxykarbónylmethyl, 2- (terc-butoxykarbonyl Xethy1, 4- ( terč - bufcxy"-kárbamidoíbutyl. 4-terc-butbxybehzyl, indoly!-3-methyl, S-(třifehylmethyl)thiomethyl, 1 -(tri£enylmethyl) imídasolyl -4-methy.l, 3 -( N?-mesi tylensulfonyl )guanídinopropyl, N-xanthyl -karboxamidomethyl, 2-(N-xanthyikarboxamido)ěthyl nebo S-(acet-am idomethyl)thiomethyl, nebo
Ri a R2 tvoří společně propy1eno vý radikál, používané jako Not-chráněné deriváty aminokyselin pro syntézu peptidů v tuhé fázi.
Jiným předmětem tohoto vynálezu jsou způsoby přípravy uvedených Not-Hsc-aminokyselin.
Ještě jiným předmětem vynálezu je způsob syntézy peptidů za použití Not - Nsc - am i nokyse 1 i n. Tyto předměty vynálezu vyplynou z následujícího popisu.
Not - Nsc-am i nokyse 1 iny podlé tohoto vynálezu, shora uvedeného obecného vzorce Ϊ, lže připravovat reakcí aminokysel in'dále uvedeného obecného vzorce II, v němž Ri a Rz mají významy uvedené u shora uvedeného obecného vzorce I, s 2-(nitrofénylsulfonyl)chlórformiátem dále uvedeného vzorce III ve směsném vodňěorganickém rozpouštědle v přítomnosti báze a při teplotě 0 až 40 °C, s výhodou při 0 až 20 °C (schéma 1)
HNR^-CHR^-COOH + (HJ
(i)
Chlorfprmiát vzorce III se uvádí do reakce v množství 0,5 až 1,5 molárnlch ekvivalentů, s výhodou 0,7 až 0,9, vztaženo na aminokyselinu. Jako organickou komponentu'rozpouštědla lze používat kterékoliv aprotické organické rozpouštědlo, které je schopné rozpouštět acylační Činidlo a je mísitelné s 7 vodou, například acetonitril, DMF, tetrahydrofuran nebo dioxan. Bází může být organická či anorganická báze, například uhličitan sodný nebo draselný, oxid hořečrtáštý nebo vápenatý, třiethylamin nebo N-méthylmorfolín.
Podle ji ného způsobu podle tohoto vynálezu se aminokyseliny Obecného vzorce II nejprve přemění v N, O-biš-trimethylšilylde-riváty dále uvedeného obecného vzorce IV, v němž Ri a R2 mají shora uvedené významy, známými postupy a potom se na ně působí chiorformlátem III v bezvodém Organickém rozpouštědle, například díchlormethanu. Po vodné hydrolýse trimethylsilylderlvátů jakožto meziproduktů získají se požadované. Ncc-Nsc-aminokysel iny ve volné formě (schéma 2), m 1) 111 ^Sr-hlR^f^-COO-Sip^ 2) H O * 0) * Ovj . 3
Deriváty vzorce I, v němž Ri je vodík a Rz značí N-xanthy1karboxami domethy1 nebo 2-(N-xanthylkarboxami do> ethyl , l ze připravovat reakcí derivátu vzorce I, v němž Ri je vodík a Rz značí karboxamidomethyl nebo 2-(karboxyami do)ethy1, s xanthydrolem v aprotickém organickém rozpouštědle v přítomnosti kyseliny. Jako rozpouštědlo lzé používat DMF a vhodnou kyselinou je organická kyselina, například trífluoroctová, nethansulfonová nebo p-toluensulfonová kyšelina. Z molekulárního vzorce je zřejmé. Že sloučeniny I mají asymetrický ot-uhlíkový atom (s výjimkou sloučenin, v nichž Ri = Rz 3 H) . Protože se Ot-uhl íkový atom neúčastni reakcí používaných pro přípravu sloučenin I, zachová se konfigurace tohoto chirálnlho centra, existujícího ve výchozích aminokyselinách II( ve výsledných Nu-Nsc-der i vátech. Je tudíž jasné, že způsoby podle tohoto vynálezu se mohou používat pro přípravu Ň«-Nsc-aminokyselin I v jakékoliv čhirální podobě (L nebo Ď), jakož i raceraických sloučenin, což závisí ha konfiguraci výchoz! sloučeniny II. Významy substituentu Ri a S2 v derivátech vzorce I podle tohoto vynálezu odpovídali strukturám postranních řetězců přirozeně se vyskytujících aminokyselin, které obsahují Cl neobsahují Chrániči skupiny známé v obóru, povětšinou skupiny térc-butylového typu nebo jim podobné vzhledem k podmínkám štěpen í i tabulka 1).
Tabulka 1
Významy substítuentú Ri a Ra ve Sloučeninách I
c. Ři Sz Aminokysel ina Zkratka Ϊ-1 H H glycin Nsc-Gly-OH 1-2 H tnethýl alanin Ksc-Ála-OH 13 H i sopropy1 val in Ňsc-. Val - OH 1-4 H . 1-methylpropyl i soleuc i n Ňsc-Ile-OH 1-5 H 2-methylpropyl 1euc i n Ňsc-Leu-OH 1-6 H t-butbxymethy1 0-t-butyl-serin Ňsc-Ser (tBu)--OH 1-7 H 1 -t-butbxymethy1 0-t-butyl-threonin Hsc-Thří tBu)--OH 1-8 H 2-methylthioethyl methionin Nsč-Met-OH 1-9 H benzyl fény!alanin Nsc-Phe-ÓH 1-10 H karbóxam idomethyl asparagin Nsc-Asn-OH Ϊ-11 H 2-karbóxam i doéthy1 glutamin Nsc-Gln-0H 1-12 H t-butoxykarbonyl-methyl aspartová kyselina β-t-butylester Ňsc-Aspí OtBu)--0H 1-13 H 2-í t-butóxykarbo- glutamová kyselina Nsc-Gluí OtBu)- nyl)ethyl γ- t-butylester -OH 1-14 H 4-(t-butoXykarb-amido) blity 1 Ň£-t-butoxykarbo-i nyl* lysin Ňsc-Lysí Boč) --OH I -15 H 4-trbutoxybenzy1 J i 0-t-butýl-týřosin 1 1 Nsc-Týrí tBu)--0H 1-16 H : indolyl-3-methyl !trýptóťan I Ssc-Trp-OH 1-17 H S-(tri fenylmeth- I Š- tri.fenyl methyl - Nsc-CýsíTrt)- yl)thiomethyl cystein -OH 9
I -18 U 1 -(trifeny!methyl) Nř-tři fény1methyl - Nsc-His(Trt)- imidazolyl-4-methyl histidin -OH 1-19 H 3-< N^-mesiti leň- N°-mesitylensulfo- Nsc-ArgíMts)- sulfonylguanidino- nyl-argiriin -OH propyl 1-20 H N-xanthy1karbox- N-xaňthyl-aspara- Nšc-Asn<Xan)- amidomethyl gin -OH 1-21 H 2-< N-xárithylkarb- N-xanthyl -g.lut- Nsc-OlníXan)- oxam i do)et hy1 amin -OH 1-22 H S- ( acetamidometh- S-acetamidomethyl- Nsc-Cys(Acm)- yl)thiomethyl cystein -OH 1-23 Ri* Ra = propylen přo1 i n Nšc-Pro-OH
Sloučeniny vzorce 1 uvedené v tabulce i představují zřejmě plnou sadu chráněných proteogenických derivátů aminokyselin potřebných pro syntézu peptidu kterékoliv směsi aminokyselin. Je rovněž zřejmé, že Ner-Nsc-deriváty aminokyselin nesoucí jiný typ ochrany základního řetězce, jakož i Nec-Nsc-deriváty neproteogeňních nebo neobvyklých aminokyselin, lže syntetizovat způsobem podle vynálezu.
Not-Nsc-aminokysel iny I jsou krystalické sloučeniny nerozpustné nebo málo rozpustné ve vodě a rozpustné v polárních rozpouštědlech a jsou stálé při dlohodobém . skladování při -10 až 25 °C.
Způsob podle tohoto vynálezu poskytuje postup přo Syntézu peptidů v tuhé fázi za použiti Net-Nsc-aminokyselin vzorce. I. Tímto zupůsobem se první Nac-Nsc-aminoskupina (C-terminál cílové aminosekvence) napojí kovaléntně na nerozpustný polymerní nosič přes volnou ct-karboxylovou skupinu vytvořením esterové nebo amidové vazby, čímž se získá Nct-Nsč-am i noacyl-polymer. Mohou se používat různé polymery jakožto polymerní nosiče, jako jsou zesítěný nebo makroporovitý polystyren, zesítěný poly-N, N-dlmethylakrylamid v.granulované formě nebo jako směs s křemelinou, zesítěné dextrany, celulózy,, papíry a jiné polymery známé v obořu a používané k tomuto účelu.
Pro napojení první Ntí-Hsc-aminokyseliny má polymerní nosič 10 obsahoval vhodné kotevní skupiny. Ve většině případů jsou kotevními skupinami takové skupiny, jež poskytují možnost odštěpení syntetizovaného peptidu od polymerního nosiče za uvolnění C-terminální karboxylové nebo karboxamidové skupiny během zpracování peptidyl-polymeru kyselými reagenty, jako je trifluoroctová kyselina a její roztoky nebo roztoky chlorovodíku y organických rozpouštědlech. Takovými kotevními skupinami pro napojení esterového typu mohou být 4-hydroxyme-thylfenoxyalkyl, 4-chlor- nebo 4-brommethylfenoxyalkyl, cc-hy-dřoxýdifeny1methyl a jiné skupiny známé v tomto oboru. PrO napojení karboxamidového typu jsou známé di- a tríalkoxylbenz -hydrylaminové skupiny, 4-aminométhyl-3,5-dimethoxyfenoxyal-kýlová skupina a také jiné známé skupiny používané k tomuto účelu. Připojení C-terminální Not-NsC-am i nokysel iny ke kotevním skupinám polymerního nosiče se může uskutečňovat metodami, jež jsou v tomto oboru známé.
Aby se Ncc-chránicí skupina odštěpila ze získaného Nor-Nsc-am i noacyl-polymeru, působí se na ni zásaditým činidlem. Vhodnými zásaditými činidly pro tento účel jsou dusíkaté báze, např. amoniak, morfolln, piperidín, piperazin, diethylamin, 1,8-díazabicyklo[5, 4,Olundec-7-en, 1,1,3,3-tet-ramethylguanidin a jejich roztoky v aprOtických organických rozpouštědlech. Zvlášť vhodným zásaditým činidlem je 20 až 50%ní roztok piperidinu v DMF. V tomto případě se Nsc-skupina odštěpí za vzniku N-I2-í4-nítrofenylsuÍfonyl)ethyl3piperidínu a oxidu uhličitého, přičemž se uvolní cc-aminoskupína.
Potom se am i noacyl-polymer s volnou ct-áminóskupinou acyluje další N<x-Nsc-aminokysel lnou ža vzniku Not-Nsc-dipeptidyl-poIýme ru. K tomuto účelu se používají v oboru známé metody, požívané obvykle k tomuto účelu. Jako acylační činidla lze používat například 4-nitrofenyl, pentachlófenýl, pentafluorfényl, 1-hydřoxybenzotriazolylestery Not-Nsc-aminokyselin a jiné známé typy aktivních esterů používané v syntéze peptidů v tuhé fázi, jakož i symetrické anhydridy Not-Nsc-am i nokysélin. Acylaci lze provádět také Not-Nsc-aminokysel iňami v přítomnosti známých kopulačních činidel, např. dícyklohexyl- 11 karbodi ifflidu, di isopřopylkrarbodi im.idu, benzotriazolyl- 1 -oxy-(tr i s-dimethy lamino)fosfon i um-hexafluor fosfátu.
Syntetické cykly, které spočívají v odštěpení Na-Nsc-skupi-ny a následné acyláci volné affiinoskupiny následující Not- Nsc-a.miriokysel inou, se opakují, až se dosáhne sestavení cílové aminokyselinové sekvence.
Po sestaveni požadovaného Ncr-Nsc-pept idyl.yl -polymeru se .Not-terminál ní chránící skupina odštěpí shora uvedenými postupy a potom se cílový péptid ve většině případů odpojí od kotevní skupiny nosiče 2a současného odštěpení trvalé ochrany od postranních řetězců aminokyse1 iη. K tomuto účelu lze používat kyselých '.reagentů, známých v obořu pro odštěpování chránících skupin terc-butylového typu, nápř. trifluoroctové kyseliny, roztoků methansu1fonové nebo p-toluensulfonbvé kyseliny, obsahujících nebo neobsahujících známá aditiva k zachycování vyvíjejících se karboniových iontů, například vodu, anišol, thioanisol, dinethylsulfid nebo ethandithiol- 1,2-tri isopropylsilan.
Popřípadě se může cílový peptid odblokovat bez odštěpeni od polymerního nosiče. V takových případech je třeba používat známě kotevní skupiny, které mohou poskytovat vazbu peptidyl--polymer, odolnou proti kyselinám.
Ve srovnání s Fmoc je Nsc-skupina odolnější proti zásaditým činidlům á rychlost jejího oštěpéní je znatelně pomalejší za stejných podmínek, avšak doba, která se obvykle přisuzuje pro odštěpení Ncf-ochrany podle protokolů syntézy v tuhé fázi (15 až 20 min), dostačuje pro kvantitativní odštěpen í
Not-Nsč-skupiny od chráněného peptidýl-polymeru takovými zásaditými činidly, jako je 20 až 50%ni ró2tok piperidinu v DMF. Na druhé straně skýtá zvýšená odolnost Nsc-skupiny k zásaditým činidlům větší její Stabilitu v neutrálních a slabě Zásaditých prostředích, které še s výhodou používají k provedeni ácylačních stupňů.
Jak je shora popsáno, může še Nsc-skupina odštěpovat kvantitativně zásaditými činidly v přítomnosti chráničích skupin terc-butylového typů, jež jsou odolné proti organickým zásadán. Na druhé straně je Nsc-skuplna úplně odolná proti 12 působeni kyselých činidel používaných obvykle ke štěpení chránící skupiny teřc-butylového typu. Použitím Nct-Nsc-aminokyselin obecného vzorce I, které obsahují v postranních řetězcích chránící skupinu s výhodou terč-butylového typu nebo ji podobnou vzhledem k štěpným podmínkám, umožňuje se tudíž vývoj nové strategie syntézy peptidů v tuhé fázi ve shodě s “principem orthógonality“.
Vynález bude nyní blíže, popsán pomocí příkladu, jež mají vynález blíže objasňovat, aniž by měly omezující význam. Všechny aminokyse1 iny v nás1eduj í cl př1k1adově Část i popisu mají L-konfiguraci, néní-li udáno jinak. Přiklády provedení vynálezu Příklad í Nct-Nsc-asparagin (1-10) 3,95 g asparaginu a 7,7 g uhličitanu draselného se rozpustí ve 100 iúl směsi voda-dioxan (3=1 hmotnostně) a ochladí v ledové lázni, potom se po kapkách v průběhu 15 minut přidá za míchání roztok 7,5 g 2-(4-niLrofenylšulfonyl)ethyl-chlorformi átu III v 70 ml ďioxanu. Chladicí lázeň se odstraní a směs še míchá dalších 20 ιιιίημ^ potom se odpaří na asi 100 ml za sníženého tlaku a nalije se do dělicí nálevky. Přidá se 100 < ml vody a výsledný roztok se extrahuje 2krát 50 ml ethylacetátu.. Vodná vrstva se oddělí, okyselí ná pH 2 přidáním 40ϋπ1 kyseliny sírové a ochladí v ledově lázni. Po 30 minutách se vzniklá sraženina odfiltruje, promyje důkladně ledovou vodou á vysuší na vzduchu. Získá se požadovaná slouče niha 1-10 v podobě bílého krystalického prášku. Její charakteristiku viz v tabulce 2 (přiklad 5). Příklad 2 N«t-Nšc- leucin (1-5)
Do 250ml baňky S kulatým dnem, vybavené Zpětným chladičem a kapací nálevkou, se vloži 4,92 g leucinu a 90 ml bezvodého dichlormethanu. K Suspenzi se přidá 9,5 ml chlortrimethylšila nu za intenzivního mícháni a směs se zahřívá při teplotě varu 1 hodinu. Výsledný roztok se ochladl v ledové lázni a potom se k němu přidá za míchání 9,1 mi tríethylaminu a 9,0 g chlór-formiátu III. Směs se míchá 20 minut v ledové lázni a potom další 1,5 hodinu při teplotě místnosti. Rozpouštědlo še odpaří za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi 200 ml ethylacetátu a 250 ml 2,5%ního vodného kyselého uhličitánu sodného. Vodná vrstva se oddělí, promýje 50 ml etheru, okyselí na pH 2 1N chlorovodíkovou kyselinou a potom extrahuje 3krát vždy 70 ml ethylacetátu. Spojené extrakty se vysuší bezvodýro.síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Rekrysta-1 ižací Zbytku z hexan-ethylacetátu se získá požadovaný produkt 1-5 ve formě bílého krystalického prášku (80¾). Jeho vlastnosti jsou uvedeny v tabulce 2 (příklad 5). Příklad 3 β-terč-Butýl ester kyseliny Noc - Nsc - aspar tové
Do 250ml baňky s kulatým dnem opatřené zpětným chladičem a kapací nálevkou se vloží 7,09 g β-ter-butylesteřu kyseliny aspartové a 90 ml bezvodého díehlormethanu. Ke směsi se přidá Za intenzivního mícháni 12,7 ml diisopropylethylenasimi a potom 9,5 ml chlortrimethylsílánu a směs se zahřívá za teploty varu 1,5 hodinu. Reakčni směs se potom ochladí v ledové lázni, najédnou se přidá 9,0 g chlorformiátu III a v míchání se pokračuje 1,5 hodinu při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se distribuuje mezi 200 ml ethylacetátu a 250 ml 2,5¾ vodného bikarbonátu sodného. Vodná vrstva se oddělí, promyje 50 ml etheru, okyselí na pH 2 přidáním 1N kyseliny chlorovodíkové a potom extrahuje 3krát vždy 70 ml ethylacetátu. Spojené extrakty se vysuší bežvodým síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Překřystal izováriím zbytku z hexan-ethylacetátu se získá požadovaný produkt 1-12,ve formě bílého krystalického prášku (86%). Jeho vlastnosti jsou uvedeny v tabulce 2 (přiklad 5). Příklad 4 . Ne-Msc-N-Xanthýl-asparagiň (1-20) 3,89 g Not - Nsc - asparag i nu (1-10) a 2,6g xanthydrolu še 14 rozpustí ve 20 ml suchého DMF. K roztoku se přidá 0,4 ml methansulfonové kyseliny a směs nechá stát 2 dny při teplotě místnosti. Výsledná směs se potom vlije za mícháni do 100 ml ledové vody a vzniklá sraženina se odfiltruje, promyje vodou a potom ethylacetátem a etherem. Surový produkt se rozpusti v 10 ml teplého DllF, zfiltruje a znovu vysřáží etherem. Sraženina se odfiltruje, promyje etherem a vysuší ve vakuu. Získá se požadovaná sloučenina 1-20 jako krystalický prážek (74¾). Její vlastnosti jsou uvedeny v tabulce 2 v příkladu 5.
Příklad 5 Vlastnosti Nct-Ňsc-aminokysel in I V tabulce 2 jsou uvedeny sloučeniny vzorce I, které se připravují postupy popsanými podrobně v příkladech 1 až 4. Čísla ve sloupci "Metoda** značí příklady, v nichž jednotlivé metody jsou popsány. Specifické optické rotace [<*3d2S byly měřeny polařimetrem DIP-320 (JASC0, Japonsko) v lOcm kyvetách Teploty táni se stanovují v otevřených kapilárách a nejsou korigovány. Chromatográfická pohybi ivost hodnot Ri je Udávána pro tenkovrstvé chrómatografické folie (Aliifolien Kieselgel 60 F264, Merck, Darmstadt, Německo); chloroform/methano1/octová kyselina, 95=5=3, (A) benzen/aceton/actová kyselina 100=50 =3 a (B) Se používají jako vyvíjející rozpouštědla, skvrny se detekuje UV-absorbancí a/nebo ninhydrinovou reakcí. Hmotnosti molekulového iontu (M+H)* se měří použitím hmotového spektrometru MS-BČ-1 (time-of-f1ight) s Cf2®2 radiačně-promotovanou desorpcí (Electron SPA, Sumy, Ukrajina).
Tabulka 2
Vlastnosti Noc-Nsc-aminokyselin I / A i _ J jt. Ji 14b . e. Sloučenina Meto/ í4f T.t, ř)°C . Hf(A) Rf(B) Molekul. ion(M+H) uxi dle] přík. (cl,Dt Ϊ) O Vypoč teno Nale zeno I-l Hsc-Gly-OH 2 - 152-154 0,40 : 0,21' 333/30 ; 333,4 1-2 l'isc-Ala-Oií 2 -25,6 134-136 0,53 0,35- 347,32 347,4 1-3 Hsc-Val-Oll 2 -12,0 72-74 0,62 0,50 375,38 1 375,4 1-4 . .Wsc-Ile-OH 2 -13,0 120-121 0,62 0,52 389,41 . 389,6 1-5 Nsc-Leu-CH 2 -33,0 160-162 0,68 0,42 389,41 389,7 1-6 ' Nsc-Ser {tBu) -OH. o +3,3 109-111 0,68 0,46 419,43 418,9 1-7 bsc-Thr(tBu)-OH 3- -9,0 64-66 0,68 0,50 433,46 433,2 1-8 , ifec-Met-OH 2 -28,7 38-90 " 0,65 . 0,37 407,47 406,9 1-9 . Nsc-Phe-OH 2 -23,0 1G0-163 ’ 0,66 0,40 423,42 423,3 1-10 Nsc-Asn-OH 1 -1,3 205-207 0,05 0,05 390,35 390,2 1-11 Nsc-Gln-OH 1 -9,7 192-194 0,10 0,05 404,38 404,3 1-12 Hsc-Asp (OtBu) -Oři 3 -12,7 72-75 0,64 0,38 447,44 , 447,2 1-13 Nsc-Gln (OtBu) -011 5 : , wl -17,0 94-96 0,67 0,38 461,47 461,4 I-14; Nsc-Lys (Boc) -OH -b Ct -11,8 110-112 0,62- 0,35 504,54 505,9 1-15 Nsc-iyr(tBu) -OH n -6,3 82-84 0,68 : 0,44 495,53 495,2 1-16 Nsc-lrp-GH 3 -14,7 188-190 0,53 0,33 ' 462,46 . 461,7 1-17 boC-Cys{Trt)-OH 3 +22,3 108-110 0,75 ; 0,52 ; 621,71 619,3 I-id Hsc-iiis (Trt) -OH +5,0 112-115 0,42 0,1 655,71 656,8 I-Í9 l jsc-Arg (Mts) -OH 'λ -4,0 115-120 0,25 0,05 615,68 614,4 1-20 Nsc-Asri{Han}-OH 4 +2,7 198-200 0,43 0,25 570,56 568,3 1-21 Hsc-Oin(Xan)-OH 4 -13,7 155-158 0,58 0,23 584,58 582,9 1-22 Hsc-Cy3(Act)-OH 2 -31,0 124-126 i 0,17 0,05 450,47 451,2 1-23 Wsc-Pro-GH 2 3 3* 13 i 115-117 ! ✓ 0,53 0,37 371,35 371,3 15 Přiklad 6 Syntéza v tuhé fázi dodekapeptidu
Ala-Ser-Ser-Thr-Ile-Ile-Lys-Phe-Gly-Ile-Asp-Lys a) Inserce kotevní skupiny.do polymerniho nosiče
Ke 250 mg aminomethylováného kopólymeru styren-1¾ divinyl-benzen (1,0 mekv, NHa/g) ve 3 ml DMF se přidá 0,75 mmol 2,4,5-trichlorfenyl-4-hydróxymethylfenoxypropiónátu a 0,75 mmol 1 ^-hydroxybenzotriazolu a suspenze sé třepe 24 hodin při teplotě místnosti. Polymer se odfiltruje, promyje DMF, ethanolem, etherem a nakonec hexanem á suší ve vakuu nad oxidem fosforečným 24 hodin. b) Napojení Nsč-LysíBoc)-OH na kotevní skupinu Získaný polymer se nechá nabótnat ve 4 ml směsi 1,2-dichlor -ethanu a N-methylpyrrolidinu (3:1) a potom se přidá 0,75 mmol Nsc-Lysí Boc)-OH (1-14), 0,1 mmol 4-dimethylaminopyřidinu a 0,75 mmol dícyklohexylkarbodiimidu. Suspenze se třepe 24 hodin při teplotě nlstnosti. Polymer se odfiltruje, promyje důkladně chloroformem. Směsí chloroform/methanol (1;1), ethanolem, etherem a nakonec hexanem a po vysušení se získá 400 mg Nsc-LysíBoc)-polymeru. o) Sestaveni peptidu
Nsc-LysíBoc)-polymer (200 mg) se vloží do polypropylenové injekční stříkačky opatřené vespod polypropylénovou fritou. Polymer se ve stříkačce promyje DMF a další syntetické cykly se uskuteční podle následujícího operačního protokolu: 1. Předběžné promytí: 33¾ piperidiň/DMF, 4 ml, 0,5 min 2. Odblokování: 33% piperidin/DMF, 4 ml, 15 min 3. Promytí DMF 6x (4ml, 1 min) 4. Acylace Not - Nsc - am i nokyse 1 i na I, 0,5 mmol; bénzotriazolyl-1-oxy-(trisdimethyl-am i no)fosfoni umhexaf1uor fosfát, 0,5 mmol; 1-hydroxybenzotrfazol, 0,5 mmol; N-methyl-morfolin, 0,75 mmol, DHF, 2 ml; (90 min pro Nsc-Ile-0H) 5. Promytí DMF 5x (4ml, 1 min)
Ntf-Nsc-aminokyseliny se přivádějí do syntetických cyklů v pořadí: Nsc-Asp(OtBu)-OH, Nsc-Ile-OH, Nšc-Gly-OH, Nsc-Phe-OH, 16
Nsč^Lys(Boc)-OH, Nšc-Ile-OH, Nsc-Ile-OH, Nsc-Thr-(tBu)-OH. Nsc-Ser(tBu)-OH, Nsc-Ser(tBu)-OH, Nsc-Ala-OH.
Po. sestavení cílové sekvence aminokyseliny se ná peptidyl-- polymer působí 20 minut 4 ml 33%ním piper idinem/DMF, potom se, přómy j e Í)MF, dichlprmethanem, ethanolem, ..etherem a nakonec hexanem. d) Odblokování a čištění
Peptidyl-polymer se třepe s 5 ml 50¾ kyseliny trifluorbctové v 1,2-dichlorěthanu 60 minut při teplotě místnosti. Polymer se odfiltruje, promyje 5 ml 50% kyseliny tr i fliipr octové v 1,2~.di i chlore thanu a spojené promývaci roztoky se zředí 100 ml bezvodého ledového etheru. Sraženina se odfiltruje, promyje etherem a vysuší vé vakuu. Získá se 170 mg surového dodekapeptidu (čistota 70% stanoveno reverzní vysoce výkonnou kapalnou chromatografií v kapalné fázi).
Surový dodekapeptid se rozpustí ve 3 ml 1M vodné kyseliny octové achromatografuje na sloupci 1,5x70 cm.naplněném přípravkem TSK HW^éOF (Merck, Darmstadt, Německo), ěkvilibrova-ném a promytém stejným pufrem. Frakce obsahující Čistý peptid se spojí a lyofilizují. Výsledný výtěžek cílového dodekapeptidu je 104 mg (41 %), čistota více než 95%ní stanoveno analýzou reverzní vysoce výkonnou chromatografi i v kapalné fází. Složení aminokyseliny (po hydrblýze 6N HC1, 110 °C, 24 a 48 hodin)= Asp 1,02(1); Ser 1,84(2); Thr 0.93(1) ; Glu ^94(-1) ; Gly 1,03(1): Ala 1,00(1); Ile 2,78(3): Lys 2,04 (2) .
Claims (7)
17 HII '11 PATENTOVÉ NÁROKV 1. Nct-2- ( 4-nitrofeňylsul fonyl) ethoxykarbony 1 -aminokysel iny obecného vzorce I 'iiyd
O o II Ifs—Ct-^CH^-O—C—NRí—CHR2—COOH O JM31 NiSVIA OHjAOfSAwgyd avyo ( Γ) L 6 ,ΧΙ X 0 01§0Q v němž Ri značí atom vodíku a 1 y u ř? q R2 značí isopropyl, 2-methyl propyl, 2-methyl thioethýl*· ° ^ benzyl, karboxamidomethyl, 2-karboxyamidoethyl, 4- teřc-butóxyi· g benzy 1, indoly1 - 3- methyl, S- ( tři fenyl methyl) thi omethyl > 1-(tri fenylméthyl)imidazolyl-4-inethyl, 3-(N^-mesitylensulfon- yl)guanid1nopropyl, N-xarithýlkarboxamidomethyl, 2-(N xanthy1- karbůxamido)ethyl nebo S-(acetamidomethyl)thiomethyl, nebo Rl a Ra tvoří společně propylenový radikál.
2. Způsob přípravy aminokyselin ' podle nároku 1, obecného vzorce I, vyznačující se tím. Se sé aminokyselina obecného vzorce II HNRi-GHŘa-COOH (II) v němž Ri a Rz mají významy uvedené v nároku 1, nechá reagovat s 2-(4-nitrofeňylsulfonyl)ethoxýkarbonyl-chlorformi ^ átem ve směsném vodňě-organickém rozpouštědle v přítomnosti báze.
3. Způsob přípravy aminokyselin podle nároku 1, vyznačující se tím, že se a) aminokyselina shora.uvedeného obecného vzorce II, v němž Ri a Ra mají významy definované v nároku 1, přemění na O,N-tr i methylsi1ylatované deriváty, b) které še nechají reagovat s 2-(4-nitrofeňylsulfonyl)eth- 18 J oxykarbonyl-chlorformiátem v aprotickém rozpouštědle v přítomnosti báze s následnou hydrolýzou.
4. Způsob přípravy aminokyselin podle nároku 1, obecného vzorce t, v němž Ri je atom vodíku a R2 značí N-xanthy1karbox -amidomethyl nebo 2-(N-xanthylkárboxamido)ethyl, vyznačující sě tím, že se aminokyseliny podle nároku I, obecného vzorce % I, v němž Ri je atom vodíku á Rz značí karboxamiďotóethyl nebo 2^ (.karboxamido) ethyl, nechají reagovat s xanthydrolem v rf organickém rozpouštědle v přítomnosti kyseliny.
5. Způsob přípravy peptidů šekvericiálni adicí chráněných aminokyselinových monomeru na rostoucí peptidový řetězec, napojený na nerozpustný polymerní podklad, př i Čemž uvedené chráněné aminokyselinové monomery jsou aminokyselinami podle nároku 1, vyznačující se tím, že se a) C-terminálňí chráněný monomer napojí na aminovou nebo hydroxylóvou funkci kotevní skupiny vázané ria polymerní podklad volnou karbúxylovou skupinou uvedeného chráněného monomeruzá vzniku chráněného aminoacy1-polymeru, b) chráněný am inoacy1-po1ymer se odblokuje působením zásadi -tého činidla za vzniku aminoacyl-polymeru s volnou a-amino-skupinou, c) na volnou ct - am i noskup i nu am i noaCy 1 -polymeru se napojí následující chráněný aminokyselinový monomer za vzniku chráně . -ného pept-idyl-polymeru, d) . stupně b) a' c) Se opakuj í až se dosáhne konečného chráněného aminokyselinového monomeru, načež sé uskuteční stupeň b).
.6, . Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že. se provádí se zásaditým činidlem, jímž je dusíkatá báze vybraná zé skupí -ny zahrnující amoniak, morfolin, piperidin, piperazin, di ethylamin, 1,8-diazabicykloí5,4,01undec*7-en, 1,1,3;3-tetra -methy1guanidin a jejich roztoky v aprotických organických rozpouštědlech.
7. Způsob podle nároku 6, Vyznačující se tím, že se provádí s piper idinem jakožto dusíkatou bází a s dimethyl formámidem jakožto organ1ckým rozpouštědlem.
e;
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU9595102102A RU2079491C1 (ru) | 1995-02-15 | 1995-02-15 | Nα -2-(4-НИТРОФЕНИЛСУЛЬФОНИЛ)ЭТОКСИКАРБОНИЛ-АМИНОКИСЛОТЫ В КАЧЕСТВЕ Nα -ЗАЩИЩЕННЫХ АМИНОКИСЛОТ ДЛЯ ТВЕРДОФАЗНОГО СИНТЕЗА ПЕПТИДОВ |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ247797A3 true CZ247797A3 (cs) | 1998-02-18 |
CZ289747B6 CZ289747B6 (cs) | 2002-03-13 |
Family
ID=20164784
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ19972477A CZ289747B6 (cs) | 1995-02-15 | 1996-01-27 | Nalfa-2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyseliny, způsob jejich přípravy a jejich pouľití |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5616788A (cs) |
EP (1) | EP0765307B1 (cs) |
JP (1) | JP2888991B2 (cs) |
KR (1) | KR100241948B1 (cs) |
CN (1) | CN1058260C (cs) |
AT (1) | ATE185796T1 (cs) |
AU (1) | AU705716B2 (cs) |
CA (1) | CA2212052C (cs) |
CZ (1) | CZ289747B6 (cs) |
DE (1) | DE69604759T2 (cs) |
DK (1) | DK0765307T3 (cs) |
ES (1) | ES2140061T3 (cs) |
FI (1) | FI973338A (cs) |
GR (1) | GR3031832T3 (cs) |
HU (1) | HUP9801150A3 (cs) |
NO (1) | NO309142B1 (cs) |
PL (1) | PL184205B1 (cs) |
RU (1) | RU2079491C1 (cs) |
WO (1) | WO1996025394A1 (cs) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1090615C (zh) * | 1996-10-19 | 2002-09-11 | Hyundai药物工业株式会社 | Nα-2-(4-硝基苯基磺酰基)乙氧羰基氨基酸 |
EP0934260A1 (en) * | 1996-10-19 | 1999-08-11 | Hyundai Pharm. Ind. Co., Ltd. | N alpha-2-(4-nitrophenylsulfonyl)ethoxycarbonyl-amino acids |
KR100378252B1 (ko) * | 1999-11-12 | 2003-03-29 | 학교법인 포항공과대학교 | 니트로술포닐에톡시카르보닐-아미노산을 이용한 합성테트라펩티드 라이브러리의 제조방법 |
AU1894000A (en) * | 1999-12-24 | 2001-07-24 | Hyundai Pharmaceutical Ind. Co., Ltd. | Nalpha-2-(4-nitrophenylsulfonyl)ethoxycarbonyl-amino acid fluorides and process for the preparation thereof |
KR100418962B1 (ko) * | 2001-06-07 | 2004-02-14 | 김학주 | 2-(4-나이트로페닐설포닐)에톡시카르보닐-아미노산류를사용하여 펩티드를 고수율 및 고순도로 제조하는 방법 |
JP5515738B2 (ja) * | 2007-07-25 | 2014-06-11 | 味の素株式会社 | ジベンゾフルベン誘導体の淘汰方法 |
CN103421087A (zh) * | 2013-04-12 | 2013-12-04 | 上海捌加壹医药科技有限公司 | 一种多肽的液相合成方法 |
WO2024079043A1 (en) | 2022-10-10 | 2024-04-18 | Bachem Holding Ag | Method of manufacturing a peptide with a lysine derivative |
-
1995
- 1995-02-15 RU RU9595102102A patent/RU2079491C1/ru active
-
1996
- 1996-01-27 ES ES96901556T patent/ES2140061T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-27 HU HU9801150A patent/HUP9801150A3/hu unknown
- 1996-01-27 AT AT96901556T patent/ATE185796T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-01-27 JP JP8524843A patent/JP2888991B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-27 CZ CZ19972477A patent/CZ289747B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-01-27 CA CA002212052A patent/CA2212052C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-27 KR KR1019970705664A patent/KR100241948B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-01-27 DE DE69604759T patent/DE69604759T2/de not_active Revoked
- 1996-01-27 WO PCT/KR1996/000012 patent/WO1996025394A1/en not_active Application Discontinuation
- 1996-01-27 EP EP96901556A patent/EP0765307B1/en not_active Revoked
- 1996-01-27 DK DK96901556T patent/DK0765307T3/da active
- 1996-01-27 PL PL96321864A patent/PL184205B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-01-27 AU AU45496/96A patent/AU705716B2/en not_active Ceased
- 1996-01-27 CN CN96191913A patent/CN1058260C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-02-01 US US08/595,381 patent/US5616788A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-08-14 FI FI973338A patent/FI973338A/fi unknown
- 1997-08-14 NO NO973752A patent/NO309142B1/no unknown
-
1999
- 1999-11-12 GR GR990402922T patent/GR3031832T3/el unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
PL321864A1 (en) | 1997-12-22 |
HUP9801150A2 (hu) | 1998-09-28 |
DE69604759D1 (de) | 1999-11-25 |
GR3031832T3 (en) | 2000-02-29 |
RU2079491C1 (ru) | 1997-05-20 |
DE69604759T2 (de) | 2000-06-21 |
ES2140061T3 (es) | 2000-02-16 |
PL184205B1 (pl) | 2002-09-30 |
CN1173865A (zh) | 1998-02-18 |
KR19980702267A (ko) | 1998-07-15 |
JPH10503216A (ja) | 1998-03-24 |
FI973338A0 (fi) | 1997-08-14 |
WO1996025394A1 (en) | 1996-08-22 |
KR100241948B1 (ko) | 2000-02-01 |
CZ289747B6 (cs) | 2002-03-13 |
JP2888991B2 (ja) | 1999-05-10 |
NO309142B1 (no) | 2000-12-18 |
DK0765307T3 (da) | 1999-12-27 |
AU705716B2 (en) | 1999-05-27 |
US5616788A (en) | 1997-04-01 |
NO973752D0 (no) | 1997-08-14 |
CA2212052C (en) | 2002-09-03 |
AU4549696A (en) | 1996-09-04 |
FI973338A (fi) | 1997-10-14 |
CA2212052A1 (en) | 1996-08-22 |
NO973752L (no) | 1997-10-14 |
HUP9801150A3 (en) | 2000-07-28 |
RU95102102A (ru) | 1996-11-20 |
CN1058260C (zh) | 2000-11-08 |
ATE185796T1 (de) | 1999-11-15 |
EP0765307B1 (en) | 1999-10-20 |
EP0765307A1 (en) | 1997-04-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI90780B (fi) | Tekohartsi | |
US7408026B1 (en) | Synthesis of proteins by native chemical ligation | |
JP2019503369A (ja) | セマグルチドの製造方法 | |
EP2534168A2 (en) | Chemical preparation of ubiquitin thioesters and modifications thereof | |
WO2007114454A1 (ja) | ペプチドのチオエステル化合物の製造方法 | |
NO166532B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av peptidet h-arg-x-z-y-tyr-r. | |
CZ247797A3 (cs) | N alfa -2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-aminokyseliny, způsob jejich přípravy, jakož i způsob syntézy peptidů | |
Furlán et al. | Selective detachment of Boc-protected amino acids and peptides from Merrifield, PAM and Wang resins by trimethyltin hydroxide | |
EP0273895A2 (en) | Solid phase peptide synthesis | |
US6787612B1 (en) | Resin derivatization method and uses thereof | |
EP4083054A1 (en) | Method for producing pna oligomer in solution process | |
US4764595A (en) | Resin support for solid phase peptide synthesis | |
JP2003508408A (ja) | 環状偽ペプチッドの製造方法 | |
US4801665A (en) | Resin method for making sulfoxide for solid phase peptide synthesis | |
KR100418962B1 (ko) | 2-(4-나이트로페닐설포닐)에톡시카르보닐-아미노산류를사용하여 펩티드를 고수율 및 고순도로 제조하는 방법 | |
WO2005100378A1 (en) | Process for the preparation of a peptide, and compounds comprising a thioester carboxyl-activating group for use therein | |
JP2002521364A (ja) | アミノ−アルデヒド固相支持体、そのためのリンカー並びにそれを製造する方法およびその用途 | |
JP2010538063A (ja) | ポリペプチドおよび蛋白質の化学的合成のための方法および中間体 | |
CA1322008C (en) | Intermediate for synthetic resin | |
US4879371A (en) | Solid phase peptide synthesis | |
KR100385096B1 (ko) | 고체상반응을통한아자펩티드유도체의제조방법 | |
US8895696B1 (en) | Methods for forming peptides and peptide conjugates and peptides and peptide conjugates compositions formed thereby | |
Procházka et al. | The analogs of oxytocin and D-homoarginine vasopressin with bulky substituted phenylalanine in position 2 | |
Camarero et al. | Fmoc-Based Synthesis of Peptide r-Thioesters Using an Aryl Hydrazine Support | |
JPH07118293A (ja) | ポリペプチドの製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20070127 |