CN105158367A - 一种固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，包括步骤：取待测样品粉碎后，向待测样品中加入醋酸乙腈溶液和Na₂EDTA缓冲溶液，同时加入无水硫酸钠和氯化钠均质提取，提取制得的上清液中加入含C18和NH₂的吸附剂进行净化，然后使用高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱测定，本发明的筛选方法可以对动物源性食品中多类兽药残留进行同时筛选检测，具有快速、简便、灵敏、准确等特点，可以对样品中的目标兽药进行准确的定性分析，同时还能进行定量检测，该法适用于批量样品中多类兽药残留的快速检测。针对固体动物源性食品，减少样品基质对目标兽药的影响，提取效果好，回收率高。

Description

一种固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法

技术领域：

本发明涉及一种固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，属于食品分析技术领域。

背景技术：

食品安全已经引起了全社会的广泛关注,其中兽药残留是影响动物源性食品安全的主要因素之一。随着我国规模化养殖业的发展，各种抗生素等药物不但被用于动物疾病的治疗，同时还添加到动物饲料或饮水中用于非治疗性的目的，以促进动物生长、提高饲料转化率、改善产品品质。这些药物的过量和违禁使用不可避免的引起动物源性食品中兽药残留，危害消费者身体健康，长期食用还容易诱导细菌耐药性的产生。因此，监控兽药合理使用已是刻不容缓的事情。

控制兽药残留量的关键环节之一就是对兽药残留量进行及时、准确的分析检测，保证兽药的合理使用，杜绝兽药残留超标。发展快速、可靠、灵敏和实用的兽药残留分析技术无疑是控制兽药残留、保证食品安全和避免国际间有关贸易争端的基础。

由于各类兽药的理化性质存在较大差异，现有的兽药残留分析主要以分类检测为主，而这些分析方法所能同时分析的药物种类较少，若要检测多类兽药，需进行多次的样品前处理，检测周期长，成本高，效率低，不能满足目前兽药种类不断增加，分析通量不断提高的需求。目前，国外学者将兽药多残留同时检测技术的开发作为研究的重点和难点。因此，开展动物源性食品中多种兽药残留的同时分析就显得十分必要。

目前，常用于兽药残留检测的方法有酶联免疫分析法(ELISA)、气相色谱法(GC)、气相色谱质谱法(GC-MS)、液相色谱法(HPLC)、液相色谱质谱法(LC-MS)和液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)等。ELISA、GC和HPLC的方法灵敏度较低，选择性和特异性较差；GC-MS，LC-MS和LC-MS/MS虽然方法灵敏度和特异性都比较高，但是，由于难以完全阐明化合物的结构裂解信息，定性准确度方面尚有欠缺，容易产生假阳性的结果，而且能同时检测的化合物数量有限。

发明内容：

针对现有技术的不足，本发明提供一种固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，该方法能同时快速筛选确证猪肉、鸡肉、蛋类、水产品等固体动物源性食品中6类33种兽药。

术语说明：

动物源性食品是指全部可食用的动物组织以及蛋和奶，包括肉类及其制品(含动物脏器)、水生动物产品等。

定量限：是指分析方法可定量测定样品中待测组分的最低浓度或最低量。

空白样品提取液：指不含有待测物质的样品经本发明步骤(1)提取、步骤(2)净化获得的提取液。

本发明的技术方案如下：

一种固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，包括步骤如下：

(1)提取：取待测样品粉碎后，向待测样品中加入醋酸乙腈溶液和Na₂EDTA缓冲溶液，醋酸乙腈溶液的体积与待测样品的质量比为：3～6:1，单位：mL/g,醋酸乙腈溶液的质量浓度为3～6％，Na₂EDTA缓冲溶液的加入量与待测样品的质量比为0.1～0.3:4，同时加入无水硫酸钠和氯化钠均质提取1～3min，然后进行离心，得提取上清液；

(2)提取上清液中加入含C18和NH₂的吸附剂，C18和NH₂的吸附剂中C18净化粉的添加量为12～16mg/mL提取上清液，NH₂净化粉的添加量为18～22mg/mL提取上清液，振荡3～5min，冷冻离心，静置分层后，取上清液干燥，然后加入甲酸水溶液和乙腈的混合定溶液，混匀后，过滤膜，得供试品溶液：

(3)对照样品溶液的制备：分别取目标分析物的标准品，用甲醇溶解，定容，得1mg/mL不同目标分析物的标准储备液；根据每种目标分析物的定量限，分别取相应量的标准储备液混合，用甲醇稀释并定容，制得混合标准中间溶液，将混合标准中间溶液用空白样品提取液稀释，制得对照样品溶液；

(4)将供试品溶液与照样品溶液使用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱测定，

(5)对样品进行一级全扫描，获得MS全扫描数据，对样品进行定性分析。

本发明优选的，还包括对样品进行定量分析步骤，采用上述步骤(4)的检测条件，对对照样品溶液进样，以分子离子峰面积为纵坐标，对照样品溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用对照样品工作曲线对样品进行定量分析，样品溶液中待测物质的响应值应在仪器测定的线性范围内；测定结果按下式计算：

$X=c\×\frac{V}{m}\×\frac{1000}{1000}$

式中：

X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(μg/kg)；

c——从对照样品工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；

V——试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；

m——试样溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。

本发明的定性分析，通过样品中化合物的实测分子量、保留时间与TOF数据库中的精确质量数及保留时间匹配，在质量精确度绝对值小于10ppm，保留时间偏差在0.25min之内，且得分≥70时，可初步确定为疑似兽药，待由Q-TOF进一步确证。

对于TOF数据库侦测疑似兽药，需要进行Q-TOF数据库的核查确证。在Q-TOF方法条件下，对实际样品进行再次测定，获得样品碎片离子全扫描信息，经过与Q-TOF数据谱库中的碎片离子信息检索比对，得到二级检索得分和对应的化合物，对于检索得分≥70的化合物被确证为目标兽药。对于检索得分＜70的化合物通过背景扣除来降低杂质离子对检索的影响；对于仍不能达到得分要求的化合物需对比其主要碎片离子，若有两个或两个以上的主要碎片离子匹配，则可确证为目标兽药。

本发明优选的，所述的待测样品为鸡肉、猪肉、牛肉、羊肉、蛋类或水产品，粉碎采用绞肉机进行粉碎。绞肉机为现有市购产品。

本发明优选的，步骤(1)中醋酸乙腈溶液的体积与待测样品的质量比为：4～5:1，单位：mL/g,醋酸乙腈溶液的质量浓度为4～5％，Na₂EDTA缓冲溶液的加入量与待测样品的质量比为0.15～0.25:4。

本发明优选的，步骤(1)中无水硫酸钠的加入量与待测样品的质量比为1～2:1，氯化钠的加入量与待测样品的质量比为0.1～0.8:1。

本发明优选的，步骤(1)中，均质提取的转速为1100～13000r/min。

本发明优选的，步骤(2)中含C18和NH₂的吸附剂中C18净化粉的粒度为40-60μm，NH₂净化粉的粒度50μm，C18净化粉的添加量为14～15mg/mL提取上清液，NH₂净化粉的添加量为20～21mg/mL提取上清液。

C18净化粉、NH₂净化粉均为现有市购产品，C18净化粉和NH₂净化粉天津Bonna-Agela公司有售。

本发明优选的，步骤(2)中所述的冷冻离心是于-1～-5℃下，以8000～9000r/min的转速离心3～6min。

本发明优选的，步骤(2)中上清液干燥为30～50℃旋转蒸发至近干，然后氮吹吹干，氮吹压力：180～220kPa，氮吹温度：30～50℃。

本发明优选的，步骤(2)，甲酸水溶液和乙腈的混合定溶液中，甲酸水溶液：乙腈的体积比为8～10:1，甲酸水溶液的质量浓度为0.1～0.3％；甲酸水和乙腈的混合定溶液的加入量为1-3ml。

本发明优选的，步骤(2)膜过滤为经过0.22μm滤膜过滤。

本发明优选的，步骤(4)中超高效液相色谱仪器的使用条件：色谱柱：ZORBAXSB-C18色谱柱，3.5μm，100×2.1mm；柱温：40℃；流动相：A为乙腈，B为甲酸水溶液，流速：0.4mL/min；进样量：10μL；流动相中A与B的体积比随时间逐渐增加，所述的梯度洗脱的程序为：0～10分钟时，流动相A∶流动相B＝1∶99～30∶70；10～14分钟时，流动相A∶流动相B＝30∶70～40∶60；14～22分钟时，流动相A∶流动相B＝40∶60～100∶0；

质谱条件：离子源：电喷雾离子源(ESI)，正离子模式；毛细管电压：4000V；雾化气压力：35psi；干燥气温度：325℃；干燥气流速：10L/min；鞘气温度：325℃；鞘气流速：11L/min；参比离子为121.0509m/z和922.0098m/z，用于正离子模式下的实时校正。

本发明优选的，步骤(4)中流动相B甲酸水溶液为含有5mmol乙酸铵的甲酸水溶液，甲酸水溶液的质量浓度为0.1～0.3％。

本发明优选的，步骤(5)中一级全扫描扫描范围为50–1700m/z，扫描速率为3spectra/s。

本发明的筛选方法，还包括数据库的建立，数据库的建立具体方法：配制浓度为1000μg/L的溶剂标准溶液，对于精确质量数据库，由LC-Q-TOF/MS在MS模式下进行测定，精确分子量通过化合物分子式进行检索，当目标化合物得分超过90，质量偏差低于5ppm时，认为化合物被识别，并记录下该峰在色谱分离条件下的保留时间。对于精确质量数据库，将化合物名称，分子式，精确分子量，保留时间，输入Excel模板，保存为精确质量数据库，用于筛查软件的分析。

为进一步准确定性，对于检索出的离子或感兴趣离子需要二级质谱信息确证，即需建立碎片离子谱库。对于碎片离子谱库，在TargetedMS/MS采集界面输入目标物的母离子，保留时间和相应的碰撞能量，进行数据采集。数据先由化合物分子式进行检索，处理结果应与上文所述的标准相同(得分超过90，质量偏差低于5ppm)；然后，采用“FindbytargetedMS/MS”对数据进行处理，并导出CEF文件；最后，将CEF文件导入PCDL软件中，与对应的兽药信息相关联并保存。碎片离子谱库中每种兽药含有4个不同碰撞能量下的碎片离子信息，以确保筛查列表的完整和可靠，碰撞能量的选择主要根据兽药的碎裂程度，选择碎片离子信息较为丰富的4个碰撞能量。

本发明的有益效果如下：

1、本发明的样品提取，针对固体动物源性食品，以醋酸乙腈溶液和Na₂EDTA缓冲溶液做提取剂，以氯化钠(NaCl)和无水硫酸钠(Na₂SO₄)分别作为盐析剂和吸水剂，在最大程度提取目标兽药的同时，减少样品基质对目标兽药的影响，提取效果好，回收率高。

2、本发明的净化采用C18和NH₂两种净化粉组合使用，净化提取液，在保证目标兽药不被吸附剂吸附的同时，尽量去除样品提取液中的干扰杂质，结果表明去杂质效率高，净化效果好，63.6％的目标兽药的基质效应不明显。

3、本发明的筛选方法可以对动物源性食品中多类兽药残留进行同时筛选检测，具有快速、简便、灵敏、准确等特点，可以对样品中的目标兽药进行准确的定性分析，同时还能进行定量检测，该法适用于批量样品中多类兽药残留的快速检测。

附图说明：

图1不同试剂提取对提取效率影响柱状图；纵坐标为平均回收率，

图2不同浓度醋酸乙腈提取对提取效率影响柱状图；纵坐标为平均回收率，横坐标为醋酸乙腈的不同浓度。

图3不同净化粉对回收率的影响柱状图，纵坐标为回收率。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明所保护范围不限于此。

实施例中的原料均为市购产品。

实施例1

一种固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，包括步骤如下：

(1)提取：取鲫鱼鱼肉为待测样品，称取4.00g待测样品，精确至0.01g，于50mL离心管中，加入20mL5％醋酸乙腈溶液和0.1gNa₂EDTA缓冲溶液，同时加入4.0g无水硫酸钠(Na₂SO4)和2.0g氯化钠(NaCl)均质提取1min,9000r/min离心5min，得提取上清液；

(2)将提取上清液移入50mL含300mgC18和400mgNH₂净化粉的具塞离心管中，使净化粉与提取液充分接触，振荡5min，以9000r/min冷冻(-2℃)离心5min，静置10min后，取10mL上清液(相当于2.0g样品)于50mL鸡心瓶中，40℃旋转蒸发至近干，氮吹吹干，氮吹压力：200kPa，氮吹温度：40℃，加入1mL0.1％甲酸水溶液：乙腈(9:1,V:V)的定容液，漩涡混匀后，经0.22μm滤膜过滤，得供试品溶液。

(3)对照样品溶液的制备：分别准确称取相当于25mg目标分析物的标准品于50mL烧杯中，用甲醇溶解并定量转移到25mL容量瓶中，定容至刻度，即得1mg/mL不同目标分析物的标准储备液，-18℃避光保存。

根据每种目标分析物的定量限，分别取相应量的标准储备液于50mL容量瓶中进行混合，用甲醇稀释并定容至刻度，配制成浓度各不相同的混合标准中间溶液(以磺胺为例，磺胺浓度为10μg/mL)。4℃避光保存。

将混合标准中间溶液加空白样品提取液逐级稀释，制得对照样品溶液；

(4)将供试品溶液与照样品溶液使用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱测定：超高效液相色谱仪器的使用条件：色谱柱：ZORBAXSB-C18色谱柱，3.5μm，100×2.1mm；柱温：40℃；流动相：A为乙腈，B为甲酸水溶液(含乙酸铵)，流速：0.4mL/min；进样量：10μL；流动相中A与B的体积比随时间逐渐增加，所述的梯度洗脱的程序为：0～10分钟时，流动相A∶流动相B＝1∶99～30∶70；10～14分钟时，流动相A∶流动相B＝30∶70～40∶60；14～22分钟时，流动相A∶流动相B＝40∶60～100∶0；

质谱条件：离子源：电喷雾离子源(ESI)，正离子模式；毛细管电压：4000V；雾化气压力：35psi；干燥气温度：325℃；干燥气流速：10L/min；鞘气温度：325℃；鞘气流速：11L/min；参比离子为121.0509m/z和922.0098m/z，用于正离子模式下的实时校正；

(5)对样品进行一级全扫描，扫描范围为50–1700m/z，扫描速率为3spectra/s，获得MS全扫描数据，对样品进行定性分析。

(6)采用上述步骤(4)的检测条件，对对照样品溶液进样，以分子离子峰面积为纵坐标，对照样品溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用对照样品工作曲线对样品进行定量分析，样品溶液中待测物质的响应值应在仪器测定的线性范围内；测定结果按下式计算：

$X=c\×\frac{V}{m}\×\frac{1000}{1000}$

式中：

X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(μg/kg)；

c——从对照样品工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；

V——试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；

m——试样溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。

对比例1：

一种固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，同实施例1，不同之处在于：

步骤(1)取待测样品粉碎后，向待测样品中加入乙腈(ACN)，同时加入无水硫酸钠和氯化钠均质提取1～3min，然后进行离心，得提取上清液。

对比例2：

一种固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，同实施例1，不同之处在于：

步骤(1)取待测样品粉碎后，向待测样品中加入乙酸乙酯，同时加入无水硫酸钠和氯化钠均质提取1～3min，然后进行离心，得提取上清液。

对比例3：

一种固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，同实施例1，不同之处在于：

步骤(1)取待测样品粉碎后，向待测样品中加入甲醇(MeOH)，同时加入无水硫酸钠和氯化钠均质提取1～3min，然后进行离心，得提取上清液。

应用例

一、取经测定不含有待测物质的样品中添加100μg/kg(以磺胺类计)的待测物质，分别按实施例1的提取方法以及对比例1-3的提取方法，采用实施例1步骤(2)的净化方法以及步骤(4)的超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱测定条件进行测定磺胺类的回收率，实施例1以及对比例1-3不同提取液对回收率影响见图1。

结果表明，用乙腈、乙酸乙酯和甲醇提取时，提取液澄清，用甲醇提取时，提取液浑浊，这可能是由于甲醇与蛋白质形成絮状沉淀的原因，不利于后续净化和测定步骤的进行。从实验结果看，用乙腈和乙酸乙酯提取时，青霉素G、氨苄青霉素、阿莫西林、四环素、土霉素、强力霉素、金霉素7种目标化合物没有回收；用甲醇提取时，回收率普遍偏低，70％化合物的回收率在40％以下；醋酸乙腈的提取效率最高，75.7％的目标化合物回收率在70％～120％范围内，且采用醋酸乙腈提取时，共提物较少。

二、取经测定不含有待测物质的样品中添加100μg/kg(以磺胺类计)的待测物质，分别采用浓度为1％、3％、5％、7％、10％、15％醋酸乙腈对已添加待测物质的样品进行提取，采用实施例1步骤(2)的净化方法以及步骤(4)的超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱测定条件进行测定磺胺类的回收率，分别将提取检测值与添加值想比较，不同浓度醋酸乙腈对回收率影响见图2所示。

结果表明，采用1％醋酸乙腈提取时，没有检索到青霉素G、氨苄青霉素、四环素、土霉素、强力霉素、金霉素6种目标化合物；采用3％醋酸乙腈提取时，没有检索到氨苄青霉素、四环素、强力霉素、金霉素4种目标化合物；采用5％和7％醋酸乙腈提取时，检索到所有待测分析物，且回收率最高；随着醋酸比例继续增加，共提物增多，回收率下降。因此，5％醋酸乙腈提取效果最好。

三、取1mL100μg/mL的对照样品溶液，分别加入200mg中性氧化铝、弗罗里硅土、C18、PSA、PAX、NH₂、PEP、GCB、PCX，经振荡、离心后，取上清液过0.22μm滤膜测定。实验结果表明，中性氧化铝、弗罗里硅土、GCB、PCX对目标化合物吸附较严重，尤其是PCX对2/3以上的目标化合物都有吸附。初步选定C18、PSA、PAX、NH₂、PEP对提取液进行净化。

取经测定不含有待测物质的样品中添加100μg/kg(以磺胺类计)的待测物质，分别采用C18、硅胶表面键合N-丙基乙二胺(PSA)、阴离子交换混合机理水可浸润型聚合物基质(PAX)、NH₂、硅胶表面键合聚苯乙烯/二乙烯苯，表面同时具有亲水性和憎水性基团(PEP)及两者之间相互组合已添加待测物质的样品进行净化，采用实施例1步骤(4)的超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱测定条件进行测定磺胺类的回收率，分别将提取检测值与添加值想比较，不同净化剂对回收率影响见图3所示。

结果表明，C18主要吸附非极性物质，对脂肪等共提物吸附性强，NH₂对糖类共提物净化效果好。从回收率角度看，C18、NH2两种吸附剂单独使用时，目标化合物的平均回收率分别为80.6％和70.3％，当将C18与NH₂两种吸附剂组合使用时取得了更好的效果，净化样品平均回收率为89.3％。

Claims (10)

1.一种固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，包括步骤如下：

(1)提取：取待测样品粉碎后，向待测样品中加入醋酸乙腈溶液和Na₂EDTA缓冲溶液，醋酸乙腈溶液的体积与待测样品的质量比为：3～6:1，单位：mL/g,醋酸乙腈溶液的质量浓度为3～6％，Na₂EDTA缓冲溶液的加入量与待测样品的质量比为0.1～0.3:4，同时加入无水硫酸钠和氯化钠均质提取1～3min，然后进行离心，得提取上清液；

(2)提取上清液中加入含C18和NH₂的吸附剂，C18和NH₂的吸附剂中C18净化粉的添加量为12～16mg/mL提取上清液，NH₂净化粉的添加量为18～22mg/mL提取上清液，振荡3～5min，冷冻离心，静置分层后，取上清液干燥，然后加入甲酸水溶液和乙腈的混合定溶液，混匀后，过滤膜，得供试品溶液：

(3)对照样品溶液的制备：分别取目标分析物的标准品，用甲醇溶解，定容，得1mg/mL不同目标分析物的标准储备液；根据每种目标分析物的定量限，分别取相应量的标准储备液混合，用甲醇稀释并定容，制得混合标准中间溶液，将混合标准中间溶液用空白样品提取液稀释，制得对照样品溶液；

(4)将供试品溶液与照样品溶液使用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱测定，

(5)对样品进行一级全扫描，获得MS全扫描数据，对样品进行定性分析。

2.根据权利要求1所述的固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，其特征在于，还包括对样品进行定量分析步骤，采用上述步骤(4)的检测条件，对对照样品溶液进样，以分子离子峰面积为纵坐标，对照样品溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用对照样品工作曲线对样品进行定量分析，样品溶液中待测物质的响应值应在仪器测定的线性范围内；测定结果按下式计算：

$X=c\×\frac{V}{m}\×\frac{1000}{1000}$

式中：

X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(μg/kg)；

c——从对照样品工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；

V——试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；

m——试样溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。

3.根据权利要求1所述的固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，其特征在于，步骤(1)中醋酸乙腈溶液的体积与待测样品的质量比为：4～5:1，单位：mL/g,醋酸乙腈溶液的质量浓度为4～5％，Na₂EDTA缓冲溶液的加入量与待测样品的质量比为0.15～0.25:4，步骤(1)中无水硫酸钠的加入量与待测样品的质量比为1～2:1，氯化钠的加入量与待测样品的质量比为0.1～0.8:1。

4.根据权利要求1所述的固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，其特征在于，步骤(1)中，均质提取的转速为1100～13000r/min。

5.根据权利要求1所述的固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，其特征在于，步骤(2)中含C18和NH₂的吸附剂中C18净化粉的粒度为40-60μm，NH₂净化粉的粒度50μm，C18净化粉的添加量为14～15mg/mL提取上清液，NH₂净化粉的添加量为20～21mg/mL提取上清液。

6.根据权利要求1所述的固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述的冷冻离心是于-1～-5℃下，以8000～9000r/min的转速离心3～6min，步骤(2)中上清液干燥为30～50℃旋转蒸发至近干，然后氮吹吹干，氮吹压力：180～220kPa，氮吹温度：30～50℃。

7.根据权利要求1所述的固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，其特征在于，步骤(2)，甲酸水溶液和乙腈的混合定溶液中，甲酸水溶液：乙腈的体积比为8～10:1，甲酸水溶液的质量浓度为0.1～0.3％；甲酸水和乙腈的混合定溶液的加入量为1-3ml，膜过滤为经过0.22μm滤膜过滤。

8.根据权利要求1所述的固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，其特征在于，步骤(4)中超高效液相色谱仪器的使用条件：色谱柱：ZORBAXSB-C18色谱柱，3.5μm，100×2.1mm；柱温：40℃；流动相：A为乙腈，B为甲酸水溶液，流速：0.4mL/min；进样量：10μL；流动相中A与B的体积比随时间逐渐增加，所述的梯度洗脱的程序为：0～10分钟时，流动相A∶流动相B＝1∶99～30∶70；10～14分钟时，流动相A∶流动相B＝30∶70～40∶60；14～22分钟时，流动相A∶流动相B＝40∶60～100∶0；

质谱条件：离子源：电喷雾离子源(ESI)，正离子模式；毛细管电压：4000V；雾化气压力：35psi；干燥气温度：325℃；干燥气流速：10L/min；鞘气温度：325℃；鞘气流速：11L/min；参比离子为121.0509m/z和922.0098m/z，用于正离子模式下的实时校正。

9.根据权利要求8所述的固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，其特征在于，步骤(4)中流动相B甲酸水溶液为含有5mmol乙酸铵的甲酸水溶液，甲酸水溶液的质量浓度为0.1～0.3％。

10.根据权利要求1所述的固体动物源性食品中多类兽药残留同时筛选检测方法，其特征在于，步骤(5)中一级全扫描扫描范围为50–1700m/z，扫描速率为3spectra/s。