CN105524050A - 抗病毒化合物的固体形式 - Google Patents

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Abstract

本发明制备了抗-HCV化合物(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯(化合物I)的无定形和晶形的固体形式，并且在固态中表征：

Description

抗病毒化合物的固体形式
本申请是申请日为2013年6月4日、申请号为201380032193.2，以及发明名称为“抗病毒化合物的固体形式”的中国发明专利申请的分案申请。
相关申请的交叉引用
本申请要求2012年6月5日提交的美国临时申请序列号61/655,934，2013年1月31日提交的美国临时申请序列号61/759,295和2013年3月13日提交的美国申请序列号13/800,374的优先权，将这些申请的全部内容通过引用并入本文中。
背景技术
本发明总地涉及抗病毒化合物(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯的晶体固体形式，用于制备该晶体固体形式的方法以及使用其的治疗方法。
丙肝被认为是一种特征在于肝病的慢性肝脏病毒性疾病。尽管靶向肝脏的药物广泛使用并且已经显示出有效性，但毒性和其他副作用限制了它们的实用性。丙肝病毒(HCV)的抑制剂对于限制HCV感染的建立和进展以及用于HCV的诊断试验中是有用的。
化合物(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯，也称为ledipasvir，在本文中指定为化合物I，已知是有效的抗-HCV剂，如例如WO2010/132601中所述的。化合物I的合成公开于美国专利号8,088,368中。然而，任何固体晶型的化合物I迄今为止是未知的。
发明内容
本发明通过提供化合物I的晶形、盐和溶剂化物满足了这些和其他需求。本发明还提供了化合物I的无定形。本发明还提供了包含化合物I的无定形和晶形的药物组合物。本发明还提供了用于制备该化合物I的无定形和晶型的方法及其在HCV治疗中的使用方法。
因此，一个实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯双丙酮溶剂化物(化合物I型I)。化合物I型I通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：6.8、12.5和19.8°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
另一个实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯单丙酮溶剂化物(化合物I型II)。化合物I型II通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.2、12.7和20.5°2θ±0.2°2θ,，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
另一个实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯(化合物I型III)。化合物I型III通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.4、14.2和21.6°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
再另一个实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯D-酒石酸盐(化合物ID-酒石酸盐)。化合物ID-酒石酸盐通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：4.0、10.3和19.7°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
另一个实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙酸乙酯溶剂化物(化合物I型IV)，化合物I型IV通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：15.1、17.2和21.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
再另一个实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙酸乙酯溶剂化物(化合物I型V)，化合物I型V通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：14.4、15.3和17.4°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。化合物I型V是部分乙酸乙酯溶剂化物。
另一个实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙酸异丙酯溶剂化物(化合物I型VI)，化合物I型VI通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：5.6、13.3和21.1°2θ±0.2°2θ,，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
根据其他实施方案，本发明提供了晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙酸甲酯溶剂化物(化合物I型VII)，化合物I型VII通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：11.0、13.8和22.2°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
再另一个实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯(化合物I型VIII)，化合物I型VIII通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：9.4、15.5和17.5°2θ±0.2°2θ，如在 波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
一个实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲酸乙酯溶剂化物(化合物I型IX)，化合物I型IX通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：13.8、19.2和22.0°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
另一个实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙腈溶剂化物(化合物I型X)，化合物I型X通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.4、6.9和10.3°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
再进一步的实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯四氢呋喃溶剂化物(化合物I型XI)，化合物I型XI通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、6.3和9.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
另一个实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲乙酮溶剂化物(化合物I型XII)，化合物I型XII通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、6.4和20.6°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
再另一个实施方案是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯四氢呋喃溶剂化物(化合物I型XIII-THF)，化合物I型XIII-THF通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、3.5和7.0°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。化合物I型XIII-THF是部分THF溶剂化物。
可替换的是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲乙酮溶剂化物(化合物I型)XIII-MEK，该化合物通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、3.5和7.0°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。化合物I型XIII-MEK是部分MEK溶剂化物。
在另一个实施方案中，本发明提供了晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲基叔-丁醚溶剂化物(化合物I型XIV)，化合物I型XIV通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：6.9、10.3和22.4°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
再另一个实施是晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯(化合物I型XV)，化合物I型XV通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.1、12.8和20.8°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
再另一个实施是无定形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯，通过约160℃的玻璃化转变温度(Tg)来表征。
再另一个实施方案是包含通式I的晶型或无定形和药物学上可接受赋形剂的药物组合物。
一个实施方案是包含化合物I型I、化合物I型II、化合物I型III和化合物ID-酒石酸盐中的至少两种的组合物。
另外，在一个实施方案中，本发明提供了一种用于治疗患有丙肝病毒(HCV)的患者的方法。该方法包括将治疗有效量的通常如上所述的无定形化合物I、化合物I型I-XV和化合物ID-酒石酸盐中的任一种给药于患者。
另一个实施方案，可选结合本文中所述的任何其他实施方案，是化合物I型I-XV和化合物ID-酒石酸盐中的任一种用于治疗患有HCV的患者的用途。
再在其他实施方案，可选结合本文中所述的任何其他实施方案，是化合物I型I-XV和化合物ID-酒石酸盐中的任一种在制造用于治疗患有HCV的患者的药物中的用途。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于制备化合物I型I的方法。该方法包括将无定形化合物I接触丙酮的步骤，由此形成化合物I型I。
再另一个实施方案是用于制备化合物I型II的方法。该方法包括将化合物I型I部分去溶剂化的步骤，由此形成化合物I型II。
另一个实施方案是用于制备化合物I型III的方法。该方法包括将化合物I型II加热至约30-120℃，由此形成化合物I型III。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于制备如上所述的化合物ID-酒石酸盐的方法。该方法包括将D-酒石酸接触溶剂中的溶液化合物I的步骤，由此形成化合物ID-酒石酸盐。
还提供了用于制备化合物I型IV的方法。该方法包括将化合物I型III接触乙酸乙酯的步骤。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于制备化合物I型V的方法。该方法包括将化合物I型IV去溶剂化的步骤。化合物I型V是部分乙酸乙酯溶剂化物。
另一个实施方案是用于制备化合物I型VI的方法。该方法包括将化合物I型III接触乙酸异丙酯的步骤。
再另一个实施方案是用于制备化合物I型VII的方法。该方法包括将化合物I型III接触乙酸甲酯的步骤。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于制备化合物I型VIII的方法。该方法包括将化合物I型VII去溶剂化的步骤。
一个实施方案是用于制备化合物I型IX的方法。该方法包括将化合物I型III接触甲酸乙酯的步骤。
另一个实施方案是用于制备化合物I型X的方法。该方法包括将化合物I型III接触乙腈的步骤。
再另一个实施方案是用于制备化合物I型XI的方法。该方法包括将化合物I型III接触四氢呋喃的步骤。
另外，本发明提供了用于制备化合物I型XII的方法。该方法包括将化合物I型III接触甲乙酮的步骤。
另一个实施方案是用于制备化合物I型XIII-THF的方法。该方法包括将化合物I型XI去溶剂化的步骤。化合物I型XIII-THF是部分THF溶剂化物。
此外，本发明提供了用于制备化合物I型XIII-MEK的方法。该方法包括将化合物I型XII去溶剂化的步骤。化合物I型XIII-MEK是部分MEK溶剂化物。
在再另一个实施方案中，本发明提供了用于制备化合物I型XIV的方法。该方法包括将化合物I型VIII接触甲基叔-丁醚的步骤。
此外，本发明提供了用于制备化合物I型XV的方法。该方法包括将化合物I型X去溶剂化的步骤。
在再另一个实施方案中，本发明提供了如实施例10中所列的用于制备无定形化合物I的方法。
附图简述
图1是分别是无定形化合物I(下曲线)和化合物I型I(上曲线)的XRPD模式。
图2是化合物I型I的X-射线粉末衍射模式。
图3是化合物I型I的差示扫描量热法(DSC)曲线。
图4是化合物I型II的X-射线粉末衍射模式。
图5是化合物I型II的差示扫描量热法(DSC)曲线。
图6比较了无定形化合物I(垂直纹)、化合物I型II(水平纹)和化合物I的部分无定形盐酸盐(对角纹)在0.9MLux-hrs下的光暴露过程中的光降解行为。最左边的条组表示化合物I的这三种型的HPLC％AN的整体下降。中间的条组表示从化合物I的每个型形成的主要光降解杂质的形成。最右边的条组相似地表示了在相对停留时间(RRT)1.67下在HPLC上洗提的次要光降解杂质的形成。
图7是化合物I型III的X-射线粉末衍射模式。
图8是化合物I型III的组合差示扫描量热法图(DSC；下曲线)和热解重量分析(TGA；上曲线)。
图9是化合物ID-酒石酸盐的X-射线粉末衍射模式。
图10是化合物ID-酒石酸盐的组合差示扫描量热法图(DSC；上曲线)和热解重量分析(TGA；下曲线)。
图11是比较了无定形化合物I(◆)、化合物I型II(●)、化合物I型III(■)和化合物ID-酒石酸盐(▲)之间的溶解速率的图表。
图12是比较了无定形化合物I(■)、无定形化合物I和0.1％(w/w)HPMC的混合物(□)、化合物ID-酒石酸盐(●)以及含有0.1％(w/w)HPMC的化合物ID-酒石酸盐(○)的含水样品(pH6)之间的溶解速率的图表。化合物I(■)和化合物ID-酒石酸盐(●)的图在所示的纵坐标上基本上是重叠的。
图13比较了无定形化合物I(垂直纹)、化合物I型III(水平纹)、化合物I型II(对角纹)和化合物ID-酒石酸盐(棋盘格)在1.2MLux-hrs下的光暴露过程中的光降解行为。最左边的条组表示化合物I的这四种型的HPLC％AN的整体下降。中间的条组表示从化合物I的每个型形成的主要光降解杂质的形成。最右边的条组相似地表示了在相对停留时间(RRT)1.67下在HPLC上洗提的次要光降解杂质的形成。
图14是化合物I型IV的X-射线粉末衍射模式。
图15是化合物I型IV的差示扫描量热法(DSC)曲线。
图16是化合物I型V的X-射线粉末衍射模式。
图17是化合物I型VI的X-射线粉末衍射模式。
图18是化合物I型VI的差示扫描量热法(DSC)曲线。
图19是化合物I型VII的X-射线粉末衍射模式。
图20是化合物I型VIII的X-射线粉末衍射模式。
图21是化合物I型VIII的差示扫描量热法(DSC)曲线。
图22是化合物I型IX的X-射线粉末衍射模式。
图23是化合物I型IX的差示扫描量热法(DSC)曲线。
图24是化合物I型X的X-射线粉末衍射模式。
图25是化合物I型XI的X-射线粉末衍射模式。
图26是化合物I型XII的X-射线粉末衍射模式。
图27是化合物I型XIII-THF的X-射线粉末衍射模式。
图28是化合物I型XIII-THF的差示扫描量热法(DSC)曲线。
图29是化合物I型XIII-MEK的X-射线粉末衍射模式。
图30是化合物I型XIII-MEK的差示扫描量热法(DSC)曲线。
图31是化合物I型XIV的X-射线粉末衍射模式。
图32是化合物I型XV的X-射线粉末衍射模式。
图33是化合物I型XV的差示扫描量热法(DSC)曲线。
图34是无定形化合物I(上曲线)和化合物ID-酒石酸盐(下曲线)各自的13C-固态NMR(ssNMR)谱之间的比较。
图35是无定形化合物I的调制差示扫描量热法(mDSC)曲线。
图36是无定形的化合物I的傅立叶-转换拉曼光谱(FT-Raman)。
具体实施方式
化合物(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲基(化合物I)是选择性的且有效的HCVNS5A抑制剂。
一个实施方案是化合物I的无定形。这种无定形的物理化学特性包括约160℃的高玻璃化转变温度(Tg)和用于口服剂量的合适粉末特性。因此，按照以下实施例11和12中所讨论的，使用这种形式研发了片剂。在一些情况中，为了提高的溶解性和生物利用率特性，使用无定形的药物是所需的。在其他情况中，为了提高稳定性，需要具有晶型的药物。
定义
如本发明说明书中所用的，以下词语和短语通常计划具有如下所列的含义，除了其中使用它们的内容表明是其他含义的范围。
术语“溶剂化物”是指通过化合物I和溶剂的结合形成的复合物。
术语“去溶剂化的”是指如本文中所述的溶剂化物的化合物I型，并且从其已经部分或完全去除了溶剂分子。产生去溶剂化形式的去溶剂化技术包括，但不限于，将化合物I型(溶剂化物)暴露于真空、将溶剂化物接受升高的温度、将溶剂化物暴露于蒸汽(如，空气或氮气)，或其任意组合。因此，去溶剂化化合物I型可以是无定形的，即，完全不具有溶剂分子，或部分溶剂化的，其中溶剂分子以化学计算或非化学计算含量存在。
本文中给出的任何通式或结构，包括化合物I，还用来表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记化合物具有由本文中给出的通式描绘的结构，除了一个或多个原子由具有选定的原子质量或质量数的原子替代。可以结合至本发明的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，如，但不限于2H(氘，D)、3H(氚)、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。本发明的各种同位素标记的化合物，例如，其中结合了放射性同位素的那些，如3H、13C和14C。这样的同位素标记的化合物在包括药物或基质组织分布试验或在病人放疗中的代谢研究、反应动力学研究、检测或成像技术(如，正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机化断层扫描(SPECT))中是有用的。
本发明还包括其中1至“n”个连接碳原子的氢是氘或被氘替代的化合物I，其中n是分子中的氢的数量。这样的化合物呈现出提高的代谢抵抗力并且因此给药于哺乳动物时对于提高任何化合物I的半衰期是有用的。参见，例如，Foster，“药物代谢研究中的氘同位素作用(DeuteriumIsotopeEffectsinStudiesofDrugMetabolism)”，TrendsPharmacol.Sci.5(12):524-527(1984)。通过本领域公知的方式来合成这样的化合物，例如，通过使用其中一个或多个氢原子已经被氘替代的起始材料。
本发明的氘标记的或取代的治疗性化合物可以具有提高的DMPK(药物代谢和药物动力学)特性，涉及分布、代谢和排泄(ADME)。使用重同位素(如，氘)的取代可以获得源自更高代谢稳定性的特定治疗优势，例如，提高的体内半衰期或降低剂量需求。18F标记的化合物可以用于PET或SPECT研究。本发明的同位素标记的化合物及其前药通常可以通过进行以下所述的略图或实施例和制备中公开的程序来制备，通过将容易获得的同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂。此外，使用重同位素，特别是氘(即，2H或D)的取代可以获得源自更高代谢稳定性的特定治疗优势，例如，提高的体内半衰期或降低的剂量需求或治疗指数的提高。将理解本内容中的氘认为是化合物I的取代基。
这样的重同位素(尤其是氘)的浓度可以通过同位素富集因子来限定。在本发明的化合物中，没有特意指定为特定同位素的任何原子打算用来表示该原子的任何稳定同位素。除非另外指出，将位置特意指定为“H”或“氢”时，理解该位置在其天然丰度同位素组成中具有氢。因此，在本发明的化合物中，任意特意指定为氘(D)的原子用来表示氘。
术语“治疗有效量”是指如以下限定的，给药于需要这样的治疗的哺乳动物时，足以实现治疗的含量。治疗有效量将根据待治疗的患者、患者的提供和年龄、病症的严重程序、给药方式等而改变，其可以通过本领域普通技术人员容易地确定。
除非另外指出，否则术语“约”是指±10％的范围。
此外，本文中使用的缩写具有如下的代表性含有：
化合物I的固体形式
如以上概括地描述，本发明提供了指定为型I-IV和D-酒石酸盐的化合物I的固体晶型。发明人令人惊讶地发现了这些固体晶型产生了多种优于化合物I的无定形的技术优势，例如，在本文中的工作实施例和附图中所解释的。
化合物I型I通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：6.8、12.5和19.8°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图包括在10.2,11.1,和23.8°2θ±0.2°2θ的其他峰。型I还通过基本上如图2中所示的其完整的X-射线粉末衍射图来表征。
在一些实施方案中，型I通过包括约124℃处的次吸热峰(endotherm)和约162℃处的主吸热峰的差示扫描量热法(DSC)曲线来表征。型I还通过基本上如图3中所示的其完整的DSC曲线来表征。
化合物I型II通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.2、12.7和20.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图包括在7.5,11.4,和20.0°2θ±0.2°2θ的其他特征峰。或者，型II还通过基本上如图4中所示的其X-射线粉末衍射图来表征。
在一些实施方案中，型II通过包括约130℃处的吸热峰的DSC曲线来表征。型II还通过基本上如图5中所示的其完整的DSC曲线来表征。
化合物I型III通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.4、14.2和21.6°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。型III的衍射图包括在8.3,15.0,和20.4°2θ±0.2°2θ的其他特征峰。型III还通过基本上如图7中所示的其完整的X-射线粉末衍射图来表征。
在一些实施方案中，型III通过包括约176℃处的吸热峰的DSC曲线来表征。或者，型III还通过基本上如图8中所示的其完整的DSC曲线来表征。
晶体化合物ID-酒石酸盐通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：4.0、10.3和19.7°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。其他特征峰发生在9.1,12.7,和24.0°2θ±0.2°2θ。或者，化合物ID-酒石酸盐还通过基本上如图9中所示的其完整的X-射线粉末衍射图来表征。
在一些实施方案中，化合物ID-酒石酸盐通过包括约221℃处的吸热峰的DSC曲线来表征。或者，化合物ID-酒石酸盐还通过基本上如图10中所示的其完整的DSC曲线来表征。
化合物I型IV通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：15.1、17.2和21.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。其他特征峰发生在5.6,13.5,和25.8°2θ±0.2°2θ。化合物I型IV还进一步通过基本上如图14中所示的XRPD衍射图来表征。
或者，化合物I型IV通过包括约167℃处的吸热峰的差示扫描量热法(DSC)曲线来表征。化合物I型IV还通过基本上如图15中所示的其完整的DSC曲线来表征。
化合物I型V通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：14.4、15.3和17.4°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图进一步包括8.6,11.8,和18.9°2θ±0.2°2θ的峰。化合物I型V还通过基本上如图16中所示的XRPD衍射图来表征。
化合物I型VI通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：5.6、13.3和21.1°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图进一步包括13.8,14.8,和16.9°2θ±0.2°2θ的峰。化合物I型VI还通过基本上如图17中所示的其完整的衍射图来表征。
或者，化合物I型VI通过包括约168℃处的吸热峰的差示扫描量热法(DSC)曲线来表征。此外，型VI还通过基本上如图18中所示的其完整的DSC曲线来表征。
化合物I型VII通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：11.0、13.8和22.2°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图进一步包括17.0,19.0,和19.4°2θ±0.2°2θ的峰。化合物I型VII还通过基本上如图19中所示的XRPD衍射图来表征。
化合物I型VIII通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：9.4、15.5和17.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图进一步包括14.6,12.2,和18.8°2θ±0.2°2θ的峰。化合物I型VIII还通过基本上如图20中所示的XRPD衍射图来表征。
或者，化合物I型VIII通过包括约171℃处的吸热峰的差示扫描量热法(DSC)曲线来表征。此外，型VIII还通过基本上如图21中所示的DSC曲线来表征。
化合物I型IX通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：13.8、19.2和22.0°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图进一步包括8.2,11.0,和17.1°2θ±0.2°2θ的峰。化合物I型IX进一步通过基本上如图22中所示的XRPD衍射图来表征。
或者，化合物I型IX通过包括约1771℃处的吸热峰的差示扫描量热法(DSC)曲线来表征。此外，型IX还通过基本上如图23中所示的DSC曲线来表征。
化合物I型X通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.4,6.9,和10.3°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图进一步包括11.2,20.0,和22.4°2θ±0.2°2θ的峰。化合物I型X进一步通过基本上如图24中所示的XRPD衍射图来表征。
化合物I型XI通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2,6.3,和9.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图进一步包括19.1,20.6,和22.5°2θ±0.2°2θ的峰。化合物I型XI进一步通过基本上如图25中所示的XRPD衍射图来表征。
化合物I型XII通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、6.4和20.6°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图进一步包括9.6,18.1,和22.5°2θ±0.2°2θ的峰。化合物I型XII进一步通过基本上如图26中所示的XRPD衍射图来表征。
化合物I型XIII-THF通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、3.5和7.0°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图进一步包括8.6,12.1,和19.8°2θ±0.2°2θ的峰。化合物I型XIII-THF还通过基本上如图27中所示的XRPD衍射图来表征。
或者，化合物I型XIII-THF通过包括约155℃处和173℃处的吸热峰的差示扫描量热法(DSC)曲线来表征。此外，型XIII-THF还通过基本上如图28中所示的DSC曲线来表征。
化合物I型XIII-MEK通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、3.5和7.0°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图进一步包括8.6,12.1,和19.8°2θ±0.2°2θ的峰。化合物I型XIII-MEK还通过基本上如图29中所示的XRPD衍射图来表征。
或者，化合物I型XIII-MEK通过包括约155℃处和173℃处的吸热峰的差示扫描量热法(DSC)曲线来表征。此外，型XIII-MEK还通过基本上如图30中所示的DSC曲线来表征。
化合物I型XIV通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：6.9、10.3和22.4°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图进一步包括3.4,11.2,和20.1°2θ±0.2°2θ的峰。化合物I型XIV还通过基本上如图31中所示的XRPD衍射图来表征。
化合物I型XV通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.1、12.8和20.8°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。衍射图进一步包括9.1,10.9,和21.3°2θ±0.2°2θ的峰。型XV另外通过基本上如图32中所示的XRPD衍射图来表征。
或者，化合物I型XV通过包括约180℃处的吸热峰的差示扫描量热法(DSC)曲线来表征。此外，化合物I型XV通过基本上如图33中所示的DSC曲线来表征。
无定形化合物I通过约160℃的玻璃化转变温度(Tg)来表征。无定形化合物I不具有限定的熔点并且在高于200℃的温度下发生分解。通过动态蒸汽吸附测定其吸湿性，显示出在90％相对湿度下最大5.4％的重量增加。其在任何湿度水平下没有经历水分诱导的相变。
或者，无定形化合物I通过基本上如图34中的上曲线所示的13C-固态NMR(ssNMR)谱来表征。
或者，无定形化合物I通过包括约160℃的玻璃化转变温度的差示扫描量热法(DSC)曲线来表征。无定形化合物I还通过基本上如图35中所示的其完整的DSC曲线来表征。
或者，无定形化合物I通过包括939cm-1处和1552cm-1处的傅立叶-转换拉曼(FT-Raman)谱来表征。无定形化合物I还通过基本上如图36中所示的其完整的FT-Raman谱来表征。
药物制剂
本发明的化合物I型可以与常规载体和赋形剂一起配制，所述载体和赋形剂将根据常规实践来选择。片剂将含有赋形剂、助流剂、填充剂、粘合剂等。含水制剂以无菌形式制备，并且，当打算用于通过口服给药以外的途径传送时，通常将是等渗的(isotonic)。所有药物制剂将可选含有赋形剂，如药物赋形剂手册(HandbookofPharmaceuticalExcipients)(1986)中所列的那些。合适的赋形剂包括抗坏血酸和其他抗氧化剂，螯合剂，如EDTA，碳水化物，如葡聚糖，羟基烷基纤维素，羟基烷基甲基纤维素，硬脂酸等。制剂的pH范围为约3至约11，并且更优选约7至约10。通常，以0.01微克至2克的剂量来给药化合物I型。在一个实施方案中，所述剂量将为约10微克至450微克。考虑了化合物I可以一天给药一次、两次或三次。
尽管活性成分单独给药是可能的，但优选将其呈现为药物制剂。本发明的药物制剂，用于兽医和用于人使用，均包含至少一种如上限定的活性成分，以及一种或多种为此可接受的载体和可选其他的治疗剂。载体必须是“可接受的，其含义是与制剂中的其它成分相容，并且在生理上对其接受者而言无害”。
制剂包括适用于前述给药途径的那些。制剂可以方便地在单位剂型中呈现，并且可以通过药物领域中公知的任一种方法来制备。技术和药物组合物通常在雷明顿药物科学(Remington’sPharmaceuticalSciences)(MackPublishingCo.，Easton，PA)中找到。这样的方法包括使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，通过使活性成分与液体载体或细碎的固体载体或两者均匀且密切地结合，并且如果需要，然后将产品成型，来制备药物组合物。
适用于口服给药的本发明的制剂可以呈现为分散单元，如胶囊、扁囊剂或片剂，各自含有预定含量的活性成分；呈现为粉末或颗粒；呈现为水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；或呈现为水包油型液体乳液或油包水型液体乳液。活性成分还可以作为大丸剂、药糖剂或糊剂来给药。
通过可选使用一种或多种辅助成分压制或模制来制得片剂。可以通过在合适的机器中压制自由流动形式的活性成分(如，粉末或颗粒)来制备压制的片剂，可选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂或防腐剂混合。可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末状活性成分的混合物来制得模制的片剂。片剂可选可以是包衣的或有刻痕的，并且可选配制，使得提供活性成分从其的缓慢或受控释放。
对于眼睛或其他外部组织(例如，口腔和皮肤)的给药，制剂优选作为含有活性成分的局部膏剂或霜剂来施用，所述活性成分含量为例如0.075％w/w至20％w/w包括范围为0.1％-20％w/w，以0.1％w/w递增，如0.6％w/w，0.7％w/w等的活性成分)，优选0.2％w/w至15％w/w，并且最优选0.5％w/w至10％w/w。配制于膏剂中时，活性成分可以与石蜡或水混溶性膏剂基料一起使用。或者，可以使用水包油型霜剂基料，在霜剂中配制活性成分。
如果需要，霜剂基料的水相可以包括，例如，至少30％w/w的多元醇，即，具有两个或多个羟基基团的醇，如丙二醇、丁烷1,3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG400)及其混合物。局部药物组合物可以理想地包括增强活性成分通过皮肤或其他受影响部位吸收或渗透的化合物I。这样的透皮增强剂的实例包括二甲亚砜和相关的类似物。
本发明的乳液的油相可以从已知的成分以已知的方式构成。尽管该相可以只包含乳化剂(emulsifier)(另外也称为乳化剂(emulgent))，但理想地包含至少一种乳化剂与脂肪或油或脂肪和油两者的混合物。优选，同时包括亲水性乳化剂和作为稳定性的亲脂性乳化剂。还优选同时包括油或脂肪。总之，含有或不含稳定剂的乳化剂构成所谓的乳化蜡，并且蜡与油和脂肪一起构成所谓的乳化膏剂基料，其形成霜剂药物组合物的油性分散相。
适用于本发明的制剂中的乳化剂和乳化稳定剂包括，但不限于，吐温60、司盘80、鲸蜡硬脂醇、苄醇、肉豆蔻醇、甘油单硬酯酸酯和十二烷基硫酸钠。
用于药物组合物的合适的油或脂肪的选择基于实现所需的化妆品特性(cosmeticproperties)。霜剂应当优选是不油腻、不染色且可清洗的产品，具有合适的稠度，以避免从管或其他容器中漏出。可以使用直链或支链、一元-或二元烷基酯，如二-异己二酸酯、异鲸蜡醇硬脂酸酯、椰子脂肪酸的丙二醇二酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己酯或称作CrodamolCAP的支链酯类的混合物，最后三种为优选的酯。这些可以单独或结合使用，这取决于所需的特性。或者，使用高熔点脂质，如白软石蜡和/或液体石蜡或其它矿物油。
根据本发明的药物制剂包含与一种或多种药物学上可接受的载体或赋形剂和可选的其它治疗剂一起的本发明的一种或多种化合物I型。含有活性成分的药物制剂可以是适于打算的给药方法的任意形式。当用于口服应用时，例如，可以制成片剂、糖锭、锭剂、水或油混悬浮液、乳剂、硬或软胶囊、糖浆剂或酏剂。可以根据药物组合物制造领域已知的任意方法来制备打算用于口服使用的组合物，并且这类组合物可以含有一种或多种物质，包括甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以便提供适口的制备物。在适合于片剂制造的无毒性药物学上可接受赋形剂中含有活性成分的片剂是可接受的。这些赋形剂可以为，例如，惰性稀释剂，如，例如，碳酸钙或碳酸钠、乳糖、乳糖单水合物、交联纤维素钠、聚烯吡酮、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，如，例如，玉米淀粉或藻酸；粘合剂，如，例如，纤维素、微晶纤维素、淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，如，例如，硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以不包衣或通过已知技术，包括微囊化来包衣，以便延缓在胃肠道中的崩解和吸收，且由此在较长时间段内提供持续作用。例如，可以使用延时材料，如，例如，单独或与蜡一起使用的甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。
还可以将口服使用的制剂制成硬明胶胶囊，其中将活性成分与惰性固体稀释剂(如磷酸钙或高岭土)混合，或制成软胶囊，其中将活性成分与水或油介质混合，如花生油、液体石蜡或橄榄油。
本发明的含水混悬剂在与适于含水悬浮液制造的赋形剂的混合物中含有活性物质。这类赋形剂包括悬浮剂，如，例如，羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶，以及分散或湿润剂，如，例如，天然存在的磷脂(例如，卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如，十七乙烯氧基鲸蜡醇(heptadecaethyleneoxycetanol))、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)。含水悬浮液还可以含有一种或多种防腐剂(如，例如，对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂，如，例如，蔗糖或糖精。
可以通过将活性成分悬浮于植物油(如，例如，花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(如，例如，液体石蜡)中来配制油混悬剂。口服混悬剂可以含有增稠剂，如，例如，蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可以加入如上面所列那些的甜味剂和矫味剂，以便提供适口的口服制剂。可以通过添加抗氧化剂，如抗坏血酸，对这些组合物进行防腐。
适合于通过添加水制备含水混悬剂的本发明的颗粒提供了活性成分与分散剂或湿润剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂的混合物。通过以上述公开的那些举例说明那些合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂。还可以存在其它赋形剂，例如甜味剂、矫味剂和着色剂。
本发明的药物组合物还可以为水包油型乳剂的形式。油相可以为植物油(如，例如，橄榄油或花生油)、矿物油(如，例如，液体石蜡)，或这些的混合物。合适的乳化剂包括天然存在的树胶(如，例如，阿拉伯树胶和黄蓍胶)、天然存在的磷脂(如，例如，大豆卵磷脂)、衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯类或偏酯类，如，例如，失水山梨糖醇单油酸酯，以及这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物，如，例如，聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯。该乳剂还可以包含甜味剂和矫味剂。可以使用甜味剂，如，例如，甘油、山梨醇或蔗糖来配制糖浆剂和酏剂。这类制剂还可以含有缓和剂、防腐剂、矫味剂或着色剂。
本发明的药物组合物可以为无菌可注射制剂形式，如，例如，无菌可注射的水或油混悬剂。可以根据已知技术，使用上面所述的合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬剂。无菌可注射制剂还可以为在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮剂，如，例如，在1,3-丁-二醇中的溶液，或制备成冻干粉末。在可以使用的可接受的媒介物和溶剂中有水、林格溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌固定油可以方便地用作溶剂或悬浮介质。为了这一目的，可以使用任意温和的固定油，包括合成的甘油一酯或二酯。此外，脂肪酸，如油酸，同样可以用于制备可注射制剂。
可以与载体材料组结合产生单一剂型的活性成分的量根据待治疗宿主和特定给药方式而改变。例如，打算用于口服给药于人的定时释放制剂可以包含混合了适当和便利含量的载体物质的约1至1000mg活性成分，所述载体物质的适当和便利含量可以占总组合物的约5至约95％(重量：重量)。可以制备该药物组合物以便提供可易于测量的给药用量。例如，打算用于静脉内输注的水溶液可以包含约3至500μg活性成分/毫升溶液，以便以约30mL/h的速率输注适当的体积。
适用于眼给药的制剂包括滴眼剂，其中将活性成分溶于或悬浮于合适的载体中，尤其是用于活性成分的含水溶剂中。活性成分优选以0.5％至20％的浓度存在于这样的药物组合物中，有利地0.5％至10％，特别为约1.5％w/w。
适合于在口腔中给药的制剂包括在矫味基质(通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中包含活性成分的锭剂；在惰性基质(如，例如，明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性成分的软锭剂；和在合适的液体载体中包含活性成分的漱口药。
可以用包含例如可可脂或水杨酸酯的合适基质，将用于直肠给药的制剂制成栓剂。
适合于肺内或鼻部给药的制剂具有例如约0.1至约500微米范围的粒度(包括0.1至500微米范围的粒度，以如例如0.5、1、30微米、35微米等的增量微米)，其通过经鼻道快速吸入或通过经口腔吸入给药，以便达到肺泡囊。合适的制剂包括活性成分的水或油溶液。可以根据常规方法制备适用于气雾剂或干粉给药的制剂并且可以使其与其它治疗剂(如，例如，迄今为止用于治疗或预防与HCV活性相关的病症中的化合物)一起递送。
可以将适用于阴道给药的药剂制成阴道栓剂、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂，其除了活性成分外，还含有如本领域公知的这类载体。
适用于非肠道给药的制剂包括水性和非水性的无菌注射溶液，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和赋予制剂与指定接受者血液等渗的溶质；和可以包括悬浮剂和增稠剂的水和非水的无菌混悬剂。
在单位剂量或多剂量容器中提供药物组合物，例如，密封安瓿和小瓶，并且可以将其储存在冷冻干燥(冻干)条件下，这仅需要在使用前即刻添加无菌液体载体，例如注射用水。由上述类型的无菌粉末，颗粒和片剂制备临时注射溶液和混悬液。优选的单位剂量制剂为含有如上文所述活性成分的日剂量或单位日亚剂量或其适当部分的那些。
应理解，除上面特别提到的成分外，本发明的制剂可以包括本领域中常规有关所讨论制剂类型的其它试剂，例如适用于口服给药的那些可以包括矫味剂。
本发明进一步提供了包含至少一种以上限定的活性成分和兽医载体的兽医组合物。
兽医载体是用于给药组合物目的的材料，并且可以是固体、液体或气体材料，其在兽医领域另外是惰性的或可接受的，并且与活性成分相容。这些兽医组合物可以口服、非肠道或通过任何其他所需途径给药。
还可以对本本发明的化合物I型进行配制，以提供活性成分的受控释放，以允许较低频率的给药或提高活性成分的药物动力学或毒性谱。因此，本发明还提供了为了持续或受控释放配制的包含一种或多种本发明的化合物I型的组合物。
活性成分的有效剂量至少取决于待治疗病症的性质、毒性、化合物是否是预防性地使用(较低剂量)、传送方法和药物制剂，并且将由临床医生使用常规剂量递增研究来确定。
在一个实施方案中，本发明提供了包含选自由化合物I型I、化合物I型II、化合物I型III、化合物ID-酒石酸盐、化合物I型IV、化合物I型V、化合物I型VI、化合物I型VII、化合物I型VIII、化合物I型IX、化合物I型X、化合物I型XI、化合物I型XII、化合物I型XIII-THF、化合物I型XIII-MEK、化合物I型XIV和化合物I型XV组成的组中的化合物和药物学上可接受赋形剂的药物组合物。
在另一个实施方案中，本发明提供了包含特征在于约160℃的玻璃化转变温度(Tg)的无定形(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯和药物学可接受的赋形剂的药物组合物。
在实施例11和12中讨论了化合物I型的药物制剂的代表性实施例。
使用方法
通过本领域技术人员已知的任一种公认的给药方式，以单剂量或多剂量，将本文中所述的化合物I的固体形式给药于遭受丙肝病毒(HCV)的患者。给药途径包括，例如，按引用并入的任何专利和专利申请中描述的那些，如直肠、颊、鼻内和经皮途径、通过动脉内注射、静脉内、腹膜内、非肠道、肌内、皮下、口服、局部、作为吸入剂，或经由浸渍或涂覆的装置，如支架，例如，动脉插入的圆柱状聚合物。
可以通过胶囊或肠包衣片剂等传送任一种化合物I型来进行口服给药。
还可以通过经皮传送装置(“贴剂”)来给药化合物I型。这样的经皮贴剂可以用于以受控的含量提供本发明的化合物的连续或不连续灌注。用于药剂传送的经皮贴剂的构造和使用是本领域公知的。参见，例如，美国专利号5,023,252，4,992,445和5,001,139。可以将这样的贴剂构造成用于连续、脉冲或按需传送药剂。
化合物优选配制于单位剂型中。术语“单位剂型”是指适宜作为用于人和其他哺乳动物患者的单位剂量的物理上分开的单位，每个单位含有预定含量的计算能产生所需治疗作用的活性材料。化合物通常以药物学上有效的含量来给药。
对于口服给药，每个剂量单位通常含有1mg至2g的本文中所述的化合物。然而，将理解，实际给药的化合物的含量通常将由医师根据相关的情况来决定，所述相关情况包括待治疗的病症，选择的给药途径，给药的实际化合物及其相对活性，个体病人的年龄、体重和应答，病人症状的严重程度等。
联合治疗
根据一些实施方案，待通过给药本发明中所述的化合物I型来治疗的患者可以得益于在治疗HCV中有效的或增强化合物形式的抗HCV治疗作用的其他治疗剂的治疗。用于这一目的的其他治疗剂包括，但不限于，病毒唑、
本发明的范围不受实施例中公开的特定实施方案的限制，所述实施例是用于说明本发明的少数实施方案，本发明也不受本发明范围内功能上等价的任何实施方案的限制。实际上，除了本文中显示和描述的那些以外的本发明的各种改变将是本领域技术人员显而易见的并且将落入所附权利要求的范围内。为此，应当注意到可以从所绘结构省略与这样的有机化合物公认的简化符号相一致的一个或多个氢原子或甲基，并且有机化学领域的技术人员将容易地认识到它们的存在。
实施例
实施例1：(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯双丙酮溶剂化物(化合物I型I)的制备。
称重大约15-60mg的无定形(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯(99.3％的HPLC纯度)，并且转移至装备有迷你磁搅拌棒的小瓶中。以200μL的增量加入丙酮，导致浆液的形成。使浆液在室温(～22℃)下搅拌两周，并且周期性地检查。
两周后，从小瓶取出300μL浆液的样品，转移至离心滤器(Costar，0.45微米)并且在1000rpm下离心2分钟。使用XRPD分析(PANalyticalX’PertPROX-射线粉末衍射仪)分析了湿饼形式的固体。这种衍射仪使用波长下的Cu-Kα辐射，并且其在发射模式下操作。扫描范围为2至40°2θ。在0.13°/s的扫描速度下的步长为0.008°，其产生了约5min/扫描。空气干燥小样本后，再次进行XRPD分析，以监控潮湿和干燥材料之间的衍射模式的任何变化。对饱和溶液运行热重分析(TGA)，以测定固体显示出是晶体时平衡固体在溶剂中的溶解性。
这些分析的结果表明在丙酮中搅拌～11天后，化合物I从无定形固体转化成晶体材料。如图1中所示，与丙酮溶液平衡的固体材料，过滤并且在短于1小时内温和干燥后，与无定形起始材料的宽范围晕相比，具有截然不同的XRPD模式。化合物I型I的XRPD模式显示于图2中，并且XRPD模式中的主峰及其相关的强度显示于以下的表1中。
表1.化合物I型I的XRPD模式中的主峰
峰位置(°2θ) 相对强度(％)
3.4 53.3
6.8 100.018 -->
8.8 34.4
9.3 37.7
10.2 34.8
11.0 49.7
12.5 76.8
19.8 72.7
21.6 14.4
23.8 41.6
通过晶体的偏振光显微镜(PLM)图像进一步证实了型I的结晶性。
HPLC分析显示出化合物I从无定形至型I的转化将％AN纯度从99.3％提高至99.8％。进一步的研究表明丙酮溶剂化给予了显著的杂质清除能力，因为分离型I时，结晶前具有96-97.5％AN的反应混合物上升至～99.6％AN。因此，在产生最终化合物I之前，大规模利用型I结晶来纯化粗制化合物I。
型I的差示扫描量热法(DSC)曲线显示出加热时，该晶体材料具有124.20℃处的次吸热峰，这表明丙酮从溶剂化物晶体的去溶剂化(图3)。接着去溶剂化吸热峰，存在162.43℃处的主吸热峰，这表示去溶剂化固体的熔化。型I的热重分析(TGA)曲线显示出在50-130℃的宽温度范围中12.20％的失重，这表明了型I可能具有一些与强结合的丙酮混合的松散结合的丙酮。失重量还表明了型I是双丙酮溶剂化物，因为单丙酮溶剂化物的理论丙酮含量为6.1％。
实施例2：(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯单丙酮溶剂化物(化合物I型II)的制备。
如以下更全面描述的，通过部分去溶剂化型I来制备化合物I型II。去溶剂化的方法是本领域技术人员公知的。这些包括，例如，真空的应用、延长暴露于环境条件、将型I接受升高的温度以及将型I接受气流，如空气或氮气，及其任意组合。在一些实施方案中，以上实施例1中所述的化合物I型I的制备导致可检测含量的化合物I型II的形成。因此，在这些实施方案中，可以制备型I和型II的混合物。
作为一个实例，将化合物I型I晶体在～21℃的真空下干燥5天，此后形成了化合物I型II。型II的XRPD模式与型I的截然不同，如图4中所示。XRPD模式中的主峰及其相关强度显示于以下的表2中。
表2.化合物I型II的XRPD模式中的主峰
峰位置(°2θ) 相对强度(％)
7.5 36.9
9.3 34.8
11.4 55.6
12.2 94.6
12.7 59.019 -->
13.4 35.4
14.1 22.5
14.9 17.2
17.8 29.3
18.6 17.5
20.0 58.7
20.5 100.0
22.7 31.0
26.2 26.5
型II的DSC曲线表明了130.27℃处的一个宽吸热峰，这表示丙酮从溶剂化晶体的去溶剂化以及在相同温度范围下熔化(图5)。型II的TGA曲线显示出在70-150℃的宽温度范围中的7.7％失重，这表明了型II具有一些与强结合的丙酮混合的松散结合的丙酮。失重量还表明了型I是单丙酮溶剂化物，因为丙酮的单溶剂化物的理论丙酮含量为6.1％。TGA和DSC数据都显示出型II对于热应力具有相当稳定的结构。
与无定形化合物I和化合物I的部分无定形的HCl盐相比，型II令人惊讶地呈现出增强的光稳定性。因此，在0.9MLux-hrs的含量中光暴露型II、无定形化合物I和部分无定形化合物IHCl盐的分开样品。样品的HPLC分析比较了每种样品中光降解产物的含量。如图6中所示，最左边的条组描绘了上述三种不同固体形式的化合物I的HPLC％AN的整体下降。例如，化合物I的型II在这个实验中产生了最低(2.24％AN)量的光降解。
中间组和最右边的条组描绘了化合物I的三种固体形式光暴露后形成的两种主要光降解杂质的含量。这些比较证明了整体上，型II在比较的三种形式中呈现出最佳的光稳定性。
实施例3：(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯(化合物I型III)的制备。
尽管型II给予了令人惊讶的优于无定形化合物I的优势，但在其结构中仍然具有显著含量的紧密结合的丙酮。这个实施例的目的是破坏溶剂化物并产生无水的晶型。
因此，将型II晶体加热至完全干燥或在～115℃下去溶剂化，这导致了第三种晶体形式，型III的发现。
通过可变温度XRPD实验来揭示型III的形成。在这个实验中，从25℃开始以10℃/min来加热型II的样品。每10℃温度升高后，将样品在该升高温度下保持20min，以允许在该温度下产生XRPD模式。继续这种加热和保持阶段，直至温度达到205℃。将选定温度下的一些XRPD模式与型I、型II和型III的参照XRPD模式进行比较。这种比较显示出在高于85℃的温度下加热时，型II开始呈现出固-固转化，并且在115℃下实现了显著转化，同时在145℃下完成了到型III的转化。型III的XPRD模式显示于图7中。XRPD模式中的主峰及其相关强度显示于以下的表3中。
表3.化合物I型III的XRPD模式中的主峰
峰位置(°2θ) 相对强度(％)20 -->
8.3 53.2
12.4 100.0
14.2 69.3
15.0 47.8
20.4 43.0
21.6 84.7
23.3 26.5
型III在175℃下开始熔化，这通过型III的DSC曲线(图8)得到了证实。型III的TGA曲线，也显示于图8中，表明这种晶型是无水的。动态蒸汽吸附(DVS)数据显示出型III是非吸湿性的，与无定形化合物5.6％水分吸收相比，在90％相对湿度下吸收低于0.3％水分。
实施例4：(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯D-酒石酸盐(化合物ID-酒石酸盐)的制备。
将大约100-500mg的化合物I型I转移至一组含有磁搅拌棒的小瓶中的每一个中。向每个小瓶中加入大约1.0-20mL的乙腈(ACN)或异丙醇(IPA)直至获得清澈的溶液。在一组分开的小瓶中，制备了以下表4中所列酸的清澈CAN或IPA溶液。
将每种酸溶液以逐滴方式加入相应的化合物I溶液中，直至1当量的酸。如果观察到了所得到的悬浮液，使它们从环境温度冷却至～0℃。如果观察到了清澈的溶液，使它们缓慢蒸发以评价可能的结晶。
在筛选的酸中，L-酒石酸和HCl分别地显示出与化合物I型I反应，并且产生弱的结晶性信号，如通过PLM测定的。然而，证明了来自这两个反应的固体产物是不稳定的，并且在暴露于环境大气时容易失去结晶性。
表4.化合物I的盐筛选
酸 pKa 观察结果
HCl -6 形成了无序盐
柠檬酸 三酸，3.1；4.8；6.4 没有产物形成
马来酸 二酸；1.92；6.23 无定形产物
L-酒石酸 二酸；3.02；4.36 形成了无定形产物
D-酒石酸 二酸；2.93；4.23 形成了晶体产物
富马酸 二酸，3.03；4.38 没有产物形成
甲苯磺酸单水合物 -1.34 没有产物形成
苯磺酸 0.7 没有产物形成
硫酸 -3 没有产物形成
琥珀酸 二酸，4.2；5.6 没有产物形成
L-苹果酸 二酸，3.46；5.1 没有产物形成
D-苹果酸 二酸，3.46；5.1 没有产物形成
丙二酸 二酸，2.83；5.69 没有产物形成21 -->
草酸 二酸，1.27；4.28 无定形产物
即使针对L-酒石酸盐进行了彻底的晶型筛选，如以下表5中概括的，没有成功地产生稳定的晶体产物。从针对L-酒石酸盐的稳定型筛选得到的各种样品的XRPD表征显示出样品在大部分溶剂中仍然作为无定形固体。在丙酮中，化合物I恢复成如上所述的丙酮溶剂化物型I。
表5.用于化合物IL-酒石酸盐的晶型筛选概括
溶剂 24小时XRPD 2周XRPD 观察结果
水 无定形固体 无定形固体 悬浮液
IPAc 无定形固体 无定形固体 悬浮液
MTBE 无定形固体 无定形固体 悬浮液
2-丙醇 无定形固体 无定形固体 悬浮液
THF N/A N/A 清澈的溶液
丙酮 化合物I型I 化合物I型I 悬浮液
甲醇 N/A N/A 清澈的溶液
ACN 无定形固体 无定形固体 悬浮液
乙醇 N/A N/A 清澈的溶液
乙酸乙酯 无定形固体 无定形固体 悬浮液
2-MeTHF 无定形固体 无定形固体 悬浮液
MEK 无定形固体 无定形固体 悬浮液
MIBK 无定形固体 无定形固体 悬浮液
n-庚烷 无定形固体 无定形固体 悬浮液
甲苯 无定形固体 无定形固体 悬浮液
DCM 无定形固体 无定形固体 悬浮液
0.8的aw(酒精/水) N/A N/A 清澈的溶液
这些观察后，将D-酒石酸加入酸列表中。因此，将D-酒石酸的IPA溶液加入IPA中的化合物I的溶液中时，立即产生了白色悬浮液。将样品过滤并且根据以上所述的参数用XRPD表征，清楚地显示出是晶体产物，(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯D-酒石酸盐(化合物ID-酒石酸盐)。
图9显示了化合物ID-酒石酸盐的XRPD模式。XRPD模式图中的主峰和相应的相对强度列于以下的表6中。
表6.化合物ID-酒石酸盐的主XRPD峰
峰位置(°2θ) 相对强度(％)
4.0 87.8％
7.9 17.7％
9.1 38.9％22 -->
10.3 47.8％
12.7 30.6％
14.8 14.9％
15.8 13.2％
16.2 16.8％
16.9 15.4％
17.5 18.2％
18.3 26.4％
19.2 16.4％
19.7 100.0％
20.8 20.0％
21.0 27.2％
22.8 19.7％
24.0 30.9％
27.4 10.6％
28.2 5.6％
通过晶体的偏振光显微镜(PLM)图像进一步证实了化合物ID-酒石酸盐的结晶性。
化合物ID-酒石酸盐的DSC曲线显示出加热时，这种晶体材料在221.08℃具有一个尖锐的吸热峰，这表明了明显的熔化事件(图10)。TGA曲线显示出最小的失重，这表明化合物ID-酒石酸盐是无水的。动态蒸汽吸附(DVS)数据证明了化合物ID-酒石酸盐在90％RH下吸收低于3％的水分。
实施例5.化合物ID-酒石酸盐的稳定型筛选
将化合物ID-酒石酸盐的样品接受类似于以上实施例1中所述程序的方式的筛选。化合物ID-酒石酸盐的稳定型筛选的结果概括于以下的表7中。2周后的各种样品的XRPD表征显示出物理形式没有改变，并且在2周后仅在水样品中有一些结晶性的丢失。
表7.化合物ID-酒石酸盐的稳定型筛选概括
实施例6：化合物ID-酒石酸盐与其他型比较的动力学溶解性和光稳定性评价
化合物ID-酒石酸盐在pH3的水中的溶解速率比本文中所述的任何其他型的化合物I快5至10倍。化合物ID-酒石酸盐还导致持续的溶解性提高(～2x)延长的期限。相反，化合物I型II导致最慢的溶解速率。这些结果和其他结果显示于图11中。这些结果表明化合物ID-酒石酸盐在适度的酸性含水介质中呈现出提高的溶解特性。
由于化合物I在较高pH范围内的溶解性低于约1μg/mL，进行了进一步的实验来评价化合物I在较高pH(在此为pH6)下的动力学溶解性。在这个实验中，针对无定形化合物I和化合物ID-酒石酸盐的样品测量了溶解速率，并且将每种形式的样品与pH6的含水介质中的0.1％(w/w)羟丙基甲基纤维素(HPMC)混合。如图12中所示，HPMC的存在在60分钟的时间段内提高了溶解和溶解性。具体地，对于化合物ID-酒石酸盐和HPMC的混合物观察到了约100-倍的增强(稳态溶解性＝0.02μg/mL)。结果证明了使用特定配制技术的D-酒石酸盐优于化合物I的所有游离碱形式的潜在优势。
在SUN实验室中在8小时内(1.2Mlux-hrs)评价了化合物I的光化学降解。结果显示出溶液中主要的光降解剂的存在，并且较少地作为固体(图13)。通过光暴露或暴露于化学氧化剂(主要的DP降解剂)形成的相对停留时间(RRT)1.67的次要光降解剂。结果表明化合物I的结晶化通常导致在光存在下更强的稳定性。特别地，结果证明了化合物ID-酒石酸盐相对于本文中所述的其他化合物I型在光存在下是最强的形式。
实施例7：多晶型物筛选
这个实施例的目的是说明化合物I的其他晶型的合成和表征。如以下详述的，在稳定型筛选中发现了化合物I的十一种其他的溶剂化物形式和两种无水形式。通过溶剂化物形式的去溶剂化产生了这两种新的无水形式。暴露于有机溶剂时，无水形式溶解，变成无定形的，或转化成溶剂化物型。
A.稳定型筛选
以类似于以上实施例1中所述的方式，通过在环境温度下(～22℃)在2mL各种溶剂中搅拌100至200mg化合物I型III来进行稳定型筛选。几天后，将作为抗溶剂的庚烷加入保持为溶液的那些样品中。在形成浆液的情况中，将浆液取样并离心，用于XRPD分析，如以下更全面地描述。表8概括了稳定型筛选的结果，表明在合适的情况中，化合物I新型的形成。
表8.来自其他稳定型筛选的结果
B.化合物I溶剂化物的去溶剂化
将从以上所述的多晶型物筛选合成的化合物I溶剂化物在各种条件下去溶剂化。结果，形成了化合物I的几种其他型。实验条件和基于TGA数据的结果概括于以下的表9中，其表明了在合适的情况中，化合物I的晶型的形成。
表9.化合物I溶剂化物的去溶剂化结果
C.无定形化合物I型与各种溶剂的相容性
为了探究以上概括的化合物I的溶剂化型的直接结晶的可能性，将化合物I的去溶剂化型单独地分配至一些常用的溶剂中。通常，观察到化合物I的去溶剂化型与那些溶剂不相容，除了型VIII在水和庚烷中。
此外，化合物I型III在MTBE中转化成化合物I型XIV，其呈现出与化合物I型X(CAN溶剂化物)相似的XRPD模式。因此，推断MTBE溶剂化物和ACN溶剂化物是同结构的；然而，观察到这两种溶剂化物在干燥时去溶剂化成不同型：如上所述，型X去溶剂化成型XV，而型XIV去溶剂化成型VIII。以下的表10概括了关于化合物I的去溶剂化型的实验结果。
表10.来自其中在不同溶剂中搅拌化合物I的无定形形式的实验的最终形式
溶剂 型III 型V 型VIII 型XV
水 无定形 无定形 VIII 无定形
EtOH/水 无定形 无定形 无定形 无定形
ACN 无定 无定形 型X(CAN溶剂化物) 型X(CAN溶剂化物)
ACN/水 出油 出油 出油 出油
IPA 溶液 溶液 溶液 溶液
MEK 溶液 溶液 溶液 溶液
MIBK 溶液 溶液 溶液 溶液
THF 溶液 溶液 溶液 溶液
2 Me-THF 溶液 溶液 溶液 溶液
乙酸甲酯 型VII 型VII 型VII 型VII
EtOAc 型IV 型IV 型IV 型IV
MTBE 无定形 无定形 型XIV(MTBE溶剂化物) 溶液27 -->
甲苯 溶液 无定形 无定形 溶液
庚烷 无定形 无定形 VIII+VII(粘性的) 无定形
实施例8：化合物I型IV-XV的表征
这个实施例呈现了如以上所述合成的化合物I型IV-XV的表征数据的详细内容。
A.型IV和V
将化合物I型IV的单个晶体接受单晶X-射线衍射分析，其结果概括于以下的表11中。
表11.化合物I型IV的单晶X-射线衍射分析的概括
根据单晶XRD，化合物I型IV是三-乙酸乙酯溶剂化物，并且在干燥过程中容易失去EtOAc。因此，型IV在真空下在40-50℃下部分去溶剂化时，获得了化合物I型V。TGA分析显示出加热至110℃时，型V失去了2.7％质量，表明型V可能是部分乙酸乙酯溶剂化物。在110℃下干燥时，型V变成无水的。型V的熔点约为160℃。
型IV和V的XRPD模式分别显示于图14和16中。在以下的表12和13中分别列出了XRPD峰列表和相对强度。
表12.化合物I型IV的XRPD峰和相对强度
表13.化合物I型V的XRPD峰和相对强度
峰位置(°2θ) 相对强度(％)
8.6 11.6
11.8 20.0
14.4 58.9
15.3 97.3
17.4 100.0
18.9 9.2
型IV的DSC曲线显示于图15中。此外，DVS数据显示出型V是非吸湿性的。
B.型VI
按照以上所列的一般程序，从IPAc获得了型VI。TGA数据表明型VI是溶剂化型(在135℃下失去22.8％重量)。将型VI加热时，XRPD峰变宽，但没有出现新的峰，表明加热时没有产生新的形式。XRPD衍射图显示于图17中；峰和相对强度列于以下的表14中。DSC曲线显示于图18中。
表14.化合物I型VI的XRPD峰和相对强度
峰位置(°2θ) 相对强度(％)
4.8 12.8
5.6 100.0
7.8 10.2
10.5 11.9
13.3 53.129 -->
13.8 17.3
14.2 13.1
14.8 24.4
16.7 16.8
16.9 17.8
18.0 12.4
18.2 14.3
19.1 12.3
21.1 60.1
C.型VII和VIII
从化合物I的乙酸甲酯溶液获得了化合物I型VII。型VIII是乙酸甲酯溶剂化物，并且其去溶剂化，变成型VIII，无水型。这两种型的XRPD模式分别显示于图19和20中。以下的表15和16列出了XRPD峰和相对强度。此外，图18显示了型VIII的DSC曲线。
表15.化合物I型VII的XRPD峰和相对强度
表16.化合物I型VIII的XRPD峰和相对强度
峰位置(°2θ) 相对强度(％)30 -->
9.4 100.0
11.8 12.0
12.2 31.4
12.7 20.8
14.6 67.1
15.5 83.7
16.8 20.1
17.2 25.9
17.5 89.1
18.4 15.6
18.8 45.0
20.3 16.3
20.9 21.2
21.6 23.2
22.6 11.8
型VIII的TGA数据显示出低于50℃时少量的失重，即使型VIII在真空下在50℃下干燥。KarlFischer分析显示出在50℃的真空炉中干燥后1.8％的含水量，证实了失重是由失水引起的。认为水的来源是材料转移过程中空气中的水分。在水中的浆液测试表明型VIII在水中是稳定的。DVS数据显示出型VIII大概吸收一当量的水，表明型VIII在水中作为单水合物存在。因此，即使在真空条件下的室温下，型VIII的优势在于可以通过在较低温度下使型VII去溶剂化来获得。
D.型IX
化合物I型IX是在甲酸乙酯中获得的溶剂化物型。XRPD衍射图显示于图22中；以下的表17列出了XRPD峰和相对强度。
表17.化合物I型IX的XRPD峰和相对强度
峰位置(°2θ) 相对强度(％)
8.2 21.7
9.4 13.3
11.0 37.4
12.6 12.5
13.8 100.0
16.1 17.2
17.1 50.8
17.7 13.7
18.4 18.7
19.2 54.5
19.6 15.1
20.4 21.531 -->
21.9 98.4
24.7 20.1
TGA数据表明型IX在熔化前失去5.9％质量；DSC曲线显示于图23中。XRPD(图27)显示出该型去溶剂化，变成型VIII。
E.型X和XIV
化合物I型X是乙腈溶剂化物，而型XIV是MTBE溶剂化物。型X和XIV呈现出非常相似的XRPD模式，如图24和31中分别所示的。然而，这些型的TGA数据非常不同。干燥时，型X变成型XV，如以下更全面描述的化合物I的无水型，而型XIV变成如上所述的型VIII。以下的表18和19分别列出了型X和XIV的XRPD峰和相对强度。
表18.化合物I型X的XRPD峰和相对强度
峰位置(°2θ) 相对强度(％)
3.4 7.8
6.9 100.0
10.3 46.5
11.2 3.6
20.0 5.6
22.4 7.3
表19.化合物I型XIV的XRPD峰和相对强度
峰位置(°2θ) 相对强度(％)
3.4 10.8
6.9 100.0
10.3 40.6
11.2 9.4
12.3 5.3
12.6 3.9
12.9 4.1
14.2 3.2
17.3 4.2
20.1 11.6
21.3 4.1
22.4 11.7
24.1 6.1
F.型XI、XII和XIII
型XI是THF溶剂化物，而型XII是MEK溶剂化物。两种型具有非常相似的XRPD模式，如图24和25中分别所示的。以下的表20和21分别列出了型XI和XII的XRPD峰和相对强度。
表20.化合物I型XI的XRPD峰和相对强度
峰位置(°2θ) 相对强度(％)
3.2 66.2
6.3 100.0
9.5 78.4
11.8 9.1
12.3 15.9
12.9 6.4
14.7 7.2
15.4 14.7
16.1 9.2
18.2 12.7
19.1 25.8
20.3 17.5
20.6 26.7
21.0 14.2
22.5 32.8
23.2 16.9
24.7 14.6
表21.化合物I型XII的XRPD峰和相对强度
在室温下在真空炉中干燥时，型XI和XII部分失去它们的溶剂，并且分别变成型XIII-THF和型XIII-MEK。型XIII-THF和型XIII-MEK的真空炉干燥样品的NMR分析显示出这些型中溶剂的存在，分别为～0.9和～1.1摩尔当量。此外，型XIII-THF和型XIII-MEK的DSC曲线是不同的，如图28和30中分别所示的。因此，推断型XIII-THF和XIII-MEK分别是THF和MEK的部分溶剂化物。XRPD分析证明了THF和MEK部分溶剂化物是相同的，如图27和29中分别所示的。型XIII-THF和XIII-MEK的XRPD峰和相对强度列于以下的表22中。
表22.化合物I型XIII-THF和XIII-MEK的XRPD峰和相对强度
峰位置(°2θ) 相对强度(％)
3.2 44.1
3.5 46.5
7.0 19.0
8.6 36.3
12.1 100.0
19.8 92.9
20.2 69.3
22.6 34.2
24.4 20.7
F.型XV
如上所述，化合物I型X在真空下在室温下干燥时变成型XV。型XV是无水的，并且是化合物I的非吸湿性晶型，如通过TGA和DVS实验所示的。图32描绘了XRPD衍射图，并且以下的表23概括了主峰及其相对强度。
表23.化合物I型XV的XRPD峰和相对强度
峰位置(°2θ) 相对强度(％)
7.6 34.7
9.1 45.1
10.9 38.4
11.4 27.2
12.1 100.0
12.8 53.0
13.5 19.4
15.1 17.0
16.7 18.2
17.4 22.9
18.0 23.5
19.4 34.4
20.8 70.8
21.3 43.1
根据DSC数据(图38)，型XV呈现出比本文中所述的化合物I的其他型略高的熔点。
实施例9：化合物I型I-XV的比较
在以下的表24中，汇集了本文中公开的化合物I的所有晶型的TGA和DSC数据。无定形形式、III、V、VIII、XIV的熔点全部在160-172℃的范围中。去溶剂化温度非常不同。
表24.化合物I型I-XV的热数据的比较
对本文中所述的大部分化合物I型获取了偏振光显微镜(PLM)数据。例如，型I、IV、VI、VII、IX、X、XI和XII的PLM数据证实了这些型中的每一种都作为晶体固体存在。
实施例10：无定形化合物I的合成
以下步骤讨论了无定形化合物I的合成。化合物I的丙酮溶剂化物的合成还公开于2012年6月5日提交的美国申请序列号61/655,935和2013年3月13日提交的美国申请序列号13/800,202中，将其通过引用并入本文中。
I.起始材料的合成
A.二醇6的碘化，以制备7a
将三苯基膦(257.2g)和咪唑(66.7g)加入反应器中。加入DCM(490mL)，启动搅拌，并且将溶液冷却至0℃。在1h内作为固体分几部分加入碘(249.2g)，同时维持内部温度低于10℃。完成添加时，在0.5h内将DCM(113mL)中的6(50g)的溶液缓慢加入反应器中，同时维持内部温度低于10℃。搅拌2.5h后，将水(225mL)中的NaCl(25g)溶液加入反应器中。相分离后，用n-庚烷(550mL)稀释底部有机层。用水(190mL)中的亚硫酸钠(21g)水溶液洗涤有机相。层分离后，通过真空蒸馏，将有机相浓缩至600mL。加入另外的n-庚烷(550mL)，并且将混合物通过真空蒸馏再次浓缩至600mL。将所得到的浆液通过已经浆液充填了n-庚烷的硅胶塞(85g)过滤。用另外的n-庚烷(1L)冲洗硅胶塞，然后通过真空蒸馏将滤液浓缩，提供作为无色液体的所需产物7a(114g，70％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.33(s,2H),0.95(s,2H).13CNMR(75MHz,CDCl3):19.1,22.7,26.0。
B.8的烷基化，以制备9
将氢化钠(60.0g，3当量，矿物油中的60％分散体)和二甲基乙酰胺(600mL)加入烧瓶中，并且将反应温度降至0-10℃。一旦内部温度大约为5℃，将化合物7a(191.6g，1当量)加入NaH溶液中。将DMAC(600mL)中的化合物8a(121.0g，1当量)的溶液在3.5h内加入，保持内部温度在0-11℃。将溶液在0-10℃下搅拌，并且在1h后取样，用于测定反应完成。当8a的剩余含量低于3％时，认为反应完成。完成时，在2-3h内缓慢加入AcOH(50mL，1.5当量)，同时保持温度在4-9℃。将溶液在0-10℃搅拌12h。将MTBE(1000mL)和水(700mL)加入淬灭的溶液中。层分离，并且用MTBE(400mL)提取含水层。将有机层合并，并且用15％NaCl溶液(1000mL)洗涤一次，用5％碳酸氢钠溶液(900mL)洗涤一次以及用溴溶液(600mL)洗涤一次。将MTBE溶液浓缩至最小体积。将油重新溶解于CAN(400mL)中，并且用己烷(200mL)洗涤。相分离，将CAN层浓缩至最小体积，并且丢弃己烷层。分离作为黄色油的产物9a(98g，61％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.45(dd,J＝8.5,3.7Hz,0.5H旋转异构体1),4.35(dd,J＝8.4,4.4Hz,0.5H旋转异构体2),4.27–4.11(m,2H),3.44–3.29(m,2H),2.26(ddd,J＝12.7,8.4,4.1Hz,1H),1.80(ddd,J＝23.5,12.6,4.0Hz,1H),1.58,1.48–1.40(m,9H),1.32–1.21(m,3H),0.68–0.44(m,4H)。
C.乙酯9a的水解
将水(910mL)、氢氧化锂(284g，2.0eq)和2-MeTHF(2.0L)加入装备有顶部搅拌、内部温度计和氮线的烧瓶中。将2-MeTHF(1.0L)中的化合物9a(911g)的溶液转移至含有氢氧化锂的烧瓶中。将反应加热至50℃，直至认为反应完成，如通过HPLC分析测定的。将反应冷却至22℃，并且将水(3.6L)加入反应中。分层，并且保留底部含水层，同时除去上部有机层。将2-MeTHF(4L)和浓HCl(420mL)加入含水层中。分层，并且除去底部含水层。将上部有机层浓缩，并且分离作为白色固体的产物17(596g，71％)。17的表征数据与以上所述的化合物4的相同。
D.经典分解
将外消旋羧酸17(596g)溶解于2-Me-THF(6L)中，然后将均匀的溶液加热至55℃。将(1S,2R)-氨基-茚满醇(221g，0.6eq)以10分钟间隔的3等份加入反应中。添加第一部分后，给溶液接种盐18a(0.6g)。加入最后一部分胺后，将溶液在55℃下老化1h。然后以～15℃/小时的速率，将浆液冷却至22℃。一旦浆液达到室温，将其过滤，并且用2-Me-THF(1.2L)将滤饼洗涤一次。将固体在真空炉中在45℃下干燥24h。分离作为白色固体的化合物18a(320g，33％)。
将固体18a溶解于MeTHF(1.5L)中，加入1MHCl(1.0L)，并且将两相混合物搅拌30min，直至固体溶解。除去下部含水层，并且用1MHCl(1L)洗涤有机层，然后用H2O(500mL)洗涤。将有机层通过MgSO4(每次250g)干燥20min，过滤，并且用MeTHF洗涤滤饼。将这一相同的干燥程序重复第二次，然后将溶液浓缩成油，产生4(197g，100％)。
E.钾盐形成
将羧酸4(219g)溶解于2-MeTHF(880mL)中，然后将溶液加热至约35℃。缓慢加入THF(1.05L)中的1.0MtBuOK溶液，使得内部温度不超过40℃。将浆液搅拌约30分钟，然后在约2小时内缓慢冷却至约20℃。将固体在真空炉中在40℃下干燥24h。分离作为白色固体的终产物10(212g，86％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.07(t,J＝7.3Hz,1H),3.44(d,J＝10.4Hz,1H),3.35(s,1H),3.10(d,J＝10.4Hz,1H),2.03(dd,J＝12.3,6.9Hz,1H),1.89(dd,J＝12.3,8.0Hz,1H),1.38(s,9H),0.71–0.27(m,4H).1HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):3.89(dd,J＝8.6,4.1Hz,0.4H旋转异构体1),3.85(dd,J＝8.6,4.3Hz,0.6H旋转异构体2),3.21–3.07(m,2H),2.00–1.92(m,1H),1.75–1.71(m,1H)1.36(s,4H旋转异构体1),1.32(s,5H旋转异构体2),0.46–0.37(m,4H).13CNMR(100MHz,d6-DMSO)δ174.5,174.4,154.1,153.4,77.2,76.9,62.3,62.0,54.1,53.8,38.7,28.4,28.3,20.6,19.9,11.8,11.6,10.5,10.2。
II.到中间体22的途径
A.中间体20的合成
将3-颈烧瓶装入2-溴代芴(100g)和乙酸(2100g)。将内含物加热至40-45℃，并且搅拌大约30分钟，获得清澈的溶液。调节内部温度至20-30℃后，加入20％(v/v)含水H2SO4(200g，用64.0gH2SO4和136g水制得)，接着加入I2(53.0g，0.512摩尔当量)，接着加入KIO3(17.5g，0.200摩尔当量)。将浆液在58℃(56-60℃)下加热约4小时。然后将浆液冷却至20-25℃，并且将9％Na2SO3溶液(Na2SO3，47.0g；水，500g)加入反应混合物中，同时将内部温度保持在20-30℃。将浆液在25℃下搅拌1小时，并且过滤。用85wt％HOAc(200g，用170gHOAc和30g水制得)冲洗滤饼，接着用水(200g，2.0wt当量)冲洗。丢弃滤饼，并且将浆液在水(1500g)中洗涤约1小时，然后过滤，并用水冲洗，直至冲洗液的pH为6-7，并且用庚烷(200g)进一步冲洗。将固体在真空下干燥，产生143g(95％产量，通过HPLC测定，96％AN纯度)作为白色固体的产物20。
B.中间体21的合成
将起始材料(20，100g)和N-氟代苯磺酰胺(NFSI，251g，2.95摩尔当量)作为固体加入烧瓶中。向混合物中加入THF(1000g)，并且使用搅拌，使固体溶解。通过缓慢应用真空，接着用氮气破坏真空，将溶液脱气三次。将溶液在-78℃浴中冷却至-68℃的内部温度。冷却时，形成了白色至灰白色浆液。以内部温度保持在对于-55℃的速率加入碱溶液(THF中1.0MLiHMDS，720g，3.00摩尔当量)。对于大部分的添加，内部温度<-60℃，总添加时间为约1h。通过HPLC分析监控反应完成。通过添加NH3/MeOH(MeOH中7NNH3，8g)淬灭反应，并且除去冷浴。内部温度温热至-20℃后，HPLC分析显示出过量N-氟代苯磺酰胺的完全消耗。将内部温度调至0℃。加入庚烷(342g)，并将溶液搅拌10分钟。如果需要，将温度调至20-25℃。将浆液过滤，并且用THF/庚烷混合物将固体冲洗两次(对于每次冲洗：THF，89.0g；庚烷：205g)。将滤液在5℃(2-8℃)下存储大约20小时。然后将溶液滤至烧瓶中，并且在35℃的最大内部温度下在真空下浓缩至2.5-3.0体积。加入CH2Cl2(1500g)，并且在回流(大约40℃)下将浆液搅拌30分钟。调节内部温度值20-25℃后，将浆液通过硅藻土垫过滤，并且用DCM(400g，4.0wt当量)冲洗滤饼。将滤液在真空下浓缩至约3.0体积。加入甲醇(600g)，并且将混合物浓缩至约4.0体积，加入另外的甲醇(300g)，并且将混合物再次浓缩至约4.0体积(300体积)。将浆液过滤，并且用甲醇冲洗两次(对于每次冲洗，100g)。将产物21在真空下干燥，产生90g(82％产量，通过HPLC测定，97-98％AN纯度)作为灰白色至浅黄色固体的产物。1HNMR(400MHz,CDCl3,δ):7.94(d,J＝1.2Hz,1H),7.81(d,J＝7.8Hz,1H),7.74(d,J＝1.4Hz,1H),7.60(d,J＝8.3Hz,1H),7.41(d,J＝8.1Hz,1H),7.29(d,J＝8.0Hz,1H).19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-111.0(s,2F)。
C.中间体22的合成
将
3-颈烧瓶装入21(100g)和THF(800mL)。通过缓慢应用真空，接着用氮气破坏真空，将溶液脱气三次。将溶液冷却至-10℃内部温度。缓慢加入THF(125g，1.04摩尔当量)中的2Ni-PrMgCl溶液，同时将内部温度维持于-10℃至0℃。然后将所得到的混合物在-10℃下搅拌30分钟，直至反应完成。将2-氯-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(40.6g，1.20摩尔当量)溶解于MTBE(122g，1.22wt当量)中，并且通过1μm滤器过滤。然后将乙酰胺的MTBE溶液缓慢加入将内部温度维持于-10℃至0℃的烧瓶中。添加完成时，将内部温度调至0℃，并且搅拌2小时。反应完成后，缓慢加入1NHCl(750g)，使得内部温度不超过20℃。如果需要，将内部温度调至20℃。分层，并用MTBE(410g)提取含水层。将合并有机层，并通过MgSO4干燥。将MgSO4滤掉，并且用THF(200g)冲洗。将滤液和冲洗液在真空下浓缩10体积(1000mL)。加入异丙醇(785g)，并且少量晶体开始形成。将这一浆液在真空下再次浓缩至10体积(1000mL)。再次加入异丙醇(785g)，将浆液在真空下浓缩至10体积(1000mL)。将内部温度调至20-25℃，并且搅拌大约30分钟。将浆液过滤，并且用异丙醇(100g)冲洗，然后在真空下干燥，提供62.28g(70.8％，通过HPLC测定，98％纯度)作为灰白色至浅黄色固体的产物22。1HNMR(400MHz,CDCl3,δ):8.19(s,1H),8.12(d,J＝7.8Hz,1H),7.82(s,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,2H),7.52(d,J＝7.8Hz,1H),4.71(s,2H).19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-111.4(s,2F)。
III.中间体24的合成
A.23的制备
将化合物22(10.8g，1.05当量)和化合物10(8.0g，1.0当量)溶解于丙酮(106mL)中。将不均匀的混合物加热至55℃，并且老化至认为反应完成，如通过HPLC分析测定的。缓慢加入水(22mL)，并且将溶液在55℃下保持30分钟。将溶液冷却至50℃，并且加入23的种晶。缓慢加入另一部分的水(11mL)。将溶液在50℃下老化1h，然后在2小时的时间段内冷却至20℃(15-25℃)。将浆液在20℃(15-25℃)下过滤，然后用丙酮(18mL)和水(6mL)的混合物洗涤滤饼。将产物干燥，获得作为黄色固体的23(12.8g，95％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物,δ):8.13(s,1H),8.07–7.97(m,1H),7.79(s,1H),7.67–7.56(m,2H),7.53–7.44(m,1H),5.61(d,J＝16.3Hz,0.5H),5.47(d,J＝16.2Hz,0.5H),5.29(d,J＝16.2Hz,0.5H),5.15(d,J＝16.3Hz,0.5H),4.62(dd,J＝8.7,3.5Hz,0.5H),4.55(dd,J＝8.7,4.0Hz,0.5H),3.48–3.28(m,2H),2.43–2.35(m,1H),2.17–2.07(m,1H),1.48(s,9H)0.77–0.55(m,4H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ190.8,190.3,172.2,172.0,154.4,153.7,143.7–143.4(m),140.3(t,J＝25.9Hz),138.2(t,J＝25.4Hz),136.9–136.5(m),135.5,135.4,134.7,134.6,132.4,127.7,124.2,124.1,123.2,123.2,122.7,121.6(t,J＝244Hz),120.8,120.8,80.1,80.0,66.0,65.9,59.4,59.0,54.3,53.7,38.9,38.0,28.4,28.3,20.7,20.0,12.9,12.3,8.8,8.3.19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-111.41(s),-111.43(s)。
B.咪唑24形成
向化合物23(7.0g)和醋酸铵(4.8g，5.0当量)中加入甲苯(62mL)和2-甲氧基乙醇(3.5mL)。将不均匀/两相混合物加热至90℃，并且老化至认为反应完成，如通过HPLC分析测定的。将溶液冷却至55℃，并且搅拌，直至形成24的浆液(如果需要，可以加入种子)。在1h内在55℃下加入庚烷(104mL)，然后在3h内将浆液冷却至22℃。一旦浆液达到室温，将其老化1h。将浆液过滤，并且用庚烷(15mL)洗涤。然后将固体溶解于DMAc(42mL)中。将溶液加热至45℃，并且将水(7mL)加入溶液中。将溶液的温度提高至50℃，并且加入24的种晶。将浆液老化30min，然后在1h内加入第二部分的水(9.1mL)。完成时，将浆液在3h内冷却至22℃，并且在室温下老化1h。将固体过滤，并且用DMAc(5mL)和水(2mL)溶液洗涤。使用最终的庚烷(23mL)洗涤，以替换DMAc和水。将固体在真空炉中在45℃下干燥。分离作为棕色固体的终产物24(5.2g，77％)。1HNMR(400MHz,DMSO,旋转异构体的混合物,δ):12.31–11.78(m,1H),8.15–8.03(m,1H),8.02–7.84(m,2H),7.84–7.43(m,4H),5.04–4.84(m,1H),3.62–3.21(m,2H),2.42–2.09(m,1H),2.08–1.78(m,1H),1.40(s,4H),1.17(s,5H),0.75–0.31(m,4H)；19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-103.85(s),-104.03(s).MS-ESI+:[M+H]+C27H27BrF2N3O2的分析计算值,542.1,544.1；实测值,542.1,544.1。
IV.中间体28的合成
A.25的合成
B.26和27的合成
向烧瓶中加入25(20.00g，0.083mmol)、4-溴-1,2-苯二胺(16.74g，0.089mmol，1.08当量)、羟基苯并三唑(HOBt)(13.96g，0.091mmol，1.1当量)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺HCl(EDC-HCl)(17.48g，0.091mol，1.1当量)。将烧瓶在冰浴中冷却，并加入N,N-二甲基乙酰胺(DMAC，80mL)。边搅拌边使反应冷却至大约10℃。在5分钟内加入N-甲基吗啉(NMM)(27.34mL，0.249mol，3当量)，保持内部温度低于20℃。将反应在室温下搅拌20h。反应完成时，将反应混合物加入分液漏斗中的MTBE(200mL)和水(600mL)中，并且温和振荡。使层分离，并且除去含水层。用MTBE(50mL)提取含水层两次，并合并有机提取物。然后用水(500mL)提取合并的有机提取物，形成没有充分分离的混合物。将混合物通过合适的固体支持物过滤，并且分层。将有机相在真空下浓缩，并且将所得到的残余物溶解于二异丙醚(100mL)中。边搅拌边使溶液冷却至大约5℃。缓慢加入乙酸(5.22mL，0.091mol，1.1当量)，保持内部温度低于10℃，并且将所得到的悬浮液在5℃下搅拌2h。然后过滤浓稠的悬浮液，并且用二异丙醚(100mL)冲洗固体，接着用庚烷(100mL)冲洗。将饼在真空下干燥，获得作为区域异构体26和27的混合物作为浅米色固体的产物(28.19g，72％，>99％AN)(数据是针对主要区域异构体的两种旋转异构体)：δ9.25(s,0.5H),9.13(s,0.5H),7.08(d,J＝8.3Hz,0.5H)；7.06(d,J＝8.2Hz,0.5H),6.92(d,J＝2.2Hz,0.5H),6.89(d,J＝2.1Hz,0.5H),6.71(dd,J＝8.4,2.2,0.5H),6.66(dd,J＝8.4,2.2,0.5H),5.10(brs,1H),5.05(brs,1H),4.15(brs,0.5H),4.10(brs,0.5H),3.76(s,1H),2.64(brs,1H),1.96-1.88(m,1H),1.77-1.67(m,1H),1.67-1.19(m,4H),1.41(s,4.5H),1.33(s,4.5H).MS-ESI+:[M+H]+对C18H25BrO3N3的分析计算值,410.1,412.1；实测值,410.0,412.0
C.中间体28的合成
向反应器中加入26/27混合物(50.0g，0.106mol)。加入MTBE(200mL，4V)，并且向悬浮液中加入冰醋酸(30.4mL，0.532mol，5当量)。将混合物加热至55℃，形成棕色的、均匀的溶液，并且在该温度下搅拌18h。如通过HPLC测定反应完成时，将溶液冷却至大约10℃，并且随后用含水KOH(200mLH2O中35g)淬灭，保持内部温度低于20℃。将两相混合物强烈搅拌15min。停止搅拌，并使层分离。排出含水层，并且用MTBE(50mL)再次反提取。将有机提取物合并，加入H2O(300mL)，并且将两相混合物强烈搅拌15min。停止搅拌，并使层分离。排出含水层，然后将棕褐色有机层精细过滤。将溶剂蒸馏至大约50mL的体积。加入二异丙醚(IPE，150mL)，同时将内部温度保持高于48℃，并将溶液蒸馏至大约80mL的总体积。再次加入IPE(150mL)，并且将溶液蒸馏至大约120mL。持续该过程，直至溶剂主要是二异丙醚，如通过约69℃的蒸馏过程中的内部温度所示或通过1HNMR测定。然后将总体积调至大约120mL，并且使溶液过夜缓慢(10℃/h)冷却至0℃，导致浆液形成。然后将浆液过滤，并用冷IPE(100mL)冲洗。收集固体，并在真空炉中干燥，获得28(39.23g，94％产量，>99.5％AN)。1HNMR(400MHz,CDCl3,δ):10.70(s,1H),7.86(s,0.5H),7.58(d,J＝8.6Hz,0.5H),7.54(s,0.5H),7.30(d,8.3Hz,1H),7.25(d,J＝8.0Hz,0.5H),4.52(d,J＝3.6Hz,1H),4.15(s,1H),3.43(d,J＝3.2Hz,1H),2.03–1.94(m,1H),1.93–1.81(m,1H),1.80–1.55(m,4H),1.52(s,9H).MS-ESI+:[M+H]+C18H23BrO2N3的分析计算值,392.1,394.1；实测值,392.1,393.9。
V.从中间体28合成无定形化合物I
A.化合物29的形成
1a.化合物28和24的耦合
将化合物28(24.98g)、双(频哪醇)二硼(19.40g)、丙酸钾(21.40g)和PdCl2[P(t-Bu)2Ph]2(2.04g)加入反应器中，并且将反应器钝化。加入乙酸异丙酯(250mL)，启动搅拌，并且将反应器再次钝化。将反应混合物加热至75℃，并且搅拌3.5h。冷却至25℃后，将化合物24(29.31g)加入反应混合物中，并且将反应器钝化。将脱气的含水1MK3PO4(223mL)加入反应器中，并且将反应混合物加热至75℃。将反应混合物在这个温度下保持1h，然后冷却至35-40℃。加入N-乙酰-L-半胱氨酸(6.27g)，并且将混合物在35-40℃下搅拌15h。将反应混合物冷却至20℃，停止搅拌，并且使层分离。分离相，并且将N-乙酰-L-半胱氨酸(6.27g)加入有机层中。将反应混合物加热至45-50℃。在45-50℃下搅拌混合物2h后，将反应冷却至20℃，并加入5％含水NaOH(250mL)。分离相，并用5％含水NaOH(125mL)洗涤有机层。然后用5％含水NaOH(125mL)处理有机相，并通过滤纸的过滤转移至分液漏斗中。分离层。将有机相转移至反应器中，并通过真空蒸馏浓缩至大约160mL。加入iPrOAc(20mL)，并使终体积大约为180mL。加入乙醇(100mL)，并且将内含物加热至大约50℃。然后将乙醇(40mL)中的草酸(9.3g)溶液加入混合物中。将溶液接种29草酸盐(200mg)，并且在50℃下老化72h。在5h内加入乙酸异丙酯(240mL)，并且将浆液在4h内冷却至15℃，并且在该温度下搅拌20h。通过过滤收集产物，用乙酸异丙酯中的乙醇溶液(48mLEtOH，191mLiPrAc)洗涤，并在45℃下真空干燥，提供作为灰白色固体的29草酸盐(41.46g，81％产量)。1HNMR(400MH,DMSO-d6,δ)11.80(brs,4H),8.11(d,J＝1.2Hz,1H),8.00(d,J＝9.2Hz,1H),7.98(s,1H),7.90(s,2H),7.87,(d,J＝9.2Hz,1H),7.85(s,1H),7.80(s,1H),7.60(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),7.56(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),5.03(m,0.5H),4.99(m,0.5H),4.52(s,0.5H),4.50(s,0.5H),4.28(brs,0.5H),4.19(brs,0.5H),3.48(m,1H),3.34(m,1H),2.66(brd,J＝12.7Hz,1H),2.38(m,0.5H),2.26(m,0.5H),2.04(m,1H),1.96(m,0.5H),1.86(d,J＝11.6Hz,0.5H),1.77(m,1H),1.70(m,1H),1.64(2H,m),1.43(s,6H)1.41(s,3H),1.35(m,1H),1.19(s,5H),1.14(s,4H),0.65(m,2H)0.54(m,1H),0.42(m,1H).HRMS-ESI+:[M+H]+C45H49O4N6F2的分析计算值,775.3778；实测值,775.3773。
B.化合物29的双-Boc去保护
在65℃下，向MeCN(324mL)中的29(92.5g，119mmol)的溶液中，加入1.5N含水HCl溶液(398mL，5.0摩尔当量)。将反应混合物在65℃下搅拌约2h，并且通过HPLC分析监控完成。确定起始材料消耗后，将反应混合物的温度调至45℃。在≥30min的过程中加入乙腈(648mL)，以维持40-50℃的内部温度。这种抗溶剂添加完成后，加入30盐酸盐的种晶(0.103g)。将浆液在45℃下老化≥1h。在≥30min的过程中加入另外的MeCN(1480mL)，以维持40-50℃的内部温度。将浆液在≥2h内冷却至20℃，然后过滤。将湿饼干燥，提供了84.6g的30(作为其四-HCl盐，还包括～6％H2O含量，80.4％产量)。典型的含水量范围为约4至约13％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6,δ):10.83(brs,2H),10.44(brs,2H),10.33(brs,1H),9.33(brs,1H),8.37(s,1H),8.36(s,1H),8.26(d,J＝8.0Hz,1H),8.08(d,J＝0.8Hz,1H),8.06(d,J＝8.0Hz,1H),8.03(d,J＝0.8Hz,1H),8.01(d,J＝8.4Hz,1H),7.98(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.79(dd,J＝8.4,0.4Hz,1H),7.75(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),5.29(dd,J＝8.0,7.6Hz,1H),4.82(d,J＝3.6Hz,1H),4.19(s,1H),3.65(d,J＝10.8Hz,1H),3.14(s,1H),3.12(d,J＝10.8Hz,1H),2.85(dd,J＝13.2,9.6Hz,1H),2.23(dd,J＝12.8,7.6Hz,1H),2.11(m,1H),1.99(d,J＝11.2Hz,1H),1.83(m,1H),1.76(m,1H),1.71(d,J＝10.8Hz,1H),1.67(m,1H),0.84(m,2H),0.70(m,2H).HRMS-ESI+:[M+H]+C35H33N6F2的分析计算值,575.2729；实测值,575.2729。
从CH3CN和含水HCl的混合物中分离作为晶体固体形式的化合物30。
C.酰胺耦合
将EDC-HCl(4.39g)、HOBt(2.06g)、Moc-缬氨酸(4-(1-甲基乙基)-2,5-二氧-，甲氧基羰基)(4.02g)和DMF(50mL)加入烧瓶中。将反应混合物在23℃下搅拌20min。然后将溶液冷却至0℃。将30-HCl盐(5.0g)和N-甲基吗啉(5.03mL)加入反应混合物中。将内含物温热至室温，并且在23℃下搅拌4小时。将水(2.5mL)加入反应混合物中，并且将内含物在23℃下搅拌15小时。加入EtOAc(70mL)和水(100mL)，并使层分离。向有机层中加入EtOAc(50mL)和水(50mL)，混合层，然后分离。用5％NaHCO3(50mL)和水(2x25mL)洗涤有机层。然后将有机层蒸馏至2.5体积(12.5mL)，并冷却至23℃。将丙酮(70mL)加入有机层中。将反应内含物接种化合物31(丙酮溶剂化物)，并搅拌15小时。将内含物过滤，用丙酮(5mL)洗涤湿饼，然后将饼干燥，提供4.78g作为丙酮溶剂化物的31(73％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6,δ):12.29(s,0.1H),12.19(d,J＝4.0Hz,1H),12.14(s,0.2H),11.85(s,1H),8.10(s,0.1H),8.08(s,1H),8.01(s,0.1H),7.963(m,1H),7.955(s,1H),7.89(d,J＝6.4Hz,1H),7.87(s,1H),7.83(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),7.79(dd,J＝7.2,2.8Hz,1H),7.78-7.90(misc.,0.9H),7.70(s,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,1H),7.55(s,1H),7.51(dd,J＝8.8,1.6Hz,1H),7.44(m,0.1H),7.31(d,J＝8.4Hz,1H),7.21(d,J＝8.4Hz,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,0.2H),6.77(m,0.2H),5.34(d,J＝7.6Hz,0.1H),5.20(dd,J＝8.0,5.2Hz,1H),5.18(m,0.1H),4.88(s,0.1H),4.67(d,J＝6.4Hz,1H),4.55(s,1H),4.17(dd,J＝8.0,8.0Hz,1H),4.10(m,0.2H),4.01(dd,J＝8.4,8.0Hz,1H),3.97(m,0.1H),3.82(d,J＝9.6Hz,1H),3.77(s,0.2H),3.71(d,J＝9.6Hz,1H),3.554(s,3H),3.548(s,3H),3.43(s,0.4H),3.20(d,J＝7.6Hz,0.3H),2.77(s,0.1H),2.66(s,1H),2.41(d,J＝8.8Hz,1H),2.22(dd,J＝12.4,8.0Hz,1H),2.13(m,0.4H),2.08(s,6H),2.05(dd,J＝13.2,5.2Hz,1H),1.99(m,2H),1.92(m,1H),1.77(m,2H),1.61(m,0.3H),1.56(m,1H),1.46(d,J＝9.2Hz,1H),1.33(d,J＝10.0Hz,0.1H),0.97(dd,J＝6.4,2.0Hz,3H),0.93(d,J＝6.8Hz,3H),0.88(d,J＝6.4Hz,3H),0.87(d,J＝6.4Hz,3H),0.80-1.05(misc.,2H),0.70(m,1H),0.59(m,2H),0.54(m,1H),0.33(m,0.1H).HRMS-ESI+:[M+H]+C49H55O6N8F2的分析计算值,889.4207；实测值,889.4205。
C.无定形化合物I的分离
将化合物I的丙酮溶剂化物，化合物31(191.4g)，在反应容器中与乙腈(1356g)混合，并且混合直至形成溶液。将该溶液缓慢加入另一个含有强烈搅拌的水(7870g)的反应容器中。将合并的反应混合物在约23℃下搅拌约30分钟。然后过滤固体，并且在约40-45℃下干燥，获得无定形化合物I(146.4g，82％产量)。
实施例11：无定形化合物I的制剂
使用以下讨论的湿法和干法制粒方法制备了含有1mg和10mg无定形化合物I(游离碱)的片剂。
高剪切湿法制粒方法
湿法制粒的制剂含有常用的赋形剂，并且包括填充剂(乳糖和微晶纤维素)、崩解剂、粘合剂和润滑剂。通过高剪切湿法制粒方法制备的制剂组合物呈现于表25中。
表25.无定形化合物I10mg片剂的定量组合物
干法制粒方法
还评价了干法制粒制剂，其组成呈现于表26中。无定形化合物I型干法制粒的口服生物利用率与含有表面活性剂的湿法制粒制剂相等。将典型的赋形剂用于干法制粒方法中，并且包括乳糖和微晶纤维素作为填充剂、崩解剂和润滑剂。使用无水乳糖，替代更常见的乳糖单水合物，以最小化无定形游离碱附近的水的存在。主要制剂的化学和物理稳定性是可接受的，以及所有粉末混合物均一性和片剂度量。
表26.无定形化合物I10mg片剂的定量组合物
此外，用基于羟丙基纤维素的OpardyWhiteYS-1-18202A对无定形化合物I1mg和10mg片剂进行膜包衣，并且其组成呈现于表27中。
表27.无定形化合物I1mg和10mg片剂的定量组合物
实施例12：化合物ID-酒石酸盐的制剂
使用以下讨论的干法制粒方法制备了含有10mg化合物ID-酒石酸盐的片剂。
干法制粒方法
该方法保持关键的重要方面是高速锥形球磨机步骤，这是分散小的但相对硬的化合物ID-酒石酸盐聚集物必需的。鉴于片剂相对低的载药量，研磨程序也用来维持可接受的混合物和片剂内含物均一性。此外，用基于羟丙基纤维素的OpardyWhiteYS-1-18202A对化合物ID-酒石酸盐10mg片剂进行膜包衣，并且其组成呈现于表28中。
表28.化合物ID-酒石酸盐10mg片剂的定量组合物
使用以上所述的干法制粒方法制备了含有10mg化合物ID-酒石酸盐但具有不同于表28中所述的组成的片剂和含有30mg化合物ID-酒石酸盐的片剂。它们的组成呈现于表29中。
表29.化合物ID-酒石酸盐10mg和30mg片剂的定量组成

Claims (99)

1.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯单丙酮溶剂化物(化合物I型II)，所述化合物I型II通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.2、12.7和20.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
2.根据权利要求1所述的化合物I型II，其中所述衍射图进一步包括在7.5、11.4和20.0°2θ±0.2°2θ的峰。
3.根据权利要求1所述的化合物I型II，其中所述衍射图基本上如图4中所示。
4.根据权利要求1所述的化合物I型II，通过包括约130℃处的吸热峰的差示扫描量热法曲线来表征。
5.根据权利要求4所述的化合物I型II，其中所述差示扫描量热法曲线基本上如图5中所示。
6.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯(化合物I型III)，所述化合物I型III通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.4、14.2和21.6°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
7.根据权利要求6所述的化合物I型III，其中所述衍射图进一步包括在8.3、15.0和20.4°2θ±0.2°2θ的峰。
8.根据权利要求6所述的化合物I型III，其中所述衍射图基本上如图7中所示。
9.根据权利要求6所述的化合物I型III，通过包括约176℃处的吸热峰的差示扫描量热法曲线来表征。
10.根据权利要求9所述的化合物I型III，其中所述差示扫描量热法曲线基本上如图8中所示。
11.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯D-酒石酸盐(化合物ID-酒石酸盐)，所述化合物ID-酒石酸盐通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：4.0、10.3和19.7°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
12.根据权利要求11所述的化合物ID-酒石酸盐，其中所述衍射图进一步包括在9.1、12.7和24.0°2θ±0.2°2θ的峰。
13.根据权利要求11所述的化合物ID-酒石酸盐，其中所述衍射图基本上如图9中所示。
14.根据权利要求11所述的化合物ID-酒石酸盐，通过包括约221℃处的吸热峰的差示扫描量热法曲线来表征。
15.根据权利要求14所述的化合物ID-酒石酸盐，其中所述差示扫描量热法曲线基本上如图10中所示。
16.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙酸乙酯(化合物I型IV)，所述化合物I型IV通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：15.1、17.2和21.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
17.根据权利要求16所述的化合物I型IV，其中所述衍射图进一步包括在5.6、13.5和25.8°2θ±0.2°2θ的峰。
18.根据权利要求17所述的化合物I型IV，其中所述衍射图基本上如图14中所示。
19.根据权利要求16所述的化合物I型IV，通过包括约167℃处的吸热峰的差示扫描量热法曲线来表征。
20.根据权利要求19所述的化合物I型IV，其中所述差示扫描量热法曲线基本上如图15中所示。
21.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙酸乙酯溶剂化物(化合物I型V)，所述化合物I型V通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：14.4、15.3和17.4°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
22.根据权利要求21所述的化合物I型V，其中所述衍射图进一步包括在8.6、11.8和18.9°2θ±0.2°2θ的峰。
23.根据权利要求22所述的化合物I型V，其中所述衍射图基本上如图16中所示。
24.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙酸异丙酯溶剂化物(化合物I型VI)，所述化合物I型VI通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：5.6、13.3和21.1°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
25.根据权利要求24所述的化合物I型VI，其中所述衍射图进一步包括在13.8、14.8和16.9°2θ±0.2°2θ的峰。
26.根据权利要求25所述的化合物I型VI，其中所述衍射图基本上如图17中所示。
27.根据权利要求24所述的化合物I型VI，通过包括约168℃处的吸热峰的差示扫描量热法曲线来表征。
28.根据权利要求27所述的化合物I型VI，其中所述衍射图基本上如图18中所示。
29.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙酸甲酯溶剂化物(化合物I型VII)，所述化合物I型VII通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：11.0、13.8和22.2°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
30.根据权利要求29所述的化合物I型VII，其中所述衍射图进一步包括在17.0、19.0和19.4°2θ±0.2°2θ的峰。
31.根据权利要求30所述的化合物I型VII，其中所述衍射图基本上如图19中所示。
32.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯(化合物I型VIII)，所述化合物I型VIII通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：9.4、15.5和17.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
33.根据权利要求32所述的化合物I型VIII，其中所述衍射图进一步包括在14.6、12.2和18.8°2θ±0.2°2θ的峰。
34.根据权利要求33所述的化合物I型VIII，其中所述衍射图基本上如图20中所示。
35.根据权利要求32所述的化合物I型VIII，通过包括约171℃处的吸热峰的差示扫描量热法(DSC)曲线来表征。
36.根据权利要求35所述的化合物I型VIII，其中所述差示扫描量热法曲线基本上如图21中所示。
37.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲酸乙酯溶剂化物(化合物I型IX)，所述化合物I型IX通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：13.8、19.2和22.0°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
38.根据权利要求37所述的化合物I型IX，其中所述衍射图进一步包括在8.2、11.0和17.1°2θ±0.2°2θ的峰。
39.根据权利要求38所述的化合物I型IX，其中所述衍射图基本上如图22中所示。
40.根据权利要求37所述的化合物I型IX，通过包括约177℃处的吸热峰的差示扫描量热法曲线来表征。
41.根据权利要求40所述的化合物I型IX，其中所述差示扫描量热法曲线基本上如图23中所示。
42.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙腈溶剂化物(化合物I型X)，所述化合物I型X通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.4、6.9和10.3°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
43.根据权利要求42所述的化合物I型X，其中所述衍射图进一步包括在11.2、20.0和22.4°2θ±0.2°2θ的峰。
44.根据权利要求43所述的化合物I型X，其中所述衍射图基本上如图24中所示。
45.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯四氢呋喃溶剂化物(化合物I型XI)，所述化合物I型XI通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2,6.3,和9.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
46.根据权利要求45所述的化合物I型XI，其中所述衍射图进一步包括在19.1、20.6和22.5°2θ±0.2°2θ的峰。
47.根据权利要求46所述的化合物I型XI，其中所述衍射图基本上如图25中所示。
48.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲乙酮溶剂化物(化合物I型XII)，所述化合物I型XII通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、6.4和20.6°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
49.根据权利要求48所述的化合物I型XII，其中所述衍射图进一步包括在9.6、18.1和22.5°2θ±0.2°2θ的峰。
50.根据权利要求49所述的化合物I型XII，其中所述衍射图基本上如图26中所示。
51.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯四氢呋喃溶剂化物(化合物I型XIII-THF)，所述化合物I型XIII-THF通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、3.5和7.0°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
52.根据权利要求51所述的化合物I型XIII-THF，其中所述衍射图进一步包括在8.6、12.1和19.8°2θ±0.2°2θ的峰。
53.根据权利要求52所述的化合物I型XIII-THF，其中所述衍射图基本上如图27中所示。
54.根据权利要求51所述的化合物I型XIII-THF，通过包括约155℃处和173℃处的吸热峰的差示扫描量热法曲线来表征。
55.根据权利要求54所述的化合物I型XIII-THF，其中所述差示扫描量热法曲线基本上如图28中所示。
56.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲乙酮溶剂化物(化合物I型XIII-MEK)，所述化合物I型XIII-MEK通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、3.5和7.0°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
57.根据权利要求56所述的化合物I型XIII-MEK，其中所述衍射图进一步包括在8.6、12.1和19.8°2θ±0.2°2θ的峰。
58.根据权利要求57所述的化合物I型XIII-MEK，其中所述衍射图基本上如图29中所示。
59.根据权利要求56的化合物I型XIII-MEK，通过包括约155℃处和173℃处的吸热峰的差示扫描量热法曲线来表征。
60.根据权利要求59的化合物I型XIII-MEK，其中所述差示扫描量热法曲线基本上如图30中所示。
61.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲基叔-丁醚溶剂化物(化合物I型XIV)，所述化合物I型XIV通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：6.9、10.3和22.4°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
62.根据权利要求61所述的化合物I型XIV，其中所述衍射图进一步包括在3.4、11.2和20.1°2θ±0.2°2θ的峰。
63.根据权利要求62所述的化合物I型XIV，其中所述衍射图基本上如图31中所示。
64.晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯(化合物I型XV)，所述化合物I型XV通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.1、12.8和20.8°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的。
65.根据权利要求64所述的化合物I型XV，其中所述衍射图进一步包括在9.1、10.9和21.3°2θ±0.2°2θ的峰。
66.根据权利要求65所述的化合物I型XV，其中所述衍射图基本上如图32中所示。
67.根据权利要求64所述的化合物I型XV，通过包括约180℃处的吸热峰的差示扫描量热法曲线来表征。
68.根据权利要求67所述的化合物I型XV，其中所述差示扫描量热法曲线基本上如图33中所示。
69.无定形(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯，通过包括约160℃的玻璃化转变温度的调制差示扫描量热法曲线来表征。
70.根据权利要求69所述的无定形化合物I，其中所述调制差示扫描量热法曲线基本上如图35中所示。
71.根据权利要求69所述的无定形化合物I，通过基本上如图34中的上曲线所示的13C-固态NMR谱来表征。
72.根据权利要求69所述的无定形化合物I，通过包括939cm-1处和1552cm-1处的峰的傅立叶-转换拉曼谱来表征。
73.根据权利要求72所述的无定形化合物I，其中所述傅立叶-转换拉曼谱基本上如图36中所示。
74.一种药物组合物，所述药物组合物包含选自由如权利要求1所述的化合物I型II、如权利要求6所述的化合物I型III、如权利要求11所述的化合物ID-酒石酸盐、如权利要求16所述的化合物I型IV、如权利要求21所述的化合物I型V、如权利要求24所述的化合物I型VI、如权利要求29所述的化合物I型VII、如权利要求32所述的化合物I型VIII、如权利要求37所述的化合物I型IX、如权利要求42所述的化合物I型X、如权利要求45所述的化合物I型XI、如权利要求48所述的化合物I型XII、如权利要求51所述的化合物I型XII-THF、如权利要求56所述的化合物I型XIII-MEK、如权利要求61所述的化合物I型XIV和如权利要求64所述的化合物I型XV组成的组中的化合物，和药物学上可接受的赋形剂。
75.一种药物组合物，所述药物组合物包含通过包括约160℃的玻璃转化温度的差示扫描量热法(DSC)曲线来表征的无定形(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯，和药物学上可接受的赋形剂。
76.一种用于治疗患有HCV的患者的方法，该方法包括将治疗有效量的如权利要求1所述的化合物I型II、如权利要求6所述的化合物I型III、如权利要求11所述的化合物ID-酒石酸盐、如权利要求16所述的化合物I型IV、如权利要求21所述的化合物I型V、如权利要求24所述的化合物I型VI、如权利要求29所述的化合物I型VII、如权利要求32所述的化合物I型VIII、如权利要求37所述的化合物I型IX、如权利要求42所述的化合物I型X、如权利要求45所述的化合物I型XI、如权利要求48所述的化合物I型XII、如权利要求51所述的化合物I型XII-THF、如权利要求56所述的化合物I型XIII-MEK、如权利要求61所述的化合物I型XIV、如权利要求64所述的化合物I型XV或如权利要求69所述的无定形化合物I给药于患者。
77.根据权利要求76所述的方法，包括进一步将至少一种抗-HCV剂给药于患者。
78.根据权利要求77所述的方法，其中所述抗-HCV剂是选自由病毒唑、组成的组的化合物。
79.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯单丙酮溶剂化物(化合物I型II)的方法，所述化合物I型II通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.2、12.7和20.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
(1)将晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯二丙酮溶剂化物(化合物I型I)部分去溶剂化，所述化合物I型I通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：6.8、12.5和19.8°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，
由此形成化合物I型II。
80.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯(化合物I型III)的方法，所述化合物I型III通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.4、14.2和21.6°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
(1)将晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯单丙酮溶剂化物(化合物I型II)加热至约30-120℃，所述化合物I型II通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.2、12.7和20.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，
由此形成化合物I型III。
81.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯D-酒石酸盐(化合物ID-酒石酸盐)的方法，所述化合物ID-酒石酸盐通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：4.0、10.3和19.7°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
(1)将D-酒石酸接触溶剂中的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸，
由此形成化合物ID-酒石酸盐。
82.根据权利要求81所述的方法，进一步包括步骤：
(2)分离化合物ID-酒石酸盐。
83.根据权利要求81所述的方法，其中所述溶剂选自由醇、醚、乙酸烷基酯，及其组合组成的组。
84.根据权利要求83所述的方法，其中所述溶剂选自由异丙醇、乙酸乙酯、乙醇、四氢呋喃、甲醇，及其组合组成的组。
85.根据权利要求84所述的方法，其中所述溶剂是异丙醇。
86.根据权利要求84所述的方法，其中所述溶剂是乙醇。
87.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙酸乙酯溶剂化物(化合物I型IV)的方法，所述化合物I型IV通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：15.1、17.2和21.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求6所述的化合物I型III接触乙酸乙酯。
88.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙酸乙酯溶剂化物(化合物I型V)的方法，所述化合物I型V通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：14.4、15.3和17.4°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求16所述的化合物I型IV去溶剂化。
89.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙酸异丙酯溶剂化物(化合物I型VI)的方法，所述化合物I型VI通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：5.6、13.3和21.1°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求6所述的化合物I型III接触乙酸异丙酯。
90.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙酸甲酯溶剂化物(化合物I型VII)的方法，所述化合物I型VII通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：11.0、13.8和22.2°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求6所述的化合物I型III接触乙酸甲酯。
91.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲酸甲酯溶剂化物(化合物I型VIII)的方法，所述化合物I型VIII通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：9.4、15.5和17.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求29所述的化合物I型VII去溶剂化。
92.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲酸乙酯溶剂化物(化合物I型IX)的方法，所述化合物I型IX通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：13.8、19.2和22.0°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求6所述的化合物I型III接触甲酸乙酯。
93.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯乙腈溶剂化物(化合物I型X)的方法，所述化合物I型X通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.4、6.9和10.3°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求6所述的化合物I型III接触乙腈。
94.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯四氢呋喃溶剂化物(化合物I型XI)的方法，所述化合物I型XI通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、6.3和9.5°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求6所述的化合物I型III接触四氢呋喃。
95.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲乙酮溶剂化物(化合物I型XII)的方法，所述化合物I型XII通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、6.4和20.6°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求6所述的化合物I型III接触甲乙酮。
96.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯四氢呋喃溶剂化物(化合物I型XIII-THF)的方法，所述化合物I型XIII-THF通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、3.5和7.0°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求45所述的化合物I型XI去溶剂化。
97.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲乙酮溶剂化物(化合物I型XIII-MEK)的方法，所述化合物I型XIII-MEK通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：3.2、3.5和7.0°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求48所述的化合物I型XII去溶剂化。
98.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯甲基叔-丁醚溶剂化物(化合物I型XIV)的方法，所述化合物I型XIV通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：6.9、10.3和22.4°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求32的化合物I型VIII接触甲基叔-丁醚。
99.一种用于制备晶形的(1-{3-[6-(9,9-二氟-7-{2-[5-(2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-5-氮杂-螺环[2.4]庚-6-基]-3H-咪唑-4-基}-9H-芴-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯(化合物I型XV)的方法，所述化合物I型XV通过包括以下峰的X-射线粉末衍射图来表征：12.1、12.8和20.8°2θ±0.2°2θ，如在波长下，使用Cu-Kα辐射，在衍射仪上测定的，所述方法包括步骤：
将根据权利要求42所述的化合物I型X去溶剂化。
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