CN114958825A - 一种差异化富集小片段核酸分子的方法 - Google Patents
一种差异化富集小片段核酸分子的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114958825A CN114958825A CN202210372920.0A CN202210372920A CN114958825A CN 114958825 A CN114958825 A CN 114958825A CN 202210372920 A CN202210372920 A CN 202210372920A CN 114958825 A CN114958825 A CN 114958825A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nucleic acid
- magnetic beads
- acid molecules
- fragment nucleic
- magnetic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 54
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 52
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 52
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims abstract description 94
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 92
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 30
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 23
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 21
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 16
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 12
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 9
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 9
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims description 8
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 claims description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 6
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 4
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 2
- BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N N-Lauroylsarcosine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)=O BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 claims description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 claims description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 2
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 abstract description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 5
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 18
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 8
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 238000003793 prenatal diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 2
- 208000032170 Congenital Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 206010055690 Foetal death Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 230000007698 birth defect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
- C12N15/1013—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种差异化富集小片段核酸分子的方法，裂解后的样品在低乙醇浓度下与第一磁珠结合，分离上清液和第一磁珠，上清液在高乙醇浓度下与第二磁珠结合，保留第二磁珠并洗脱，得到小片段核酸分子，其中低乙醇浓度是指反应体系中乙醇浓度为5％‑20％(V/V)，高乙醇浓度是指反应体系中乙醇浓度为21％‑35％(V/V)。本发明提供了一种差异化富集小片段核酸分子的方法，尤其是小片段核酸富集的提取方法，通过改变结合体系中乙醇的终比例，从而实现先将大片段核酸结合并分离，再将小片段核酸结合并富集的过程。使用本发明的方法，可以富集母体内游离的小片段胎儿DNA，用于后续检测，降低假阳性率。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种差异化富集小片段核酸分子的方法。
背景技术
随着医疗技术的发展，无创产前胎儿检测逐渐成为热门检测项目，减少了胎儿因出生缺陷导致的早期流产、死胎、先天残疾的情况发生。母血血浆中胎儿游离DNA正是无创产前诊断的主要研究目标。但是，由于胎儿游离DNA长度较短，片段长度一般小于300bp，母血血浆中胎儿游离DNA含量少，母体游离DNA含量多的缘故，导致无创产前诊断易出现假阳性的结果，给诊断带来困扰。因此，急需一种能够分离血浆游离DNA的方法，能够去除母血血浆中来源于母体的大片段游离DNA，又能够富集母血血浆中胎儿的小片段游离DNA的提取方法。
发明内容
本发明提供了一种差异化富集小片段核酸分子的方法，该方法可以在提取过程中分离样本中大片段核酸，保留并提取样本中的小片段核酸。
本发明采用的技术方案为：
一种差异化富集小片段核酸分子的方法，其特征在于：裂解后的样品在低乙醇浓度下与第一磁珠结合，在该过程中，大片段核酸分子会结合到第一磁珠上，而小片段核酸分子仍留存在溶液中；分离上清液和第一磁珠，上清液在高乙醇浓度下与第二磁珠结合，保留第二磁珠并洗脱，得到小片段核酸分子，其中低乙醇浓度是指反应体系中乙醇浓度为5％-20％，高乙醇浓度是指反应体系中乙醇浓度为21％-35％，且高于低乙醇浓度。本发明所指的小片段核酸分子，通常是指500bp以下的核酸片段，甚至300bp以下的片段。大片段核酸分子通常指大于500bp的核酸片段。
优选的，其步骤包括:
(1)样本裂解：在血浆样本中加入蛋白酶K和裂解液，进行裂解反应；
(2)大片段核酸分子的吸附：向裂解产物中加入结合液、乙醇和第一磁珠，进行吸附反应，所述第一磁珠为硅基磁珠，其中乙醇的加入量为使反应体系中乙醇浓度控制在5％-20％，其中结合液的作用为促进核酸与磁珠结合。
(3)分离第一磁珠和上清液：将步骤(2)获得的反应体系置于磁力架上，分离第一磁珠和上清液；
(4)小片段核酸分子的吸附：向上清液中加入乙醇和第二磁珠，使反应体系中乙醇浓度为21％-35％，进行吸附反应，所述第二磁珠为硅基磁珠；
(5)分离第二磁珠和上清液：将步骤(4)获得的反应体系置于磁力架上，分离第二磁珠和上清液；
(6)小片段核酸分子的回收：将第二磁珠置于洗脱液中，进行洗脱反应，然后分离磁珠和洗脱液，回收洗脱液，得到富集的小片段核酸分子。
优选的，在进行小片段核酸分子的回收之前，先对分离的第二磁珠进行洗涤。
优选的，步骤(1)中蛋白酶K：样品：裂解液的比例为40μL：1mL:125μL，反应过程为60℃孵育20min。
优选的，步骤(2)中裂解产物：结合液：第一磁珠的比例为1165μL：600μL：20μL，反应过程为室温颠倒混匀10min。
优选的，步骤(4)中第二磁珠的加入量与第一磁珠的加入量基本相同，反应过程为室温颠倒混匀10min。
优选的，步骤(6)中第二磁珠：洗脱液的比例为20μL：50μL，反应过程为涡旋混匀10min。
优选的，所述对分离的第二磁珠进行洗涤具体为：在第二磁珠内加入洗涤液，涡旋混匀 2min，在磁力架上分离第二磁珠和洗涤液。
本发明提供了一种差异化富集小片段核酸分子的方法，尤其是小片段核酸富集的提取方法，通过改变结合体系中乙醇的终比例，从而实现先将大片段核酸结合并分离，再将小片段核酸结合并富集的过程。使用本发明的方法，可以富集母体内游离的小片段胎儿DNA，用于后续检测，降低假阳性率。
附图说明
图1是实施例1中提取的核酸电泳结果；
图2是实施例2中提取的核酸电泳结果；
图3是实施例3中提取的核酸电泳结果。
具体实施方式
为了进一步描述使本发明的具体内容，以下结合实施例对本发明进行详细说明。实施例所涉及的操作方法及试剂为业内技术人员所熟知，应当理解，以下所描述的具体实施例仅仅用于对发明进行详细说明，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。
实施例1
(1)取5个5mL离心管，标记为1号、2号、3号、4号、5号。依次向5mL离心管中加入40μL蛋白酶K(来源于翌圣公司，货号10409)、980μL猪血浆、20μL DNA marker (来源于翌圣公司，货号10507)、125μL样本裂解液(自配，所述的裂解液包含1-3M盐酸胍，0.2％-1％(m/V)的NP-40，0.2％-1.5％(m/V)的SDS)，60℃孵育20min；
(2)向上一步骤孵育产物中加入600μL结合液(自配，所述的结合液包含3-6M盐酸胍和/或硫氰酸胍，0.2％-5％(m/V)的Triton X-100，0.2％-2％(m/V)的N-月桂酰肌氨酸钠， 0.2％-5％(m/V)的NP-40)、乙醇(1号756μL、2号669μL、3号588μL、4号512μL、5号 441μL)、20μL硅基磁珠(来源于翌圣公司试剂盒18300)，室温颠倒混匀10min后，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，将离心管中液体转移至新的离心管中，将1-5 号离心管终转移液体依次分别标记为6号、7号、8号、9号、10号；
(4)向1-5号离心管中，加入1mL洗涤液A(来源于翌圣公司试剂盒18300)洗去杂质，涡旋混匀2min，将所有液体转移至1.5mL离心管中，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，将离心管中液体倒掉，保留磁珠；
(5)向上一步骤保留磁珠的离心管中，加入1mL洗涤液B(来源于翌圣公司试剂盒18300) 洗去洗涤液A，涡旋混匀2min，将所有液体转移至1.5mL离心管中，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，将离心管中液体倒掉，保留磁珠。
(6)将上一步骤保留磁珠的离心管室温放置5-10min，向离心管中加入50μL洗脱液(自配，所述洗脱液为ddH2O)，涡旋混匀10min后，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，吸取DNA溶液。将1-5号离心管对应DNA溶液依次标记为A、C、E、G、I。
(7)向6-10号离心管中加入乙醇(1号0μL、2号87μL、3号168μL、4号244μL、5 号315μL)、20μL硅基磁珠，室温颠倒混匀10min后，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，将离心管中液体倒掉，保留磁珠；
(8)向上一步骤保留磁珠的离心管中，加入1mL洗涤液A，涡旋混匀2min，将所有液体转移至1.5mL离心管中，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，将离心管中液体倒掉，保留磁珠；
(9)向上一步骤保留磁珠的离心管中，加入1mL洗涤液B，涡旋混匀2min，将所有液体转移至1.5mL离心管中，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，将离心管中液体倒掉，保留磁珠。重复一遍该步骤。
(10)将上一步骤保留磁珠的离心管室温放置5-10min，向离心管中加入50μL洗脱液，涡旋混匀10min后，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，吸取DNA溶液。将6-10号离心管对应DNA溶液依次标记为B、D、F、H、J。
(11)取10μL A-J号DNA溶液进行凝胶电泳，结果见附图1。
实施例2
向1.5mL离心管中加入900μL猪血浆、100μL DNA marker，涡旋混匀后，即为待提取样本，待用。按照表1向96深孔板中加入下列相应试剂，其中深孔板第一列1-5行无水乙醇加入体积依次为200μL、165μL、150μL、135μL、120μL；按照杭州奥盛Auto-Pure32A核酸提取仪的操作，将深孔板放入仪器中，安装好磁棒套，运行事先设定的提取程序，提取程序见表2；程序结束后收集6/12列中的DNA样本，依次标记为1-5。再向深孔板第一列1-5行补加无水乙醇，补加体积依次为0μL、35μL、50μL、65μL、80μL。按照杭州奥盛Auto-Pure32A 核酸提取仪的操作，将深孔板放入仪器中，安装好磁棒套，再次运行事先设定的提取程序，提取程序见表2；程序结束后收集6/12列中的DNA样本，依次标记为6-10。提取结束后，分别取两次提取核酸进行凝胶电泳，结果见附图2。
表1深孔板试剂加样体积
表2杭州奥盛Auto-Pure32A提取器提取程序
实施例3
(1)取1个5mL离心管标记为1号。依次向5mL离心管中加入40μL蛋白酶K、960μL 猪血浆、20μL DNA marker 20μL 170bp PCR扩增产物、125μL样本裂解液，60℃孵育20min；
(2)向上一步骤孵育产物中加入600μL结合液、669μL乙醇、20μL硅基磁珠，室温颠倒混匀10min后，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，将离心管中液体转移至新的离心管中，标记为2号；
(4)向1号离心管中，加入1mL洗涤液A，涡旋混匀2min，将所有液体转移至1.5mL 离心管中，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，将离心管中液体倒掉，保留磁珠；
(5)向上一步骤保留磁珠的离心管中，加入1mL洗涤液B，涡旋混匀2min，将所有液体转移至1.5mL离心管中，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，将离心管中液体倒掉，保留磁珠。
(6)将上一步骤保留磁珠的离心管室温放置5-10min，向离心管中加入50μL洗脱液，涡旋混匀10min后，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，吸取DNA溶液。
(7)向2号离心管中加入87μL乙醇、20μL硅基磁珠，室温颠倒混匀10min后，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，将离心管中液体倒掉，保留磁珠；
(8)向上一步骤保留磁珠的离心管中，加入1mL洗涤液A，涡旋混匀2min，将所有液体转移至1.5mL离心管中，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，将离心管中液体倒掉，保留磁珠；
(9)向上一步骤保留磁珠的离心管中，加入1mL洗涤液B，涡旋混匀2min，将所有液体转移至1.5mL离心管中，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，将离心管中液体倒掉，保留磁珠。
(10)将上一步骤保留磁珠的离心管室温放置5-10min，向离心管中加入50μL洗脱液(来源于翌圣公司试剂盒)，涡旋混匀10min后，将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附柱离心管壁，吸取DNA溶液。
(11)取两次获得的DNA溶液进行凝胶电泳，结果见附图3。
本发明披露的小片段核酸富集的提取方法，可通过改变乙醇在结合体系中的终浓度来选择性的去除大片段核酸，富集小片段的核酸，原理通俗易懂，操作简单。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种差异化富集小片段核酸分子的方法，其特征在于：裂解后的样品在低乙醇浓度下与第一磁珠结合，分离上清液和第一磁珠，上清液在高乙醇浓度下与第二磁珠结合，保留第二磁珠并洗脱，得到小片段核酸分子，其中低乙醇浓度是指反应体系中乙醇浓度为5％-20％V/V，高乙醇浓度是指反应体系中乙醇浓度为21％-35％V/V。
2.如权利要求1所述的差异化富集小片段核酸分子的方法，其特征在于其步骤包括:
(1)样本裂解：在血浆样本中加入蛋白酶K和裂解液，进行裂解反应；
(2)大片段核酸分子的吸附：向裂解产物中加入结合液、乙醇和第一磁珠，进行吸附反应，所述第一磁珠为硅基磁珠，其中乙醇的加入量为使反应体系中乙醇浓度控制在5％-20％；
(3)分离第一磁珠和上清液：将步骤(2)获得的反应体系置于磁力架上，分离第一磁珠和上清液；
(4)小片段核酸分子的吸附：向上清液中加入乙醇和第二磁珠，使反应体系中乙醇浓度为21％-35％，进行吸附反应，所述第二磁珠为硅基磁珠；
(5)分离第二磁珠和上清液：将步骤(4)获得的反应体系置于磁力架上，分离第二磁珠和上清液；
(6)小片段核酸分子的回收：将第二磁珠置于洗脱液中，进行洗脱反应，然后分离磁珠和洗脱液，回收洗脱液，得到富集的小片段核酸分子。
3.如权利要求2所述的差异化富集小片段核酸分子的方法，其特征在于：在进行小片段核酸分子的回收之前，先对分离的第二磁珠进行洗涤。
4.如权利要求2所述的差异化富集小片段核酸分子的方法，其特征在于：步骤(1)中蛋白酶K：样品：裂解液的比例为40μL：1mL:125μL，反应过程为60℃孵育20min。
5.如权利要求4所述的差异化富集小片段核酸分子的方法，其特征在于：步骤(2)中裂解产物：结合液：第一磁珠的比例为1165μL：600μL：20μL，反应过程为室温颠倒混匀10min。
6.如权利要求5所述的差异化富集小片段核酸分子的方法，其特征在于：步骤(4)中第二磁珠的加入量与第一磁珠的加入量基本相同，反应过程为室温颠倒混匀10min。
7.如权利要求6所述的差异化富集小片段核酸分子的方法，其特征在于：步骤(6)中第二磁珠：洗脱液的比例为20μL：50μL，反应过程为涡旋混匀10min。
8.如权利要求3所述的差异化富集小片段核酸分子的方法，其特征在于：所述对分离的第二磁珠进行洗涤具体为：在第二磁珠内加入洗涤液，涡旋混匀2min，在磁力架上分离第二磁珠和洗涤液。
9.如权利要求2所述的差异化富集小片段核酸分子的方法，其特征在于：所述裂解液包含1-3M盐酸胍，0.2％-1％m/V的NP-40，0.2％-1.5％m/V的SDS。
10.如权利要求2所述的差异化富集小片段核酸分子的方法，其特征在于：所述结合液包含3-6M盐酸胍和/或硫氰酸胍，0.2％-5％m/V的Triton X-100，0.2％-2％m/V的N-月桂酰肌氨酸钠，0.2％-5％m/V的NP-40。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210372920.0A CN114958825A (zh) | 2022-04-07 | 2022-04-07 | 一种差异化富集小片段核酸分子的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210372920.0A CN114958825A (zh) | 2022-04-07 | 2022-04-07 | 一种差异化富集小片段核酸分子的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114958825A true CN114958825A (zh) | 2022-08-30 |
Family
ID=82978118
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210372920.0A Pending CN114958825A (zh) | 2022-04-07 | 2022-04-07 | 一种差异化富集小片段核酸分子的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114958825A (zh) |
Citations (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070190535A1 (en) * | 2006-02-13 | 2007-08-16 | Hall Gerald E Jr | Size fractionation of nucleic acid samples |
| CN102046643A (zh) * | 2008-05-30 | 2011-05-04 | 恰根有限公司 | 分离核酸的方法 |
| CN103459613A (zh) * | 2011-01-31 | 2013-12-18 | 艾索特里克斯遗传实验室有限责任公司 | 使用结合分子富集微粒或核酸的方法 |
| CN105112400A (zh) * | 2015-08-31 | 2015-12-02 | 臻和（北京）科技有限公司 | 一种提取游离dna的试剂盒 |
| CN105349532A (zh) * | 2015-12-15 | 2016-02-24 | 杭州千基生物科技有限公司 | 一种磁珠法提取游离核酸的方法及其试剂盒 |
| CN106834274A (zh) * | 2017-02-17 | 2017-06-13 | 苏州贝斯派生物科技有限公司 | 一种回收片段化降解dna的方法 |
| CN106893721A (zh) * | 2017-02-16 | 2017-06-27 | 广东氪生物技术有限公司 | 一种用于核酸纯化或片段筛选的试剂盒及其使用方法 |
| CN107312773A (zh) * | 2017-06-13 | 2017-11-03 | 天根生化科技（北京）有限公司 | 纯化核酸的结合液及其应用 |
| CN109722431A (zh) * | 2019-01-21 | 2019-05-07 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 一种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒 |
| CN109735532A (zh) * | 2018-12-30 | 2019-05-10 | 北京优迅医学检验实验室有限公司 | 一种用于核酸纯化和筛选的磁珠悬浮液及其应用 |
| CN109750030A (zh) * | 2019-01-21 | 2019-05-14 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 一种基于磁珠法的快速、不加热的核酸提取试剂盒 |
| CN109913447A (zh) * | 2019-04-04 | 2019-06-21 | 深圳市南科征途有限公司 | 游离dna提取富集试剂盒及游离dna提取方法 |
| CN110923228A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-03-27 | 广州高盛生物科技股份有限公司 | 一种磁珠法核酸纯化的结合液、试剂盒、方法及应用 |
| CN111154750A (zh) * | 2020-01-13 | 2020-05-15 | 苏州行知康众生物科技有限公司 | 一种针对性富集血浆目标游离dna的方法 |
| CN111926060A (zh) * | 2020-08-26 | 2020-11-13 | 天津诺禾致源生物信息科技有限公司 | 用于小片段核酸纯化筛选的方法 |
| WO2020260620A1 (en) * | 2019-06-28 | 2020-12-30 | Qiagen Gmbh | Method for enriching nucleic acids by size |
| CN113755486A (zh) * | 2021-09-23 | 2021-12-07 | 翌圣生物科技(上海)股份有限公司 | 用于处理石蜡包埋样本的脱蜡剂及从石蜡包埋样本中提取核酸的方法 |
| CN113943728A (zh) * | 2021-12-09 | 2022-01-18 | 深圳基因家科技有限公司 | 一种核酸纯化方法 |
| CN114350652A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-04-15 | 力因精准医疗产品（上海）有限公司 | 血液游离dna提取试剂盒及核酸提取方法 |
-
2022
- 2022-04-07 CN CN202210372920.0A patent/CN114958825A/zh active Pending
Patent Citations (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070190535A1 (en) * | 2006-02-13 | 2007-08-16 | Hall Gerald E Jr | Size fractionation of nucleic acid samples |
| CN102046643A (zh) * | 2008-05-30 | 2011-05-04 | 恰根有限公司 | 分离核酸的方法 |
| CN103459613A (zh) * | 2011-01-31 | 2013-12-18 | 艾索特里克斯遗传实验室有限责任公司 | 使用结合分子富集微粒或核酸的方法 |
| CN105112400A (zh) * | 2015-08-31 | 2015-12-02 | 臻和（北京）科技有限公司 | 一种提取游离dna的试剂盒 |
| CN105349532A (zh) * | 2015-12-15 | 2016-02-24 | 杭州千基生物科技有限公司 | 一种磁珠法提取游离核酸的方法及其试剂盒 |
| CN106893721A (zh) * | 2017-02-16 | 2017-06-27 | 广东氪生物技术有限公司 | 一种用于核酸纯化或片段筛选的试剂盒及其使用方法 |
| CN106834274A (zh) * | 2017-02-17 | 2017-06-13 | 苏州贝斯派生物科技有限公司 | 一种回收片段化降解dna的方法 |
| CN107312773A (zh) * | 2017-06-13 | 2017-11-03 | 天根生化科技（北京）有限公司 | 纯化核酸的结合液及其应用 |
| CN109735532A (zh) * | 2018-12-30 | 2019-05-10 | 北京优迅医学检验实验室有限公司 | 一种用于核酸纯化和筛选的磁珠悬浮液及其应用 |
| CN109722431A (zh) * | 2019-01-21 | 2019-05-07 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 一种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒 |
| CN109750030A (zh) * | 2019-01-21 | 2019-05-14 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 一种基于磁珠法的快速、不加热的核酸提取试剂盒 |
| CN109913447A (zh) * | 2019-04-04 | 2019-06-21 | 深圳市南科征途有限公司 | 游离dna提取富集试剂盒及游离dna提取方法 |
| WO2020260620A1 (en) * | 2019-06-28 | 2020-12-30 | Qiagen Gmbh | Method for enriching nucleic acids by size |
| CN110923228A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-03-27 | 广州高盛生物科技股份有限公司 | 一种磁珠法核酸纯化的结合液、试剂盒、方法及应用 |
| CN111154750A (zh) * | 2020-01-13 | 2020-05-15 | 苏州行知康众生物科技有限公司 | 一种针对性富集血浆目标游离dna的方法 |
| CN111926060A (zh) * | 2020-08-26 | 2020-11-13 | 天津诺禾致源生物信息科技有限公司 | 用于小片段核酸纯化筛选的方法 |
| CN113755486A (zh) * | 2021-09-23 | 2021-12-07 | 翌圣生物科技(上海)股份有限公司 | 用于处理石蜡包埋样本的脱蜡剂及从石蜡包埋样本中提取核酸的方法 |
| CN113943728A (zh) * | 2021-12-09 | 2022-01-18 | 深圳基因家科技有限公司 | 一种核酸纯化方法 |
| CN114350652A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-04-15 | 力因精准医疗产品（上海）有限公司 | 血液游离dna提取试剂盒及核酸提取方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| CHRISTOPHER K. RAYMOND等: "UltraPrep is a scalable, cost-effective, beadbased method for purifying cell-free DNA", PLOS ONE, vol. 15, pages 1 - 11 * |
| O OLSVIK等: "Magnetic Separation Techniques in Diagnostic Microbiology", AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, vol. 07, no. 01, pages 43 - 54 * |
| 杨麒巍: "选择性扩增孕妇血浆中游离胎儿DNA方法建立及其在21-三体综合征无创性产前检测中的应用", 中国优秀博士学位论文全文数据库（电子期刊）医药卫生科技辑, no. 08, pages 1 - 156 * |
| 王晖等: "两步磁珠法提取血浆游离DNA的评价及临床应用", 山西医科大学学报, vol. 50, pages 526 - 530 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109722431B (zh) | 一种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒 | |
| EP3636769B1 (en) | Sample nucleic acid measurement test kit, reagent, and application thereof | |
| EP3260556B1 (en) | Methods for the extraction of nucleic acid from a sample | |
| Sharma et al. | Mass spectrometric based analysis, characterization and applications of circulating cell free DNA isolated from human body fluids | |
| US20080213870A1 (en) | Methods for obtaining modified DNA from a biological specimen | |
| CN111057705B (zh) | 一种提取游离核酸的试剂盒及使用方法 | |
| US20210380966A1 (en) | Method for isolating poly(a) nucleic acids | |
| CN110846382B (zh) | 胎儿游离dna的富集方法 | |
| JP2002501759A (ja) | 核酸の改善された単離方法 | |
| CN111705062B (zh) | 二苯乙烯类雌激素核酸适体及其应用 | |
| CN113913421A (zh) | 全血dna提取试剂及提取方法 | |
| US20090042290A1 (en) | Method of modifying a macromolecule without prior extraction from a sample | |
| CN112322614A (zh) | 一种磁珠法提取血液基因组dna的试剂盒及其使用方法 | |
| CN106754884B (zh) | 试剂盒及其应用 | |
| CN116445583A (zh) | 一种用于细胞甲基化检测样本前处理试剂盒及使用方法 | |
| CN114958825A (zh) | 一种差异化富集小片段核酸分子的方法 | |
| CN114525275B (zh) | 低共熔溶剂应用于dna提取、dna提取方法及试剂盒 | |
| Santos et al. | Purification, concentration and recovery of small fragments of DNA from Giardia lamblia and their use for other molecular techniques | |
| CN116179533A (zh) | 一种核酸提取纯化试剂盒及使用方法 | |
| CN113913494A (zh) | 快速便捷提取体液中病毒dna的试剂盒及提取方法 | |
| CN109439655B (zh) | 适用于超微量细胞核酸提取的试剂盒及方法 | |
| CN113215148A (zh) | 一种病毒基因组核酸快速提取试剂盒及其使用方法 | |
| CN118109459B (zh) | 一种无需蛋白酶k处理的磁珠法提取RNA的试剂盒及提取方法 | |
| CN109022426A (zh) | 一种提取牛樟芝总dna的试剂及应用 | |
| CN112899357A (zh) | 一种运用数字pcr进行胎儿分数检测的方法及其试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220830 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |