CN111808844A - 一种同时提取dna和rna的试剂盒及其使用方法 - Google Patents
一种同时提取dna和rna的试剂盒及其使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111808844A CN111808844A CN202010746877.0A CN202010746877A CN111808844A CN 111808844 A CN111808844 A CN 111808844A CN 202010746877 A CN202010746877 A CN 202010746877A CN 111808844 A CN111808844 A CN 111808844A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nucleic acid
- solution
- dna
- rna
- eluent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 81
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 69
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 69
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 46
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 44
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000012487 rinsing solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 112
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 46
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 33
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 25
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 23
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 22
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 16
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 14
- 150000002357 guanidines Chemical class 0.000 claims description 13
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 8
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N ferrosoferric oxide Chemical compound O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims description 5
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229940122426 Nuclease inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 claims description 4
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 4
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 3
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 claims description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 claims description 3
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 3
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 2
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 claims description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 claims description 2
- GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N dodecyl benzenesulfonate;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCCOS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DBLXOVFQHHSKRC-UHFFFAOYSA-N ethanesulfonic acid;2-piperazin-1-ylethanol Chemical compound CCS(O)(=O)=O.OCCN1CCNCC1 DBLXOVFQHHSKRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229940080264 sodium dodecylbenzenesulfonate Drugs 0.000 claims description 2
- GBHSCKFAHCEEAZ-UHFFFAOYSA-N 2-[hydroxymethyl(methyl)amino]acetic acid Chemical compound OCN(C)CC(O)=O GBHSCKFAHCEEAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229960001484 edetic acid Drugs 0.000 claims 1
- FYFFGSSZFBZTAH-UHFFFAOYSA-N methylaminomethanetriol Chemical compound CNC(O)(O)O FYFFGSSZFBZTAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000004907 flux Effects 0.000 abstract description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000001821 nucleic acid purification Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 abstract 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 39
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 8
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 7
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 7
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 6
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- FLKPEMZONWLCSK-UHFFFAOYSA-N diethyl phthalate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCC FLKPEMZONWLCSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 2
- 241000276707 Tilapia Species 0.000 description 2
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005089 Plant RNA Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- XFIOKOXROGCUQX-UHFFFAOYSA-N chloroform;guanidine;phenol Chemical compound NC(N)=N.ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 XFIOKOXROGCUQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 229930000223 plant secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
- C12N15/101—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by chromatography, e.g. electrophoresis, ion-exchange, reverse phase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
- C12N15/1013—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种同时提取DNA和RNA的试剂盒及其使用方法。本发明的试剂盒包括以下试剂：细胞裂解液、核酸结合液、核酸吸附材料、洗脱液A、去蛋白漂洗液、去盐分漂洗液和洗脱液B。本发明通过选择性的洗脱DNA，将RNA继续保留在吸附材料上，达到分级分离DNA与RNA的效果。本发明区别于用于同时提取DNA和RNA的TRIzol法，所用的试剂种类少，不使用苯酚、氯仿等有毒溶剂，且能够用于核酸纯化仪上，具有快速、高效、高通量、环保、可自动化同时提取DNA和RNA的优点。
Description
技术领域
本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种同时提取DNA和RNA的试剂盒及其使用方法。
背景技术
DNA和RNA统称为核酸，核酸是分子生物学研究与应用中最基本的研究检测对象，如何获得高质量的核酸已成为重要且基本的实验技术。目前的技术路线都是针对单独提取DNA或RNA的，如果要同时提取DNA与RNA就必须要把实验材料一分为二来进行。目前用于核酸提取的技术主要包括：酚氯仿萃取法、硅胶柱分离法、盐析法和磁珠法。这些技术基本上都只能提取DNA或 RNA，不能使用同一份样品同时提取到DNA和RNA。
用于提取RNA的经典方法TRIzol法目前是同时提取DNA与RNA最常用的方法。所谓TRIzol法，即“胍-酚-氯仿”法，是把胍盐与苯酚配成单一溶液，细胞裂解后游离出核酸，再加入氯仿提取，经离心后水相与有机相分离，RNA存在于水相中，DNA存在于有机相中，进而到达同时提取DNA和RNA的效果。这种方法操作复杂，而且苯酚、氯仿等都是有毒的有机溶剂，既不环保也无法实现高通量自动化提取。
专利号为ZL201510982621.9的发明(申请人为北京艾德莱生物科技有限公司)公开了一种用于DNA和RNA同时提取的试剂，提取方法和通途。该发明操作复杂而且使用了酚氯仿等有毒的有机溶剂，且该方法是把RNA从总核酸中洗脱掉下来，因为RNA与硅质材料吸附更紧密，所以很难保证特异性洗脱RNA 而不洗脱DNA。
目前，随着二代测序技术的成熟，临床上越来越多的样品运用二代测序技术进行疾病预测与诊断，如何快速、高效、高通量地同时提取DNA与RNA具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足而提供一种快速、高效、环保、高通量的同时提取DNA和RNA的试剂盒及提取方法。
为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种同时提取DNA和RNA的试剂盒，包括以下试剂：细胞裂解液、核酸结合液、核酸吸附材料、洗脱液A、去蛋白漂洗液、去盐分漂洗液和洗脱液B。
细胞裂解液将细胞裂解，使细胞内核酸游离出来；核酸结合液能够创建核酸与吸附材料相结合的环境，使核酸特异性地吸附到吸附材料上，通过吸附材料的特异性选择而去掉蛋白等杂质；去蛋白漂洗液及去盐分漂洗液可以进一步去除痕量杂质，保证核酸样品的纯净；核酸吸附材料可吸附核酸，根据吸附力的不同可以使用不同的洗脱液将DNA与RNA分别洗脱。
优选地，所述细胞裂解液包含以下成分：表面活性剂1～20％(v/v)、蛋白变性剂1～5mol/L、核酸酶抑制剂0.1～1mol/L、pH稳定剂0.1～1mol/L。
优选地，所述表面活性剂为十二烷基肌氨酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十六烷基三甲基溴化铵、曲拉通X-100、吐温20中的至少一种。
优选地，所述蛋白变性剂为盐酸胍、异硫氰酸胍或尿素中的至少一种。
蛋白变性剂可高效地使核酸酶等蛋白质变性而失活，从而保护核酸不被水解。
优选地，所述核酸酶抑制剂为乙二胺四乙酸、乙二醇-双-(2-氨基乙醚)四乙酸、巯基乙醇、TCEP与二硫苏糖醇中的至少一种。
优选地，所述的pH稳定剂为三羟甲基氨基甲烷、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、3- 吗啉丙磺酸、N-三(羟甲基)甲基甘氨酸中的至少一种。
核酸酶抑制剂可以抑制细胞内核酸酶的活性，保护核酸防止被水解。
优选地，所述核酸结合液为含胍盐的溶液、醇溶液中的至少一种；所述含胍盐的溶液中胍盐的浓度为0.1～8mol/L，所属醇溶液中醇的体积百分比为40～ 80％。
优选地所述胍盐为盐酸胍、异硫氰酸胍中的至少一种，所述胍盐的浓度为 1～4mol/L。
优选地，所述醇溶液中的醇为乙醇、聚乙二醇或异丙醇，所述醇溶液中醇的体积百分比为40～60％。
优选地，所述核酸吸附材料为硅质纯化柱或二氧化硅四氧化三铁纳米磁珠。
优选地，所述洗脱液A为含氯化物的溶液、醇溶液中的至少一种；所述含氯化物的溶液中氯化物的浓度为0.05～6mol/L,所述醇溶液中醇的体积百分比为 5～40％。
DNA洗脱液是根据DNA、RNA各自与硅质材料结合强度不同，能够特定地使DNA从吸附材料中游离出来，而且能够保证RNA与吸附材料继续稳定结合，达到将RNA与DNA分离的目的。
优选地，所述氯化物为氯化钠、氯化铵或氯化镁中至少一种；所述醇溶液中的醇为乙醇或异丙醇，所述醇溶液中醇的体积百分比为4～30％。
优选地，所述去蛋白漂洗液为胍盐或乙醇溶液中至少一种；所述去盐漂洗液为乙醇溶液；所述洗脱液B为DEPC处理水。
上述同时提取DNA和RNA试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
(1)在样品中加入裂解液，混匀并离心获得上清液；
(2)取步骤(1)中的上清液加入核酸结合液，混匀后转移到核酸吸附材料中；
(3)当所述核酸吸附材料为硅质纯化柱时，将步骤(2)中的核酸吸附材料离心弃除离心液，并向核酸吸附材料中加入去蛋白漂洗液，离心保留吸附材料；
当所述核酸吸附材料为二氧化硅四氧化三铁纳米磁珠时，将步骤(2)得到的核酸吸附材料置于磁场中，去除液体并保留核酸吸附材料；
(4)DNA洗脱：向步骤(3)处理后的核酸吸附材料中加入洗脱液A，离心收集滤液；
(5)向步骤(4)处理后的核酸吸附材料中加入洗脱液A，离心保留吸附材料并干燥；
(6)RNA洗脱：向步骤(5)处理后的核酸吸附材料中加入洗脱液B，离心即获得RNA；
(7)DNA纯化：取步骤(4)获得的滤液，加入等体积的核酸结合液，混匀，转移到吸附材料，离心吸附DNA，去除滤液，加入去盐分洗脱液，室温离心，重复一次后室温干燥，加入洗脱液B，即获得DNA。优选地，所述离心的转速为12000rpm，离心的时间为1min。
优选地，所述干燥的温度为20～25℃，干燥的时间为1min。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明的试剂盒中不含有酚氯仿等有毒有机溶剂，成分环保；与传统TRIzol 法相比操作简单，且提取的DNA与RNA纯度高，具有快速、高效、可同时提取DNA和RNA的优点。另外，本发明的试剂盒可以用于核酸纯化仪上，并自动化操作，可实现高通量提取DNA与RNA，满足了二代测序的需要。
附图说明
图1为本发明提取DNA和RNA的1％琼脂糖凝胶电泳图。
具体实施方式
为了更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将列举具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例提供一种同时提取DNA和RNA的试剂盒，包括以下成分：
细胞裂解液：2％SDS、100mM Tris、2％PVP、0.5％巯基乙醇、1.4M NaCl、 10mMEDTA；
核酸结合液：75％乙醇溶液；
核酸吸附材料：硅质纯化柱；
洗脱液A：0.1M氯化钠，30％乙醇；
去蛋白漂洗液：1M盐酸胍50％乙醇；
去盐分漂洗液：75％乙醇溶液；
洗脱液B：DEPC处理水。
本实施所述同时提取DNA和RNA试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
(1)将100mg植物样品经液氮研磨后中加入到含有0.6ml细胞裂解液的 1.5ml离心管中，剧烈涡旋混匀，70℃水浴10分钟后，加入0.2ml 3M乙酸铵溶液，混匀常温12000rpm离心1min，获得上清；
(2)取上述步骤(1)获得的上清0.4ml，加入0.4ml核酸结合液，混匀后转移混合物到硅质纯化柱中，离心过滤吸附核酸；
(3)向步骤(2)处理后的硅质纯化柱中加入0.5ml去蛋白漂洗液，离心除掉漂洗液；
(4)DNA洗脱：向步骤(3)处理后的硅质纯化柱中加入0.5ml洗脱液A，离心收集过滤液用于DNA提取与纯化；
(5)向步骤(4)处理后的硅质纯化柱中加入0.5ml DNA洗脱液，室温下 12000rpm离心1min并干燥；
(6)RNA洗脱：向步骤(5)处理后的硅质纯化柱中加入0.1ml DEPC水，离心洗脱即获得RNA；
(7)DNA纯化：取步骤(4)获得的滤液，加入等体积的核酸结合液，混匀后室温下12000rpm离心1min，去掉上清保留沉淀，加入0.6ml去盐分漂洗液，混匀后室温下12000rpm离心1min，重复两次后室温干燥1min，加入0.1ml DEPC 处理水溶解沉淀，即获得高纯度DNA。
步骤(1)中加入乙酸铵沉淀除去多糖多酚等植物次代谢产物。
实施例2
一种同时提取DNA和RNA的试剂盒，包括以下成分：
细胞裂解液：4M异硫氰酸胍、100mM Tris、30mM TCEP、1％Triton X-100、 10mMEDTA；
核酸结合液：75％乙醇溶液；
核酸吸附材料：硅质纯化柱；
洗脱液A：0.1M氯化铵、40％乙醇；
去蛋白漂洗液：3M异硫氰酸胍、40％乙醇；
去盐分漂洗液：75％乙醇溶液；
洗脱液B：DEPC处理水。
上述同时提取DNA和RNA试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
(1)将30mg动物组织样品加入到含有0.6ml细胞裂解液的1.5ml离心管中，用研磨杵将组织彻底研磨，混匀常温12000rpm离心1min，获得上清；
(2)取上述步骤(1)获得的上清0.4ml，加入0.4ml核酸结合液，混匀后转移混合物到硅质纯化柱中，离心过滤吸附核酸；
(3)向步骤(2)处理后的硅质纯化柱中加入0.5ml去蛋白漂洗液，离心除掉漂洗液；
(4)DNA洗脱：向步骤(3)处理后的硅质纯化柱中加入0.5ml洗脱液A，离心收集过滤液用于DNA提取与纯化；
(5)向步骤(4)处理后的硅质纯化柱中加入0.5ml DNA洗脱液，室温下 12000rpm离心1min并干燥；
(6)RNA洗脱：向步骤(5)处理后的硅质纯化柱中加入0.1ml DEPC水，离心洗脱即获得RNA；
(7)DNA纯化：取步骤(4)获得的滤液，加入等倍体积的无水乙醇，混匀后转移混合液到新的硅质纯化柱中，室温下12000rpm离心1min，用0.6ml 去盐分漂洗液漂洗纯化柱2次后，空柱子离心1分钟，干燥柱子，向纯化加入 0.1ml去离子水，离心洗脱，获得高纯度DNA。
实施例3
一种同时提取DNA和RNA的试剂盒，包括以下成分：
细胞裂解液：5M盐酸胍、0.1M Tris、1％曲拉通X-100、4mg/ml蛋白酶K；
核酸结合液：3M异硫氰酸胍，60％乙醇；
核酸吸附材料：硅质纯化柱和二氧化硅四氧化三铁纳米磁珠；
洗脱液A：1M氯化钠，0.1M氯化铵，35％乙醇；
去蛋白漂洗液：3M异硫氰酸胍、40％乙醇；
去盐分漂洗液：80％乙醇溶液；
洗脱液B：DEPC处理水。
上述同时提取DNA和RNA试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
(1)取1ml微生物培养液置于1.5ml离心管中，室温下8000rpm离心1分钟收集菌体，去掉培养基；
(2)向菌体加入0.2ml重悬液(0.1M Tris，0.5％Trition x-100,10mM EDTA，10mg/ml溶菌酶)重悬菌体，37℃水浴处理30分钟；
(3)向处理液加入0.2ml细胞裂解液,65℃水浴处理10分钟。
(4)加入0.4ml核酸结合液与25ul二氧化硅四氧化三铁纳米磁珠，混匀室温放置2分钟让磁珠充分吸附核；
(5)将离心管置于高强磁场中吸附磁珠，除去液体，保留磁珠；
(6)DNA洗脱：向含磁珠的离心管中加入0.5ml洗脱液A重悬磁珠并室温静置2分钟，将离心管置于高强磁场中吸附磁珠，吸取液体并保留用于DNA 提取；
(7)向含磁珠的离心管中加入0.5ml去盐分漂洗液，漂洗磁珠，置离心管于磁场中，吸附磁珠弃液体；
(8)RNA洗脱：室温干燥磁珠5分钟，加入0.1ml洗脱液B水溶解RNA，置离心管于磁场中，收集液体即为高质量的RNA；
(9)DNA纯化：向第6步获得的DNA洗脱液加入结合液(4M盐酸胍， 50％异丙醇)与25ul二氧化硅四氧化三铁纳米磁珠，混匀后室温放置2分钟让磁珠充分吸附核酸。置离心管于磁场中吸附磁珠，弃液体；再加入0.5ml去盐分漂洗液，漂洗磁珠，置离心管于磁场中，吸附磁珠弃液体。室温干燥磁珠5 分钟，加入0.1ml去离子水水溶解DNA，置离心管于磁场中，收集液体即为高质量的DNA。
实施例4
本实施例提供一种同时提取DNA和RNA的试剂盒，包括以下成分：
细胞裂解液：1％CTAB、2M异硫氰酸胍、0.1M EDTA；
核酸结合液：40％乙醇溶液；
核酸吸附材料：硅质纯化柱；
洗脱液A：0.05M氯化钠，5％乙醇；
去蛋白漂洗液：1M盐酸胍50％乙醇；
去盐分漂洗液：75％乙醇溶液；
洗脱液B：DEPC处理水。
本实施所述同时提取DNA和RNA试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
(1)将100mg植物样品经液氮研磨后中加入到含有0.6ml细胞裂解液的 1.5ml离心管中，剧烈涡旋混匀，常温12000rpm离心1min，获得上清；
(2)取上述步骤(1)获得的上清0.4ml，加入0.4ml核酸结合液，混匀后转移混合物到硅质纯化柱中，离心过滤吸附核酸；
(3)向步骤(2)处理后的硅质纯化柱中加入0.5ml去蛋白漂洗液，离心除掉漂洗液；
(4)DNA洗脱：向步骤(3)处理后的硅质纯化柱中加入0.5ml洗脱液A，离心收集过滤液用于DNA提取与纯化；
(5)向步骤(4)处理后的硅质纯化柱中加入0.5ml DNA洗脱液，室温下 12000rpm离心1min并干燥；
(6)RNA洗脱：向步骤(5)处理后的硅质纯化柱中加入0.1ml DEPC水，离心洗脱即获得RNA；
(7)DNA纯化：取步骤(4)获得的滤液，加入等体积的异丙醇，混匀后室温下12000rpm离心1min，去掉上清保留沉淀，加入0.6ml去盐分漂洗液，混匀后室温下12000rpm离心1min，重复两次后室温干燥1min，加入0.1ml DEPC 处理水溶解沉淀，即获得高纯度DNA。
实施例5
一种同时提取DNA和RNA的试剂盒，包括以下成分：
细胞裂解液：20％吐温20/5M异硫氰酸胍、1M EGTA；
核酸结合液：80％乙醇溶液；
核酸吸附材料：硅质纯化柱；
洗脱液A：6M氯化铵、40％乙醇；
去蛋白漂洗液：3M异硫氰酸胍、40％乙醇；
去盐分漂洗液：75％乙醇溶液；
洗脱液B：DEPC处理水。
上述同时提取DNA和RNA试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
(1)将30mg动物组织样品加入到含有0.6ml细胞裂解液的1.5ml离心管中，用研磨杵将组织彻底研磨，混匀常温12000rpm离心1min，获得上清；
(2)取上述步骤(1)获得的上清0.4ml，加入0.4ml洗脱液A，混匀后转移混合物到硅质纯化柱中，离心过滤吸附核酸；
(3)向步骤(2)处理后的硅质纯化柱中加入0.5ml去蛋白漂洗液，离心除掉漂洗液；
(4)DNA洗脱：向步骤(3)处理后的硅质纯化柱中加入0.5ml DNA洗脱液，离心收集过滤液用于DNA提取与纯化；
(5)向步骤(4)处理后的硅质纯化柱中加入0.5ml DNA洗脱液，室温下 12000rpm离心1min并干燥；
(6)RNA洗脱：向步骤(5)处理后的硅质纯化柱中加入0.1ml DEPC水，离心洗脱即获得RNA；
(7)DNA纯化：取步骤(4)获得的滤液，加入等倍体积的无水乙醇，混匀后转移混合液到新的硅质纯化柱中，室温下12000rpm离心1min，用0.6ml 80％乙醇漂洗纯化柱2次后，空柱子离心1分钟，干燥柱子，向纯化加入0.1ml去离子水，离心洗脱，获得高纯度DNA。
对比例1
取与实施例1相同的样品100mg，采用TRNzol法(TRNsol，来自GBCBIO 公司产品)进行提取DNA和RNA。
效果例1
采用实施例1的试剂盒及使用方法分别提取三叶草叶片和玉米粒的DNA和 RNA；采用实施例2的试剂盒及使用方法分别提取罗非鱼肝脏和青蛙心肌的DNA与RNA；采用实施例3的试剂盒及使用方法分别提取细菌培养物和霉菌培养物的DNA和RNA；采用对比例1的方法分别提取罗非鱼肝脏与三叶草叶片的DNA和RNA。
使用Nanodrop测定上述提取DNA与RNA的纯度，结果如表1和表2。从表1和表2可以看出，实施例1～3提取的DNA纯度(OD260/OD280比值在1.8 左右)与RNA的纯度都十分高(OD260/OD280比值在2.0左右)；对比例1提取的DNA的OD260/280比值低于1.8，表表明所得DNA纯度不高。
表1：各实例提取的DNA含量与纯度评价表
表2各实例提取的DNA含量与纯度评价表
对上述提取DNA与RNA使用1％琼脂糖凝胶电泳进行检测，结果图1。从图1可以看出，实施例1～3所提取的RNA条带完整，无明显的DNA污染；对比例1提取的植物RNA有降解的现象。
综上所述，本发明的平时提取DNA和RNA的试剂盒效果稳定，提取质量高，具有快速、高效，环保、可同时提取DNA和RNA的优点。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明做了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种同时提取DNA和RNA的试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：细胞裂解液、核酸结合液、核酸吸附材料、洗脱液A、去蛋白漂洗液、去盐分漂洗液和洗脱液B。
2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述细胞裂解液包含以下成分：表面活性剂1～20％(v/v)、蛋白变性剂1～5mol/L、核酸酶抑制剂0.1～1mol/L、pH稳定剂0.1～1mol/L。
3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为十二烷基肌氨酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十六烷基三甲基溴化铵、曲拉通X-100、吐温20中的至少一种；
所述蛋白变性剂为盐酸胍、异硫氰酸胍或尿素中的至少一种；
所述核酸酶抑制剂为乙二胺四乙酸、乙二醇-双-(2-氨基乙醚)四乙酸、巯基乙醇、TCEP或者二硫苏糖醇中的至少一种；
所述的pH稳定剂为三羟甲基氨基甲烷、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、3-吗啉丙磺酸、N-三(羟甲基)甲基甘氨酸中的至少一种。
4.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述核酸结合液为含胍盐的溶液、醇溶液中的至少一种；所述含胍盐的溶液中胍盐的浓度为0.1～8mol/L，所属醇溶液中醇的体积百分比为40～80％。
5.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述胍盐为盐酸胍、异硫氰酸胍中的至少一种，所述胍盐的浓度为1～4mol/L；
所述醇溶液中的醇为乙醇、聚乙二醇或异丙醇，所述醇溶液中醇的体积百分比为40～60％。
6.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述核酸吸附材料为硅质纯化柱或二氧化硅四氧化三铁纳米磁珠。
7.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述洗脱液A为含氯化物的溶液、醇溶液中的至少一种；所述含氯化物的溶液中氯化物的浓度为0.05～6mol/L,所述醇溶液中醇的体积百分比为5～40％。
8.根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于，所述氯化物为氯化钠、氯化铵、氯化镁中至少一种；
所述醇溶液中的醇为乙醇或异丙醇，所述醇溶液中醇的体积百分比为4～30％。
9.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述去蛋白漂洗液中胍盐的浓度为1～4mol/L，所述去蛋白漂洗液中乙醇的体积百分比为10～50％；所述去盐漂洗液为75％乙醇溶液；所述洗脱液B为DEPC处理水。
10.根据权利要求1～9所述试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在样品中加入裂解液，混匀并离心获得上清液；
(2)取步骤(1)中的上清液加入核酸结合液，混匀后转移到核酸吸附材料中；
(3)当所述核酸吸附材料为硅质纯化柱时，将步骤(2)中的核酸吸附材料离心弃除离心液，并向核酸吸附材料中加入去蛋白漂洗液，离心保留吸附材料；
当所述核酸吸附材料为二氧化硅四氧化三铁纳米磁珠时，将步骤(2)得到的核酸吸附材料置于磁场中，去除液体并保留吸附材料；
(4)DNA洗脱：向步骤(3)处理后的核酸吸附材料中加入洗脱液A，离心收集滤液；
(5)向步骤(4)处理后的核酸吸附材料中加入洗脱液A，离心保留核酸吸附材料并干燥；
(6)RNA洗脱：向步骤(5)处理后的核酸吸附材料中加入洗脱液B，离心即获得RNA；
(7)DNA纯化：取步骤(4)获得的滤液，加入等体积的核酸结合液，混匀，转移到吸附材料，离心吸附DNA，去除滤液，加入去盐分洗脱液，室温离心，重复一次后室温干燥，加入洗脱液B，即获得DNA。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010746877.0A CN111808844A (zh) | 2020-07-29 | 2020-07-29 | 一种同时提取dna和rna的试剂盒及其使用方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010746877.0A CN111808844A (zh) | 2020-07-29 | 2020-07-29 | 一种同时提取dna和rna的试剂盒及其使用方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111808844A true CN111808844A (zh) | 2020-10-23 |
Family
ID=72864019
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010746877.0A Pending CN111808844A (zh) | 2020-07-29 | 2020-07-29 | 一种同时提取dna和rna的试剂盒及其使用方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111808844A (zh) |
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112501158A (zh) * | 2020-12-04 | 2021-03-16 | 麦凯(上海)生物科技有限公司 | 一种人液体样本全核酸抽提试剂盒及其应用 |
| CN112725334A (zh) * | 2021-02-23 | 2021-04-30 | 山东思科捷生物技术有限公司 | 一种细胞rna快速提取试剂盒及rna提取方法 |
| CN112980832A (zh) * | 2021-04-23 | 2021-06-18 | 南方科技大学 | 一种核酸的提取方法以及用于核酸提取的试剂盒 |
| CN113215150A (zh) * | 2021-06-24 | 2021-08-06 | 常州艾立贝医疗科技有限公司 | 一种保存裂解液及基于其的样本核酸快速提取方法 |
| CN113265399A (zh) * | 2021-06-18 | 2021-08-17 | 汉远化生医国际科技(北京)有限公司 | 一种绿色快速动物组织dna提取方法 |
| CN113684203A (zh) * | 2021-08-11 | 2021-11-23 | 汉远化生医国际科技(北京)有限公司 | 一种快速提取生物核酸的样品处理方法 |
| CN113789323A (zh) * | 2021-10-15 | 2021-12-14 | 苏州中科先进技术研究院有限公司 | 一种尿液基因组提取试剂盒及使用方法 |
| CN114279786A (zh) * | 2021-12-24 | 2022-04-05 | 河南省农业科学院经济作物研究所 | 一种适用于油莎豆流式细胞术样品的制备方法及细胞裂解液 |
| CN114517196A (zh) * | 2022-02-25 | 2022-05-20 | 杭州诺辉健康科技有限公司 | 一种血浆游离miRNA提取方法及其应用 |
| CN114525274A (zh) * | 2022-03-22 | 2022-05-24 | 合肥欧创基因生物科技有限公司 | 一种裂解液及基于该裂解液的离心柱法病毒核酸提取试剂盒 |
| CN114908081A (zh) * | 2022-04-29 | 2022-08-16 | 杭州新景生物试剂开发有限公司 | 一种核酸提取试剂及其试剂盒以及快速萃取分离纯化核酸的方法 |
| CN116694623A (zh) * | 2023-07-24 | 2023-09-05 | 中国人民解放军空军特色医学中心 | 用于从微量动物或植物组织中同时快速高效提取dna、rna以及蛋白质的裂解液及其提取方法 |
| CN117384898A (zh) * | 2023-09-25 | 2024-01-12 | 禾盛(广州)医疗科技有限责任公司 | 血液核酸释放剂、试剂盒及其提取方法 |
| CN117625740A (zh) * | 2023-11-01 | 2024-03-01 | 嘉应学院 | 一种从Trizol样品中快速提取适用于高通量测序的DNA的方法 |
| CN118240814A (zh) * | 2024-05-20 | 2024-06-25 | 中山大学 | 一种完全区分dna和rna的纯化方法及rna纯化试剂盒 |
| CN118497195A (zh) * | 2024-07-18 | 2024-08-16 | 中山大学 | 一种基于trizol裂解液的无氯仿无相分快速提取rna的方法及其应用 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6180778B1 (en) * | 1994-02-11 | 2001-01-30 | Qiagen Gmbh | Process for the separation of double-stranded/single-stranded nucleic acid structures |
| CN101233233A (zh) * | 2005-08-30 | 2008-07-30 | 富士胶片株式会社 | 分离和纯化rna的方法 |
| CN101243186A (zh) * | 2005-09-28 | 2008-08-13 | 富士胶片株式会社 | 核酸的提取方法 |
| US20090143570A1 (en) * | 2007-11-30 | 2009-06-04 | Ge Healthcare Bio-Sciences Corp. | Method for isolation of genomic dna, rna and proteins from a single sample |
| CN101613697A (zh) * | 2009-08-05 | 2009-12-30 | 公安部物证鉴定中心 | 一种提取纯化dna的方法 |
| CN102703437A (zh) * | 2012-06-26 | 2012-10-03 | 北京艾德莱生物科技有限公司 | 无dna残留的rna提取试剂盒及rna提取方法 |
| CN108342383A (zh) * | 2018-02-28 | 2018-07-31 | 默禾医疗科技（上海）有限公司 | 一种高纯度dna或rna的快速提取试剂盒及其提取方法 |
| CN108949747A (zh) * | 2018-07-27 | 2018-12-07 | 广州奇辉生物科技有限公司 | 一种提取rna的试剂盒及应用方法 |
| CN110511925A (zh) * | 2019-08-29 | 2019-11-29 | 无锡市第二人民医院 | 一种柱式法全血核酸保存提取一体化试剂盒及提取方法 |
-
2020
- 2020-07-29 CN CN202010746877.0A patent/CN111808844A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6180778B1 (en) * | 1994-02-11 | 2001-01-30 | Qiagen Gmbh | Process for the separation of double-stranded/single-stranded nucleic acid structures |
| CN101233233A (zh) * | 2005-08-30 | 2008-07-30 | 富士胶片株式会社 | 分离和纯化rna的方法 |
| CN101243186A (zh) * | 2005-09-28 | 2008-08-13 | 富士胶片株式会社 | 核酸的提取方法 |
| US20090143570A1 (en) * | 2007-11-30 | 2009-06-04 | Ge Healthcare Bio-Sciences Corp. | Method for isolation of genomic dna, rna and proteins from a single sample |
| CN101613697A (zh) * | 2009-08-05 | 2009-12-30 | 公安部物证鉴定中心 | 一种提取纯化dna的方法 |
| CN102703437A (zh) * | 2012-06-26 | 2012-10-03 | 北京艾德莱生物科技有限公司 | 无dna残留的rna提取试剂盒及rna提取方法 |
| CN108342383A (zh) * | 2018-02-28 | 2018-07-31 | 默禾医疗科技（上海）有限公司 | 一种高纯度dna或rna的快速提取试剂盒及其提取方法 |
| CN108949747A (zh) * | 2018-07-27 | 2018-12-07 | 广州奇辉生物科技有限公司 | 一种提取rna的试剂盒及应用方法 |
| CN110511925A (zh) * | 2019-08-29 | 2019-11-29 | 无锡市第二人民医院 | 一种柱式法全血核酸保存提取一体化试剂盒及提取方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李海洋;王飞;雷红涛;张璇;陈珂;: "硅羟基磁珠的制备及全基因组DNA提取优化", 生物技术通报, no. 06, pages 223 - 229 * |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112501158A (zh) * | 2020-12-04 | 2021-03-16 | 麦凯(上海)生物科技有限公司 | 一种人液体样本全核酸抽提试剂盒及其应用 |
| CN112725334A (zh) * | 2021-02-23 | 2021-04-30 | 山东思科捷生物技术有限公司 | 一种细胞rna快速提取试剂盒及rna提取方法 |
| CN112980832A (zh) * | 2021-04-23 | 2021-06-18 | 南方科技大学 | 一种核酸的提取方法以及用于核酸提取的试剂盒 |
| CN113265399A (zh) * | 2021-06-18 | 2021-08-17 | 汉远化生医国际科技(北京)有限公司 | 一种绿色快速动物组织dna提取方法 |
| CN113215150A (zh) * | 2021-06-24 | 2021-08-06 | 常州艾立贝医疗科技有限公司 | 一种保存裂解液及基于其的样本核酸快速提取方法 |
| CN113684203A (zh) * | 2021-08-11 | 2021-11-23 | 汉远化生医国际科技(北京)有限公司 | 一种快速提取生物核酸的样品处理方法 |
| CN113789323A (zh) * | 2021-10-15 | 2021-12-14 | 苏州中科先进技术研究院有限公司 | 一种尿液基因组提取试剂盒及使用方法 |
| CN114279786A (zh) * | 2021-12-24 | 2022-04-05 | 河南省农业科学院经济作物研究所 | 一种适用于油莎豆流式细胞术样品的制备方法及细胞裂解液 |
| CN114517196A (zh) * | 2022-02-25 | 2022-05-20 | 杭州诺辉健康科技有限公司 | 一种血浆游离miRNA提取方法及其应用 |
| CN114525274A (zh) * | 2022-03-22 | 2022-05-24 | 合肥欧创基因生物科技有限公司 | 一种裂解液及基于该裂解液的离心柱法病毒核酸提取试剂盒 |
| CN114908081A (zh) * | 2022-04-29 | 2022-08-16 | 杭州新景生物试剂开发有限公司 | 一种核酸提取试剂及其试剂盒以及快速萃取分离纯化核酸的方法 |
| CN116694623A (zh) * | 2023-07-24 | 2023-09-05 | 中国人民解放军空军特色医学中心 | 用于从微量动物或植物组织中同时快速高效提取dna、rna以及蛋白质的裂解液及其提取方法 |
| CN116694623B (zh) * | 2023-07-24 | 2024-01-02 | 中国人民解放军空军特色医学中心 | 用于从微量动物或植物组织中同时快速高效提取dna、rna以及蛋白质的裂解液及其提取方法 |
| CN117384898A (zh) * | 2023-09-25 | 2024-01-12 | 禾盛(广州)医疗科技有限责任公司 | 血液核酸释放剂、试剂盒及其提取方法 |
| CN117625740A (zh) * | 2023-11-01 | 2024-03-01 | 嘉应学院 | 一种从Trizol样品中快速提取适用于高通量测序的DNA的方法 |
| CN118240814A (zh) * | 2024-05-20 | 2024-06-25 | 中山大学 | 一种完全区分dna和rna的纯化方法及rna纯化试剂盒 |
| CN118497195A (zh) * | 2024-07-18 | 2024-08-16 | 中山大学 | 一种基于trizol裂解液的无氯仿无相分快速提取rna的方法及其应用 |
| CN118497195B (zh) * | 2024-07-18 | 2024-09-27 | 中山大学 | 一种基于trizol裂解液的无氯仿无相分快速提取rna的方法及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111808844A (zh) | 一种同时提取dna和rna的试剂盒及其使用方法 | |
| EP1994142B1 (en) | Methods and compositions for the rapid isolation of small rna molecules | |
| JP5390772B2 (ja) | 核酸を安定化試薬から精製するための組成物および方法 | |
| EP2066792B1 (en) | Nucleic acid purification method using anion exchange | |
| US7655794B2 (en) | Nucleic acid purification method | |
| US5010183A (en) | Process for purifying DNA and RNA using cationic detergents | |
| CN110923228A (zh) | 一种磁珠法核酸纯化的结合液、试剂盒、方法及应用 | |
| EP2069495B1 (en) | Nucleic acid purification method | |
| CN113388611B (zh) | 磁珠法提取稳定型细菌基因组dna的试剂盒及其提取方法 | |
| US20120130061A1 (en) | Method F Method For Isolating And Purifying Nucleic Acids | |
| US20230203476A1 (en) | Nucleic acid extraction method and application | |
| CN117264944A (zh) | 一种用于磁珠法血液dna快速提取的裂解结合液、包括该裂解液的试剂盒及其应用 | |
| EP2250182B1 (en) | Isolation of dna, rna and protein from a single sample | |
| US20080139800A1 (en) | Process For the Concentration and/or Isolation of Nucleic Acid or Nucleic Acid-Containing Species | |
| CN112921028A (zh) | Dna纯化方法、基因组dna的提取方法、测序方法和试剂盒 | |
| WO2009040444A1 (en) | Rna isolation method | |
| JP3922419B2 (ja) | 純度の高いポリａ＋ｒｎａの精製方法 | |
| JP3922420B2 (ja) | 改良されたリボ核酸の単離方法 | |
| KR100622606B1 (ko) | 단일공정에 의한 플라스미드 ｄｎａ 정제용 조성물과 그를이용하여 플라스미드 ｄｎａ를 정제하는 방법 | |
| Gaikwad | DNA extraction: Comparison of methodologies | |
| CN116004613A (zh) | 一种基于磁珠法快速提取植物组织总rna的方法 | |
| Parimoo et al. | Sample Preparation in RNA Analysis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |