CN104807922A - 农作物中阿维菌等5种农药检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了农作物中阿维菌等5种农药检测方法，该检测方法至少能够检测分析出阿维菌素、甲维盐、吡虫啉、茚虫威和代森锌中的两种以上，包括以下步骤：（1）配制溶液：溶液A：0.1%氢氧化钠溶液；溶液B：含EDTA-Na₂(10mmol/L)和L-半胱氨酸(10mmol/L)的乙腈-水溶液；配制待测农药成分的标准溶液；（2）将标准溶液用UPLC-MS/MS检测分析；（3）样品检测：301：取样品粉碎，加入溶液A，匀浆，加入溶液B，涡旋混匀，超声提取5-20分钟，离心取上清液。302：将步骤301所得上清液，加入C₁₈+GCB，混匀涡旋，离心取上清液，用UPLC-MS/MS检测分析；（4）处理步骤（2、3）数据得出农药残留量。本发明测试方法快速准确、经济实用，符合法规要求，可满足日常检测的需要。

Description

农作物中阿维菌等5种农药检测方法

技术领域

本发明涉及一种色谱检测方法，特别涉及一种残留农药检测方法，属于检测分析技术领域。

背景技术

随着农业技术的发展，规模化自动化生产越来越普及，农业产能得到了极大的提升。农作物的种植密度及农产品的产出密度增加，也使得病虫害对于农业生产的威胁逐年增大，为了保证农产品不受到病虫害的威胁，农药的使用也越来越普遍，用量越来越大。少数种植户由于农药使用知识不足或严重欠缺，在种植过程中难免出现不规范的农药使用情况，直接导致农产品中农药残留超标。如果食用了农药残留超标的蔬菜水果，将会严重的影响食用者的身体健康。

农作物种植过程中常用的农药有以下几种：

阿维菌素又名爱比菌素，甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(Emamectin benzoate，以下简称甲维盐)，是以阿维菌素B1为原料经过化学结构修饰后制得，两者均属大环内酯类抗生素中的阿维菌素类生物农药(avermectins，AVMs)，主要成分为Avermectin B1a和Avermectin B1b两种亚型构成，其中B1a占90％以上。与一般大环内酯类抗生素不同的是阿维菌素类还具有很高的杀虫活性，而甲维盐作为一种新型高效的半合成生物源杀虫剂，其药效高于阿维菌素，是农作物中广泛使用的杀虫剂。甲维盐对蜜蜂、鹤鹑、家蚕、斑马鱼具有高毒性。目前，欧盟规定在稻米中残留限量为0.01mg/kg；CAC规定在棉籽中残留限量为0.02mg/kg；国标GB 2763-2014规定甲氨基阿维菌素在黄瓜、番茄的残留限量为0.02mg/kg，马铃薯、西葫芦的残留限量为0.01mg/kg。

吡虫啉(imidacloprid)作为为低毒杀虫剂或杀菌剂常用于水果和蔬菜等农作物的病虫害防治。日本“肯定列表”对番茄中的残留量作了规定，其限量为2mg/kg；国际食品法典委员会(CAC)和欧盟规定限量均为0.5mg/kg。中国的限量标准要求：黄瓜、番茄的残留限量为1mg/kg，大白菜最低限量为0.2mg/kg，美国对大麦、小麦、谷物、玉米的限量要求是0.05mg/kg。

茚虫威是美国杜邦公司近年来开发生产的一种低毒杀虫剂，常用于防治甘蓝、花椰类、芥蓝、番茄、辣椒、黄瓜等作物的虫害。我国规定甘蓝、菠菜残留限量3mg/kg，芥蓝、白菜残留限量为2mg/kg。

代森锌在农业上常用来防治白菜、黄瓜霜霉病，番茄炭疽病，马铃薯晚疫病，葡萄白腐病、黑斑病，苹果、梨黑星病等。制剂有80％可湿性粉剂，能阻止各种微生物的发育，属于广谱性、低毒类杀菌剂。尽管世界各国对其致癌机制和致畸性处于研究和争议之中，但是其使用广泛、用量较大，毒性积蓄不可忽视。目前世界上已有很多国家对食品中代森类农药规定了最高残留限量，其中日本“肯定列表”制度(以二硫代氨基甲酸酯)计规定了196种农产品中二硫代氨基甲酸酯的最高残留限量。美国规定了41种农产品中代森锰农药最高残留限量，74种农产品中代森锰锌农药最高残留限量。澳大利亚规定了61中农产品中(以二硫代氨基甲酸酯计)包括代森锌、代森锰锌、丙森锌、代森联、福美双、福美锌的最高残留限量。我国对芦笋、番茄、黄瓜等农产品中规定了此类农药最高残留限量1～5mg/kg，花生仁限量下限为0.1mg/kg。

现有技术对于上述几种常见的农药残留物的检测方法，主要是采用液相色谱分别检测分析，由于各种农药之间理化性质差异大，尚无统一的多残留检测方案。而且，各种农药的检测方法通常较为老旧，存在诸多缺陷或不便。

阿维菌素类检测常见方法有液相色谱紫外检测，但灵敏度低，近年来相继研究报道液相色谱-串联质谱法应用于茶叶、动物性食品和蔬菜水果中的残留量检测，但方法具有专属性。

吡虫啉、茚虫威以前也常用液相色谱紫外法进行检测，目前在茶叶、蔬菜水果等农产品的残留量检测方法也已建立，但是前处理操作复杂多样。

代森锌的检测一直用衍生法，国家标准中常采用酸性条件下用SnCl₂还原，将其衍生成CS₂，常用GC-ECD或FPD进行检测，其前处理操作复杂，干扰经常存在。采用LC-MSMS已经有报导，有衍生后检测，也有非衍生直接检测。但在多残留液相色谱串联质谱检测方法中均未列入。

在农作物种植过程中，实际应用农药时因为病虫害的耐药性增加，越来越多的农户使用合剂保护农作物的产量稳定。虽然合剂对病虫害有较好的效果，但也使得农作物中残留的农药成分变得更加复杂总量大大增加，随着人们对合用药残留毒性的关注度不断提高，多残留检测方案也日渐受到重视，但是未曾有一种方法同时检测这五种农药的报导。

人工饲养的家禽家畜通常是直接喂食相应的混合饲料，如果饲料原料(农作物)中残留有农药，家禽家畜是无法吸收分解的，非常容易产生生物蓄积。人如果食用了这样的家禽家畜则会中毒，出现比直接食用农作物更加严重的症状。

所以，亟需一种能够同时检测多种农药的残留量的分析测试方法，从源头上防止农药残留超标的农产品流入市场，也防止这些不良食物原料流入家禽家畜养殖行业。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中所存在的上述不足，提供一种农作物上残留农药检测方法。该方法能够同时检测分析出农作物上残留的多种农药，方便快速分析农作物的安全性、可靠性。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

一种残留农药检测方法，至少能够检测分析出阿维菌素、甲维盐、吡虫啉、茚虫威和代森锌中的两种以上，包括以下步骤：

(1)配制溶液：

溶液A：0.1％(重量)氢氧化钠溶液。

溶液B：含EDTA-Na₂(10mmol/L)和L-半胱氨酸(10mmol/L)的乙腈-水溶液。

配制待测农药成分的标准溶液。

(2)将标准溶液用UPLC-MS/MS检测分析。

(3)样品检测：

301：取样品粉碎，加入溶液A，匀浆，加入溶液B，涡旋混匀，超声提取5-20分钟，离心取上清液。

302：将步骤301所得上清液，加入C₁₈和GCB吸附剂，混匀涡旋，离心取上清液，用UPLC-MS/MS检测分析。

(4)处理步骤(2)(3)数据得出农药残留量。

与现有技术相比，本发明的有益效果：本发明根据农作物种植过程中可能残留的农药理化特性，设计合理的溶液组分对样品进行预处理，实现一次检测分析多种农药的残留量的检测方法。为研究阿维菌素等农药在饲料原料的残留代谢规律、饲料的质量安全控制与监测提供参考。方法快速、准确、成本低、适用性强。

附图说明：

图1-图6依次是大豆、大麦、高粱、棉籽、小麦和玉米的提取液在净化前后紫外光谱图。

图7是五种农药在不同离子源温度条件下响应值曲线图。其中，曲线1是代森锌，曲线2是曲线是吡虫啉，曲线3是甲维盐，曲线4是茚虫威，曲线5是阿维菌素。

图8是采用本发明方法测试5种农药所得到的质谱图。

图9-13分别是图8中农药吡虫啉(256.3/209)、阿维菌素(890.7/305.1)、茚虫威(528.1/150)、甲维盐(886.8/158.1)、代森锌(210.8/58)测试结果放大图。

具体实施方式

本发明中部分缩写解释如下：

EDTA-Na₂，乙二胺四乙酸二钠；

UPLC-MS/MS，超高效液相-三重四极杆串联质谱法；

C₁₈，碳18柱或C18吸附剂。

GCB，石墨化炭黑。

进一步，残留农药检测方法，至少能够检测分析出阿维菌素、甲维盐、吡虫啉、茚虫威和代森锌中的两种以上，包括以下步骤：(1)配制溶液：溶液A：0.1％氢氧化钠溶液。溶液B：含EDTA-Na₂(10mmol/L)和L-半胱氨酸(10mmol/L)的乙腈-水溶液。称取0.6058g L-半胱氨酸，1.8612g EDTA-Na₂用约50mL水溶解后，加乙腈定容至500mL。配制待测农药成分的标准溶液。(2)将标准溶液用UPLC-MS/MS检测分析。(3)样品检测：301：取样品粉碎，加入溶液A，匀浆，加入溶液B，涡旋混匀，超声提取5-20分钟，离心取上清液。302：将步骤301所得上清液，加入C₁₈和GCB吸附剂，混匀涡旋，离心取上清液，用UPLC-MS/MS检测分析。(4)处理步骤(2)(3)数据得出农药残留量。

阿维菌素、甲维盐、吡虫啉、茚虫威，一般均选择甲醇或乙腈提取，但是，代森锌属于乙撑双二硫代氨基甲酸盐类农药，通常不溶于乙腈、甲醇等提取剂，需在碱性条件下转化为水溶性的盐类，用EDTA-Na₂络合Zn²⁺，在还原剂L-半胱氨酸保护下，以甲醇水或乙腈水提取。试验比较了氨水、氢氧化钠溶液对5种农药的提取影响，结果表明，使用氨水时代森锌无法转化为可溶性盐，回收率为0，采用氢氧化钠时，5种药物均有回收，虽然氢氧化钠溶液在短时间内对除代森锌外的4种药物无明显影响。但是过高浓度的氢氧化钠进入提取液将对质谱检测产生影响，过高的离子浓度将形成离子抑制效应，导致代森锌低响应或无响应值。采用0.05％、0.1％、1％三种浓度的氢氧化钠试验，结果显示当氢氧化钠的浓度低于或等于0.05％时，农药转化不完全，检测结果等于加标量；而当氢氧化钠浓度大于1％时，氢氧化钠对质谱的检测分析产生影响，测试结果不稳定。优化后最终确定采用0.1％的氢氧化钠溶液。用含EDTA-Na₂(10mmol/L)和L-半胱氨酸(10mmol/L)的乙腈水溶液配制混合标液考察标准溶液的稳定性，结果显示，48小时内无明显变化。故本次实验选择0.1％的氢氧化钠溶液溶解和稀释样品，再采用含EDTA-Na₂(10mmol/L)和L-半胱氨酸(10mmol/L)的乙腈水溶液提取。

进一步，色谱系统色谱条件：使用C4、C18柱、阳离子交换柱、氨基柱中的一种，优选采用C18色谱柱进行分离。分别用C₄、C₁₈柱、阳离子交换柱、氨基柱进行试验，发现五种药物均能很好分离，但是发现阿维菌素在C₄、阳离子交换柱、氨基柱上保留时间长，分析时间过长，部分药物峰形不对称。最优选的，所述色谱柱是Hypersil BDS C18column(100mm×4.6mm×5μm)。峰形的好坏直接影响积分面积，进而影响定量的准确性，因此必须合理选择分析柱和优化流动相条件。Hypersil BDS C₁₈硅胶单体键合前经过专门的碱钝化处理，将残余硅羟基极大程度上得到降低，大大降低了硅羟基与分析物之间的相互作用，从而改善了色谱峰形，峰的对称性好。

进一步，优化色谱条件：采用双组分流动相，其中流动相A：10mmol/L氨水，流动相B：100％乙腈。常用的流动相体系有0.1％甲酸水-甲醇体系、甲酸水-甲醇体系、0.1％氨水-甲醇体系以及添加乙酸铵或甲酸铵，已有文献报道在流动相中加入体积分数0.1％的甲酸，能有效消除峰形拖尾现象，并且响应值也大幅提高，但试验发现代森锌无响应。所以，采用双组分流动相，以氨水和乙腈改善待分离组分在色谱柱中的分配系数。当采用10mmol/L氨水-乙腈体系时，5种化合物均有较好的响应。更优选采用梯度洗脱程序，流速为0.3mL/min，梯度条件为：20％B；0.5～1.5min，20％～90％B；1.5～5.0min，90％B；5.0～5.5min，90％～20％B；5.5～6.5min保持20％B。以上梯度洗脱过程中的比例为体积比。通过优化条件，采用梯度洗脱，五种化合物的分离图如图9-13所示，相对保留时间分别是：代森锌1.07min，吡虫啉2.03min，甲维盐2.56min，茚虫威2.70min，阿维菌素4.10min。其质谱特征离心数据如下：吡虫啉(256.3/209)、阿维菌素(890.7/305.1)、茚虫威(528.1/150)、甲维盐(886.8/158.1)、代森锌(210.8/58)。

进一步，标准溶液配制过程如下：配制标准物质储备溶液：准确称取适量的阿维菌素、甲维盐、吡虫啉、茚虫威标准品，用甲醇配制质量浓度为100.0mg/L的标准溶液，代森锌标准品中加入2mL溶剂A溶解后，加入溶剂B配制成1000.0mg/L的标准溶液，于4℃避光保存。标准物质使用液：准确移取适量标准溶液，分别稀释成质量浓度为5，10，25，50，100，200μg/L(代森锌的质量浓度为：50，100，250，500，1000，2000μg/L)，现配现用。

进一步，步骤301中，样品粉碎至粒径小于3mm。

进一步，步骤301中，粉碎后的样品，加入0.8倍(体积/质量，mL/g)以上的溶液A，匀浆。优选的，匀浆采用组织匀浆机以8000r/min以上的转速匀浆，最好是11000r/min的转速匀浆。优选匀浆时间为20-50秒，最好是30秒。

进一步，步骤301中，加入溶液B时，加入量为溶液A的2-5倍(vol/vol)。优选的，加入溶液B以后，密封盛装容器，旋涡混匀器上混合10-30秒，然后超声提取5-60分钟，优选10-20分钟。提取完成后，离心3分钟以上，取上清液。

进一步，步骤302中，将301得到的上清液放入15mL的离心管中，加入0.2g C₁₈+0.05gGCB，混匀涡旋1min，5000r/min离心5min后，取上清液上样检测分析。

饲料样品中含有较多的有机质，常用弗罗里硅土、石墨化碳(GCB)、乙二胺-N-丙基甲硅烷(PSA)、C₁₈作净化柱，试验比较了弗罗里硅土、GCB、PSA、C₁₈小柱等净化方式对目标分析物的影响，石墨化碳的去色素效果最好，但是代森锌、阿维菌素未获得回收，其他柱净化棉籽的色素几乎无效果，并且通过优化洗脱条件都不能使5种药物的回收率同时达到70％以上。采用固相萃取小柱时行净化虽然便于实现自动化操作，但是需要严谨实验优化淋洗、洗脱参数，费时，而且回收率不稳定，由于五种农药的极性相差太大，难以找到合适极性的洗脱溶剂和洗脱体积，因此选择基质分散固相萃取。

进一步，UPLC-MS/MS检测分析中质谱条件是：ESI正、负离子同扫模式：多反应监测(MRM)参数：气帘气(Curtain Gas)40.0psi，(正)离子化电压(IonSpray Voltage)+4500V，(负)离子化电压(IonSpray Voltage)-5500V，离子源温度(Temperature)250℃，电喷雾气(Ion Source Gas1)50psi，辅助加热气(Ion Source Gas2)55psi，碰撞气(Collision Gas)8psi，驻留时间(Dwell Time)25mSec。优化后的母离子Q1、子离子Q3、去簇电压(DeclusteringPotential)、、碰撞能(Collision Energy)、出口电压(Collision Cell Exit Potential)见表1。入口电压(Entrance Potential)10eV，0.5～5.0min采用阀切换入质谱，其余切换入废液，0～1.5min采集MRM负离子，1.5～6.5min采集MRM正离子。

采用甲醇、乙腈与水作流动相，进行质谱优化，发现甲醇与乙腈对除代森锌外的4种药物离子丰度无明显影响。试验发现甲酸的加入有利于抑制其他阳离子的形成，增强加H⁺峰的形成，NH₄ ⁺化合物的加入有利于抑制加钠峰形成，增强加NH₄ ⁺峰的形成。但当NH₄ ⁺浓度大于20mmol/L时，代森锌用10μg/L的浓度进行优化时，均无响应值。因此确定采用低浓度的氨水作为目标离子增强剂。代森锌采用负离子模式，进行母离子Q1扫描，代森锌形成[M-Zn-H]^-(m/z210.8)，其他4种药物采用正离子模式，进行母离子Q1扫描发现阿维菌素的响应受离子源温度的影响极大，而且阿维菌素形成的分子离子峰强度在没有加入NH₄ ⁺时只扫描到极低丰度的加Na⁺峰，加入NH₄ ⁺后，[M+NH₄]⁺强度大于[M+Na]⁺，几乎找不到[M+H]⁺，甲维盐在水溶液状态下，电离出甲氨基阿维菌素(C₄₉H₇₅NO₁₃)和苯甲酸盐(C₇H₆NO₂)，扫描到[M-C₇H₆O₂+H]⁺(m/z886.8)。同时检测5种农药时，在150-550℃的离子源温度范围内考查分析发现当温度为200-250℃时，离子响应度最好。结合所检测的5种药物应标准限量要求，最适宜的离子源温度为250℃。确定母离子后，再对母离子进行了子离子扫描，从而确定了子离子和碰撞能量。同时对质谱的毛细管电压、锥孔电压、脱溶剂气和锥孔气进行了优化。

下面结合试验例及具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明内容所实现的技术均属于本发明的范围。本发明中未特别说明的百分比均为重量百分比。

1.实验准备部分

1.1仪器、试剂与材料

Triple Quad 4500液相色谱—三重四极杆串联质谱联用仪配电喷雾离子源(ESI(美国AB SCIEX公司，AB-135型电子分析天平(梅特勒托利多上海有限公司)；RV100旋转蒸发仪(德国IKA)，LD5-2B离心机(北京京立离心机有限公司)；DZF6050真空干燥箱上海一恒科学仪器有限公司；KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；组织匀浆机DF-18(山东农业大学茶学系)；旋涡混匀器MS3(德国IKA)。

乙睛、甲醇(色谱纯，默克公司)；甲酸、乙酸铵、氨水(分析纯，天津科密欧化学试剂有限公司)；氢氧化钠、氯化钠、无水硫酸钠、EDTA-Na₂(分析纯，上海国药集团)；L-半胱氨酸(99％，阿拉丁试剂上海有限公司)；阿维菌素、甲维盐、吡虫啉、茚虫威、代森锌(含量95～99.5％.sigma公司)。净化材料：C18固相萃取小柱，石墨化碳小柱，弗罗里硅土小柱，中性氧化铝小柱及其填料由天津博纳艾杰尔科技有限公司和美国菲罗门公司(Phenomenex)提供。

溶液A：0.1％氢氧化钠溶液。

溶液B：含EDTA-Na₂(10mmol/L)和L-半胱氨酸(10mmol/L)的乙腈水溶液，称取0.6058gL-半胱氨酸，1.8612g EDTA-Na₂用约50mL水溶解后，加乙腈定容至500mL。

标准物质储备溶液：准确称取适量的阿维菌素、甲维盐、吡虫啉、茚虫威标准品，用甲醇配制质量浓度为100.0mg/L的标准溶液，代森锌标准品中加入2mL溶液A溶解后，加入溶液B配制成1000.0mg/L的标准溶液，于4℃避光保存。

标准物质使用液：准确移取适量标准溶液，分别稀释成质量浓度为5，10，25，50，100，200μg/L(代森锌的质量浓度为：50，100，250，500，1000，2000μg/L)，现配现用。

玉米、高粱、大麦、棉籽、小麦、大豆样品由分公司提供，或者采购市售农产品作为相应样品。

1.2样品处理

1.2.1提取：

采集有代表性的样品200g，用粉碎机粉成粒径不超过3mm的精制样。称取5.00克精制样品于50mL具塞离心管中，加入5.00mL溶剂A，用组织匀浆机以11000r/min转速匀浆30秒，然后准确加入15.00mL溶剂B，加塞密封，于旋涡混匀器混合30秒后，置超声波清洗器中在20℃超声提取15分钟，以4800r/min离心5分钟，取上清液10mL待净化。

1.2.2净化：

取提取液5mL入15mL离心管中，加入0.2g C₁₈吸附剂和0.05g GCB吸附剂，混匀涡旋1min，5000r/min离心5min后，取上清液1mL，过0.22um滤膜。取5μL进行UPLC-MS/MS分析。

1.3色谱与质谱条件

1.3.1色谱条件

色谱柱：Hypersil BDS C18column(100mm×4.6mm×5μm)流动相A：10mmol/L氨水，流动相B：100％乙腈，采用梯度洗脱程序，流速为0.3mL/min，梯度条件为：20％B；0.5～1.5min，20％～90％B；1.5～5.0min，90％B；5.0～5.5min，90％～20％B；5.5～6.5min保持20％B。

1.3.2质谱条件

ESI正、负离子同扫模式：多反应监测(MRM)参数：气帘气(Curtain Gas)40.0psi，(正)离子化电压(IonSpray Voltage)+4500V，(负)离子化电压(IonSpray Voltage)-5500V，离子源温度(Temperature)250℃，电喷雾气(Ion Source Gas1)50psi，辅助加热气(Ion SourceGas2)55psi，碰撞气(Collision Gas)8psi，驻留时间(Dwell Time)25mSec。优化后的母离子Q1、子离子Q3、去簇电压(Declustering Potential)、、碰撞能(Collision Energy)、出口电压(Collision Cell Exit Potential)见表1。入口电压(Entrance Potential)10eV，0.5～5.0min采用阀切换入质谱，其余切换入废液，0～1.5min采集MRM负离子，1.5～6.5min采集MRM正离子。

表1 MRM监测模式下5种农药的仪器优化条件

Table 1 Optimized parameters of multi-reaction monitoring for analysis of 5pesticides

      

      

2结果与讨论

2.1净化方法的选择

取样品：1.玉米，2.高粱，3.大麦,4.棉籽，5.小麦，6.大豆。按上述1.2提取方法进行处理得到提取液，每5mL提取液采用0.2g C₁₈+0.05g GCB进行基质分散固相萃取，除棉籽提取液略带黄色，其他四种饲料原料提取液均为无色。样品净化前后分别使用紫外可见分光光度计测试待测液的吸光光谱，结果见图1-6。从图1-6中可以看出，近紫外光谱区至可见光谱区，吸收值下降并趋于平滑，说明净化效果良好。

2.2质谱条件的优化

采用150℃、200℃、250℃、300℃、350℃、550℃的离子源温度条件考察温度对5种药物的响应值影响，结果见图7。

为了最大限度去除水溶性杂质及有机质干扰，根据各分析目标物的相对保留时间对进入质谱前的流动相进行了阀切换，0.5～5.0min切换入质谱，其余切换入废液，0～1.5min采集MRM负离子，1.5～6.5min采集MRM正离子。选取离子丰度较强三个母子离子对，在MRM条件下，5种农药的质谱图见图8。

2.3线性范围、定量限、加标回收率及相对标准偏差

配制与待测样品相同基质的混合标准系列工作液，阿维菌素、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、吡虫啉、茚虫威四种农药浓度梯度为分别5，10，25，50，100，200μg/L，代森锌浓度梯度为50，100，250，500，1000，2000μg/L，以选定的定量离子峰面积对质量浓度做标准曲线，5种药物在玉米、高粱、大麦、棉籽、小麦、大豆基质中的线性方程及相关系数列于表2。采用空白样品中添加目标化合物的方法按1.2样品提取与净化进行处理后上机分析，以3倍信噪比确定检出限，以10倍信噪比确定定量下限，结果列于表2。结果显示，在不同基质中，阿维菌素、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、吡虫啉、茚虫威四种农药浓度在5～200μg/L、代森锌浓度在50～2000μg/L范围内的线性相关系数(r²)为0.9951～0.9999，表明线性相关性良好。

表2 5种农药的线性方程、相关系数、检出限、定量下限及回收率结果

Table 2 Linear equations,correlation coefficients(r²),limits of detection(LODs),limits of quantitation(LOQs)and recoverys of five pesticides

      

2.6实际样品的测定

应用上述方法对周边市场所购买的36个饲料原料进行检测，其中吡虫啉检出比例占1％，含量在1.5μg/kg～16.4μg/kg，主要存在于大豆样品。其它样品未发现所检测的农药残留。

本发明建立了应用UPLC-MS/MS同时饲料原料中的阿维菌素、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、吡虫啉、茚虫威、代森锌的分析方法。研究表明，在加标浓度为阿维菌素、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、吡虫啉、茚虫威5.0～50μg/kg、代森锌50～2000μg/kg的玉米、小麦饲料中，5种农药的加标回收率为70.8％～103.6％，相对标准偏差(n＝5)为4.5％～13.9％，阿维菌素、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、吡虫啉、茚虫威四种农药的检出限为0.02～0.7μg/kg，定量下限为0.07～2.3μg/kg，代森锌在蔬菜中的检出限为8.2～30μg/kg，定量下限为27～100μg/kg。方法快捷、操作简单、节能环保、结果准确，符合相关法律法规的要求，以及满足日常检测需要。

Claims (10)

1.一种残留农药检测方法，至少能够检测分析出阿维菌素、甲维盐、吡虫啉、茚虫威和代森锌中的两种以上，包括以下步骤：

（1）配制溶液：

溶液A：0.1%氢氧化钠溶液；

溶液B：含EDTA-Na2 10mmol/L和L-半胱氨酸10mmol/L的乙腈-水溶液；

配制待测农药成分的标准溶液；

（2）将标准溶液用UPLC-MS/MS检测分析；

（3）样品检测：

301：取样品粉碎，加入溶液A，匀浆，加入溶液B，涡旋混匀，超声提取5-20分钟，离心取上清液；

302：将步骤301所得上清液，加入C₁₈和GCB吸附剂，混匀涡旋，离心取上清液，用UPLC-MS/MS检测分析；

（4）处理步骤（2）（3）数据得出农药残留量。

2.根据权利要求1所述残留农药检测方法，其特征在于，色谱系统的色谱条件：使用C4、C18柱、阳离子交换柱、氨基柱中的一种。

3.根据权利要求2所述残留农药检测方法，其特征在于，采用C18色谱柱进行分离。

4.根据权利要求1所述残留农药检测方法，其特征在于，色谱条件：采用双组分流动相，其中流动相A：10mmol/L氨水，流动相B ：100%乙腈。

5.根据权利要求4所述残留农药检测方法，其特征在于，采用梯度洗脱程序，流速为0.3mL/min，梯度条件为：20%B；0.5~1.5min，20%~90%B；1.5~5.0min，90%B；5.0~5.5min，90%~20%B；5.5~6.5min保持20%B。

6.根据权利要求1所述残留农药检测方法，其特征在于，步骤301中，样品粉碎至粒径小于3mm。

7.根据权利要求1所述残留农药检测方法，其特征在于，步骤301中，粉碎后的样品，加入0.8倍以上的溶液A，匀浆；所述比例为体积/质量比：mL/g。

8.根据权利要求1所述残留农药检测方法，其特征在于，步骤301中，加入溶液B时，加入量为溶液A的2-5倍。

9.根据权利要求1所述残留农药检测方法，其特征在于，加入溶液B以后，密封盛装容器，旋涡混匀器上混合10-30秒，然后超声提取5-60分钟，提取完成后，离心3分钟以上，取上清液。

10.根据权利要求1所述残留农药检测方法，其特征在于，步骤302中，将步骤301得到的上清液放入15mL的离心管中，加入0.2g C₁₈ + 0.05g GCB，混匀涡旋1min，5000r/min离心5min后，取上清液上样检测分析。