CN107523565B - 基于纳米磁珠的多酚类植物rna的简化提取方法 - Google Patents
基于纳米磁珠的多酚类植物rna的简化提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107523565B CN107523565B CN201711022661.4A CN201711022661A CN107523565B CN 107523565 B CN107523565 B CN 107523565B CN 201711022661 A CN201711022661 A CN 201711022661A CN 107523565 B CN107523565 B CN 107523565B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- magnetic beads
- rna
- nanometer magnetic
- standing
- extraction method
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
- C12N15/1013—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
基于纳米磁珠的多酚类植物RNA的简化提取方法,包括以下步骤,(1)、制取样品;(2)、细胞裂解;(3)、洗涤;然后重复洗涤步骤一次;(4)、解离。利用本发明的方法提取多酚类植物的总RNA回收率高,纯度高,片段完整,可以直接应用于后续检测。核酸提取时间较一般纳米磁珠提取更短,效率更高,操作简单,更容易实现自动化,所使用试剂环境友好,更安全。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种基于纳米磁珠的多酚类植物RNA的简化提取方法。
背景技术
RNA,即 Ribonucleic Acid,能够传递遗传信息,是调控蛋白质合成的重要媒介。任何基因功能的有效发挥均依赖于 RNA 的表达与调控,所以RNA 在分子生物学研究领域占有重要地位。从植物组织中提取到纯度高、完整性好的RNA是探究RNA调控机理的关键所在。高质量的 RNA 提取是进行分子生物学实验如cDNA (互补脱氧核糖核酸)文库的构建、荧光定量PCR检测、Northern 杂交等的重要前提。
目前,RNA 提取主要采用的是 Chomczynski 等提出的异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法,Trizol等方法,但在提取富含多酚类植物组织总RNA的过程中仍会被大量酚类物质所干扰。这些酚类物质通过苯酚、胍等都很难去除。酚类物质极易被氧化成醌类物质,在提取过程中与RNA不可逆转地结合,从而影响RNA的纯化。并且酚类物质残留在样品中易发生氧化产生深褐色的物质,所以使用传统方法提取的RNA往往带有很深的铁锈色,影响后续的分子实验。
常用的提取方法存在以下缺点:1.常规提取试剂中多含毒性较大的有机溶剂,对环境污染较大,且对操作人员的身心有一定影响;2.常规提取方法(非纳米磁珠法)操作耗时长,操作环境要求很高,稍不注意就会造成RNA的降解,功亏一篑;3.常规提取方法(非纳米磁珠法)提取样本之间质量差异较大,过程复杂,自动化程度低;4.目前常规的纳米磁珠法对对富含酚类的植物组织提取效率低,且通常采用两种洗液进行洗涤;5.目前常规的纳米磁珠法在洗脱后必须要将总RNA与磁珠分离后才能进行后续的荧光定量PCR反应。
发明内容
本发明为了解决现有技术中的不足之处,提供一种基于纳米磁珠的多酚类植物RNA的简化提取方法,该方法采用的试剂经过配方改良更适用于富含酚类的植物组织提取,使用范围更广泛;与两种洗液进行纯化的常规方式比较,本发明仅需一种洗液纯化,同时蛋白酶K的加入使纯化过程高效简便;洗脱后可以实现总RNA和磁珠不分离进行后续荧光定量PCR反应,使本发明的自动化程度更高;配方中不含酚氯仿等重污染的有机试剂,降低操作人员的不适心理和环境污染。
为解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案:基于纳米磁珠的多酚类植物RNA的简化提取方法,包括以下步骤,
(1)、制取样品:取0.2g多酚类植物的组织材料放入研钵中并加入过量液氮,迅速研磨成均匀的粉末,在研磨过程中,保证组织材料始终浸在液氮中;
(2)、细胞裂解:待液氮完全挥发之前,将材料转入1.5ml离心管中,依次添加300uL裂解液和20uL纳米磁珠,将混合溶液吸打混匀5次后25℃室温静置10min;
(3)、洗涤:转移1.5ml离心管至磁分离架上,静置1min后用移液枪弃上清液,然后撤掉磁分离架,添加洗液600uL,吸打混悬纳米磁珠5次,静置5min;
然后重复洗涤步骤一次;
(4)、解离:转移1.5ml离心管至磁分离架上,静置1min后用移液枪弃上清液,撤掉磁分离架,在离心管内添加65uL洗脱液,吸打混匀5次,80℃干浴 10min;然后在25℃室温状态下静置10min后加入反转录酶、Taq酶、引物和探针等进行后续的荧光定量PCR操作。
所述裂解液的PH值为6.5,裂解液由异硫氰酸胍、硼酸、牛血清白蛋白、硼氢化钠、三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、乙二胺四乙酸和聚乙二醇辛基苯基醚混合而成;其中,高浓度盐包括以下成分:3-5M异硫氰酸胍、0.1-0.5M 硼酸、30-60mM 三羟甲基氨基甲烷、20-50mM氯化钠和20-50mM 乙二胺四乙酸;所述裂解液还包含以下成分:质量体积浓度0.1-0.5%牛血清白蛋白、0.1-0.6%硼氢化钠和2-5%聚乙二醇辛基苯基醚。
所述洗液的PH值为6.5,洗液由三羟甲基氨基甲烷、蛋白酶K、乙基苯基聚乙二醇和乙醇混合而成;所述洗液包含以下成分:30-50mM三羟甲基氨基甲烷、0.2-0.6mg/ml蛋白酶K、质量体积浓度0.3-0.8%乙基苯基聚乙二醇和50-70%乙醇。
所述洗脱液的PH值为8.8,洗脱液采用80-150mM三羟甲基氨基甲烷。
所述纳米磁珠的颗粒直径为200-500nm,纳米磁珠采用经过羟基包被的超顺磁性氧化硅纳米磁珠,纳米磁珠的浓度为10mg/mL。
采用上述技术方案,本发明主要采用四种原料:Lysis buffer(裂解液)、Washing(洗液)、RNase-buffer(洗脱液)和纳米磁珠。各原料中各组分的功能作用分别为:
1、裂解液
异硫氰酸胍能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的RNA酶;
硼酸可以与酚类化合物依靠氢键形成复合物,从而抑制了酚类物质的氧化及其与RNA 的结合;
牛血清白蛋白:原花色素类物质与牛血清白蛋白(BSA)间形成可溶性的或不溶性的复合物,减小了原花色素类物质与RNA 结合的机会,因此提高了RNA的产量;
硼氢化钠是一种可还原醌的还原剂,用它处理后提取缓冲液的褐色可被消减,醌类化合物可被还原成多酚化合物;
三羟甲基氨基甲烷不仅起缓冲作用,还可防止RNA降解;
氯化钠维持核酸结构的稳定和提供缓冲反应环境;
乙二胺四乙酸抑制RNA酶的活性,防止RNA降解
聚乙二醇辛基苯基醚是一种非离子型表面活性剂。通过使蛋白质变性,破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质,从而实现核酸游离在裂解体系中。
2、洗液
三羟甲基氨基甲烷不仅起缓冲作用,还可防止RNA降解;
蛋白酶K将蛋白质消化成小的片段,提高纯化效率同时可以抑制RNA酶的降解;
乙基苯基聚乙二醇与蛋白结合力强,用于防止物质分子疏水间相互作用,确保蛋白的充分溶解和结构稳定;
乙醇具有去除盐离子、残存的有机溶剂和水的作用。
3、洗脱液采用三羟甲基氨基甲烷,用于RNA的溶解和保存。
4、纳米磁珠与RNA形成RNA-磁珠复合体,有利于RNA的分离和纯化。
本方法针对富含酚类植物RNA提取中的问题进行配方改良,添加硼酸,牛血清白蛋白,硼氢化钠等试剂,可以有效减少植物组织中的酚、醌、原花色素、多糖等对提取过程的干扰,可以广泛应用于富含多酚多糖,醌等物质的植物组织的总RNA提取;蛋白酶K的加入,在抑制RNA酶的同时将大分子的蛋白质切割,使纯化效率大大提高;用时40min即可完成整个过程,操作时间短,大大降低提取过程中RNA降解的风险;结合纳米磁珠特性对提取配方和操作进行改进,操作过程简便,更适用于机械化、自动化操作;RNase-buffer将RNA洗脱以后,可不进行纳米磁珠分离,直接进行后续荧光定量PCR操作,提高试验效率;本发明所用的配方不含酚、氯仿等污染严重的有机试剂,配比单纯,大大消除了操作人员的不适心理和对环境的污染。
综上所述,利用本发明的方法提取多酚类植物的总RNA回收率高,纯度高,片段完整,可以直接应用于后续检测。核酸提取时间较一般纳米磁珠提取更短,效率更高,操作简单,更容易实现自动化,所使用试剂环境友好,更安全。
附图说明
图1中所示为葡萄果皮RNA提取液和阴性对照的WRKY基因进行荧光定量PCR结果示意图;
图2中所示为葡萄果皮WRKY基因PCR结果进行1%琼脂糖凝胶电泳示意图;
图3中所示为将烟草叶片RNA提取液进行1倍、10倍和100倍稀释后对Actin基因进行荧光定量PCR结果示意图。
具体实施方式
本发明的基于纳米磁珠的多酚类植物RNA的简化提取方法,包括以下步骤:
(1)、制取样品:取0.2g多酚类植物的组织材料放入预冷的研钵中并加入过量液氮,迅速研磨成均匀的粉末。在研磨过程中,保证组织材料始终浸在液氮中;
(2)、细胞裂解:待液氮完全挥发之前,将材料转入1.5ml离心管中,再依次添加300uL裂解液和20uL纳米磁珠,将混合溶液吸打混匀5次后25℃室温静置10min;
(3)、洗涤:转移1.5ml离心管到磁分离架上,静置1min后用移液枪弃上清液,然后撤掉磁分离架。再添加洗液 600uL,吸打混悬纳米磁珠5次,25℃室温静置5min;
然后重复洗涤步骤一次;
(4)、解离:转移1.5ml离心管至磁分离架上,静置1min后用移液枪弃上清液,撤掉磁分离架,在离心管内添加65uL洗脱液,吸打混匀5次后80℃干浴 10min;然后在25℃室温状态下静置10min后加入反转录酶、Taq酶、引物、探针等进行后续的荧光定量PCR操作。
所述裂解液的PH值为6.5,裂解液由异硫氰酸胍、硼酸、牛血清白蛋白、硼氢化钠、三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、乙二胺四乙酸和聚乙二醇辛基苯基醚混合而成;其中,高浓度盐包括以下成分:3.5M异硫氰酸胍,0.1M 硼酸,50mM 三羟甲基氨基甲烷,30 mM氯化钠,30mM 乙二胺四乙酸;所述裂解液还包含以下成分:0.1%牛血清白蛋白,0.2%硼氢化钠,2%聚乙二醇辛基苯基醚。
所述的洗液的PH值为6.5,洗液由三羟甲基氨基甲烷、蛋白酶K、乙基苯基聚乙二醇和乙醇混合而成;所述洗液包含以下成分:50 mM三羟甲基氨基甲烷,0.5 mg/ml蛋白酶K,0.5%乙基苯基聚乙二醇,70%乙醇。
所述的洗脱液的PH值为8.8,洗脱液采100mM三羟甲基氨基甲烷。
所述的纳米磁珠的颗粒直径为300nm,纳米磁珠采用经过羟基包被的超顺磁性氧化硅纳米磁珠,纳米磁珠的浓度为10mg/mL。
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将说明本发明的具体实施方式。显而易见地,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以获得其他的实施方式。
案例1 以本发明方法提取葡萄果皮中的总RNA并扩增WRKY基因
包括以下步骤
(1)裂解与结合 取0.2g新鲜葡萄(赤霞珠)果皮放入液氮预冷的研钵中,快速研磨成均匀粉末,研磨过程中保证果皮始终浸在液氮中。在液氨完全挥发之前,将其转入液氮预冷的1.5ml离心管。再依次加入300uL裂解液和20uL纳米磁珠,将混合溶液吸打混匀5次后在25℃的室温静置10min。转移1.5ml离心管到磁分离架上,磁力分离1min。裂解分离出的葡萄果皮RNA与直径为300nm的纳米磁珠结合,纳米磁珠为经过羟基包被的超顺磁性氧化硅纳米磁珠,浓度为10mg/mL,在外部磁场的作用下,形成磁珠-核酸复合物;吸弃上清。
其中,裂解液中高浓度盐包括以下成分:3.5M异硫氰酸胍,0.1M硼酸,50mM三羟甲基氨基甲烷,30 mM氯化钠,30 mM 乙二胺四乙酸;所述裂解液还包含以下成分:0.1%牛血清白蛋白,0.2%硼氢化钠,2%聚乙二醇辛基苯基醚。
(2)洗涤撤掉磁分离架后,再向离心管中添加洗液600uL,吸打混悬纳米磁珠5次,静置5min后将离心管至磁分离架上,磁分离1min,吸弃上清,去除磁珠-核酸复合物上的杂质。重复上述操作步骤一次。
其中,洗涤缓冲液的成分为50mM三羟甲基氨基甲烷,0.5mg/ml蛋白酶K,0.5%乙基苯基聚乙二醇,70%乙醇。
(3)解离 转移1.5ml离心管至磁分离架上,静置1min后用移液枪弃上清液,撤掉磁分离架,向离心管中加入65uL洗脱液,然后吸打混匀5次,80℃干浴 10min;然后在25℃的常温状态下静置10min。后加入反转录酶、Taq酶、引物和探针等进行后续的荧光定量PCR操作。
(4)荧光定量PCR反应
本次试验所采用的PCR体系为: 65μLRNA提取液,8μL 10*RT-PCR Buffer,Taq酶0.25μL,MLV反转录酶0.05μL,上下游引物各0.25μL,探针0.125μL,dNTPs 0.5μL,超纯水5.575μL。其中,10*RT-PCR Buffer,Taq酶,MLV反转录酶均购自promega试剂公司。
WRKY基因(长度750bp)引物为:
WRKY-For:5'GCTAGGATCCCATGGATGGAAGATTCAAT3'
WRKY-Rev: 5'TAGGTACCTCAGCCCGTGGTCCCACAC3'
反转录程序为:
25℃ 10min,42 ℃50min,70 ℃10min
荧光定量PCR反应程序为:
50℃ 2min;95℃2min;95℃15s,52℃ 30s荧光,72℃ 25s ,40 Cycle
(5)实验结果
图1中所示为葡萄果皮RNA提取液和阴性对照的WRKY基因进行荧光定量PCR结果示意图。
图2中所示为葡萄果皮WRKY基因PCR结果进行1%琼脂糖凝胶电泳示意图。其中M为D2000 Marker 1,2,3为PCR产物。
(6)结果分析
从图1可以看出,阳性重复之间的扩增结果一致,阴性对照均未检出,说明本发明操作稳定且污染率较低。图2电泳结果目标条带清晰说明本方法提取的RNA质量较高。
案例2 将本发明方法提取烟草叶片的总RNA稀释为不同梯度扩增Actin基因
(1)提取步骤 取0.2g新鲜烟草叶片放入液氮预冷的研钵中,快速研磨成均匀粉末,研磨过程中保证叶片组织始终浸在液氮中。其余操作过程同案例1。将总RNA提取液稀释1倍,10倍和100倍后进行Actin基因的荧光定量PCR反应。
(2)荧光定量PCR反应
Actin引物序列为:
Actin-For: 5′ACTGGTGTTATGGTTGGTATGGGTC3′
Actin-Rev: 5′ATGACCTGCCCATCTGGTAACTC3′
反转录程序:
25℃ 10min,42 ℃50min,70 ℃10min
荧光定量PCR反应程序为:
50℃ 2min;95℃2min;95℃15s,52℃ 30s荧光,72℃ 25s ,40 Cycle
(3)实验结果
图3中所示为将烟草叶片RNA提取液进行1倍、10倍和100倍稀释后对Actin基因进行荧光定量PCR结果示意图。
(4)结果分析
图3稀释1倍(未经稀释)的RNA扩增Actin基因的Ct值为27.55,稀释10倍和100倍的RNA扩增Actin基因的Ct值分别为32.29和37.64,具有比较均一的梯度。说明本发明方法过程较为稳定,总RNA纯度较高。
案例3 本发明与常规CTAB法和SDS法提取烟草叶片总RNA质量比较
(1)CTAB法操作步骤为:称取0.2g新鲜烟草叶片于液氮预冷的研钵中,加入液氮充分研磨成细粉末状,研磨中不断缓慢倒入液氮防止材料解冻;将研磨碎的材料移入预冷的1.5ml离心管中,加入600μl经65℃预热的CTAB提取液,立刻用力上下颠倒并涡旋震荡30s,于65℃水浴锅中温浴5min。
所用CTAB提取液包含以下成分:2%CTAB,0.1mol/LTris-HCl(PH=8.0),0.01mol/LNaCl,25mmol/L EDTA(PH=8.0),使用前加入2%β-巯基乙醇。
冷却后加入等体积的氯仿/异戊醇涡旋震荡1min使之充分混匀,室温10000r/min离心15min;取上清,重复氯仿/异戊醇抽提一次,取上清,用100μl 70%乙醇洗涤沉淀。沉淀微干后加入500μl SSTE缓冲液溶解沉淀,加入等体积氯仿/异戊醇再抽提2次;转移上清后加入0.25倍体积的异戊醇充分混匀后,于室温放置10min;4℃12000r/min离心10min,收集沉淀,用70%乙醇漂洗两次,重复上述离心;用一次性使用的洗头吸尽残存的乙醇,加50μlDEPC水溶解RNA。
所用SSTE缓冲液成分为:0.5% SDS,1mmol/L EDTA(PH=8.0),1mol/L NaCl,10mmol/L Tris-Cl(PH=8.0)。
(2)SDS法所采用的步骤为:将0.2g烟草叶片液氮研磨成粉末,移入2ml离心管中,加入1ml提取缓冲液,室温下晃动10min;加入1/3体积5mol/L醋酸钾(PH=6.0),冰上沉淀30min,4℃10000r/min离心15min;上清液转移到新离心管中,等体积酚/氯仿抽取,4℃10000r/min离心15min,重复此步;再用等体积氯仿抽提水相,4℃12000r/min离心15min;DEPC水溶解沉淀;用等体积的酚/氯仿抽提,4℃12000r/min离心25min;收集沉淀,用70%乙醇洗涤沉淀2次,沉淀溶解于50μlDEPC水。
所用提取缓冲液成分为:0.1mol/LTris-HCL(PH=7.4),0.5mol/LNaCl,25mol/LEDTA(PH=8.0),20g/L SDS,20g/LPVPP和2%β-巯基乙醇使用前加入
(3)本发明步骤方法参照案例1。在80℃干浴 10min后将1.5ml离心管置于磁分离架上1min,将总RNA提取液与磁珠分离后,上清转移至新的1.5ml离心管中,然后测定样品纯度。
(4)测定方式为:取3μlRNA溶液稀释至3ml,用紫外可见分光光度计测量A230,A260,A280,并计算A260/A230,A260/A280的比值,确定其纯度,再计算回收率。
回收率计算公式:RNA得率(μg.g-1.FW-1)=(A260*40*稀释倍数*原液体积)/提取样品质量(g)
(5)实验结果 表1为采用不同方法提取烟草组织叶片的RNA的纯度和得率
(6)结果分析
从表1中看出,本发明优于常规的SDS法,与常规的CTAB法得率相当,说明本发明提取的RNA基本排除了色素、多糖、多酚和蛋白质等物质的污染,纯度较高,获得的RNA产量也较高。但是本发明操作简便,是一种更为理想的提取RNA的选择。
表1 采用不同方法提取烟草组织叶片的RNA的纯度和得率
上述实施例并非对本发明的形状、材料、结构等作任何形式上的限制,凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (4)
1.基于纳米磁珠的多酚类植物RNA的简化提取方法,其特征在于:包括以下步骤,
(1)、制取样品:取0.2g多酚类植物的组织材料放入研钵中并加入过量液氮,迅速研磨成均匀的粉末,在研磨过程中,保证组织材料始终浸在液氮中;
(2)、细胞裂解:待液氮完全挥发之前,将材料转入1.5ml离心管中,依次添加300uL裂解液和20uL纳米磁珠,将混合溶液吸打混匀5次后25℃室温静置10min;
(3)、洗涤:转移1.5ml离心管至磁分离架上,静置1min后用移液枪弃上清液,然后撤掉磁分离架,添加洗液600uL,吸打混悬纳米磁珠5次,静置5min;
然后重复洗涤步骤一次;
(4)、解离:转移1.5ml离心管至磁分离架上,静置1min后用移液枪弃上清液,撤掉磁分离架,在离心管内添加65uL洗脱液,吸打混匀5次,80℃干浴 10min;然后在25℃室温状态下静置10min后加入反转录酶、Taq酶、引物和探针进行后续的荧光定量PCR操作;
所述裂解液的PH值为6.5,裂解液由3-5M异硫氰酸胍、0.1-0.5M 硼酸、30-60mM 三羟甲基氨基甲烷、20-50mM氯化钠、20-50mM 乙二胺四乙酸、质量体积浓度0.1-0.5%牛血清白蛋白、质量体积浓度0.1-0.6%硼氢化钠和质量体积浓度2-5%聚乙二醇辛基苯基醚混合而成。
2.根据权利要求1所述的基于纳米磁珠的多酚类植物RNA的简化提取方法,其特征在于:所述洗液的PH值为6.5,洗液由30-50mM三羟甲基氨基甲烷、0.2-0.6mg/ml蛋白酶K、质量体积浓度0.3-0.8%乙基苯基聚乙二醇和质量体积浓度50-70%乙醇混合而成。
3.根据权利要求1所述的基于纳米磁珠的多酚类植物RNA的简化提取方法,其特征在于:所述洗脱液的PH值为8.8,洗脱液采用80-150mM三羟甲基氨基甲烷。
4.根据权利要求1所述的基于纳米磁珠的多酚类植物RNA的简化提取方法,其特征在于:所述纳米磁珠的颗粒直径为200-500nm,纳米磁珠采用经过羟基包被的超顺磁性氧化硅纳米磁珠,纳米磁珠的浓度为10mg/mL。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711022661.4A CN107523565B (zh) | 2017-10-27 | 2017-10-27 | 基于纳米磁珠的多酚类植物rna的简化提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711022661.4A CN107523565B (zh) | 2017-10-27 | 2017-10-27 | 基于纳米磁珠的多酚类植物rna的简化提取方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107523565A CN107523565A (zh) | 2017-12-29 |
CN107523565B true CN107523565B (zh) | 2020-07-24 |
Family
ID=60685483
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201711022661.4A Active CN107523565B (zh) | 2017-10-27 | 2017-10-27 | 基于纳米磁珠的多酚类植物rna的简化提取方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107523565B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113462682A (zh) * | 2021-06-18 | 2021-10-01 | 汉远化生医国际科技(北京)有限公司 | 用于分离和/或纯化生物rna的裂解、结合、洗涤和/或洗脱试剂 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102191239A (zh) * | 2010-03-11 | 2011-09-21 | 中国热带农业科学院橡胶研究所 | 一种提取荔枝总rna的方法 |
CN103215253A (zh) * | 2012-11-26 | 2013-07-24 | 福州泰普生物科学有限公司 | 一种采用磁珠法提取病毒dna或rna的试剂盒及其使用方法 |
CN104017804A (zh) * | 2014-06-26 | 2014-09-03 | 华南农业大学 | 一种高质高效的多酚多糖类植物样品rna提取方法 |
CN104313015A (zh) * | 2014-10-16 | 2015-01-28 | 上海派森诺生物科技有限公司 | 一种多糖多酚植物组织总rna提取方法 |
CN104357439A (zh) * | 2014-11-27 | 2015-02-18 | 广东省农业科学院作物研究所 | 一种从富含多糖多酚类的植物材料中提取rna的方法 |
CN205999392U (zh) * | 2016-06-20 | 2017-03-08 | 北京国科融智生物技术有限公司 | 一种生物纳米磁珠法提取植物总rna试剂盒 |
CN106591297A (zh) * | 2017-02-28 | 2017-04-26 | 解码(上海)生物医药科技有限公司 | 一种磁珠法核酸提取方法 |
-
2017
- 2017-10-27 CN CN201711022661.4A patent/CN107523565B/zh active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102191239A (zh) * | 2010-03-11 | 2011-09-21 | 中国热带农业科学院橡胶研究所 | 一种提取荔枝总rna的方法 |
CN103215253A (zh) * | 2012-11-26 | 2013-07-24 | 福州泰普生物科学有限公司 | 一种采用磁珠法提取病毒dna或rna的试剂盒及其使用方法 |
CN104017804A (zh) * | 2014-06-26 | 2014-09-03 | 华南农业大学 | 一种高质高效的多酚多糖类植物样品rna提取方法 |
CN104313015A (zh) * | 2014-10-16 | 2015-01-28 | 上海派森诺生物科技有限公司 | 一种多糖多酚植物组织总rna提取方法 |
CN104357439A (zh) * | 2014-11-27 | 2015-02-18 | 广东省农业科学院作物研究所 | 一种从富含多糖多酚类的植物材料中提取rna的方法 |
CN205999392U (zh) * | 2016-06-20 | 2017-03-08 | 北京国科融智生物技术有限公司 | 一种生物纳米磁珠法提取植物总rna试剂盒 |
CN106591297A (zh) * | 2017-02-28 | 2017-04-26 | 解码(上海)生物医药科技有限公司 | 一种磁珠法核酸提取方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Comparison of Three Magnetic Bead Surface Functionalities for RNA Extraction and Detection;Nicholas M Adams 等;《ACS Appl. Mater. Interfaces》;20150325;第7卷(第11期);6062-6069 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN107523565A (zh) | 2017-12-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5972613A (en) | Methods of nucleic acid isolation | |
EP2478087B1 (en) | Compositions and methods for recovery of nucleic acids or proteins from tissue samples fixed in cytology media | |
EP2574670B1 (en) | Method for purifying nucleic acid at ultrahigh speed | |
CN111808844A (zh) | 一种同时提取dna和rna的试剂盒及其使用方法 | |
CN101792757A (zh) | 一种用磁珠分离基因组dna试剂盒及其应用 | |
EP2607482B1 (en) | Solution for extraction of rna | |
EP2094846B1 (en) | Use of tde for the isolation of nucleic acids | |
CN110257368A (zh) | 从含有游离核酸的样品中分离游离核酸的方法和系统 | |
CN107523565B (zh) | 基于纳米磁珠的多酚类植物rna的简化提取方法 | |
US20020068280A1 (en) | Compositions and methods for DNA purification from whole blood | |
CN114525275B (zh) | 低共熔溶剂应用于dna提取、dna提取方法及试剂盒 | |
CN113667664A (zh) | 一种用纳米磁珠提取核酸的试剂盒及提取方法 | |
CN111206073B (zh) | 一种硅珠法核酸提取试剂盒及其使用方法和应用 | |
CN113604465A (zh) | 一种基于十六烷基三甲基溴化铵的磁珠核酸提取方法 | |
CN112662665A (zh) | 磁珠法提取质粒dna的方法及提取质粒dna的试剂盒 | |
CN102191238A (zh) | 小分子rna的提取方法 | |
US20060199203A1 (en) | Extraction of high-purity DNA and RNA | |
CN111117998A (zh) | 微生物核酸萃取方法 | |
JP2014030364A (ja) | Dnaの抽出方法 | |
US20200347379A1 (en) | Method for isolation of nucleic acids | |
EP4253538A1 (en) | Method for isolating nucleic acid using binding buffer including compound having low or intermediate dielectric constant | |
CN114908081B (zh) | 一种核酸提取试剂及其试剂盒以及快速萃取分离纯化核酸的方法 | |
Jarallah et al. | Design of a new rapid and efficient kit for extracting DNA from blood sample | |
JPH11196869A (ja) | リボ核酸の単離方法 | |
CN101532012B (zh) | 一种快速抽提纯化rna的试剂盒以及方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |