CN105420230A

CN105420230A - 一种磁珠法提取核酸的裂解液

Info

Publication number: CN105420230A
Application number: CN201610022017.6A
Authority: CN
Inventors: 王海滨; 王棽; 周其玲; 冯小霞
Original assignee: Beijing Nagene Diagnostic Reagent Co Ltd
Current assignee: Beijing Nagene Diagnostic Reagent Co Ltd
Priority date: 2016-01-14
Filing date: 2016-01-14
Publication date: 2016-03-23
Anticipated expiration: 2036-01-14
Also published as: CN105420230B

Abstract

本发明提供了一种磁珠法提取核酸的裂解液，所述裂解液由0.2～0.4N氢氧化钠、0.3～0.6M氯化钾、0.01～0.05％N-月桂酰肌氨酸钠、5mM？EDTA、0.3～0.6M？Tris-HCL和1～2％曲通X-100组成。本发明磁珠法核酸提取的裂解液可以充分、有效地裂解细胞，加快裂解进程，同时，保护核酸免受氧化，避免DNA自身二聚体形成。此外，本发明裂解液性质温稳定，不受季节、温度、盐离子浓度等影响，并能充分配合磁珠进行核酸吸附，使提取核酸的效果达到最优化。本发明提供的磁珠核酸提取的洗涤液可以有效去除残留的杂质，避免核酸的丢失，且少量残余的洗涤液不会影响PCR扩增结果，保证检测结果的准确。

Description

一种磁珠法提取核酸的裂解液

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别涉及一种磁珠法提取核酸的裂解液。

背景技术

核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作。核酸提取是指利用物理、化学方法将核算从载体中分离出来的过程。目前，在国内大部分医疗机构及科研领域均需要从大批量血液样本中提取核酸。因此，为了保证抽提出高浓度的核酸，人们不断开发出新的技术。

核酸提取方法繁多，包括传统的酚-氯仿法、盐析法、滤膜离心柱法等。这些方法各有其优缺点，但总体上核酸提取的效果差强人意。磁珠法是通过磁性硅胶吸附细胞，随后加入细胞裂解液裂解细胞。从细胞中游离出来的核酸被吸附到磁性颗粒表面，而蛋白等分子不被吸附而留在溶液中。在磁场作用下，磁性颗粒与液体分离。此时，弃去含有杂质的液体，并用相应的洗脱液洗脱磁珠上吸附的核酸。该方法不需离心，操作简单，可以使核酸提取效率显著升高，已成为目前新兴的核酸提取技术。

在本领域中，磁珠法提取核酸普遍使用的裂解液为含有胍盐的裂解液。胍盐是一种强蛋白质变性剂，采用高浓度的胍盐来裂解细胞，可迅速破坏细胞结构，裂解细胞，使核酸从蛋白质中释放出来。磁珠法提取核酸所使用的磁珠，表面包裹了各种活性集团，有研究表明裂解液中的离子强度、pH等条件会直接影响这些功能集团的活性，进而影响磁珠吸附核酸的量。有研究表明，当胍盐裂解液稀释度降低到60％以下时，样品DNA回收效率明显降低。目前临床常用的检测样本中，往往一些样本(如脑组织样本)需先经其他方法处理，再提取纯化核酸。面对这种情况，就必须控制加入经前处理的样本量，以保证胍盐液的浓度，避免因过量稀释而影响磁珠与核酸的结合，从而导致核酸回收效率降低，检测结果不准确。此外，胍盐成分不稳定，尤其易受室温、季节温度影响，导致裂解效果大相径庭。因此，面对现有技术中的这些缺点，市场上急需要一种用途广泛，使用方便，裂解效率更高的新型磁珠法提取核酸的裂解液。

与此同时，磁珠法提取核酸的洗涤液中往往采用含有乙醇的低盐溶液，然而在经过最后一步洗涤过程中，难于将乙醇去除干净，而乙醇是很多反应，特别是PCR反应的中度抑制物。因此，残留的乙醇将会严重影响PCR扩增的实验结果。此外，用含有乙醇的洗涤液清洗磁珠时，会造成磁珠在乙醇溶剂中的剧烈蹦跳，极易导致污染。因此，如何解决这一问题，以保证检测结果的准确性，成为亟待解决的重要问题。

发明内容

本发明的一个方面是针对现有技术中磁珠法核酸提取的裂解液效率低的缺点，提供了一种磁珠法提取核酸的裂解液。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：

一种磁珠法提取核酸的裂解液，所述裂解液由0.2～0.4N氢氧化钠、0.3～0.6M氯化钾、0.01～0.05％N-月桂酰肌氨酸钠、5mMEDTA、0.3～0.6MTris-HCL和1～2％曲通X-100组成。

在本发明技术方案中，发明人创造性地使用特定量的曲通X-100和N-月桂酰肌氨酸钠配合氢氧化钠进行核酸提取。不仅可以充分裂解细胞，同时可加快裂解速度快，整个裂解时间仅需要5～10分钟，与现有技术中的裂解方法相比，大大缩短了操作时间。同时，使用曲通X-100和终浓度N-月桂酰肌氨酸钠可帮助氢氧化钠彻底裂解细胞，使核酸充分释放，并帮助磁珠有效吸附核酸，使核酸和蛋白有效地分离。

并且，在本发明技术方案中不使用胍盐进行核酸提取，从而可以有效避免胍盐易受室温、季节温度、盐离子浓度等影响造成的核酸提取效果下降。本发明裂解液在普通实验条件下即可进行，且能充分配合磁珠进行核酸的有效吸附，使提取核酸的效果达到最优化，并保证实验结果真实可靠。

作为优选，所述裂解液由所述裂解液由0.25～0.35N氢氧化钠、0.4～0.5M氯化钾、0.02～0.04％N-月桂酰肌氨酸钠、5mMEDTA、0.4～0.5MTris-HCL和1～2％曲通X-100组成。

更优选地，所述裂解液由0.3N氢氧化钠、0.45M氯化钾、0.03％N-月桂酰肌氨酸钠、5mMEDTA、0.45MTris-HCL和1％曲通X-100组成。

作为优选，在本发明的实施方式中，所述裂解液还包括3～8mMDTT。在本发明技术方案中还可以加入3～8mmol的DTT参与核酸的提取，这样可以有效保护核酸不被氧化，而且可防止DNA自身二聚体的形成。

作为优选，所述裂解液还包括不多于0.001wt％的提取指示剂。该提取指示剂可以起到良好的指示作用，防止实验操作中的错加、漏加、多加。其中，所述提取指示剂选自溴酚蓝、石绿、甲基红、甲基橙、罗丹名、溴甲酚绿、品红、二甲酚橙、二苯胺或刚果红中的一种。

更优选地，所述提取指示剂为溴酚蓝。溴酚蓝可以起到良好的指示剂作用，在本发明方法的裂解液中，在室温条件下呈蓝色，与待检测样品混合后颜色减退，从而提示操作者样品的加入情况，避免因操作问题带来的样本漏加、错加、多加的问题。

所述磁珠法提取核酸中的磁珠可以为市售磁珠法核酸提取中所使用的任意常规磁珠。磁珠和裂解液可以按照任意比例混合。作为优选，磁珠和裂解液的体积混合比例为1～1.5：100。作为优选，在本发明的一个实施方式中，所述磁珠按照以下方法制备：

步骤A)纳米微球的制备：

在氩气保护下，在含有13～17g硫酸亚铁七水合物和8～12g三氯化铁六水合物的水溶液中，每间隔10分钟滴加1ml0.4M～0.6M氢氧化钠溶液；当反应溶液变为胶状乳浊液时，每间隔20分钟滴加1ml0.2M～0.3M氢氧化钠溶液，摇床持续摇匀，摇床速度100转/分钟，待出现磁性后，继续在氩气保护下反应4～10小时；随后在所得溶液中加入氯化钠，使氯化钠终浓度为0.5M～1M；室温静置18～36小时后使用去离子水漂洗至溶液pH为7；再使用0.2M～0.3M的氢氧化钠溶液配成磁珠体积百分比为20％～40％的磁珠悬液，即得；

步骤B)通过表面修饰制备纳米磁珠：

将步骤A)所得磁珠悬液在50℃～60℃条件下通入氩气并均匀搅拌；加入60g九水硅酸钠搅拌至完全溶解，每3min滴加0.5ml冰乙酸，摇床持续摇匀，摇床速度100转/分钟，搅拌2h；当pH值为6～8时，使用3倍于所述磁珠悬液体积的0.3M氯化钠溶液漂洗5次，再使用0.3M氯化钠溶液配制成磁珠体积百分比为20％～40％的磁珠悬液；在得到的磁珠悬液中加入30gPEG-1750，摇床持续摇匀，摇床速度100转/分钟，搅拌24h；使用3倍于所述磁珠悬液体积的0.3M的氯化钠溶液漂洗5次；再使用0.3M氯化钠溶液和叠氮钠配制成磁珠体积百分比为40％-60％的磁珠悬液，即得所述纳米磁珠。

通过以上方法制备的磁珠具有如下优势：适用性广，能纯化多种不同样品；可通过改变反应条件能控制磁珠大小和表面修饰基团的数量；可在水相中呈表面颗粒均匀，分散性好。区别其它有机溶剂得到的磁珠，以上方法制备的磁珠核酸吸附量大，制备方法简单，成本低，无需复杂大型设备，适合实验室或工业化生产。

本发明的另一个方面是提供了一种磁珠法核酸提取的试剂盒。该试剂盒包括上述裂解液和洗涤液。

其中，所述洗涤液可以为任意市售核酸提取所用洗涤液。作为优选，所述洗涤液为0.3～0.6M氯化钾溶液，所述洗涤液的pH值为4～5。

作为优选，在本发明中，用乙酸将所述洗涤液的pH值调整为4～5。

在本发明中，使用0.3～0.6M氯化钾作为洗涤液的主要成分，其不含有乙醇。以PCR反应为例，乙醇是PCR反应的中度抑制物，少量残存会影响PCR扩增的实验结果。此外，磁珠在含有乙醇的溶液中不稳定，易蹦跳而导致污染。核酸在偏酸性的氯化钾中溶解率低，避免核酸的丢失，使用本发明洗涤液仅需洗涤一次，且少量残余液不会影响PCR扩增的实验结果，保证实验结果的准确有效。

为了便于观察操作过程中残液是否吸净，防止多加、漏加、错加等操作失误，所述洗涤液还包括不多于0.001wt％的洗涤指示剂，所述洗涤指示剂选自溴酚蓝、石绿、甲基红、甲基橙、罗丹名、溴甲酚绿、品红、二甲酚橙、二苯胺或刚果红中的一种。

作为优选，所述洗涤指示剂与以上所述提取指示剂不同。

更优选地，所述洗涤指示剂为石绿。

由于本发明试剂盒中提供了特殊的裂解液和洗涤液，因此在其应用于分子生物学检测，特别是PCR检测中，洗涤过程只需要一步即可完成，并且无需放置时间，既减少了操作过程中发生污染的可能性，又节约了检测时间。

本发明的另一个方面是提供一种上述磁珠法提取核酸的裂解液的应用。所述裂解液可用于提取细胞、细菌、血清、血浆、唾液、尿液或胸腹水中的核酸，优选为血清或血浆，更优选为在PCR检测中提取待测样品的细胞、细菌、血清、血浆、唾液、尿液或胸腹水中的核酸。

作为优选，所述PCR的方法为：将混合有磁珠的裂解液和待检测样品加入到PCR扩增管中，混匀，静置，进行磁吸后吸出混合液，将得到的磁珠洗涤一次；在上述PCR扩增管中加入配制好的PCR反应液，对目标核酸进行PCR反应。

更优选地，所述PCR方法的步骤包括：

步骤1)将混合有磁珠的裂解液加入到PCR扩增管中；

步骤2)将待检测样品加入到所述混合有磁珠的裂解液中，混匀，室温静置5～10分钟；

步骤3)将所述PCR扩增管放置在磁力架上，待磁珠全部吸附至一侧后将混合液吸出；

步骤4)将PCR扩增管从磁力架上取下，将洗涤液加入步骤3)得到的PCR扩增管中，再将其放回磁力架上，待磁珠吸附至一侧后，立即将洗涤液吸走；

步骤5)将配制好的PCR反应液加入到步骤4)得到的PCR扩增管中，使磁珠与所述PCR反应液充分混匀，离心，进行PCR反应。

更优选地，所述PCR反应为实时荧光定量PCR反应。

本发明的另一个方面是提供一种上述磁珠法提取核酸的试剂盒的应用。所述试剂盒用于PCR、酶切、分子杂交、文库构建或Southern杂交过程中的核酸提取。

本发明的有益效果为：

本发明磁珠法核酸提取的裂解液可以充分、有效地裂解细胞，加快裂解进程，同时，保护核酸免受氧化，避免DNA自身二聚体形成。此外，本发明裂解液性质温稳定，不受季节、温度、盐离子浓度等影响，并能充分配合磁珠进行核酸吸附，使提取核酸的效果达到最优化。本发明提供的磁珠核酸提取的洗涤液可以有效去除残留的杂质，避免核酸的丢失，且少量残余的洗涤液不会影响PCR扩增结果，保证检测结果的准确。

附图说明

图1为本发明实施例1的方法检测HBVDNA的结果图；

图2为本发明实施例2的方法检测HBVDNA的结果图；

图3为本发明实施例3的方法检测HBVDNA的结果图；

图4为使用本发明裂解液进行磁珠法提取扩增HBVDNA国家标准品与使用传统胍盐裂解液进行磁珠法提取扩增HBVDNA国家标准品的结果比较图；

图5为使用本发明不含有乙醇的洗涤液与使用常规洗涤液后对HBVDNA国家标准品PCR扩增的影响比较图；

图6为实施例6中使用本发明裂解液进行磁珠法提取扩增HBVDNA的结果图；

图7为实施例6中使用其他裂解液进行磁珠法提取扩增HBVDNA的结果图。

具体实施方式

本发明公开了一种磁珠法提取核酸的裂解液，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。需要特别指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明，并且相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围的基础上对本文所述内容进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。

本发明中使用的术语“磁珠”，是指磁性微球(简称磁珠)，现已广泛用于细胞分离、酶的固定、核酸纯化等多个领域。

本发明中使用的术语“裂解液”，即“lysisbuffer”，是指为了使样品中的核酸游离在裂解体系中所需加入的一种配制液体。

本发明中使用的术语“洗涤液”，即“washbuffer”，是指可以去除核酸以外杂质所需加入的试剂。

本发明中使用的术语“指示剂”，是化学试剂中的一类，其在一定介质条件下，其颜色能发生变化。

本发明中使用的例如“0.01～0.05％N-月桂酰肌氨酸钠”、“1～2％曲通X-100”中的百分比是指物质的纯度。

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

实验材料与仪器

以下实施例中所用的PCR扩增仪器为上海宏石医疗科技有限公司生产的实时荧光定量PCR仪。

样本采用临床化验室HBVDNA定量检测后的血清。

为了详细说明本发明方法的具体实施方式中实施例1和实施例2，分别按照以下浓度配制1L裂解液的工作液以便后续操作使用：方案1)0.2N氢氧化钠、0.3M氯化钾、0.01％N-月桂酰肌氨酸钠、5mMEDTA、0.3MTris-HCL、1％曲通-100、3mMDTT和0.001wt％的溴酚蓝。方案2)0.4N氢氧化钠、0.6M氯化钾、0.05％N-月桂酰肌氨酸钠、5mMEDTA、0.6MTris-HCL、2wt％曲通-100、8mMDTT和0.001wt％的溴酚蓝。

为了详细说明本发明方法的具体实施方式中实施例1和实施例2，分别按照磁珠和裂解液的体积比为1：100和1.5：100的比例将磁珠加入上述已配制好的裂解液中，即混合有磁珠的裂解液方案1)1L裂解液中加入10ml自然沉淀24小时的磁珠，混匀。混合有磁珠的裂解液方案2)1L裂解液中加入15ml自然沉淀24小时的磁珠，混匀。

为了详细说明本发明方法的具体实施方式中实施例1和实施例2，分别按照以下组成成分配制1L的洗涤液工作液以便后续操作使用：洗涤液方案1)0.3M氯化钾、0.001wt％的石绿、用乙酸将pH值调至4。洗涤液方案2)0.6M氯化钾、0.001wt％的石绿、用乙酸将pH值调至5。

实施例1：HBVDNA的实时荧光定量PCR检测

分别采用根据上述混合有磁珠的裂解液方案1)和洗涤液方案1)配制的试剂对临床诊断明确且经过检测HBVDNA定量值为2×10¹IU/ml乙肝患者血清进行如下步骤的操作：

(1)PCR裂解液的分装：将配制好的混有磁珠的裂解液按照每管100μl分装到专用PCR管中。

(2)加样：取100μl的血清加入到上述分装有混合有磁珠的裂解液的PCR管中，用吸头轻轻吹打混匀5次，室温静置10分钟。

(3)吸弃液体：将上述PCR管放置到八联排磁力架上，静置2分钟，用移液器在磁珠对侧将液体吸掉，注意勿吸掉磁珠。

(4)洗涤：从八联排磁力架上取下PCR管，并将已配制好的洗涤液每管加入200μl，重新放置到八联排磁力架上，无需等候时间直接用移液器或负压泵吸弃洗涤液，注意吸净残液。

(5)将2.0μl(1U/μl)单位的TaqDNA聚合酶与38.0μlPCR反应液(所述反应液为包括浓度40nmol/μl上下游引物和30nmol/μl探针；20nmol/μl的Tris碱；20mmol/μl氯化镁；50mmol/μl氯化钾、200umol/μl的dNTP和0.001wt％的石绿指示剂的荧光PCR扩增试剂混合液)混匀，加入到步骤(4)得到的PCR扩增管中，封盖，轻轻将磁珠弹下来，保证磁珠与PCR反应液彻底混匀。

其中正向引物序列为HBVF5’-TAGGAGGCTGTAGGCATAAATTGG-3’，反向引物序列为HBVR5’-GCACAGCTTGGAGGCTTGT-3’，探针序列为HBVP5’-FAM-TCACCTCTGCCTAATC-MGB-3’。

(6)离心：水平离心机3000RPM离心45秒。

(7)将上述得到的PCR管放置于PCR仪内进行扩增。

扩增程序：37℃，2min；95℃，5分钟；进行45-50循环的95℃，10秒钟和61℃，45秒钟，在61℃检测荧光信号。

实验结果如图1所示，结果表明，按照本实例的试剂配比方案,可以有效准确检测出HBVDNA定量值为2×10¹IU/ml的乙肝患者血清标本。

实施例2：HBVDNA的实时荧光定量PCR检测

分别采用根据上述混合有磁珠的裂解液方案2)和洗涤液方案2)配制的试剂对临床诊断明确且经过检测HBVDNA定量值为2×10¹IU/ml乙肝患者血清进行如下步骤的操作：

(2)加样：取100μl的血清加入到上述分装有混合有磁珠的裂解液的PCR管中，用吸头轻轻吹打混匀5次，室温静置5分钟。

其中正向引物序列为HBVF5’-TAGGAGGCTGTAGGCATAAATTGG-3’，反向引物序列为HBVR5’-GCACAGCTTGGAGGCTTGT-3’，探针序列为HBVP5’-TCACCTCTGCCTAATC-3’。

(6)离心：水平离心机3000RPM离心45秒。

(7)将上述得到的PCR管放置于PCR仪内进行扩增。

实验结果如图2所示，结果表明，按照本实例的试剂配比方案,可以有效准确检测出HBVDNA定量值为2×10¹IU/ml的乙肝患者血清标本。

实施例3：HBVDNA的实时荧光定量PCR检测

按照以下组分比例配制混合有磁珠的裂解液和洗涤液：

0.3N氢氧化钠、0.45M氯化钾、0.03％N-月桂酰肌氨酸钠、5mMEDTA、0.45MTris-HCL、1％曲通X-100、3mMDTT和0.001wt％的溴酚蓝。

按照磁珠和裂解液的体积比为1：100加入自然沉淀24小时的磁珠，混匀。

洗涤液：0.3M氯化钾、0.001wt％的石绿、用乙酸将pH值调至4。

使用以上裂解液和洗涤液对临床诊断明确且经过检测HBVDNA定量值为2×10¹IU/ml乙肝患者血清进行如下步骤的操作：

(6)离心：水平离心机3000RPM离心45秒。

(7)将上述得到的PCR管放置于PCR仪内进行扩增。

实验结果如图3所示，结果表明，按照本实例的试剂配比方案,可以有效准确检测出HBVDNA定量值为2×10¹IU/ml的乙肝患者血清标本。

如图3所示，使用本实施例的裂解液和洗涤液对2×10¹IU/ml的乙肝患者血清标本进行检测时，不仅可以有效对其定量，并且其PCR的效率高于实施例1和实施例2的PCR效率。

实施例4：使用本发明裂解液与使用现有技术中胍盐裂解液的比较

为了验证本发明裂解液与胍盐裂解液之间的差异，采用胍盐裂解液的基础配方进行配制：5M异硫氰酸胍、50mmTris-HCL、20％TritonX-100。

除了分别使用本发明实施例3的裂解液和按照以上组分配制的胍盐裂解液以外，利用与实施例3相同的方法对临床诊断明确且经过检测HBVDNA定量值为2×10⁷IU/ml和20IU/ml的乙肝患者血清进行实时荧光定量PCR检测。

结果如图4所示，实验结果表明，使用本发明的裂解液提取HBVDNA的扩增曲线梯度明显优于使用胍盐裂解液的扩增曲线梯度。无论是在HBVDNA浓度为2×10⁷IU/ml，还是再HBVDNA浓度在20IU/ml时，本发明扩增曲线的Ct值要比胍盐裂解液扩增曲线的Ct值提前至少1个Ct值。

实施例5：使用本发明洗涤液与使用现有技术中洗涤液的比较

为了验证乙醇对核酸提取的影响，使用本发明不含乙醇的洗涤液与传统含乙醇的洗涤液进行比较。其中含乙醇的洗涤液配制方法：20mMNaCl、2mMTris-HCl、80％乙醇。

除了分别使用本发明实施例3的洗涤液和按照以上组分配制的常规洗涤液以外，利用与实施例3相同的方法对临床诊断明确且经过检测HBVDNA定量值为2×10⁷IU/ml、2×10³IU/ml和20IU/ml的乙肝患者血清进行实时荧光定量PCR检测。

结果如图5所示，实验结果表明，含有乙醇的洗涤液的扩增曲线均落后于本发明洗涤液，且随着检测样品浓度的降低，其影响越发明显。在检测20IU/mlHBVDNA时，其Ct值落后于本发明Ct值约4个Ct。

实施例6：使用本发明裂解液与使用其他裂解液的比较

为了验证本发明可以有效配合磁珠使用提取核酸，且提取效率远高于现有技术，使用本发明与其他的提取技术进行比较。进行对比的裂解液基础配制方法为：400mMKCl、10％TritonX-100、50mg/ml蛋白酶K、10mMNaOH。

除了分别使用本发明裂解液和按照以上组分配制的裂解液以外，利用与实施例3相同的方法对临床诊断明确且经过检测HBVDNA定量值为2×10⁵IU/ml和2×10³IU/ml的乙肝患者血清进行实时荧光定量PCR检测。

结果如图6、7所示，实验结果表明，本发明的裂解液可以充分裂解病毒，使核酸释放。无论是在高浓度的2×10⁵IU/ml或是较低浓度的2×10³IU/ml，其Ct值和提取效率均要高于其他裂解液。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种磁珠法提取核酸的裂解液，其特征在于，所述裂解液由0.2～0.4N氢氧化钠、0.3～0.6M氯化钾、0.01～0.05％N-月桂酰肌氨酸钠、5mMEDTA、0.3～0.6MTris-HCL和1～2％曲通X-100组成。

2.根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述裂解液由0.25～0.35N氢氧化钠、0.4～0.5M氯化钾、0.02～0.04％N-月桂酰肌氨酸钠、5mMEDTA、0.4～0.5MTris-HCL和1～2％曲通X-100组成。

3.根据权利要求2所述的裂解液，其特征在于，所述裂解液由0.3N氢氧化钠、0.45M氯化钾、0.03％N-月桂酰肌氨酸钠、0.45MTris-HCL、5mMEDTA和1％曲通X-100组成。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的裂解液，其特征在于，所述裂解液还包括3～8mMDTT。

5.根据权利要求1～3任意一项所述的裂解液，其特征在于，所述裂解液还包括不多于0.001wt％的提取指示剂，所述提取指示剂选自溴酚蓝、石绿、甲基红、甲基橙、罗丹名、溴甲酚绿、品红、二甲酚橙、二苯胺或刚果红中的一种，优选为溴酚蓝。

6.一种磁珠法核酸提取的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1～3任意一项所述的裂解液和洗涤液。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为0.3～0.6M氯化钾溶液，所述洗涤液的pH值为4～5。

8.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液还包括不多于0.001wt％的洗涤指示剂，所述洗涤指示剂选自溴酚蓝、石绿、甲基红、甲基橙、罗丹名、溴甲酚绿、品红、二甲酚橙、二苯胺或刚果红中的一种，优选为石绿。

9.一种如权利要求1～3任意一项所述的裂解液的应用，其特征在于，所述裂解液用于提取细胞、细菌、血清、血浆、唾液、尿液或胸腹水中的核酸，优选为血清或血浆，更优选为在PCR检测中提取待测样品的细胞、细菌、血清、血浆、唾液、尿液或胸腹水中的核酸。

10.一种如权利要求6所述的试剂盒的应用，其特征在于，所述试剂盒用于PCR、酶切、分子杂交、文库构建或Southern杂交过程中的核酸提取。