JPH01221358A - ベンズヒドリルアミン誘導体及びその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基
（以下、ｌ−”ｆｉ。、」と略す。）を利用するポリペ
プチドアミドの固相合成のための反応試薬として有用な
新規ベンズヒドリルアミン誘導体及びその中間体に関す
る。

〔従来の技術〕

ポリペプチドの自動化された同相合成に際し、カルピノ
（Ｃａｒｐｉ％０）及びハン（３４％）によって開発さ
れた、塩基の存在下で脱離する保護基であるＦ、。、を
利用することが知られている（Ｃａｒｐ−ｓｓｏ、　Ｌ
、Ａ、　、　Ｈａｙｓ、　Ｇ、Ｙ、　：　Ｊ、　Ａｙｓ
、　Ｃｈａｍ、　Ｓｏｃ、　。

９２、５７４８（１９７０）；Ｃａｒｐｉｎｏ、Ｌ、Ａ
、：Ａｃｔ、　Ｃｈａｍ、　Ｒａｇ、　、　２０．４０
１（１９８７））。

当該方法では、Ｆｍ８とともに、側鎖を有するアミノ酸
にはｔ−ブトキシカルボニル（以下「Ｓｏｃ」と略す。

）又はｔ−ブチル系（以下「ｔＢ％」　と略す。）のエ
ステル又はエーテルのように酸の存在下で脱離し得る保
護基が用いられる。Ｂｏｇ及び１８％のような保護基は
同相合成の最終段階で、トリフルオル酢酸（以下「ＴＥ
Ａ」と略す。）で穏やかな処理をすることによって遊離
させることができる。この方法による固相合成において
は、ＵＶ吸収スペクトルを利用することによって反応の
進行具合、すなわち軸合及びポリマー支持体上に結合し
ているアミノ酸のα位窒素の保護基の脱離状態を知るこ
とができる。Ｆｍｏｃを利用することによって、メチオ
ニンやシスティンを含有スるポリペプチドの合成及び酸
に敏感なトリプトファンを含むポリペプチドの合成が以
前よりも容易になった。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかし、Ｊ’　ｆｎｏａを用いるポリペプチドアミドの
合成法は、最終生成物であるポリペプチドアミドの適当
な前駆物質を開発する必要があるため、十分に確立され
ている方法とは言えなかった。特に、メリフィールド（
Ｍａｒｒｉｆｉａｌｄ　）によって開発された同相合成
法において従来用いられてきた前駆物質よりも酸の存在
下でより一層脱離しやすい前駆物質が好ましい。現在は
、この目的にかなう物質として、ベンジルアミン又はベ
ンズヒドリルアミンと結合した数種の樹脂が使用されて
いる。しかしながら、これらの樹脂を得るためには取り
扱いのむずかしいクロルメチルポリスチレン樹脂を扱う
必要がある。このような困難な操作と比較して、容易に
入手可能なアミノメチル化ポリスチレン樹脂に直接導入
し得る反応試薬を開発することが、実用上の見地から望
まれていた。このような目的にそうものとして、アルベ
リチオ（Ａｌｂｍｒｉ−ａｉｏ　）とバルナリ（Ｂａｒ
ｓａｒｙ）は、ベンジルアミン誘導体試薬である、５−
　［（２’又は４′）−Ｆ　ｍｅ　ｅ−アミノメチル−
３’、　５’−ジメトキシ〕フェノキシ吉草酸を提案し
た（Ａｌｂ−デ１ｃｉｏ、Ｆ、。

Ｂａｒｔｓａｒｙ、Ｇ、：　　１ｓｔ　、Ｊ、Ｐｅｐｔ
ｉｄｅ　　Ｐｒｏｔａｔｓ　　Ｒａｓ、。

３０．２０６（１９８７））。しかし、この試薬は、出
発物質から７段階の反応を経て得られるものであって、
しかも総括収率が１５％と低いという二つの問題点があ
った。

〔問題点を解決する喪めの手段〕

本発明は以上の問題点を解決すべく鋭意検討を続けた結
果、ベンズヒドリルアミンの二つのベンゼン環にそれぞ
れ低級アルコキシ基を導入することによって、ベンズヒ
ドリルアミンのＣ−Ｎ結合が酸で切断しやす（なること
、及びこのベンズヒドリルアミンに例えばプロピオン酸
基を付加することによってアミノメチル化ポリスチレン
樹脂とうまく結合することを見い出し、これらの知見に
もとづいて本発明を完成した。

すなわち、本発明はポリペプチドアミドの同相合成を効
率よく行うことのできる反応試薬又はその合成中間体と
して使用される下記の一般式（Ｉｌ、（Ｉｌｌで表され
る新規なベンズヒドリルアミン誘導体及び下記の一般式
（Ｉｌｌ）で表される新規なベンゾフェノン誘導体を提
供するものである。

（式中、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立にＣ，−Ｃ。

の低級アルキル基を示す。鴇は１〜４の整数を、悔は１
又は２をそれぞれ示す。） （式中、Ｒ１、Ｒ２、’Ｆ’及び鴨は前記と同じものを
意味しｓ　Ｆｔｎ６ｃは９−フルオレニルメチルオキシ
カルボニル基を示す。） （式中、Ｒ、、Ｒ２、ｓ及び鵠は前記と同じものを意味
する。） 以下、本発明の詳細な説明する。

本発明化合物の一般式（１１、（Ｉｆ）及び（２）で表
される化合物は、例えば、３−（４−メトキシフェニル
）プロピオン酸メチルを出発物質として、次に示す反応
によって製造することができる。

１）、３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチ
ルとｐ−メトキシベンゾイルクロリドとのフリーデル−
クラフッ縮合 ２）得られたメチルエステルのけん化 ３）ヒドロギシルアミンによる処理（オキシムの生成） ４）得られたオキシムの亜鉛（酢酸中）による還元 ５）得られたアミン体のＦユ。、−０８ｓ（Ｓ〜はＮ−
ヒドロキシスクシンイミジルの略）を用いたＦ惧ＯＣ化 得られたｐｍ・０反応試薬は、１−ヒドロキシベンゾト
リアゾール（以下、「ＨＯＢｔ」と略す。）の存在下で
、ジシクロへキシルカルボジイミド（以下、「ＤＣＣ」
と略す。）との縮合によってアミノメチル化ポリスチレ
ン樹脂に結合させる。なおこの反応はカイザー試験（Ｋ
α＄ａ−デｔｅｓｔ　）で陰性になるまで行う。得られ
ｆＣ樹脂を反応試薬として使用する前に、Ｆｍ＠ｅ基は
ピペリジン２０％含有のジメチルホルムアミド（以下、
「ＤＭＦ」と略す。）溶液中で処理することにより除去
する。この工５にして、プロピオニル結合によって固定
された２、４′−ジメトキシベンズヒドリルアミン樹脂
（以下、「レジンＡ」と称する。）が容易に得られる。

一方、上記のＦｍｏｃ反応試薬をＩＩ−等のアミノ酸と
ＰＡＮ樹脂（ＰＡＮは２−フェニルアセトアミドメチル
の略）の結合体に縮合させる。続いて上記した方法によ
ってＦイ０．基を除去するとレジンＡとは別のＦｍｏａ
同相合成用樹脂（以下「レジンＢ」と称する。）が得ら
れる。レジンＢにおいて、用いられｆｃ、Ｉｌ−等のア
ミノ酸は酸の加水分解によりポリペプチドアミドがどの
程度遊離したかを知るのに有用である。

以下に、本発明化合物並びに本発明化合物を含む反応試
薬であるレジンＡ及びレジンＢの合成方法を実施的によ
って詳しく説明する。なお、各化合物の同定に用いたク
ロマトグラフィー、ＮＭＲｌＭＳ及びＩＲの測定には次
の機器を使用した。

クロマトグラフィー：シリカゲル薄層クロマトグラフィ
ー（Ｋｉａｚａｌ−ｇｅｌ　Ｇ、メルク（Ｍａｒｃｈ）
社製〕を使用し、展開溶媒としてＲｈ値はクロロホルム
、Ｒｔｔ値はクロロホルム：メタノール：水（８：３：
１）を使用した。

核磁器共鳴（’Ｈ−ＮＭＲ）スペクトル：　ＪＥＯＬＦ
Ｘ−２００分光計を使用し、内部標準物質としてテトラ
メチルシランを使用した。

質量ｙ、ペク）　ル（ＭＳ）：　ＪＥＯＬ　　ＪＭＳ−
０１ＳＧ−２分光計を使用した。

赤外吸収（ＩＲ）　：日立２１５分光光度計を使用した
。

〔実施例〕

ドライアイス−メタノール冷却下で、メタノール３０−
にチオニルクロリド３．１ｄ（４２，５ミリモル）を徐
々に加えた。攪拌しながら室温に戻し、３−（４−メト
キシフェニル）プロピオン酸５ノ（２７，７ミリモル）
を加え、１時間攪拌した。続いて溶媒を溜去し、残渣を
酢酸エチルに溶解し、飽和重曹水で２回洗い、更に飽和
食塩水で１回洗った。硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を
溜去した後に減圧乾燥して淡黄色結晶５．２９Ｆを得た
（収率９８％）。

Ｒｆ１値　０．８３ ２．３−（４−メトキシベンゾイル）−４−メト上記１
により得られた３−（４−メトキシフェニル）プロピオ
ン酸メチル１０．８ｔ（５５，６ミリモル）及び４−メ
トキシベンゾイルクロリド１１．４ｒ（６６，８ミｌＪ
モル）ヲニトロベンゼン２００ｄに溶かした溶液を氷冷
し、激しく攪拌しながら塩化アルミニウム２６．７ｆ（
２００，３ミリモル）を６回に分け３時間かけて加えた
。塩化アルミニウムを全部加え終った後文にもう１時間
攪拌した。

氷とＩＮ塩酸１２０−を混ぜたビーカーを用意し、ここ
に反応溶液を注ぎ、激しく攪拌した。これを分液ロート
に移し、酢酸エチルを加えてよく振った。この液の有機
層を飽和重曹水で２回洗い、次に飽和食塩水で２回洗っ
た。硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を溜去した。残渣を
３０％酢酸エチル−ヘキサンを用いたフラッシュカラム
クロマトグラフィーにかけ精製し、淡黄色の油状物質を
得た。

収ｉ　　１７．８？（収率９７％） Ｒｆｔ値　０．１４ Ｍ　Ｓ　、　３２８．１３０６　ＣＣ１，Ｉｆ、０．の
計算値：３２８．１３１０） ＮＭＲ（ＣＤＣ１，）：δ２．６１　（ｔ　、　Ｊ　＝
７．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．９２　（ｔ　、　Ｊ　＝７．
８Ｈｚ　、　２Ｈ）、３．６６（ｓ。

３Ｈ）、３．７１　（ｓ　、　３Ｈ）、３．８６　（ｓ
　、　３ｆｆ）、６．９１　（ｄｔ　、Ｊ＝９．０及び
２．３Ｈｇ、２７７）、６．９１　（ｄ　、　Ｊ＝８．
５Ｈｚ　、　ＩＨ）、７．１４（ｄ。

Ｊ＝２．２Ｈ露、ＩＨ）、７．２８　（ｄｄ、Ｊ＝８．
５及び２．２　Ｈｚ　、　Ｉ　Ｈ）、７．７９（ｄｔ、
Ｊ＝９．０及び２．３Ｈｚ、２Ｈ） Ｊ　Ｒ（ｎｅａｔ　）　ニジｍａｇ２９２０．１７２４
．１６４８．１５９０．１４９２．１４１６．１３００
．１２５０．１１６２．１０２２．８４０ｃｔｎ−’上
記２により得られたケトン１７．３ｆ（５２，７ミリモ
ル）をメタノール（１３０ｍ）−水（２０ｄ）の溶媒に
加えた溶液に水冷下で粒状の水酸化ナトリウム５．０ｆ
（１２５ミリモル）を加え、攪拌しながら室温に戻した
。この反応物を室温で更に１時間攪拌してエステルを完
全に加水分解した。

得られた酸ＣＲｔｔ値０．８４）を再び氷冷し、水酸化
ナトリウム１３．８？（３４５ミリモル）とヒドロキシ
ルアミン塩酸塩３３．０ｔＣ４７４ミリモル）を加え、
６週間還流した。反応終了後反応溶液中のメタノールを
溜去した。残渣に水を少々加えて懸濁液とした後、クエ
ン酸を加えて酸性にし、酢酸エチルで５回抽出した。抽
出した有機層を合わせて飽和食塩水で２回洗い、硫酸ナ
トリウムで乾燥した後、溶媒を溜去した。残渣を酢酸エ
チル及び５−へキサンから再結晶し、無色針状結晶を得
た。

収量　１５．２ｆ（８８％） 融点　１７７−１７８℃ Ｒｆ、値　０．７５ ＮＭＲ（ＣＤ５ＯＤ）　：δ２．５９　（ｔ　、　Ｊ＝
７．４　Ｈｚ　、　２ｆｆ）、２．８９　（ｔ　、　Ｊ
　＝７．４Ｈｚ　、　２Ｈ）、３．５７（ａ。

３Ｍ）、３．７９　（ａ　、　３Ｈ）、６．８５（ｄｔ
、！＝９．０及び２．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．９０　（ｄ
　、　Ｊ＝８．３Ｈｇ、ＩＨ）、７．１６　（ｄ　、　
Ｊ＝２．４Ｈｚ　、　ＩＨ）、７．２５　（ｄｄ　、Ｊ
＝８．３及び２．４　Ｈｚ　、　Ｉ　Ｈ）、７．５２（
ｔｘｔ、！＝９．０及び２．４Ｈｚ　、　２ｆｆ）元素
分析（Ｃ，、Ｈ，ＮＯ，（３２９，４）として）ＣＨＮ 計算値　６５．６４％　　５．８１％　　４．２５％実
測値　６５．６６％　　５．８４％　　４．２６％ＩＲ
（ＫＢｒ）ニジｍ５ｚ３１７０．２９９５．１７０２．
１６０２．１５１２．１４２０．１２４８．１１７８．
１０２１．９５２．８３０ｃｍ−’ 上記３により得られたケトオキシム５．Ｏ５’（１５，
２ミリモル）を酢ｆＲ，１４０ｔｎｔに溶かし、亜鉛１
０Ｆ（０，０２規定塩酸で５分洗滌し、水洗したもの）
を水冷下で徐々に加えた。得られた混合物を室温に戻し
１時間攪拌後セライト濾過した。

濾液の酢酸を溜去し、残渣に酢酸エチルを加えて生成物
を結晶化させた。−晩放置後濾集し、得られた粉末をエ
タノールから再結晶し、白色粉末を得た。

収量　３．８４ｔ（８０％） Ｒｆ！値　０．３Ｂ 融点　１９１．５−１９２．５℃ ＮＭＲ（ＣＤ、ＯＤ）：δ２．４１　（ｔ　、　Ｊ＝６
．８Ｈｚ　、２Ｈ）、２．８５　（ｔ　、　！＝６．８
Ｈｚ、２Ｈ）、３．７８（ａ。

６Ｈ）、５．６３　（ａ　、　ＩＨ）、６．８８−６．
９８　（ｍ。

１ｆｆ）、６．９３　（ｄ　、　！＝８．７Ｈｚ　、　
２Ｈ）、７．１２−７．３２（ｍ、２Ｈ）、７．２９　
（ｄ　、　Ｊ＝８．７　Ｈｚ　。

２Ｈ） ＪＲ（ＫＥｒ）　　ニジｔｎａｚ３６４０　、３３７０
、２９４５．１６３５．１６１０．１５６５．１５３２
．１５１０．１４００．１２４５．１０３４ｃｍ＝’Ｍ
　Ｓ、　　３１５．１４７６　（ＣｔａＨｔｔＡ’Ｏｎ
の計算値は３１５．１４７０　） 元素分析（Ｃ，、Ｈ，、Ｎｏ４・１，５　Ｈ，０（３４
２，４）として）ＣＨＮ 計算値　６３．１４％　　７．０６％　　４．０９％実
測値　６３．３８％　　７．０４％　　３．８８％上記
実施例の出発物質である３−（４−メトキシフェニル）
プロピオン酸から本発明化合物である３−（α−アミノ
−４−メトキシベンジル）−４−メトキシフェニルプロ
ピオン酸までの合成経路を構造式で示すと次のようにな
る。

収率　９８％ 文献既知物質 次に、上記の本発明化合物を用いて、以下に記すように
まず３−（α−ｐｍ＠ｅ−アミノー４−メトキシベンジ
ル）−４−メトキシフェニルプロピオン酸を合成し、こ
れを用いてアミド前駆体樹脂であるレジンＡ及びレジン
Ｂを製造した。

酸の合成 トリエチルアミン０．８８ｄ←妾寺＝１を含むＤＭＦ５
ゴ中に、上記４により得られた３−（α−アミノ−４−
メトキシベンジル）−４−メトキシフェニルプロピオン
酸１．ＯＦ　（３，１７ミリモル）を溶かし、この溶液
にＦｍｏａ　−Ｏ８ｓ　１．２８　？÷＋ｉ台者→を加
えて得られる混合物を室温で１時間攪拌した。次いで溶
媒を溜去し、残渣に５％クエン酸及びエーテルを加えた
。得られた粉末をメタノール及びエーテルから再結晶し
た。

収量　１．７０ｒ（収率１００％） 融点　１７４−１７５℃ Ｒｆ！値　０．７３ 元素分析・　（Ｃｓ５ＨｓＩＮＯａ　（５３７，６）と
して）ＣＨＮ 計算値　　７３．７２％　　５．８１％　２．６１％実
測値　　６３．４７％　　５．８３％　２．５９％上記
５により得られた酸７７４ダ（１，４４ミｌＪモル）の
溶液にＤＣＣ３２６■←を十由懺→及びＨＯＢｇ　　２
４３ダ←←手当虐→を加えて得られる混合物を、室温で
１時間攪拌し、次いで濾別した。

予めＤＭＦで洗ったアミノメチルポリスチレン樹脂（ア
ミノ基含有ｉｏ、７２ミリモル／９）１ｔと濾液とを混
合した。この樹脂がカイザー試験で陰性になるまで、′
ｃｉ液と樹脂との懸濁液を１０時間穏やかに振とうした
。アミノ基を完全にマスキングするために、上記樹脂を
、２０％無水酢酸／ＤＭＦ（２０ｍ）溶液で更に１時間
処理した。処理後の樹脂を捷ずＤＭＦで洗い、続いて塩
化メチレンで洗う操作を２回行い、真空内で乾燥した。

収量は１．２８ｆであった。ポリペプチドアミド合成に
使用する前に、上記した操作によって得られた樹脂をピ
ペリジン２０％含有のＤＭＦ溶液で５分間処理した。Ｄ
ＭＦの使用量は樹脂２００ｍｇ当り５−である。この処
理を、更にもう一度１５分間行い、処理後の樹脂をＤＭ
Ｆ５−で洗う操作を５回行った。

上記５により得られた酸２６９１Ａ９（０，５ミリモル
）をＤＭＦ５ゴに浴かした溶液にＤＣＣＩ　０３■和を
孝曲嘴→及びＨＯＢｔ　７７１１ｉ９←井参寺養ヰを加
えて得られる混合物を、室温で１時間攪拌し、次いで濾
別した。予めＤＭＦで洗ったＨ−１１ａ−ＰＡＭ−ポリ
スチレン樹脂（Ｉｌ−の含有量０．フロミリモル／ｒ）
１３９■と濾液とを混合した。この樹脂がカイザー試験
で陰性になるまで、濾液と樹脂との懸濁液を３時間像と
うした。次に、この樹脂をＤＭＦで洗い、更に、２０％
無水酢酸／ＤＭＦ（５ｍｌ）溶液で１時間処理した。処
理後の樹脂をまずＤＭＦで洗い、続いて塩化メチレンで
洗う操作を３回行い、真空乾燥した。収量は１８５■で
あった。ポリペプチドアミド合成に使用する前に、上記
した操作によって得られた樹脂をピペリジ７２０％含有
のＤＭＦ溶液で５分間処理した。

ＤＭＦの使用量は樹脂２００■当り５ｄである。

この処理を、更にもう一度１５分間行い、処理後の樹脂
をＤＭＦ５ｔｄで洗う操作を５回行った。

上記した本発明化合物からレジンＡ又はレジンＢの合成
経路を構造式で示すと次のようになる。

このようにして得られた樹脂の特性を５Ｆｆｌ＆。６−
アミノ酸を便用することにより調べた。以下にレジンＢ
からフェニルアラニンを分離した場合を示す。

〔試験例〕フェニルアラニンのレジンＢからの分離 レジンＢをレジンＢのＦ％ＯＢ誘導体１８５ダ（０，１
ミリモル）から製造し、これをＤＭＦ５ｗｔに懸濁させ
た。この懸濁液にＦｍｏ　ａ　−Ｐ　ｈ　ａ　−０−Ｐ
ｆｐ（ペンタフルオロフェニルの略）０．５ミリモル及
びＨＯＢｔ　Ｏ，５４１７モルを加え、１時間振とうし
た。

続いて、当該樹脂をＤＭＦ５ｗｔで５回洗い、次いでＤ
ＭＦＳｔ中に２０％のピペリジンを含む溶液で５分間処
理した。更に、ＤＭＦ５−中に２０％のピペリジンを含
む新たな溶液で１５分間処理した。処理後の樹脂をＤＭ
Ｆ５−で５回、及び塩化メチレン５ばて２回洗って真空
乾燥した。収量は１７９Ｍ９であった。得られた乾燥樹
脂を５■とり、１モルのチオアニソールをＴＦＡ−ｓ−
フレソール（１００μｔ−１０μｔ）に溶解した溶液中
で、２８℃の温度下６０分間処理した。ＴＬＣ（薄層ク
ロマトグラフィー）によってフェニルアラニンアミドが
遊離したことを確認した。処理後の樹脂を６Ｎ塩酸で加
水分解した後、フェニルアラニンの有無をアミノ酸分析
機で調べたところ、フェニルアラニンは検出されなかっ
た。これはフェニルアラニンが樹脂からほぼ完全に分離
し九ことを示すものであり、レジンＢがアミノ酸に対す
るアミド前駆体として有用であり、チオアニンールを含
む上記の溶液が分離試薬として優れていることを確認し
た。

次に、本発明化合物を含む樹脂がポリペプチドアミドの
固相合成に有用であることを、３種類の生理活性ポリペ
プチドの合成によって明らかにした。

なお、これらの生理活性ポリペプチドアミドの精製に用
いた高性能液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ　　ｐｅ
ｒｆｏｒｍａｎｃｅ　　１ｉｑｕｉｄ　　ｅ五ｒｏｍａ
ｔｏｇｒａ−ｐｈＷ、以下（”ＨＰＬＣＪと略す。）は
、Ｗａｔｇｒｓ２０４ｃｏ情ｐａｃｔ　ｍｏｄｅｌ　で
行った。′！九〉Ｆ常ｏｎによる固相合或はアサ−トン
（Ａｔｈｍｒｔｏ％）らによる方法に従って行った（Ａ
ｔｈａｒｔｏ＊、　Ｅｌ、　Ｅｒａｖｎ。

Ｅ、、　５ｈｅｐｐａｒｄ、　Ｒ，Ｃ，：Ｊ、　Ｃｈａ
ｍ、　Ｓｏｔ、、　Ｃｈａｎ。

Ｃａｍ５ｓｓ、　、　１９　ｇ　１．１１５１　）。

〔製造例１〕　テトラガストリン（Ｔａｇｒａｇａｓｔ
−？（爲、　Ｈ−Ｔｒｐ−Ｋｍ　ｔ−Ａｍｐ−Ｐｈａ−
ＮＨ，）の製造レジンＢ１８５１に９（０，１ミリモル
）を用いて、アサ−トンらの方法に従いＦ、・Ｃ固相合
成を行った。アミン基の保護基であるｐｍｏｅを除去す
るために、２０％ピペリジン／ＤＭｐ（ｓ−）溶液でま
ず５分間、更に新しい同じ溶液で１５分間処理し、次い
でＤ　Ｍ　Ｆ　５　ｒｙｅを用いて洗う操作を５回行っ
た。縮合操作として、レジンＢをＤＭＦ５−中に懸濁さ
せ、対応するＦお。、アミノ酸のＰｆｐエステル及びＨ
ＯＢｔを加えてから呈温で６０分間振とうし、続（・て
ＤＭＦ５−で洗う操作を５回行った。

これによって、Ｈ−Ｔｒｐ−Ｍａ　ｔ−Ａｓｐ（ＯｌＢ
ｓ）　−Ｐｈａ−レジンＢ２３９■が得られた。６Ｎ塩
酸を用いた加水分解による氷解物中のアミノ酸の比率は
次の通りであった。

Ａｓｐ　１．１２、Ｍｍｔ＋Ｍｇｔ（０）　０．５２、
ＰＰＬ−１，１０、Ｔｒア検出されず、Ｉ！ｓ１．ｏｏ
（レジンＢに結合している内部標準物質） このようにして得られたポリペプチド樹脂１００■（４
１，８マイクロモル）を、ＥＤＴ（１，２−エタンジチ
オール）２９３μを及び犠−クレゾール２９３μｔの存
在下で１モル濃度のチオアニンール／ＴＦＡ溶液５ｗｔ
と２８℃で１時間反応させた。反応後、樹脂を濾別して
ＴＦＡで洗った。濾液と上記の洗液とをいっしょにし、
ＴＦＡを真空下で溜去し、残渣に乾燥エーテルを加えた
。得られた粉末を遠心分離により集め、エーテルで洗っ
た。収量は１４．’ｌりであった。一方、上記の濾別し
た樹脂を６Ｎ塩酸で加水分解したところ、ＰｈａとＩｔ
−の比率は０．３９　：　１．００であった。これは、
上記の反応条件によって約６１％のペプチドが樹脂から
分離したことを示すものである。こ５して得られ念未精
製ペプチドをＨＰＬＣに工って精製した。ＨＰＬＣで使
用したカラムはＣｏａｔｎｏｓｉ１５Ｃ１８カラムｓＴ
　（４，６Ｘ　１５０ｗｔ）で、上記ポリペプチドの分
離精製は（１１％ＴＦＡ水溶液に加えたアセトニトリル
の傾斜溶離法（アセトニトリルの濃度１０−６０％、溶
離時間５０分間）により、流速１ｍ／分で行った。精製
ポリペプチドの保持時間は３７．２分で、合成テトラガ
ストリンの保持時間と一致し友。精製したテトラガスト
リンの収量は１０．２１ｎ９（収率４１％）であった。

４規定ＭＳＡ（メタンスルホン酸）溶液による加水分解
後のアミノ酸の比率は次の通りであった。

Ａｓｐ　１．０１、Ｍａｔｏ、７２、Ｐｈａ　１．００
．　Ｔｒｐｏ、８２　（Ｐｈａの回収率７６％） 〔製造例２〕　ニューロメゾインＢ（Ｎｍｕデ０惧−ｄ
ｉ％Ｂ）の製造 レジンＢ１８５１Ｑ（アミノ基含有量０．１ミリモル）
を用いて、製造例１と同様にＦｍｏｃ固相合成によって
Ｈ−Ｇｌｙ−Ａｓｓ−Ｌａｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｔ五デ
（ｔＢｔ）−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（Ｂｏｇ）−Ｐｈａ−Ｍａ
ｔ−レジンＢ２９１１ｎ９を合成した。得られたポリペ
プチド樹脂１００Ｍ９を、ＥＤＴ及び溝−クレゾール各
々２９５μｔからなる混合物の存在下水冷浴中にて１モ
ル濃度のＴＭＳＢｒ（）リメチルシリルプロマイド）−
チオアニンール／ＴＦＡ溶液で１時間処理した。

処理後の樹脂を濾別し％ＴＦＡ５−で洗った。濾液とＴ
ＦＡの洗液をいっしょにしてＴＦＡを真空下で溜去し、
残渣に乾燥エーテルを加えた。その結果得られた粉末を
遠心分離によって集め、５０％酢酸を用いて凍結乾燥し
た。収量は２０．３ダであった。上記した処理後の樹脂
におけるＩｔ−とｐｈ−の比率は１．００　：　０．２
８であった。これは、樹脂から分離して生成したペプチ
ドの収率が７２％であることを示している。こうして得
られた未精製ポリペプチドをＨＰＬＣによって精製した
。

ＨＰＬＣで使用したカラムはＣｏａｍａａｉｌ　５Ｃ１
８ＳＴカラム（４，６Ｘ　１５０ｗｎ）で、上記ポリペ
プチドの分離精製は０．１％ＴＦＡ水溶液に加えたアセ
トニトリルの傾斜溶離法（アセトニトリルの濃度１０−
６０％、溶離時間５０分間）により、流速１−７分で行
った。精製ポリペプチドの保持時間は３２．９分で、ニ
ューロメゾインＢの真正なサンプルの保持時間と一致し
た。収量は１４．１９であった（樹脂に結合したＭａｔ
に基づく収率は３６％）。４規定ＭＳＡ溶液による加水
分解後のアミノ酸の比率は次の通りであった。ＡＪｊｌ
、０７．５ｔｒ１．０３、Ｇ１１２．１７、Ａｌａｌ、
１５、Ｍａｔｏ、８９、Ｚ、ａｓｌ、０６、Ｐｈａ　１
．００．　Ｈ４ｓ　１．００、Ｔｆｉｐ　０．８０　（
Ｐｈａの回収率８３％）Ｃｆｆ造例３）　　アルギニン
バソプレッシン（Ａｒｇ−ＶａＨｐｒａａａｉｓ）の製
造 レジ７Ｂ　１７８ｍ９（０，１ミリモル）を用いて、製
造例１と同様にＦｍｏＩＩ固相合成によってＨ−Ｃｙａ
ＣＡｃｍ）　Ｔｙｓ（Ｂｓ）−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌ
ｙ−レジンＥ　（Ａ６滉はアセトアミドメチル、Ｍｔｒ
は４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスル
ホニルの略）２８０〜を合成した。得られたポリペプチ
ド樹脂のアミノ酸比率は次の通りである。

ＡａｐＯ，８４、Ｇｌｕ　Ｏ，８３、Ｇ（ｖｌ、００、
ＴｙｒＯ，７１，Ｐｒｏ　Ｏ，８６、Ｐｈａ　０１８１
、Ａｒｇｏ、８３このポリペプチド樹脂ｘｏＯＭ９（２
６，ｓマイクロモル）をＴＦＡ５−に懸濁し、アニｙ−
ル０．　ｓ−の存在下水冷浴中にてトリフルオロ酢酸タ
リウム（Ｔｔ（ＣＦｓＣＯＯ）ｓ）　　７９．５マイク
ロモルと６０分間反応させた。次に、各々１モル濃度の
ＴＭＳＢｒ及びチオアニンールと更に６０分間反応させ
た。

反応後の樹脂をＴＦＡ５−で洗う操作を３回行なった。

濾液及びＴＦＡ洗液をいっしょにして、ＴＦＡ及びＴＭ
ＳＢｒを真窒溜去した。残渣に乾燥エーテルを加え、得
られた粉末は水により凍結乾燥した。この乾燥粉末をま
ずゲル濾過によって精製した。使用したカラムはＳａｐ
ｋａｄａｍ　Ｇ　−１０（１，８Ｘ７０ｕ）で、０．２
規定酢酸を用いて溶離した。ゲル濾過による精製は、２
８０ｓｓＫおけるＵＶ吸収を測定することによって、望
ましいフラクションである２１乃至３５番目のフラクシ
ョン（各々３−）をいっしょにし、凍結乾燥を施して溶
媒を除去することにより行った。この結果１３．５■の
粉末が得られた。樹脂に結合しているＧｌｌに基づく、
ポリペプチド粉末の収率は４５％であった。このように
して得られた粉末を更にＨＰＬＣによって精製した。Ｈ
ＰＬＣで使用したカラムはＣｏａｍｏａｔｌ　５Ｃ１８
カラム（１，０Ｘ２５１）で、上記ポリペプチドの分離
精製は０．１％ＴＦＡ水溶液に加えたアセトニトリルの
傾斜溶離法（アセトニトリルの濃度１５−３０％、溶離
時間４８分）Ｋより、流速１．Ｂｓｇ／分で行った。精
製し念ポリペプチドの保持時間は２０．５分で、アルギ
ニンバソプレッシンの真正なサンプルの保持時間と一致
した。収量は８．８１！Ｉ９であった（樹脂に結合した
Ｇｌｌに基づく総括収率は３０％）。６規定塩酸による
加水分解後の氷解物におけるアミノ酸の比率は次の通り
であった。

Ａｓｐ　Ｏ，９７、ＧＪｓＯ，９６、ＧＪｙｌ、００、
ＣｙａＯ０４８、７’ｙｒ０．８９、　Ｐｈａ　　Ｏ，
９７％　Ａｒｇ　　Ｏ，９０゜Ｐｒｏ　０．９０　（Ｇ
ｌＨの回収率１００％）〔発明の効果〕 本発明によるベンズヒドリルアミン誘導体を含む樹脂を
用いてポリペプチドアミドのｐｍｏｃ固相合成を行うこ
とにより、ポリペプチドアミドの収率が高くなるととも
に、ベンズヒドリルアミンの＝Ｗ′ Ｃ−Ｎ結合が従来のものよりも酸で　　　やすい九め当
該ポリペプチドをその保持体である樹脂から効率よく回
収できるという効果を本発明は有する。したがって、ポ
リペプチドアミドからなる生理活性物質等の製造技術分
野において、本発明は多大の貢献をなすことが期待され
る。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１及びＲ＿２はそれぞれ独立にＣ＿１〜Ｃ
   ＿９の低級アルキルを示す。ｎは１〜４の整数を、ｍは
   １又は２をそれぞれ示す。） で表されるベンズヒドリルアミン誘導体。
2. （２）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２、ｎ及びｍは前記と同じものを
   意味し、Ｆ＿ｍ＿ｏ＿ｃは９−フルオレニルメチルオキ
   シカルボニル基を示す。） で表されるベンズヒドリルアミン誘導体。
3. （３）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２、ｎ及びｍは前記と同じものを
   意味する。） で表されるベンゾフェノン誘導体。