CN105307657A - 杂芳基化合物和其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及适用作蛋白激酶的抑制剂的化合物，所述化合物在ATP结合位点含有半胱氨酸残基。本发明另外提供包含治疗有效量的一或多种蛋白激酶抑制剂化合物的药学上可接受的组合物以及所述组合物用于治疗癌症和癌瘤的方法。

Description

杂芳基化合物和其用途
相关申请案的交叉引用
本申请案要求2013年3月15日申请的美国临时申请案第61/793,113号以及2014年3月13日申请的欧洲申请案第EP14305361号的优先权，所述申请案的全部内容以引用的方式并入本文中。
技术领域
本发明涉及适用作蛋白激酶的抑制剂的化合物。本发明还提供包含本发明化合物的药学上可接受的组合物和使用所述组合物治疗多种病症的方法。
背景技术
近年来，通过更好地理解与疾病相关的酶和其它生物分子的结构，已对新颖治疗剂的研究提供极大帮助。已成为广泛研究对象的一个重要酶类别为蛋白激酶。
蛋白激酶构成负责控制细胞内多种信号转导过程的结构上相关的酶的巨大家族。由于蛋白激酶的结构和催化功能保守，因此认为其自共同祖先基因演化而来。几乎所有激酶都含有类似的250-300个氨基酸催化域。激酶可根据其磷酸化的底物而分类成各家族(例如蛋白质-酪氨酸、蛋白质-丝氨酸/苏氨酸、脂质等)。
一般来说，蛋白激酶通过实现信号传导路径中涉及的从三磷酸核苷到蛋白质受体的磷酰基转移来介导细胞内信号传导。这些磷酸化事件充当可调节或调控目标蛋白生物功能的分子开/关转换器。这些磷酸化事件最终回应于多种细胞外刺激和其它刺激引发。所述刺激的实例包括环境和化学应力信号(例如渗压冲击、热冲击、紫外辐射、细菌内毒素和H2O2)、细胞因子(例如介白素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α))和生长因子(例如颗粒球巨噬细胞群落刺激因子(GM-CSF)和纤维母细胞生长因子(FGF))。细胞外刺激可影响与细胞生长、迁移、分化、激素分泌、转录因子活化、肌肉收缩、葡萄糖代谢、蛋白质合成的控制和细胞周期的调控相关的一或多个细胞反应。
多种疾病与由如上文所述的蛋白激酶介导的事件引发的异常细胞反应有关。这些疾病包括(但不限于)自体免疫疾病、发炎疾病、骨骼疾病、代谢疾病、神经和神经退化性疾病、癌症、心血管疾病、过敏症和哮喘、阿兹海默氏病(Alzheimer'sdisease)和激素相关疾病。因此，仍需要寻找适用作治疗剂的蛋白激酶抑制剂。
发明内容
现已发现本发明化合物和其药学上可接受的组合物有效用作一或多种蛋白激酶的抑制剂。所述化合物具有通式I：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、X1、X2、X3、X4、X5、G、Y、T和q中的每一者如本文实施例中所定义和描述。在某些实施例中，R1为弹头基团。
本发明化合物和其药学上可接受的组合物适用于治疗与蛋白激酶介导的事件引发的异常细胞反应相关的多种疾病、病症或病况。所述疾病、病症或病状包括本文所述的疾病、病症或病状。
本发明提供的化合物还适用于研究生物学和病理学现象中的激酶；所述激酶介导的细胞内信号转导路径的研究；和新激酶抑制剂的比较性评估。
附图说明
图1：I-1对FGFR4的质量修正。
图2：显示化合物I-69对MDA-MB-453细胞中pFGFR4信号传导具有长期作用持续(PDA)的数据与FGFR4的再合成速率一致。
图3：显示化合物I-1对MDA-MB-453细胞中的pFGFR4信号传导具有PDA的数据与FGFR4的再合成速率一致，而其非共价可逆类似物I-234不具有PDA。
图4：FGFR4的氨基酸序列(SEQIDNO.1)。
具体实施方式
1.本发明化合物的一般描述
在特定实施例中，本发明提供FGFR4的不可逆抑制剂。在一些实施例中，所述化合物包括具有本文所述化学式的化合物，或其药学上可接受的盐，其中各变量如本文所定义和描述。
2.化合物和定义
本发明化合物包括上文一般描述的化合物并且通过本文所披露的类别、子类和种类进一步说明。除非另有指出，否则如本文所用的以下定义应适用。对于本发明，根据元素周期表(PeriodicTableoftheElements),CAS版,物理化学手册(HandbookofChemistryandPhysics),第75版识别化学元素。此外，有机化学的一般原理描述于“有机化学(OrganicChemistry)”,托马斯·索雷尔(ThomasSorrell),大学科学书籍(UniversityScienceBooks),索萨利托(Sausalito):1999和“马奇的高等有机化学(March'sAdvancedOrganicChemistry)”,第5版,史密斯,M.B.(Smith,M.B.)和马奇,J.(March,J.)编,约翰·威利父子出版社(JohnWiley&Sons),纽约(NewYork):2001中，其全部内容以引用的方式并入本文中。
如本文所用，术语“脂肪族”或“脂肪族基团”意思是完全饱和或含有一或多个不饱和单元的直链(即未分支)或分支链、经取代或未经取代的烃链，或完全饱和或含有一或多个不饱和单元，但不为芳香族的单环烃或双环烃(本文中还称为“碳环”、“环脂肪族”或“环烷基”)，其具有与分子其余部分的单一连接点。除非另外规定，否则脂肪族基团含有1到6个脂肪族碳原子。在一些实施例中，脂肪族基团含有1到5个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基团含有1到4个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基团含有1到3个脂肪族碳原子，并且在其它实施例中，脂肪族基团含有1到2个脂肪族碳原子。在一些实施例中，“环脂肪族”(或“碳环”或“环烷基”)指的是完全饱和或含有一或多个不饱和单元的单环C3-C6烃，但其不为芳香族的，具有与分子其余部分的单一连接点。示范性脂肪族基团或直链或分支链、经取代或未经取代的烷基、烯基、炔基和其氢化物，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
如本文所用，术语“桥接双环”指的是任何双环系统，即碳环或杂环、饱和或部分不饱和、具有至少一个桥。如IUPAC所定义，“桥”为连接两个桥头的原子或价键的未分支链，其中“桥头”为环系统的键结于三个或三个以上骨架原子(氢除外)的任何骨架原子。在一些实施例中，桥接双环具有7到12个环成员和0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。所述桥接双环基团为本领域所熟知且包括下文所述的基团，其中各基团在任何可取代碳或氮原子处连接于分子的其余部分。除非另外规定，否则桥接双环基团任选地经一或多个如针对脂肪族基团所述的取代基取代。另外或替代地，桥接双环基团的任何可取代氮任选地经取代。示范性桥接双环包括：
术语“低碳烷基”指的是C1-4直链或分支链烷基。示范性低碳烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。
术语“低碳卤烷基”指的是经一或多个卤素原子取代的C1-4直链或分支链烷基。
术语“杂原子”意思是氧、硫、氮或磷(包括氮、硫或磷的任何氧化形式；任何碱性氮的季铵化形式；或杂环的可取代氮，例如N(如3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如吡咯烷基中)或NR+(如N-取代的吡咯烷基中))中的一或多者。
如本文所用，术语“不饱和”意思是具有一或多个不饱和单元的部分。
如本文所用，术语“二价C1-8(或C1-6)饱和或不饱和直链或分支链烃链”指的是如本文所定义的直链或分支链二价亚烷基、亚烯基和亚炔基链。
术语“亚烷基”指的是二价烷基。“亚烷基链”为聚亚甲基，即-(CH2)n-，其中n为正整数，优选1到6、1到4、1到3、1到2或2到3。经取代亚烷基链为一或多个亚甲基氢原子置换为取代基的聚亚甲基。适合取代基包括下文针对经取代脂肪族基团所述的取代基。
术语“亚烯基”指的是二价烯基。经取代亚烯基链为一或多个氢原子置换为取代基的含有至少一个双键的聚亚甲基。适合取代基包括下文针对经取代脂肪族基团所述的取代基。
如本文所用，术语“环丙烯基”指的是具有以下结构的二价环丙基：
术语“卤素”意思是F、Cl、Br或I。
单独使用或用作“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中较大部分的术语“芳基”指的是总共具有五到十四个环成员的单环和双环系统，其中系统中至少一个环为芳香族的且其中系统中的各环含有三到七个环成员。术语“芳基”与术语“芳基环”可互换使用。在本发明的某些实施例中，“芳基”指的是芳香族环系统。示范性芳基为苯基、联苯基、萘基、蒽基等，其任选地包括一或多个取代基。如本文所用，术语“芳基”的范围内还包括为芳香族环稠合于一或多个非芳香族环的基团，例如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘酰亚胺基、菲啶基或四氢萘基等。
单独使用或用作较大部分(例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”)的部分的术语“杂芳基”和“杂芳-”指的是具有5到10个环原子，优选5、6或9个环原子；环阵列中具有6、10或14个共用π电子；且除碳原子外具有一到五个杂原子的基团。术语“杂原子”指的是氮、氧或硫，且包括氮或硫的任何氧化形式，和碱性氮的任何季铵化形式。杂芳基包括(但不限于)噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚嗪基、嘌呤基、萘啶基和喋啶基。如本文所用，术语“杂芳基”和“杂芳-”还包括杂芳香族环稠合于一或多个芳基、环脂肪族或杂环基环的基团，其中基团或连接点在杂芳香族环上。非限制性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喏啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基任选地为单环或双环。术语“杂芳基”与术语“杂芳基环”、“杂芳基”或“杂芳香族”可互换使用，所述术语中任一者包括任选地经取代的环。术语“杂芳烷基”指的是经杂芳基取代的烷基，其中烷基和杂芳基部分独立地任选地经取代。
如本文所用，术语“杂环”(“heterocycle”、“heterocyclicring”)和“杂环基”(“heterocyclyl”、“heterocyclicradical”)可互换使用并且指的是饱和或部分不饱和，且除碳原子外具有一或多个，优选一到四个如上文定义的杂原子的稳定5到7元单环或7到10元双环杂环部分。当关于杂环的环原子使用时，术语“氮”包括经取代氮。举例来说，在具有0到3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和环中，氮为N(如3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如吡咯烷基中)或+NR(如N-取代的吡咯烷基)。
杂环可在导致稳定结构的任何杂原子或碳原子处和可任选地经取代的任何环原子处连接于其侧接基团。所述饱和或部分不饱和杂环基的实例包括(但不限于)四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑啶基、哌嗪基、二氧杂环己烷基、二氧戊环基、二氮呯基、噁氮呯基、噻氮呯基、吗啉基和啶基。术语“杂环”(“heterocycle”、“heterocyclicring”)、“杂环基”(“heterocyclyl”、“heterocyclicgroup”、“heterocyclicradical”)、“杂环基环”和“杂环部分”在本文中可互换使用，且还包括杂环基环稠合于一或多个芳基、杂芳基或环脂肪族环的基团，例如吲哚啉基、3H-吲哚基、色满基、菲啶基或四氢喹啉基，其中基团或连接点在杂环基环上。杂环基任选地为单环或双环。术语“杂环烷基”指的是经杂环基取代的烷基，其中烷基和杂环基部分独立地任选地经取代。
如本文所用，术语“部分不饱和”指的是包括至少一个双键或三键的环部分。术语“部分不饱和”打算涵盖具有多个不饱和位点的环，但不打算包括如本文所定义的芳基或杂芳基部分。
如本文所述，本发明的某些化合物含有“任选地经取代的”部分。一般来说，术语“经取代”不管是否冠以术语“任选地”都意思是指定部分的一或多个氢置换为适合取代基。“经取代”适用于由结构明示或暗示的一或多个氢(例如指的是至少且指的是至少)。除非另外指出，否则“任选地经取代的”基团在基团的各可取代位置具有适合取代基，并且当任何既定结构中的一个以上位置经一个以上选自规定基团的取代基取代时，每一位置的取代基可能相同或不同。本发明设想的取代基组合优选为导致形成稳定或化学上可行的化合物的组合。如本文所用，术语“稳定”指的是当经受允许制造、检测和在某些实施例中回收、纯化和用于本文披露的一或多种目的的条件时未发生实质改变的化合物。
“任选地经取代的”基团的可取代碳原子上的适合单价取代基独立地为卤素；-(CH2)0-4R○；-(CH2)0-4OR○；-O(CH2)0-4R○；-O-(CH2)0-4C(O)OR○；-(CH2)0-4CH(OR○)2；-(CH2)0-4SR○；任选地经R○取代的-(CH2)0-4Ph；任选地经R○取代的-(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph；任选地经R○取代的-CH＝CHPh；任选地经R○取代的-(CH2)0-4O(CH2)0-1-吡啶基；-NO2；-CN；-N3；-(CH2)0-4N(R○)2；-(CH2)0-4N(R○)C(O)R○；-N(R○)C(S)R○；-(CH2)0-4N(R○)C(O)NR○ 2；-N(R○)C(S)NR○ 2；-(CH2)0-4N(R○)C(O)OR○；-N(R○)N(R○)C(O)R○；-N(R○)N(R○)C(O)NR○ 2；-N(R○)N(R○)C(O)OR○；-(CH2)0-4C(O)R○；-C(S)R○；-(CH2)0-4C(O)OR○；-(CH2)0-4C(O)SR○；-(CH2)0-4C(O)OSiR○ 3；-(CH2)0-4OC(O)R○；-OC(O)(CH2)0-4SR○；SC(S)SR○；-(CH2)0-4SC(O)R○；-(CH2)0-4C(O)NR○ 2；-C(S)NR○ 2；-C(S)SR○；-SC(S)SR○,-(CH2)0-4OC(O)NR○ 2；-C(O)N(OR○)R○；-C(O)C(O)R○；-C(O)CH2C(O)R○；-C(NOR○)R○；-(CH2)0-4SSR○；-(CH2)0-4S(O)2R○；-(CH2)0-4S(O)2OR○；-(CH2)0-4OS(O)2R○；-S(O)2NR○ 2；-(CH2)0-4S(O)R○；-N(R○)S(O)2NR○ 2；-N(R○)S(O)2R○；-N(OR○)R○；-C(NH)NR○ 2；-P(O)2R○；-P(O)R○ 2；-OP(O)R○ 2；-OP(O)(OR○)2；SiR○ 3；-(C1-4直链或分支链亚烷基)O-N(R○)2；或-(C1-4直链或分支链亚烷基)C(O)O-N(R○)2，其中各R○如下文所定义任选地经取代且独立地为氢、C1-6脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、-CH2-(5到6元杂芳基环)，或具有0到4个选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环，或尽管上文定义，但两个独立存在的R○与其插入原子一起形成具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环，其如下文所定义任选地经取代。
R○(或两个独立存在的R○与其插入原子一起形成的环)上的适合单价取代基独立地为卤素、-(CH2)0-2R●、-(卤基R●)、-(CH2)0-2OH、-(CH2)0-2OR●、-(CH2)0-2CH(OR●)2；-O(卤基R●)、-CN、-N3、-(CH2)0-2C(O)R●、-(CH2)0-2C(O)OH、-(CH2)0-2C(O)OR●、-(CH2)0-2SR●、-(CH2)0-2SH、-(CH2)0-2NH2、-(CH2)0-2NHR●、-(CH2)0-2NR● 2、-NO2、-SiR● 3、-OSiR● 3、-C(O)SR●、-(C1-4直链或分支链亚烷基)C(O)OR●或-SSR●，其中各R●未经取代或冠以“卤基”时仅经一或多个卤素取代，且独立地选自C1-4脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环。R○的饱和碳原子上的适合二价取代基包括＝O和＝S。
“任选地经取代的”基团的饱和碳原子上的适合二价取代基包括以下：＝O、＝S、＝NNR* 2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、-O(C(R* 2))2-3O-或-S(C(R* 2))2-3S-，其中各独立存在的R*选自氢、如下文所定义经取代的C1-6脂肪族基，或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环。键结于“任选地经取代的”基团的邻近可取代碳的适合二价取代基包括：-O(CR* 2)2-3O-，其中各独立存在的R*选自氢、如下文所定义任选地经取代的C1-6脂肪族基，或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环。
R*的脂肪族基团上的适合取代基包括卤素、-R●、-(卤基R●)、-OH、-OR●、-O(卤基R●)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR●、-NH2、-NHR●、-NR● 2或-NO2，其中各R●未经取代或冠以“卤基”时仅经一或多个卤素取代，且独立地为C1-4脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环。
“任选地经取代的”基团的可取代氮上的适合取代基包括 或其中各独立地为氢、如下文所定义任选地经取代的C1-6脂肪族基、未经取代的-OPh或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环，或尽管上文定义，但两个独立存在的与其插入原子一起形成具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的3到12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环。
的脂肪族基团上的适合取代基独立地为卤素、-R●、-(卤基R●)、-OH、-OR●、-O(卤基R●)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR●、-NH2、-NHR●、-NR● 2或-NO2，其中各R●未经取代或冠以“卤基”时仅经一或多个卤素取代，且独立地为C1-4脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指的是在正确医学判断的范围内，适用于与人类和低等动物的组织接触而无不当毒性、刺激、过敏反应等，且与合理收益/风险比相称的那些盐。本领域中熟知药学上可接受的盐。举例来说，S.M.贝尔热(S.M.Berge)等人在以引用方式并入本文中的药物科学杂志(J.PharmaceuticalSciences),1977,66,1-19中详细描述药学上可接受的盐。本发明化合物的药学上可接受的盐包括从适合无机和有机酸和碱衍生的盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例为氨基与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或有机酸(例如乙酸、乙二酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸)形成的盐，或通过使用本领域中所用的例如离子交换的其它方法形成的盐。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、油酸盐、乙二酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。
从适当碱衍生的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N+(C1-4烷基)4盐。代表性碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。适当时，其它药学上可接受的盐包括无毒铵、季铵和使用相对离子形成的胺阳离子，所述相对离子例如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低碳烷基磺酸根和芳基磺酸根。
除非另外说明，否则本文描绘的结构还打算包括所述结构的所有异构(例如对映异构、非对映异构和几何异构(或构型异构))形式；例如，各不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体，以及Z和E构型异构体。因此，本发明化合物的单个立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何异构(或构型异构)混合物在本发明范围内。除非另外说明，否则本发明化合物的所有互变异构型式在本发明范围内。此外，除非另外说明，否则本文描绘的结构还打算包括仅在存在一或多种同位素增浓原子方面不同的化合物。举例来说，具有本发明结构且包括以氘或氚置换氢或以13C或14C增浓碳置换碳的化合物在本发明范围内。所述化合物例如适用作分析工具、生物分析法中的探针或本发明的治疗剂。在一些实施例中，R1基团包含一或多个氘原子。
如本文所用，术语“不可逆”或“不可逆抑制剂”指的是能够以实质上不可逆方式共价结合于目标蛋白激酶的抑制剂(即化合物)。也就是说，鉴于可逆抑制剂能够结合于目标蛋白激酶(但一般不能形成共价键)，并且因此可与目标蛋白激酶解离，不可逆抑制剂在形成共价键后将保持与目标蛋白激酶实质上结合。不可逆抑制剂一般呈现时间依赖性，抑制程度借此随抑制剂与酶的接触时间增加。在某些实施例中，不可逆抑制剂在共价键形成后将保持与激酶实质上结合并且将保持结合的时间将比蛋白质寿命长。
一般技术人员熟知识别化合物是否用作不可逆抑制剂的方法。所述方法包括(但不限于)具有蛋白激酶目标的化合物的抑制概况的酶动力学分析、使用在抑制剂化合物存在下修饰的蛋白质药物目标的质谱法、不连续暴露(也称为“洗脱”)实验和使用标记(例如放射性标记抑制剂)显示酶的共价修饰，以及所属领域的技术人员已知的其它方法。
一般技术人员将了解某些反应性官能团可用作“弹头”。如本文所用，术语“弹头”或“弹头基团”指的是本发明化合物上存在的官能团，其中所述官能团能够共价结合于目标蛋白的结合袋中存在的氨基酸残基(例如半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸或能够共价修饰的其它残基)，借此不可逆抑制蛋白质。应了解，如本文所定义和描述的-L-Y基团提供用于共价和不可逆抑制蛋白质的所述弹头基团。在某些情形中，使用“前弹头基团”替换弹头基团。所述前弹头基团体内或体外转化为弹头基团。
如本文所用，术语“抑制剂”定义为以可测量亲和力结合和/或抑制目标蛋白激酶的化合物。在某些实施例中，抑制剂具有小于约50μM，小于约1μM，小于约500nM，小于约100nM或小于约10nM的IC50和/或结合常数。
如本文所用，术语“可测量亲和力”和“可测量抑制”意思是在无所述化合物或其组合物存在下，包含本发明化合物或其组合物和FGFR4的样品与包含FGFR4的等效样品之间的FGFR4活性的可测量改变。
本发明设想的取代基和变量的组合仅为导致形成稳定化合物的组合。如本文所用，术语“稳定”指的是具有足以允许制造的稳定性和保持化合物完整性持续足以适用于本文详述目的(例如向个体治疗性或预防性投予)的时段的化合物。
化学基团列表在本文变量的任何定义中的叙述包括所述变量作为任何单个基团或所列基团的组合的定义。本文变量的实施例的叙述包括作为任何单个实施例或与任何其它实施例或其部分组合的实施例。
3.示范性化合物的描述
根据一个方面，本发明提供式I化合物，
或其药学上可接受的盐，其中：
X1为-NR4、N、-CR4R4'或-CR4；
X2为-NR5、N、-CR5R5'或-CR5；
X3为N或CR6；
X4为N或CR7；
X5为N、C或CH；其中X1、X2、X3、X4或X5中至少一者为N；
G为H、O、OR或N(R)(R)；
环A为任选地经取代的选自以下的基团：苯基、3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元饱和或部分不饱和杂环，或7到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环；
各R独立地为氢或任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基、苯基、3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元杂环，或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环；或
同一氮原子上的两个R基团与其所连接的所述氮原子一起形成具有0到2个独立地选自氮、氧或硫的额外杂原子的4到7元杂环，或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的额外杂原子的4到7元杂芳基环；
R1为弹头基团；其中R1连接于与T连接的原子相邻的原子；
各R2独立地为-R、卤素、-卤烷基、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2；
R3为氢、C2-6烯基、-W-Cy或C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选地经1到3个独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、氧代基(oxo)、-OR'或-C(O)O(C1-6烷基)；
W不存在或为任选地经一或多个R”取代的二价C1-3亚烷基链且其中W的一个亚甲基单元任选地置换为-O-、-S-或-NR'-；
各R'独立地为氢或C1-6烷基；
各R”独立地为卤素或C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选地经1到3个独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、氧代基或-OR'；
Cy为苯基、C3-7环烷基或具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到7元单环或5到10元双环饱和、部分不饱和或杂芳基环，其中Cy任选地经1到3个Rx取代；
各Rx独立地为H、-CN、氧代基、-NH2、C1-6烷基、卤素、-OR'、-N(R')2、-NHC(O)(C1-6烷基)、-C(O)N(R')2、-C(O)O(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)或-SO2N(R')2；
或如果化合价不允许，那么R3不存在；
R4和R4'中的每一者独立地为氢或任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基、苯基、任选地桥接的3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元杂环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环，或任选地桥接的7到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环；
R5和R5'中的每一者独立地为-R、卤素、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2；
Y为O或NRa；
Ra为氢或任选地经取代的C1-6脂肪族基团；
T为共价键或二价直链或分支链、饱和或不饱和C1-6烃链，其中一或多个亚甲基单元任选地经以下置换：-O-、-S-、-N(R)-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-N(R)C(O)N(R)-、-S(O)-、-SO2-、-SO2N(R)-、-N(R)SO2-或-N(R)SO2N(R)-；
q为0-6；且
R6和R7中的每一者独立地为-R、卤素、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2。
在某些实施例中，X1为-NR4。在某些实施例中，X1为N。在某些实施例中，X1为-CR4R4'。在某些实施例中，X1为-CR4。
在某些实施例中，X2为-NR5。在某些实施例中，X2为N。在某些实施例中，X2为-CR5R5'。在某些实施例中，X2为-CR5。
在某些实施例中，X3为N。在某些实施例中，X3为CR6。
在某些实施例中，X4为N。在某些实施例中，X4为CR7。
在某些实施例中，X5为N。在某些实施例中，X5为C。在某些实施例中，X5为CH。
在某些实施例中，G为H。在某些实施例中，G为O。在某些实施例中，G为OR。在某些实施例中，G为N(R)(R)。
在某些实施例中，G为OMe。在某些实施例中，G为NH2。
在某些实施例中，Y为O。在某些实施例中，Y为NRa。
如上文一般定义，环A为任选地经取代的选自以下的基团：苯基、3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元饱和或部分不饱和杂环，或7到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环。
在某些实施例中，环A为任选地经取代的苯基。在一些实施例中，环A为任选地经取代的3到8元饱和或部分不饱和碳环。在一些实施例中，环A为具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选地经取代的5到6元单环杂芳基环。在一些实施例中，环A为具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选地经取代的4到7元饱和或部分不饱和杂环。在一些实施例中，环A为任选地经取代的7到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环。
在多个实施例中，环A为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基、环辛基、[3.3.0]双环辛基、[4.3.0]双环壬基、[4.4.0]双环癸基、[2.2.2]双环辛基、芴基、苯基、萘基、茚满基、四氢萘基、吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、NH-咔唑基、咔啉基、色满基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋呫基、咪唑啶基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、吲哚啉基、吲哚嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、异吲哚啉基、异吲哚烯基、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异吲哚啉基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑啶基、噁唑基、噁唑啶基、嘧啶基、菲啶基、菲啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基、吩噁嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑啶基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基(pyridinyl、pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喏啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻嗯基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基或吨基。
在某些实施例中，环A为苯基、环己基、环己烯基、环戊基、环丁基、环丙基、吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、吡咯、吡唑、哌啶、哌啶酮、吡咯烷、四氢吡喃、四氢呋喃、四氢噻吩二氧化物或环丁烯二酮。
在某些实施例中，环A为任选地经取代的选自以下的基团：苯基、环己基、7到8元饱和或部分不饱和碳环或具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元饱和或部分不饱和杂环。
在多个实施例中，环A为任选地经取代的选自苯基或环己基的基团。
在某些实施例中，环A如本文所定义经取代。在一些实施例中，环A经一个、两个或三个各自经独立选择的R2基团取代。环A上的示范性取代基包括Br、I、Cl、F、Me、-CF3、-OMe、-OR、-N(R)2、吡唑基、噻唑基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基。
下文阐述示范性环A基团：
在一些实施例中，环A包含一或多个具有特定构型的手性中心。
在某些实施例中，环A为3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元饱和或部分不饱和杂环或7到10元双环饱和或部分不饱和环，其中环A的取代基-T-Y-和R1为“顺式”构型。
化学技术熟练技术人员将了解在环A的取代基-T-Y-和R1的情形中，“顺式”意思是化合物包含以下环A构型中的任一者：
其中环A、R1、R2、R3、X1、X2、X3、X4、X5、G、Y、T和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在一些实施例中，本发明化合物具有式I-顺(1)：
或其药学上可接受的盐，或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、X1、X2、X3、X4、X5、G、Y、T和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
举例来说，在一些实施例中，本发明提供式I-顺(1)化合物，其中环A为3到8元饱和或部分不饱和碳环。在一些实施例中，本发明提供式I-顺(1)化合物，其中环A为具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元饱和或部分不饱和杂环。在一些实施例中，本发明提供式I-顺(1)化合物，其中环A为7到10元双环饱和或部分不饱和环。
在某些实施例中，本发明提供式I-顺(1)化合物，其中环A任选地经取代且选自环己基、环己烯基、环戊基、环丁基、环丙基、哌啶基、哌啶酮基、吡咯烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩二氧化物或环丁烯二酮基。在某些实施例中，本发明提供式I-顺(1)化合物，其中环A为任选地经取代的四氢呋喃。
式I-顺(1)的示范性化合物包括例如化合物I-82、I-92、I-114、I-241、I-186等。
在一些实施例中，本发明提供式I-顺(2)化合物，其中环A为上文和此处所述结构中的任一者，其在式I-顺(1)中描绘的位点处能够具有手性中心。
在一些实施例中，本发明化合物具有式I-顺(2)：
或其药学上可接受的盐，或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、X1、X2、X3、X4、X5、G、Y、T和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
举例来说，在一些实施例中，本发明提供式I-顺(2)化合物，其中环A为3到8元饱和或部分不饱和碳环。在一些实施例中，本发明提供式I-顺(2)化合物，其中环A为具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元饱和或部分不饱和杂环。在一些实施例中，本发明提供式I-顺(2)化合物，其中环A为7到10元双环饱和或部分不饱和环。
在某些实施例中，本发明提供式I-顺(2)化合物，其中环A任选地经取代且选自环己基、环己烯基、环戊基、环丁基、环丙基、哌啶基、哌啶酮基、吡咯烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩二氧化物或环丁烯二酮基。在某些实施例中，本发明提供式I-顺(2)化合物，其中环A为任选地经取代的四氢呋喃。
式I-顺(2)的示范性化合物包括例如化合物I-66、I-93、I-119、I-240、I-185等。
在一些实施例中，本发明提供式I-顺(2)化合物，其中环A为上文和此处所述结构中的任一者，其在式I-顺(2)中描绘的位点处能够具有手性中心。
在另一实施例中，各R2独立地为-R。
在另一实施例中，各R2为氢。
在另一实施例中，各R2独立地为卤素、-卤烷基、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2。
在某些实施例中，各R2独立地为甲基、乙基、丙基、异丙基、F、Cl、Br、I、CF3、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢吡啶基、吡唑基、噻唑基或四唑基。
在某些实施例中，各R2独立地为-CH3、-Cl、-F、-CF3或-OMe；或选自
在某些实施例中，环A选自
在多个实施例中，R3为氢。
在多个实施例中，R3为C2-6烯基、-W-Cy或C1-6烷基，其中C1-6烷基任选地经1到3个独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、氧代基、-OR'或-C(O)O(C1-6烷基)。
在某些实施例中，W不存在(即W为共价键)。在某些实施例中，W为任选地经一或多个R”取代的二价C1-3亚烷基链且其中W的一个亚甲基单元任选地置换为-O-、-S-或-NR'-。在某些实施例中，Cy为苯基，其中Cy任选地经1到3个Rx取代。在某些实施例中，Cy为C3-7环烷基，其中Cy任选地经1到3个Rx取代。在某些实施例中，Cy为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到7元单环或5到10元双环饱和或部分不饱和杂环，其中Cy任选地经1到3个Rx取代。在某些实施例中，Cy为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到7元单环或5到10元双环杂芳基环，其中Cy任选地经1到3个Rx取代。
在一些实施例中，各Rx独立地为H、-CN、氧代基、-NH2、C1-6烷基、卤素、-OR'、-N(R')2、-C(O)R'、-NHC(O)(C1-6烷基)、-C(O)N(R')2、-C(O)O(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)或-SO2N(R')2。
在一些实施例中，Rx为-C(O)R'。在一些实施例中，Rx为-C(O)Me。
在某些实施例中，R3为C1-6烷基。
在某些实施例中，R3为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、氧杂环丁烷基、苯基、哌啶基、吡啶基、吡唑基、噻唑基或吡啶酮基。
在某些实施例中，R3为
在一些实施例中，R3为
在某些实施例中，R3不存在。
在某些实施例中，R4和R4'中的每一者独立地为氢。
在某些实施例中，R4和R4'中的每一者独立地为任选地经取代的苯基。在某些实施例中，R4和R4'中的每一者独立地为任选地经取代的C1-6脂肪族基。在某些实施例中，R4和R4'中的每一者独立地为3到8元饱和或部分不饱和碳环。在其它实施例中，R4和R4'中的每一者独立地为具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选地经取代的4到7元杂环，或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环。
在某些实施例中，R4和R4'中的每一者独立地为任选地经取代的苯基或3到8元饱和或部分不饱和碳环。在某些实施例中，R4和R4'中的每一者独立地为任选地经取代的苯基。
在某些实施例中，R4和R4'中的每一者独立地为任选地经取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、氧杂环丁烷基、苯基、哌啶基、吡啶基、吡唑基、噻唑基或吡啶酮基。
在某些实施例中，R4和R4'中的每一者独立地为乙基、苯基、环己基、
在某些实施例中，R5和R5'中的每一者独立地为-R。
在某些实施例中，R5和R5'中的每一者独立地为H。在某些实施例中，R5和R5'都为H。在某些实施例中，R5和R5'中的一者为H。在某些实施例中，R5和R5'独立地为H或-Me。
在某些实施例中，R5和R5'中的每一者独立地为卤素、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2。
在一些实施例中，Ra为氢。在一些实施例中，Ra为任选地经取代的C1-6脂肪族基团。
在另一实施例中，T为共价键。在另一实施例中，T为二价直链或分支链、饱和或不饱和C1-6烃链，其中一或多个亚甲基单元任选地经以下置换：-O-、-S-、-N(R)-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-N(R)C(O)N(R)-、-S(O)-、-SO2-、-SO2N(R)-、-N(R)SO2-或-N(R)SO2N(R)-。
在另一实施例中，其中T为二价直链或分支链、饱和或不饱和C1-6烃链，其中一或多个亚甲基单元任选地置换为-O-、-S-、-N(R)-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-N(R)C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-N(R)SO2N(R)-。
在另一实施例中，T为共价键或二价直链或分支链、饱和或不饱和C1-6烃链。
在某些实施例中，q为0。在其它实施例中，q为1。在其它实施例中，q为2-6。
在某些实施例中，本发明提供式I-a化合物，
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R4、R5、R5'、Ra、T和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，化合物具有式I-b：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、R4、T和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，本发明提供式I-c化合物：
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，本发明提供式I-d化合物：
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在其它实施例中，本发明提供式I-e化合物：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、R5、R5'、Ra和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在其它实施例中，本发明提供式I-f化合物：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、R5、R5'、Ra和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，本发明提供式I-g化合物：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，本发明提供式I-h化合物：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，本发明提供式I-h化合物，其中环A为任选地经取代的选自以下的基团：苯基、3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元饱和或部分不饱和杂环，或7到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且环A为任选地经取代的单环。在一些实施例中，化合物具有式I-h且环A为任选地经取代的单环碳环。在一些实施例中，化合物具有式I-h且环A为任选地经取代的单环杂环。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且环A为任选地经取代的芳基。在某些实施例中，化合物具有式I-h且环A为任选地经取代的苯基。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且环A为任选地经取代的杂芳基。在某些实施例中，化合物具有式I-h且环A为任选地经取代的吡啶基。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且环A为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选地经取代的4到7元饱和或部分不饱和杂环。在某些实施例中，化合物具有式I-h且环A为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选地经取代的5元饱和杂环。
在某些实施例中，化合物具有式I-h且环A为苯基、环己基、环己烯基、环戊基、环丁基、环丙基、吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、吡咯、吡唑、哌啶、哌啶酮、吡咯烷、四氢吡喃、四氢呋喃、四氢噻吩二氧化物或环丁烯二酮。
在某些实施例中，化合物具有式I-h且环A为任选地经取代的选自以下的基团：四氢吡喃、四氢呋喃或四氢噻吩二氧化物。在某些实施例中，化合物具有式I-h且环A为任选地经取代的四氢吡喃。在某些实施例中，化合物具有式I-h且环A为未经取代的四氢吡喃。在某些实施例中，化合物具有式I-h且环A为任选地经取代的四氢呋喃。在某些实施例中，化合物具有式I-h且环A为未经取代的四氢呋喃。在某些实施例中，化合物具有式I-h且环A为任选地经取代的四氢噻吩二氧化物。在某些实施例中，化合物具有式I-h且环A为未经取代的四氢噻吩二氧化物。
在某些实施例中，化合物具有式I-h且环A如本文所定义经取代。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且环A经一个、两个或三个各自经独立地选择的R2基团取代。环A上的示范性取代基包括Br、I、Cl、F、Me、-CF3、-OMe、-OR、-N(R)2、吡唑基、噻唑基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且环A经一个、两个或三个各自经独立地选择的R2基团取代。环A上的示范性取代基包括Br、I、Cl、F、Me、-CF3、-OMe、-OR、-N(R)2、-C(O)R'、＝O或任选地经取代的选自以下的基团：环烷基、吡唑基、噻唑基、哌啶基、哌嗪基、哒嗪基、咪唑基或吗啉基。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且环A为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元饱和或部分不饱和杂环，其中环A经一个、两个或三个各自独立地选择的R2基团取代。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且环A为经一个、两个或三个各自经独立地选择的R2基团取代的四氢吡喃。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且环A为经一个、两个或三个各自经独立地选择的R2基团取代的四氢呋喃。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且环A为经一个、两个或三个各自经独立地选择的R2基团取代的四氢噻吩二氧化物。
在某些实施例中，化合物具有式I-h且各R2独立地为甲基、乙基、丙基、异丙基、F、Cl、Br、I、CF3、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢吡啶基、吡唑基、噻唑基或四唑基。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为任选地经取代的吡唑基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为n-取代的吡唑基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为n-烷基吡唑基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为n-甲基吡唑基。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为任选地经取代的吡啶基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为未经取代的吡啶基。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为n-取代的四唑基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为n-烷基四唑基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为n-甲基四唑基。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为任选地经取代的哌嗪基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为n-取代的哌嗪基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为n-烷基哌嗪基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为n-甲基哌嗪基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为n-乙基哌嗪基。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且各R2独立地为卤素、-卤烷基、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为-OR。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R2为-OH。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为-C(O)R。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R2为-C(O)Me。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且各R2独立地为-R。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为任选地经取代的环烷基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为任选地经取代的环丙基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R2为未经取代的环丙基。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且R3为C2-6烯基、-W-Cy或C1-6烷基，其中C1-6烷基任选地经1到3个独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、氧代基、-OR'或-C(O)O(C1-6烷基)。
举例来说，在某些实施例中，化合物具有式I-h且R3为C1-6烷基，其中C1-6烷基任选地经1到3个-OH基团取代。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R3为C1-6烷基，其中C1-6烷基任选地经1到2个-OH基团取代。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R3为任选地经1到3个-OH基团取代的C3-6烷基。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R3为任选地经1到2个-OH基团取代的C3-6烷基。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且R3为C1-6烷基。在一些实施例中，化合物具有式I-h且R3为甲基、乙基或丙基。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R3为甲基。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R3为乙基。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R3为丙基，例如异丙基。
在一些实施例中，化合物具有式I-h且R3为-W-Cy。在某些实施例中，化合物具有式I-h，R3为-W-Cy，且W不存在(即W为共价键)。
在某些实施例中，化合物具有式I-h，R3为-W-Cy且W为任选地经一或多个R”取代的二价C1-3亚烷基链且其中W的一个亚甲基单元任选地置换为-O-、-S-或-NR'-。在某些实施例中，化合物具有式I-h，R3为-W-Cy，且Cy为C3-7环烷基，其中Cy任选地经1到3个Rx取代。
在某些实施例中，化合物具有式I-h，R3为-W-Cy，且Cy为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到7元单环饱和环，其中Cy任选地经1到3个Rx取代。在某些实施例中，化合物具有式I-h，R3为-W-Cy，W为任选地经一或多个R”取代的二价C1-3亚烷基链，且Cy为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到7元单环饱和环，其中Cy任选地经1到3个Rx取代。在某些实施例中，化合物具有式I-h，R3为-W-Cy，W为任选地经一或多个R”取代的二价C1亚烷基链，且Cy为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到7元单环饱和环，其中Cy任选地经1到3个Rx取代。在某些实施例中，化合物具有式I-h，R3为-W-Cy，W为任选地经一或多个R”取代的二价C1-3亚烷基链，且Cy为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到5元单环饱和环，其中Cy任选地经1到3个Rx取代。在某些实施例中，化合物具有式I-h，R3为-W-Cy，W为任选地经一或多个R”取代的二价C1亚烷基链，且Cy为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元单环饱和环，其中Cy任选地经1到3个Rx取代。在某些实施例中，化合物具有式I-h，R3为-W-Cy，W为任选地经一或多个R”取代的二价C1亚烷基链，且Cy为具有1个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元单环饱和环，其中Cy任选地经1到3个Rx取代。在某些实施例中，R3如上文所定义且Rx为-C(O)R'。在某些实施例中，R3如上文所定义且Rx为-C(O)Me。
在某些实施例中，化合物具有式I-h且R3为
在某些实施例中，化合物具有式I-h且R3为：
在某些实施例中，化合物具有式I-h且R4为任选地经取代的苯基。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R4为任选地经1到5个卤素取代的苯基。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R4为任选地经1到5个烷氧基取代的苯基。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R4为任选地经1到5个独立地选自卤素和烷氧基的基团取代的苯基。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R4为任选地经1到5个独立地选自氯、氟、甲氧基和乙氧基的基团取代的苯基。在某些实施例中，化合物具有式I-h且R4为任选地经取代的苯基，其中所述任选地存在的取代为上文和此处所述的任一者。
在某些实施例中，化合物具有式I-h且R4为乙基、苯基、环己基、
在某些实施例中，化合物具有式I-h且R4为
在一些实施例中，式I-h化合物具有式I-h(顺)(1)或I-h(顺)(2)：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，式I-h化合物具有式I-h(顺)(1)：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，式I-h化合物具有式I-H(顺)(2)：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，本发明提供式I-j化合物：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R4、Ra和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，本发明提供式I-k化合物：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，本发明提供式I-n化合物：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、R4和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，化合物具有式I-q：
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、R3、R4、T和q中的每一者如上文定义且在上文和此处的实施例、类别和子类中单独或组合描述。
在某些实施例中，本发明提供选自表1或表2的化合物：
表1
在某些实施例中，本发明提供选自表2的化合物：
表2
在某些实施例中，本发明提供选自以下的化合物：
在一些实施例中，本发明提供选自表3的化合物
表3：
在一些实施例中，本发明提供选自上文描绘的化合物的化合物或其药学上可接受的盐。
如上文一般定义，本文任何化学式的R1基团为-L-Y，其中：
L为共价键或二价C1-8饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中L的一个、两个或三个亚甲基单元任选地且独立地置换为亚环丙基、-NR-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝S)-、-C(＝NR)-、-N＝N-或-C(＝N2)-；
Y为氢、任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，或具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到10元单环或双环饱和、部分不饱和或芳基环，且其中所述环经1到4个Re基团取代；且
各Re独立地选自-Q-Z、氧代基、NO2、卤素、CN、适合离去基或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，其中：
Q为共价键或二价C1-6饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中Q的一个或两个亚甲基单元任选地且独立地由以下置换：-N(R)-、-S-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SO-或-SO2-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-；且
Z为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
在某些实施例中，L为共价键。
在某些实施例中，L为二价C1-8饱和或不饱和直链或分支链烃链。在某些实施例中，L为-CH2-。
在某些实施例中，L为共价键、-CH2-、-NH-、-CH2NH-、-NHCH2-、-NHC(O)-、-NHC(O)CH2OC(O)-、-CH2NHC(O)-、-NHSO2-、-NHSO2CH2-、-NHC(O)CH2OC(O)-或-SO2NH-。
在一些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的一个或两个额外亚甲基单元任选地且独立地由以下置换：-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-、-C(O)O-、亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-。
在某些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-C(O)-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-，且L的一个或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-。
在一些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-C(O)-，且L的一个或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-。
如上文所述，在某些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键。一般技术人员将了解，所述双键可存在于烃链主链内或在主链“外”，且因此形成亚烷基。举例来说，所述具有亚烷基分支链的L基团包括-CH2C(＝CH2)CH2-。因此，在一些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个亚烷基双键。示范性L基团包括-NHC(O)C(＝CH2)CH2-。
在某些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-C(O)-。在某些实施例中，L为-C(O)CH＝CH(CH3)-、-C(O)CH＝CHCH2NH(CH3)-、-C(O)CH＝CH(CH3)-、-C(O)CH＝CH-、-CH2C(O)CH＝CH-、-CH2C(O)CH＝CH(CH3)-、-CH2CH2C(O)CH＝CH-、-CH2CH2C(O)CH＝CHCH2-、-CH2CH2C(O)CH＝CHCH2NH(CH3)-或-CH2CH2C(O)CH＝CH(CH3)-，或-CH(CH3)OC(O)CH＝CH-。
在某些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-OC(O)-。
在一些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-，且L的一个或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-。在一些实施例中，L为-CH2OC(O)CH＝CHCH2-、-CH2-OC(O)CH＝CH-或-CH(CH＝CH2)OC(O)CH＝CH-。
在某些实施例中，L为-NRC(O)CH＝CH-、-NRC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NRC(O)CH＝CHCH2O-、-CH2NRC(O)CH＝CH-、-NRSO2CH＝CH-、-NRSO2CH＝CHCH2-、-NRC(O)(C＝N2)-、-NRC(O)(C＝N2)C(O)-、-NRC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NRC(O)C(＝CH2)CH2-、-CH2NRC(O)-、-CH2CH2NRC(O)-或-CH2NRC(O)亚环丙基-；其中R为H或任选地经取代的C1-6脂肪族基；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
在某些实施例中，L为-NHC(O)CH＝CH-、-NHC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NHC(O)CH＝CHCH2O-、-CH2NHC(O)CH＝CH-、-NHSO2CH＝CH-、-NHSO2CH＝CHCH2-、-NHC(O)(C＝N2)-、-NHC(O)(C＝N2)C(O)-、-NHC(O)C(＝CH2)CH2-、-CH2NHC(O)-、-CH2CH2NHC(O)-或-CH2NHC(O)亚环丙基-。
在一些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个三键。在某些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个三键且L的一或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为-NRC(O)-、-C(O)NR-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-C(＝S)-、-C(＝NR)-、-O-、-N(R)-或-C(O)-。在一些实施例中，L具有至少一个三键且L的至少一个亚甲基单元置换为-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)-、-C(O)O-或-OC(O)-，或-O-。
示范性L基团包括-C≡C-、-C≡CCH2N(异丙基)-、-NHC(O)C≡CCH2CH2-、-CH2-C≡C-CH2-、-C≡CCH2O-、-CH2C(O)C≡C-、-C(O)C≡C-或-CH2OC(＝O)C≡C-。
在某些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L的一个亚甲基单元置换为亚环丙基且L的一或两个额外亚甲基单元独立地置换为-C(O)-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-。示范性L基团包括-NHC(O)-亚环丙基-SO2-和-NHC(O)-亚环丙基-。
如上文一般定义，Y为氢、任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，或具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到10元单环或双环饱和、部分不饱和或芳基环，且其中所述环经1到4个Re基团取代，各Re独立地选自-Q-Z、氧代基、NO2、卤素、CN、适合离去基或C1-6脂肪族基，其中Q为共价键或二价C1-6饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中Q的一或两个亚甲基单元任选地且独立地置换为-N(R)-、-S-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SO-或-SO2-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-；且Z为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
在某些实施例中，Y为氢。
在某些实施例中，Y为任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。在一些实施例中，Y为任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基。在其它实施例中，Y为任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基。在一些实施例中，Y为C2-6烯基。在其它实施例中，Y为C2-4炔基。
在其它实施例中，Y为经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基。所述Y基团包括-CH2F、-CH2Cl、-CH2CN和-CH2NO2。
在某些实施例中，Y为具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的饱和3到6元单环，其中Y经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述。
在一些实施例中，Y为具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述。示范性所述环为环氧化物和氧杂环丁烷环，其中各环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述。
在其它实施例中，Y为具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述。所述环包括哌啶和吡咯烷，其中各环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述。在某些实施例中，Y为其中各R、Q、Z和Re如上文所定义且如本文所述。
在一些实施例中，Y为饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述。在某些实施例中，Y为环丙基、环丁基、环戊基或环己基，其中各环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述。在某些实施例中，Y为其中Re如上文所定义且如本文所述。在某些实施例中，Y为任选地经卤素、CN或NO2取代的环丙基。
在某些实施例中，Y为具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述。
在一些实施例中，Y为部分不饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述。在一些实施例中，Y为环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基或环己烯基，其中各环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述。在某些实施例中，Y为其中各Re如上文所定义且如本文所述。
在某些实施例中，Y为具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述。在某些实施例中，Y选自：
其中各R和Re如上文所定义且如本文所述。
在某些实施例中，Y为具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述。在某些实施例中，Y为苯基、吡啶基或嘧啶基，其中各环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述。
在一些实施例中，Y选自：
其中各Re如上文所定义且如本文所述。
在其它实施例中，Y为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述。在一些实施例中，Y为具有1到3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5元部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述。示范性所述环为异噁唑基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、三唑基、噻二唑基和噁二唑基，其中各环经1到3个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述。在某些实施例中，Y选自：
其中各R和Re如上文所定义且如本文所述。
在某些实施例中，Y为具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8到10元双环、饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所述。根据另一方面，Y为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的9到10元双环、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所述。示范性所述双环包括2,3-二氢苯并[d]异噻唑，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所述。
如上文一般定义，各Re基团独立地选自-Q-Z、氧代基、NO2、卤素、CN、适合离去基或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，其中Q为共价键或二价C1-6饱和或不饱和、直链或分支链烃链，其中Q的一或两个亚甲基单元任选地且独立地置换为-N(R)-、-S-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SO-或-SO2-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-；且Z为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
在某些实施例中，Re为任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。在其它实施例中，Re为氧代基、NO2、卤素或CN。
在一些实施例中，Re为-Q-Z，其中Q为共价键且Z为氢(即Re为氢)。在其它实施例中，Re为-Q-Z，其中Q为二价C1-6饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中Q的一或两个亚甲基单元任选地且独立地置换为-NR-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-S-、-O-、-C(O)-、-SO-或-SO2-。在其它实施例中，Q为具有至少一个双键的二价C2-6直链或分支链烃链，其中Q的一或两个亚甲基单元任选地且独立地置换为-NR-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-S-、-O-、-C(O)-、-SO-或-SO2-。在某些实施例中，Re基团的Z部分为氢。在一些实施例中，-Q-Z为-NHC(O)CH＝CH2或-C(O)CH＝CH2。
在某些实施例中，各Re独立地选自氧代基、NO2、CN、氟、氯、-NHC(O)CH＝CH2、-C(O)CH＝CH2、-CH2CH＝CH2、-C≡CH、-C(O)OCH2Cl、-C(O)OCH2F、-C(O)OCH2CN、-C(O)CH2Cl、-C(O)CH2F、-C(O)CH2CN或-CH2C(O)CH3。
在某些实施例中，Re为适合离去基，即经受亲核置换的基团。“适合离去基”为容易由所要引入化学部分(例如所关注半胱氨酸的硫醇部分)置换的化学基团。适合离去基为本领域中熟知，例如参看“高等有机化学(AdvancedOrganicChemistry),”杰瑞·马奇(JerryMarch),第5版,第351页-第357页,约翰·威利父子出版社,纽约。所述离去基包括(但不限于)卤素、烷氧基、磺酰氧基、任选地经取代的烷基磺酰氧基、任选地经取代的烯基磺酰氧基、任选地经取代的芳基磺酰氧基、酰基和重氮盐部分。适合离去基的实例包括氯、碘、溴、氟、乙酰氧基、甲烷磺酰氧基(甲磺酰氧基)、甲苯磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基、硝基-苯基磺酰氧基(硝基苯磺酰氧基)和溴-苯基磺酰氧基(溴苯磺酰氧基)。
在某些实施例中，-L-Y的以下实施例和组合适用：
(a)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的一或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-、-C(O)O-、亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(b)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-C(O)-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-，且L的一个或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(c)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-C(O)-，且L的一个或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(d)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-C(O)-；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(e)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-OC(O)-；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(f)L为-NRC(O)CH＝CH-、-NRC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NRC(O)CH＝CHCH2O-、-CH2NRC(O)CH＝CH-、-NRSO2CH＝CH-、-NRSO2CH＝CHCH2-、-NRC(O)(C＝N2)-、-NRC(O)(C＝N2)C(O)-、-NRC(O)CH＝CHCH2O-、-NRC(O)C(＝CH2)CH2-、-CH2NRC(O)-、-CH2CH2NRC(O)-或-CH2NRC(O)亚环丙基-；其中R为H或任选地经取代的C1-6脂肪族基；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(g)L为-NHC(O)CH＝CH-、-NHC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NHC(O)CH＝CHCH2O-、-CH2NHC(O)CH＝CH-、-NHSO2CH＝CH-、-NHSO2CH＝CHCH2-、-NHC(O)(C＝N2)-、-NHC(O)(C＝N2)C(O)-、-NHC(O)C(＝CH2)CH2-、-CH2NHC(O)-、-CH2CH2NHC(O)-或-CH2NHC(O)亚环丙基-；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(h)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个亚烷基双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-C(O)-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-，且L的一或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(i)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个三键且L的一或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-，且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(j)L为-C≡C-、-C≡CCH2N(异丙基)-、-NHC(O)C≡CCH2CH2-、-CH2-C≡C-CH2-、-C≡CCH2O-、-CH2C(O)C≡C-、-C(O)C≡C-或-CH2OC(＝O)C≡C-；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(k)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L的一个亚甲基单元置换为亚环丙基且L的一或两个额外亚甲基单元独立地置换为-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(l)L为共价键且Y选自：
(i)经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基；
(ii)任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基；或
(iii)任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基；或
(iv)具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(v)具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(vi)其中各R、Q、Z和Re如上文所定义且如本文所述；或
(vii)饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(viii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(ix)部分不饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(x)其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xi)具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xii)
其中各R和Re如上文所定义且如本文所述；或
(xiii)具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述；或
(xiv)
其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xv)具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述；或
(xvi)
其中各R和Re如上文所定义且如本文所述；或
(xvii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8到10元双环、饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所述；
(m)L为-C(O)-且Y选自：
(i)经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基；或
(ii)任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基；或
(iii)任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基；或
(iv)具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(v)具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(vi)其中各R、Q、Z和Re如上文所定义且如本文所述；或
(vii)饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(viii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(ix)部分不饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(x)其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xi)具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xii)
其中各R和Re如上文所定义且如本文所述；或
(xiii)具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述；或
(xiv)
其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xv)具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述；或
(xvi)
其中各R和Re如上文所定义且如本文所述；或
(xvii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8到10元双环、饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所述；
(n)L为-N(R)C(O)-且Y选自：
(i)经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基；或
(ii)任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基；或
(iii)任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基；或
(iv)具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(v)具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(vi)其中各R、Q、Z和Re如上文所定义且如本文所述；或
(vii)饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(viii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(ix)部分不饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(x)其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xi)具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xii)
其中各R和Re如上文所定义且如本文所述；或
(xiii)具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述；或
(xiv)
其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xv)具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述；或
(xvi)
其中各R和Re如上文所定义且如本文所述；或
(xvii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8到10元双环、饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所述；
(o)L为二价C1-8饱和或不饱和直链或分支链烃链；且Y选自：
(i)经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基；
(ii)任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基；或
(iii)任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基；或
(iv)具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(v)具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(vi)其中各R、Q、Z和Re如上文所定义且如本文所述；或
(vii)饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(viii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(ix)部分不饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(x)其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xi)具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xii)
其中各R和Re如上文所定义且如本文所述；或
(xiii)具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述；或
(xiv)
其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xv)具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述；或
(xvi)
其中各R和Re如上文所定义且如本文所述；或
(xvii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8到10元双环、饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所述；
(p)L为共价键、-CH2-、-NH-、-C(O)-、-CH2NH-、-NHCH2-、-NHC(O)-、-NHC(O)CH2OC(O)-、-CH2NHC(O)-、-NHSO2-、-NHSO2CH2-、-NHC(O)CH2OC(O)-或-SO2NH-；且Y选自：
(i)经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基；或
(ii)任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基；或
(iii)任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基；或
(iv)具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(v)具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(vi)其中各R、Q、Z和Re如上文所定义且如本文所述；或
(vii)饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(viii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(ix)部分不饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(x)其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xi)具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xii)
其中各R和Re如上文所定义且如本文所述；或
(xiii)具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述；或
(xiv)
其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xv)具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所述；或
(xvi)
其中各R和Re如上文所定义且如本文所述；或
(xvii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8到10元双环、饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所述。
(q)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L的两个或三个亚甲基单元任选地且独立地置换为-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-、-C(O)O-、亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
(r)L-Y为体外或体内转化为不可逆弹头的“前弹头”。在某些实施例中，L-Y为其中LG为离去基。在某些实施例中，L-Y为 在某些实施例中，“前弹头”根据以下转化为不可逆弹头：
在某些实施例中，本文任何化学式的Y基团选自表1、表2、表3、表7或表8中所述者，其中各波形线指示与分子其余部分的连接点。
在某些实施例中，R1为-L-Y，其中：
L为共价键或二价C1-8饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中L的一个、两个或三个亚甲基单元任选地且独立地置换为-N(R)-、-N(R)C(O)-、-N(R)SO2-、-O-、-C(O)-或-SO2-；且
Y为氢或任选地经氧代基、卤素、N(R)2、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
在某些实施例中，R1基团的Y基团-L-Y选自下表4中所述者，其中各波形线指示与分子其余部分的连接点。
表4.示范性Y基团：
其中各Re独立地为适合离去基、NO2、CN或氧代基。
在某些实施例中，R1为-C(O)CH2CH2C(O)CH＝C(CH3)2、-C(O)CH2CH2C(O)CH＝CH(环丙基)、-C(O)CH2CH2C(O)CH＝CHCH3、-C(O)CH2CH2C(O)CH＝CHCH2CH3或-C(O)CH2CH2C(O)C(＝CH2)CH3。在某些实施例中，R1为-C(O)CH2NHC(O)CH＝CH2、-C(O)CH2NHC(O)CH2CH2C(O)CH＝CHCH3或-C(O)CH2NHC(O)CH2CH2C(O)C(＝CH2)CH3。在某些实施例中，R1为-S(O)2CH2CH2NHC(O)CH2CH2C(O)CH＝C(CH3)2、-S(O)2CH2CH2NHC(O)CH2CH2C(O)CH＝CHCH3或-S(O)2CH2CH2NHC(O)CH2CH2C(O)CH＝CH2。在某些实施例中，R1为-C(O)(CH2)3NHC(O)CH2CH2C(O)CH＝CHCH3或-C(O)(CH2)3NHC(O)CH2CH2C(O)CH＝CH2。
在某些实施例中，R1为-C≡CH、-C≡CCH2NH(异丙基)、-NHC(O)C≡CCH2CH3、-CH2-C≡C-CH3、-C≡CCH2OH、-CH2C(O)C≡CH、-C(O)C≡CH或-CH2OC(＝O)C≡CH。在一些实施例中，R1选自-NHC(O)CH＝CH2、-NHC(O)CH＝CHCH2N(CH3)2或-CH2NHC(O)CH＝CH2。
在某些实施例中，R1选自下表5中所述者，其中各波形线指示与分子其余部分的连接点。
表5：示范性R 1 基团
其中各Re独立地为适合离去基、NO2、CN或氧代基。
在某些实施例中，R1选自
在某些实施例中，R1选自
在某些实施例中，R1选自：
在一些实施例中，R1选自表1、表2、表3、表7或表8中所描绘者。
如上文一般定义，R1为弹头基团。不希望受任何特定理论约束，相信所述R1基团(即弹头基团)尤其适于共价结合于某些蛋白激酶的结合域中的关键半胱氨酸残基。在结合域中具有半胱氨酸残基的蛋白激酶为一般技术人员所已知且包括FGFR4或其突变体。图4提供SEQIDNO.1，其为FGFR4的氨基酸序列。在某些实施例中，本发明化合物具有弹头基团，其特征在于本发明化合物以半胱氨酸552残基(其在图4中由方框强调且在下文中为粗体加下划线)为目标：
含有C552的FGFR4子序列：
LGVCTQEGPLYVIVEAAKGNLREFLRARRP
因此，在一些实施例中，R1特征在于-L-Y部分能够共价结合于半胱氨酸552残基，借此不可逆抑制酶。半胱氨酸残基为FGFR4或其突变体的Cys552，其中所提供的残基编号是根据UniprotP22455。
一般技术人员将了解多种如本文所定义的弹头基团适于所述共价结合。
在某些实施例中，R1特征在于-L-Y部分能够共价结合于FGFR4的半胱氨酸残基，借此不可逆抑制酶。在一些实施例中，半胱氨酸残基为Cys552。
一般技术人员将了解多种如本文所定义的弹头基团适于所述共价结合。所述R1基团包括(但不限于)本文所述和上文描绘者。
在某些实施例中，本发明提供上文任何表中描绘的任何化合物或其药学上可接受的盐。
如本文所述，本发明化合物为FGFR4或其突变体的不可逆抑制剂。
在某些实施例中，本发明提供式A结合物：
Cys552-修饰子-抑制剂部分
A
其中：
Cys552为FGFR4的Cys552；
修饰子为由弹头基团与FGFR4激酶的Cys552共价结合而产生的二价基团；
所述弹头基团为能够共价结合于Cys552的官能团；且
所述抑制剂部分为在所述FGFR4激酶的结合位点结合的部分。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-i的环A、R2、R3、X1、X2、X3、X4、X5、Y、G、T和q中的每一者如上文针对式I所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-a-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-a-i的环A、R2、R3、R4、R5、R5'、Ra、T和q中的每一者如上文针对式I-a所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-b-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-b-i的环A、R2、R3、R4、T和q中的每一者如上文针对式I-b所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-c-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-c-i的R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文针对式I-c所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-d-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-d-i的R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文针对式I-d所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-e-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-e-i的环A、R2、R3、R5、R5'、Ra和q中的每一者如上文针对式I-e所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-f-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-f-i的环A、R2、R3、R5、R5'、Ra和q中的每一者如上文针对式I-f所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-g-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-g-i的环A、R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文针对式I-g所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-h-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-h-i的环A、R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文针对式I-h所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-j-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-j-i的环A、R2、R4、Ra和q中的每一者如上文针对式I-j所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-k-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-k-i的环A、R2、R3、R4、Ra和q中的每一者如上文针对式I-k所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-n-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-n-i的环A、R2、R3、R4和q中的每一者如上文针对式I-n所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，结合物A的抑制剂部分具有式I-q-i：
其中波形线指示经修饰子与结合物A的Cys552的连接点；且其中式I-q-i的环A、R2、R3、R4、Ra、T和q中的每一者如上文针对式I-q所定义且如本文实施例中定义和描述。
在某些实施例中，本发明提供下式中任一者的结合物：
其中关于上式的Cys552、修饰子、环A、R2、R3、R4、R5、R5'、Ra、X1、X2、X3、X4、X5、T、Y、G和q中的每一者如针对式I、I-a、I-b、I-c、I-d、I-e、I-f、I-g、I-h、I-j、I-k、I-n和I-q的本文实施例中所定义和描述。
在其它实施例中，上文所述结合物中任一者的修饰子部分选自下表6中所述者。示范性修饰子进一步包括表1、表2、表3、表5、表7或表8中存在的弹头部分与FGFR4的半胱氨酸552的共价键结形成的任何二价基团。应理解，下文的示范性修饰子显示结合于Cys552的巯基。
表6.结合于Cys552的示范性修饰子：
4.用途、配制和投予
药学上可接受的组合物
根据另一实施例，本发明提供一种组合物，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂。本发明组合物中化合物的量可有效以可测量方式抑制生物样品或患者中的蛋白激酶(尤其FGFR4)或其突变体。在某些实施例中，本发明组合物中化合物的量可有效以可测量方式抑制生物样品或患者中的FGFR4或其突变体。在某些实施例中，本发明组合物经配制用于向需要所述组合物的患者投予。在一些实施例中，本发明组合物经配制用于向患者经口投予。
如本文所用，术语“患者”意思是动物，优选为哺乳动物，且最优选为人类。
术语“药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂”指的是不会破坏所配制化合物的药理学活性的无毒载剂、佐剂或媒剂。用于本发明组合物的药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂包括(但不限于)离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白，例如人血清白蛋白；缓冲物质，例如磷酸盐；甘氨酸；山梨酸；山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；盐或电解质，例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐；胶状二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；基于纤维素的物质；聚乙二醇；羧甲基纤维素钠；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物；聚乙二醇和羊毛脂。
“药学上可接受的衍生物”意思是向接受者投予后能够直接或间接提供本发明化合物或其抑制活性代谢物或残基的本发明化合物的任何无毒盐、酯、酯的盐或其它衍生物。
如本文所用，术语“其抑制活性代谢物或残基”意思是其代谢物或残基也是FGFR4或其突变体的抑制剂。
本发明组合物经口、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、直肠、经鼻、经颊、经阴道或经植入储集器投予。如本文所用，术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输液技术。所述组合物优选经口、腹膜内或静脉内投予。本发明组合物的无菌可注射形式包括水性或油性悬浮液。这些悬浮液根据本领域中已知的技术使用适合分散剂或湿润剂和悬浮剂配制。无菌可注射制剂还是无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如1,3-丁二醇中的溶液。采用的可接受媒剂和溶剂为水、林格氏溶液(Ringer'ssolution)和等张氯化钠溶液。此外，无菌不挥发性油常规用作溶剂或悬浮介质。
为此，采用的任何温和不挥发性油包括合成单甘油酯或二甘油酯。例如油酸的脂肪酸和其甘油酯衍生物适用于可注射制剂中，如尤其呈聚氧乙基化形式的天然药学上可接受的油(例如橄榄油或蓖麻油)。这些油溶液或悬浮液还含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或类似分散剂，其通常用于配制药学上可接受的剂型，包括乳液和悬浮液。其它通常使用的界面活性剂(例如Tweens、Spans)和其它通常用于制造药学上可接受的固体、液体或其它剂型的乳化剂或生物可用性增强剂还可用于配制的目的。
本发明的药学上可接受的组合物以任何经口可接受的剂型经口投予。示范性经口剂型为胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在经口使用的片剂的情形中，常用载剂包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加例如硬脂酸镁的润滑剂。对于以胶囊形式经口投予而言，适用的稀释剂包括乳糖和经干燥的玉米淀粉。当经口使用需要水性悬浮液时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。需要时，任选地还添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
或者，本发明的药学上可接受的组合物以用于直肠投予的栓剂形式投予。这些可通过混合药剂与适合非刺激性赋形剂来制备，所述赋形剂在室温下为固体但在直肠温度下为液体，且因此将在直肠中熔融释放药物。所述材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
本发明的药学上可接受的组合物还局部投予，当治疗目标包括通过局部施用容易接近的区域或器官(包括眼睛、皮肤或下肠道的疾病)时尤其如此。容易制备针对这些区域或器官中每一者的适合局部配制物。
下肠道的局部施用可以直肠栓剂配制物(参看上文)或适合灌肠剂配制物实现。还使用局部经皮贴片。
对应局部施用，在含有悬浮或溶解于一或多种载剂中的活性组分的适合软膏中配制所提供的药学上可接受的组合物。用于局部投予这一化合物的示范性载剂为矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，所提供药学上可接受的组合物可在含有悬浮或溶解于一或多种药学上可接受的载剂中的活性组分的适合洗剂或乳膏中配制。适合载剂包括(但不限于)矿物油、去水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、十六醇十八醇、2-辛基十二醇、苯甲醇和水。
对于眼用途，所提供药学上可接受的组合物任选地在等张pH值调整无菌生理食盐水中配制成微粒化悬浮液，或优选在等张pH值调整无菌生理食盐水中配制成溶液，其中具有或不具有防腐剂(例如氯苄烷铵)。或者，对于眼用途，药学上可接受的组合物在例如凡士林的软膏中配制。
本发明的药学上可接受的组合物任选地通过鼻用气化喷雾剂投予或吸入投予。所述组合物根据医药配制领域中熟知的技术制备且在采用苯甲醇或其它适合防腐剂、提高生物可用性的吸收促进剂、氟碳化物和/或其它常规增溶剂或分散剂的生理食盐水中制备成溶液。
本发明的药学上可接受的组合物最优选配制用于经口投予。所述配制物可与食物一起或不与食物一起投予。在一些实施例中，本发明的药学上可接受的组合物不与食物一起投予。在其它实施例中，本发明的药学上可接受的组合物与食物一起投予。
任选地与载剂材料组合产生单个剂型的组合物的本发明化合物的量将视打算治疗的主体、特定投予模式而变化。优选地，所提供组合物应经配制使得可向接受这些组合物的患者投予0.01-100mg/kg体重/天的剂量的抑制剂。
还应理解，任何特定患者的特定剂量和治疗方案将视多种因素而定，包括所用特定化合物的活性、年龄、体重、整体健康状况、性别、饮食、投予时间、排泄速率、药物组合和治疗医师的诊断以及所治疗特定疾病的严重程度。组合物中本发明化合物的量还将视组合物中的特定化合物而定。
化合物和药学上可接受的组合物的用途
本文所述化合物和组合物一般适用于抑制一或多种酶的蛋白激酶活性。
耐药性作为目标疗法的重要挑战显现。举例来说，和以及正在研发的若干其它激酶抑制剂已报告耐药性。此外，cKit和PDGFR受体已报告耐药性。已报告不可逆抑制剂可有效抵抗蛋白激酶的耐药性形式(夸克(Kwak),E.L.,R.索德拉(R.Sordella)等人,(2005).“EGF受体的不可逆抑制剂可能欺骗性的获得吉非替尼耐药性(IrreversibleinhibitorsoftheEGFreceptormaycircumventacquiredresistancetogefitinib).”PNAS102(21):7665-7670。)不希望受任何特定理论约束，本发明化合物为蛋白激酶的耐药性形式的有效抑制剂。
由本文所述的化合物和组合物抑制并且本文所述的方法适用的激酶实例包括FGFR4或其突变体。在一些实施例中，所提供化合物相较于其它FGFR抑制剂选择性抑制FGFR4。
可体外、体内或在细胞株中测试本发明用作FGFR4或其突变体的测试化合物的化合物的活性。体外分析包括判断经活化FGFR4或其突变体的磷酸化活性和/或后续功能结果或ATP酶活性的抑制的分析法。替代体外分析法定量测试化合物结合于FGFR4的能力。可在结合、分离测试化合物/FGFR4复合物和测定放射性标记结合量之前通过放射性标记抑制剂测量抑制剂结合。或者，可通过进行竞争实验测定测试化合物结合，其中新测试化合物用结合于已知放射性配位体的FGFR4培育。下文实例中阐述用于分析本发明用作FGFR4或其突变体的测试化合物的化合物的详细条件。
蛋白质酪氨酸激酶为催化磷酸酯基从ATP或GTP转移到位于蛋白质底物上的酪氨酸残基的一类酶。受体酪氨酸激酶通过经磷酸化事件活化第二消息效应子从细胞外部向内部传输信号。多种细胞过程由这些信号推动，包括增殖、碳水化合物利用、蛋白质合成、血管生成、细胞生长和细胞存活。
(a)FGFR家族
蛋白酪氨酸激酶(PTK)受体的纤维母细胞生长因子(FGF)家族调节生理功能的分集阵列，包括致有丝分裂、伤口愈合、细胞分化和血管新生，以及发育。正常和恶性细胞生长以及增殖都受FGF(用作自分泌以及旁分泌因子的细胞外信号传导分子)局部浓度变化影响。自分泌FGF信号传导在类固醇激素依赖性癌症进展到非激素依赖性状态中可尤其重要(帕厄斯(Powers)等人,(2000)内分泌相关癌症(Endocr.Relat.Cancer),7,165-197)。
FGF和其受体在若干组织和细胞株中以高程度表现，且相信过度表现造成恶性表型。
两个原型成员为酸性纤维母细胞生长因子(aFGF或FGF1)和碱性纤维母细胞生长因子(bFGF或FGF2)，且迄今为止，至少已识别出二十种独特FGF家族成员。经四种类型的高亲和力跨膜蛋白酪氨酸激酶纤维母细胞生长因子受体(FGFR)第1号到第4号(FGFR1到FGFR4)传输FGF的细胞反应。在配位体结合后，受体二聚且自体磷酸化或反式磷酸化特异性细胞质酪氨酸残基以传输细胞内信号，所述信号最终调控核转录因子效应子。
抑制FGFR的化合物将适用于提供尤其通过预防血管新生防止肿瘤生长或诱发肿瘤中的细胞凋亡的方式。因此预期将证明化合物适用于治疗或预防增生性病症，例如癌症。具体来说，具有受体酪氨酸激酶的活化突变体或受体酪氨酸激酶上调的肿瘤对抑制剂尤其敏感。
多个研究描述在细胞株模型中用抗体拮抗剂靶向FGFR4激酶活性或其配位体FGF19中的任一者来抑制增殖和诱导细胞凋亡。何(Ho)等人(2009)肝病学杂志(JournalofHepatology),50显示三分的一患者在表现高含量mRNA的FGFR4基因中具有常见多形现象，并且这些肿瘤与高分泌量的肝细胞癌标记α-胎蛋白相关。
在某些实施例中，本发明提供一种用于抑制FGFR4或其突变体在患者或生物样品中的活性的方法，其包含向所述患者投予本发明化合物或使所述生物样品与本发明化合物接触的步骤。
在某些实施例中，FGFR4或其突变体活性被不可逆抑制。在某些实施例中，FGFR4或其突变体活性通过共价修饰FGFR4的Cys552不可逆抑制。
在某些实施例中，本发明提供一种治疗有需要患者的FGFR4介导的病症的方法，其包含向所述患者投予本发明化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要患者的肝细胞癌的方法，其包含向所述患者投予本发明化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要患者的横纹肌肉瘤、食道癌、乳癌或头部或颈部癌的方法，其包含向所述患者投予本发明化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。
如本文所用，术语“临床耐药性”指的是由于药物目标中的突变，药物目标对药物治疗失去易感性。
如本文所用，术语“耐药性”指的是编码目标蛋白的野生型核酸序列，和/或目标的蛋白序列中改变、降低或消除抑制剂对目标蛋白的抑制作用的变化。
如本文所用，术语“治疗”指的是逆转、减轻、延迟如本文所述的疾病或病症或其一或多种症状的发作，或抑制其进展。在一些实施例中，在已产生一或多种症状后投予治疗。在其它实施例中，在无症状存在下投予治疗。举例来说，在症状发作之前(例如根据症状史和/或根据遗传或其它易感因素)向易感个体投予治疗。在症状已解决后还继续治疗，例如以防止或延迟其复发。
使用有效治疗上文提供的病症或减轻所述病症严重程度的任何量和任何途径的投予来投予根据本发明方法的化合物和组合物。所需确切量将视以下因素随个体变化：物种、年龄和个体一般状况、感染严重程度、特定药剂、其投予模式等。本发明化合物优选配制为容易投予且剂量均匀的单位剂型。如本文所用，表述“单位剂型”指的是适于打算治疗的患者的药剂的物理离散单元。然而，应理解，本发明的化合物和组合物的每日总用量将由主治医师在正确医学判断范围内来决定。针对任何特定患者或生物体的特定有效剂量将视多种因素而定，包括所治疗的病症和所述病症的严重程度；所用特定化合物的活性；所用特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用特定化合物的投予时间、投予途径和排泄速率；治疗持续时间，与所采用特定化合物组合或一致的药物，和医学技术中熟知的类似因素。
本发明的药学上可接受的组合物可视所治疗感染的严重程度而定经口、经直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过粉末、软膏或滴剂)、经颊、作为经口或经鼻喷雾或其类似物向人类和其它动物投予。在某些实施例中，本发明的化合物可以每天每千克个体体重约0.01毫克到约50毫克且优选每千克个体体重约1毫克到约25毫克，每天一或多次经口或肠胃外投予，以获得所要治疗效应。
用于经口投予的液体剂型包括(但不限于)药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性化合物之外，液体剂型任选地含有通常用于本领域中的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(具体来说棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，以及其混合物。除惰性稀释剂之外，经口组合物还可包括佐剂，例如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
根据已知技术使用适合分散剂或湿润剂和悬浮剂配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂还是无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒剂和溶剂中，可采用水、林格氏溶液、U.S.P.和等张氯化钠溶液。此外，无菌不挥发性油常规用作溶剂或悬浮介质。为此，可采用包括合成单甘油酯或二甘油酯的任何温和不挥发性油。此外，使用例如油酸的脂肪酸制备可注射制剂。
可对可注射配制物进行灭菌，例如通过经细菌截留过滤器过滤，或通过并入呈无菌固体组合物形式的灭菌剂，所述组合物可在使用之前溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中。
为了延长本发明化合物的作用，通常需要减缓从皮下或肌肉内注射的化合物的吸收。这通过使用具有不良水溶性的结晶或非晶形材料的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则视其溶解速率而定，而溶解速率又可视晶体大小和结晶形式而定。或者，肠胃外投予的化合物形式的延迟吸收可通过将化合物溶解或悬浮于油媒剂中来实现。通过在生物可降解的聚合物(例如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成化合物的微胶囊基质来制得可注射的储槽形式。视化合物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质而定，可控制化合物释放速率。其它生物可降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将化合物覆埋于与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备储槽式可注射配制物。
用于经直肠或经阴道投予的组合物优选为栓剂，其可通过将本发明化合物与在环境温度下为固体但在体温下为液体且因此在直肠或阴道腔中熔融且释放活性化合物的适合非刺激性赋形剂或载剂(例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备。
用于经口投予的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒。在所述固体剂型中，活性化合物与至少一种例如柠檬酸钠或磷酸二钙的药学上可接受的惰性赋形剂或载剂和/或以下混合：a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶(acacia)；c)保湿剂，例如甘油；d)崩解剂，例如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，例如石蜡；f)吸收促进剂，例如季铵化合物；g)湿润剂，例如十六醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸附剂，例如高岭土和膨润土；和i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和其混合物。在胶囊、片剂和丸剂情形中，剂型还任选地包含缓冲剂。
还使用相似类型的固体组合物作为软填充和硬填充明胶胶囊中的填充剂，所述胶囊使用赋形剂，例如乳糖以及高分子量聚乙二醇等。可以包衣剂和结壳剂(例如肠溶衣和医药配制技术中熟知的其它包衣剂)制备片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型。其任选地含有遮光剂，并且还可为仅在或优选在肠道某一部分任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。还使用相似类型的固体组合物作为软填充和硬填充明胶胶囊中的填充剂，所述胶囊使用赋形剂，例如乳糖以及高分子量聚乙二醇等。
活性化合物还可与一或多种上述赋形剂一起呈微囊封形式。可以包衣剂和结壳剂(例如肠溶衣、控制释放包衣剂和医药配制技术中熟知的其它包衣剂)制备片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型。在所述固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性稀释剂(例如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。在通常实践中，所述剂型还包含惰性稀释剂之外的额外物质，例如制锭润滑剂和其它制锭助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂情形中，剂型还任选地包含缓冲剂。其任选地含有遮光剂，且还可为仅在或优选在肠道某一部分任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。
用于局部或经皮投予本发明化合物的剂型包括软膏、糊剂、乳膏、洗液、凝胶、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。在无菌条件下，将活性组分与药学上可接受的载体和任何所需防腐剂或缓冲剂按要求混合。眼用配制物、滴耳剂和滴眼剂也涵盖于本发明的范围内。此外，本发明涵盖经皮贴片的用途，其具有提供控制本发明化合物到身体的递送的额外优势。可通过将化合物溶解或分散于适当介质中来制造所述剂型。还可使用吸收增进剂来增加化合物的穿过皮肤的通量。速率可通过提供速率控制膜或将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。
根据一个实施例，本发明涉及抑制生物样品中的蛋白激酶活性的方法，其包含使所述生物样品与本发明化合物或包含所述化合物的组合物接触的步骤。
根据另一实施例，本发明涉及一种抑制生物样品中FGFR4或其突变体活性的方法，其包含使所述生物样品与本发明化合物或包含所述化合物的组合物接触的步骤。在某些实施例中，本发明涉及一种不可逆抑制生物样品中FGFR4或其突变体活性的方法，其包含使所述生物样品与本发明化合物或包含所述化合物的组合物接触的步骤。
如本文所用，术语“生物样品”包括(但不限于)细胞培养物或其提取物；由哺乳动物所获得的活组织检查材料或其提取物；和血液、唾液、尿、粪便、精液、眼泪或其它体液或其提取物。
生物样品中FGFR4或其突变体活性的抑制适用于所属领域的技术人员已知的多种目的。所述目的的实例包括(但不限于)输血、器官移植、生物标本储存和生物分析。
本发明的另一实施例涉及一种抑制患者体内蛋白激酶活性的方法，其包含向所述患者投予本发明化合物或包含所述化合物的组合物的步骤。
根据另一实施例，本发明涉及一种抑制患者体内FGFR4或其突变体活性的方法，其包含向所述患者投予本发明化合物或包含所述化合物的组合物的步骤。根据某些实施例，本发明涉及一种不可逆抑制患者体内FGFR4或其突变体活性的方法，其包含向所述患者投予本发明化合物或包含所述化合物的组合物的步骤。在其它实施例中，本发明提供一种治疗有需要患者体内由FGFR4或其突变体介导的病症的方法，其包含向所述患者投予本发明化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。所述病症在本文中详细描述。
本发明化合物或其医药组合物任选地并入到用于涂覆可植入医学装置(例如假体、人工瓣膜、人工血管、支架和导管)的组合物中。已使用例如血管支架克服再狭窄(损伤后血管壁再变窄)。然而，使用支架或其它可植入装置的患者有凝块形成或血小板活化的危险。通过用包含激酶抑制剂的药学上可接受的组合物预涂所述装置来防止或减轻这些非所要作用。经本发明化合物涂覆的可植入装置为本发明的另一实施例。
5.探针化合物
在某些方面中，本发明化合物系栓到可检测部分形成探针化合物。在一个方面中，本发明的探针化合物包含本文所述的任何化学式的不可逆蛋白激酶抑制剂、可检测部分和将抑制剂连接于可检测部分的系栓部分。
在一些实施例中，所述本发明的探针化合物包含所提供的本文所述的任何化学式的化合物，其通过二价系栓部分-T1-系栓可检测部分Rt。系栓部分经环A、环B或R1连接于本发明化合物。一般技术人员将了解当系栓部分连接于R1时，R1为表示为R1'的二价弹头基团。在某些实施例中，所提供的探针化合物选自式I-t中的任一者：
其中环A、R1、R2、R3、X1、X2、X3、X4、X5、G、Y、T和q中的每一者如上文所定义且描述于此处的类别和子类中，R2'为二价R2；T1为二价系栓部分；且Rt为可检测部分。
在一些实施例中，Rt为选自一级标记或二级标记的可检测部分。在某些实施例中，Rt为选自以下的可检测部分：荧光标记(例如荧光染料或荧光团)、质量标签、化学发光基团、发色团、电子致密基团或能量转移剂。在一些实施例中，Rt为生物素、生物素亚砜、放射性同位素或荧光标记。
如本文所用，术语“可检测部分”与术语“标记”和“报告体”可互换使用且涉及任何能够被检测的部分，例如一级标记和二级标记。可使用定量(绝对、近似或相对条件)所研究系统中的可检测部分的方法测量可检测部分的存在。在一些实施例中，所述方法为一般技术人员所熟知且包括定量报告体部分(例如标记、染料、光交联反应剂、细胞毒性化合物、药物、亲和力标记、光亲和力标记、反应性化合物、抗体或抗体片段、生物材料、纳米粒子、自旋标记、荧光团、含有金属的部分、放射性部分、量子点、新颖官能团、与其它分子共价或非共价相互作用的基团、光笼形部分、光化辐射激发部分、配位体、光异构化部分、生物素、生物素类似物(例如生物素亚砜)、并入重原子的部分、可化学裂解基团、可光裂解基团、氧化还原活性剂、同位素标记部分、生物物理探针、磷光基团、化学发光基团、电子致密基团、磁性基团、嵌入基团、发色团、能量转移剂、生物活性剂、可检测标记和上述的任何组合)的任何方法。
例如放射性同位素(例如氚、32P、33P、35S、14C、123I、124I、125I或131I)的一级标记、质量标签为稳定同位素(例如13C、2H、17O、18O、15N、19F和127I)、正电子发射同位素(例如11C、18F、13N、124I和15O)和荧光标记，其为无需进一步修饰即可检测到的产生信号的报告体基团。可检测部分可通过方法加以分析。示范性方法为荧光、正电子发射断层摄影法、SPECT医学成像、化学发光、电子自旋共振、紫外光/可见光吸收谱、质谱、核磁共振、磁共振、流动式细胞测量术、自放射摄影术、闪烁计数、磷光成像和电化学方法。
如本文所用，术语“二级标记”指的是例如生物素的部分和多种蛋白质抗原，其需要存在可产生检测到信号的第二中间物。对于生物素而言，二级中间物包括抗生蛋白链菌素-酶结合物。对于抗原标记而言，二级中间物包括抗体-酶结合物。一些荧光基团可用作二级标记，因为其在非辐射荧光共振能量转移(FRET)过程中会向另一基团转移能量，且第二基团会产生所检测的信号。
如本文所用，术语“荧光标记”、“荧光染料”和“荧光团”指的是吸收既定激发波长的光能且发射不同波长的光能的部分。荧光标记的实例包括(但不限于)：AlexaFluor染料(AlexaFluor350、AlexaFluor488、AlexaFluor532、AlexaFluor546、AlexaFluor568、AlexaFluor594、AlexaFluor633、AlexaFluor660和AlexaFluor680)、AMCA、AMCA-S、BODIPY染料(BODIPYFL、BODIPYR6G、BODIPYTMR、BODIPYTR、BODIPY493/503、BODIPY530/550、BODIPY558/568、BODIPY564/570、BODIPY576/589、BODIPY581/591、BODIPY630/650、BODIPY650/665)、羧基若丹明6G(Carboxyrhodamine6G)、羧基-X-若丹明(ROX)、CascadeBlue、CascadeYellow、Coumarin343、Cyanine染料(Cy3、Cy5、Cy3.5、Cy5.5)、Dansyl、Dapoxyl、二烷基氨基香豆素、4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基-荧光素、DM-NERF、曙红(Eosin)、红萤素(Erythrosin)、荧光素、FAM、羟基香豆素、IRDyes(IRD40、IRD700、IRD800)、JOE、丽丝氨若丹明B(LissaminerhodamineB)、海蓝(MarinaBlue)、甲氧基香豆素、萘并荧光素、Oregon绿488、Oregon绿500、Oregon绿514、海水蓝(PacificBlue)、PyMPO、芘、若丹明B、若丹明6G、若丹明绿、若丹明红、Rhodol绿、2',4',5',7'-四-溴砜-荧光素、四甲基-若丹明(TMR)、羧基四甲基若丹明(TAMRA)、Texas红、Texas红-X、5(6)-羧基荧光素、2,7-二氯荧光素、N,N-双(2,4,6-三甲基苯基)-3,4:9,10-苝双(二甲酰胺、HPTS、乙基曙红、DY-490XLMegaStokes、DY-485XLMegaStokes、Adirondack绿520、ATTO465、ATTO488、ATTO495、YOYO-1,5-FAM、BCECF、二氯荧光素、若丹明110、若丹明123、YO-PRO-1、SYTOX绿、钠绿(SodiumGreen)、SYBR绿I、AlexaFluor500、FITC、Fluo-3、Fluo-4、氟-祖母绿、YoYo-1ssDNA、YoYo-1dsDNA、YoYo-1、SYTORNASelect、福沙绿-FP(DiversaGreen-FP)、深绿(DragonGreen)、EvaGreen、Surf绿EX、光谱绿(SpectrumGreen)、NeuroTrace500525、NBD-X、MitoTracker绿FM、LysoTracker绿DND-26、CBQCA、PA-GFP(活化后)、WEGFP(活化后)、FlASH-CCXXCC、单体阿兹米绿(AzamiGreenmonomeric)、阿兹米绿、绿荧光素蛋白(GFP)、EGFP(CampbellTsien2003)、EGFP(Patterson2001)、Kaede绿、7-苯甲基氨基-4-硝基苯-2-氧杂-1,3-二唑、Bexl、小红莓、卢米奥绿(LumioGreen)和SuperGloGFP。
如本文所用，术语“质量标签”指的是能够使用质谱(MS)检测技术借助于质量唯一检测的任何部分。质量标签的实例包括电泳释放标签，例如N-[3-[4'-[(对甲氧基四氟苯甲基)氧基]苯基]-3-甲基丙三醇基]异哌啶甲酸、4'-[2,3,5,6-四氟-4-(五氟苯氧基)]甲基苯乙酮和其衍生物。这些质量标签的合成和效用描述于美国专利4,650,750、4,709,016、5,360,8191、5,516,931、5,602,273、5,604,104、5,610,020和5,650,270中。质量标签的其它实例包括(但不限于)核苷酸、双脱氧核苷酸、不同长度和碱基组成的寡核苷酸、寡肽、寡醣和不同长度和单体组成的其它合成聚合物。适当质量范围(100-2000道尔顿(Dalton))的多种有机分子(中性和带电)(生物分子或合成化合物)也用作质量标签。适合同位素(例如13C、2H、17O、18O和15N)也用作质量标签。
如本文所用，术语“化学发光基团”指的是由于未添加热量的化学反应发光的基团。举例来说，鲁米诺(luminol)(5-氨基-2,3-二氢-1,4-酞嗪二酮)与如过氧化氢(H2O2)的氧化物在碱和金属催化剂存在下反应产生激发态产物(3-氨基邻苯二甲酸酯，3-APA)。
如本文所用，术语“化学发光基团”指的是吸收可见波长、UV波长或IR波长的光的分子。
如本文所用，术语“染料”指的是含有发色团的可溶性着色物质。
如本文所用，术语“电子致密基团”指的是当用电子束照射时散射电子的基团。所述基团包括(但不限于)钼酸铵、次硝酸铋、碘化镉、碳酰肼、六水合氯化铁、六亚甲基四胺、无水三氯化铟、硝酸镧、三水合乙酸铅、三水合柠檬酸铅、硝酸铅、高碘酸、磷钼酸、磷钨酸、铁氰化钾、亚铁氰化钾、钌红、硝酸银、“强”蛋白银(Ag分析：8.0-8.5％)、四苯基卟啉银(S-TPPS)、氯金酸盐钠、钨酸钠、硝酸铊、氨基硫脲(TSC)、乙酸铀酰、硝酸铀酰和硫酸氧钒。
如本文所用，术语“能量转移剂”指的是贡献能量或从另一分子接受能量的分子。仅举例来说，荧光共振能量转移(FRET)为荧光供体分子的激发态能量借以非辐射性转移到未激发受体分子，未激发受体分子接着以较长波长荧光发射所贡献能量的偶极子-偶极子偶合过程。
如本文所用，术语“并有重原子的部分”指的是并有一般比碳重的原子的离子的基团。在一些实施例中，所述离子或原子包括(但不限于)硅、钨、金、铅和铀。
如本文所用，术语“光亲和力标记”指的是具有暴露于光时与标记具有亲和力的分子形成键联的基团的标记。
如本文所用，术语“光笼形部分”指的是在特定波长下照射时共价或非共价结合其它离子或分子的基团。
如本文所用，术语“光异构化部分”指的是用光照射时从一种异构型式变为另一种异构型式的基团。
如本文所用，术语“放射性部分”指的是核自发发出核辐射，例如α、β或γ粒子的基团；其中α粒子为氦核，β粒子为电子且γ粒子为高能光子。
如本文所用，术语“自旋标记”指的是含有展现未成对电子自旋(即稳定顺磁性基团)的原子或原子基团的分子，所述未成对电子自旋在一些实施例中由电子自旋共振光谱检测且在其它实施例中连接于另一分子。所述自旋标记分子包括(但不限于)硝酰基和氮氧化物，且在一些实施例中为单自旋标记或双自旋标记。
如本文所用，术语“量子点”指的是在一些实施例中在近红外中检测且具有极高量子产率(即在适度照明时极亮)的胶状半导体纳米晶体。
一般技术人员将了解可检测部分经适合取代基连接于所提供化合物。如本文所用，术语“适合取代基”指的是能够共价连接于可检测部分的部分。所述部分为一般技术人员所熟知且包括含有例如(略举数例)羧酸酯部分、氨基部分、硫醇部分或羟基部分的基团。应了解，所述部分直接或经系栓部分(例如二价饱和或不饱和烃链)连接于所提供化合物。
在一些实施例中，可检测部分经点击化学连接于所提供化合物。在一些实施例中，所述部分经叠氮化物与炔烃任选地在铜催化剂存在下1,3-环加成连接。使用点击化学的方法为本领域中已知且包括罗斯托柴夫(Rostovtsev)等人,德国应用化学(Angew.Chem.Int.Ed.)2002,41,2596-99和孙(Sun)等人,生物结合物化学(BioconjugateChem.),2006,17,52-57所述者。在一些实施例中，提供点击准备抑制剂部分且与点击准备-T-Rt部分反应。如本文所用，“点击准备”指的是部分含有用于点击化学反应的叠氮化物或炔烃。在一些实施例中，点击准备抑制剂部分包含叠氮化物。在某些实施例中，点击准备-T-Rt部分包含用于无铜点击化学反应的应变环辛炔(例如使用巴斯金(Baskin)等人,美国国家科学协会公报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)2007,104,16793-16797中所述的方法)。
在一些实施例中，可检测部分Rt选自标记、染料、光交联反应剂、细胞毒性化合物、药物、亲和力标记、光亲和力标记、反应性化合物、抗体或抗体片段、生物材料、纳米粒子、自旋标记、荧光团、含有金属的部分、放射性部分、量子点、新颖官能团、与其它分子共价或非共价相互作用的基团、光笼形部分、光化辐射激发部分、配位体、光异构化部分、生物素、生物素类似物(例如生物素亚砜)、并入重原子的部分、可化学裂解基团、可光裂解基团、氧化还原活性剂、同位素标记部分、生物物理探针、磷光基团、化学发光基团、电子致密基团、磁性基团、嵌入基团、发色团、能量转移剂、生物活性剂、可检测标记或其组合。
在一些实施例中，Rt为生物素或其类似物。在某些实施例中，Rt为生物素。在某些其它实施例中，Rt为生物素砜。
在另一实施例中，Rt为荧光团。在另一实施例中，荧光团选自AlexaFluor染料(AlexaFluor350、AlexaFluor488、AlexaFluor532、AlexaFluor546、AlexaFluor568、AlexaFluor594、AlexaFluor633、AlexaFluor660和AlexaFluor680)、AMCA、AMCA-S、BODIPY染料(BODIPYFL、BODIPYR6G、BODIPYTMR、BODIPYTR、BODIPY493/503、BODIPY530/550、BODIPY558/568、BODIPY564/570、BODIPY576/589、BODIPY581/591、BODIPY630/650、BODIPY650/665)、羧基若丹明6G、羧基-X-若丹明(ROX)、CascadeBlue、CascadeYellow、Coumarin343、Cyanine染料(Cy3、Cy5、Cy3.5、Cy5.5)、Dansyl、Dapoxyl、二烷基氨基香豆素、4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基-荧光素、DM-NERF、曙红、红萤素、荧光素、FAM、羟基香豆素、IRDyes(IRD40、IRD700、IRD800)、JOE、丽丝氨若丹明B、海蓝、甲氧基香豆素、萘并荧光素、Oregon绿488、Oregon绿500、Oregon绿514、海水蓝、PyMPO、芘、若丹明B、若丹明6G、若丹明绿、若丹明红、Rhodol绿、2',4',5',7'-四-溴砜-荧光素、四甲基-若丹明(TMR)、羧基四甲基若丹明(TAMRA)、Texas红、Texas红-X、5(6)-羧基荧光素、2,7-二氯荧光素、N,N-双(2,4,6-三甲基苯基)-3,4:9,10-苝双(二甲酰胺、HPTS、乙基曙红、DY-490XLMegaStokes、DY-485XLMegaStokes、Adirondack绿520、ATTO465、ATTO488、ATTO495、YOYO-1,5-FAM、BCECF、二氯荧光素、若丹明110、若丹明123、YO-PRO-1、SYTOX绿、钠绿、SYBR绿I、AlexaFluor500、FITC、Fluo-3、Fluo-4、氟-祖母绿、YoYo-1ssDNA、YoYo-1dsDNA、YoYo-1、SYTORNASelect、福沙绿-FP、深绿、EvaGreen、Surf绿EX、光谱绿、NeuroTrace500525、NBD-X、MitoTracker绿FM、LysoTracker绿DND-26、CBQCA、PA-GFP(活化后)、WEGFP(活化后)、FlASH-CCXXCC、单体阿兹米绿、阿兹米绿、绿荧光素蛋白(GFP)、EGFP(CampbellTsien2003)、EGFP(Patterson2001)、Kaede绿、7-苯甲基氨基-4-硝基苯-2-氧杂-1,3-二唑、Bexl、小红莓、卢米奥绿或SuperGloGFP。
如上文一般描述，所提供探针化合物包含系栓部分-T-，其将不可逆抑制剂连接于可检测部分。如本文所用，术语“系栓”或“系栓部分”指的是任何二价化学间隔基团。示范性系栓为共价键、聚合物、水溶性聚合物、任选地经取代的烷基、任选地经取代的杂烷基、任选地经取代的杂环烷基、任选地经取代的环烷基、任选地经取代的杂环基、任选地经取代的杂环烷基烷基、任选地经取代的杂环烷基烯基、任选地经取代的芳基、任选地经取代的杂芳基、任选地经取代的杂环烷基烯基烷基、任选地经取代的酰胺部分、醚部分、酮部分、酯部分、任选地经取代的氨基甲酸酯部分、任选地经取代的腙部分、任选地经取代的肼部分、任选地经取代的肟部分、二硫化物部分、任选地经取代的亚胺部分、任选地经取代的磺酰胺部分、砜部分、亚砜部分、硫醚部分或其任何组合。
在一些实施例中，系栓部分-T1-选自共价键、聚合物、水溶性聚合物、任选地经取代的烷基、任选地经取代的杂烷基、任选地经取代的杂环烷基、任选地经取代的环烷基、任选地经取代的杂环烷基烷基、任选地经取代的杂环烷基烯基、任选地经取代的芳基、任选地经取代的杂芳基和任选地经取代的杂环烷基烯基烷基。在一些实施例中，系栓部分为任选地经取代的杂环。在一些实施例中，杂环选自氮丙啶、环氧乙烷、环氧硫化物、氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、吡咯啉、四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、吡唑、吡咯、咪唑、三唑、四唑、噁唑、异噁唑、环氧乙烯、噻唑、异噻唑、二硫杂环戊烷、呋喃、噻吩、哌啶、四氢吡喃、硫化环戊烷、吡啶、吡喃、噻喃酮、哒嗪、嘧啶、吡嗪、哌嗪、噁嗪、噻嗪、二噻烷和二噁烷。在一些实施例中，杂环为哌嗪。在其它实施例中，系栓部分任选地经卤素、-CN、-OH、-NO2、烷基、S(O)和S(O)2取代。在其它实施例中，水溶性聚合物为PEG基团。
在其它实施例中，系栓部分在可检测部分与蛋白激酶抑制剂部分之间提供充分空间分离。在其它实施例中，系栓部分稳定。在另一实施例中，系栓部分不会实质影响可检测部分的反应。在其它实施例中，系栓部分向探针化合物提供化学稳定性。在其它实施例中，系栓部分向探针化合物提供足够可溶性。
在一些实施例中，系栓部分-T1-(例如水溶性聚合物)的一端偶合于所提供的不可逆抑制剂且另一端偶合于可检测部分Rt。在其它实施例中，水溶性聚合物经所提供不可逆抑制剂的官能团或取代基偶合。在其它实施例中，水溶性聚合物经报告体部分的官能团或取代基偶合。
在一些实施例中，用于系栓部分-T1-中的亲水性聚合物的实例包括(但不限于)：聚烷基醚和其烷氧基封端的类似物(例如聚氧乙二醇、聚氧乙二醇/丙二醇和其甲氧基或乙氧基封端的类似物、聚氧乙二醇，聚氧乙二醇也称为聚乙二醇或PEG)；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙烯烷基醚；聚噁唑啉、聚烷基噁唑啉和聚羟基烷基噁唑啉；聚丙烯酰胺、聚烷基丙烯酰胺和聚羟基烷基丙烯酰胺(例如聚羟基丙基甲基丙烯酰胺和其衍生物)；聚丙烯酸羟基烷基酯；聚唾液酸等、亲水性肽序列；多醣和其衍生物，包括葡聚糖和葡聚糖衍生物，例如羧甲基葡聚糖、硫酸葡聚糖、氨基葡聚糖；纤维素和其衍生物，例如羧甲基纤维素、羟基烷基纤维素；几丁质和其衍生物，例如聚葡萄胺糖、丁二酰基聚葡萄胺糖、羧甲基几丁质、羧甲基聚葡萄胺糖；玻尿酸和其衍生物；淀粉；海藻酸盐；硫酸软骨素；白蛋白；普鲁兰和羧甲基普鲁兰；聚氨基酸和其衍生物，例如聚麸氨酸、聚赖氨酸、聚天冬氨酸、聚天冬酰胺；顺丁烯二酸酐共聚物，例如：苯乙烯顺丁烯二酸酐共聚物、二乙烯基乙基醚顺丁烯二酸酐共聚物；聚乙烯醇；其共聚物、其三元共聚物，其混合物，和前述的衍生物。在其它实施例中，水溶性聚合物为任何结构型式。示范性形式为线性、分叉或分支链。在其它实施例中，多官能聚合物衍生物包括(但不限于)具有两个末端的线性聚合物，各末端键结于相同或不同的官能团。
在一些实施例中，水聚合物包含聚(乙二醇)部分。在其它实施例中，聚合物的分子量具有广泛范围。示范性范围为约100Da到约100,000Da或100,000Da以上。在其它实施例中，聚合物的分子量为约100Da到约100,000Da、约100,000Da、约95,000Da、约90,000Da、约85,000Da、约80,000Da、约75,000Da、约70,000Da、约65,000Da、约60,000Da、约55,000Da、约50,000Da、约45,000Da、约40,000Da、约35,000Da、30,000Da、约25,000Da、约20,000Da、约15,000Da、约10,000Da、约9,000Da、约8,000Da、约7,000Da、约6,000Da、约5,000Da、约4,000Da、约3,000Da、约2,000Da、约1,000Da、约900Da、约800Da、约700Da、约600Da、约500Da、约400Da、约300Da、约200Da和约100Da。在一些实施例中，聚合物的分子量为约100Da到50,000Da。在一些实施例中，聚合物的分子量为约100Da到40,000Da。在一些实施例中，聚合物的分子量为约1,000Da到40,000Da。在一些实施例中，聚合物的分子量为约5,000Da到40,000Da。在一些实施例中，聚合物的分子量为约10,000Da到40,000Da。在一些实施例中，聚(乙二醇)分子为分支链聚合物。在其它实施例中，分支链PEG的分子量为约1,000Da到约100,000Da。示范性范围为约100,000Da、约95,000Da、约90,000Da、约85,000Da、约80,000Da、约75,000Da、约70,000Da、约65,000Da、约60,000Da、约55,000Da、约50,000Da、约45,000Da、约40,000Da、约35,000Da、约30,000Da、约25,000Da、约20,000Da、约15,000Da、约10,000Da、约9,000Da、约8,000Da、约7,000Da、约6,000Da、约5,000Da、约4,000Da、约3,000Da、约2,000Da和约1,000Da。在一些实施例中，分支链PEG的分子量为约1,000Da到约50,000Da。在一些实施例中，分支链PEG的分子量为约1,000Da到约40,000Da。在一些实施例中，分支链PEG的分子量为约5,000Da到约40,000Da。在一些实施例中，分支链PEG的分子量为约5,000Da到约20,000Da。实质上水溶性主链的上述列表绝非详尽的且仅为说明性的，且在一些实施例中，具有上文所述质量的聚合材料适用于本文所述的方法和组合物中。
一般技术人员应了解，当-T1-Rt经R2基团连接于本文化学式的化合物时，则所得系栓部分包含R2基团。
在某些实施例中，系栓部分-T1-具有以下结构中的一者：
在一些实施例中，系栓部分-T1-具有以下结构：
在一些实施例中，系栓部分-T1-具有以下结构：
在其它实施例中，系栓部分-T1-具有以下结构：
在某些其它实施例中，系栓部分-T1-具有以下结构：
在其它实施例中，系栓部分-T1-具有以下结构：
在一些实施例中，系栓部分-T1-具有以下结构：
在一些实施例中，-T1-Rt具有以下结构：
在一些实施例中，-T1-Rt具有以下结构：
在其它实施例中，-T1-Rt具有以下结构：
在某些实施例中，-T1-Rt具有以下结构：
在一些实施例中，式I-t的探针化合物衍生自本文所述的任何化合物。
在某些实施例中，探针化合物具有以下结构中的一者：
应了解，许多-T1-Rt试剂市场有售。举例来说，众多生物素标记试剂获自例如赛默飞世尔(ThermoScientific)，具有不同系栓长度。所述试剂包括NHS-PEG4-生物素和NHS-PEG12-生物素。
在一些实施例中，与上文示范者类似的探针结构使用如本文所述的点击准备抑制剂部分和点击准备-T1-Rt部分制备。
在一些实施例中，所提供探针化合物共价修饰蛋白激酶的磷酸化构型。在一个方面中，蛋白激酶的磷酸化构型为蛋白激酶的活性或非活性形式。在某些实施例中，蛋白激酶的磷酸化构型为所述激酶的活性形式。在某些实施例中，探针化合物可渗透细胞。
在一些实施例中，本发明提供一种判断患者体内所提供不可逆抑制剂(即本文呈现的任何化学式的化合物)对蛋白激酶的占有率的方法，其包含提供从投予至少一种剂量的所述不可逆抑制剂的化合物的患者获得的一或多种组织、细胞类型或其溶解产物，使所述组织、细胞类型或其溶解产物与探针化合物(即式I-t的化合物)接触以共价修饰所述溶解产物中存在的至少一种蛋白激酶，且测量由探针化合物共价修饰的所述蛋白激酶的量来判断相较于所述探针化合物对所述蛋白激酶的占有率，所述化合物对所述蛋白激酶的占有率。在某些实施例中，所述方法进一步包含调整本文呈现的化学式的化合物的剂量以提高蛋白激酶的占有率的步骤。在某些其它实施例中，所述方法进一步包含调整本文呈现的化学式的化合物的剂量以降低蛋白激酶的占有率的步骤。
如本文所用，术语“占有率”或“占有”指的是蛋白激酶被所提供共价抑制剂化合物修饰的程度。一般技术人员应了解，需要投予可能达到蛋白激酶的所要有效占有率的最低剂量。
在一些实施例中，待修饰的蛋白激酶为FGFR4。
在一些实施例中，探针化合物包含正测定占有率的不可逆抑制剂。
在一些实施例中，本发明提供一种评定所提供不可逆抑制剂于哺乳动物体内的功效的方法，其包含向所述哺乳动物投予所提供的不可逆抑制剂，向从所述哺乳动物分离的组织或细胞或其溶解产物投予所提供的探针化合物，测量探针化合物的可检测部分的活性，且比较所述可检测部分的活性与标准物的活性。
在其它实施例中，本发明提供一种评定所提供不可逆抑制剂于哺乳动物中的药物动力学的方法，其包含向所述哺乳动物投予所提供的不可逆抑制剂，向从所述哺乳动物分离的一或多种细胞类型或其溶解产物投予本文呈现的探针化合物，和在投予抑制剂之后在不同时间点测量探针化合物的可检测部分的活性。
在其它实施例中，本发明提供一种体外标记蛋白激酶的方法，其包含使所述蛋白激酶与本文所述的探针化合物接触。在一个实施例中，接触步骤包含用本文呈现的探针化合物培育蛋白激酶。
在某些实施例中，本发明提供一种体外标记蛋白激酶的方法，其包含使表现蛋白激酶的一或多种细胞或组织或其溶解产物与本文所述的探针化合物接触。
在某些其它实施例中，本发明提供一种检测经标记蛋白激酶的方法，其包含通过电泳法分离蛋白质(所述蛋白质包含由本文所述的探针化合物标记的蛋白激酶)和通过荧光检测探针化合物。
在一些实施例中，本发明提供一种体外评定所提供不可逆抑制剂的药物动力学的方法，其包含用目标蛋白激酶培育所提供的不可逆抑制剂，向目标蛋白激酶添加本文呈现的探针化合物，且测定探针化合物修饰的目标的量。
在某些实施例中，探针化合物通过结合于抗生物素蛋白、抗生蛋白链菌素、亲和素或卡普他维汀(captavidin)检测。
在一些实施例中，探针通过西方墨点法(Westernblot)检测。在其它实施例中，探针通过ELISA检测。在某些实施例中，探针通过流动式细胞测量术检测。
在其它实施例中，本发明提供一种用不可逆抑制剂探测激酶组的方法，其包含用生物素标记探针化合物培育一或多种细胞类型或其溶解产物产生用生物素部分修饰的蛋白质，消化蛋白质，用抗生物素蛋白或其类似物捕捉，且执行多个二维LC-MS-MS识别通过探针化合物修饰的蛋白激酶和所述激酶的内收位点。
在某些实施例中，本发明提供一种测量细胞中蛋白质合成的方法，其包含用目标蛋白的不可逆抑制剂培育细胞，在特殊时间点形成细胞溶解产物，且用本发明探针化合物培育所述细胞溶解产物测量游离蛋白质很长一段时间的外观。
在其它实施例中，本发明提供一种测定使哺乳动物体内目标蛋白激酶占有率最大的给药时程的方法，其包含分析一或多种从哺乳动物分离且来自投予所提供具有本文呈现的化学式中任一者的不可逆抑制剂的哺乳动物的细胞类型或其溶解产物(源自例如脾细胞、周边B细胞、全血、淋巴结、肠组织或其它组织)，其中所述分析步骤包含使所述一或多种组织、细胞类型或其溶解产物与所提供探针化合物接触且测量通过探针化合物共价修饰的蛋白激酶的量。
范例
如下文实例中描绘，在某些示范性实施例中，根据以下一般程序制备化合物。应了解，尽管一般方法描绘本发明某些化合物的合成，但以下一般方法和一般技术人员已知的其它方法可应用于如本文所述的所有化合物和这些化合物中每一者的子类和种类。
下文实例中所用的化合物编号对应于上文所述的化合物编号。
在下文说明性实例中，除非另外说明，否则在室温或环境温度下，在18到25℃范围内进行反应。经无水硫酸镁或硫酸钠干燥有机溶液且使用旋转式汽化器在减压下蒸发溶剂。一般来说，反应过程继之以TLC或LCMS且反应时间为代表性的。产量仅针对说明给出且不必为勤劳过程开发可获得者。1HNMR数据为相对于四甲硅烷(TMS)或残余溶剂以百万分率(ppm)给出的主要诊断质子的δ值。在400MHz下测定1HNMR谱。根据体积:体积(v/v)给出溶剂比。质谱(MS)数据在LCMS系统上产生，其中HPLC组件一般包含安捷伦(Agilent)或岛津(Shimadzu)LCMS-2020仪器，且在SepaxBR-C18(4.6×50mm，3μm)柱或类似物上操作，其以酸性洗脱剂(例如使用0-95％水/具有0.1％甲酸或三氟乙酸的乙腈的梯度)洗脱。色谱在正、负和/或UV的电喷雾(ESI)中进行。全文提供LCMS值(m/z)且一般仅报告指示母核质量的离子。除非另外指出，否则引用的值为针对正离子模式的(M+H)+或(M+1)+。制备型HPLC在使用渐减极性混合物(例如水与含有1％三氟乙酸的乙腈的渐减极性混合物)作为洗脱剂的C18逆相二氧化硅上进行。对映异构增浓中间物和最终化合物通过‘abs’命名且外消旋类似物通过‘rac’命名。对映异构增浓产物和中间物通过使用奇拉帕克(CHIRALPAK)AD-H(6×150mm，5μm)柱或类似物的手性HPLC表征且一般具有≥95:5的对映异构比。除非另外规定，否则起始物质市场有售或根据已知方法合成。
TFA；三氟乙酸
THF；四氢呋喃；
DMF；N,N-二甲基甲酰胺
EtOAc；乙酸乙酯
DCM；二氯甲烷
DMSO；二甲亚砜
DIPEA；N,N-二异丙基乙胺
TBAF；氟化四-正丁基铵
DMAP；4-二甲基氨基吡啶
NMO；N-甲基吗啉N-氧化物
TBDPSCl：叔丁基(氯)二苯基硅烷
NMP；N-甲基-2-吡咯烷酮
Ms；甲磺酰基，甲烷磺酰基
SFC；超临界流体色谱法
er；对映异构比
h：小时
min：分钟
aq：水溶液
sat：饱和
PBS；磷酸盐缓冲盐水
DTT；二硫苏糖醇
ATP；三磷酸腺苷
实例1：合成共用中间物6
步骤1：中间物1
向装备有机械搅拌器的1L三颈烧瓶装入尿嘧啶(45.0g，401mmol)和三聚甲醛(14.5g，483mmol)。以一份添加氢氧化钾溶液(0.5M，600mL，0.30mol)。在55℃下搅拌所得混合物隔夜。在冰水浴中冷却混合物且用12NHCl将pH值调整到6。通过过滤收集所得沉淀物且干燥获得呈白色固体状的标题化合物(46.0g)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ4.12(d,2H),4.78(t,1H),7.24(s,1H),10.64(s,1H),10.98(s,1H)。
步骤2：中间物2
向装备有机械搅拌器的500mL三颈烧瓶装入中间物1(25.0g，176mmol)、甲苯(30mL)和氧氯化磷(125mL)。经10分钟逐滴添加DIPEA(130mL)。在回流下加热所得混合物隔夜。浓缩溶液且将所得残余物缓慢倒入冷(0℃)1.5MHCl上且用EtOAc萃取。有机相用水、NaHCO3饱和水溶液、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥且浓缩获得标题化合物(32.0g)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ4.64(s,2H),8.66(s,1H)。
步骤3：中间物3
向装备有机械搅拌器的500mL三颈烧瓶装入中间物2(32.0g，111mmol)、丙酮(150mL)、NaI(26.5g，177mmol)。在环境温度下搅拌混合物15分钟，接着在回流下加热30分钟。将混合物冷却到环境温度且过滤去除所得固体。浓缩滤液获得46.0g标题化合物，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ4.39(s,2H),8.60(s,1H)。
步骤4：中间物4
在环境温度下搅拌中间物3(15.0g，47.9mmol)、3,5-二甲氧基苯胺(8.80g，57.4mmol)和K2CO3(14.4g，104mmol)于丙酮(150mL)中的混合物隔夜。在冰水浴中冷却溶液且过滤去除所得固体。浓缩滤液且用EtOH(100mL)湿磨残余物，接着在0℃下搅拌30分钟。通过过滤收集沉淀物且干燥获得9.40g标题化合物。MSm/z:314.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.73(s,6H),4.22(brs,1H),4.40(s,2H),5.74(d,2H),5.94(t,1H),8.53(s,1H)。
步骤5：中间物5
在密封试管中，在60℃下搅拌中间物4(9.40g，29.9mmol)、DIPEA(9.60g，74.3mmol)和MeNH2HCl(2.40g，35.8mmol)于二噁烷(150mL)中的溶液隔夜。使溶液冷却到环境温度。添加DIPEA(9.60g，74.3mmol)，随后缓慢添加含三光气(9.30g，31.3mmol)的二噁烷(60mL)。在环境温度下搅拌溶液1小时，然后将其加热到70℃持续3小时。浓缩溶液，添加水，且在环境温度下搅拌混合物30分钟。通过过滤收集所得固体，接着溶解于MeOH/H2O(135mL/15mL)中，且在回流下加热10分钟，然后在冰水浴中冷却溶液且通过过滤收集所得固体，用冷MeOH/H2O(v/v：18/2)洗涤且干燥获得标题化合物(5.80g)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。MSm/z:335.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.46(s,3H),3.79(s,6H),4.74(s,2H),6.41(t,1H),6.46(d,2H),8.12(s,1H)。
步骤6：共用中间物6
将中间物5(5.50g，16.4mmol)于DCM(150mL)中的溶液冷却到0℃且逐滴添加含SO2Cl2(4.70g，34.8mmol)的DCM(20mL)。在0℃下搅拌所得混合物1小时，然后将其倒入NaHCO3饱和水溶液中且分离有机相，用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩获得6.00g标题化合物。MSm/z:403.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.47(s,3H),3.95(s,6H),4.65(s,2H),6.62(s,1H),8.12(s,1H)。
实例2：合成共用中间物8
步骤1：中间物2
根据中间物1的文献程序(EP2112150A1，2009)制备中间物2。
步骤2：中间物3
向中间物2(2.10g，11.0mmol)于140mL1,4-二噁烷中的悬浮液中添加3-硝基苯甲基胺盐酸盐(2.49g，13.2mmol)和三乙胺(5.22mL，37.5mmol)。在95℃下搅拌混合物24小时。添加额外3-硝基苯甲基胺盐酸盐(208mg，1.10mmol)和三乙胺(3.08mL，22.1mmol)且在100℃下搅拌反应物17小时。浓缩反应混合物且对粗产物进行硅胶快速色谱法(用含50-100％EtOAc的庚烷的梯度洗脱)。接着用EtOAc湿磨所得残余物获得2.05g标题化合物。MSm/z:307.0(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ:8.18(1H,s),7.85(1H,s),7.74(1H,d),7.59(2H,m),5.11(1H,t),4.66(2H,d),4.35(2H,d),2.28(3H,s)。
步骤3：中间物4
向中间物3(2.10g，6.69mmol)于140mLDCM中的溶液中添加氧化锰(8.02g，53.5mmol)且在环境温度下搅拌混合物17小时。反应混合物经硅藻土过滤，用DCM洗涤且在减压下浓缩滤液获得1.85g标题化合物，其未经纯化即直接使用。MSm/z:305.1(M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ:9.75(1H,s),9.08(1H,brs),8.38(1H,s),8.20(1H,s),8.15(1H,d),7.66(1H,d),7.52(1H,t),4.87(2H,d),2.48(3H,s)。
步骤4：中间物5
在氩气下，向中间物4(500mg，1.64mmol)于9mLDCM中的溶液中添加3,5-二甲氧基苯胺(229mg，1.49mmol)和乙酸(94.1μL，1.64mmol)。在环境温度下搅拌混合物15分钟，随后分2份添加三乙酰氧基硼氢化钠(2×238mg，2.24mmol)，之间间隔15分钟。在环境温度下搅拌反应物17小时，添加额外三乙酰氧基硼氢化钠(476mg，2.24mmol)且再搅拌混合物6小时。反应物用10mL1MNaOH淬灭，这导致气体剧烈逸出，然后搅拌混合物15分钟。水层以DCM(×3)萃取，且经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。对粗产物进行硅胶快速色谱法(用含50％EtOAc的庚烷洗脱)，获得591mg标题化合物。MSm/z:442.1(M+H)+。
步骤5：中间物6
在氩气下，向中间物5(591mg，1.34mmol)于6mL2-MeTHF中的溶液中添加三光气(437mg，1.47mmol)，随后缓慢添加三乙胺(578μL，4.15mmol)。在环境温度下搅拌混合物1小时，接着在70℃下搅拌1.5小时。反应物用NaHCO3饱和水溶液/H2O的1:1混合物(12mL)淬灭，且通过过滤去除所得固体且用EtOAc洗涤。分离滤液层且用EtOAc，随后用DCM萃取水层。用盐水洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。对粗产物进行干式-硅胶快速色谱法(用含50-70％EtOAc的庚烷的梯度洗脱)。所得残余物接着用Et2O湿磨获得398mg标题化合物。MSm/z:468.0(ES+,M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ:8.34(1H,s),8.11(2H,m),7.80(1H,d),7.47(1H,t),6.47(2H,d),6.40(1H,t),5.38(2H,s),4.73(2H,s),3.77(6H,s),2.52(3H,s)。
步骤6：中间物7
向中间物6(396mg，0.847mmol)于7mLMeCN和15mLDCM中的经冷却(0℃)溶液中添加硫酰氯(137μL，1.69mmol)。在0℃下搅拌反应物15分钟。反应物用NaHCO3饱和水溶液淬灭且水相用DCM(×2)萃取。经合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩获得452mg标题产物，其未经纯化即直接使用。MSm/z:536.0(H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ:8.32(1H,s),8.09(2H,m),7.78(1H,d),7.46(1H,t),6.61(1H,s),5.38(2H,s),4.65(2H,s),3.94(6H,s),2.49(3H,s)。
步骤7：中间物8
向中间物7(451mg，0.841mmol)于10mLDCM中的溶液中添加mCPBA(228mg，0.925mmol)。在环境温度下搅拌反应物1小时，接着用6mLNaHCO3饱和水溶液和4mL2M硫代硫酸钠淬灭。搅拌混合物15分钟，接着用H2O稀释且用DCM(×3)萃取水相。经合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩获得468mg标题产物，其未经纯化即直接使用。MSm/z:552.0(M+H+)。
实例3：合成I-1
步骤1：中间物2
向来自实例2的中间物8(150mg，0.27mmol)于1,4-二噁烷(8mL)中的溶液中添加苯-1,2-二胺(88.1mg，0.82mmol)和对甲苯磺酸(23.4mg，0.14mmol)。在100℃下，在氮气下，加热混合物隔夜。使混合物冷却到环境温度，添加水且过滤所得悬浮液获得145mg标题化合物。MSm/z:596.3(M+H)+。
步骤2：中间物3
向中间物2(145mg，0.24mmol)于THF(15mL)中的溶液中添加三乙胺(98.0mg，0.97mmol)和(Boc)2O(106mg，0.48mmol)。在回流下加热反应混合物隔夜。使混合物冷却到环境温度，添加水，且用EtOAc(30mL×3)萃取水层。干燥(Na2SO4)经合并的有机层，过滤且浓缩。对粗产物进行硅胶快速色谱法(65％EtOAc/己烷)获得121mg标题化合物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.44(s,9H),3.97(s,6H),4.62(s,2H),5.16(s,2H),6.96-7.11(m,3H),7.39(d,1H),7.47-7.57(m,3H),8.04-8.07(m,2H),8.16(s,1H),8.48(s,1H),8.58(s,1H)。
步骤3：中间物4
向中间物3(112mg，0.16mmol)于乙醇(8mL)和水(4mL)中的溶液中添加铁粉(54.0mg，0.96mmol)和NH4Cl(52mg，0.96mmol)。在回流下加热混合物1.5小时。使反应混合物冷却到环境温度，过滤，且浓缩滤液。向所得残余物中添加水且用EtOAc(30mL×3)萃取水层。经合并的有机层用饱和NaHCO3洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩获得104.4mg标题化合物，其未经纯化即直接用于下一步骤。MSm/z:666.4[M+H]+
步骤4：中间物5
使中间物4(98.6mg，0.15mmol)、丙酸(16.4mg，0.22mmol)和HATU(113mg，0.30mmol)于DMF(6mL)中的混合物冷却到0℃。添加DIPEA(57.3mg，0.44mmol)且在环境温度下搅拌反应混合物隔夜。添加水且用EtOAc(60mL×3)萃取所得混合物。干燥(Na2SO4)经合并的有机层，过滤且浓缩。对粗产物进行硅胶快速色谱法(3％MeOH/DCM)获得74mg标题化合物。MSm/z:722.4[M+H]+
步骤5：中间物6
向中间物5(74.0mg，0.10mmol)于DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(2mL)，且在环境温度下搅拌溶液30分钟。去除溶剂且向残余物中添加水，用EtOAc(30mL×3)萃取残余物。经合并的有机层用饱和NaHCO3洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩获得79mg标题化合物，其未经纯化即使用。MSm/z:622.4[M+H]+
步骤6：I-1
向中间物6(79.0mg，0.13mmol)和DIPEA(33.0mg，0.25mmol)于THF(3mL)中的经冷却(0℃)溶液中添加丙烯酰氯(13.8mg，0.15mmol)。在0℃下搅拌反应物10分钟。用NaHCO3饱和水溶液淬灭反应物，且用EtOAc(30mL×3)萃取。用NaHCO3饱和水溶液洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。对粗产物进行硅胶快速色谱法(5％MeOH/DCM)获得34.3mg标题化合物。MSm/z:676.4[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.08(t,3H),2.29(q,2H),3.96(s,6H),4.60(s,2H),5.06(s,2H),5.68-5.83(m,1H),6.26(dd,1H),6.40-6.56(m,1H),6.83(d,1H),6.95-7.09(m,3H),7.16(t,1H),7.37-7.48(m,1H),7.50-7.53(m,3H),8.14(s,1H),8.53(s,1H),9.70(s,1H),9.74(s,1H)。
实例4：合成I-2
步骤1：中间物2
在氮气下，在回流下加热中间物1(如实例2中所述，在步骤2中使用甲胺代替3-硝基苯甲基胺制备(106mg，0.25mmol))、苯-1,2-二胺(80mg，0.74mmol)和p-TsOH(21.2mg，0.12mmol)于1,4-二噁烷(8mL)中的混合物16小时。使反应混合物冷却到环境温度且分配于EtOAc与水之间。用NaHCO3饱和水溶液、盐水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)且真空浓缩。用硅胶柱色谱法(5％MeOH/DCM)纯化粗产物获得标题化合物(69.3mg)。MSm/z:475.3(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.23(s,3H),3.97(s,6H),4.50(s,2H),4.81(s,2H),6.57(t,1H),6.70-6.79(m,1H),6.83-6.94(m,1H),6.99(s,1H),7.35(d,1H),8.04(s,1H),8.45(s,1H)。
步骤2：I-2
向中间物2(69.1mg，0.15mmol)和DIPEA(37.4mg，0.29mmol)于THF(10mL)中的经冷却(0℃)溶液中添加丙烯酰氯(15.8mg，0.17mmol)。在0℃下搅拌反应物10分钟。用NaHCO3饱和水溶液淬灭反应物，且用EtOAc(40mL×3)萃取。用NaHCO3饱和水溶液洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(3％MeOH/DCM)纯化粗产物获得I-2(23.3mg)。MSm/z:529.3(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.22(s,3H),3.96(s,6H),4.52(s,2H),5.77(dd,2.0Hz,1H),6.27(dd,2.0Hz,1H),6.47-6.54(m,1H),6.99(s,1H),7.108-7.13(m,1H),7.17-7.22(m,1H),7.56(d,1H),7.80(d,1H),8.09(s,1H),8.59(s,1H),9.76(s,1H)。
实例5：合成I-3
步骤1：中间物2
向中间物1的混合物(如实例1中所述，在步骤4中使用苯甲基胺代替甲胺制备(54.0mg，0.11mmol))中添加含苯-1,2-二胺(24.0mg，0.22mmol)的1,4-二噁烷(2mL)和一滴TFA。在密封试管中，在回流下加热反应混合物16小时，然后将其冷却到环境温度且分配于EtOAc与水之间。用NaHCO3饱和水溶液、盐水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)且真空浓缩。用硅胶柱色谱法(用100％EtOAc洗脱)纯化粗产物获得标题化合物(34.5mg)。MSm/z:551.0(M+H)+。
步骤2：I-3
向中间物2(14.0mg，0.025mmol)于THF(1mL)中的经冷却(0℃)溶液中添加丙烯酰氯(1.9μL，0.023mmol)。在0℃下搅拌反应物10分钟，然后通过逆相HPLC(用含0-90％MeCN的水的梯度洗脱)纯化。与NaHCO3饱和水溶液一起搅拌经合并的洗脱份，用DCM萃取，且浓缩有机层获得10.6mg标题化合物。MSm/z:605.2(M+H)+。
实例6：合成I-4
如实例3中所述，在步骤1中使用3-氨基苯甲基氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺，制备标题化合物。MSm/z:690.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:8.07(1H,s),7.63(1H,s),7.45(1H,s),7.32(2H,m),7.23(2H,m),7.00(2H,m),6.90(1H,s),6.26(2H,m),5.66(1H,m),5.28(2H,s),4.68(2H,s),4.33(2H,s),3.96(6H,s),2.34(2H,q),1.89(3H,t)。
实例7：合成I-5
步骤1：中间物2
向来自实例1的中间物5(30.1mg，0.09mmol)和苯-1,2-二胺(19.5mg，0.18mmol)于1,4-二噁烷(1mL)中的混合物中添加一滴TFA。在密封试管中，在回流下加热反应混合物16小时，然后将其冷却到环境温度且分配于EtOAc与水之间。用NaHCO3饱和水溶液、盐水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)且真空浓缩。经硅胶柱色谱法(用100％EtOAc洗脱)纯化粗产物获得标题化合物(16.7mg)。MSm/z:551.0(M+H)+。
步骤2：I-5
向中间物2(14.0mg，0.034mmol)于THF(1mL)中的经冷却(0℃)溶液中添加丙烯酰氯(2.8μL，0.034mmol)。在0℃下搅拌反应物10分钟，然后通过逆相HPLC(用含0-90％MeCN的水(具有0.1％TFA)的梯度洗脱)纯化。浓缩经合并的洗脱份，与NaHCO3饱和水溶液一起搅拌，用DCM萃取，且浓缩有机层获得14.6mg标题化合物。MSm/z:407.2(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.23(s,3H),3.75(s,6H),4.72(s,2H),5.79(dd,1H),6.28(dd,1H),6.56-6.45(m,2H),6.60(s,2H),7.25-7.27(m,2H),7.59(d,1H),7.72(d,1H),8.09(s,1H),9.41(brs,1H),9.88(s,1H)。
实例8：合成I-6
如实例5中所述，在步骤1中使用(2-氨基-4-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺制备化合物I-6。MSm/z:673.1(M+H)+
实例9：合成I-7，(外消旋)
步骤1：中间物2
向来自实例2的中间物8(150mg，0.27mmol)于二噁烷(15mL)中的溶液中添加反-环己烷-1,2-二胺(62mg，0.54mmol)和催化剂对甲苯磺酸。在回流下加热所得混合物16小时。将反应混合物分配于EtOAc与NaHCO3饱和水溶液之间。分离有机层，干燥(Na2SO4)且蒸发到干燥。通过制备型TLC(含6.6％甲醇的二氯甲烷)纯化粗产物获得标题化合物(150mg)。MSm/z:602.3(M+H)+。
步骤2：中间物3
向中间物2(150mg，0.25mmol)于DCM(15mL)中的溶液中添加三乙胺(50mg，0.49mmol)和二碳酸二叔丁酯(65mg，0.29mmol)。在环境温度下搅拌所得混合物2小时。将反应混合物分配于EtOAc与水之间。分离有机相，用1NHCl、NaHCO3饱和水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥且蒸发到干燥获得标题化合物(130mg)。MSm/z:702.3(M+H)+。
步骤3：中间物4
向中间物3(130mg，0.180mmol)于乙醇(15mL)和NH4Cl饱和水溶液(2mL)中的悬浮液中添加Fe粉(83.0mg，1.48mmol)且在回流下加热所得混合物2小时，然后用DCM(60mL)稀释，分离有机相，经无水硫酸钠干燥，且蒸发到干燥获得标题化合物(120mg)。
步骤4：中间物5
将中间物4(110mg，0.16mmol)、丙酸(18.0mg，0.24mmol)和HATU(124mg，0.33mmol)溶解于DMF(10mL)中。在N2下，将反应混合物冷却到0℃，且缓慢添加DIPEA(63mg，0.49mmol)，且在环境温度下搅拌混合物16小时。将反应混合物分配于EtOAc与水之间。分离有机相，用水洗涤，经无水硫酸钠干燥且蒸发到干燥。通过硅胶柱色谱法(含4％MeOH的DCM)纯化残余物获得标题产物(80mg)。MSm/z:728.4(M+H)+
步骤5：I-7
将中间物5(80.0mg，0.11mmol)溶解于DCM(2mL)中，随后添加TFA(5mL)。在环境温度下搅拌所得混合物1小时，然后浓缩。将残余物溶解于DCM中，且添加DIPEA直到pH＝7。将溶液冷却到0℃，添加丙烯酰氯(15.0mg，0.17mmol)，且在0℃下搅拌混合物10分钟。通过添加NaHCO3饱和水溶液淬灭反应物，用EtOAc萃取，且经无水Na2SO4干燥有机层且浓缩。通过制备型TLC(含4％MeOH的DCM)纯化残余物获得标题化合物(20mg，两个步骤26％)。MSm/z:682.4(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ:1.02-1.11(t,3H),1.16-1.30(m,3H),1.49-1.70(m,3H),1.76-1.94(m,2H),2.28(q,2H),3.66-3.75(m,1H),3.96(s,6H),4.50(s,2H),5.11(s,2H),5.46-5.54(m,1H),6.01(d,1H),6.03-6.15(m,1H),6.61-6.70(m,1H),6.99(s,1H),6.94(d,1H),7.18(s,1H),7.34-7.43(m,1H),7.57-7.65(m,1H),7.96(s,1H),9.76(s,1H)。
实例10：合成I-8，(外消旋)
步骤1：中间物2
向来自实例2的中间物8(150mg，0.27mmol)于1,4-二噁烷(8mL)中的溶液中添加顺-环己烷-1,2-二胺(93.0mg，0.82mmol)和p-TSA(23.4mg，0.14mmol)。在100℃下加热反应混合物16小时。添加水，且用EtOAc(50mL×3)萃取所得混合物。经Na2SO4干燥经合并的有机层，过滤且真空浓缩获得标题化合物(164mg)，其未经进一步纯化即可使用。MSm/z:602.3[M+1]+。
步骤2：中间物3
向中间物2(164mg，0.27mmol)于DCM(6mL)中的溶液中添加三乙胺(82.6mg，0.82mmol)和二碳酸二叔丁酯(89.0mg，0.41mmol)。在环境温度下搅拌反应混合物2小时。浓缩反应混合物且对粗产物进行硅胶柱色谱法(2％MeOH/DCM)获得标题化合物(159mg)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.34(s,9H),1.42-1.52(m,2H),1.56-1.77(m,2H),3.25(d,2H),3.48-3.64(m,1H),3.75-3.91(m,1H),3.97(s,6H),4.55(s,2H),5.25(s,2H),6.31-6.47(m,1H),6.54-6.64(m,1H),7.01(s,1H),7.62(t,1H),7.76(d,1H),8.02(s,1H),8.07-8.18(m,2H)。
步骤3：中间物4
向中间物3(153mg，0.22mmol)于EtOH(10mL)和水(5mL)中的溶液中添加Fe粉(72.0mg，1.31mmol)和NH4Cl(70.0mg，1.31mmol)。在回流下加热混合物2小时。过滤反应混合物，且真空浓缩滤液。向残余物中添加水且用EtOAc(50mL×3)萃取水溶液。用饱和NaHCO3洗涤经合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩获得标题化合物(96.7mg)，其未经纯化即使用。MSm/z:672.4(M+H)+
步骤4：中间物5
向中间物4(96.7mg，0.14mmol)于DMF(6mL)中的溶液中添加丙酸(16.0mg，0.22mmol)和HATU(109.5mg，0.29mmol)。使混合物冷却到0℃，且添加DIPEA(55.7mg，0.43mmol)。在环境温度下搅拌反应混合物16小时。添加水，且用EtOAc(50mL×3)萃取混合物。用盐水洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，且真空浓缩。对粗产物进行硅胶柱色谱法(3％MeOH/DCM)获得标题化合物(98.0mg)。MSm/z:728.5(M+H)+
步骤5：中间物6
向中间物5(98.0mg，0.13mmol)于DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(2mL)，且在环境温度下搅拌反应混合物30分钟。真空浓缩反应混合物，添加水且用EtOAc(50mL×3)萃取所得混合物。用NaHCO3饱和水溶液洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，且真空浓缩获得标题化合物(88.3mg)，其未经进一步纯化即使用。MSm/z:628.4(M+H)+
步骤6：I-8
向中间物6(88.3mg，0.14mmol)和DIPEA(36.1mg，0.28mmol)于4mLTHF中的经冷却(0℃)溶液中添加丙烯酰氯(15.3mg，0.17mmol)。在0℃下搅拌反应物10分钟。用NaHCO3饱和水溶液淬灭混合物，且用EtOAc(40mL×3)萃取。用NaHCO3饱和水溶液洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，且真空浓缩。对所得残余物进行硅胶柱色谱法(5％MeOH/DCM)获得标题化合物(55.9mg)。MSm/z:682.3(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.07(t,3H),1.22-1.83(m,8H),2.28(q,2H),3.96(s,6H),4.13(br,1H),4.51(s,2H),5.04-5.14(m,2H),5.55(dd,2.4Hz,1H),5.74(s,1H),6.05(dd,1H),6.22-6.41(m,1H),6.60(brs,1H),6.91-7.05(m,2H),7.18(t,1H),7.41(d,1H),7.58(s,1H),7.67(d,1H),7.98(s,1H),9.73(s,1H)。
实例11：合成I-9
如实例17(下文)中所述，在步骤2中使用1-(2-甲氧基乙基)哌嗪代替N-乙基哌啶且使用如实例2中针对中间物6所述的方式制备的中间物，其使用实例2中所述的mCPBA氧化，制备标题化合物。MSm/z:750.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:7.97(1H,s),7.63(1H,s),7.40(2H,d),7.33(2H,m),7.16(1H,t),6.87(2H,m),6.57(2H,s),6.45(1H,dd),6.39(1H,m),5.75(1H,dd),5.13(2H,s),4.75(2H,s),3.77(6H,s),3.76(1H,m),3.43(3H,s),2.36(2H,q),1.62(3H,t)
实例12：合成I-10
如实例5中所述，在步骤1中使用(2-氨基-5-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺制备化合物I-10。MSm/z:673.1(M+H+)。
实例13：合成I-11
如实例5中所述，在步骤1中使用4,5-二氯苯-1,2-二胺代替苯-1,2-二胺制备化合物I-11。MSm/z:673.1(M+H+)。
实例14：合成I-12
如实例5中所述，在步骤1中使用(3-氟苯基)甲胺代替甲胺制备化合物I-12。MSm/z:623.3(M+H+)。
实例15：合成I-13
如实例17(下文)中所述，在步骤2中使用2-甲氧基-N-甲基甲胺代替N-乙基哌啶且在步骤4中使用来自实例1的中间物5的衍生物(在步骤5中使用苯甲胺代替甲胺制备)代替中间物4，制备标题化合物。MSm/z:624.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ:7.92(1H,s),7.29(1H,d),7.21(6H,m),6.78(1H,dd),6.55(2H,s),6.46(1H,s),6.41(2H,m),5.77(1H,dd),5.15(2H,s),4.51(2H,s),3.78(6H,s),3.60(2H,t),3.54(2H,t),3.06(3H,t)。
实例16：合成I-14
如实例17中所述，在步骤2中使用2-甲氧基-1-乙醇代替N-乙基哌啶且在步骤4中使用来自实例1的中间物5的衍生物(在步骤5中使用苯甲胺代替甲胺制备)代替中间物4，制备化合物I-14。MSm/z:611.3(M+H+)。
实例17：合成I-15
步骤1：中间物2
向中间物1(2.34g，15.0mmol)于DMF(50mL)中的溶液中添加(Boc)2O(6.60g，30.3mmol)和DMAP(600mg，4.9mmol)。在室温下搅拌反应物隔夜。在减压下去除DMF后，通过硅胶色谱法分离产物。MSm/z:357.2(M+H+)。
步骤2
在DMF(3.0mL)中混合中间物2(300mg，084mmol)与N-乙基哌啶(0.30mL，2.19mmol)。在110℃下加热混合物3.0小时。接着，真空浓缩反应物且通过硅胶快速色谱法纯化获得330mg标题化合物。MSm/z:351.3(M+H)+。
步骤3：中间物3
将来自步骤2的产物溶解于MeOH(10mL)中，且添加10重量％Pd/C(100mg)。在环境温度下，在H2气球下，搅拌反应混合物4.5小时。经短硅藻土栓过滤反应混合物且真空浓缩获得275mg标题化合物，其未经纯化即使用。MSm/z:292.1(M+H+)。
步骤4：中间物5
将中间物3(200mg，0.68mmol)、中间物6(来自实例1)(150mg，0.37mmol)和TFA(5.0μL)溶解于1,4-二噁烷(2.0mL)中，且在110℃下加热反应混合物16小时。将反应混合物冷却到环境温度，浓缩且通过硅胶色谱法纯化获得110mg标题化合物。MSm/z:619.8(M+H)+。
步骤4：I-15
在环境温度下，将中间物5溶解于20％TFA/DCM中，且搅拌3.5小时。浓缩反应混合物，将所得残余物溶解于DCM中且用二氧化硅支撑的碳酸盐处理，且过滤混合物。浓缩滤液，接着溶解于THF(2.0mL)中，且冷却到-10℃，随后添加丙烯酰氯(7.0μL，0.086mmol)。10分钟后，浓缩反应物且通过制备型HPLC纯化。MSm/z:573.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ:8.67(1H,s),7.78(1H,s),7.67(1H,s),7.48(1H,d),6.67(1H,dd),6.40(5H,m),5.74(1H,dd),4.63(2H,s),3.77(6H,s),3.66(4H,m),3.41(2H,m),3.33(3H,s),3.14(2H,m),2.89(2H,m),1.39(3H,t)。
实例18：合成I-16
如实例5中所述，使用(4-甲氧基苯基)甲胺代替甲胺制备起始物质，制备化合物I-16。MSm/z:635.4(M+H+)。
实例19：合成I-17
如实例17中所述，在步骤2中使用吗啉代替N-乙基哌啶且在步骤4中使用来自实例1的中间物5代替中间物6，制备标题化合物。MSm/z:546.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:7.87(1H,s),7.40(1H,d),7.25(1H,s),6.98(1H,dd),6.54(2H,s),6.46(1H,m),6.35(1H,dd),5.80(1H,dd),4.71(2H,s),3.84(4H,t),3.77(6H,s),3.38(3H,s),3.21(4H,t)。
实例20：合成I-18(外消旋)
如实例21中所述，在步骤1中使用mCPBA代替SO2Cl2(实例2，步骤7中描述mCPBA氧化)制备化合物I-18。MSm/z:476.4(M+H+)。
实例21：合成I-19，(外消旋)
步骤1：中间物2
向中间物1(如实例2中所述，在步骤2中使用甲胺代替3-硝基苯甲基胺且跳过步骤6制备)(250mg，0.72mmol)于MeCN(2mL)和DCM(4mL)的冰冷却的溶液中添加硫酰氯(0.12mL，1.44mmol)。在0℃下搅拌反应物15分钟。用NaHCO3饱和水溶液淬灭反应物且用DCM(30mL×3)萃取水层。干燥(Na2SO4)经合并的有机层，过滤且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(2％MeOH/DCM)纯化粗产物获得192mg标题化合物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ2.96(s,3H),3.41(s,3H),4.03(s,6H),4.81(s,2H),7.08(s,1H),8.64(s,1H)。
步骤2：中间物3
向中间物2(60.0mg，0.14mmol)于1,4-二噁烷(5mL)中的溶液中添加顺-环己烷-1,2-二胺(47.7mg，0.42mmol)和p-TSA(12.0mg，0.07mmol)。在105℃下加热反应物隔夜。使混合物冷却到环境温度，添加水，且用EtOAc(50mL×3)萃取所得混合物。用NaHCO3饱和水溶液洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(10％MeOH/DCM)纯化粗产物获得73.9mg标题化合物。MSm/z:481.3(M+1)+
步骤3：I-19
向中间物3(73.9mg，0.15mmol)和DIPEA(39.7mg，0.31mmol)于THF(3mL)中的冰冷却溶液中添加丙烯酰氯(16.7mg，0.18mmol)。在0℃下搅拌反应物10分钟。以NaHCO3饱和水溶液淬灭反应物，且用EtOAc(30mL×3)萃取。用NaHCO3饱和水溶液洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(5％MeOH/DCM)纯化粗产物获得40.7mg标题化合物。MSm/z:535.3(M+1)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.35-1.84(m,8H),3.96(s,6H),4.11-4.29(m,2H),4.44(s,2H),5.50-5.75(m,1H),5.99-6.25(m,1H),6.23-6.47(m,1H),6.52-6.86(m,1H),6.97-7.18(m,1H),7.66-7.90(m,1H),7.96-8.14(m,1H)。
实例22：合成I-20
如实例17中所述，在步骤2中使用1-(2-甲氧基乙基)哌嗪代替N-乙基哌啶且在步骤4中使用中间物5(来自实例1)代替中间物6，制备标题化合物。MSm/z:603.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:7.94(1H,s),7.50(1H,d),7.40(1H,d),7.00(1H,dd),6.54(2H,s),6.44(2H,m),6.39(1H,m),5.80(1H,dd),4.71(2H,s),3.79(6H,s),3.44(5H,m),3.31(3H,s)。
实例23：合成I-21
如实例17中所述，在步骤2中使用2-甲氧基-N-甲基乙胺代替N-乙基哌啶且在步骤4中使用中间物5(来自实例1)代替中间物6，制备标题化合物。MSm/z:548.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:7.86(1H,s),7.39(1H,d),7.15(1H,s),6.85(1H,dd),6.53(2H,m),6.46(1H,m),6.35(1H,m),5.79(1H,dd),4.70(2H,s),3.77(6H,s),3.59(2H,s),3.38(3H,s),3.06(3H,s)。
实例24：合成I-22(外消旋)
如实例21中所述，在步骤2中使用反-环己烷-1,2-二胺代替顺-环己烷-1,2-二胺，制备化合物I-22。MSm/z:535.3(M+H+)。
实例25：合成I-23
步骤1：中间物2
在环境温度下搅拌中间物1(750mg，3.93mmol)于环丙胺(5mL)中的溶液隔夜，然后浓缩溶液，用EtOAc湿磨且过滤获得700mg标题化合物。MSm/z:212.1(M+H)+
步骤2：中间物3
向中间物2(700mg，3.32mmol)于DCM(30mL)中的溶液中添加氧化锰(2.30g，26.4mmol)且在环境温度下搅拌混合物3小时。经硅藻土过滤反应混合物且用DCM洗涤，且浓缩滤液获得550mg标题化合物。MSm/z:210.2(M+H)+
步骤3：中间物4
在氮气下，向中间物3(550mg，2.63mmol)于DCM(20mL)中的溶液中添加3,5-二甲氧基苯胺(480mg，3.14mmol)和乙酸(0.13g，2.17mmol)。在环境温度下搅拌混合物15分钟，随后以15分钟间隔分两份添加NaBH(OAc)3(0.55g×2，5.19mmol)。在环境温度下搅拌反应物17小时，随后用1MNaOH淬灭且搅拌15分钟。用DCM(50mL×3)萃取水层，且经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。对粗产物进行硅胶快速色谱法(含10％EtOAc的DCM)获得0.83g标题化合物。MSm/z:347.2(M+H)+
步骤4：中间物5
在氮气下，向中间物4(830mg，2.41mmol)于THF(20mL)中的溶液中添加三光气(890mg，3.57mmol)，随后添加三乙胺(1.20g，11.9mmol)。在环境温度下搅拌混合物1小时，接着在回流下搅拌3小时。用NaHCO3饱和水溶液/H2O的1:1混合物(20mL)淬灭反应物且用EtOAc(60mL×3)萃取。用盐水洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。用己烷洗涤粗产物获得500mg标题化合物。MSm/z:373.3(M+H)+
步骤5：中间物6
向中间物5(150mg，0.40mmol)于MeCN(6mL)和DCM(12mL)中的冰冷却溶液中添加硫酰氯(108mg，0.80mmol)。在0℃下搅拌反应物10分钟。用NaHCO3饱和水溶液淬灭反应物且用DCM(50mL×3)萃取水相。干燥(Na2SO4)经合并的有机层，过滤且浓缩。通过制备型TLC(含5％MeOH的DCM)纯化粗产物获得60mg标题化合物。MSm/z:457.2(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ0.62-0.70(m,2H),1.09-1.00(m,2H),2.73-2.83(m,1H),2.91(s,3H),3.97(s,6H),4.60-4.69(m,2H),7.01(s,1H),8.62(s,1H)
步骤6：中间物7
向中间物6(60mg，0.13mmol)于二噁烷(10mL)中的溶液中添加苯-1,2-二胺(43mg，0.39mmol)和催化剂p-TSA(2mg)。将所得混合物加热到回流隔夜。将反应混合物冷却到环境温度，用EtOAc稀释，用NaHCO3饱和水溶液洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩。通过制备型TLC(含2％MeOH的DCM)纯化粗产物获得30mg标题化合物。MSm/z:501.3(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ0.62(d,2H),0.95(d,2H),2.60(dd,1H),3.95(s,6H),4.39(s,2H),4.83(s,2H),6.47-6.63(m,1H),6.73(dd,1H),6.82-6.86(m,1H),6.98(s,1H),8.06(s,1H),7.51(d,1H),8.39(s,1H)。
步骤7：I-23
向中间物7(30mg，0.06mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加DIPEA(15mg，0.12mmol)且冷却到-78℃。向反应混合物中添加丙烯酰氯(6.5mg，0.07mmol)。在-78℃下搅拌反应混合物10分钟，然后将其用NaHCO3饱和水溶液淬灭，用EtOAc萃取且浓缩。通过制备型TLC(含3到4％MeOH的DCM)纯化粗产物获得20mg标题化合物。MSm/z:555.3(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ0.55-0.67(m,2H),0.96(q,2H),2.61-2.64(m,1H),3.95(s,6H),4.41(s,2H),5.78(dd,1H),6.28(dd,1H),6.52(dd,1H),6.98(s,1H),7.06-7.12(m,1H),7.17-7.24(m,1H),7.51(d,1H),7.98(d,1H),8.11(s,1H),8.53(s,1H),9.83(s,1H)。
实例26：合成I-24
如实例25中所述，在步骤2中使用(4-氯-3-甲氧基苯基)甲胺代替环丙胺制备化合物I-24。MSm/z:669.4(M+H+)。
实例27：合成I-25
如实例25中所述，在步骤2中使用(4-氟苯基)甲胺代替环丙胺制备化合物I-25。MSm/z:623.3(M+H+)。
实例28：合成I-26
如实例3的多个步骤中所述，但使用以下顺序：步骤1、步骤6、步骤3制备化合物I-26。MSm/z:620.4(M+H+)。
实例29：合成I-27
步骤：中间物2
向中间物1(466mg，2.15mmol)于DMF(6.0mL)中的溶液中添加(Boc)2O(515mg，2.36mmol)和DMAP(20mg)。在环境温度下搅拌反应物16小时。在减压下去除DMF且通过硅胶色谱法纯化获得480mg标题化合物。MSm/z:317.1(M+H+)。
步骤2中间物4
在1,4-二噁烷(5mL)和2MNa2CO3水溶液(1.2mL)中合并中间物2(90mg，0.28mmol)、中间物3(120mg，0.58mmol)和Pd(dppf)Cl2(22.0mg，0.03mmol)。在110℃下加热混合物30分钟。以EtOAc稀释反应混合物，用NaHCO3饱和水溶液和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。对残余物进行硅胶快速色谱法获得47mg标题化合物。MSm/z:319.2(M+H+)。
步骤3中间物4
将中间物4(47.0mg，0.15mmol)溶解于MeOH(5mL)中，向其中添加10重量％Pd/C(20mg)。在环境温度下，在H2气球下，搅拌反应混合物3.5小时。经短硅藻土栓过滤反应混合物且真空浓缩获得标题化合物(定量)，其直接使用。MSm/z:288.1(M+H+)。
I-27
如实例5中所述，使用来自实例1的共用中间物5制备标题化合物。MSm/z:541.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:7.92(1H,s),7.31(2H,m),7.18(2H,m),6.92(1H,m),6.86(1H,s),6.53(2H,m),6.46(1H,dd),5.44(1H,dd),5.01(2H,s),4.89(6H,s),4.64(1H,m),4.57(1H,s),3.93(3H,s),3.87(2H,m),3.29(1H,m)。
实例30：合成I-28
如实例5中所述制备化合物I-28。使用(3-甲氧基苯基)甲胺代替甲胺制备起始物质。MSm/z:654.5(M+H+)。
实例31：合成I-29
步骤1：中间物2
在环境温度下搅拌中间物1(3.0g，21.3mmol)于甲胺(乙醇溶液，30mL)中的溶液2小时，然后在减压下蒸发挥发物。向残余物中添加NaHCO3水溶液(50mL)且用EtOAc(30mL×3)萃取混合物。经Na2SO4干燥经合并的有机层且浓缩获得3.53g标题化合物。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.03(d,3H),6.63-6.67(m,1H),6.84(d,1H),7.43-7.48(m,1H),7.99(brs,1H),8.17(dd,1H)。
步骤2：中间物3
向中间物3(500mg，3.29mmol)和DIPEA(900mg，7.0mmol)于DMF(5mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(1.92g，21.4mmol)。在环境温度下搅拌反应物2.5小时。将混合物分配于EtOAc与水之间。分离有机层且用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥且对粗产物进行硅胶快速色谱法(用含6％MeOH的DCM洗脱)获得583mg标题化合物。MSm/z:207.2(M+1)+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.32(s,3H),5.53(d,1H),5.82-5.89(m,1H),6.37(d,1H),7.37(d,1H),7.56(t,1H),7.67-7.71(m,1H),8.01(d,1H)。
步骤3：中间物4
在80℃下搅拌中间物3(200mg，0.97mmol)和Fe(272mg，4.85mmol)于NH4Cl水溶液(3mL)和EtOH(6mL)中的混合物1小时。通过过滤去除固体且浓缩滤液。用水稀释残余物且用EtOAc(20mL×3)萃取，用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)且真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(用含5％MeOH的DCM洗脱)纯化粗产物获得105mg标题化合物。MSm/z:177.2(M+1)+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.26(s,3H),3.76(br,2H),5.52(dd,1H),6.07(dd,1H),6.39(dd,1H),6.74-6.80(m,1H),6.99(dd,1H),7.14-7.18(m,1H),7.26(s,1H)
步骤4：I-29
在95℃下，在N2下搅拌来自实例1的中间物6(100mg，0.24mmol)、中间物4(44mg，0.24mmol)、Cs2CO3(162mg，0.48mmol)、Pd2(dba)3(21.4mg，0.038mmol)和Xantphos(43.0mg，0.076mmol)于1,4-二噁烷(2mL)中的混合物5小时。在减压下蒸发挥发物。将残余物分配于EtOAc与水之间，且用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，且真空浓缩。对粗产物进行硅胶快速色谱法(用含50％EtOAc的己烷洗脱)获得29.8mg标题化合物。MSm/z:543.3(M+1)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.15(s,3H),3.25(s,3H),4.00(s,6H),4.52(s,2H),5.34-5.57(m,1H),5.88-6.16(m,2H),7.00(s,1H),7.17-7.23(m,2H),7.34-7.43(m,1H),7.87(d,1H),8.05(s,1H),8.76(s,1H)。
实例32：合成I-30
如实例17中所述，使用中间物5(来自实例1)代替中间物6制备化合物I-30。MSm/z:573.5(M+H+)。
实例33：合成I-31
步骤1：中间物2
向中间物1(2.34g，15.0mmol)于DMF(50mL)中的溶液中添加(Boc)2O(6.60g，30.3mmol)和DMAP(600mg，4.9mmol)。在环境温度下搅拌反应物隔夜。在减压下去除DMF，且通过硅胶色谱法分离标题化合物。MSm/z:257.2(M+H+)。
步骤2：中间物3
在DMF(6.0mL)中合并中间物2(660mg，2.57mmol)和哌啶(0.65mL，6.60mmol)。在110℃下加热反应混合物3小时。真空浓缩反应物且通过硅胶快速色谱法纯化获得660mg标题化合物。MSm/z:322.3(M+H+)。
步骤3：中间物4
将中间物3(660mg，2.06mmol)溶解于MeOH(10mL)中，向其中添加10重量％Pd/C(100mg)。在H2气球下，搅拌反应物4.5小时。经短硅藻土栓过滤反应物且真空浓缩。粗产物(定量)未经纯化直接用于下一步骤中。MSm/z:292.1(M+H)+。
I-31
使用如实例5中所述的程序，自中间物4和中间物5(来自实例1)制备标题化合物。MSm/z:544.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ:8.65(1H,s),8.24(1H,s),7.71(1H,m),7.44(1H,m),6.41(5H,m),5.79(1H,dd),4.65(2H,s),3.77(6H,s),3.39(4H,m),3.34(3H,s),2.00(4H,m),1.67(2H,m)。
实例34：合成I-32
如实例25中所述，在步骤1中使用烯丙基胺代替环丙胺且在步骤5中使用mCPBA代替SO2Cl2(实例2，步骤7中描述mCPBA氧化)，制备化合物I-32。MSm/z:487.1(M+H+)。
实例35：合成I-33
如实例25中所述，在步骤1中使用3-氨基丙-1,2-二醇代替环丙胺且在步骤5中使用mCPBA代替SO2Cl2(实例2，步骤7中描述mCPBA氧化)，制备化合物I-33。MSm/z:521.2(M+H+)。
实例36：合成I-34
如实例7中所述制备化合物I-34。如实例1中所述，在步骤5中使用环丙胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:487.3(M+H+)。
实例37：合成I-35(外消旋)
如实例21中所述制备化合物I-35。如实例2中所述，在步骤2中使用吡啶-3-基甲胺代替3-硝基苯甲胺，制备起始物质。MSm/z:612.3(M+H+)。
实例38：合成I-36
如实例7中所述制备化合物I-36。如实例2中所述，在步骤2中使用3-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯代替3-硝基苯甲基胺且跳过步骤6，制备初始物质。MSm/z:630.3(M+H+)。
实例39：合成I-37
如实例5中所述，在步骤1中使用(2-氨基苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯代替1,2-苯二胺制备化合物I-37。在步骤2之前执行脱除BOC保护基步骤(如实例3，步骤5中所述)。MSm/z:619.4(M+H+)。
实例40：合成I-38
如实例53中所述，在步骤1中使用苯胺代替环丙胺制备化合物I-38。MSm/z:401.3(M+H+)。
实例41：合成I-39(外消旋)
如实例21中所述，在步骤1中使用mCPBA代替SO2Cl2(实例2，步骤7中描述mCPBA氧化)且在步骤2中使用(顺-2-氨基环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯代替顺-环己烷-1,2-二胺，制备化合物I-39。在步骤3之前执行脱除BOC保护基步骤(如实例3，步骤5中所述)。MSm/z:481.5(M+H+)。
实例42：合成I-40
如实例7中所述制备标题化合物。如实例2中所述，在步骤2中使用3-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯代替4-硝基苯甲基胺且跳过步骤6，制备初始物质。如实例3，步骤5中所述执行最终脱除BOC保护基步骤。MSm/z:544.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:8.02(1H,s),7.76(1H,d),7.55(1H,d),7.36(2H,m),6.53(2H,s),6.46(1H,m),6.36(1H,dd),5.80(1H,dd),4.73(2H,s),3.82(2H,d),3.77(6H,s),3.30(2H,s),2.81(2H,t),1.92(1H,m),1.68(2H,m),1.30(2H,q)。
实例43：合成I-41
如实例7中所述，在步骤1中使用(2-氨基-5-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯代替1,2-苯二胺制备化合物I-41。在步骤2之前执行脱除BOC保护基步骤(如实例3，步骤5中所述)。MSm/z:475.4(M+H+)。
实例44：合成I-42
如实例7中所述，在步骤1中使用(2-氨基-5-三氟甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯代替1,2-苯二胺制备化合物I-42。在步骤2之前执行脱除BOC保护基步骤(如实例3，步骤5中所述)。MSm/z:529.4(M+H+)。
实例45：合成I-43
如实例7中所述制备标题化合物。如实例2中所述，在步骤2中使用3-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯代替3-硝基苯甲基胺且跳过步骤6，制备初始物质。如实例3，步骤5中所述执行最终脱除BOC保护基步骤。MSm/z:530.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ:7.87(1H,s),7.68(1H,m),7.43(1H,m),7.24(1H,m),7.18(2H,m),6.32(4H,m),5.68(1H,dd),4.85(1H,m),4.52(2H,s),4.13(1H,m),3.70(6H,s),3.30(3H,m),2.39(2H,m),1.72(2H,m),1.88(2H,m)。
实例46：合成I-44
如实例5中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用吡啶-3-基甲胺代替甲胺制备中间物1。MSm/z:538.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:8.62(2H,m),8.23(1H,d),8.05(1H,s),7.78(1H,m),7.65(1H,dd),7.48(1H,dd),7.31(2H,m),6.55(2H,s),6.46(1H,s),6.36(2H,m),5.77(1H,dd),5.22(2H,dd),4.75(2H,s),3.77(6H,s)。
实例47：合成I-45(外消旋)
如实例10中所述制备化合物I-45。如实例2中所述，在步骤2中使用3-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯代替3-硝基苯甲基胺且跳过步骤6，制备初始物质。MSm/z:636.3(M+H+)。
实例48：I-46(外消旋)
如实例21中所述，在步骤1中使用mCPBA代替SO2Cl2(实例2，步骤7中描述mCPBA氧化)制备标题化合物。如实例2中所述，在步骤2中使用3-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯代替3-硝基苯甲基胺且跳过步骤6，制备初始物质。如实例3，步骤5中所述执行最终脱除BOC保护基步骤。MSm/z:536.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:7.98(1H,s),6.51(2H,s),6.46(1H,s),6.17(2H,m),5.62(1H,dd),5.03(1H,m),4.62(2H,m),4.28(1H,m),3.93(1H,m),3.77(6H,s),3.40(2H,m),2.94(1H,m),2.59(1H,m),2.10(2H,m),1.96(2H,m),1.77(6H,m),1.54(2H,m)。
实例49：I-47，(外消旋)
如实例21中所述制备标题化合物。如实例2中所述，在步骤2中使用2-氨基乙腈代替3-硝基苯甲胺，制备起始物质。MSm/z:560.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:8.07(1H,s),6.92(1H,s),6.33(1H,m),6.18(1H,dd),5.63(1H,dd),5.01(2H,s),4.61(2H,s),4.48(2H,m),3.97(6H,s),1.79(6H,m),1.55(2H,m)。
实例50：I-48，
如实例4中所述制备标题化合物。如实例2中所述，在步骤2中使用2-氨基乙腈代替3-硝基苯甲胺且跳过步骤6，制备起始物质。MSm/z:486.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:8.06(1H,s),7.76(1H,d),7.51(1H,d),7.32(2H,m),6.56(2H,s),6.47(3H,m),5.79(1H,dd),4.7(2H,s),4.72(2H,s),3.77(6H,s)。
实例51：合成I-49
如实例7中所述，在步骤1中使用(2-氨基-5-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯代替1,2-苯二胺制备化合物I-49。在步骤2之前执行脱除BOC保护基步骤(如实例3，步骤5中所述)。MSm/z:475.4(M+H+)。
实例52：合成I-50
如实例7中所述，在步骤1中使用(2-氨基-5-三氟甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯代替1,2-苯二胺制备化合物I-50。在步骤2之前执行脱除BOC保护基步骤(如实例3，步骤5中所述)。MSm/z:529.4(M+H+)。
实例53：I-51
步骤1：中间物1
向2,4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶(1.70g，5.88mmol)于MeCN(5mL)和甲苯(15mL)中的溶液中添加NaOH水溶液(1.5mL，5.88mmol)，含环丙胺(580mg，5.88mmol)的MeCN(6mL)/甲苯(6mL)。在0℃下搅拌混合物4小时。将混合物分配于EtOAc与H2O之间。用盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥且浓缩。通过硅胶柱色谱法(用含30％EtOAc的己烷洗脱)纯化残余物获得540mg标题化合物。MSm/z:218.2(M+1)+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ0.40-0.54(m,4H),2.13-2.18(m,1H),3.97(s,2H),8.62(s,1H)
步骤2：中间物2
在0℃下搅拌中间物1(540mg，2.55mmol)于甲胺(乙醇溶液，10mL)中的溶液1小时。在减压下蒸发挥发物。将残余物分配于EtOAc与水之间且用盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥且浓缩。通过硅胶柱色谱法(用含5％MeOH的DCM洗脱)纯化残余物获得350mg标题化合物。MSm/z:213.3(M+1)+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ0.29～0.33(m,2H),0.45-0.50(m,2H),2.08-2.13(m,1H),2.98(d,3H),3.74(s,2H),7.17(br,1H),7.75(s,1H)。
步骤3：中间物3
在80℃下搅拌中间物2(100mg，0.47mmol)、三光气(83mg，0.28mmol)、TEA(95mg，0.94mmol)于THF(3mL)中的混合物16小时。将混合物分配于EtOAc与H2O之间。用盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥且浓缩。通过硅胶柱色谱法(用含2％MeOH的DCM洗脱)纯化残余物获得60mg标题化合物。MSm/z:239.3(M+1)+。
步骤4：中间物4
在90℃下，在N2氛围下，搅拌中间物3(60mg，0.25mmol)、苯-1,2-二胺(32.7mg，0.30mmol)、Cs2CO3(164mg，0.50mmol)、Pd2(dba)3(21.7mg，0.038mmol)和Xantphos(43.7mg，0.076mmol)于1,4-二噁烷(2mL)中的混合物16小时。在减压下蒸发挥发物。用水稀释残余物，且用EtOAc(20mL×3)萃取。用盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥且浓缩。通过硅胶柱色谱法(用含5％MeOH的DCM洗脱)纯化残余物获得39mg标题化合物。MSm/z:311.3(M+1)+
步骤5：I-51
在-78℃下，向中间物4(39mg，0.13mmol)和DIPEA(38.7mg，0.3mmol)于THF(5mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(13.6g，0.15mmol)。在-78℃下搅拌反应混合物20分钟。添加水且用EtOAc(20mL×3)萃取混合物。用盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥且浓缩。通过硅胶柱色谱法(用含5％MeOH的DCM洗脱)纯化残余物获得9.3mg标题化合物。MSm/z:365.4(M+1)+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ0.63-0.71(m,2H),0.88(q,2H),2.62-2.69(m,1H),3.30(s,3H),4.25(s,2H),5.71(d,1H),6.21(dd,1H),6.38(d,1H),7.18-7.22(m,2H),7.28(brs,1H),7.50(br,1H),7.89(s,1H),8.38(brs,1H)。
实例54：合成I-52
如实例53中所述，在步骤1中使用环己胺代替环丙胺制备化合物I-52。MSm/z:407.4(M+H+)。
实例55：合成I-53
如实例21中所述，在步骤2中使用(顺-2-氨基环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯代替顺-环己烷-1,2-二胺，制备化合物I-53。在步骤3之前执行脱除BOC保护基步骤(如实例3，步骤5中所述)。MSm/z:549.5(M+H+)。
实例56：合成I-54
如实例17中所述，使用(2-氨基-5-(1-乙基哌啶-4-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯代替中间物3制备化合物I-54。MSm/z:572.6(M+H+)。
实例57：合成I-55
如实例17中所述，使用(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯代替中间物3制备化合物I-55。MSm/z:587.5(M+H+)。
实例58：合成I-56
如实例17中所述，使用(2-氨基-5-(1-乙基-1,2,3,6-四氢吡啶-4基)苯基)氨基甲酸叔丁酯代替中间物3制备化合物I-56。MSm/z:570.6(M+H+)。
实例59：合成I-57
如实例25中所述，在步骤1中使用丁-3-烯-1-胺代替环丙胺且在步骤5中使用mCPBA代替SO2Cl2(实例2，步骤7中描述mCPBA氧化)，制备化合物I-57。MSm/z:501.1(M+H+)。
实例60：合成I-58
如实例25中所述，在步骤1中使用4-氨基丁-1,2-二醇代替环丙胺且在步骤5中使用mCPBA代替SO2Cl2(实例2，步骤7中描述mCPBA氧化)，制备化合物I-58。MSm/z:535.1(M+H+)。
实例61：I-59
如实例7中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用2-甲氧基乙胺代替甲胺且跳过步骤6，制备起始物质。MSm/z:505.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:7.97(1H,s),7.67(1H,m),7.56(1H,m),7.34(2H,m),6.53(2H,s),6.46(2H,m),6.39(1H,m),5.80(1H,dd),4.70(2H,s),4.20(2H,t),3.77(6H,s),3.57(2H,t),3.25(3H,s)。
实例62：合成I-60
如实例25中所述，在步骤1中使用4-(氨基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯代替环丙胺且在步骤5中使用mCPBA代替SO2Cl2(实例2，步骤7中描述mCPBA氧化)，制备化合物I-60。MSm/z:644.7(M+H+)。
实例63：I-61，(外消旋)
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用2-甲氧基乙胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:579.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:7.97(1H,s),6.91(1H,s),6.34(1H,m),6.17(1H,dd),5.63(1H,d),4.59(2H,m),4.48(1H,brs),4.37(1H,brs),4.29(2H,m),3.97(6H,s),3.48(2H,s),3.35(3H,s),1.76(6H,m)。
实例64：合成I-62
如实例17中所述，在步骤2中使用哌嗪-1-甲酸叔丁酯代替N-乙基哌嗪制备化合物I-62。MSm/z:713.5(M+H+)。
实例65：合成I-63(外消旋)
如实例21中所述制备化合物I-63。如实例2中所述，在步骤2中使用苯甲胺代替3-硝基苯甲胺，制备中间物1。MSm/z:611.4(M+H+)。
实例66：合成I-64
如实例7中所述制备化合物I-64。如实例1中所述，在步骤5中使用噻唑-4-基甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:544.4(M+H+)。
实例67：I-65
步骤1：中间物2
在100℃下加热来自实例1的中间物6(100mg，0.25mmol)、2-硝基苯酚(51.7mg，0.37mmol)、Cs2CO3(162mg，0.50mmol)于NMP(5mL)中的混合物16小时。使混合物冷却到环境温度。添加水且用EtOAc(35mL×3)萃取所得混合物。用盐水洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(4％EtOAc/DCM)纯化粗产物获得52.5mg标题化合物。
步骤2：中间物3
将中间物2(52.5mg，0.10mmol)、Fe(34.5mg，0.62mmol)、NH4Cl(33.3mg，0.62mmol)于乙醇(4mL)和H2O(2mL)中的混合物加热到回流2小时。接着，使混合物冷却到环境温度且过滤。真空浓缩滤液，添加水且用EtOAc(35mL×3)萃取所得混合物。用饱和NaHCO3洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(3％MeOH/DCM)纯化粗产物获得7.1mg标题化合物。MSm/z:476.3(M+1)+
步骤3：I-65
向中间物3(7.10mg，0.02mmol)和DIPEA(3.9mg，0.03mmol)于THF(4mL)中的经冷却(0℃)溶液中添加丙烯酰氯(1.6mg，0.02mmol)。在0℃下搅拌反应物10分钟，然后用饱和NaHCO3淬灭且用EtOAc(20mL×3)萃取。用饱和NaHCO3洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(含4％EtOAc的DCM)纯化残余物获得3.0mg标题化合物。MSm/z:530.4(M+1)+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.45(s,3H),3.94(s,6H),4.57(s,2H),6.08(d,1H),6.41(dd,1H),6.61(s,1H),6.67(d,1H),7.05-7.11(m,1H),7.20(d,1H),7.27-7.30(m,1H),7.97(s,1H),8.38(d,1H)。
实例68：I-66
如实例84中所述，在步骤3中使用(1R,2S)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯代替(1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物(40mg)。MSm/z:611.1(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ:7.96(1H,d),7.71(1H,d),7.28(4H,m),7.2(1H,m),7.0(1H,s),6.3(1H,dd),6.05(1H,dd),5.55(1H,dd),5.12(1H,brs),4.5(2H,s),3.96(6H,s),1.2-1.8(8H,m)。
实例69：I-67
步骤1：中间物2
在90℃下，在氮气氛围下，搅拌来自实例1的中间物5(150mg，0.45mmol)、苯-1,2-二胺(48.5mg，0.45mmol)、Cs2CO3(292mg，0.90mmol)、Pd2(dba)3(41.0mg，0.045mmol)和xantphos(51.8mg，0.09mmol)于1,4-二噁烷(6mL)中的混合物5小时。使混合物冷却到环境温度。添加水且用EtOAc(30mL×3)萃取所得混合物。用盐水洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(3％MeOH/DCM)纯化粗产物获得88.5mg标题化合物。MSm/z:407.4(M+1)+。
步骤2：I-67
向中间物2(88.2mg，0.22mmol)和Et3N(87.8mg，0.87mmol)于THF(6mL)中的经冷却(0℃)溶液中添加2-氯乙烷磺酰氯(35.4mg，0.22mmol)。在40℃下加热反应物6小时。添加水且用EtOAc(30mL×3)萃取所得混合物。干燥(Na2SO4)经合并的有机层，过滤且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(3％MeOH/DCM)纯化粗产物获得8.8mg标题化合物。MSm/z:497.4(M+1)+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.40(s,3H),3.79(s,6H),4.64(s,2H),5.86(d,1H),6.14(d,1H),6.39(s,1H),6.48(d,2H),6.55(dd,9.6Hz,1H),7.17-7.27(m,3H),7.46-7.52(m,2H),7.95(s,1H),8.12(s,1H)。
实例70：合成I-68(外消旋)
如实例21中所述，使用来自实例25的中间物6代替中间物2制备化合物I-68。MSm/z:561.5(M+H+)。
实例71：合成I-69(外消旋)
如实例21中所述，使用来自实例116的中间物1代替中间物2制备化合物I-69。MSm/z:618.4(M+H+)。
实例72：合成I-70(外消旋)
如实例21中所述制备化合物I-70。如实例2中所述，在步骤2中使用环丁胺代替3-硝基苯甲胺，制备起始物质。MSm/z:575.3(M+H+)。
实例73：合成I-71(外消旋)
如实例10中所述，在步骤1中使用7-氯-3-(3,5-二甲氧基苯基)-1,4-二甲基-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮代替中间物8(如实例2中所述，在步骤2中使用1-(2,4-二氯嘧啶-5-基)乙酮代替中间物2，使用甲胺代替3-硝基苯甲基胺且忽略步骤6制备)且忽略步骤2到5，制备化合物I-71。MSm/z:481.5(M+H+)。
实例74：合成I-72(外消旋)
如实例4中所述，在步骤1中使用7-氯-3-(3,5-二甲氧基苯基)-1,4-二甲基-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮代替中间物1(如实例2中所述，在步骤2中使用1-(2,4-二氯嘧啶-5-基)乙酮代替中间物2，使用甲胺代替3-硝基苯甲基胺且忽略步骤6制备)，制备化合物I-72。MSm/z:475.5(M+H+)。
实例75：合成I-73(外消旋)
如实例21中所述制备化合物I-73。如实例2中所述，在步骤2中使用氨(amonia)代替3-硝基苯甲胺，制备起始物质。MSm/z:521.2(M+H+)。
实例76：I-74
如实例29中所述，使用来自实例1的中间物6代替中间物5制备标题化合物。MSm/z:609.0(M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ:8.01(1H,s),7.95(2H,m),7.84(1H,s),7.52(1H,dd),7.44(1H,dd),6.88(1H,s),6.47(1H,dd),6.38(1H,dd),5.80(1H,dd),4.60(2H,s),3.95(6H,s),3.91(3H,s),3.35(3H,s)。
实例77：合成I-75
如实例102中所述，在步骤5中使用甲胺代替环丙胺制备化合物I-75。MSm/z:495.3(M+H+)。
实例78：合成I-76(外消旋)
如实例21中所述制备化合物I-76。如实例2中所述，在步骤2中使用甲胺代替3-硝基苯甲胺，在步骤4中使用2-氯-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤6，制备起始物质。MSm/z:501.3(M+H+)。
实例79；I-77
如实例29中所述，在步骤1中使用5-溴-2硝基苯胺代替中间物1制备标题化合物。MSm/z:541.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ:8.00(1H,s),7.95(1H,s),7.84(1H,s),7.77(1H,s),7.64(1H,d),7.53(1H,m),6.54(2H,s),6.46(1H,m),6.41(1H,m),5.83(1H,dd),4.71(2H,s),3.93(3H,s),3.78(6H,s),3.36(3H,s)。
实例80：I-78
如实例29中所述，在步骤2中使用2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)噻唑代替中间物3，制备标题化合物。MSm/z:544.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ:9.94(1H,s),8.91(1H,s),8.52(1H,s),8.12(1H,s),7.89(1H,d),7.74(1H,d),7.68(1H,dd),6.54(3H,m),6.41(1H,m),6.27(1H,dd),5.79(1H,dd),4.69(2H,s),3.72(6H,s),3.26(3H,s)。
实例81：合成I-79
如实例7中所述制备化合物I-79。如实例1中所述，在步骤5中使用1-甲基哌啶-4-胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:468.3(M+H+)。
实例82：合成I-80
如实例7中所述制备化合物I-80。如实例1中所述，在步骤5中使用1-乙基哌啶-4-胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:558.4(M+H+)。
实例83：合成I-81
如实例7中所述制备化合物I-81。如实例1中所述，在步骤5中使用4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯代替甲胺，制备起始物质。执行最终脱除BOC保护基(如实例3，步骤5中所述)。MSm/z:530.3(M+H+)。
实例84：合成I-82
步骤1：中间物2
如实例1中所述，在步骤5中使用苯甲胺代替甲胺，制备标题化合物。
步骤2：中间物3
如文献(化学与生物(Chemistry&Biology)2010,17,285-295)中所述制备标题化合物。将中间物2(150mg，0.31mmol)和HOBT(78mg，0.51mmoL)溶解于4mLDMF中且搅拌90分钟。添加氨(3.8mL，二噁烷中0.5N，1.9mmoL)且在环境温度下搅拌反应混合物隔夜。减压去除溶剂，且将反应混合物分配于水、盐水和氯仿之间。经硫酸钠干燥有机相，且减压去除溶剂获得300mg标题化合物，其原样用于下一反应中。MSm/z:578.2(M+H+)。
步骤3：中间物4
将中间物3(300mg，0.52mmoL)、((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(214mg，1mmoL)和DIPEA(170μL，1.56mmoL)于4mLDMF中的溶液加热到70℃持续4小时。使反应混合物冷却，且分配于水、盐水和EtOAc之间。经硫酸钠干燥有机相，且使溶剂减压。对粗产物进行硅胶色谱法(用含0-75％EtOAc的庚烷梯度洗脱)，获得57mg标题化合物。MSm/z:657.2(M+H+)。
步骤4：中间物5
向中间物4(57mg，0.087mmol)于5mLDCM中的溶液中添加500μLHCl(二噁烷中4N)且在环境温度下搅拌反应物1小时。加压去除溶剂，获得77mg标题化合物。MSm/z:557.2(M+H+)。
步骤5：I-82
向中间物5(77mg，0.13mmoL)和丙烯酸(9μl，0.13mmoL)于500μLofDMF中的溶液中添加DIPEA(114μL，0.65mmoL)和HATU(49mg，0.13mmoL)。在环境温度下搅拌反应物15分钟，接着通过快速色谱法(用含0-70％丙酮的庚烷梯度洗脱)直接纯化，获得16mg标题化合物。MSm/z:611.1(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ:7.96(1H,d),7.72(1H,d),7.28(4H,m),7.2(1H,m),7.0(1H,s),6.31(1H,dd),6.05(1H,dd),5.55(1H,dd),5.12(2H,brs),4.5(2H,s),3.96(6H,s),1.2-1.8(8H,m)。
实例85：合成I-83
步骤1：中间物2
根据文献程序(WO01/29042；PCT/EP00/10088)自中间物1制备标题化合物。
步骤2：中间物3
在微波中，在120℃下均匀加热中间物2(53mg，0.14mmol)和苯二胺(74mg，0.69mmoL)30分钟。对粗产物进行硅胶快速色谱法(用含0-80％EtOAc的庚烷梯度洗脱)，获得30mg标题化合物。MSm/z:415.1(M+H+)。
步骤3：I-83
向中间物3(30mg，0.072mmol)于500μLTHF中的经冷却(-10℃)溶液中添加丙烯酰氯(6.1μL，0.076mmoL)。在-10℃下搅拌反应物5分钟，接着用DIPEA(14μL，0.079mmoL)处理且再搅拌5分钟。将反应混合物分配于水、盐水之间，且分离有机层，且使用硅胶快速色谱法(用含0-100％EtOAc的庚烷梯度洗脱)纯化，获得25mg标题化合物。MSm/z:469.1(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ:8.68(1H,s),8.12(1H,s),7.8(1H,d),7.64(2H,d),7.58(1H,d),7.48(1H,t),7.2(1H,t),7.12(1H,t),6.5(1H,dd),6.3(1H,dd),5.79(1H,dd),4.57(2H,s),3.25(3H,s)。
实例86：合成I-84
如实例31中所述，在步骤2中使用2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)噻唑代替中间物3，制备化合物I-84。MSm/z:544.4(M+H+)。
实例87：合成I-85
如实例7中所述制备化合物I-85。如实例1中所述，在步骤5中使用4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯代替甲胺，制备起始物质。执行最终脱除BOC保护基(如实例3，步骤5中所述)。MSm/z:598.2(M+H+)。
实例88：合成I-86
如实例7中所述制备化合物I-86。如实例1中所述，在步骤5中使用噻唑-4-基甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:612.3(M+H+)。
实例89：合成I-87
如实例7中所述制备化合物I-87。如实例1中所述，在步骤5中使用4-(氨基甲基)吡啶-2-胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:553.4(M+H+)。
实例90：合成I-88
如实例7中所述制备化合物I-88。如实例1中所述，在步骤5中使用氧杂环丁-3-胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:503.4(M+H+)。
实例91：合成I-89(外消旋)
如实例21中所述制备化合物I-89。使用N-(3-((7-氯-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-氧代基-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)甲烷磺酰胺代替中间物2且其如实例1中所述，在步骤5中使用N-(3-(氨基甲基)苯基)甲烷磺酰胺代替甲胺制备。MSm/z:704.3(M+H+)。
实例92：合成I-90
如实例7中所述制备化合物I-90。如实例1中所述，在步骤5中使用3-(氨基甲基)苯甲腈代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:562.5(M+H+)。
实例93：I-91
如实例5中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用噻唑-2-基甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:612.0(M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ:8.07(1H,s),7.11(1H,d),7.51(3H,m),7.23(2H,m),6.90(1H,s),6.45(1H,dd),6.34(1H,dd),5.79(1H,dd),5.50(2H,s),4.67(2H,s),3.96(6H,s)。
实例94：I-92
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用噻唑-2-基甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:618.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:8.00(1H,s),7.70(1H,d),7.52(1H,d),6.92(1H,s),6.32(1H,dd),6.16(1H,d),5.62(1H,dd),5.56(2H,br),4.65(2H,s),3.97(6H,s),1.69(6H,br),1.51(2H,br)。
实例95：合成I-93
如实例116中所述，在步骤2中使用((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯代替((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯制备化合物I-93。如实例1中所述，在步骤5中使用噻唑-2-基甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:618.1(M+H+)。
实例96：合成I-94
如实例116中所述，在步骤2中使用((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯代替((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯制备化合物I-94。起始物质为来自实例1的中间物6。MSm/z:535.1(M+H+)。
实例97：合成I-95
步骤1：中间物2
如实例84中所述，在步骤2中使用6-CF3-HOBT代替HOBT，自中间物6(实例1)制备标题化合物(645mg，MSm/z:570.0(M+H+))。
步骤2：中间物3
如实例84，步骤3中所述，自中间物2制备标题化合物(440mg，MSm/z:581.2(M+H+))。
步骤3：中间物4
向中间物3(440mg，0.76mmol)于10mLDCM中的溶液中添加10mLHCl(二噁烷中4N)且在环境温度下搅拌反应物2小时。减压去除溶剂且所得固体直接用于后续反应中。
步骤4：I-95
如实例84，步骤5中所述制备标题化合物(190mg)。MSm/z:535.1(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ:7.96(1H,s),7.77(1H,d),6.98(1H,s),6.7(1H,brs),6.32(1H,brs),6.04(1H,d),5.55(1H,dd),4.44(2H,s),4.14(2H,m),3.97(6H,s),3.22(3H,s),1.37-1.76(8H,m)。
实例98：合成I-96
如实例7中所述制备化合物I-96。如实例1中所述，在步骤5中使用2-氨基乙酸叔丁酯代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:561.5(M+H+)。
实例99：合成I-97
如实例7中所述制备化合物I-97。如实例1中所述，在步骤5中使用3-(氨基甲基)苯甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:580.4(M+H+)。
实例100：合成I-98
如实例7中所述制备化合物I-98。如实例1中所述，在步骤5中使用环丙基甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:501.5(M+H+)。
实例101：合成I-99
如实例7中所述制备化合物I-99。如实例1中所述，在步骤5中使用2,2-二氟丙-1-胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:511.6(M+H+)。
实例102：I-100
步骤1：中间物2
向125mL密封试管中，向甲苯(50mL，469mmol)中添加3,5-二甲氧基苯胺(2.00g，13.1mmol)。缓慢添加乙酸酐(1.36mL，14.4mmol)且形成沉淀物。将反应物加热到45℃持续30分钟，接着在室温下搅拌反应物隔夜。第二天，用己烷稀释反应物且过滤，用额外己烷冲洗且真空干燥获得2.5g标题化合物。MSm/z:196.2(M+H)+。
步骤2：中间物3
向250mL圆底烧瓶中添加含N-(3,5-二甲氧基苯基)乙酰胺(3.20g，16.4mmol)的DCM(75mL)。使反应混合物冷却到0℃。缓慢添加含N-氯丁二酰亚胺(2.30g，17.2mmol)的25mLDCM且在环境温度下搅拌混合物16小时。浓缩反应物且溶解于己烷-EtOAc的1-1混合物中。过滤所得沉淀物，浓缩滤液，溶解于1:1己烷-EtOAc中且过滤固体获得第二批固体。合并所收集的沉淀物，且通过硅胶(用含25％EtOAc的己烷洗脱)纯化获得1.50g标题化合物。MSm/z:230.2(M+H)+。
步骤3：中间物4
向125mL密封烧瓶中添加含中间物3(1.90g，8.27mmol)的EtOH(50mL，856mmol)，随后添加含氢氧化钾(2.32g，41.4mmol)的10mL水。在95℃下搅拌反应物16小时，随后冷却且浓缩。将所得油状物分配于水与EtOAc之间，经MgSO4干燥有机层，过滤且浓缩获得1.00g标题化合物。MSm/z:188.1(M+H)+。
步骤4：合成中间物5
向密封容器中，添加含中间物4(1.50g，8.00mmol)的DMA(5mL，53.3mmol)，随后添加DIPEA(820μl，8.80mmol)。在环境温度下搅拌反应混合物10分钟，且添加来自实例1的2,4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶(2.31g，8.00mmol)。在60℃下搅拌反应混合物7.5小时，接着在环境温度下搅拌16小时。浓缩反应混合物且与甲苯共沸若干次。添加EtOAc，且用盐水(3×)洗涤有机层。用硫酸钠干燥有机层，浓缩且通过快速柱色谱法(用含5-25％EtOAc的庚烷)纯化获得1.75g标题化合物。MSm/z:348.2(M+H)+。
步骤5：合成中间物6
将中间物5(1.50g，4.30mmol)溶解于1,4-二噁烷(20mL)中。添加环丙基甲胺(612mg，8.61mmol)和DIPEA(1.54mL，8.61mmol)。在35℃下搅拌溶液3小时。添加水(20mL)，且分离有机层，经硫酸镁干燥、过滤且减压浓缩。对残余物进行硅胶色谱法(用DCM洗脱)获得1.17g标题化合物。MSm/z:383.4(M+H)+。
步骤6：中间物7
将中间物6(1.16g，3.03mmol)溶解于DCM(15mL)中。以一份添加三光气(873mg，3.33mmol)。黄色溶液变得部分混浊，接着变回溶液。在环境温度下搅拌混合物30分钟。添加三乙胺(2.11mL，15.13mmol)，且在环境温度下搅拌所得悬浮液18小时。观测到形成氯甲酸酯中间物([M+H]+＝445m/z)。将悬浮液转移到压力容器中且在50℃下再搅拌48小时。使混合物冷却且用水(20mL)和碳酸氢钠饱和水溶液(20mL)洗涤有机相。经硫酸镁干燥有机层，过滤且减压浓缩。对残余物进行硅胶色谱法(含0-5％EtOAC的DCM)获得1.04g标题化合物。MSm/z:409.4(M+H)+。
步骤7：中间物8
将中间物7溶解于1,4-二噁烷(3mL)中，且添加苯-1,2-二胺(52.85mg，489μmol)和TFA(244μmol)。在95℃下搅拌溶液20小时。用EtOAc稀释溶液且用碳酸氢钠饱和水溶液(5mL)和盐水(5mL)洗涤，接着经硫酸钠干燥，过滤且减压浓缩。对残余物进行硅胶色谱法(含5％MeOH的DCM)获得100mg标题化合物。MSm/z:481.5(M+H)+
步骤8：I-100
将中间物8(98.0mg，204μmol)溶解于DCM(2mL)中。添加Et3N(56.8μl，408μmol)，随后添加丙烯酰氯(19.9μl，245μmol)。在环境温度下搅拌溶液30分钟，接着添加MeOH，且减压浓缩反应混合物。经逆相色谱法(用MeOH，接着含1NNH3的甲醇预洗脱)色谱残余物。随后经硅胶(含20-30％EtOAc的DCM)色谱获得21.0mg标题化合物。MSm/z:535.6(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.84(s,1H),8.56(s,1H),8.08(d,1H),7.74(dd,1H),7.57(d,1H),7.19(td,1H),7.12(td,1H),6.76(dd,2H),6.52(dd,1H),6.28(dd,1H),5.78(dd,1H),4.78-4.67(m,1H),4.47(d,1H),4.14-3.93(m,1H),3.87(s,3H),3.79(m,5H),1.17(m,1H),1.01-0.69(m,1H),0.48-0.10(m,4H)。
实例103：I-101
步骤1：中间物2
将来自实例102的中间物7(100mg，244μmol)与顺环己烷-1,2-二胺(69.75mg，610.85μmol)合并且溶解于1,4-二噁烷(3mL)中。在95℃下搅拌溶液20小时。使溶液冷却到环境温度且减压浓缩。对残余物进行硅胶色谱法(3％含MeOH中1NNH3的DCM)获得90mg标题化合物。MSm/z:487.5(M+H)+。
步骤2：I-101
将中间物2(90mg，185μmol)溶解于DCM(2mL)中。添加三乙胺(51.5μl，370μmol)，随后添加丙烯酰氯(18.0μl，222μmol)。在环境温度下搅拌溶液30分钟，然后用MeOH淬灭且减压浓缩。经逆相HPLC色谱残余物，接着硅胶色谱获得标题化合物。MSm/z:541.6(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.95(s,1H),7.74(d,1H),6.78(t,1H),),6.73(d,1H),6.60(brs,1H),6.34(dd,2H),6.04(dd,1H),5.56(dd,1H),4.64(d,1H),4.41(d,1H),4.22(brs,1H),4.05(brs,1H),3.90-3.80(3,7H),1.84-1.03(m,10H),0.92-0.73(m,1H),0.61-0.3(m,4H)。
实例104：合成I-102
如实例7中所述制备化合物I-102。如实例1中所述，在步骤5中使用2-氟丙-1-胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:493.6(M+H+)。
实例105：合成I-103
如实例7中所述制备化合物I-103。如实例1中所述，在步骤5中使用2,2-二氟丙-1-胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:579.5(M+H+)。
实例106：合成I-104
如实例7中所述制备化合物I-104。如实例1中所述，在步骤5中使用2,2-二氟丙-1-胺代替甲胺且在步骤4中使用2-氯-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺，制备起始物质。MSm/z:545.5(M+H+)。
实例107：合成I-105(外消旋)
如实例21中所述制备化合物I-105。使用7-氯-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(2,2-二氟乙基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮代替中间物2且如实例1中所述在步骤5中使用2,2-二氟丙-1-胺代替甲胺制备。MSm/z:585.5(M+H+)。
实例108：合成I-106(外消旋)
如实例21中所述制备化合物I-106。使用7-氯-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(2-氟乙基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮代替中间物2且如实例1中所述在步骤5中使用2-氟丙-1-胺代替甲胺制备。MSm/z:567.5(M+H+)。
实例109：合成I-107(外消旋)
如实例21中所述制备化合物I-107。使用7-氯-3-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(2,2-二氟乙基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮代替中间物2且如实例1中所述在步骤5中使用2,2-二氟丙-1-胺代替甲胺且在步骤4中使用2-氯-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺制备。MSm/z:551.6(M+H+)。
实例110：合成I-108
步骤1：中间物1
向125mL密封试管中，添加含3,5-二甲氧基苯胺(2.00g，13.1mmol)的甲苯(50mL)。添加乙酸酐(1.36mL，14.4mmol)且开始形成沉淀物。将反应物加热到45℃持续30分钟，接着冷却到环境温度且搅拌16小时。用己烷稀释反应混合物且过滤。用额外己烷冲洗固体且真空干燥滤液获得2.50g标题化合物。MSm/z:196.2(M+H)+。
步骤2：中间物2
向125mL圆底烧瓶中添加selectfluor(5.99g，16.9mmol)和MeCN(40mL)且冷却到0℃。在0℃下添加含中间物1(3.00g，15.4mmol)的10mLMeCN且搅拌反应物且升温到环境温度16小时。浓缩反应物，添加EtOAc和H2O，且分离有机层，经MgSO4干燥，过滤且浓缩滤液。对所得残余物进行硅胶(用DCM-EtOAc洗脱)纯化。第二次纯化(用含4％MeOH的DCM洗脱)获得800mg标题化合物。LC.MSm/z:214.2(M+H)+
步骤3：中间物3
向125mL圆底烧瓶中添加含中间物2(700mg，3.28mmol)的EtOH(9.6mL)和含氢氧化钾(918mg，16.4mmol)的4mLH2O，且密封反应物，且在90℃下加热20小时。浓缩反应混合物，添加H2O和EtOAc，且分离有机层，经MgSO4干燥，过滤且浓缩。通过硅胶(用含40％EtOAc的己烷洗脱)纯化所得固体获得450mg标题化合物。LC.MSm/z:172.1(M+H)+。
步骤4：中间物4
向密封容器中添加中间物3(2.38g，13.9mmol)、DMA(20mL)和DIPEA(27.8mmol，2.59mL)。在环境温度下搅拌反应混合物15分钟，然后添加2,4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶(4.02g，13.9mmol)。在50℃下加热反应混合物16小时，然后使其冷却到环境温度，接着分配于NH4Cl饱和水溶液(40mL)与EtOAc(40mL)之间。收集有机相且再用EtOAc(40mL)萃取水相一次。合并有机相，经MgSO4干燥且浓缩。通过硅胶快速色谱法(用含30％EtOAc的己烷洗脱)纯化获得4.07g标题化合物。MSm/z:332.2(M+H)+。
步骤5：中间物5
向中间物4(1.00g，3.00mmol)于二噁烷(10mL)中的溶液中添加DIPEA(0.70mL，7.53mmol)和含2M甲胺的THF(4.52mL，9.03mmol)。将反应混合物加热到50℃持续16小时。添加额外甲胺(9.03mmol，4.52mL)，且在50℃下再搅拌反应混合物16小时。浓缩反应混合物且通过硅胶快速色谱法(用含50％EtOAC的庚烷洗脱)纯化获得570mg标题化合物。MSm/z:327.3(M+H)+。
步骤6：中间物6
在环境温度下，向中间物5(570mg，1.74mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加三光气(1.92mmol，569mg)。在环境温度下搅拌混合物30分钟，然后添加Et3N(0.74mL，5.23mmol)，且在环境温度下搅拌反应混合物5小时。向反应混合物(5mL)中缓慢添加H2O，随后添加NaH2CO3饱和水溶液(20mL)直到达到pH10。
用EtOAc(2×20mL)萃取反应混合物，用盐水洗涤经合并的有机相且经MgSO4干燥，且减压去除溶剂。用Et2O湿磨所得残余物，且过滤固体获得490mg标题化合物。浓缩滤液获得额外100mg标题化合物，其通过硅胶快速色谱法(用含10％EtOAc的DCM洗脱)纯化获得额外20mg标题化合物。MSm/z:353.3(M+H)+。
步骤7：中间物7
在环境温度下，向中间物6(250mg，0.71mmol)于1,4-二噁烷(5mL)中的溶液中添加1,2-苯二胺(230mg，2.3mmol)，随后添加2滴TFA。在95℃下加热反应混合物16小时，然后使其冷却到环境温度，且分配于NH4Cl饱和水溶液(10mL)与EtOAc(20mL)之间。用盐水洗涤有机相，经MgSO4干燥，减压浓缩且通过硅胶快速色谱法(用含20％EtOAc的DCM洗脱)纯化所得残余物获得163mg标题化合物。MSm/z:425.5(M+H)+。
步骤8：I-108
向中间物7(163mg，0.38mmol)于DCM(5mL)中的溶液中添加Et3N(0.05mL，0.38mmol)。使混合物冷却到0℃，且逐滴添加丙烯酰氯(34.8mg，0.38mmol)。在0℃下搅拌反应混合物5分钟，接着升温到环境温度持续30分钟。将反应混合物分配于NH4Cl饱和水溶液(10mL)与EtOAc(20mL)之间。经MgSO4干燥有机相，浓缩，且通过硅胶快速色谱法(用含60％EtOAc的DCM洗脱)纯化残余物获得32mg标题化合物。MSm/z:479.5(M+H)+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.4(s,3H),3.80(s,3H),3.90(s,3H),4.6(s,2H),5.75(d,1H),6.2(m,1H),6.4(m,2H),6.55(d,1H),7.25(m,3H),7.5(s,1H),7.8(s,1H),7.9(s,1H),8.4(s,1H)。
实例111：合成I-109
如实例7中所述制备化合物I-109。如实例1中所述，在步骤5中使用环丙基甲胺代替甲胺且在步骤4中使用2-氟-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺，制备起始物质。MSm/z:519.6(M+H+)。
实例112：合成I-110
如实例7中所述制备化合物I-110。如实例1中所述，在步骤5中使用2-氟丙-1-胺代替甲胺且在步骤4中使用2-氯-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺，制备起始物质。MSm/z:527.5(M+H+)。
实例113：合成I-111(外消旋)
如实例21中所述制备化合物I-111。使用7-氯-3-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(2-氟乙基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮代替中间物2且如实例1中所述在步骤5中使用2-氟丙-1-胺代替甲胺且在步骤4中使用2-氯-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺制备。MSm/z:533.5(M+H+)。
实例114：合成I-112(外消旋)
如实例21中所述，在步骤2中使用顺-环戊烷-1,2-二胺代替顺-环己烷-1,2-二胺，制备化合物I-112。MSm/z:521.3(M+H+)。
实例115：合成I-113(外消旋)
如实例21中所述，在步骤2中使用顺-环己-4-烯-1,2-二胺代替顺-环己烷-1,2-二胺，制备化合物I-113。MSm/z:533.4(M+H+)。
实例116：合成I-114
步骤1：中间物2
根据经修正文献程序(WO2009；PCT/US2009/002401)自中间物1制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用噻唑-4-基甲胺代替甲胺制备中间物1。将中间物1(540mg，1.11mmoL)、HOBT(340mg，2.23mmoL)和NMP(735μL，6.68mmoL)装入12mL二噁烷中；加热到100℃持续2小时。减压去除溶剂，且添加水以引起沉淀，通过过滤去除所得固体且浓缩滤液获得672mg标题化合物，其直接用于下一反应中。MSm/z:585.0(M+H+)。
步骤2：中间物3
将中间物2(672mg，1.15mmoL)、((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(492mg，2.3mmoL)和NMP(400μL，3.67mmoL)于12mLDMF/1.2mLNMP中的溶液加热到100℃持续16小时。减压去除溶剂且对粗产物进行硅胶色谱法(用含0-100％EtOAc的庚烷梯度洗脱)，获得650mg标题化合物。MSm/z:664.1(M+H+)。
步骤3：中间物4
向中间物3(650mg，0.98mmoL)于10mLDCM中的溶液中添加10mLHCl(二噁烷中4N)且在环境温度下搅拌反应物2小时。减压去除溶剂获得标题化合物。MSm/z:564.0(M+H+)。
步骤4：I-114
在冰水/甲醇浴中冷却中间物4(552mg，0.98mmoL)于3mLDMF中的溶液且添加丙烯酸(62μl，0.98mmoL)。向混合物中添加DIPEA(1mL，5.9mmoL)，接着添加HATU(345mg，0.98mmoL)。在环境温度下搅拌反应物15分钟，且通过快速色谱法(用含0-100％丙酮的庚烷梯度洗脱)直接纯化，获得515mg标题化合物。MSm/z:618.0(M+H+)。
实例117：合成I-115
步骤1：中间物1
向1000mL圆底烧瓶中添加selectfluor(13.5g，38.2mmol)和MeCN(400mL)。将悬浮液冷却到0℃，且经10分钟缓慢添加含3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(5.00g，25.5mmol)的最少MeCN。搅拌反应混合物且经2天升温到室温，然后添加碳酸钠饱和水溶液且搅拌反应混合物15分钟，且减压去除MeCN。添加水和EtOAc，且用NaCl饱和水溶液(3×)洗涤有机层。经MgSO4干燥有机层，过滤且干燥浓缩且经硅胶快速色谱法(用含30到50％己烷的DCM洗脱)纯化获得1.0g标题化合物。MSm/z:233.3(M+H+)。
步骤2：合成中间物2
向125mL密封试管中添加含甲基中间物1(1.00g，4.31mmol)和KOH(507mg，9.04mmol)的EtOH(25mL)。将反应混合物加热到90℃持续20小时，接着冷却且浓缩。添加水且用1NHCl处理所得溶液直到达到pH<3。形成白色沉淀物，将其过滤且用水冲洗。将固体溶解于EtOAc中，经MgSO4干燥，且浓缩有机滤液获得600mg标题化合物。MSm/z:219.2(M+H+)。
步骤3：中间物3
向125mL圆底试管中添加含中间物2(0.62g，2.84mmol)、叠氮磷酸二苯酯(647μl，2.98mmol)、Et3N(416μl，2.98mmol)和2-甲基丙-2-醇(299μl，3.13mmol)的甲苯(5mL)且密封反应混合物且加热到70℃持续2小时。冷却反应混合物，且减压去除甲苯。添加EtOAc且依序用Na2CO3饱和水溶液(2×)和NaCl饱和水溶液(2×)洗涤有机相。经MgSO4干燥有机相，浓缩，且通过硅胶(用含100％EtOAc的DCM洗脱)纯化所得残余物获得500mg标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.81(s,1H),6.89(t,1H),3.32(s,6H),1.42(s,9H)。
步骤4：中间物4
向125mL圆底烧瓶中添加中间物3(500mg，1.73mmol)、存于二噁烷中的4NHCl(8.64mL，34.6mmol)且在环境温度下搅拌反应混合物5小时，然后浓缩获得标题化合物的HCl盐。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ6.17(s,2H),3.77(s,6H)。
步骤5：中间物5
向125mL试管中添加存于DMA(4mL)中的中间物4(360mg，1.60mmol)、2,4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶(461mg，1.60mmol)和DIPEA(848μl，4.79mmol)。密封试管且在搅拌下将反应混合物加热到65℃持续4小时，随后冷却，浓缩且与甲苯共蒸发若干次。将所得油状物溶解于EtOAc中，且通过过滤去除固体。浓缩滤液，溶解于DCM中且通过硅胶快速色谱法(用EtOAc/己烷洗脱)纯化获得350mg标题化合物。MSm/z:350.3(M+H+)。
步骤6：中间物6
将中间物5(128mg，365.56μmol)和2,2-二氟乙胺(59.3mg，731μmol)溶解于1,4-二噁烷中。添加DIPEA(131μl，731μmol)且在45℃下搅拌溶液5小时，接着在40℃下搅拌2天。减压浓缩溶液，且经硅胶快速色谱法(于己烷中的30％EtOAc)纯化所得残余物获得105mg标题化合物。MSm/z:395.4(M+H+)。
步骤7：中间物7
将中间物6(103mg，261μmol)溶解于DCM(2mL)中且添加三光气(85.2mg，287μmol)。在环境温度下搅拌溶液1小时。添加Et3N(182μl，1.30mmol)且再搅拌溶液1小时。LCMS显示中间物6消失且形成胺甲酰氯中间物。在50℃下加热反应混合物持续72小时，然后使其冷却到环境温度且添加水(2mL)，随后添加碳酸氢钠饱和水溶液(3mL)。在环境温度下搅拌混合物30分钟，接着用DCM萃取且经MgSO4干燥有机层，过滤且减压浓缩。经硅胶快速色谱法(用DCM洗脱)纯化所得残余物获得80mg标题化合物。MSm/z:421.4(M+H+)。
步骤8：中间物8
将中间物7(32.0mg，76.1μmol)溶解于1,4-二噁烷(0.5mL)中且添加顺-环己烷-1,2-二胺(21.7mg，190μmol)。在密封试管中，在90℃下搅拌溶液18小时，随后减压浓缩且经硅胶快速色谱法(用含10％MeOH的DCM洗脱)纯化所得残余物获得33mg标题化合物。MSm/z:499.6(M+H+)。
步骤9：I-115
将中间物8(30mg，60.2μmol)溶解于DCM中。将溶液冷却到0℃，且添加Et3N(16.8μl，120μmol)，随后添加丙烯酰氯(4.87μl，60.2μmol)。在0℃下搅拌悬浮液45分钟。添加甲醇且减压浓缩所得溶液。对残余物进行硅胶色谱法(用含60％EtOAc的DCM洗脱)获得20mg标题化合物。MSm/z:553.6(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.01(s,1H),7.76(m,1H),7.07(t,1H),7.00-6.60(m,1H),6.48-6.11(m,2H),6.03(dd,1H),5.54(dd,1H),4.57(s,2H),4.37(m,2H),4.18(m,2H),4.09(s,6H),1.86-1.24(m,8H)。
实例118：合成I-116
步骤1：中间物2
将来自实例117的中间物7溶解于1,4-二噁烷(0.5mL)中，且添加苯-1,2-二胺(16.5mg，152μmol)和2滴TFA。密封容器，且在90℃下搅拌溶液18小时，随后减压浓缩反应混合物且经硅胶色谱法(用含60％EtOAc的DCM洗脱)纯化所得残余物获得21.0mg标题化合物。MSm/z:493.5(M+H+)。
步骤2：I-116
将中间物2(20.0mg，40.6μmol)溶解于DCM中且将溶液冷却到0℃。添加Et3N(11.3μl，81.2μmol)，随后添加丙烯酰氯(3.21μl，40.6μmol)。在0℃下搅拌悬浮液1.5小时，随后添加甲醇且减压浓缩混合物。对所得残余物进行硅胶色谱法(含30％EtOAc的DCM)获得11.0mg标题化合物。MSm/z:547.6(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.82(s,1H),8.75(s,1H),8.14(s,1H),7.72(dd,1H),7.65-7.53(m,1H),7.25-7.01(m,3H),6.51(dd,1H),6.40-6.04(m,2H),5.78(dd,1H),4.65(s,2H),4.32(m,2H),3.90(s,6H)。
实例119；合成I-117
步骤1：中间物2
向10mL试管中添加含来自实例1的中间物6(140mg，347μmol)、碳酸钾(240mg，1.73mmol)、BrettPhos(16.2mg，17.3μmol)、1-甲基-1H-吡唑-3,4-二胺二盐酸盐(64.2mg，347μmol)的叔丁醇(6ml，62.7mmol)，且密封反应混合物且用氮气净化。将混合物加热到110℃持续8小时，随后湿气冷却到环境温度且添加水。经过滤收集所得沉淀物。且用DCM萃取滤液。经MgSO4干燥有机层，过滤且浓缩。通过硅胶快速色谱法(MeOH/DCM)纯化经合并的固体获得48.0mg标题化合物。MSm/z:479.4(M+H)+。1HNMR符合单种异构体，尽管2DNMR相互关系未确认形成何种异构体。指派材料的区位化学性，中间物2的指派基于N-甲基吡唑胺降低的亲电子性且材料用于下一步骤。
步骤2：I-117
将中间物2(48.0mg，100μmol)溶解于DCM(1ml)中。将悬浮液冷却到0℃。添加Et3N(27.9μl，200μmol)，随后添加丙烯酰氯(7.92μl，100μmol)。在0℃下搅拌所得悬浮液90分钟。添加甲醇且减压浓缩混合物。经硅胶快速色谱法(含30％DCM的EtOAc)纯化所得残余物获得30.0mg标题化合物。MSm/z:533.5(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),8.95(s,1H),8.10(d,2H),7.01(s,1H),6.53(m,1H),6.36(m,1H),5.82(dd,1H),4.53(s,2H),3.98(s,6H),3.81(s,3H)。
实例120：I-119
如实例116中所述，在步骤2中使用((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯代替((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。MSm/z:618.0(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ:9.01(1H,d),8.0(1H,s),7.69(1H,d),6.99(1H,s),6.3(1H,dd),6.05(1H,dd),5.55(1H,dd),5.26(2H,bs),4.52(2H,s),3.96(6H,s),3.3(4H,m),2.16(4H,m),1.9(4H,m)。
实例121：合成I-120
如实例53中所述，在步骤1中使用乙胺代替环丙胺且在步骤2中代替甲胺，制备化合物I-120。MSm/z:367.3(M+H+)。
实例122：合成I-121
如实例7中所述制备化合物I-121。如实例1中所述，在步骤5中使用(1H-吡唑-4-基)甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:527.5(M+H+)。
实例123；合成I-122
步骤1，中间物2
在110℃下加热含中间物1(57.0mg，0.034mmol)和PMB-NH2(0.13mL，1.01mmol)的DMF(2.0mL)4小时。真空去除DMF，且将所得残余物溶解于DCM(5mL)中，随后添加AcOH(0.1mL)和N-乙基哌嗪(0.10mL，7.90mmol)。1小时后，添加NaHB(OAc)3(100mg，0.47mmol)且搅拌反应物16小时。添加EtOAc且用NaHCO3饱和水溶液和盐水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。硅胶快速色谱法获得80mg标题化合物。MSm/z:385.2(M+H+)。
步骤2：中间物3
在环境温度下用含20体积％TFA的DCM处理中间物2(80.0mg，0.21mmol)且搅拌反应混合物30分钟。真空浓缩反应混合物，且用二氧化硅支撑的碳酸盐处理所得残余物，过滤且浓缩获得定量产量的标题化合物，其未经进一步纯化即使用。MSm/z:265.2(M+H+)。
步骤3，中间物4
向中间物3(56.0mg，0.21mmol)于DMF(4.0mL)中的溶液中添加(Boc)2O(100mg，0.46mmol)和DMAP(10.0mg，0.08mmol)。在环境温度下搅拌反应物隔夜。在减压下去除DMF，且通过硅胶色谱法分离产物(98.0mg)。MSm/z:465.3(M+H+)。
步骤4，中间物5
在0℃下，向中间物4(98.0mg，0.21mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中添加NiCl2-6H2O和NaBH4。30分钟后，通过添加水淬灭反应物，经硅藻土过滤，且浓缩获得62.0mg标题化合物，其未经进一步纯化即使用。MSm/z:335.3(M+H+)。
步骤5：I-122
如实例5中所述，使用来自实例1的中间物5制备标题化合物。MSm/z:587.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:8.00(1H,s),7.79(1H,d),7.64(1H,s),7.55(1H,d),7.29(1H,dd),6.53(2H,s),6.45(2H,m),5.81(1H,dd),4.71(2H,s),3.78(6H,s),3.77(2H,s),3.35(3H,s),3.35(4H,d)3.30(4H,d)3.19(2H,q),1.32(3H,t)。
实例124：合成I-123
如实例128中所述，在步骤2中使用丁二酸代替N-生物素基-NH-(PEG)2-COOH，制备化合物I-123。MSm/z:713.5(M+H+)。
实例125：合成I-124
如实例7中所述制备化合物I-124。如实例1中所述，在步骤5中使用4-(氨基甲基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯代替甲胺，制备起始物质。执行最终脱除BOC保护基步骤(如实例3，步骤5中所述)。MSm/z:595.4(M+H+)。
实例126：合成I-125
如实例7中所述制备化合物I-125。如实例1中所述，在步骤5中使用氨代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:447.4(M+H+)。
实例127：合成I-126
步骤1：中间物2
向中间物1(2.00g，28.53mmol)于50mL丙酮/H2O(4:1)中的溶液中添加NMO(10g，50％水溶液，42.7mmol)和K2OsO4·2H2O(210mg，0.57mmol)。在环境温度下搅拌反应混合物16小时。添加Na2SO3(8.0g)且搅拌所得混合物10分钟。将反应混合物蒸发到干燥且将残余物溶解于EtOAc。过滤所得悬浮液且将滤液蒸发到干燥获得2.50g标题化合物。
步骤2：中间物3
向中间物2(2.50g，24.0mmol)和Et3N(12.2g，121mmol)于DCM(50mL)中的冰冷却溶液中添加甲烷磺酰氯(13.8g，121mmol)。在0℃下搅拌混合物30分钟。添加Na2CO3饱和水溶液且将反应混合物分配于DCM与水之间。分离有机层，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥且蒸发。用乙醇再结晶粗固体获得4.83g标题化合物。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.15(s,6H),3.98-4.02(m,2H),4.14-4.19(m,2H),5.18-5.21(m,2H)。
步骤3：中间物4
向中间物3(4.83g，18.6mmol)于DMF(50mL)中的溶液中添加15-冠-5(0.40g，1.82mmol)和NaN3(6.03g，92.8mmol)。在N2下，将混合物加热到100℃隔夜。用EtOAc稀释反应混合物，用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥且蒸发到干燥获得2.60g标题化合物。
步骤4：中间物5
向中间物4(2.60g，16.9mmol)于MeOH(15mL)中的溶液中添加Pd/C(10重量％，0.78g)且在环境温度下搅拌反应混合物16小时。过滤反应混合物且浓缩滤液获得1.45g标题化合物，其未经进一步纯化即使用。
步骤5：中间物6
向中间物5(0.90g，8.81mmol)和来自实例1的中间物6(1.42g，0.40当量)于NMP(10mL)中的溶液中添加DIPEA(2.30g，17.8mmol)。在氮气下，在100℃下加热反应混合物16小时。使反应混合物冷却到环境温度，添加水，且用EtOAc(40mL×3)萃取水层。干燥(无水Na2SO4)经合并的有机层，过滤且浓缩。通过硅胶柱色谱法(含5％MeOH的DCM)纯化获得162mg标题化合物。MSm/z:469.4(M+H)+。
步骤9：I-126
向中间物6(162mg，0.35mmol)和Et3N(37.5mg，0.41mmol)于DCM(10mL)中的冰冷却溶液中添加丙烯酰氯(41.9mg，0.41mmol)。在0℃下搅拌混合物10分钟。用NaHCO3饱和水溶液淬灭反应混合物且用EtOAc萃取所得混合物。干燥有机相，浓缩，且通过硅胶柱色谱法(含3％MeOH的DCM)纯化残余物获得112mg标题化合物。MSm/z:523.4(M+H)+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:3.39(s,3H),3.71-3.81(m,2H),3.94(s,6H),4.17-4.21(m,2H),4.52(s,2H),4.73-4.79(m,2H),5.62-5.65(m,2H),6.02-6.07(m,1H),6.26(d,1H),6.32(br,1H),6.60(s,1H),7.84(s,1H)。
实例128：合成I-127
向I-62(30.0mg，0.042mmol)于2mLDCM中的溶液中添加200μLTFA，且在环境温度下搅拌反应混合物1小时。减压去除溶剂且将所得固体溶解于300μlDMF中。向这一溶液中添加N-生物素基-NH-(PEG)2-COOH.DIPEA(35mg，0.049mmol)、HOBT(7mg，0.046mmol)、EDC(9mg，0.046mmol)和NMM(30μL，0.28mmol)，且在环境温度下搅拌混合物16小时。通过逆相制备型HPLC(用含10-90％MeCN的具有0.1％TFA水溶液的H2O梯度洗脱)纯化粗产物，获得22mg标题化合物。MSm/z:1155.3(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ:9.73(1H,s),8.05(1H,s),7.77(2H,m),7.47(1H,d),7.3(1H,s),7.0(1H,s),6.86(1H,dd),6.5(1H,dd),6.45(1H,brs),6.25(1H,dd),5.77(1H,dd),4.51(2H,s),4.3(1H,m),4.1-3.0(31H,m),2.8(1H,dd),2.34(3H,m),2.08(5H,tt),1.73(3H,m),1.6(6H,m),1.5-1.2(8H,m)。
实例129：合成I-128
步骤1：中间物2
根据文献程序(WO01/19825；PCT/US00/17037；WO2008/051820；PCT/US2007/081899)自中间物1制备标题化合物。
步骤2：中间物3
将中间物2(200mg，1.04mmol)和mono-BOC苯二胺(450mg，2.07mmol)于9mL1:2THF/IPA中的溶液加热到100℃持续1小时。减压去除溶剂且将反应混合物分配于水与EtOAc之间。经Na2SO4干燥有机层，过滤且减压浓缩。对粗产物进行硅胶色谱法(用含0-50％EtOAc的庚烷梯度洗脱)，获得150mg标题化合物。MSm/z:361.1(M+H+)
步骤3：中间物4
向中间物3(250mg，0.69mmol)于6mL二噁烷中的溶液中添加亚硫酸氢钠(1.5g，12mL水中8.68mmol)和500μl浓氢氧化铵。用超声波处理所形成的固体直到获得溶液。浓缩溶液且分配于盐水与EtOAc之间；用Na2SO4干燥有机层，过滤且减压去除溶剂获得260mg标题化合物。MSm/z:331.1(M+H+)
步骤4：中间物5
使中间物4(260mg，0.79mmol)和2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-氧代基乙酸乙酯(220mg，0.94mmol)于含有400μl乙酸的10mLEtOH中的溶液回流16小时。过滤所形成的固体获得150mg标题化合物。MSm/z:505.2(M+H+)
步骤6：I-128
向中间物5(150mg，0.3mmol)于10mLDCM中的溶液中添加2mLTFA，且在环境温度下搅拌反应混合物2小时。减压去除溶剂且分配于冷(0℃)饱和NaHCO3与EtOAc之间。过滤所形成的固体获得122mg游离胺中间物。MSm/z:405.2(M+H+)。接着将固体悬浮于5mLTHF和500μLDMF中，且在冰水/甲醇浴中冷却溶液。添加丙烯酰氯(20μL，0.23mmol)且在-10℃下搅拌反应混合物5分钟，然后用DIPEA(50μL，0.276mmol)处理且在环境温度下搅拌30分钟。减少溶剂体积，且对粗产物进行硅胶色谱法(用含0-75％EtOAc的庚烷梯度洗脱)。通过逆相制备型HPLC(用含10-90％乙腈的具有0.1％TFA水溶液的H2O梯度洗脱)进一步纯化标题化合物，获得10mg标题化合物。MSm/z:459.0(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ:9.87(1H,s),9.43(1H,s),8.87(1H,s),7.81(1H,d),7.649(1H,d),7.408(2H,d),7.25(2H,m),6.64(1H,dd),6.5(1H,dd),6.3(1H,dd),5.78(1H,dd),3.8(6H,s),3.50(3H,s)。
实例130：合成I-129(外消旋)
如实例21中所述制备化合物I-129。使用7-氯-1-(环丙基甲基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮代替中间物2且其如实例1中所述在步骤5中使用环丙基甲胺代替甲胺制备。MSm/z:575.5(M+H+)。
实例131：合成I-130
如实例7中所述制备化合物I-130。如实例1中所述，在步骤5中使用环丙基甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:569.5(M+H+)。
实例132：合成I-131
如实例7中所述制备化合物I-131。如实例1中所述，在步骤4中使用2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺，制备起始物质。MSm/z:497.5(M+H+)。
实例133：合成I-132
步骤1：中间物3
在1,4-二噁烷(5mL)中合并来自实例1的中间物4(380mg，1.21mmol)、中间物2(如US7713994中所述制备)(251mg，1.81mmol)和DIPEA(642μl，3.63mmol)。密封反应容器，且加热到50℃持续16小时，随后浓缩且将所得残余物溶解于DCM中。过滤固体且经硅胶快速色谱法(用含1-5％MeOH的EtOAc洗脱)纯化滤液获得160mg具有20％区位异构体杂质的标题化合物，其未经进一步纯化即使用。MSm/z:416.4(M+H+)。
步骤4：中间物4
在THF(5mL)中合并中间物3(160mg，385μmol)和三光气(120mg，404μmol)且搅拌30分钟。添加Et3N(154μl，1.15mmol)且将反应物加热到50℃持续16小时，随后冷却到环境温度且经硅胶快速色谱法(用MeOH/DCM洗脱)纯化所得残余物获得60mg标题化合物。MSm/z:442.4(M+H+)。
步骤5：中间物5
将中间物4(56mg，127μmol)溶解于MeCN(0.3mL)和DCM(0.3mL)中。将溶液冷却到0℃且添加二硫酰氯(20.6μl，254μmol)。在0℃下搅拌混合物2小时。添加水，随后添加碳酸氢钠饱和水溶液，且在环境温度下再搅拌混合物20分钟。用DCM萃取反应混合物，且经MgSO4干燥经合并的有机层，且减压浓缩且通过硅胶快速色谱法(用含30％EtOAc的DCM洗脱)纯化获得16mg标题化合物。MSm/z:510(M+H+)。
步骤6：中间物6
将中间物5(16.0mg，31.3μmol)悬浮于1,4-二噁烷(0.5mL)中且添加(顺)-环己烷-1,2-二胺(7.15mg，62.3μmol)和Et3N(13.1μl，94.0μmol)。在95℃下搅拌所得悬浮液6小时，随后减压浓缩反应混合物且通过硅胶快速色谱法(用含15％MeOH的DCM洗脱)纯化所得残余物获得15.0mg标题化合物。
步骤7：I-132
将中间物6(15.0mg，25.5μmol)悬浮于DCM(0.25mL)中且添加Et3N(7.11μg，51.0μmol)。将混合物冷却到0℃且添加丙烯酰氯(1.60μl，25.5μmol)。在0℃下搅拌混合物30分钟，接着添加MeOH(3mL)。减压浓缩溶液，且经硅胶快速色谱法(含10％MeOH的DCM)纯化所得残余物获得5mg标题化合物。MSm/z:642.6(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.01(m,1H),7.68(d,1H),7.61(d,1H),7.00(s,1H),6.74(m,1H),6.40-6.23(m,1H),6.17-5.98(m,3H),5.54(dt,1H),4.91(s,2H),4.53(s,2H),3.96(s,5H),4.01(m,1H),3.36(s,6H),1.87-1.11(m,8H)。
实例134：合成I-133
如实例21中所述制备化合物I-133。使用1-((2-氨基吡啶-4-基)甲基)-7-氯-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮代替中间物2且其如实例1中所述在步骤5中使用4-(氨基甲基)吡啶-2-胺代替甲胺制备。MSm/z:627.5(M+H+)。
中间物135：合成I-134
如实例7中所述制备化合物I-134。如实例1中所述，在步骤5中使用(2-甲基噻唑-4-基)甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:626.4(M+H+)。
实例136：合成I-135
如实例7中所述制备化合物I-135。如实例1中所述，在步骤5中使用4-(氨基甲基)吡啶-2-胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:621.4(M+H+)。
实例137：合成I-136
如实例7中所述制备化合物I-136。如实例1中所述，在步骤5中使用(1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:609.4(M+H+)。
实例138：合成I-137
如实例21中所述制备化合物I-137。使用7-氯-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-((2-甲基噻唑-4-基)甲基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮代替中间物2且如实例1中所述在步骤5中使用(2-甲基噻唑-4-基)甲胺代替甲胺制备。MSm/z:632.5(M+H+)。
中间物139：合成I-138(外消旋)
如实例21中所述，在步骤2中使用顺-1-甲基吡咯烷-3,4-二胺代替顺-环己烷-1,2-二胺，制备化合物I-138。MSm/z:536.4(M+H+)。
实例140：合成I-139(外消旋)
如实例21中所述，在步骤2中使用顺-1-(3,4-二氨基吡咯烷-1-基)乙酮代替顺-环己烷-1,2-二胺制备化合物I-139。MSm/z:564.5(M+H+)。
实例141：合成I-140
如实例84中所述，在步骤3中使用((3R,4R)-4-氨基四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯代替((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸酯，且以来自实例1的中间物6的衍生物(在步骤5中使用苯甲胺代替甲胺制备)为起始物质，制备标题化合物(2mg)。MSm/z:537.2(M+H+)。
实例142：合成I-141
如实例29中所述，在步骤2中使用1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1H-吡唑代替中间物3且在步骤4中使用来自实例1的共用中间物6，制备化合物I-141。MSm/z:609.4(M+H+)。
实例143：合成I-142
步骤1：I-142
将来自实例4的中间物2(43.0mg，90.5μmol)悬浮于DCM(1mL)中且添加Et3N(37.8μl，272μmol)。将悬浮液冷却到0℃且添加甲基丙烯酰氯(9.81μl，99.5μmol)。在0℃下搅拌反应混合物45分钟，在0℃下添加甲醇，且减压浓缩反应混合物。经硅胶快速色谱法(含5％EtOAc的DCM)纯化所得残余物获得3.4mg标题化合物。MSm/z:543.5(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),8.71(s,1H),8.11(d,1H),7.74(dd,1H),7.50(dd,1H),7.17(ddd,2H),7.00(s,1H),5.80(m,1H),5.52(t,1H),4.52(s,2H),3.96(s,6H),3.22(s,3H),1.94(s,3H)。
实例144：I-143
如实例84中所述，自步骤2开始，制备标题化合物。如实例117，中间物7中所述，在步骤6中用甲胺代替2,2-二氟乙胺，制备中间物2。MSm/z:503.1(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ:7.94(1H,s),6.96(1H,t),6.29(1H,br),6.19(1H,dd),5.64(1H,dd),4.65(2H,s),4.44(2H,br),3.92(6H,s),3.42(3H,s),1.78(6H,br),1.56(2H,br)。
实例145：合成I-144
如实例7中所述制备化合物I-144。如实例1中所述，在步骤5中使用(5-(氨基甲基)-2-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯代替甲胺，制备起始物质。执行最终脱除BOC保护基步骤(如实例3，步骤5中所述)。MSm/z:638.5(M+H+)。
实例146：合成I-145
如实例17中所述，使用4-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-2-硝基苯胺(Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,18(18),4997-5001；2008)代替中间物1，且跳过步骤2，制备化合物I-145。MSm/z:611.4(M+H+)。
实例147：合成I-146
如实例17中所述，使用4-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-2-硝基苯胺(生物有机化学与医药化学快报(Bioorganic&MedicinalChemistryLetters),18(18))代替中间物1，使用来自实例1的中间物5且跳过步骤2，制备化合物I-146。MSm/z:543.5(M+H+)。
实例148：合成I-147
如实例116中所述制备化合物I-147。如实例1中所述，在步骤5中使用(1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:615.5(M+H+)。
实例149：合成I-148
如实例116中所述制备化合物I-148。如实例1中所述，在步骤5中使用(1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:605.6(M+H+)。
实例150：合成I-149
如实例7中所述制备化合物I-149。如实例1中所述，在步骤5中使用(1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲胺代替甲胺，制备起始物质。MSm/z:522.6(M+H+)。
实例151：合成I-150
如实例7中所述制备化合物I-150。在步骤1中使用(2-氨基-5-((1-甲基哌啶-4-基)胺甲酰基)苯基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。MSm/z:669.5(M+H+)。
实例152：合成I-151
如实例7中所述制备化合物I-151。在步骤1中使用(2-氨基-5-((1-甲基哌啶-3-基)胺甲酰基)苯基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺。MSm/z:601.5(M+H+)。
实例153：合成I-152
如实例116中所述制备化合物I-152。如实例1中所述，在步骤5中使用4-(氨基甲基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯代替甲胺，制备起始物质。如实例3，步骤5中所述执行最终脱除BOC保护基步骤。MSm/z:601.4(M+H+)。
实例154：合成I-153
如实例17中所述，使用4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)-2-硝基苯胺(如2007年6月14日的PCT国际申请案2007066201中所述制备)代替中间物1，且跳过步骤2，制备化合物I-154。MSm/z:611.4(M+H+)。
实例155：合成I-154(外消旋)
如实例7中所述制备化合物I-155。在步骤1中使用顺-1-(1-甲基哌啶-4-基)吡咯烷-3,4-二胺代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。MSm/z:547.1(M+H+)。
实例156：I-155
中间物7
根据文献(药物化学杂志(J.Med.Chem.)2005,48,4628-4653)且如上文流程中所述制备标题化合物。
如实例7步骤2中所述，自中间物7制备标题化合物。MSm/z:443.1(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ.9.92(1H,brs),9.51(1H,brs),8.99(1H,s),8.15(2H,brs),7.76-7.67(2H,m),7.26-7.26(2H,m),6.64-6.62(4H,m),6.62(1H,dd),6.28(1H,dd),5.78(1H,dd)。
实例157：合成I-156
如实例116中所述制备化合物I-156。如实例1中所述，在步骤5中使用3-(氨基甲基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯代替甲胺，制备起始物质。如实例3，步骤5中所述执行最终脱除BOC保护基步骤。MSm/z:601.4(M+H+)。
实例158：合成I-157
如实例7中所述制备化合物I-157。如实例1中所述，在步骤5中使用5-(氨基甲基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯代替甲胺，制备起始物质。如实例3，步骤5中所述执行最终脱除BOC保护基步骤。MSm/z:595.4(M+H+)。
实例159：合成I-158
如实例17中所述，使用4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)-2-硝基苯胺(如2007年6月14日的PCT国际申请案2007066201中所述制备)代替中间物1，来自实例1的中间物5代替中间物6且跳过步骤2，制备化合物I-158。MSm/z:543.5(M+H+)。
实例160：合成I-159(外消旋)
如实例7中所述制备化合物I-159。在步骤1中使用顺-3,4-二氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。MSm/z:622.5(M+H+)。
实例161：合成I-160(外消旋)
如实例7中所述制备化合物I-160。在步骤1中使用(2-((顺)-3,4-二氨基吡咯烷-1-基)-2-氧代基乙基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。如实例3，步骤5中所述执行最终脱除BOC保护基步骤。MSm/z:579.5(M+H+)。
实例162：合成I-161(外消旋)
如实例7中所述制备化合物I-161。在步骤1中使用1-((顺)-3,4-二氨基吡咯烷-1-基)-2-羟基乙酮代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。MSm/z:580.4(M+H+)。
实例163：合成I-162
如实例116中所述，在步骤2中使用((1S,2R)-2-氨基环戊基)氨基甲酸叔丁酯代替((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯，且以来自实例1的中间物6为起始物质，制备化合物I-162。MSm/z:521.1(M+H+)。
实例164：合成I-163
如实例7中所述制备化合物I-163。如实例1中所述，在步骤5中使用5-(氨基甲基)-1H-咪唑-1-甲酸叔丁酯代替甲胺，制备起始物质。如实例3，步骤5中所述执行最终脱除BOC保护基步骤。MSm/z:595.4(M+H+)。
实例165：合成I-164
如实例7中所述制备化合物I-164。在步骤1中使用((顺)-3,4-二氨基吡咯烷-1-基)(1-甲基哌啶-4-基)甲酮代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。MSm/z:647.5(M+H+)。
实例166：合成I-165
向来自实例178的中间物10(86.0mg，0.13mmoL)于2mLDCM中的溶液中添加200μLHCl(二噁烷中4N)且在室温下搅拌反应物30分钟。减压去除溶剂获得胺盐酸盐。MSm/z:553.2(M+H+)。在冰水/甲醇浴中冷却盐和丙烯酸(10μL，0.13mmoL)于500μLDMF中的溶液。向混合物中添加DIEA(130μL，0.74mmol)，接着添加HATU(55mg，0.13mmol)。在室温下搅拌反应物15分钟，且通过快速色谱法(用含0-70％丙酮的庚烷梯度洗脱)直接纯化，获得36mg标题化合物。MSm/z:607.1(M+H+)。
实例167：合成I-166(外消旋)
如实例7中所述制备化合物I-166。在步骤1中使用((顺)-3,4-二氨基吡咯烷-1-基)(1-甲基哌啶-2-基)甲酮代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。MSm/z:647.5(M+H+)。
实例168：合成I-167(外消旋)
如实例7中所述制备化合物I-167。在步骤1中使用((顺)-3,4-二氨基吡咯烷-1-基)(1-甲基哌啶-3-基)甲酮代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。MSm/z:647.5(M+H+)。
实例169：合成I-168
向来自实例166的I-165(34.0mg，0.06mmoL)于各500μlIPA、THF和水中的溶液添加单水合LiOH(7.50mg，0.18mmoL)，且在环境温度下搅拌反应混合物2小时。减压去除溶剂且用2滴3NHCl处理所得残余物引起沉淀。过滤沉淀物且干燥获得14.0mg标题化合物。MSm/z:579.2(M+H+)。
实例170：合成I-169
如实例116中所述制备化合物I-169。如实例1中所述，在步骤4中使用3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7，制备起始物质。MSm/z:505.5(M+H+)。
实例171：合成I-170(外消旋)
如实例7中所述制备化合物I-170。在步骤1中使用(顺)-1-(吡啶-2-基)吡咯烷-3,4-二胺代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。MSm/z:559.4(M+H+)。
实例172：合成I-171
如实例116中所述制备化合物I-171。如实例1中所述，在步骤5中使用5-(氨基甲基)-1H-咪唑-1-甲酸叔丁酯代替甲胺，制备起始物质。如实例3，步骤5中所述执行最终脱除BOC保护基步骤。MSm/z:601.4(M+H+)。
实例173：合成I-172(外消旋)
如实例174中所述且跳过步骤4制备化合物I-172。MSm/z:463.2(M+H+)。
实例174：合成I-173
步骤1-2：中间物2
在110℃下加热中间物1(WO2009153313)(102mg，0.37mmol)和顺-1,2-二氨基环己烷(0.20mL，1.67mmol)于二噁烷(2.0mL)中的混合物16小时。使反应混合物冷却到环境温度，浓缩到干燥，溶解于DCM(20mL)中且且环境温度下用(Boc)2O(1.20g)处理，接着搅拌隔夜。接着浓缩粗反应物且进行硅胶快速色谱法(0-100％EtOAc/己烷)获得50mg标题化合物。MS:452.2[M+H]+
步骤3：中间物3
在二噁烷(3mL)和2.0MNa2CO3水溶液(0.7mL)中合并中间物2(50.0mg，0.110mmol)和2-(3,5-二甲氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(60.0mg，0.22mmol)，和Pd(dppf)Cl2(10.0mg，0.014mmol)。在微波反应器中，在120℃下加热混合物30分钟。用EtOAc稀释反应混合物，用NaHCO3饱和水溶液、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化所得残余物获得48mg标题化合物。MSm/z:509.4(M+H+)。
步骤4-5：中间物4
将中间物3(40.0mg，0.079mmol)溶解于DCM(2mL)和MeCN(2mL)中。在0℃下，添加SO2Cl2(13μL，0.16mmol)且将反应物保持于0℃下2.5小时。去除溶剂后，在室温下用20％TFA/DCM(4.0mL)处理粗混合物30分钟。蒸发所有挥发物后，将残余物溶解于DCM中且用二氧化硅支撑的碳酸盐处理使碱性胺游离。过滤且浓缩后，获得定量产物且粗产物原样用于下一步骤中。MSm/z:477.4(M+H+)。
步骤6：I-173
将中间物4(40mg，0.088mmol)溶解于THF(3.0mL)中且冷却到-10℃。添加丙烯酰氯(7.2μL，0.088mmol)且在-10℃下搅拌反应混合物10分钟。浓缩反应混合物且将所得残余物溶解于DMSO中且通过制备型HPLC纯化。MSm/z:531.2(M+H+)。1HNMR(400MHz,CD3OD):9.25(1H,s),8.15(1H,s),7.77(1H,s),6.91(1H,s),6.36(1H,dd),6.16(1H,dd),5.62(1H,dd),4.56(2H,m),3.97(6H,s),3.95(3H,s),1.86(6H,m),1.60(2H,m)。
实例175：合成I-174(外消旋)
如实例7中所述制备化合物I-174。在步骤1中使用((反)-4-氨基-6-氧代基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。如实例3，步骤5中所述执行最终脱除BOC保护基步骤。MSm/z:550.4(M+H+)。
实例176：合成I-175
如实例102中所述制备标题化合物，其中氯嘧啶环脲中间物(实例102中中间物7的等效物)如实例102中所述，在步骤5中使用2-氯-6-氟-3,5-二甲氧基苯胺代替中间物4，使用甲胺代替环丙基甲胺，且在步骤7中使用((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯代替1,2-苯二胺制备。MSm/z:519.4(M+H)+。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.81(s,1H),6.63(d,1H),6.23(ddd,1H),6.03(ddd,1H),5.59(ddd,1H),4.52(d,2H),4.41(s,1H),4.17(d,1H),3.92(d,6H),3.38(s,3H),2.00-1.00(m,9H)。
实例177：合成I-176
如实例116中所述制备化合物I-176。如实例1中所述，在步骤4中使用4-甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7，制备起始物质。MSm/z:437.4(M+H+)。
实例178：合成I-177
步骤1：中间物10
根据文献且如上文流程中所述制备标题化合物。将中间物8(US2005/0020645A1；生物有机化学与医药化学(Bioorganic&MedicinalChemistry),2009,17,1193-1206)(45.0mg，0.16mmoL)、如实例116中所述的方式使用来自实例1的中间物6制备的中间物9(45mg，0.08mmoL)、NMM(26μL，0.24mmoL)于1mL二噁烷和100μLNMP中的溶液加热到100℃持续16小时。减压去除溶剂且通过硅胶快速色谱法(用含0-100％EtOAc的庚烷梯度洗脱)纯化所得残余物，获得40mg标题化合物。MSm/z:653.2(M+H+)。
步骤2：中间物11
向中间物10(100mg，0.15mmoL)于1mLTHF和500μL水中的溶液中添加单水合LiOH(20.0mg，0.46mmoL)，且在60℃下搅拌反应物2小时。减压去除溶剂且用5滴3NHCl处理所得残余物引起沉淀。过滤沉淀物且干燥获得50mg标题化合物。MSm/z:625.1(M+H+)。
步骤3：中间物12
向中间物11(50mg，0.08mmoL)于500μLTHF中的溶液中添加HATU(30.0mg，0.08mmoL)、NMM(26μL，0.24mmoL)和过量乙胺(THF中2M，5mL)。在环境温度下搅拌反应混合物5天。减压去除溶剂且通过硅胶快速色谱法(用含0-100％丙酮的庚烷梯度洗脱)纯化所得残余物，获得25.0mg标题化合物。MSm/z:652.2(M+H+)。
步骤4和5：I-177
向中间物12(25mg，0.04mmol)于5mLDCM中的溶液中添加1mLHCl(二噁烷中4N)且在环境温度下搅拌反应物30分钟。减压去除溶剂获得中间物12的胺盐酸盐，MSm/z:552.2(M+H+)，将其溶解于500μLDMF中且添加丙烯酸(2.4μl，0.04mmoL)。在冰水/甲醇浴中冷却反应混合物且添加DIPEA(40μL，0.21mmoL)，随后添加HATU(14.0mg，0.04mmol)。在环境温度下搅拌反应混合物15分钟，接着通过制备型HPLC(用10-90％含有0.1％TFA和MeCN的水梯度洗脱)纯化，获得7.0mg标题化合物。MSm/z:606.2(M+H+)。
实例180：合成I-179
如实例3中所述制备标题化合物。在步骤1中使用3-氨基苯甲基氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺，且跳过步骤2的Boc保护。MSm/z:690.2(M+H+)。
实例181：合成I-180
如实例3中所述制备标题化合物。在步骤1中使用3-氨基苯甲基氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺。在步骤2之前执行脱除BOC保护基步骤(如实例3，步骤5中所述)。MSm/z:690.1(M+H+)。
实例182：合成I-181
如实例7中所述制备标题化合物。在步骤1中使用3-氨基苯甲基氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。在步骤2之前执行脱除BOC保护基步骤(如实例3，步骤5中所述的脱除BOC保护基)。MSm/z:543.3(M+H+)。
实例183：合成I-182(外消旋)
如实例7中所述制备标题化合物。在步骤1中使用4,5-二甲氧基环己烷-顺-1,2-二胺代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。MSm/z:595.5(M+H+)。
实例184：合成I-183(外消旋)
如实例7中所述制备标题化合物。在步骤1中使用顺-1-(吡嗪-3-基)吡咯烷-3,4-二胺代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。MSm/z:600.4(M+H+)。
实例185：合成I-184(外消旋)
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用2-氯-6-氟-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7制备起始物质。MSm/z:519.4(M+H+)。
实例186：手性分离I-185与I-186
手性分离I-126(ChiralpakIA，250mm×4.6mmID，5μm，0.4mL/min，含30％庚烷的EtOH)获得Rt＝23和31min的两种对映异构体，其分别指派为绝对构型I-186和I-185(>98％ee)。基于酶促和细胞功效类似于I-94和I-95指派绝对构型。
I-185：MSm/z:523.5(M+H+)，[α]D＝-20(C＝1.00mg/mL,CH2Cl2,23℃)，1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:3.39(s,3H),3.71-3.81(m,2H),3.94(s,6H),4.17-4.21(m,2H),4.52(s,2H),4.73-4.79(m,2H),5.62-5.65(m,2H),6.02-6.07(m,1H),6.26(d,1H),6.32(br,1H),6.60(s,1H),7.84(s,1H)。
I-186：MSm/z:523.5(M+H+)，[α]D＝+38(C＝1.00mg/mL,CH2Cl2,23℃)，1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:3.39(s,3H),3.71-3.81(m,2H),3.94(s,6H),4.17-4.21(m,2H),4.52(s,2H),4.73-4.79(m,2H),5.62-5.65(m,2H),6.02-6.07(m,1H),6.26(d,1H),6.32(br,1H),6.60(s,1H),7.84(s,1H)。
通过根据下文流程的对映选择性合成确认的I-186绝对构型。根据文献(JACS,1995,117,5897-5898)且如实例226中所述制备N-((3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-基)丙烯酰胺，且在实例127中用于代替顺-四氢呋喃-3,4-二胺。
I-186的立体化学证据和对映选择性合成
根据实例226中所述的程序合成中间物7(上文流程)。通过与来自实例127的中间物6偶合，随后使用如实例127中所述的程序脱除Boc保护基和丙烯酰胺形成，使用中间物7制备I-186。I-186：MSm/z:523.5(M+H+)，1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:3.39(s,3H),3.71-3.81(m,2H),3.94(s,6H),4.17-4.21(m,2H),4.52(s,2H),4.73-4.79(m,2H),5.65(dd,1H),6.02-6.07(m,1H),6.26(d,1H),6.32(br,1H),6.60(s,1H),7.84(s,1H)。
实例187：合成
使用本文所述的技术，制备以下化合物。对于制备为外消旋或非对映异构混合物形式的化合物，可通过采用手性起始物质或执行手性色谱法制备光学纯形式的单个异构体。
化合物I-187
如实例7中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用4-氨基双环并[2.2.2]辛-1-醇代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7，制备起始物质。
化合物I-188
如实例7中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用4-氨基双环并[2.2.2]辛-1-醇代替3,5-二甲氧基苯胺，在步骤5中使用苯甲胺代替甲胺且跳过步骤7，制备起始物质。
化合物I-189
如实例7中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用4-氨基双环并[2.2.2]辛-1-醇代替3,5-二甲氧基苯胺，在步骤5中使用环丙胺代替甲胺且跳过步骤7，制备起始物质。
化合物I-190
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用3-(氨基甲基)苯磺酰胺代替甲胺，制备起始物质。
化合物I-191
如实例7中所述，在步骤1中使用(2-氨基-5-(4-乙基哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺，使用来自实例1的中间物6代替中间物5，且添加如实例3，步骤5中所述的最终脱除BOC保护基步骤，制备标题化合物。
化合物I-193
如实例7中所述，在步骤1中使用((顺)-5-氨基-2-氧代基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺，使用来自实例1的中间物6代替中间物5，且添加如实例3，步骤5中所述的最终脱除BOC保护基步骤，制备标题化合物。
化合物I-194
如实例7中所述，在步骤1中使用((顺)-4-氨基-6-氧代基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺，使用来自实例1的中间物6代替中间物5，且添加如实例3，步骤5中所述的最终脱除BOC保护基步骤，制备标题化合物。
化合物I-195
如实例7中所述，在步骤1中使用((反)-5-氨基-2-氧代基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺，使用来自实例1的中间物6代替中间物5，且添加如实例3，步骤5中所述的最终脱除BOC保护基步骤，制备标题化合物。
实例188：合成I-196
如实例7中所述，在步骤1中使用((反)-4-氨基-6-氧代基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺，使用来自实例1的中间物6代替中间物5，且添加如实例3，步骤5中所述的最终脱除BOC保护基步骤，制备标题化合物。MSm/z:550.4(M+H+)。
实例189：合成
使用本文所述的技术，制备以下化合物。对于制备为外消旋或非对映异构混合物形式的化合物，可通过采用手性起始物质或执行手性色谱法制备光学纯形式的单个异构体。
化合物I-197
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用3,5-二甲氧基-2,6-二甲基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺，且跳过步骤7，制备氯环脲衍生物。
化合物I-198
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺，且跳过步骤7，制备氯环脲衍生物。MSm/z:491.5(M+H+)。
化合物I-199
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用2,6-二甲基-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7，制备起始物质。
化合物I-200
如实例127中所述，使用2,5-二氢噻吩代替中间物2且如文献(JOC,2010,75,4629-4631)中所述执行硫的氧化，制备标题化合物。MSm/z:571.4(M+H+)。
化合物I-201
如实例7中所述，在步骤1中使用(顺)-1-(嘧啶-4-基)吡咯烷-3,4-二胺代替苯-1,2-二胺，且使用来自实例1的中间物6代替中间物5，制备标题化合物。MSm/z:600.5(M+H+)。
实例190：合成I-202
如实例7中所述，在步骤1中使用(顺)-1-(吡啶-2-基)吡咯烷-3,4-二胺代替苯-1,2-二胺，且使用来自实例1的中间物6代替中间物5，制备标题化合物。MSm/z:599.4(M+H+)。
实例191：合成
使用本文所述的技术，制备以下化合物。对于制备为外消旋或非对映异构混合物形式的化合物，可通过采用手性起始物质或执行手性色谱法制备光学纯形式的单个异构体。
化合物I-203
如实例7中所述，在步骤1中使用(顺)-1-(1H-吡唑-3-基)吡咯烷-3,4-二胺代替苯-1,2-二胺，且使用来自实例1的中间物6代替中间物5，制备标题化合物。
实例192：合成I-204
如实例7中所述，在步骤1中使用(顺)-1-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡咯烷-3,4-二胺代替苯-1,2-二胺，且使用来自实例1的中间物6代替中间物5，制备标题化合物。MSm/z:602.5(M+H+)。
实例193：合成I-205
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用3,5-二乙氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺制备氯环脲衍生物。MSm/z:551.5(M+H+)。
实例194：合成I-206
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用2-氟-6-氟-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺，且跳过步骤7，制备氯环脲衍生物。MSm/z:507.4(M+H+)。
实例195：合成I-207
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用3,4,5-三甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7制备氯环脲衍生物。MSm/z:485.5(M+H+)。
实例196：合成I-208
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用3,4,5-三甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺制备氯环脲衍生物。MSm/z:553.4(M+H+)。
实例197：合成I-209
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用4-甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7制备氯环脲衍生物。MSm/z:425.4(M+H+)。
实例198：合成I-210
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用噻唑-4-基甲胺代替甲胺，制备氯环脲衍生物。MSm/z:606.4(M+H+)。
实例199：合成I-212
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用环丙基甲胺代替甲胺，制备氯环脲衍生物。MSm/z:563.4(M+H+)。
实例200：合成I-213
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用(1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲胺代替甲胺，制备氯环脲衍生物。MSm/z:603.5(M+H+)。
实例201：合成I-214
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用(1H-吡唑-4-基)甲胺代替甲胺，制备氯环脲衍生物。MSm/z:589.5(M+H+)。
实例202：合成I-215
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用(1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲胺代替甲胺，制备氯环脲衍生物。MSm/z:603.5(M+H+)。
实例203：合成I-216
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用(1H-吡唑-3-基)甲胺代替甲胺，制备氯环脲衍生物。MSm/z:589.5(M+H+)。
实例204：合成I-217
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤5中使用乙胺代替甲胺，制备氯环脲衍生物。MSm/z:537.4(M+H+)。
实例205：合成I-218
如实例127中所述，在步骤5之前使用甲基化步骤(如实例31，步骤1中所述)，制备标题化合物。MSm/z:537.5(M+H+)。
实例206：合成I-219
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用3,5-二乙氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺制备起始物质。MSm/z:563.5(M+H+)。
实例207：合成I-220
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用3,4,5-三甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7，制备起始物质。MSm/z:497.5(M+H+)。
实例208：合成
使用本文所述的技术，制备以下化合物。对于制备为外消旋或非对映异构混合物形式的化合物，可通过采用手性起始物质或执行手性色谱法制备光学纯形式的单个异构体。
化合物I-221
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用3,4,5-三甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺，制备起始物质。MSm/z:565.5(M+H+)。
实例209：合成I-222
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用4-甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7，制备起始物质。MSm/z:437.5(M+H+)。
实例210：合成I-223
如实例224中所述，在步骤1中使用((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯代替顺-四氢呋喃-3,4-二胺，制备标题化合物。MSm/z:532.5(M+H+)。1HNMR(400MHz,CDCl3):1.50-1.78(m,8H),3.68(s,3H),3.95(s,6H),4.30(br,1H),4.53(br,1H),5.61(d,1H),5.99-6.05(m,1H),6.26(d,1H),6.63(s,1H),7.41(s,1H),8.44(s,1H)。
实例211：合成
使用本文所述的技术，制备以下化合物。对于制备为外消旋或非对映异构混合物形式的化合物，可通过采用手性起始物质或执行手性色谱法制备光学纯形式的单个异构体。
化合物I-224
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用3,5-双(三氟甲氧基)苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺，制备起始物质。
化合物I-225
如实例127中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用3,5-双(三氟甲氧基)苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺，制备氯环脲衍生物。
化合物I-226
如实例7中所述，在步骤1中使用3,4-二氨基环丁-3-烯-1,2-二酮代替苯-1,2-二胺，且使用来自实例1的中间物6代替中间物5，制备标题化合物。
化合物I-227
如实例7中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用2-溴-6-氟-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺，在步骤5中使用环丙基甲胺代替甲胺且跳过步骤7，制备起始物质。
实例212：合成I-228
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用2-溴-6-氟-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7，制备起始物质。MSm/z:563.4(M+H+)。
实例213：合成
使用本文所述的技术，制备以下化合物。对于制备为外消旋或非对映异构混合物形式的化合物，可通过采用手性起始物质或执行手性色谱法制备光学纯形式的单个异构体。
化合物I-229
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用2,4,6-三氟-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7，制备起始物质。
化合物363I-230
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用2-环丙基-6-氟-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7，制备起始物质。
化合物I-231
如实例116中所述制备标题化合物。如实例1中所述，在步骤4中使用2-环丙基-6-氯-3,5-二甲氧基苯胺代替3,5-二甲氧基苯胺且跳过步骤7，制备起始物质。
实例214：合成I-118
如实例116中所述，在步骤4中使用丙酸代替丙烯酸，制备化合物I-118。MSm/z:602.2(M+H+)。
实例215：合成I-232
如实例3中所述制备化合物I-232。在步骤1中使用(3-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺。MSm/z:676.4(M+H+)。
实例216：合成I-233
如实例3中所述制备化合物I-233。在步骤1中使用(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯代替苯-1,2-二胺。MSm/z:676.3(M+H+)。
实例217：合成I-234
如实例3中所述制备化合物I-234。在步骤6中使用丙酰氯代替丙烯酰氯。MSm/z:678.2(M+H+)。
实例218：合成I-235
如实例7中所述制备化合物I-235。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。在步骤2中使用丙酰氯代替丙烯酰氯。MSm/z:531.0(M+H+)。
实例219：合成I-236
如实例5中所述制备化合物I-236。在步骤2中使用丙酰氯代替丙烯酰氯。MSm/z:607.1(M+H+)。
实例220：合成I-237
如实例7中所述制备化合物I-237。在步骤1中使用苯胺代替苯-1,2-二胺。MSm/z:392.3(M+H+)。
实例221：合成I-238
如实例7中所述制备化合物I-238。在步骤1中使用苯胺代替苯-1,2-二胺。使用来自实例1的中间物6代替中间物5。MSm/z:460.1(M+H+)。
实例222：合成I-239
向中间物I-186(3.80mg，0.007mmoL)于500μLTHF中的溶液中添加催化剂10％Pd/C。经气球引入1atmH2且在环境温度下搅拌反应混合物1小时。经硅藻土垫过滤反应混合物，且减压去除溶剂获得3.7mg标题化合物。MSm/z:525.2(M+H+)。
实例223：合成共用中间物8
步骤1：中间物2
向中间物1(1.35g，6.88mmol)于EtOH中的混合物中添加浓H2SO4(4滴)。在85℃下加热反应混合物16小时，随后使其冷却到环境温度且浓缩。用水(20mL)稀释所得残余物且用DCM(25mL×3)萃取。用盐水(50mL)洗涤经合并的有机层，经Na2SO4干燥且浓缩获得呈黄色固体状的标题化合物(2.85g，100％)。
步骤2：中间物4
在0℃下，将含甲胺的EtOH(33％，17.5mL，140mmol)缓慢添加到中间物3(10.0g，43.1mmol)于120mL二氯甲烷中的溶液中。搅拌溶液30分钟。添加水(150ml)，且分离所得混合物，经MgSO4干燥有机层，过滤且浓缩获得呈白色固体状的标题化合物(9.77g，100％)。
步骤3：中间物5
在0℃下，向LAH(2.45g，64.6mmol)于无水THF(30mL)中的混合物中逐滴添加中间物4(9.77g，43.0mmol)于无水THF(45mL)中的溶液。在环境温度下搅拌反应混合物15分钟。小心地逐滴添加水(18mL)。搅拌混合物30分钟。逐滴添加NaOH水溶液(15％，8.5mL)，随后添加水(26mL)。在环境温度下搅拌所得悬浮液17小时，随后过滤反应混合物，且依序用THF(100mL×2)洗涤。浓缩经合并的滤液和洗涤液且将所得残余物悬浮于乙酸乙酯/己烷(体积比：2:1，200mL)中。通过过滤收集固体获得呈黄色固体状的标题化合物(4.23g，53％)。
步骤4：中间物6
将化合物5(4.23g，23.2mmol)溶解于二氯甲烷(1L)中且在搅拌下用二氧化锰(18.0g，207mmol)处理。搅拌所得悬浮液24小时，接着经硅藻土过滤，用二氯甲烷(100mL)洗涤，且浓缩经合并的有机层获得标题化合物(3.00g，75％)。
步骤5：中间物7
将中间物2(1.29g，5.75mmol)、中间物6(1.00g，5.46mmol)和K2CO3(1.50g，10.9mmol)于DMF(100mL)中的混合物加热到110℃持续4小时。将混合物冷却到环境温度，倒入水中，过滤，且干燥固体获得呈白色固体状的标题化合物(1.20g，63％)。
步骤6：中间物8
在0℃下，向中间物7(1.33g，3.88mmol)于DCM(15mL)和NMP(5mL)中的溶液逐滴添加SO2Cl2(2.10g，15.6mmol)。在0℃下搅拌所得混合物30分钟，随后浓缩，用水稀释，用EtOAc(25mL×4)萃取且经Na2SO4干燥经合并的有机层。浓缩有机层获得呈白色固体状的标题化合物(1.50g，87％)。用乙酸乙酯再结晶所得固体或通过硅胶柱色谱法纯化获得呈白色固体状的标题化合物(1.20g，70％)。
实例224：合成I-211
步骤1：中间物1
将来自实例223的共用中间物8(300mg，0.68mmol)、顺-四氢呋喃-3,4-二胺(204mg，2.0mmol)和DIPEA(387mg，3.0mmol)于NMP(5mL)中的混合物加热到80℃持续3小时。使混合物冷却到环境温度且分配于EtOAc与水之间。分离有机相，用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥且经二氧化硅柱色谱法纯化所得残余物获得标题化合物(137mg，44％)。MSm/z:466.3(M+H+)。
步骤2：I-211
在0℃下，向中间物1(3.50g，7.5mmol)、DIPEA(1.94g，15mmol)于无水DCM(100mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(680mg，7.50mmol)于无水DCM(5mL)中的溶液。搅拌反应混合物10分钟，随后分配于DCM与H2O之间。分离有机相，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥且经硅胶柱色谱法纯化粗产物获得标题化合物(2.90g，74％)。MSm/z:520.4(M+H+)。1HNMR(400Hz,CDCl3):3.68-3.85(m,5H),3.95(s,6H),4.16-4.24(m,2H),4.87(br,2H),5.62(d,1H),6.02-6.08(m,1H),6.24-6.39(m,3H),6.63(s,1H),7.43(s,1H),8.47(s,1H)。
实例225：手性分离I-211获得I-240和I-241
手性SFC分离I-211(ChiralCelOD-3，150×4.6mm，5μm，2.4mL/min，CO2中40％具有0.05％DEA的MeOH)获得Rt＝3.46和4.89min的两种对映异构体，其分别指派I-240和I-241的绝对构型(>98％ee)。基于酶促和细胞功效类似于I-94和I-95指派绝对构型。
I-241：MSm/z:520.4(M+H+)，[α]D＝+75(C＝4.00mg/mL,CH2Cl2,23℃)，1HNMR(400Hz,CDCl3):3.68-3.85(m,5H),3.95(s,6H),4.16-4.24(m,2H),4.87(br,2H),5.62(d,1H),6.02-6.08(m,1H),6.24-6.39(m,3H),6.63(s,1H),7.43(s,1H),8.47(s,1H)。
I-240：MSm/z:520.4(M+H+)，[α]D＝-65(C＝4.00mg/mL,CH2Cl2,23℃)，1HNMR(400Hz,CDCl3):3.68-3.85(m,5H),3.95(s,6H),4.16-4.24(m,2H),4.87(br,2H),5.62(d,1H),6.02-6.08(m,1H),6.24-6.39(m,3H),6.63(s,1H),7.43(s,1H),8.47(s,1H)。
通过根据下文流程的对映选择性合成确认的I-241绝对构型。根据文献(JACS,1995,117,5897-5898)且如实例226中所述制备N-((3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-基)丙烯酰胺，且在实例224中用于代替顺-四氢呋喃-3,4-二胺。
实例226：I-241的立体化学证据和对映选择性合成
步骤1：中间物2，((3R,4S)-4-叠氮基四氢呋喃-3-基氧基)三甲基硅烷
向装备有搅拌棒的烧瓶中装入(R,R)-萨伦(Salen)催化剂(600mg，0.02当量，西格玛奥瑞奇(SigmaAldrich)，目录号531944，CAS#164931-83-3)，且用N2吹拂。在环境温度下依序添加环氧环戊烷(4.30g，50.0mmol)和TMSN3(6.00g，1.05当量)。搅拌反应混合物12小时，此时减压去除过量TMSN3，且通过硅胶柱色谱法(用30％EtOAc/己烷洗脱)纯化残余物获得呈黄色油状的标题化合物(7.80g，78％，91％ee，JACS,1995,117,5897-5898)。1HNMR(CDCl3,400MHz):δ0.00(s,9H),3.46-3.49(m,1H),3.64-3.69(m,2H),3.83(dd,1H),3.89(dd,,1H),4.08-4.11(m,1H)。
步骤2：中间物3，(3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-醇
向((3R,4S)-4-叠氮基四氢呋喃-3-基氧基)三甲基硅烷(7.80g，38.8mmol)于MeOH(100mL)中的溶液中添加TFA(10.0mg，0.002当量)，且在室温下搅拌混合物30分钟。用Pd/C(1.90g，25wt％)处理所得溶液且在环境温度下，在H2氛围下搅拌40小时。经硅藻土过滤反应溶液，且用MeOH洗涤滤饼。减压浓缩经合并的有机物获得标题化合物(3.10g)。1HNMR(CDCl3,400MHz):δ3.38-3.40(m,2H),3.54(m,2H),3.68-3.72(m,2H),3.75(dd,1H),3.83(dd,1H),4.00-4.03(m,1H)。
步骤3：中间物4，(3S,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基氨基甲酸叔丁酯
向(3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-醇(1.00g，9.71mmol)于THF(30mL)中的溶液添加(Boc)2O(2.70g，1.30当量)。在环境温度下搅拌混合物隔夜。减压浓缩反应溶液。将残余物分配于EtOAc与水之间，用水和盐水洗涤有机层，经无水Na2SO4干燥且减压浓缩。通过柱色谱法(用5％EtOAc/己烷洗脱)纯化粗产物获得呈白色固体形式的标题化合物(1.20g，61％)。1HNMR(CDCl3,400MHz):δ1.45(s,9H),3.11(s,1H),3.60-3.63(m,1H),3.68-3.71(1H),3.95(s,br,1H),4.04-4.11(m,2H),4.28-4.30(m,1H),4.74(s,br,1H)。
步骤4：中间物5，(3R,4S)-4-(叔丁氧羰基氨基)四氢呋喃-3-基甲烷磺酸酯
在0℃下，在氮气氛围下，向(3S,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.20g，5.91mmol)和TEA(0.89g，1.50当量)于DCM(40mL)中的溶液中分部分添加甲烷磺酰氯(0.88g，1.30当量)。使混合物缓慢升温到室温且搅拌1小时。用水、1NHCl和碳酸氢钠饱和水溶液洗涤所得溶液，经无水Na2SO4干燥且减压浓缩获得标题化合物(1.60g，96％)。1HNMR(CDCl3,400MHz):δ1.45(s,9H),3.21(s,3H),3.70-3.73(m,1H),3.97-3.99(m,1H),4.05-4.07(m,1H),4.17-4.19(m,2H),4.76(s,1H),5.05(d,1H)。
步骤5，中间物6，(3R,4S)-4-叠氮基四氢呋喃-3-基氨基甲酸叔丁酯:
向(3R,4S)-甲烷磺酸4-(叔丁氧羰基氨基)四氢呋喃-3-基酯(1.60g，5.70mmol)于NMP(10mL)中的溶液中添加NaN3(0.92g，2.50当量)。在95℃下搅拌混合物5小时。用水淬灭所得溶液且用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机相，经硫酸钠干燥，过滤且减压浓缩获得标题化合物(620mg，48％)。1HNMR(CDCl3,400MHz):δ1.47(s,9H),3.45(t,1H),3.87-3.89(m,1H),4.02-4.07(m,2H),4.21(s,br,1H),4.36-4.44(m,1H),4.85(s,br,1H)。
步骤6：中间物7，(3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-基氨基甲酸叔丁酯
向(3R,4S)-4-叠氮基四氢呋喃-3-基氨基甲酸叔丁酯(620mg，2.72mmol)于甲醇(15ml)中的溶液中添加Pd/C(10％，170mg)。在环境温度下，在氢气下氢化(3atm)混合物隔夜，随后过滤反应混合物，且浓缩滤液获得标题化合物(350mg，63％，91％ee)。1HNMR(CDCl3,400MHz):δ1.26(s,br,1H),1.46(s,9H),1.68(s,br,1H),3.47-3.49(m,1H),3.57-3.59(m,2H),3.98-4.06(m,2H),4.10(d,1H),5.24(s,br,1H)。
通过与来自实例224的中间物8偶合，随后使用如实例224中所述的程序脱除Boc保护基和丙烯酰胺形成，使用中间物7制备I-241。I-241：MSm/z:520.4(M+H+)，1HNMR(400MHz,CDCl3):3.68-3.85(m,5H),3.95(s,6H),4.16-4.24(m,2H),4.87(br,2H),5.62(d,1H),6.02-6.08(m,1H),6.24-6.39(m,3H),6.63(s,1H),7.43(s,1H),8.47(s,1H)。
实例227：合成I-242
步骤1：中间物1
向4-甲氧基-2-硝基苯胺(170mg，1.02mmol)于无水NMP(5mL)中的溶液中添加NaH(60％，42.0mg，1.02mmol)。在室温下搅拌反应混合物10分钟，随后在100℃下加热0.5小时，随后添加来自实例223的共用中间物8(300mg，0.68mmol)。在100℃下搅拌反应混合物隔夜，随后冷却到室温且分配于EtOAc与水之间。分离有机相且用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥且经硅胶柱色谱法纯化粗产物获得标题化合物(200mg，55％)。MSm/z:532.4(M+H+)。
步骤2：中间物2
将中间物1(200mg，0.38mmol)、Fe(130mg，2.26mmol)和NH4Cl(130mg，2.43mmol)于EtOH(10mL)与H2O(6mL)中的混合物加热到回流持续1小时。通过过滤去除所得固体且用DCM萃取滤液。用盐水洗涤有机相，经Na2SO4干燥且经硅胶柱色谱法纯化粗产物获得标题化合物(180mg，95％)。MSm/z:502.4(M+H+)。
步骤3：I-242
在0℃下，向中间物2(180mg，0.36mmol)和DIPEA(70mg，0.54mmol)于无水DCM(5mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(40mg，0.43mmol)于无水DCM(1mL)中的溶液。10分钟后，将反应混合物分配于DCM/H2O之间，且分离有机相，用盐水洗涤且经Na2SO4干燥。经硅胶柱色谱法纯化所得固体获得标题化合物(60.0mg，30％)。MSm/z:556.4(M+H+)。1HNMR(400Hz,DMSO-d6):δ3.48(s,3H),3.78(s,3H),3.96(q,6H),5.74(d,1H),6.27(dd,1H),6.53(q,1H),6.82(dd,1H),6.99(s,1H),7.40(br,1H),7.58(br,1H),7.76(s,1H),8.73(s,1H),9.15(s,1H),9.68(br,1H)。
实例228：合成I-243
如实例227中所述，在步骤1中使用4-甲基-2-硝基苯胺代替4-甲氧基-2-硝基苯胺制备标题化合物。MSm/z:540.5(M+H+)。
实例229：合成I-244
如实例227中所述，在步骤1中使用2-硝基苯胺代替4-甲氧基-2-硝基苯胺制备标题化合物。MSm/z:526.4(M+H+)。
实例230：合成I-245
如实例227中所述，在步骤1中使用4-氟-2-硝基苯胺代替4-甲氧基-2-硝基苯胺制备标题化合物。MSm/z:544.4(M+H+)。
实例231：合成I-246
如实例127中所述，在步骤5中使用4-氯-3-(7-氯-1-甲基-2-氧代基-1,2-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-3(4H)-基)-N-(3-(2-氰基丙-2-基)苯基)苯甲酰胺代替中间物6(其如实例1中所述，在步骤4中使用3-氨基-4-氯-N-(3-(2-氰基丙-2-基)苯基)苯甲酰胺代替3,5-二甲氧基苯胺制备)，制备标题化合物。MSm/z:615.6(M+H+)。
实例232：合成I-247
如实例127中所述，在步骤5中使用N-(3-(叔丁基)苯基)-4-氯-3-(7-氯-1-甲基-2-氧代基-1,2-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-3(4H)-基)苯甲酰胺代替中间物6(其如实例1中所述，在步骤4中使用3-氨基-N-(3-(叔丁基)苯基)-4-氯苯甲酰胺代替3,5-二甲氧基苯胺制备)，制备标题化合物。MSm/z:604.6(M+H+)。
实例233：共用中间物2
步骤1：中间物1
在0℃下，向来自实例223的共用中间物8(3.50g，7.88mmol)于THF/H2O(50/50mL)中的混合物中分部分添加KOH(1.30g，23.6mmol)。在室温下搅拌所得混合物4小时，随后浓缩且将pH值调整到2。通过过滤收集所得沉淀物，且干燥获得呈白色固体状的标题化合物(2.50g，83％)。LCMS:382.3[M+1]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.46(s,3H),3.96(s,6H),6.99(s,1H),7.63(s,1H),8.57(s,1H),12.43(s,1H)。
步骤2：共用中间物2
向中间物1(2.50g，6.56mmol)于CH3CN(80mL)中的混合物中添加POCl3(10.0mL)。在90℃下搅拌混合物6小时，随后浓缩且溶解于水中。过滤沉淀物且干燥(Na2SO4)获得呈白色固体状的标题化合物(2.50g，95％)。LCMS:400.3[M+1]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.65(s,3H),3.98(s,6H),7.04(s,1H),8.09(s,1H),9.08(s,1H)。
实例234：I-248
步骤1：中间物2
在室温下，向1-甲基-1H-吡唑-3-胺(2.0g，20.6mmol)、3-溴丙-1-烯(5.25g，43.4mmol)于无水THF(50mL)中的溶液中分部分添加NaH(60％，1.73g，43.3mmol)。在60℃下搅拌混合物16小时。将混合物冷却到室温，且通过在冷却下逐滴添加水小心地淬灭。浓缩反应混合物且用EtOAc(50mL×2)萃取。用盐水(50mL)洗涤经合并的有机层，经无水Na2SO4干燥且浓缩。通过硅胶色谱法(用含50％EtOAc的己烷洗脱)纯化粗产物获得呈黄色油状的标题化合物(2.07g，54％)。
步骤2：中间物3
向中间物2(1.00g，5.65mmol)于甲苯(50mL)中的溶液中添加Grubbs第二代催化剂(50mg，43.3mmol)。在氮气氛围下，在95℃下搅拌混合物16小时，随后冷却到室温且浓缩。通过硅胶色谱法(用含50％EtOAc的己烷洗脱)纯化所得残余物获得呈黄色油状的标题化合物(130mg，15％)。LCMS:150.2[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.61-3.64(m,2H),3.75(s,3H),3.77-3.82(m,2H),5.26-5.29(m,2H),5.46(d,1H),7.15(d,1H)。
步骤3：中间物4
向中间物3(130mg，0.87mmol)和K2OsO42H2O(38.0mg，0.10mmol)于THF(50mL)中的溶液中添加50％NMO(306mg，1.31mmol)。在室温下搅拌混合物4小时。添加Na2SO3(200mg)且再搅拌反应混合物30分钟。浓缩混合物，且通过硅胶色谱法(用含5％MeOH的DCM洗脱)纯化所得残余物获得呈无色油状的标题化合物(90mg，60％)。LCMS:184.2[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.27-3.30(m,2H),3.70(s,3H),3.47-3.51(m,2H),4.28(m,2H),5.41(d,1H),7.09(d,1H)。
步骤4：中间物5
在0℃下，向中间物4(456mg，2.49mmol)和Et3N(754mg，7.47mmol)于DCM(20mL)中的溶液中逐滴添加MsCl(115mg，7.43mmol)。在0℃下搅拌混合物30分钟。用H2O(25mL)淬灭混合物且用DCM(50mL×2)萃取。用盐水(50mL)洗涤经合并的有机层，经无水Na2SO4干燥且浓缩获得呈淡黄色固体状的标题化合物(103g)，其未经进一步纯化即使用。LCMS:340.2[M+1]+。
步骤5：中间物6
在NMP(4mL)中合并中间物5(103mg，3.03mmol)、NaN3(601mg，9.25mmol)和15-冠-5(102mg，0.46mmol)，且在85℃下搅拌所得混合物隔夜。使混合物冷却到室温且分配于EtOAc与水之间。用水、盐水洗涤有机相，经无水Na2SO4干燥，且浓缩获得呈淡黄色油状的标题化合物(905mg)，其未经进一步纯化即使用。LCMS:234.2[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.38-3.42(m,2H),3.58-3.62(m,2H),3.70(s,3H),4.13-4.17(m,2H),5.41(d,1H),7.10(d,1H)。
步骤6：中间物7
向中间物6(905mg，3.88mmol)于MeOH(50mL)中的溶液中添加10％Pd/C(200mg)。在真空下脱气所得悬浮液且用H2净化。在室温下，在氢气氛围下搅拌混合物16小时。经硅藻土垫过滤悬浮液，且用MeOH洗涤。将经合并的滤液浓缩到干燥获得呈淡黄色油状的标题化合物(682mg，97％)。MS:182.2[M+1
步骤7：中间物8
将中间物7(100mg，0.55mmol)、来自实例233的共用中间物2(148mg，0.37mmol)和DIPEA(142mg，1.10mmol)于NMP(10mL)中的混合物脱气且用N2净化。在100℃下加热所得反应混合物1小时。使反应混合物冷却到室温且倒入冰水中。过滤所得固体，用水洗涤且干燥获得粗产物，将其通过硅胶色谱法(用含5％MeOH的DCM洗脱)纯化获得呈黄色固体状的标题化合物(170mg，84％)。LCMS:545.6[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.27-3.35(m,2H),3.63-3.67(m,1H),3.73(br,3H),3.75(s,3H),3.77-3.81(m,2H),3.95(s,6H),4.67-4.68(m,1H),5.49(d,1H),6.63(s,1H),7.14(d,1H),7.42(s,1H),8.47(s,1H)。
步骤8：I-248
在0℃下，向中间物8(190mg，0.35mmol)和DIPEA(90.0mg，0.70mmol)于DCM(10mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(31.6mg，0.35mmol)。在0℃下搅拌混合物30分钟。用水淬灭混合物且用DCM(50mL×3)萃取。用盐水(50mL)洗涤经合并的有机层，经无水Na2SO4干燥且浓缩。通过硅胶色谱法(用含5％MeOH的DCM洗脱)纯化残余物获得呈灰白色固体状的标题化合物(90.0mg，43％)。MS:599.5[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.38-3.46(m,2H),3.71-3.76(m,7H),3.81-3.85(m,1H),3.95(s,6H),4.91-4.93(m,2H),5.51(d,1H),5.63(d,1H),6.03-6.10(m,1H),6.28(d,1H),6.35(br,1H),6.63(s,1H),7.17(d,1H),7.40(s,1H),8.45(s,1H)。
实例235：I-252
步骤1：中间物1
在80℃下，在N2下加热来自实例233的共用中间物2(200mg，0.45mmol)、顺-3,4-二氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.90mmol)和DIPEA(116.mg，0.90mmol)于NMP(4mL)中的混合物1小时。使混合物冷却到室温且分配于EtOAc与水之间。分离有机相，用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥且蒸发获得呈黄色固体状的标题化合物(270mg，91％)。
步骤2：中间物2
根据上文流程且如先前所述进行丙酰化获得标题化合物。
步骤3：中间物3
根据上文流程且如先前所述进行脱除Boc保护基获得标题化合物。
步骤3：中间物4
向中间物3(207mg，0.40mmol)于1,4-二噁烷(8mL)中的溶液添加2-氯吡啶(37.0mg，0.36mmol)、BINAP(46.0mg，0.08mmol)、Pd2(dba)3(37.0mg，0.04mmol)和Cs2CO3(260mg，0.80mg)，且在95℃下，在N2下搅拌混合物隔夜。使混合物冷却到室温且分配于DCM与水之间。分离有机相，用饱和NaHCO3洗涤，经无水Na2SO4干燥，且进行硅胶柱色谱法(用含5％MeOH的DCM洗脱)获得标题化合物(35.0mg，15％)。LCMS:596.1[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.53(dd,1H),3.61(dd,1H),3.71(s,3H),3.95(s,6H),3.96-4.07(m,2H),4.95(s,2H),5.66(d,1H),6.06(dd,1H),6.30(d,1H),6.41(d,1H),6.61-6.67(m,2H),7.41(s,1H),7.48(t,1H),8.18(d,1H),8.46(s,1H)。
实例236：I-253
步骤1：中间物2
在110℃下，在1,4-二噁烷(2.0mL)中加热来自实例223的共用中间物8(96.0mg，0.22mmol)和((1S,2R)-2-氨基环戊基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，1.00nmol)持续20小时。浓缩反应混合物且通过硅胶色谱法(0-100％EtOAc/己烷)纯化获得标题化合物(120mg，97％)。LCMSm/z:564.2[M+H]+。
步骤2：中间物3
在室温下，将中间物2(120mg)溶解于4.0MHCl/二噁烷中且搅拌2小时，随后将反应混合物蒸发到干燥且所得残余物未经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤3：I-253
向中间物3(23.0mg，0.046mmol)于DCM(2.0mL)中的溶液中添加DIPEA(100μL)和3-氯丙烷-1-磺酰氯(8μL，0.066mmol)。在室温下搅拌反应混合物4小时，接着浓缩且通过制备型HPLC纯化获得标题化合物，LCMS:554.2[M+H]+。
实例237：I-255
步骤1：中间物2
如实例223中所述，在步骤6中使用3当量SO2Cl2制备中间物1。将中间物1(139mg，0.37mmol)、如实例226中所述制备的(3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-基氨基甲酸叔丁酯(112mg，0.55mmol)和DIPEA(95.0mg，0.74mmol)溶解于NMP(6mL)中且加热到80℃持续1小时。使混合物冷却到室温且分配于EtOAc与水之间。分离有机相，用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥且浓缩。经硅胶色谱法(含10％MeOH的DCM)纯化所得残余物获得标题化合物(90.0mg，49％)。LCMS:498.6[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):1.38(s,9H),2.00-2.04(m,1H),2.36-2.40(m,1H),3.73(s,3H),3.95(s,6H),3.83(s,6H),4.23-4.27(m,1H),4.51(br,1H),4.76-4.81(m,1H),4.90(d,1H),6.48(t,1H),6.82(d,2H),7.63(s,1H),8.49(s,1H)。
步骤2：中间物3
向中间物2(70.0mg，0.14mmol)于DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(4mL)。在室温下搅拌反应混合物1小时。浓缩反应混合物获得呈黄色固体状的标题化合物。LCMS:398.4[M+1]+
步骤3：I-255
在-78℃下，向中间物2和DIPEA(39.0mg，0.30mmol)于无水DCM(6mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(14.0mg，0.15mmol)于无水DCM(1mL)中的溶液。搅拌反应物10分钟，随后将其分配于DCM与H2O之间。分离有机相，用盐水洗涤且经Na2SO4干燥。经硅胶色谱法纯化所得残余物获得标题化合物(50.0mg，74％)。LCMS:452.4[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):3.72(s,3H),3.75-3.79(m,8H),4.18-4.21(m,1H),4.25-4.29(m,1H),4.83-4.88(m,2H),5.63(dd,1H),5.86(br,1H),5.98-6.05(m,2H),6.26(dd,1H),6.49(t,1H),6.81(d,2H),7.62(s,1H),8.49(s,1H)。
中间物238：I-256
步骤1：中间物2
在25℃下，向中间物1(120mg，0.207mmol)于DCM(5mL)中的溶液中添加m-CPBA(89.0mg，0.517mmol)。在25℃下搅拌混合物5小时，随后浓缩且通过硅胶色谱法(含5％MeOH的DCM)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题化合物(40.0mg，31％)。LCMS:614.5[M+1]+。
步骤2：中间物3
在25℃下，向中间物2(40.0mg，0.065mmol)于DCM(4mL)中的溶液中添加TFA(4mL)，且在25℃下搅拌混合物4小时。浓缩混合物获得呈黄色油状的标题化合物，其未经进一步纯化即使用。
步骤3：I-256
在-20℃下，向中间物3(33.5mg，0.065mmol)于THF(20mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(6.48mg，0.072mmol)。在-20℃下搅拌混合物30分钟，随后用水淬灭且用EtOAc萃取。用盐水(50mL)洗涤经合并的有机层，经无水Na2SO4干燥且浓缩。经硅胶色谱法(含5％MeOH的DCM)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题化合物(13.5mg，36％)。LCMS:568.5[M+1]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.42-3.59(m,1H),3.65(s,3H),3.67-3.77(m,3H),3.96(s,6H),5.00-5.09(m,3H),5.60-5.62(m,1H),6.09-6.23(m,3H),6.97(s,1H),7.75(s,1H),8.72(s,1H)。
实例239：I-257
步骤1：中间物1
在100℃下，在氮气氛围下，加热来自实例233的共用中间物2(100mg，0.28mmol)、4,5-二氟苯-1,2-二胺(48.0mg，0.34mmol)、Pd2(dba)3(50.0mg，0.05mmol)、Davephos(43.0mg，0.11mmol)和Na2CO3(206mg，1.95mmol)于叔戊醇(4mL)中的混合物3小时。将反应混合物冷却到室温，且用水(25mL)稀释。用DCM萃取所得混合物。用盐水(20mL)洗涤经合并的有机层，经无水Na2SO4干燥且浓缩。通过硅胶柱色谱法(用含1-2％MeOH的DCM洗脱)纯化所得残余物获得标题化合物(25mg，18％)。LCMS:508.4[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ10.88(s,1H),9.28(d,1H),8.74(s,1H),8.60(s,1H),7.92(d,1H),7.58(s,1H),6.66(s,1H),3.96(s,6H),3.84(s,3H)。
步骤2：I-257
在0℃下，向中间物1(30.0mg，0.05mmol)、DIPEA(14.2mg，0.05mmol)于DCM(10mL)中的混合物中添加丙烯酰氯(5.30mg,0.06mmol)，且在0℃下搅拌所得混合物10分钟。用水淬灭反应物且用EtOAc萃取水性混合物。用盐水洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。通过硅胶柱色谱法(用含2-5％MeOH的DCM洗脱)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题化合物(12.1mg，42％)。LCMS:562.5[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.53(s,1H),7.94(s,1H),7.83(t,1H),7.68-7.62(m,1H),7.48(s,1H),6.64(s,1H),6.48(d,1H),6.27(q,1H),5.81(d,1H),3.95(s,6H),3.69(s,3H)。
实例240：I-258
步骤1：中间物1
在25℃下，向2-硝基-5-(三氟甲基)苯胺(100mg，0.23mmol)于NMP(10mL)中的溶液中逐滴添加NaH(5.40mg，0.23mmol)。在25℃下搅拌混合物0.5小时。添加来自实例223的共用中间物8(100mg，0.23mmol)且在100℃下搅拌所得混合物1小时。用水淬灭反应物，用EtOAc萃取，且用盐水洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩获得呈黄色固体状的标题化合物(100mg，78％)。
步骤2：中间物2
使中间物1(100mg，0.17mmol)、Fe(59.0mg，1.05mmol)和NH4Cl(57.0mg，1.05mmol)于EtOH(10mL)/水(10mL)中的混合物回流1小时。通过过滤去除固体且浓缩滤液。用EtOAc萃取所得残余物且用盐水洗涤经合并的有机层，经无水Na2SO4干燥且浓缩。通过硅胶柱色谱法(用含2-5％MeOH的DCM洗脱)纯化残余物获得呈黄色固体状的标题化合物(10.0mg，11％)。LCMS:540.5[M+H]+。
步骤3：I-258
在25℃下搅拌中间物2(10.0mg，0.02mmol)、DIPEA(4.70mg，0.04mmoL)于THF(10mL)中的混合物。在0℃下添加丙烯酰氯(2.00mg，0.02mmol)且在0℃下搅拌所得混合物10分钟。用水淬灭反应物且用EtOAc萃取。用盐水洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(用含2-5％MeOH的DCM洗脱)纯化残余物获得呈黄色固体状的标题化合物(4.60mg，42％)。LCMS:594.5[M+H]+。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ8.65(s,1H),8.29(s,1H),7.72(d,1H),7.62(s,1H),7.40(d,1H),6.78(s,1H),6.45-6.31(m,2H),5.73(d,1H),3.86(s,6H),3.56(s,3H)。
实例241：I-259
步骤1：中间物1
在100℃下，在N2氛围下，加热来自实例223的共用中间物2(50.0mg，0.13mmol)、2-氟-6-硝基苯胺(23.5mg，0.15mmol)、Pd2(dba)3(24.0mg，0.026mmol)、Davephos(20.0mg，0.052mmol)和Na2CO3(96.0mg，0.91mmol)于叔戊醇(2mL)中的混合物持续4小时。使反应混合物冷却到室温且分配于DCM与水之间。分离有机层，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥且浓缩。通过制备型TLC纯化所得残余物获得标题化合物(20.0mg，31％)。LCMS:520.4[M+1]+。
步骤2：中间物2
将中间物1(20.0mg，0.038mmol)、Fe(13.0mg，1.40mmol)和NH4Cl(80.0mg，1.40mmol)于EtOH/H2O(10/10ml)中的混合物加热到80℃且搅拌4小时。过滤悬浮液，且浓缩滤液。通过制备型TLC纯化所得残余物获得呈黄色固体状的产物(10.0mg，53％)。LCMS:490.4[M+1]+。
步骤3：I-259
如先前实例中所述进行中间物2的丙酰化获得标题化合物。LCMS:544.5[M+1]+。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ3.45(s,3H),3.86(s,6H),5.64-5.67(m,1H),6.24-6.29(m,1H),6.33-6.40(m,1H),6.78(s,1H),6.98-7.03(m,1H),7.22-7.27(m,1H),7.55(d,1H),7.60(s,1H),8.58(s,1H)。
实例242：I-265
步骤1：中间物1
使4-氯-3-甲基苯甲酸甲酯(4.00g，24.0mmol)、n-溴丁二酰亚胺(NBS，4.30g，24.0mmol)和过氧化苯甲酰(BPO，0.58g，2.40mmol)于CCl4(50mL)中的混合物回流4小时。使混合物冷却到室温，过滤，且浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(用含2-5％EtOAc的己烷洗脱)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题化合物(2.70g，43％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.12(d,1H),7.92(dd,Hz,1H),7.47(d,1H),4.61(s,2H),3.93(s,3H)。
步骤2：中间物2
使中间物1(1.00g，3.80mmol)、TMSCN(0.56g，5.69mmol)和K2CO3(786mg，5.69mmol)于CH3CN(50mL)中的混合物回流16小时。使混合物冷却到室温，过滤，且浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(用含5-10％EtOAc的己烷洗脱)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题化合物(590mg，75％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.18(d,1H),7.99(dd,1H),7.52(d,1H),3.94(s,3H),3.88(s,2H)。
步骤3：中间物3
在25℃下，向中间物2(920mg，4.41mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加H2SO4(4mL)。在60℃下搅拌混合物16小时。用Na2CO3饱和水溶液将混合物碱化到pH8且用DCM萃取。经无水Na2SO4干燥经合并的有机层且浓缩获得呈灰白色固体状的标题化合物(910mg，86％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.97(d,1H),7.46(d,1H),7.90(dd,1H),3.91(s,3H),3.83(s,2H),3.72(s,3H)。
步骤4：中间物4
在25℃下，向中间物3(270mg，1.11mmol)和4-(甲基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(204mg，1.11mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加K2CO3(307mg，2.22mmol)。在110℃下搅拌混合物4小时，随后添加水且通过过滤收集沉淀物获得标题化合物(320mg，77％)。LCMS:376.3[M+H]+。
步骤5：中间物5
向中间物4(320mg，0.85mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加5MNaOH(5mL)。在室温下搅拌混合物4小时，随后用1MHCl碱化到pH＝6且通过过滤收集固体获得标题化合物(150mg，49％)。
步骤6：中间物6
在室温下，向中间物5(180mg，0.50mmol)、HATU(87.0mg，0.23mmol)和3-叔丁基苯胺(67.4mg，0.45mmol)于DMF(20mL)中的溶液中逐滴添加DIPEA(117mg，0.90mmol)。在40℃下搅拌混合物4小时，随后将其分配于EtOAc与H2O之间。用盐水洗涤有机相，经Na2SO4干燥，浓缩且通过硅胶柱色谱法(用含5-10％EtOAc的己烷洗脱)纯化所得残余物获得呈黄色粉末状的标题化合物(100mg，41％)。LCMS:493.5[M+1]+。
步骤7：中间物7
在0℃下，向中间物6(100mg，0.20mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加m-CPBA(87mg，0.51mmol)。在室温下搅拌混合物16小时。将混合物分配于EtOAc与H2O之间。用盐水洗涤有机相，经Na2SO4干燥，浓缩且通过硅胶柱色谱法(用含2-5％MeOH的DCM洗脱)纯化粗产物获得呈黄色粉末状的标题化合物(80mg，75％)。
步骤8：中间物8
将中间物7(80.0mg，0.15mmol)、如实例226中所述制备的(3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-基氨基甲酸叔丁酯(61.0mg，0.30mmol)和DIPEA(39.0mg，0.30mmol)于NMP中的溶液脱气且用N2净化。在80℃下搅拌混合物1小时，随后将其分配于EtOAc与H2O之间。用盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥，浓缩且通过硅胶柱色谱法(用含2-5％MeOH的DCM洗脱)纯化所得残余物获得标题化合物(30.0mg，31％)。LCMS:647.7[M+1]+。
步骤9：I-265
在25℃下，搅拌中间物8(30.0mg，0.05mmol)于DCM(2mL)和TFA(2mL)中的溶液1小时。浓缩混合物且用DIPEA将pH值调整到>7。在0℃下，向混合物中添加丙烯酰氯(4.20mg，0.05mmol)。再搅拌反应混合物10分钟，随后用NaHCO3饱和水溶液(25mL)淬灭且用DCM萃取。用盐水洗涤经合并的有机层，经无水Na2SO4干燥且浓缩。通过硅胶柱色谱法(用含5-10％MeOH的DCM洗脱)纯化所得残余物获得呈黄色固体状的标题化合物(7.50mg，25％)。LCMS:601.6[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.81(s,1H),8.27(s,1H),8.01(s,1H),7.85(d,2H),7.61-7.55(m,3H),7.50(d,1H),7.30(t,1H),7.20(d,1H),6.62(s,1H),6.26(d,1H),6.14(q,1H),5.67(d,1H),5.04-4.96(m,1H),4.91-4.88(m,1H),4.24-4.17(m,2H),3.96-3.93(m,1H),3.88-3.83(m,1H),3.72(s,3H),1.32(s,9H)。
实例243：I-269
步骤1：中间物1
在100℃下，搅拌5-氟-2-硝基苯胺(2.00g，12.8mmol)、1-乙基哌嗪(1.60g，14.1mmol)和K2CO3(2.65g，119.2mmol)于DMSO(50mL)中的混合物12小时。将反应混合物分配于EtOAc与H2O之间，用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。经硅胶(DCM:MeOH＝30:1)纯化所得残余物获得呈黄色固体状的标题化合物(1.40g，44％)。
步骤2：中间物2
将丙烯酰氯(867mg，9.6mmol)逐滴添加到中间物1(400mg，1.60mmol)和DIPEA(2.06g，16.0mmol)于NMP(10mL)中的混合物中。在30℃下搅拌反应混合物12小时。将反应混合物分配于EtOAc与H2O之间，用盐水洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩获得呈黄色油状的中间物2(400mg，粗产物)。LCMS:305.4[M+1]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.03(t,3H),2.36(q,2H),3.47-3.49(m,4H),3.41-3.44(m,4H),5.84-5.87(m,1H),6.27-6.31(m,1H),6.50-6.56(m,1H),6.84(dd,1H),7.75(d,1H),8.01(d,1H),10.65(s,1H)。
步骤3：中间物3
来自先前步骤的中间物2、Fe(1.16g，20.7mmol)和NH4Cl(1.12g，20.7mmol)溶解于EtOH/H2O(20mL/10mL)中且在75℃下搅拌2小时，随后冷却反应混合物，过滤且用MeOH洗涤沉淀物。真空浓缩滤液，接着分配于EtOAc与NaHCO3水溶液之间。用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。通过硅胶色谱法(DCM:MeOH:NH4OH＝400:8:4)纯化所得残余物获得呈黄色固体状的标题化合物(200mg，22％)。LCMS:275.4[M+1]+。
步骤4：I-269
在100℃下，在N2下，搅拌中间物3(200mg，0.73mmol)、来自实例233的共用中间物2(290mg，0.73mmol)和对甲苯磺酸(62.0mg，0.36mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的混合物12小时。将反应混合物分配于EtOAc与NaHCO3水溶液之间，且用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。通过逆相制备型HPLC纯化所得残余物获得呈黄色固体状的标题化合物(29.2mg，6％)。LCMS:638.6[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.43(t,3H),3.12-3.15(m,2H),3.24-3.33(m,4H),3.63(s,3H),3.70-3.73(m,2H),3.91-3.98(m,8H),5.79(dd,1H),6.37-6.52(m,2H),6.91(s,1H),7.02(dd,1H),7.43(s,1H),7.68-7.70(m,2H),8.70(s,1H)。
实例244：I-274
步骤1：中间物1
向3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(2.00g，10.2mmol)于CH3CN(20mL)中的溶液中添加1-(氯甲基)-4-氟-1,4-二氮鎓双环[2.2.2]辛烷二-四氟硼酸酯(SelectfluorTM，5.40g，15.2mmol)。在室温下搅拌反应物隔夜，随后用水稀释且用乙酸乙酯萃取。用水和盐水洗涤有机层，经硫酸钠干燥且真空浓缩。通过柱色谱法(己烷/乙酸乙酯：10/1)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题化合物(800mg，38％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.81(s,3H),3.87(s,3H),3.93(s,3H),6.70(dd,1H),6.91(dd,1H)。
步骤2：中间物2
向中间物1(800mg，3.70mmol)于THF(10mL)中的冰冷却溶液中分部分添加LiAlH4(0.30g，7.90mmol)。在室温下搅拌反应物30分钟，接着向混合物中缓慢添加水且通过过滤去除所得固体。真空浓缩滤液获得呈油状的标题化合物(610mg，87.9％)，其直接用于下一步骤中。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.79(s,3H),3.86(s,3H),3.88(s,1H),4.74(d,2H),6.45-6.49(m,1H),6.49-6.55(m,1H)。
步骤3：中间物3
在0℃下，向中间物2(610mg，3.30mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加PBr3(1.06g，3.90mmol)。在室温下搅拌反应物4小时。向反应混合物中添加NaHCO3饱和水溶液且用水稀释且用乙酸乙酯萃取。用水和盐水洗涤有机层，经硫酸钠干燥且真空浓缩。通过柱色谱法(己烷/乙酸乙酯：10/1)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题化合物(640mg，79％)。
步骤4：中间物4
向中间物3(640mg，2.60mmol)于DCM(15mL)中的溶液中添加TMSCN(510mg，5.1mmol)和K2CO3(709mg，5.10mmol)。在60℃下搅拌反应物隔夜，随后用水稀释反应混合物且用乙酸乙酯萃取。用水和盐水洗涤有机层，经硫酸钠干燥且真空浓缩。通过柱色谱法(己烷/乙酸乙酯：10/1)纯化粗产物获得呈白色固体状的标题化合物(454mg，90％)。
步骤5：中间物5
向中间物4(454mg，2.30mmol)于EtOH(4mL)中的溶液中添加浓H2SO4(1mL)。在90℃下搅拌反应物4小时。用水稀释反应混合物且用乙酸乙酯萃取。用水和盐水洗涤有机层，经硫酸钠干燥且真空浓缩获得标题化合物(400mg，59％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤6：中间物6
向中间物5(400mg，1.65mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加4-(甲基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(302.6mg，1.65mmol)和K2CO3(456mg，3.3mmol)。在110℃下搅拌反应物4小时。用水稀释反应混合物，且通过过滤收集沉淀物获得呈白色固体状的标题化合物(500mg，84％)。LCMS:362.4[M+1]+。
步骤7：中间物7
向中间物6(500mg，1.38mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加m-CPBA(594mg，3.45mmol)。在室温下搅拌反应物隔夜，随后过滤且浓缩。通过硅胶柱色谱法(DCM/MeOH：40/1)纯化所得残余物获得呈淡黄色固体状的标题化合物(210mg，30％)。LCMS:394.3[M+1]+。
步骤8：中间物8
向中间物7(50.0mg，0.13mmol)于NMP(5mL)中的溶液中添加(3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-基氨基甲酸叔丁酯(38.5mg，0.19mmol)和DIPEA(33.0mg，0.26mmol)。在100℃下搅拌反应物1小时，随后冷却到室温，用水稀释且用乙酸乙酯萃取。用水和盐水洗涤有机层，经硫酸钠干燥且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(DCM/MeOH:20/1)纯化粗产物获得呈白色固体状的标题化合物(60.0mg，92％)。LCMS:516.6[M+1]+。
步骤9：中间物9
向中间物8(60.0mg，0.11mmol)于DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(3mL)。在环境温度下搅拌反应混合物30分钟，随后真空蒸发溶剂获得标题化合物(52.0mg)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤10：I-274
在0℃下向中间物9(52.0mg，0.11mmol)于DCM(5mL)中的溶液中添加DIPEA(28.4mL，0.22mmol)和丙烯酰氯(9.00mg，0.10mmol)。在搅拌下将反应物升温到室温持续30分钟。用水稀释反应混合物且用DCM萃取。用水和盐水洗涤有机层，经硫酸钠干燥且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(DCM/MeOH:20/1)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题化合物(7.10mg，12％)。LCMS:470.5[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.71(s,3H),3.75-3.78(m,1H),3.80(s,3H),3.81-3.85(m,1H),3.89(s,3H),4.17-4.22(m,1H),4.24-4.31(m,1H),4.81-4.90(m,2H),5.65(dd,1H),5.80-5.89(m,1H),6.04(d,2H),6.26(dd,1H),6.56(dd,2H),7.62(s,1H),8.47(s,1H)。
实例245：I-276
步骤1：中间物1
在25℃下，向4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)-2-硝基苯胺(30.0mg，0.14mmol)于NMP(5mL)中的溶液中添加NaH(11.3mg，0.47mmol)。在25℃下搅拌混合物0.5小时。添加来自实例233的共用中间物2(50.0mg，0.11mmol)且在100℃下搅拌所得混合物1小时。用水淬灭反应物且用EtOAc萃取。用盐水洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩获得呈黄色固体状的标题化合物(47.0mg，73％)。LCMS:584.4[M+H]+。
步骤2：中间物2
将中间物1(47.0mg，0.08mmol)、Fe(27.0mg，0.48mol)和NH4Cl(26.0mg，0.48mol)溶解于EtOH(10mL)/水(10mL)中且回流1小时。通过过滤去除固体且浓缩滤液。将所得残余物溶解于EtOAc中，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，浓缩且通过硅胶色谱法(用含2-5％MeOH的DCM洗脱)纯化获得呈黄色固体状的标题化合物(30.0mg，68％)。
步骤3：I-276
在25℃下搅拌中间物2(30.0mg，0.05mmol)和DIPEA(14.0mg，0.10mmoL)于DCM(10mL)中的溶液。在0℃下添加丙烯酰氯(5.00mg，0.05mmol)且在0℃下搅拌所得混合物10分钟。用水淬灭反应物且用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(用含2-5％MeOH的DCM洗脱)纯化所得残余物获得呈黄色固体状的标题化合物(3.60mg，12％)。LCMS:608.6[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.01(s,1H),9.63(s,1H),8.85(s,1H),8.22(s,1H),8.15(d,1H),7.84(s,1H),7.75(d,1H),7.00(s,1H),6.60-6.52(m,1H),6.32(d,1H),5.81(d,1H),4.23(s,3H),3.96(s,6H),3.56(s,3H)。
实例246，I-278
步骤1：中间物1
在室温下，在氢气氛围下，搅拌6-甲基-3-硝基吡啶-2-胺(500mg，3.26mmol)和Pt/C(250mg)于MeOH(12mL)中的混合物4小时。过滤反应混合物且浓缩滤液获得黄色固体(300mg，75％产率)。LCMS:124.3[M+1]+。
步骤2：中间物2
在100℃下加热中间物1(56.0mg，0.45mmol)、来自实例233的共用中间物2(150mg，0.38mmol)和p-TSA(10.0mg，0.06mmol)于1,4-二噁烷(12mL)中的混合物隔夜。冷却到室温后，浓缩混合物且将所得残余物溶解于DCM中，用NaHCO3饱和水溶液和盐水洗涤，浓缩且经硅胶柱色谱法(含10％MeOH的DCM)纯化获得呈黄色固体状的标题化合物(32.0mg，17％产率)。LCMS:487.4[M+1]+。
步骤3：I-278
向中间物2(32.0mg，0.07mmol)和DIPEA(17.0mg，0.131mmol)于DCM(6mL)中的经冷却(0℃)溶液中添加丙烯酰氯(6.00mg，0.07mmol)。在0℃下搅拌反应物10分钟，随后通过添加水淬灭且用DCM萃取。用盐水洗涤经合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(含1％MeOH的DCM)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题化合物(20.0mg，56％)。LCMS:541.5[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.55(s,3H),3.71(s,3H),3.97(s,6H),5.92(d,1H),6.49-6.54(m,1H),6.59-6.67(m,2H),7.19(br,1H),7.46(s,1H),8.50(br,1H),8.57(s,1H),9.50(br,1H)。
实例247：I-279
步骤1：中间物1
向如实例244中所述制备的6-(2-氟-3,5-二甲氧基苯基)-8-甲基-2-(甲基磺酰基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(160mg，0.40mmol)于DCM(10mL)中的冰冷却溶液中添加SO2Cl2(55.0mg，0.38mmol)，且在0℃下搅拌反应物30分钟。添加饱和NaHCO3，且分离有机层，用盐水洗涤，干燥且真空浓缩获得标题化合物(162mg，94％)。
步骤2：中间物2
在85℃下，在N2下，将中间物1(180mg，0.42mmol)、如实例226中所述制备的(3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-基氨基甲酸叔丁酯(97.0mg，0.48mmol)、DIPEA(10.mg，0.80mmol)于NMP(5mL)中的混合物加热3小时。使混合物冷却到室温且分配于EtOAc与水之间。分离有机相，用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，且对所得残余物进行硅胶柱色谱法(用含5％MeOH的DCM洗脱)获得呈黄色固体状的标题化合物(90.0mg，40％)。LCMS:550.5[M+1]+。
步骤3：I-279
如先前所述进行丙酰化获得标题化合物(34％)。手性HPLC表明滞转异构体的1:1混合物，其通过MGII制备型SFC色谱法分离，所述色谱法使用ChiralCelOD-H柱，移动相为含60％CO2的乙醇(0.1％NH3·H2O)且流动速率为50mL/min。分离纯洗脱份且在室温下储存时平衡成混合物，因此获得呈滞转异构体混合物形式的I-279。LCMS:504.5[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.71(s,3H),3.76(dd,1H),3.83(dd,1H),3.92(d,6H),4.19(dd,1H),4.22-4.30(m,1H),4.86(s,2H),5.63(d,1H),6.03(dd,1H),6.26(d,2H),6.66(d,1H),7.52(s,1H),8.47(s,1H)。
实例248：I-281
步骤1：中间物1
向3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(500mg，2.55mmol)于CH3CN(25mL)中的溶液中分小份添加1-(氯甲基)-4-氟-1,4-二氮鎓双环[2.2.2]辛烷二-四氟硼酸酯(SelectfluorTM，1.80g，5.10mmol)。在室温下搅拌所得混合物隔夜。将混合物倒入水中，用EtOAc萃取，干燥且蒸发到干燥。经硅胶色谱法(用含20％EtOAc的己烷洗脱)纯化所得残余物获得标题化合物(240mg，49％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.89(s,6H),3.96(s,3H),6.73(t,1H)。
步骤2：中间物2
向中间物1(240mg，1.03mmol)于THF中的冰冷却溶液中添加LAH(60.0mg，1.58mmol)，且在0℃下搅拌混合物30分钟。添加EtOAc和水，且用EtOAc萃取所得混合物，干燥且真空蒸发。经硅胶色谱法(用含30％EtOAc的己烷洗脱)纯化所得残余物获得标题化合物(100mg，43％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.93(t,1H),3.88(s,6H),4.80(d,2H),6.62(t,1H)。
步骤3：中间物3
在0℃下，向中间物2(670mg，3.28mmol)和Et3N(660mg，6.0mmol)于DCM(20mL)中的冰冷却溶液中缓慢添加MsCl(83.0g，310mmol)，且在0℃下搅拌混合物0.5小时。用冰水淬灭混合物，用DCM萃取，经无水Na2SO4干燥且蒸发到干燥获得标题化合物(920mg，99％)。
步骤4：中间物4
向中间物3(0.92g，3.28mmol)和TMSCN(650mg，6.57mmol)于CH3CN(15mL)中的溶液中添加K2CO3(0.97g，6.57mmol)。在80℃下，在N2下搅拌混合物隔夜。用NaHCO3饱和水溶液淬灭混合物，用乙酸乙酯萃取，经无水Na2SO4干燥且蒸发到干燥获得呈褐色油状的标题化合物，其静置时固化(0.60g，85％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.74(s,2H),3.89(s,6H),6.65(t,1H)。
步骤5：中间物5
向中间物4(600mg，2.82mmol)于EtOH(8mL)中的溶液中缓慢添加H2SO4(4mL)，且将混合物加热到回流16小时。用Na2CO3饱和水溶液淬灭混合物，将pH值调整到>7。用乙酸乙酯萃取水层，经无水Na2SO4干燥且蒸发到干燥获得标题化合物(600mg，82％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.26(t,3H),3.71(t,2H),3.89(s,6H),4.18(q,2H),6.59(t,1H)。
步骤6：中间物6
向4-(甲基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(349mg，1.92mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加中间物5(500mg，1.92mmol)和K2CO3(530mg，3.84mmol)，且在100℃下搅拌混合物20小时。使反应混合物冷却到室温且倒入水中。过滤所得固体，用水洗涤，且自乙醇再结晶获得呈黄色固体状的标题化合物(250mg，34％)。LCMS:380.2[M+1]+。
步骤7：中间物7
向中间物6(210mg，0.55mmol)于DCM(20mL)中的溶液中以一份添加m-CPBA(146mg，0.85mmol)，且在室温下搅拌混合物30分钟。用DCM稀释混合物，用饱和Na2SO3和饱和NaHCO3洗涤。分离有机层，经Na2SO4干燥，且真空浓缩获得呈淡黄色固体状的标题化合物(210mg，97％)。LCMS:396.2[M+1]+。
步骤8：中间物8
在85℃下，在N2下，加热中间物7(100mg，0.25mmol)、如实例226中所述制备的((3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(77.0mg，0.38mmol)、DIPEA(10.0mg，0.80mmol)于NMP(3mL)中的混合物1.5小时。使反应混合物冷却到室温且分配于EtOAc与水之间。分离有机相，用水、盐水洗涤，且经无水Na2SO4干燥。对所得残余物进行硅胶柱色谱法(用含5％MeOH的DCM洗脱)获得呈黄色固体状的标题产物(106mg，79％)。LCMS:534.5[M+1]+。
步骤9：I-281
根据上文流程且如先前所述进行丙酰化获得标题化合物(54.0mg，69％)。LCMS:488.5[M+1]+。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.71(s,3H),3.75-3.80(m,1H),3.83(dd,1H),3.89(s,6H),4.16-4.22(m,1H),4.24-4.31(m,1H),4.82-4.90(m,2H),5.64(d,1H),6.02(dd,2H),6.27(d,1H),6.69(t,1H),7.59(s,1H),8.47(s,1H)。
实例249：I-286
步骤1：中间物1
将化合物环戊-3-烯醇(1.5g，17.9mmol)于10mLDMF中的溶液冷却到0℃且在N2下向混合物中添加TBDPSCl(7.35g，26.8mmol)、咪唑(3.6g，53.6mmol)和DMAP(0.2g，1.8mmol)。在28℃下，在N2下搅拌混合物隔夜，随后通过添加NaHCO3饱和水溶液淬灭，用EtOAc萃取，干燥且蒸发到干燥。(5.0g，87％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.08(s,9H),2.32-2.51(m,4H),4.54-4.59(m,1H)5.62(s,2H),7.35-7.46(m,6H),7.68(dd,4H)。
步骤2：中间物5
根据上文流程，使用如实例226中所述的方案，将中间物1转化为中间物5。
步骤6：中间物6
将中间物5(233mg，0.57mmol)、来自实例233的共用中间物2(200mg，0.57mmol)和DIPEA(125mg，1.00mmol)于NMP(6mL)中的混合物加热到80℃持续1小时。使混合物冷却到室温且分配于EtOAc与水之间。分离有机相，用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥且经柱色谱法纯化所得残余物获得标题化合物(60.0mg，15％)。LCMS:818.7[M+1]+。
步骤7：中间物7
向中间物6(500mg，0.69mmol)于20mLDCM中的溶液中添加(Boc)2O(304mg，1.38mmol)且在30℃下搅拌混合物2小时。用NaHSO4(10％)、饱和NaCl(饱和水溶液)和饱和NaHCO3(饱和水溶液)淬灭混合物，用DCM萃取，干燥且浓缩获得标题化合物(400mg，71％)。LCMS:818.6[M+H]+。
步骤8：中间物8
向中间物7(300mg，0.37mmol)于8mLTHF中的溶液中添加TBAF(311mg，0.73mmol)且在室温下搅拌混合物2小时。用水淬灭混合物，用EtOAc萃取，干燥且蒸发到干燥获得标题化合物。(160mg，74％)。LCMS:580.5[M+H]+。
步骤9：中间物9
向中间物8(160mg，0.27mmol)于6mLDCM中的溶液中添加戴斯-马汀高碘烷(Dess-MartinPeriodinane)(234mg，0.54mmol)且在室温下搅拌混合物2小时。用饱和NaHCO3(饱和水溶液)淬灭混合物，用DCM萃取，干燥且蒸发到干燥。通过柱色谱法(DCM:MeOH＝20:1)纯化所得残余物获得标题化合物。(120mg，76％)。LCMS:578.5[M+H]+。
步骤10：中间物10
向中间物9(50.0mg，0.087mmol)于DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(2mL)，且在室温下搅拌混合物30分钟。真空去除溶剂获得呈TFA盐形式的产物。
步骤11：I-286
根据上文流程且如先前所述进行中间物10的丙酰化获得标题化合物。LCMS:532.5[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.47-2.61(m,2H),2.80(s,2H),3.63(d,3H),3.95(d,6H),4.81-4.99(m,2H),5.63(s,1H),6.09(dd,1H),6.28(dd,1H),6.63(s,1H),7.44(s,1H),8.48(s,1H)。
实例250：I-288
步骤1：中间物2
使来自实例249的中间物1(60.0mg，0.10mmol)于10mLDCM中的溶液冷却到0℃且逐滴添加二乙基氨基三氟化硫(DAST)(8mL)。在0℃下搅拌混合物0.5小时。用饱和NaHCO3淬灭混合物，用DCM萃取，干燥且浓缩。通过柱色谱法(DCM:MeOH＝30:1)纯化所得残余物获得标题化合物(40mg，67％)。LCMS:600.5[M+H]+。
步骤2：I-288
如先前所述自中间物2制备I-288。LCMS:554.5(M+H)+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.28-2.41(m,2H),2.65-2.79(m,2H),3.68(s,3H),3.95(s,6H),4.74-4.90(m,2H),5.64(dd,1H),6.02(dd,2H),6.26(dd,1H),6.63(s,1H),7.43(s,1H),8.47(s,1H)。
实例251：I-290
步骤1：中间物1
在0℃下，向(9.0g，42mmol)于无水THF(50mL)中的溶液中分部分添加LiAlH4(3.2g，84mmol)，随后在室温下搅拌混合物1小时。向混合物中添加Na2SO4-10H2O，随后过滤。浓缩滤液获得呈黄色固体状的标题化合物(7.55g)。LCMS:172.3[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.38(dd,3H),2.52(s,3H),4.34(q,2H),5.62-5.49(m,1H),8.70(s,1H)。
步骤2：中间物2
在室温下搅拌中间物1(7.5g，44mmol)和MnO2(55g，630mmol)于DCM(60mL)中的混合物隔夜。过滤混合物，且浓缩滤液。通过柱色谱法(DCM:MeOH＝20:1)纯化所得残余物获得呈淡黄色固体状的标题化合物(3.85g，52％)。LCMS:170.2[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.55(s,3H),8.42(s,1H),9.78(s,1H)。
步骤3：中间物3
将中间物2(500mg，3.0mmol)、2-(3,5-二甲氧基苯基)乙酸乙酯(1.0g，4.5mmol)和K2CO3(1.3g，9.4mmol)于DMF(20mL)中的混合物加热到110℃隔夜。用水稀释混合物且过滤所得悬浮液。用水洗涤沉淀物且干燥获得呈白色固体状的标题化合物(830mg)。LCMS:330.3[M+1]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ2.59(s,3H),3.79(s,6H),6.55(t,1H),6.89(d,2H),8.14(s,1H),8.89(s,1H),12.55(s,1H)。
步骤4：中间物4
在-10℃下，向中间物3(500mg，1.5mmol)于NMP(10mL)中的溶液中逐滴添加SO2Cl2(620mg，4.6mmol)，且搅拌所得混合物1小时。用水稀释混合物，通过过滤收集沉淀物，且干燥获得呈灰白色固体状的标题化合物(770mg，100％)。LCMS:430.3[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.45-3.35(m,3H),3.95(t,6H),6.68(s,1H),7.75(s,1H),9.04(s,1H),9.48(s,1H)。
步骤5：中间物5
将中间物4(200mg，0.47mmol)、DIPEA(91mg，0.71mmol)和来自实例226的(3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-基氨基甲酸叔丁酯(110mg，0.55mmol)溶解于NMP(10mL)中且在85℃下，在N2氛围下搅拌3小时。使混合物冷却到室温，用水稀释且用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机层，经无水Na2SO4干燥且浓缩。通过柱色谱法(5％MeOH/DCM)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题化合物(214mg，85％)。LCMS:552.5[M+1]+。
步骤6：中间物6
向中间物5(214mg)于DCM(8mL)中的溶液中添加TFA(4ml)，且在室温下搅拌混合物0.5小时。真空去除TFA，用DCM(20mL)稀释残余物，用饱和碳酸氢钠洗涤，干燥且浓缩获得呈淡黄色固体状的标题化合物(170mg)。LCMS:452.4[M+1]+。
步骤7：I-290
如先前所述进行中间物6的丙酰化获得呈白色固体状的标题化合物(50mg，55％)。LCMS:506.4[M+1]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.72-3.92(m,2H),3.98(d,8H),4.83-4.96(m,2H),5.46-5.54(m,1H),5.71-5.81(m,1H),6.07-6.16(m,1H),6.65(s,1H),7.06-7.11(m,1H),7.60(s,1H),8.64(s,1H),8.85-8.77(m,1H)。
实例252：I-292、I-293
步骤1-10：中间物10
根据上文流程且如针对I-248所述制备中间物10。LCMS:585.2[M+1]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.28-3.31(m,1H),3.39-3.43(m,1H),3.53-3.56(m,1H),3.59(s,3H),3.66-3.70(m,1H),3.96(s,6H),4.70-4.84(m,2H),5.49-5.59(m,2H),5.98-6.08(m,1H),6.18-6.25(m,1H),6.98(s,1H),7.44(s,1H),7.71(s,1H),7.85(d,1H),8.26(d,1H),8.65(s,1H),11.73(br,1H)。
步骤11：I-292、I-293
通过制备型SFC色谱法纯化中间物10获得>98％er标题化合物(ChiralCelOJ-H柱，250×30mmI.D，移动相含60％CO2的MEOH，0.1％NH3·H2O，流动速率＝50ml/min，38℃)。基于酶促和细胞功效类似于I-94/I-95和I-240/I-241指派绝对构型。
实例253：I-294
步骤1：中间物1
在氮气氛围下，在250ml3颈烧瓶中，将1-溴-3,5-二甲氧基苯(3.5g)溶解于DMF中且冷却到-20℃。经加料漏斗逐滴添加POCl3(4.8g)，同时保持反应温度低于5℃。接着使反应混合物升温到90℃且搅拌隔夜。将混合物倒入冰水中，用EtOAc萃取，用NaHCO3洗涤，经无水Na2SO4干燥且真空浓缩。所得残余物(5.0g，0.02mol)直接用于下一步骤中。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.88(d,6H),6.44(d,1H),6.79(d,1H),10.32(s,1H)。
步骤2：中间物2
向中间物2(5.0g，0.021mol)于乙二醇(10mL)中的溶液中添加KOH(3.5g，6.3mmol)和N2H4·H2O(2.1g，42mmol)。在回流下加热反应物3小时，接着冷却到室温，用水稀释且用EtOAc萃取。用NaHCO3洗涤有机层，经无水Na2SO4干燥且真空浓缩。所得残余物直接用于下一步骤中。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.22(s,3H),378(d,6H),6.38(d,1H),6.70(d,1H)。
步骤3：中间物3
用于合成中间物3的程序与中间物1相同。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.28(s,3H),3.92(d,6H),6.43(s,1H),10.38(s,1H)。
步骤4：中间物4
用于合成中间物4的程序与中间物2相同。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.27(s,6H),3.82(d,6H),6.43(s,1H)。
步骤5：中间物5
在-78℃下，向中间物4(1.0g，4.1mmol)于THF(5mL)中的溶液中逐滴添加正丁基锂(2mL，己烷中2.5M，4.9mmol)于THF(10mL)中的溶液。30分钟后，添加硼酸三甲酯(0.9g，8.2mol)，且使混合物升温到室温隔夜。将混合物倒入10％HCl上，且用EtOAc萃取。用饱和盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)且浓缩获得呈褐色油状的标题化合物。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ0.07(s,1H),2.27(s,6H),3.82(s,6H),6.43(s,1H)。
步骤6：中间物6
向((3R,4S)-4-((6-溴-8-甲基-7-氧代基-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)四氢呋喃-3-基)氨基甲酸酯(150mg，0.34mmol)于甲苯/H2O(5mL/0.5mL)中的溶液中添加中间物5(200mg，0.68mmol)、Pd(PPh3)4(39mg，0.03mmol)和Na2CO3(73mg，0.7mmol)。在95℃下搅拌所得混合物隔夜。用EtOAc稀释混合物，用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥且浓缩。经硅胶色谱法(用含50％EtOAc的己烷洗脱)纯化所得残余物获得标题化合物(80mg，45％)。LCMS:526.3[M+1]+。
步骤7：I-294
向中间物6(80mg，0.15mmol)于DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(5mL)，且在室温下搅拌混合物30分钟。蒸发挥发物获得呈TFA盐形式的标题化合物，将其溶解于DCM(10mL)中。添加DIPEA直到pH>7，将混合物冷却到0℃，且逐滴添加丙烯酰氯(14mg，0.15mmol)于DCM(1mL)中的溶液。搅拌反应混合物10分钟，随后将其分配于DCM与水之间，分离有机相，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥且经硅胶柱色谱法纯化所得残余物获得标题化合物(24mg，34％)。LCMS:480.3[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.90(d,6H),3.73(s,3H),3.87(d,7H),3.96(dd,1H),4.18-4.24(m,2H),4.92(s,1H),5.02(d,1H),5.66(d,1H),6.15(d,1H),6.26(d,1H),6.52(s,1H),6.79-6.81(dd,1H),7.27(s,1H),8.20(s,1H)。
实例254：I-296
步骤1：中间物1
在60℃下搅拌4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(5.0g，21mmol)和丙-2-胺(2.5g，43mmol)于NMP(15mL)中的混合物隔夜。用水稀释混合物且过滤所得悬浮液，干燥，浓缩且通过柱色谱法(含12.5％乙酸乙酯的己烷)纯化获得呈灰白色固体状的标题化合物(4.9g，98％)。LCMS:256.3[M+1]+。
步骤2：中间物2
在0℃下，向中间物1(4.9g，19mmol)于无水THF(50mL)中的溶液中分部分添加LiAlH4(1.4g，39mmol)。在室温下搅拌混合物1小时，接着逐滴添加Na2SO4-10H2O。过滤反应混合物，且浓缩滤液获得呈灰白色固体形式的标题化合物(4.23g，100％)。LCMS:214.3[M+1]+。
步骤3：中间物3
在室温下搅拌中间物2(4.2g，19mmol)和MnO2(18g，210mmol)于DCM(50mL)中的混合物隔夜。过滤混合物，且浓缩滤液且通过硅胶色谱法(DCM:MeOH＝20:1)纯化获得呈褐色固体状的标题化合物(3.0g，75％)。LCMS:212.2[M+1]+。
步骤4：中间物4
在室温下搅拌2-(3,5-二甲氧基苯基)乙酸乙酯(59mg，2.6mmol)、KF/Al2O3(1.7g，12mmol)和中间物3(500mg，2.4mmol)于NMP(20ml)中的混合物0.5小时。将混合物添加到盐水中，用EtOAc萃取，经(Na2SO4)干燥且真空浓缩获得呈油状的标题化合物。LCMS:312.4[M+1]+。
步骤5：中间物5
在-10℃下，向中间物4(880mg，2.4mmol)于DCM(30mL)中的溶液中逐滴添加SO2Cl2(640mg，4.7mmol)。搅拌所得混合物1小时，随后用饱和NaHCO3淬灭且用DCM萃取。用饱和NaHCO3洗涤经合并的有机层，干燥且真空浓缩获得呈灰白色固体状的标题化合物(860mg，79％)。LCMS:456.1[M+1]+。
步骤6：中间物6
将中间物5(200mg，0.44mmol)、DIPEA(85mg，0.66mmol)和来自实例226的(3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-基氨基甲酸叔丁酯(107mg，0.53mmol)在NMP(10mL)中合并且在85℃下，在N2氛围下搅拌2小时。使混合物冷却到室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取且用盐水洗涤有机层，经无水Na2SO4干燥且浓缩。通过柱色谱法(1％MeOH/DCM)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题化合物(190mg，73％)。LCMS:594.2[M+1]+。
步骤7：中间物7
如先前所述进行中间物6的脱除Boc保护基获得标题化合物(170mg)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.05(s,3H),3.62-3.66(m,1H),3.68-3.77(m,2H),3.94(s,6H),4.12(q,3H),4.23-4.31(m,1H),4.46-4.55(m,1H),5.80(s,1H),6.61(s,1H),7.37(s,1H),8.44(s,1H)。
步骤8：I-296
如先前所述进行中间物7的丙酰化获得呈白色固体状的标题化合物(40mg，46％)。LCMS:548.3[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.61(d,6H),3.86(s,3H),3.94(s,6H),4.23(dd,2H),4.78-4.93(m,2H),5.66(dd,1H),5.74(d,1H),6.12(d,1H),6.29(dd,2H),6.62(s,1H),7.37(s,1H),8.42(s,1H)。
实例255：I-307
步骤1：中间物2
将来自实例251的中间物1(654mg，1.99mmol)、(R)-3-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(832mg，2.98mmol)和K2CO3(550mg，3.98mmol)于NMP(20mL)中的混合物加热到80℃持续3小时。使混合物冷却到室温且分配于EtOAc与水之间。分离有机相，用水、盐水洗涤，且经无水Na2SO4干燥。经硅胶柱色谱法(DCM:MeOH＝120:1)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题产物(1.0g，99％)。LCMS:513.3[M+1]+。
步骤2：中间物3
在室温下，搅拌中间物2(1.00g，1.95mmol)和TFA(8mL)于DCM(16mL)中的混合物1小时。将溶液的pH值调整到9，用DCM稀释，用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥且浓缩。经硅胶柱色谱法(DCM:MeOH:NH4OH＝300:10:4)纯化所得残余物获得呈黄色固体状的标题化合物(600mg，75％)。LCMS:413.3[M+1]+。
步骤3：中间物4
在0℃下，将Ac2O(178mg，1.75mmol)逐滴添加到中间物3(600mg，1.46mmol)和Et3N(220mg，2.18mmol)于DCM(20mL)中的混合物中。搅拌混合物0.5小时，随后用1N·HCl、NaHCO3水溶液和盐水洗涤。经无水Na2SO4干燥有机层且浓缩获得呈黄色油状的标题化合物(600mg，91％)。LCMS:455.3[M+1]+。
步骤4：中间物5
在0℃下，向中间物4(200mg，0.44mmol)于DCM(20mL)中的溶液中逐滴添加SO2Cl2(148mg，1.1mmol)，接着在0℃下搅拌混合物30分钟，用NaHCO3水溶液淬灭，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥且浓缩获得呈黄色油状的标题产物(270mg)，其直接用于下一步骤中。LCMS:677.3[M+1]+。
步骤5：中间物6
将中间物5(270mg，0.48mmol)、((3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(127mg，0.63mmol)、DIPEA(186mg，1.44mmol)于NMP(10mL)中的混合物加热到80℃持续3小时。使混合物冷却到室温且分配于EtOAc与水之间。分离有机相，用水、盐水洗涤，且经无水Na2SO4干燥。经柱色谱法(DCM:MeOH＝40:1)纯化所得残余物获得呈白色固体状的标题产物(200mg，61％)。
步骤6：中间物7
在室温下，搅拌中间物6(100mg，0.15mmol)和TFA(2mL)于DCM(4mL)中的混合物0.5小时。浓缩反应溶液且所得残余物直接用于下一步骤中(假定100％产率)。LCMS:577.2[M+1]+。
步骤7：I-307
在冰-盐水浴中，向中间物7和DIPEA(194mg，1.5mmol)于无水DCM(20mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(13mg，0.15mmol)于无水DCM(2mL)中的溶液。搅拌反应混合物10分钟，随后将其分配于DCM与H2O之间。分离有机相，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥且经制备型HPLC纯化粗产物获得呈白色固体状的标题化合物(20mg)。LCMS[M+1]+:631.2。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ1.86-2.06(m,5H),2.94-3.00(m,1H),3.32-3.33(m,2H),3.39-3.98(m,10H),4.13-4.24(m,2H),4.47-4.64(m,2H),4.80-4.85(m,1H),4.94-4.97(m,1H),5.54-5.60(m,1H),6.08-6.16(m,2H),6.90(s,1H),7.66(s,1H),8.63(s,1H)。
实例256：额外化合物
如先前实例中所述合成和表征下表7和8中呈现的化合物。
表7
表8
实例257：蛋白质质量修正分析
将FGFR4完整蛋白质(来自西格开米(SignalChem)(表9中的方法)或英杰公司(Invitrogen)(表9中的方法)与本发明化合物(化合物对于蛋白质10倍过量)培育60分钟。培育后，在使用迈克罗(micro)C4ZipTip方案脱盐之前用15μL0.2％TFA稀释5μL样品等分试样，将其直接添加到使用芥子酸作为解吸附基质的MALDI目标(0.1％TFA:乙腈50:50(体积比)中10mg/mL)。将对照样品中FGFR4的质心质量与用本发明化合物培育的FGFR4的质心质量比较。经处理FGFR4的质心质量相较于未经处理FGFR4的移位除以本发明化合物的分子量。这一计算提供培育1小时后的经修饰蛋白质百分比。这一分析确认FGFR4目标是否共价结合于测试化合物(即蛋白质质量是否经修饰)。
举例来说，为了评定FGFR4经I-1的质量修正，完整FGFR4(英杰公司，目录号：P3054)单独培育和用I-1(I-1相对于蛋白质10倍过量)培育。60分钟后，稀释蛋白质样品且蛋白质样品如上文所述制备。蛋白质的质心质量(m/z:42761.7；显示于图1，画面A中)与经处理蛋白质的质心质量(m/z:43350.2；显示于图1，画面B中)比较。589Da(87％)的质心质量移位表明I-1完全修饰FGFR4。其它化合物也使用这一方式测试。这些实验的结果描绘于表9中。
表9、表10和表11显示所选本发明化合物在多种FGFR分析中的活性。表9、表10和表11中的化合物编号与上文化合物编号对应。
活性命名为“A”的化合物提供EC50/IC50/GI50≤100nM；活性命名为“B”的化合物提供101-500nM的EC50/IC50/GI50；活性命名为“C”的化合物提供501-999nM的EC50/IC50/GI50；活性命名为“D”的化合物提供EC50/IC50/GI50≥1000nM。
活性命名为“E”的化合物提供≥70％的质量修正；活性命名为“F”的化合物提供31-69％的质量修正；活性命名为“G”的化合物提供≤30％的质量修正。
表9：测试化合物的质量修正数据的概述
化合物 MS FGFR4 方法
I-1 E a
I-2 E a
I-3 F a
I-5 E a
I-7 F a
I-8 F a
I-9 F a
I-10 G a
I-11 F a
I-12 E a
I-13 E a
I-14 E a
I-15 E a
I-17 E a
I-19 E a
I-20 F a
I-21 F a
I-23 E a
I-24 E a
I-25 E a
I-26 E a
I-28 F a
I-30 F a
I-31 E a
I-32 F a
I-33 F a
I-34 E a
I-35 E a
I-36 F a
I-38 E a
I-42 F a
I-43 E b
I-44 E b
I-45 F b
I-46 G a
I-47 E a
I-48 E a
I-49 E a
I-50 E a
I-52 F a
I-54 F a
I-55 F a
I-57 F a
I-58 F a
I-64 E b
I-66 G b
I-69 E b
化合物 MS FGFR4 方法
I-82 F b
I-83 E b
I-117 E b
I-155 E a
I-179 E a
I-180 F a
I-181 E a
I-232 G a
I-233 G a
I-236 G a
I-237 G a
I-238 G a
I-241 E a
实例257：对FGFR4酶的功效评定的咬封盖分析方案
对应于表10中的方法a的FGFR4-WT的10倍储备溶液(PR4380C或P3054)(来自英杰公司,卡尔斯巴德(Carlsbad),CA)如下文所述制备。或者，对应于表10中的方法b的FGFR4-WT(F01-11G)的10倍储备溶液(西格开米,里士满(Richmond),BC)如下文所述制备。在由20mMTris，pH7.5、5mMMgCl2、1mMEGTA、5mMβ-甘油磷酸酯、5％甘油(10×储备液，KB002A)和0.2mMDTT(DS001A)组成的1×激酶反应缓冲液中制备1.4×ATP(AS001A)和5×Tyr-Sox结合肽底物(KNZ3101)的溶液。将5μLFGFR4吸入科宁(Corning)(#3574)384孔白色未结合表面微量滴定盘(科宁,NY)中，所述盘中含有0.5μL体积的100％DMSO。在帝肯(Tecan)EVO100上制备连续稀释化合物。向各孔中添加第二次添加的10μlTyr-SoxFGFR4底物，且通过添加35μL1.4×ATP开始激酶反应。在来自BioTek的斯那吉(Synergy)板读取器(威努斯基(Winooski),VT)中，在λex360/λem485下，每71秒监测反应，持续240分钟。在各分析结束时，检验各孔的发展曲线的线性反应动力学和拟合统计学(R2、95％信赖区间、绝对平方和)。自相对荧光单元对于时间(秒)的曲线的斜率测定各反应的初始速度(0分钟到约60分钟)，接着针对抑制剂浓度绘制曲线以自log[抑制剂]对于反应(来自吉非帕蒂软件(GraphPadSoftware)的吉非帕蒂普瑞森(GraphPadPrism)中的可变斜率模型(圣地亚哥(SanDiego),CA))估算IC50。
方法：
a)[FGFR4-WT]＝10nM，[ATP]＝300μM，[Y10-Sox]＝10μM(ATPKMapp～300μM)，
b)[FGFR4-WT]＝2.5nM，[ATP]＝250μM，[Y10-Sox]＝10μM(ATPKMapp～250μM)，
tools.invitrogen.com/content/sfs/manuals/omnia_kinase_assay_man.pdf
这些实验的结果(以IC50形式报告)显示本发明化合物抑制FGFR酶活性的能力且描绘于表10中。
表10：测试化合物的酶促数据的概述
化合物 FGFR4IC50(nM) 方法
I-1 A a
I-2 A b
I-3 A b
I-5 A a
I-6 C b
I-7 C b
I-8 A b
I-9 A b
I-10 D b
I-11 C b
I-12 B b
I-13 B b
I-14 A b
I-15 A b
I-17 A a
I-18 D b
I-19 B a
I-20 A b
I-21 A a
I-22 C a
I-23 A b
I-24 A b
I-25 B b
I-26 A b
I-27 A a
I-28 A a
I-29 B a
I-30 A a
I-31 A a
I-32 A a
I-34 A a
I-35 A a
I-36 A a
I-37 B a
I-38 C a
I-39 D a
I-40 A a
I-41 A a
I-42 A a
I-43 A a
I-44 A a
I-45 D a
I-46 D a
I-47 A a
化合物 FGFR4IC50(nM) 方法
I-48 A a
I-49 A a
I-50 A a
I-51 D a
I-52 C a
I-53 A a
I-54 A a
I-55 A a
I-56 A a
I-57 A a
I-58 A a
I-59 A a
I-60 A a
I-61 A a
I-62 A a
I-63 A a
I-64 A a
I-65 A a
I-66 D a
I-67 A a
I-68 B a
I-69 A a
I-70 A a
I-73 B a
I-74 A a
I-75 A a
I-76 C a
I-77 A a
I-78 A a
I-79 B a
I-80 B a
I-81 B a
I-82 A a
I-83 B a
I-84 C a
I-85 A a
I-86 A a
I-87 A a
I-88 A a
I-89 A a
I-90 A a
I-91 A a
I-92 A a
I-93 D a
I-94 D a
I-95 A a
I-96 D a
I-97 A a
I-98 A a
化合物 FGFR4IC50(nM) 方法
I-99 A a
I-100 A a
I-101 B a
I-102 A a
I-103 A a
I-104 A a
I-105 B a
I-106 B a
I-107 D a
I-108 A a
I-109 A a
I-110 A a
I-111 C a
I-112 A a
I-113 A a
I-114 A a
I-115 B a
I-116 A a
I-117 A a
I-118 D a
I-119 D a
I-120 D a
I-121 A a
I-122 B a
I-123 A a
I-124 A a
I-125 B a
I-126 A a
I-127 A a
I-128 B a
I-129 A a
I-130 A a
I-131 A a
I-132 A a
I-133 A a
I-134 A a
I-135 A a
I-136 A a
I-137 A a
I-138 B a
I-139 A a
I-140 B a
I-141 A a
I-142 A a
I-143 A a
I-144 A a
I-145 A a
I-146 A a
I-147 A a
化合物 FGFR4IC50(nM) 方法
I-148 A a
I-149 A a
I-150 A a
I-151 A a
I-152 A a
I-153 A a
I-154 B a
I-155 A a
I-181 A b
I-185 D a
I-186 A a
I-196 A a
I-198 A a
I-200 A a
I-201 A a
I-202 A a
I-204 A a
I-205 B a
I-206 A a
I-207 D a
I-208 C a
I-209 D a
I-210 A a
I-211 A a
I-212 A a
I-213 A a
I-214 A a
I-215 A a
I-216 A a
I-217 A a
I-218 D a
I-219 B a
I-220 D a
I-221 D a
I-222 D a
I-223 A a
I-228 B a
I-232 A b
I-233 A b
I-234 B b
I-235 B b
I-236 B b
I-237 B a
I-238 A a
I-241 A a
I-240 D a
I-242 A a
I-243 A a
I-244 A a
化合物 FGFR4IC50(nM) 方法
I-245 A a
I-246 B a
I-247 B a
I-248 A a
I-249 A a
I-250 A a
I-251 A a
I-252 A a
I-253 A a
I-254 A a
I-255 C a
I-256 A a
I-257 A a
I-258 A a
I-259 A a
I-260 A a
I-261 A a
I-262 A a
I-263 A a
I-264 A a
I-265 A a
I-266 A a
I-267 A a
I-268 A a
I-269 A a
I-270 A a
I-271 A a
I-272 A a
I-273 A a
I-274 A a
I-275 A a
I-276 A a
I-277 A a
I-278 A a
I-279 A a
I-280 A a
I-281 A a
I-282 A a
I-283 C a
I-284 A a
I-285 A a
I-286 A a
I-287 A a
I-288 A a
I-289 A a
I-290 A a
I-291 A a
I-292 A a
I-293 B a
化合物 FGFR4IC50(nM) 方法
I-294 A a
I-295 A a
I-296 A a
I-297 A a
I-298 A a
I-299 A a
I-300 A a
I-301 A a
I-302 A a
I-303 A a
I-304 A a
I-305 A a
I-306 A a
I-307 A a
I-308 A a
I-309 A a
实例258：FGFR4信号传导
细胞制备：使用MDA-MB-453(乳癌)和Huh7(肝细胞癌)细胞。在补充有10％FBS(英杰公司)和1％青霉素(Penicillin)-链霉素(Streptomycin)(P/S,Lonza,Walkersville,MD)的DMEM(英杰公司,卡尔斯巴德,CA)中生长Huh7细胞。在补充有10％FBS和1％P/S的完全RPMI1640(英杰公司)中生长MDA-MB-453细胞。在37℃下，在5％CO2含湿气培育箱中，所有细胞均以单层培养物形式维持和增殖。
对于MSD和ELISA分析，全体FGFR4抗体获自R&DSystems(明尼阿波里斯(Minneapolis),MN)且在1:500下使用。对于免疫墨点(西方墨点)分析，全体FGFR4抗体获自圣克鲁兹(SantaCruz)(圣克鲁兹,CA)且在1:1000下使用。磷酸基-FGFR抗体获自细胞信号传导(CellSignaling)(丹弗斯(Danvers),MA)或R&DSystems且在1:1000下使用。来自细胞信号传导的磷酸基-FGFR抗体用于免疫墨点，而来自R&D的磷酸基-FGFR抗体用于MSD和ELISA分析。二级抗体在1:10,000下使用。山羊抗小鼠IgGIRDye800CW抗体获自里克生物科学(LiCorBiosciences)(林肯(Lincoln),NE)且山羊抗家兔IgG亚历克莎福陆(AlexaFluor)680获自英杰公司。抗家兔Sulfo标签和抗-抗生蛋白链菌素Sulfo标签抗体获自中尺度发现(MesoScaleDiscovery)(盖瑟斯堡(Gaithersburg),MD)，且分别在1:1000和1:5000下使用。
免疫墨点(西方墨点，WB)-方法A(仅针对MDA-MB-453)
对于MDA-MB-453细胞信号传导，细胞在96孔聚D-赖氨酸板(BD生物科学(BDBioscience),圣何塞(SanJose),CA)中生长到90％汇合，接着在低血清(0.1％FBS)介质中培育16-18小时。接着在低血清(0.1％FBS)培养基中用5、1.25、0.31、0.078、0.020或0.005μM测试化合物处理细胞1小时。处理后，细胞用冷PBS(英杰公司)洗涤且通过在32μL冷细胞提取缓冲液(英杰公司)中冷冻/熔融3次立即溶解，所述缓冲液中补充有完全蛋白酶抑制剂(罗氏(Roche),印第安纳波利斯(Indianapolis),IN)和PhosphoSTOP(罗氏)磷酸酶抑制剂。
通过BCA分析(皮尔斯(Pierce),罗克福德(Rockford),IL)测定MDA-MB-453蛋白质浓度。50-100μg各溶解产物样品通过4-12％梯度(SDS-PAGE(英杰公司))分离，转移到硝基纤维素膜(拜拉德(Biorad),赫拉克勒斯(Hercules),CA)且用特异性抗体探测。使用奥德赛(Odyssey)红外成像(里克生物科学)定量磷酸基-蛋白质信号。
为了评定磷酸基-FGFR信号传导，用抗磷酸基-FGFR(Y653/Y654)和全体抗FGFR抗体探测墨点。磷酸基FGFR信号根据各样品的全体FGFR表现标准化。结果根据DMSO对照％表示。使用S形曲线分析程序(吉非帕蒂普瑞森第5版)拟合标准化数据与可变希尔斜率(Hillslope)，以测定EC50值。结果提供于表11中的题为“信号传导EC50(nM)”栏中。
中尺度分析(MSD)-方法B(用于MDA-MB-453和Huh7)
MDA-MB-453和Huh7细胞在96孔聚-D-赖氨酸板(BD生物科学,圣何塞,CA)中生长到90％汇合。接着在低血清(0.1％FBS)培养基中培育细胞16-18小时，接着在低血清(0.1％FBS)培养基中用5、1.67、0.56、0.185、0.068、0.021或0.007μM测试化合物处理1小时。处理后，细胞用冷PBS(英杰公司)洗涤且通过在32μL冷细胞提取缓冲液(英杰公司)中冷冻/熔融3次立即溶解，所述缓冲液中补充有完全蛋白酶抑制剂(罗氏)和PhosphoSTOP(罗氏)磷酸酶抑制剂。
在4℃下，用全体FGFR-4抗体涂覆MSD板(中尺度发现)隔夜。在4℃下，将溶解产物(25μL)添加到MSD板隔夜。通过在室温下用磷酸基-FGFR抗体(R&DSystems)和抗家兔磺基标签抗体(中尺度)培育2小时获得MSD信号。结果根据DMSO对照％表示。使用S形曲线分析程序(吉非帕蒂普瑞森第5版)拟合数据与可变希尔斜率(Hillslope)，以测定EC50值。结果提供于表11中的题为“信号传导EC50(nM)”栏中。
ELISA—方法C(仅用于MDA-MB-453)
MDA-MB-453细胞在96孔聚-D-赖氨酸板(BD生物科学,圣何塞,CA)中生长到90％汇合。接着在低血清(0.1％FBS)培养基中培育细胞16-18小时。接着在低血清(0.1％FBS)培养基中用5、1.67、0.56、0.185、0.068、0.021或0.007μM测试化合物处理MDA-MB-453细胞1小时。处理后，MDA-MB-453细胞用冷PBS(英杰公司)洗涤且通过在32μL冷细胞提取缓冲液(英杰公司)中冷冻/熔融3次立即溶解，所述缓冲液中补充有完全蛋白酶抑制剂(罗氏)和PhosphoSTOP(罗氏)磷酸酶抑制剂。
在4℃下，用全体FGFR-4抗体涂覆Nunc免疫板(96孔；西格玛(Sigma),圣路易斯,MO)隔夜。在室温下，向板中添加溶解产物(25μL)持续2小时。在室温下，每孔添加磷酸基-FGFR检测抗体(100μL)持续2小时，随后添加山羊抗家兔HRP抗体(100μL)持续45分钟。结果根据DMSO对照％表示。使用S形曲线分析程序(吉非帕蒂普瑞森第5版)拟合数据与可变希尔斜率(Hillslope)，以测定EC50值。
这些实验的结果显示本发明化合物抑制细胞中FGFR4的磷光体信号传导的能力。结果描绘于表11中的题为“信号传导EC50(nM)”栏中。MDA-MB-453细胞结果归入标题“pFGFR4(MDA)”且Huh7结果归入标题“pFGFR4(Huh)”
实例259：细胞增殖
MDA-MB-453和Huh7细胞接种于96孔组织培养板(科宁)中补充有5％FBS和1％P/S的适当生长培养基中，如表11中所指示。对于MDA-MB-453和Huh7细胞两者，起始密度为每孔5000个细胞。使细胞沉降4小时，接着用5、1.25、0.31、0.078、0.020或0.005μM测试化合物处理：MDA-MB-453处理96小时且Huh7细胞处理120小时。通过赛特格鲁(CellTiterGlo)(派美雅(Promega),麦迪逊(Madison),WI)测定细胞活力且使用标准曲线将结果转化为细胞编号。通过吉非帕蒂普瑞森测定生长抑制(GI50)值。
这些实验的结果显示化合物抑制FGFR依赖细胞株中细胞生长的能力且描绘于表11中题为“细胞增殖GI50(nM)”栏中。MDA-MB-453细胞结果归入标题“MDA”且Huh7细胞结果归入标题“Huh”。
实例260：目标占有率分析
利用生物素标记共价探针评定游离FGFR4蛋白质。如实例235，方法B中所述，用测试化合物处理MDA-MB-453细胞，洗涤和溶解。各溶解产物(25μL)添加到96孔板中且添加2μM生物素标记共价探针(I-127)。在室温下培育反应物2小时。在室温下，将样品和探针混合物转移到FGFR4涂覆的MSD板中持续2小时。在室温下，用抗-抗生蛋白链菌素Sulfo标签(中尺度)抗体获得MSD信号持续1小时。结果根据DMSO对照％表示。使用S形曲线分析程序(吉非帕蒂普瑞森第5版)拟合数据与可变希尔斜率(Hillslope)，以测定EC50值。
这些实验的结果通过评定游离FGFR4蛋白质的量显示本发明化合物共价修饰MDA-MB-453细胞中的FGFR4的能力。如果化合物完全(100％)共价修饰FGFR4，那么无游离FGFR4可用于供生物素标记探针共价修饰和随后结合于抗生蛋白链菌素和检测。结果描绘于表11中的题为“FGFR4占有率EC50(nM)”栏中。
表11：测试化合物的细胞数据的概述
实例261：洗脱实验
将MDA-MB-453细胞接种于12孔或96孔组织培养板中的补充有10％FBS和1％P/S的适当生长培养基中直到90％汇合。使细胞沉降4小时，接着保持于低血清(0.1％FBS)培养基中隔夜。
第二天早晨，去除培养基且在低血清培养基中用1000-2000nM测试化合物处理1小时。用PBS(英杰公司)洗涤细胞，使其不含测试化合物(3×)。一组细胞如上文所述立即溶解(0小时时间点)。用适当完全生长培养基(10-20％FBS)培育剩余细胞持续1、2、4、8、16(在某些情形中)和24小时。在所有时间点收集DMSO(0.5％)对照。
代表性数据显示于图2和图3中。通过细胞洗涤后磷酸化FGFR4(pFGFR4)的检测评定，图2中的数据显示代表性化合物I-69对FGFR4自体磷酸化提供长期抑制。图2中的图形显示pFGFR4的抑制与所检验细胞中FGFR4的再合成速率(T1/2～4-8h)一致。图3中的数据比较共价改性(不可逆)化合物I-1和其相应非共价改性(可逆)类似物I-234的作用持续时间。共价修饰FGFR4的I-1具有长期作用持续时间，这与细胞中FGFR4的再合成速率一致，而I-234在洗脱后不显示长期作用持续时间。
尽管本文描述本发明的大量实施例，但显而易知可对基本实例作出改变，以提供其它利用本发明化合物和方法的实施例。因此，应了解，本发明的范围由随附权利要求书而非以实例方式提出的特定实施例界定。

Claims (68)

1.一种式I化合物，
或其药学上可接受的盐，其中：
X1为-NR4、N、-CR4R4'或-CR4；
X2为-NR5、N、-CR5R5'或-CR5；
X3为N或CR6；
X4为N或CR7；
X5为N、C或CH；其中X1、X2、X3、X4或X5中至少一者为N；
G为H、O、OR或N(R)(R)；
环A为任选地经取代的选自以下的基团：苯基、3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元饱和或部分不饱和杂环，或7到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环；
各R独立地为氢或任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基、苯基、3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元杂环，或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环；或
同一氮原子上的两个R基团与其所连接的所述氮原子一起形成具有0到2个独立地选自氮、氧或硫的额外杂原子的4到7元杂环，或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的额外杂原子的4到7元杂芳基环；
R1为弹头基团；其中R1连接于与T连接的原子相邻的原子；
各R2独立地为-R、卤素、-卤烷基、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2；
R3为氢、C2-6烯基、-W-Cy或C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选地经1到3个独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、氧代基(oxo)、-OR'或-C(O)O(C1-6烷基)；
W不存在或为任选地经一或多个R”取代的二价C1-3亚烷基链且其中W的一个亚甲基单元任选地置换为-O-、-S-或-NR'-；
各R'独立地为氢或C1-6烷基；
各R”独立地为卤素或C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选地经1到3个独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、氧代基或-OR'；
Cy为苯基、C3-7环烷基或具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到7元单环或5到10元双环饱和、部分不饱和或杂芳基环，其中Cy任选地经1到3个Rx取代；
各Rx独立地为H、-CN、氧代基、-NH2、C1-6烷基、卤素、-OR'、-N(R')2、-NHC(O)(C1-6烷基)、-C(O)N(R')2、-C(O)O(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)或-SO2N(R')2；
或如果化合价不允许，那么R3不存在；
R4和R4'中的每一者独立地为氢或任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基、苯基、任选地桥接的3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元杂环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环，或任选地桥接的7到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环；
R5和R5'中的每一者独立地为-R、卤素、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2；
Y为O或NRa；
Ra为氢或任选地经取代的C1-6脂肪族基团；
T为共价键或二价直链或分支链、饱和或不饱和C1-6烃链，其中一或多个亚甲基单元任选地经以下置换：-O-、-S-、-N(R)-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-N(R)C(O)N(R)-、-S(O)-、-SO2-、-SO2N(R)-、-N(R)SO2-或-N(R)SO2N(R)-；
q为0-6；且
R6和R7中的每一者独立地为-R、卤素、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中环A为任选地经取代的苯基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中环A为任选地经取代的3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元饱和或部分不饱和杂环、7到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中环A为苯基、环己基、环己烯基、环戊基、环丁基、环丙基、吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、吡咯、吡唑、哌啶、哌啶酮、吡咯烷、四氢吡喃、四氢呋喃、四氢噻吩二氧化物或环丁烯二酮。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中环A为
6.根据权利要求5所述的化合物，其中各R2为氢。
7.根据权利要求5所述的化合物，其中各R2独立地为-R。
8.根据权利要求5所述的化合物，其中各R2独立地为卤素、-卤烷基、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2。
9.根据权利要求5所述的化合物，其中各R2独立地为-CH3、-Cl、-F、-CF3或-OMe；或选自
10.根据权利要求1所述的化合物，其中环A选自：
11.根据权利要求1所述的化合物，其中R3为氢。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中R3为C2-6烯基、-W-Cy或C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选地经1到3个独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、氧代基、-OR'或-C(O)O(C1-6烷基)。
13.根据权利要求1所述的化合物，其中R3为
14.根据权利要求1所述的化合物，其中R4为任选地经取代的苯基。
15.根据权利要求1所述的化合物，其中R4为任选地经取代的C1-6脂肪族基，或任选地经取代的选自以下的环：3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元杂环或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环。
16.根据权利要求1所述的化合物，其中R4为乙基、苯基、环己基、
17.根据权利要求1所述的化合物，其中R5和R5'中的每一者独立地为-R。
18.根据权利要求1所述的化合物，其中R5和R5'中的每一者独立地为氢。
19.根据权利要求1所述的化合物，其中R5和R5'中的每一者独立地为H或-Me。
20.根据权利要求1所述的化合物，其中T为共价键。
21.根据权利要求1所述的化合物，其中T为二价直链或分支链、饱和或不饱和C1-6烃链，其中一或多个亚甲基单元任选地置换为-O-、-S-、-N(R)-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-N(R)C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-N(R)SO2N(R)-。
22.根据权利要求1所述的化合物，其具有式I-a：
或其药学上可接受的盐。
23.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为式I-b化合物：
或其药学上可接受的盐。
24.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为式I-c化合物：
或其药学上可接受的盐。
25.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为式I-d化合物：
或其药学上可接受的盐。
26.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为式I-e化合物：
或其药学上可接受的盐。
27.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为式I-f化合物：
或其药学上可接受的盐。
28.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为式I-g化合物：
或其药学上可接受的盐。
29.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为式I-h化合物：
或其药学上可接受的盐。
30.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为式I-j化合物：
或其药学上可接受的盐。
31.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为式I-k化合物：
或其药学上可接受的盐。
32.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为式I-n化合物：
或其药学上可接受的盐。
33.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为式I-q化合物：
或其药学上可接受的盐。
34.根据权利要求1所述的化合物，其选自表1。
35.根据权利要求1所述的化合物，其选自表2。
36.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为-L-Y，其中：
L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的一个或两个额外亚甲基单元任选地且独立地由以下置换：-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-、-C(O)O-、亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-；
Y为氢、任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，或具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到10元单环或双环饱和、部分不饱和或芳基环，且其中所述环经1到4个Re基团取代；且
各Re独立地选自-Q-Z、氧代基、NO2、卤素、CN、适合离去基或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，其中：
Q为共价键或二价C1-6饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中Q的一个或两个亚甲基单元任选地且独立地由以下置换：-N(R)-、-S-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SO-或-SO2-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-；且
Z为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
37.根据权利要求36所述的化合物，其中：
L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-C(O)-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-，且L的一个或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-；且
Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
38.根据权利要求37所述的化合物，其中L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-C(O)-，且L的一个或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-。
39.根据权利要求37所述的化合物，其中L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-OC(O)-。
40.根据权利要求37所述的化合物，其中L为-NRC(O)CH＝CH-、-NRC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NRC(O)CH＝CHCH2O-、-CH2NRC(O)CH＝CH-、-NRSO2CH＝CH-、-NRSO2CH＝CHCH2-、-NRC(O)(C＝N2)C(O)-、-NRC(O)C(＝CH2)CH2-、-CH2NRC(O)-、-CH2CH2NRC(O)-或-CH2NRC(O)亚环丙基-；其中R为H或任选地经取代的C1-6脂肪族基；且Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
41.根据权利要求40所述的化合物，其中L为-NHC(O)CH＝CH-、-NHC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NHC(O)CH＝CHCH2O-、-CH2NHC(O)CH＝CH-、-NHSO2CH＝CH-、-NHSO2CH＝CHCH2-、-NHC(O)(C＝N2)C(O)-、-NHC(O)C(＝CH2)CH2-、-CH2NHC(O)-、-CH2CH2NHC(O)-或-CH2NHC(O)亚环丙基-。
42.根据权利要求36所述的化合物，其中L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个亚烷基双键且L的至少一个亚甲基单元置换为-C(O)-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-，且L的一个或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-。
43.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为-L-Y，其中：
L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个三键且L的一个或两个额外亚甲基单元任选地且独立地置换为-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-，
Y为氢、任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，或具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到10元单环或双环饱和、部分不饱和或芳基环，且其中所述环经1到4个Re基团取代；且
各Re独立地选自-Q-Z、氧代基、NO2、卤素、CN、适合离去基或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，其中：
Q为共价键或二价C1-6饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中Q的一个或两个亚甲基单元任选地且独立地由以下置换：-N(R)-、-S-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SO-或-SO2-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-；且Z为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
44.根据权利要求43所述的化合物，其中Y为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
45.根据权利要求44所述的化合物，其中L为-C≡C-、-C≡CCH2N(异丙基)-、-NHC(O)C≡CCH2CH2-、-CH2-C≡C-CH2-、-C≡CCH2O-、-CH2C(O)C≡C-、-C(O)C≡C-或-CH2OC(＝O)C≡C-。
46.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为-L-Y，其中：
L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L的一个亚甲基单元置换为亚环丙基且L的一个或两个额外亚甲基单元独立地置换为-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-；
Y为氢、任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，或具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到10元单环或双环饱和、部分不饱和或芳基环，且其中所述环经1到4个Re基团取代；且
各Re独立地选自-Q-Z、氧代基、NO2、卤素、CN、适合离去基或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，其中：
Q为共价键或二价C1-6饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中Q的一个或两个亚甲基单元任选地且独立地由以下置换：-N(R)-、-S-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SO-或-SO2-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-；且
Z为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
47.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为-L-Y，其中：
L为共价键、-C(O)-、-N(R)C(O)-或二价C1-8饱和或不饱和直链或分支链烃链；且
Y选自以下(i)到(xvii)：
(i)经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基；
(ii)任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基；或
(iii)任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基；或
(iv)具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代；或
(v)具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代；或
(vi)其中各R、Q、Z；或
(vii)饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代；或
(viii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代；或
(ix)部分不饱和3到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代；
(x)或
(xi)具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代；或
(xii)或
(xiii)具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代；或
(xiv)
其中各Re如上文所定义且如本文所述；或
(xv)具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代；或
(xvi)
(xvii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8到10元双环、饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代；
其中：
各R基团独立地为氢或任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基、苯基、具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元杂环，或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环；
各Re独立地选自-Q-Z、氧代基、NO2、卤素、CN、适合离去基或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，其中：
Q为共价键或二价C1-6饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中Q的一个或两个亚甲基单元任选地且独立地由以下置换：-N(R)-、-S-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SO-或-SO2-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-；且
Z为氢或任选地经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
48.根据权利要求47所述的化合物，其中L为共价键、-CH2-、-NH-、-C(O)-、-CH2NH-、-NHCH2-、-NHC(O)-、-NHC(O)CH2OC(O)-、-CH2NHC(O)-、-NHSO2-、-NHSO2CH2-、-NHC(O)CH2OC(O)-或-SO2NH-。
49.根据权利要求48所述的化合物，其中L为共价键。
50.根据权利要求47、48或49中任一权利要求所述的化合物，其中Y选自：
其中各Re独立地选自卤素。
51.根据权利要求1所述的化合物，其中R1选自：
其中各Re独立地为适合离去基、NO2、CN或氧代基。
52.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为-L-Y，其中：
L为共价键或二价C1-8饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中L的一个、两个或三个亚甲基单元任选地且独立地置换为-N(R)-、-N(R)C(O)-、-N(R)SO2-、-O-、-C(O)-或-SO2-；且
Y为氢或任选地经氧代基、卤素、N(R)2、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
53.根据权利要求1所述的化合物，其中R1选自：
54.一种组合物，其包含根据权利要求1所述的化合物和药学上可接受的佐剂、载剂或媒剂。
55.一种用于抑制FGFR4或其突变体在患者或生物样品中的活性的方法，其包含向所述患者投予根据权利要求1所述的化合物或使所述生物样品与根据权利要求1所述的化合物接触的步骤。
56.根据权利要求55所述的化合物，其中所述FGFR4或其突变体的活性被不可逆地抑制。
57.根据权利要求56所述的化合物，其中所述FGFR4或其突变体的活性通过共价修饰FGFR4的Cys552不可逆地抑制。
58.一种治疗有需要的患者的FGFR4介导的病症的方法，其包含向所述患者投予根据权利要求1所述的化合物的步骤。
59.根据权利要求58所述的化合物，其中所述病症为肝细胞癌。
60.根据权利要求58所述的化合物，其中所述病症为横纹肌肉瘤、食道癌、乳癌或头部或颈部癌。
61.一种式I-t化合物，
或其药学上可接受的盐，其中：
R2'为二价R2；
T1为二价系栓部分；
Rt为可检测部分；
X1为-NR4、N、-CR4R4'或-CR4；
X2为-NR5、N、-CR5R5'或-CR5；
X3为N或CR6；
X4为N或CR7；
X5为N、C或CH；其中X1、X2、X3、X4或X5中至少一者为N；
G为H、O、OR或N(R)(R)；
环A为任选地经取代的选自以下的基团：苯基、3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元饱和或部分不饱和杂环，或7到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环；
各R独立地为氢或任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基、苯基、3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元杂环，或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环；或
同一氮原子上的两个R基团与其所连接的所述氮原子一起形成具有0到2个独立地选自氮、氧或硫的额外杂原子的4到7元杂环，或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的额外杂原子的4到7元杂芳基环；
R1为弹头基团；其中R1连接于与T连接的原子相邻的原子；
各R2独立地为-R、卤素、-卤烷基、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2；
R3为氢、C2-6烯基、-W-Cy或C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选地经1到3个独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、氧代基、-OR'或-C(O)O(C1-6烷基)；
W不存在或为任选地经一或多个R”取代的二价C1-3亚烷基链且其中W的一个亚甲基单元任选地置换为-O-、-S-或-NR'-；
各R'独立地为氢或C1-6烷基；
各R”独立地为卤素或C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选地经1到3个独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、氧代基或-OR'；
Cy为苯基、C3-7环烷基或具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3到7元单环或5到10元双环饱和、部分不饱和或杂芳基环，其中Cy任选地经1到3个Rx取代；
各Rx独立地为H、-CN、氧代基、-NH2、C1-6烷基、卤素、-OR'、-N(R')2、-NHC(O)(C1-6烷基)、-C(O)N(R')2、-C(O)O(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)或-SO2N(R')2；
或如果化合价不允许，那么R3不存在；
R4和R4'中的每一者独立地为氢或任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基、苯基、任选地桥接的3到8元饱和或部分不饱和碳环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到7元杂环、具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元单环杂芳基环，或任选地桥接的7到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环；
R5和R5'中的每一者独立地为-R、卤素、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2；
Y为O或NRa；
Ra为氢或任选地经取代的C1-6脂肪族基团；
T为共价键或二价直链或分支链、饱和或不饱和C1-6烃链，其中一或多个亚甲基单元任选地经以下置换：-O-、-S-、-N(R)-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-N(R)C(O)N(R)-、-S(O)-、-SO2-、-SO2N(R)-、-N(R)SO2-或-N(R)SO2N(R)-；
q为0-6；且
R6和R7中的每一者独立地为-R、卤素、-OR、-SR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R或-N(R)2。
62.根据权利要求61所述的化合物，其中T1选自：
63.根据权利要求62所述的化合物，其中Rt为生物素。
64.根据权利要求62所述的化合物，其中Rt为生物素亚砜。
65.根据权利要求62所述的化合物，其中Rt为放射性同位素。
66.根据权利要求62所述的化合物，其中Rt为荧光标记。
67.根据权利要求62所述的化合物，其具有以下结构：
68.一种式A的结合物，
Cys552-修饰子-抑制剂部分
A
其中：
所述Cys552为FGFR4的Cys552；
所述修饰子为由弹头基团与FGFR4激酶的所述Cys552共价结合而产生的二价基团；
所述弹头基团为能够共价结合于Cys552的官能团；且
所述抑制剂部分为在所述FGFR4激酶的结合位点结合的部分。
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