CN110923228A - 一种磁珠法核酸纯化的结合液、试剂盒、方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种磁珠法核酸纯化的结合液、试剂盒、方法及应用，所述结合液包括柠檬酸盐缓冲液、EDTA、醋酸钠、氯化锂和异丙醇，所述结合液不包括胍盐。本发明的结合液不含胍盐，能长时间与磁珠共存，且能充分促进核酸沉淀以及与磁珠的结合，低异丙醇含量有助于提高核酸纯度，降低杂质与磁珠的非特异性结合。

Description

一种磁珠法核酸纯化的结合液、试剂盒、方法及应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种磁珠核酸纯化的结合液、试剂盒、方法及应用。

背景技术

磁珠法核酸提取试剂是结合生物化学和纳米材料科学的新技术产品，经过化学修饰的超顺磁性纳米磁珠能够在特定的离子反应体系中与核酸分子特异性结合，利用该原理可以从各种动物组织、细胞、微生物中分离DNA，应用于下游的各种研究和检测领域。

磁珠法核酸提取过程分为四个步骤：裂解-结合-漂洗-洗脱。其中裂解需要用到裂解液以及辅助添加剂如蛋白酶K，二硫苏糖醇(DTT)等，结合需要在特定离子反应试剂中加入磁珠与裂解产物中的核酸进行结合，漂洗则是利用不同的醇类组合对磁珠进行清洗，去除样本中含有的杂质以及前面提取步骤中引入的杂质，最后在中性水溶液作用下把核酸从磁珠上洗脱下来。

CN109022417A公开了一种磁珠法核酸提取转化试剂盒及其使用方法。所述试剂盒包括裂解液、蛋白酶K、磁珠液、转化试剂、核酸保护剂、结合液、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ及洗脱剂。该试剂盒的使用方法包括步骤：(1)裂解；(2)转化；(3)分层；(4)结合；(5)初级洗涤；(6)次级洗涤；(7)干燥；(8)洗脱。该发明所述的试剂盒及其使用方法能实现样本在进行自动化核酸提取的同时完成转化。样本被裂解释放核酸后便开始转化，并且在转化完成后通过结合液使核酸与蛋白质分离，然后用磁珠法对甲基化的核酸进行纯化，再以后续对样品的qPCR检测时试验程序中的预变性步骤来代替前面省略的脱磺基步骤，整个提取转化程省去了原核酸提取步骤中的纯化过程。

CN107663521A公开了血浆游离核酸提取试剂盒及其应用，其中，该试剂盒包括：(1)磁珠裂解结合液，(2)第一清洗液，(3)第二清洗液，(4)洗脱液。利用该发明的血浆游离核酸提取试剂盒能够快速提取血浆中的游离脱氧核糖核酸，且其使用快速简便，无需离心只需半小时就可以完成一次批量提取，且获得的核酸质量好，用于后续测序和检测的结果准确可靠。但该试剂盒针对于血浆样本，无法满足其他样本类型的核酸提取。

CN101613697A公开了一种提取纯化DNA的方法。该方法包括以下步骤：1)预处理：将生物样品与预处理裂解液接触，去除生物细胞所粘附的固体物质，得到粗裂解液；2)核酸吸附：将步骤1)得到的粗裂解液与裂解结合液以及磁珠悬浮液混合，形成含有磁性纳米微球-DNA的复合体的溶液体系，收集所述溶液体系中的磁性纳米微球-DNA的复合体；3)洗涤：将步骤2)得到的磁性纳米微球-DNA的复合体依次用洗涤液I、洗涤液II洗涤，然后用洗脱液溶出DNA。该发明提供的方法提取DNA的效率可达90％，提取的DNA可应用于STR复合扩增、DNA测序、DNA定量等下游分析操作。

在法医应用领域里，物证来源具有相当的复杂性，样本具有多宿主，多组织来源性，同时又含有复杂的杂质或核酸提取扩增抑制物。目前，市面上大部分磁珠提取试剂盒对样本有选择性，裂解液中的成分比较简单，大多参照传统的核酸提取方法进行配置，遇到复杂多样的样品时往往需要用到不同的试剂盒进行核酸提取，增加操作者的工作难度；其次，结合的步骤涉及核酸吸附剂和磁珠的混合，市面上大部分的结合液中含有胍盐，胍盐虽然可以促进核酸的沉淀以及与磁珠的结合，但是大部分的磁珠不能与胍盐长期保存，因此在生产过程中需要生产人员把磁珠和结合液分别存放，对于自动化设备的试剂生产尤其麻烦，需要把磁珠与结合液分别分装于不同的耗材中，加重生产人员的工作负担；再次，核酸的最佳保存方法是-80℃或液氮低温保存，但大部分科研单位或企业选择价格便宜的TE缓冲液或超纯水，于-20℃保存，但随着时间的推移仍然无法避免核酸降解。

因此，提供一种多样本适应性的磁珠法核酸纯化结合液、试剂盒及方法具有重要意义和广阔的应用前景。

发明内容

针对现有技术的不足及实际的需求，本发明提供一种磁珠法核酸纯化的结合液、试剂盒、方法及应用，本发明的结合液、试剂盒及方法能满足多种样本来源的核酸提取，提取得到的核酸完整，保存时间延长，能用于各种下游分子生物学实验。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种磁珠法核酸纯化的结合液，所述结合液包括柠檬酸盐缓冲液、EDTA、醋酸钠、氯化锂和异丙醇，所述结合液不包括胍盐。

磁珠法提取核酸涉及裂解、结合、漂洗和洗脱四个步骤，结合的步骤涉及核酸吸附剂和磁珠的混合，现有技术中大部分的结合液中含有胍盐，胍盐虽然可以促进核酸的沉淀以及与磁珠的结合，但是大部分的磁珠不能与胍盐长期保存，因此在生产过程中需要生产人员把磁珠和结合液分别存放，对于自动化设备的试剂生产尤其麻烦，需要把磁珠与结合液分别分装于不同的耗材中，加重生产人员的工作负担。本发明通过调整结合液的组成和pH值，在不含胍盐的情况下仍满足核酸的充分沉淀以及与磁珠的混合，使得磁珠可以与结合液长期共存，简化结合液与磁珠的自动化生产过程。

所述柠檬酸盐缓冲液的终浓度为50-100mM，例如可以是50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM或100mM。

本发明中，“M”为mol/L的简写，“mM”为mmol/L。

优选地，所述EDTA的终浓度为1-10mM，例如可以是1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM或10mM。

优选地，所述醋酸钠的终浓度为100-300mM，例如可以是100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM、200mM、210mM、22mM、0230mM、240mM、250mM、260mM、270mM、280mM、290mM或300mM。

优选地，所述氯化锂的终浓度为100-200mM，例如可以是100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM或200mM。

优选地，所述异丙醇的体积分数为10-30％，例如可以是10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％。

优选地，所述结合液包括50-100mM的柠檬酸盐缓冲液、1-10mM的EDTA、100-300mM的醋酸钠、100-200mM的氯化锂和10-30％(v/v)的异丙醇。

优选地，所述结合液的pH值为5.0-7.0，优选为6.5。

第二方面，本发明提供一种磁珠法核酸纯化试剂盒，所述试剂盒包括如第一方面所述的结合液。

本发明提供的试剂盒具有广泛样本适应性的核酸试剂盒，其中裂解液中包含更丰富的裂解成分，结合液中不含有胍盐成分，允许磁珠与结合液长期保存，洗脱液中添加核酸保护剂，延长核酸的保存时间，同时防止微生物污染。

优选地，所述试剂盒还包括裂解液、漂洗液和洗脱液。

优选地，所述裂解液包括Tris-HCl、EDTA、胍盐、表面活性剂和NaCl。

优选地，所述Tris-HCl的终浓度为50-150mM，例如可以是50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM、100mM、110mM、120mM、130mM、140mM或150mM。

优选地，所述EDTA的终浓度为1-10mM，例如可以是1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM或10mM。

优选地，所述胍盐包括盐酸胍和异硫氰酸胍。

优选地，所述盐酸胍的终浓度为2-4M，例如可以是2M、2.5M、3M、3.5M或4M。

优选地，所述异硫氰酸胍的终浓度为2-4M，例如可以是2M、2.5M、3M、3.5M或4M。

优选地，所述表面活性剂包括SDS、TritonX-100和Tween-20。

优选地，所述SDS与裂解液的质量体积比为0.5-1％，例如可以是0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1％。

优选地，所述Triton-X的体积分数为1-2％，例如可以是1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％或2％。

优选地，所述Tween-20的体积分数为1-2％，例如可以是1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％或2％。

优选地，所述NaCl的终浓度为50-100mM，例如可以是50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM或100mM。

优选地，所述裂解液的pH值为7.0-8.0，例如可以是7.0、7.2、7.5、7.8、8.0。

优选地，所述裂解液包括：50-150mM的Tris-HCl、1-10mM的EDTA、2-4M的盐酸胍、2-4M的异硫氰酸胍、0.5-1％(m/v)的SDS、1-2％(v/v)的Triston-X、1-2％(v/v)的Tween-20、50-100mM的NaCl。

本发明的裂解液成分丰富，各组分配比合理，裂解效果更佳，有利于后续核酸与磁珠的充分结合。

优选地，所述裂解液还包括DTT或/和蛋白酶K。

本发明中，根据样本的不同可以选择性添加DTT或/和蛋白酶K，蛋白酶K的工作终浓度为1-2mg/mL，DTT的工作终浓度为1-10mM，例如可以是1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM或10mM。

优选地，所述漂洗液包括漂洗液I和漂洗液II。

优选地，所述漂洗液I包括Tris-HCl、NaCl、EDTA和盐酸胍。

优选地，所述Tris-HCl的终浓度为1-10mM，例如可以是1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM或10mM。

优选地，所述NaCl的终浓度为50-100mM，例如可以是50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM或100mM。

优选地，所述EDTA的终浓度为1-5mM，例如可以是1mM、2mM、3mM、4mM或5mM。

优选地，所述盐酸胍的终浓度为1-2M，例如可以是1M、1.1M、1.2M、1.3M、1.4M、1.5M、1.6M、1.7M、1.8M、1.9M或2M。

优选地，所述漂洗液I包括1-10mM的Tris-HCl、50-100mM的NaCl、1-5mM的EDTA和1-2M的盐酸胍。

优选地，所述漂洗液I的pH值为7.5-8.5。

优选地，所述漂洗液II包括Tris-HCl、EDTA和乙醇。

优选地，所述Tris-HCl的终浓度为1-10mM，例如可以是1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM或10mM。

优选地，所述EDTA的终浓度为1-5mM，例如可以是1mM、2mM、3mM、4mM或5mM。

优选地，所述乙醇的体积分数为75-85％，例如可以是75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％或85％。

优选地，所述漂洗液II包括1-10mM的Tris-HCl、1-5mM的DTA和75-85％(v/v)的乙醇。

优选地，所述漂洗液II的pH值为7.5-8.5。

优选地，所述洗脱液包括Tris-HCl、EDTA和核酸保护剂。

优选地，所述Tris-HCl的终浓度为1-10mM，例如可以是1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM或10mM。

优选地，所述EDTA的终浓度为1-5mM，例如可以是1mM、2mM、3mM、4mM或5mM。

优选地，所述核酸保护剂包括甘油、SDS和氟化钠。

优选地，所述甘油的体积分数为1-5％。

优选地，所述SDS与洗脱液的质量体积比为0.01-0.05％，例如可以是0.01％、0.02％、0.03％、0.04％或0.05％。

优选地，所述氟化钠与洗脱液的质量体积比为0.01-0.02％，例如可以是0.01％、0.015％或0.02％。

优选地，所述洗脱液包括1-10mM的Tris-HCl、1-5mM的EDTA、1-5％(v/v)的甘油、0.01-0.05％(m/v)的SDS和0.01-0.02％(m/v)的氟化钠。

本发明中通过组合配比甘油、SDS和氟化钠，使洗脱液的成分更加温和，保护核酸的完整，提高保存的时间。

优选地，所述洗脱液的pH值为7.5-8.5。

第三方面，本发明提供一种如第一方面所述的结合液和/或第二方面所述的试剂盒的应用，所述裂解液和/或试剂盒用于提取纯化生物样本的核酸。

优选地，所述生物样本包括全血、血斑、细胞培养物、细菌培养物、组织、精液、精斑、毛发或唾液中的任一种或至少两种的组合。

优选地，所述生物样本的载体包括FTA卡、定性滤纸、纱布、烟蒂、指甲或擦拭物中的任一种或至少两种的组合。

优选地，所述核酸用于PCR、酶切、分子杂交或文库构建中的任一种或至少两种的组合。

第四方面，本发明提供一种磁珠法核酸纯化的方法，使用如第二方面所述试剂盒进行核酸提取。

优选地，所述方法包括如下步骤：

(1)将样本与裂解液混合，孵育，离心取上清液；

(2)将步骤(1)所得上清液、结合液和磁珠混匀，孵育；

(3)磁吸，移除上清液，然后加入漂洗液I，震荡；

(4)将步骤(3)所得混合液磁吸后移除上清液，加入漂洗液II，震荡；

(5)将步骤(4)所得混合液磁吸后移除上清液，自然晾干，加入洗脱液得纯化后的核酸。

优选地，步骤(2)所述结合液与磁珠的体积比为(10-50):1，例如可以是10:1、15:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1或50:1。

优选地，步骤(2)所述孵育的时间为8-12min，优选为10min。

优选地，步骤(3)所述磁吸的时间为50-70s，优选为60s。

优选地，步骤(5)所述晾干的时间为3-5min。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明的结合液不含胍盐，能长时间与磁珠共存，且能充分促进核酸沉淀以及与磁珠的结合，低异丙醇含量有助于提高核酸纯度，降低杂质与磁珠的非特异性结合；

(2)本发明的试剂盒组合优化裂解液、结合液、漂洗液和洗脱液，使其可用于多种样本的核酸提取，具有普适性，对滤纸、纱布等较难提取核酸的载体具有很好的适应性，同样适用于烟蒂、屏幕拭子、矿泉水瓶口等复杂载体上的核酸提取；

(3)本发明试剂盒中洗脱液包含核酸保护试剂，通过甘油、SDS和氟化钠的组合配比可以显著延长提取后的核酸在常温或低温状态的保存时间，核酸质量高，可以提高下游实验的扩增效率，此外还可以防止微生物污染。

附图说明

图1为实施例2中FTA卡上血斑的STR分型结果；

图2为实施例2中纱布上血斑的STR分型结果；

图3为实施例2中滤纸上血斑的STR分型结果；

图4为实施例3中烟蒂上提取的DNA的STR分型结果；

图5为实施例3中指甲上提取的DNA的STR分型结果；

图6为实施例3中手机屏幕擦拭子上提取的DNA的STR分型结果；

图7为实施例3中矿泉水瓶口上提取的DNA的STR分型结果；

图8为实施例3中钱包上提取的DNA的STR分型结果。

具体实施方式

为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。

实施例1试剂盒的组装

按照以下各液体的配方进行配制：

1、裂解液(pH7.0-8.0)：Tris-Cl(50-150mM)，EDTA(1-10mM)，盐酸股(2-4M)，异硫氰酸胍(2-4M)，SDS(0.5-1％，m/v)，TritonX-100(1-2％，v/v)，Tween-20(1-2％，v/v)，NaCl(50-100mM)，根据样本的不同选择加入DTT(1-10mM)，蛋白酶K(1-2mg/mL)；

2、结合液(pH5.0-6.0)：柠檬酸盐缓冲液(50-100mM)，EDTA(1-10mM)，醋酸钠(100-300mM)，氯化锂(100-200mM)，异丙醇(10-30％，v/v)；

3、漂洗液I(pH7.5-8.5)：Tris-Cl(1-10mM)，NaCl(50-100mM)，EDTA(1-5mM)，盐酸胍(1-2M)；

4、漂洗液II(pH7.5-8.5)：Tris-Cl(1-10mM)，EDTA(1-5mM)，乙醇(75-85％，v/v)；

5、洗脱液(pH7.5-8.5)：Tris-Cl(1-10mM)，EDTA(1-5mM)，甘油(1-5％，v/v)，SDS(0.01-0.05％，m/v)，氟化钠(0.01-0.02％，m/v)；

将上述裂解液、结合液、漂洗液I、漂洗液II和洗脱液与说明书一同装入试剂盒中。

实施例2 DNA回收率计算

采用实施例1所述试剂盒计算DNA回收率，具体步骤如下：分别取5ng，10ng，20ng标准基因组DNA，每个梯度重复3个样本，经下属提取过程进行DNA提取，提取后的DNA用Qubit3.0进行定量，计算提取前后的DNA回收率，定量结果见表1。

(1)取上述对应含量的标准DNA，稀释至10μl水溶液中，加入100-150μl裂解液，加入100-300μl结合液和10μl磁珠，于离心管中室温孵育10min(纯DNA不经过裂解步骤)；

(2)将离心管至于磁力架磁吸1min，移除上清液体；

(3)从磁力架上取下离心管，加入300μl漂洗液I，涡旋震荡5-10s；

(4)将离心管至于磁力架磁吸1min，移除上清液体；

(5)从磁力架上取下离心管，加入300μl漂洗液II，涡旋震荡5-10s；

(6)将离心管至于磁力架磁吸1min，移除上清液体；

(7)自然晾干3-5min；

(8)加入50μl洗脱液，在Qubit 3.0进行核酸定量

表1

由表1可知，本发明的试剂盒对DNA具有很高的回收率，能够保证样本在提取过程中核酸不会由于操作步骤造成严重的损失。

实施例3不同载体血液DNA提取

采用实施例1的试剂盒进行不同载体的DNA提取，具体步骤如下：取2μl全血，用200μl超纯水稀释后分别均匀滴在FTA卡、定性滤纸和纱布上，每种载体取3个重复样本。其中，FTA卡，定性滤纸，纱布均剪取0.2cm×0.2cm大小的样本进行提取：

(1)取上述样本于离心管中，加入200-400μl裂解液，加入2mg/mL蛋白酶K，56℃孵育20min；

(2)10000rpm离心后收集上清液，加入200-600μl结合液和15μl磁珠，室温孵育10min，期间震荡混匀；

(3)将离心管至于磁力架磁吸1min，移除上清液体；

(4)从磁力架上取下离心管，加入500μl漂洗液I，涡旋震荡5-10s；

(5)将离心管至于磁力架磁吸1min，移除上清液体；

(6)从磁力架上取下离心管，加入500μl漂洗液II，涡旋震荡5-10s；

(7)将离心管至于磁力架磁吸1min，移除上清液体；

(8)重复步骤(6)；

(9)自然晾干3-5min；

(10)加入50-100μl洗脱液，取6μl进行STR-PCR扩增，使用Promega公司的PowerPlex 21系统进行PCR反应，反应体积为10μl，29个反应循环。

对提取得到的核酸分别进行STR分型检测，结果如图1-3所示。STR(short tandemrepeat，短片段重复序列)广泛存在于人类及哺乳动物的基因组中，具有高度多态性，它们一般由2-6个碱基构成一个核心序列，核心序列串联重复排列，由核心序列重复数目的变化产生长度多态性。对于一个特定的个体，染色体上某个特定位置的重复序列的重复次数是固定的，而对于不同的个体在同一位置处的重复次数可能不同，通过对这种多态性的检测，就可以明确定性具体的个体。由图1-3可知，本发明的试剂盒对不同载体上的血液DNA均具有良好的回收能力，提取的DNA能够获得完整的STR分型。

实施例4对法医模拟检材的核酸提取测试

采用实施例1的试剂盒对法医模拟检材的核酸进行提取，具体步骤如下：随机收集各类法医模拟检材，如烟蒂，指甲，擦拭物(手机、矿泉水瓶、钱包等)，采用上述的核酸提取试剂盒进行核酸提取，提取样本通过PCR-STR检测提取效果。

(1)取上述样本于离心管中，根据样本大小加入200-500μl裂解液，0-2mg/mL蛋白酶K，0-10Mm DTT，56℃孵育15-30min；

(2)10000rpm离心后收集上清液，加入200-800μl结合液和10-20μl磁珠，室温孵育10min，期间震荡混匀；

(3)将离心管至于磁力架磁吸1min，移除上清液体；

(4)从磁力架上取下离心管，加入300-500μl漂洗液I，涡旋震荡5-10s；

(5)将离心管至于磁力架磁吸1min，移除上清液体；

(6)从磁力架上取下离心管，加入300-500μl漂洗液II，涡旋震荡5-10s；

(7)将离心管至于磁力架磁吸1min，移除上清液体；

(8)重复步骤(6)；

(9)自然晾干3-5min；

(10)加入50-100μl洗脱液，取6μl进行STR-PCR扩增，使用Promega公司的PowerPlex 21系统进行PCR反应，反应体积为10μl，29个反应循环。

对提取得到的核酸进行STR分型检测，结果见图4-8。

由图4-8可知，结本发明试剂盒能够有效提取各类法医模拟检材DNA，并且提取的DNA能够获得完整的STR分型。

实施例5 DNA保存性能测试

采用实施例1试剂盒中的洗脱液对提取到的核酸进行保存性能测试，具体包括如下步骤：利用管家基因β-actin的CT值来检测不同DNA保存液(洗脱液)中标准基因组DNA的含量变化，分别做常温静置24h、48h、72h、96h和-20℃保存5天，10天，20天，40天的对比实验，取10ng标准DNA作为起始量，通过qPCR检测不同时间段的CT值变化，结果见表2。

表2

由表2可知，随着时间的推移，本发明的DNA保存液(洗脱液)中DNA的降解速度低于普通的TE保存液，表明本发明的DNA保存液(洗脱液)对DNA的保存和保护更有效。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种磁珠法核酸纯化的结合液，其特征在于，所述结合液包括柠檬酸盐缓冲液、EDTA、醋酸钠、氯化锂和异丙醇，所述结合液不包括胍盐。

2.根据权利要求1所述的结合液，其特征在于，所述柠檬酸盐缓冲液的终浓度为50-100mM；

优选地，所述EDTA的终浓度为1-10mM；

优选地，所述醋酸钠的终浓度为100-300mM；

优选地，所述氯化锂的终浓度为100-200mM；

优选地，所述异丙醇的体积分数为10-30％；

优选地，所述结合液包括50-100mM的柠檬酸盐缓冲液、1-10mM的EDTA、100-300mM的醋酸钠、100-200mM的氯化锂和10-30％的异丙醇；

优选地，所述结合液的pH值为5.0-7.0，优选为6.5。

3.一种磁珠法核酸纯化试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1或2所述的结合液。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括裂解液、漂洗液和洗脱液；

优选地，所述裂解液包括Tris-HCl、EDTA、胍盐、表面活性剂和NaCl；

优选地，所述Tris-HCl的终浓度为50-150mM；

优选地，所述EDTA的终浓度为1-10mM；

优选地，所述胍盐包括盐酸胍和异硫氰酸胍；

优选地，所述盐酸胍的终浓度为2-4M；

优选地，所述异硫氰酸胍的终浓度为2-4M；

优选地，所述表面活性剂包括SDS、TritonX-100和Tween-20；

优选地，所述SDS与裂解液的质量体积比为0.5-1％；

优选地，所述Triton-X的体积分数为1-2％；

优选地，所述Tween-20的体积分数为1-2％；

优选地，所述NaCl的终浓度为50-100mM；

优选地，所述裂解液的pH值为7.0-8.0；

优选地，所述裂解液包括：50-150mM的Tris-HCl、1-10mM的EDTA、2-4M的盐酸胍、2-4M的异硫氰酸胍、0.5-1％的SDS、1-2％的Triston-X、1-2％的Tween-20和50-100mM的NaCl；

优选地，所述裂解液还包括DTT或/和蛋白酶K。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液包括漂洗液I和漂洗液II；

优选地，所述漂洗液I包括Tris-HCl、NaCl、EDTA和盐酸胍；

优选地，所述Tris-HCl的终浓度为1-10mM；

优选地，所述NaCl的终浓度为50-100mM；

优选地，所述EDTA的终浓度为1-5mM；

优选地，所述盐酸胍的终浓度为1-2M；

优选地，所述漂洗液I包括1-10mM的Tris-HCl、50-100mM的NaCl、1-5mM的EDTA和1-2M的盐酸胍；

优选地，所述漂洗液I的pH值为7.5-8.5；

优选地，所述漂洗液II包括Tris-HCl、EDTA和乙醇；

优选地，所述Tris-HCl的终浓度为1-10mM；

优选地，所述EDTA的终浓度为1-5mM；

优选地，所述乙醇的体积分数为75-85％；

优选地，所述漂洗液II包括1-10mM的Tris-HCl、1-5mM的DTA和75-85％的乙醇；

优选地，所述漂洗液II的pH值为7.5-8.5。

6.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包括Tris-HCl、EDTA和核酸保护剂；

优选地，所述Tris-HCl的终浓度为1-10mM；

优选地，所述EDTA的终浓度为1-5mM；

优选地，所述核酸保护剂包括甘油、SDS和氟化钠；

优选地，所述甘油的体积分数为1-5％；

优选地，所述SDS与洗脱液的质量体积比为0.01-0.05％；

优选地，所述氟化钠与洗脱液的质量体积比为0.01-0.02％；

优选地，所述洗脱液包括1-10mM的Tris-HCl、1-5mM的EDTA、1-5％的甘油、0.01-0.05％的SDS和0.01-0.02％的氟化钠；

优选地，所述洗脱液的pH值为7.5-8.5。

7.一种如权利要求1或2所述的结合液和/或权利要求3-6任一项所述的试剂盒的应用，其特征在于，所述裂解液和/或试剂盒用于提取纯化生物样本的核酸；

优选地，所述生物样本包括全血、血斑、细胞培养物、细菌培养物、组织、精液、精斑、毛发或唾液中的任一种或至少两种的组合；

优选地，所述生物样本的载体包括FTA卡、定性滤纸、纱布、烟蒂、指甲或擦拭物中的任一种或至少两种的组合；

优选地，所述核酸用于PCR、酶切、分子杂交或文库构建中的任一种或至少两种的组合。

8.一种磁珠法核酸纯化的方法，其特征在于，使用如权利要求3-6任一项所述试剂盒进行核酸提取。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将样本与裂解液混合，孵育，离心取上清液；

(2)将步骤(1)所得上清液、结合液和磁珠混匀，孵育；

(3)磁吸，移除上清液，然后加入漂洗液I，震荡；

(4)将步骤(3)所得混合液磁吸后移除上清液，加入漂洗液II，震荡；

(5)将步骤(4)所得混合液磁吸后移除上清液，自然晾干，加入洗脱液得纯化后的核酸。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述结合液与磁珠的体积比为(10-50):1；

优选地，步骤(2)所述孵育的时间为8-12min，优选为10min；

优选地，步骤(3)所述磁吸的时间为50-70s，优选为60s；

优选地，步骤(5)所述晾干的时间为3-5min。

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