CN106841430A - 一种液相色谱‑串联质谱测定饲料中抗菌类和违禁药物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于饲料中抗菌类和违禁药物残留检测技术领域。具体涉及一种液相色谱‑串联质谱测定饲料中抗菌类和违禁类药物的方法。本发明的主要步骤为，将饲料样品，加入适量体积比的乙腈与Na₂EDTA溶液中充分漩涡混匀，利用超声法提取，然后离心，将离心后的提取溶液，用QuEChERS净化剂净化，经过氮气浓缩后，利用液相色谱‑串联质谱进行测定。本发明灵敏度高，操作简便、快速、有机试剂用量少。本发明可同时定性和定量检测饲料中多类抗菌类和违禁药物，检出限完全能够满足饲料样品中抗菌类和违禁药物残留检测要求。

Description

一种液相色谱-串联质谱测定饲料中抗菌类和违禁药物的 方法

技术领域

本发明属于饲料中抗菌类和违禁类药物残留检测技术领域，具体涉及液相色谱-串联质谱联用测定饲料中抗菌类和违禁药物的方法。

背景技术

食品安全一直是个热议的话题，它关系到每个人的健康和生命安全。饲料作为动物的日常饲粮，为动物提供营养来源，满足动物生长的生理需求。因此，饲料的安全在很大程度上决定着动物性食品的卫生安全性。兽药在养殖业中有非常重要的作用，但长期、普遍使用添加药物的饲料，药物的原形或其代谢产物和有关杂质可能蓄积、残留在动物的组织、器官或食用产品中，这样便造成了兽药在动物性食品中的残留，危害消费者健康。保证饲料产品的质量安全，可从源头上保证畜产品的质量和食品的安全。

动物饲料中违法添加禁用药物的液相色谱质谱联用的分析方法在近年来得到了越来越广泛的应用，如β-受体激动剂、抗生素类药物及镇静剂等的检测，部分常见药物检测的相应国家和行业标准也逐步出台。已报道的文献中有同时检测食品中一类或几类抗菌类和违禁药物和抗氧化剂的方法，但缺乏同时检测饲料中抗菌类和违禁药物的方法。因此，目前需要探索快速高效分离检测多类抗菌类和违禁药物的检测方法，满足饲料安全检测的需要，填补饲料检测方面的空白。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种液相色谱-串联质谱联用测定饲料中抗菌类和违禁药物的方法。本发明具有灵敏度高、快速，简便、成本低和回收率高等优点。

本发明的技术方案如下所述：

一种液相色谱-串联质谱同时测定饲料中抗菌类和违禁类药物的方法，包括如下步骤：

(1)样品提取

准确称取饲料样品2.0g，加入提取剂，所述的提取剂的配比为：乙腈：0.5％浓度的Na₂EDTA，体积比为90:10；充分漩涡混匀，5min超声提取，离心，得到提取液；

(2)QuEChERS净化

向离心后的提取液中加入QuEChERS净化吸附剂C18 500mg，漩涡后离心；移取上清液，用40℃氮气吹干；采用体积比为10:90的乙腈：0.1％浓度的甲酸溶解残渣，并定容至1mL；

(3)液相色谱-串联质谱检测

色谱条件：

高效液相色谱柱：C₁₈色谱柱，150mm×2.1mm，5μm；进样量为10μL；柱温为40℃；流速为0.2mL/min；

HPLC洗脱条件：

配制溶液A和溶液B：其中溶液A为0.1％浓度的甲酸水溶液，溶液B为0.1％浓度的甲酸乙腈；

洗脱程序：

0min：5％浓度的溶液B，5min：5％浓度的溶液B，10min：25％浓度的溶液B，25min：50％浓度的溶液B，40min：70％浓度的溶液B，最后用5％浓度的溶液B平衡5min；

质谱条件：

API5000三重四级杆串联质谱仪：正负离子模式；电喷雾离子源；扫描方式：多反应监测；离子源温度500℃；碰撞气压力0.021MPa；气帘气压力0.24MPa；

(4)准确量取适量抗菌类和违禁药物混合标准工作液，用空白样品基质溶液作为标准溶液的稀释液，对混合标准工作液进行稀释，配制成浓度为0.1-100μg/L的混合标准工作液，依次进行测定，以得到的峰面积为纵坐标，以对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。

本发明所述抗菌类和违禁类药物包括：林可霉素类；β-内酰胺类；喹诺酮类；四环素类；酰胺醇类；磺胺类；大环内酯类，β-受体激动剂；β-受体阻断剂；硝基咪唑；抗病毒药和镇静剂。

本发明有益效果在于：

(1)本发明建立了一种可以同时测定饲料样品中抗菌类和违禁类药物的检测方法。

(2)本发明采用QuEChERS净化方法，净化效果好，操作简便、快速、成本低，具有较高的灵敏度，准确度和精密度好。

(3)本发明一针进样，可以同时测定12类139种抗菌类和违禁药物，降低了检测成本，提高了检测效率，适用于高通量饲料中抗菌类和违禁药物的残留检测。

附图说明

图1：环丙沙星特征离子质量色谱图。

图2：土霉素特征离子质量色谱图。

图3：氯霉素特征离子质量色谱图。

图4：林可霉素特征离子质量色谱图。

图5：替米考星特征离子质量色谱图。

图6：头孢拉定特征离子质量色谱图。

图7：磺胺二甲恶唑和磺胺异恶唑特征离子质量色谱图。

图8：氯丙那林特征离子质量色谱图。

图9：莱克多巴胺特征离子质量色谱图。

图10：泰妙菌素特征离子质量色谱图。

图11：金刚烷胺特征离子质量色谱图。

图12：乙酰甲喹特征离子质量色谱图。

具体实施方式

下面结合具体具体实施实例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不局限于具体实施实例。

实施例1：饲料中抗菌类和违禁药物含量的测定

(1)饲料前处理

准确称取饲料样品2.0g，加入提取剂(配方：乙腈：0.5％浓度的Na₂EDTA的体积比为90:10)，充分漩涡混匀，超声提取，离心；

(2)QuEChERS净化

将离心后的提取液液中加入QuEChERS净化吸附剂C18 500mg，漩涡后离心；移取上清液，用40℃氮气吹干；以体积比为10:90的乙腈与0.1％浓度的甲酸的溶解残渣，定容至1mL；

(3)液相色谱-串联质谱检测

色谱条件：高效液相色谱柱：C₁₈色谱柱：150mm×2.1mm，5μm；进样量：10μL；柱温：40℃；流速：0.2mL/min；

流动相：0.1％浓度的甲酸水溶液A和0.1％甲酸乙腈溶液B；

洗脱程序：0min：5％浓度的溶液B，5min：5％浓度的溶液B，10min：25％浓度的溶液B，25min：50％浓度的溶液B，40min：70％浓度的溶液B，最后用5％浓度的溶液B平衡5min；

质谱条件：API5000三重四级杆串联质谱仪：正负离子模式；电喷雾离子源；扫描方式：多反应监测；离子源温度500℃；碰撞气压力0.021MPa；气帘气压力0.24MPa；

(4)标准曲线的绘制，以外标法定量

准确量取适量抗菌类和违禁药物制成混合标准工作液，用空白样品基质溶液作为标准溶液的稀释液，对混合标准工作液进行稀释，配制成浓度为0.1～100μg/L基质匹配标准工作液，依次进行测定，以得到的峰面积为纵坐标，以对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。基质匹配标准溶液的线性相关系数大于0.99。

(5)准确度和精密度测定

向样品中添加抗菌类和违禁药物，浓度为1.0μg/L～10μg/L，每个浓度样品测定5次，重复5天，进行准确度和精密度实验。样品中抗菌类和违禁药物回收率为60％～110％，批间变异系数小于20％。

从以上数据可以看出，采用本发明，回收率和变异系数能满足该残留检测要求。这表明本发明的检测方法简便、可靠，完全可以满足饲料中抗菌类和违禁药物的检测需要。

Claims (2)

1.一种液相色谱-串联质谱测定饲料中抗菌类和违禁类药物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)样品提取

准确称取饲料样品2.0g，加入体积比为90:10的乙腈与0.5％浓度的Na₂EDTA溶液作为提取剂，充分漩涡混匀后用超声方法提取，离心后得到提取液；

(2)QuEChERS净化

向离心后的提取液中加入500mg的C18，漩涡后离心；移取上清液，用40℃氮气吹干；用体积比为10:90的乙腈与0.1％浓度的甲酸溶解残渣，定容至1mL；

(3)液相色谱-串联质谱检测

色谱条件：

高效液相色谱柱：C₁₈色谱柱：150mm×2.1mm，5μm；进样量：10μL；柱温：40℃；流速：0.2mL/min；

HPLC洗脱条件：

配制溶液A和溶液B：溶液A为0.1％浓度的甲酸水溶液，溶液B为0.1％浓度的甲酸乙腈；

洗脱程序：

0min：5％浓度的溶液B，5min：5％浓度的溶液B，10min：25％浓度的溶液B，25min：50％浓度的溶液B，40min：70％浓度的溶液B，最后用5％浓度的溶液B平衡5min；

质谱条件：

API5000三重四级杆串联质谱仪：正负离子模式；电喷雾离子源；扫描方式：多反应监测；离子源温度500℃；碰撞气压力0.021MPa；气帘气压力0.24MPa；

(4)准确量取适量抗菌类和违禁药物混合标准工作液，用空白样品基质溶液作为标准溶液的稀释液，对混合标准工作液进行稀释，配制成浓度为0.1-100μg/L的混合标准工作液，依次进行测定，以得到的峰面积为纵坐标，以对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2.如权利要求1所述的一种液相色谱-串联质谱测定饲料中抗菌类和违禁类药物的方法，其特征在于，所述抗菌类和违禁类药物包括，林可霉素类；β-内酰胺类；喹诺酮类；四环素类；酰胺醇类；磺胺类；大环内酯类，β-受体激动剂；β-受体阻断剂；硝基咪唑；抗病毒药；镇静剂。