CN114062552B - 一种植物源食品中吡虫啉代谢物的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，包括以下步骤：S10、将待检测植物源食品粉碎后，向其加入水和甲酸乙腈溶液，搅拌后超声提取，得混合液，向混合液中加入氯化钠，离心得第一上清液，浓缩，得中间液；S20、向中间液中加入含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液并搅拌，超声，再向其加入无水亚硫酸钠并搅拌，得溶液A，将溶液A离心留上清，并调节上清的pH为2～3，加水定容，得衍生化后的样品；S30、将衍生化后的样品转入固相萃取柱后，用乙腈洗脱，得洗脱液，过滤，得待测液；S40、将待测液用液相色谱‑质谱联用仪测试，得到植物源食品中吡虫啉及其代谢物的含量。该检测方法简单、可靠、准确，符合国际上对吡虫啉残留定义的要求。

Description

一种植物源食品中吡虫啉代谢物的检测方法

技术领域

本发明涉及农药残留测定技术领域，特别涉及一种植物源食品中吡虫啉代谢物的检测方法。

背景技术

吡虫啉(Imidacloprid，简写为IMI)名称为1-(6-氯3-吡啶甲基)-N-硝基咪唑-2-亚胺，是具有氯吡啶结构的第一代烟碱类杀虫剂的代表性药剂，其广泛应用于农业生产上，针对水稻、小麦、小白菜等植物上的多种害虫有良好的治疗效果。在选用蚍虫啉为植物除害虫时，吡虫啉可能会进入到植物内，因而，为了确保植物源性食品的安全，亟需建立吡虫啉代谢物在植物源性农产品中的检测方法。

JMPR(即农药残留联合专家会议，由粮农组织/世界卫生组织举办的)、EFSA(欧洲食品安全局)、EPA(美国环境保护署)等规定吡虫啉在植物源食品中的残留定义为：吡虫啉及含有6-氯吡啶基部分的代谢物之和，以吡虫啉表示。

目前关于吡虫啉的检测方法，主要是对吡虫啉及其代谢物分别进行检测，但代谢物种类繁多，因而无法保证所有含有6-氯吡啶基部分的代谢物均能被检测到，从而使测试结果不够准确。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，旨在提供一种能准确检测出植物源食品中的吡虫啉及其代谢物含量的检测方法。

为实现上述目的，本发明提出一种植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，所述吡虫啉代谢物包括含有6-氯吡啶基部分的代谢物，所述检测方法包括以下步骤：

S10、将待检测植物源食品粉碎后，向其加入水和甲酸乙腈溶液，搅拌后超声提取，得到混合液，向所述混合液中加入氯化钠并搅拌，然后离心得到第一上清液，浓缩，得到中间液；

S20、向所述中间液中加入含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液并搅拌，然后超声，再向其加入无水亚硫酸钠并搅拌，以将所述植物源食品中吡虫啉及其代谢物全部转化为6-氯烟酸，得到溶液A，将所述溶液A离心留上清，并调节所述上清的pH为2～3，最后加水定容，得到衍生化后的样品；

S30、将所述衍生化后的样品转入固相萃取柱后，用乙腈洗脱，得洗脱液，然后过滤，得待测液；

S40、将所述待测液用液相色谱-质谱联用仪测试，得到所述待检测植物源食品中吡虫啉及其代谢物的含量。

可选地，步骤S10中：

每1g所述待检测植物源食品中加入的水、甲酸乙腈溶液和氯化钠对应为0.8～1.2mL、1.8～2.2mL和0.6～1g；和/或，

所述甲酸乙腈溶液的质量分数为1％。

可选地，所述植物源食品包括大白菜、小白菜、草莓、苹果、小麦、糙米、甘蔗和棉籽的至少一种

可选地，步骤S20中：

所述第一上清液与所述含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液的体积比为5：14～16；和/或，

所述含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液中，所述高锰酸钾的质量分数为4％，所述氢氧化钠的质量分数为0.5％。

可选地，所述第一上清液的体积与所述无水亚硫酸钠的质量之比为5mL：(5～7)g。

可选地，步骤S30包括：

分别用甲醇、水预淋C₁₈固相萃取柱，然后将所述衍生化后的样品转入所述C₁₈固相萃取柱中，用乙腈洗脱，得洗脱液。

可选地，步骤S40中，所述液相色谱-质谱联用仪的色谱条件包括：

色谱柱为Waters Acquity色谱柱；柱温为40℃；流速为0.50mL/min；进样量为2μL；流动相A为甲醇，流动相B为体积分数为0.1％的甲酸水溶液。

可选地，步骤S40中，所述液相色谱-质谱联用仪的质谱条件包括：

离子源为电喷雾离子源ESI；扫描方式为负离子模式；喷雾电压为3.5KV；检测方式为多重反应监测。

可选地，步骤S40包括：

S41、用乙腈将6-氯烟酸标准品配置成质量浓度为0.005～1.0mg/L的系列标准溶液，用液相色谱-质谱联用仪测试所述标准工作液，并根据测试结果绘制出标准曲线；

S42、将所述待测液用液相色谱-质谱联用仪测试，并根据所述待测液的液相色谱-质谱仪测定结果和标准曲线，得到所述植物源食品中吡虫啉及其代谢物的含量。

本发明提出一种植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，通过衍生化步骤将吡虫啉以及含有6-氯吡啶基部分的代谢物全部转化为6-氯烟酸，然后使用液相色谱-质谱联用仪直接对6-氯烟酸进行检测，使含有6-氯吡啶基部分的代谢物能被全部检测到，从而能准确检测出植物源食品中吡虫啉及其代谢物的含量，且该检测方法操作简单，只需要一次衍生化步骤；通过固相萃取柱完成了衍生化后的样品的净化，净化效果好，且有机试剂的用量小，对环境友好。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实施例3绘制的标准曲线图。

本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

目前关于吡虫啉的检测方法，主要是对吡虫啉的代谢物分别进行检测，但代谢物种类繁多，因而无法保证所有含有6-氯吡啶基部分的代谢物均能被检测到，从而使测试结果不够准确。

鉴于此，本发明提出一种植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，旨在提供一种能准确检测出植物源食品中的吡虫啉及其代谢物含量的检测方法。在一实施例中，所述检测方法包括以下步骤：

步骤S10、将待检测植物源食品粉碎后，向其加入水和甲酸乙腈溶液，搅拌后超声提取，得到混合液，向所述混合液中加入氯化钠并搅拌，然后离心得到上清液，浓缩，得到中间液。

在本实施例中，每1g植物源食品中，水、甲酸乙腈溶液和氯化钠的添加量对应为0.8～1.2mL、1.8～2.2mL和0.6～1g，在此配比下，有利于对植物源食品中的吡虫啉代谢物的提取。较优地，所述甲酸乙腈溶液的质量分数为1％，所述甲酸乙腈溶液在此质量浓度下，对吡虫啉代谢物的提取效果较好。

其中，所述植物源食品包括大白菜、小白菜、草莓、苹果、小麦、糙米、甘蔗和棉籽的至少一种。

在一具体实施例中，步骤S10包括：将5g待检测植物源食品粉碎后，向其加入4～6mL水和9～11mL质量浓度为1％甲酸乙腈溶液，涡旋提取30min后，再超声提取10～20min，得到混合液，向所述混合液中加入3～5g氯化钠后，涡旋30s，然后在4000～5000r/min下离心4～7min，收集得到第一上清液，取5mL第一上清液在70℃下氮吹至近干，得到中间液。

步骤S20、向所述中间液中加入含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液并搅拌，然后超声，再向其加入无水亚硫酸钠并搅拌，以将所述植物源食品中吡虫啉及其代谢物全部转化为6-氯烟酸，得到溶液A，将所述溶液A离心留上清，并调节所述上清的pH为2～3，最后加水定容，得到衍生化后的样品。

其中，所述第一上清液与所述含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液的体积比为5：14～16。在一实施例中，所述含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液，所述高锰酸钾的质量分数为4％，所述氢氧化钠的质量分数为0.5％。

进一步地，所述第一上清液的体积与所述无水亚硫酸钠的质量之比为5mL：(5～7)g。

其中，所述吡虫啉代谢物包括含有6-氯吡啶基部分的代谢物。可以理解的是，所述含有6-氯吡啶基部分的代谢物包括：吡虫啉脲、吡虫啉烯烃、吡虫啉胍盐酸盐、5-羟基吡虫啉、6-氯-3-吡啶甲醇、6-氯烟酸，如此，本发明提供的检测方法，通过衍生化步骤的设计，能完成对吡虫啉及上述6种代谢物的检测，检测全面，从而能对植物源食品中的吡虫啉代谢物含量进行准确的检测。

在一具体实施例中，步骤S20包括：向步骤S10得到的中间液中加入14～16mL含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液(其中，高锰酸钾的质量分数为4％，氢氧化钠的质量分数为0.5％)，涡旋30min后，超声20～40min，然后向其加入5～7g无水亚硫酸钠，涡旋1min，以将所述植物源食品中吡虫啉及其代谢物全部转化为6-氯烟酸，得到溶液A，将溶液A在4000～5000r/min下离心4～7min，将上清全部倒出，再用盐酸调节上清的pH至2～3，最后加水定容至20mL，得到衍生化后的样品。

步骤S30、将所述衍生化后的样品转入固相萃取柱后，用乙腈洗脱，得洗脱液，然后过滤，得待测液。

通过固相萃取柱完成了衍生化后的样品的净化，净化效果好，且有机试剂的用量小，对环境友好。

较优地，在使用所述固相萃取柱净化时，先对所述固相萃取柱进行活化，因此，在一优选实施例中，步骤S30包括：分别用甲醇、水预淋C₁₈固相萃取柱，然后将所述衍生化后的样品转入所述C₁₈固相萃取柱中，用乙腈洗脱，得洗脱液。

进一步地，具体实施时，分别用5mL甲醇、5mL水预淋C₁₈固相萃取柱，然后将16mL步骤S20得到的衍生化后的样品转入C₁₈固相萃取柱中，用1mL乙腈洗脱，得到洗脱液，然后用0.22μm微膜过滤，得到待测液。

步骤S40、将所述待测液用液相色谱-质谱联用仪测试，得到所述待检测植物源食品中吡虫啉代谢物的含量。

其中，所述液相色谱-质谱联用仪的色谱条件包括：

色谱柱为Waters Acquity色谱柱(2.1mm×50mm，1.7μm)；柱温为40℃；流速为0.50mL/min；进样量为2μL；流动相A为甲醇，流动相B为体积分数为0.1％的甲酸水溶液。

所述液相色谱-质谱联用仪的质谱条件包括：离子源为电喷雾离子源ESI；扫描方式为负离子模式；喷雾电压为3.5KV；检测方式为多重反应监测。

进一步地，Heat Block Temperature：400℃；Nebulizing Gas Flow：3.0L/min；Drying Gas Flow：15L/min。

在本实施例中，步骤S40包括：

步骤S41、用乙腈将6-氯烟酸标准品配置成质量浓度为0.005～1.0mg/L的系列标准溶液，用液相色谱-质谱联用仪测试所述标准工作液，并根据测试结果绘制出标准曲线；

在一实施例中，用乙腈将6-氯烟酸标准品配制成1000mg/L的工作液，再用乙腈稀释配制成0.005、0.05、0.5、1.0mg/L的系列标准液，用液相色谱-质谱联用仪在上述液相色谱串联质谱条件下测试所述标准工作液，以6-氯烟酸标准溶液浓度与对应的监测离子峰面积作标准曲线，重复测定3次。

步骤S42、将所述待测液用液相色谱-质谱联用仪测试，并根据所述待测液的液相色谱-质谱仪测定结果和标准曲线，得到所述植物源食品中吡虫啉代谢物的含量。

可以理解的是，用液相色谱-质谱联用仪测试所述待测液时，所述液相色谱-质谱联用仪的液相色谱串联质谱条件与步骤S41相同。

需要说明的是，本发明采用外标法定量法测定，6-氯烟酸标准溶液定量，现配现用。

本发明提出一种植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，通过衍生化步骤将吡虫啉以及含有6-氯吡啶基部分的代谢物全部转化为6-氯烟酸，然后使用液相色谱-质谱联用仪直接对6-氯烟酸进行检测，使含有6-氯吡啶基部分的代谢物能被全部检测到，从而能准确检测出植物源食品中吡虫啉及其代谢物的含量，且该检测方法操作简单，只需要一次衍生化步骤；通过固相萃取柱完成了衍生化后的样品的净化和浓缩，净化效果好，且有机试剂的用量小，对环境友好。

以下结合具体实施例和附图对本发明的技术方案作进一步详细说明，应当理解，以下实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

下述各实施例中，所用的仪器设备信息如下：

液质联用仪：岛津三重四级杆液质联用仪(LCMS-8045；统计分析软件：LabSolution Version 5.89)；自动涡旋仪：Talboys数显多管涡旋混合器；高速离心机：Thermo-Fisher ST16；移液器：100-1000μL、20-200μL。

下列各实施例中，所用试剂和材料信息如下：

乙腈：色谱纯；甲醇：色谱纯；甲酸：色谱纯；氯化钠：分析纯；高锰酸钾：分析纯；无水亚硫酸钠：分析纯；氢氧化钠：分析纯；盐酸：分析纯；水：一级水；微孔过滤膜：0.22μmPTFE。

参照物信息：

吡虫啉：浓度：999.7μg/mL，透明液体；来源：北京振翔科技有限公司；溶剂：丙酮；批号：D0009295；储存条件：0-8℃避光保存。

6-氯烟酸：浓度：99.5％，黄色粉末；来源：北京振翔科技有限公司；批号：D0015359；储存条件：0-8℃避光保存。

实施例1a待测液的制备

(1)提取：将5g待检测植物源食品粉碎后置于50mL离心管中，向其加入5mL水和10mL质量浓度为1％甲酸乙腈溶液，涡旋提取30min后，再超声提取15min，得到混合液，向所述混合液中加入4g氯化钠后，涡旋30s，然后在4500r/min下离心5min，收集得到第一上清液，取5mL第一上清液在70℃下氮吹至近干，得到中间液。

(2)衍生化：向步骤(1)得到的中间液中加入15mL含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液(其中，高锰酸钾的质量分数为4％，氢氧化钠的质量分数为0.5％)，涡旋30min后，超声30min，然后向其加入6g无水亚硫酸钠，涡旋1min，以将植物源食品中吡虫啉、以及含有6-氯吡啶基部分的代谢物全部转化为6-氯烟酸，得到溶液A，将溶液A在4000r/min下离心7min，将上清全部倒出，再用盐酸调节上清的pH至2～3，最后加水定容至20mL，得到衍生化后的样品。

(3)净化：分别用5mL甲醇、5mL水预淋C₁₈固相萃取柱，然后将16mL步骤S20得到的衍生化后的样品转入C₁₈固相萃取柱中，用1mL乙腈洗脱，得到洗脱液，然后用0.22μm微膜过滤，得到待测液。

实施例1b待测液的制备

(1)提取：将5g待检测植物源食品粉碎后置于50mL离心管中，向其加入4mL水和9mL质量浓度为1％甲酸乙腈溶液，涡旋提取30min后，再超声提取10min，得到混合液，向所述混合液中加入3g氯化钠后，涡旋30s，然后在4000r/min下离心7min，收集得到第一上清液，取5mL第一上清液在70℃下氮吹至近干，得到中间液。

(2)衍生化：向步骤(1)得到的中间液中加入14mL含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液(其中，高锰酸钾的质量分数为4％，氢氧化钠的质量分数为0.5％)，涡旋30min后，超声20min，然后向其加入5g无水亚硫酸钠，涡旋1min，以将植物源食品中含有6-氯吡啶基部分的代谢物全部转化为6-氯烟酸，得到溶液A，将溶液A在4500r/min下离心5min，将上清全部倒出，再用盐酸调节上清的pH至2～3，最后加水定容至20mL，得到衍生化后的样品。

(3)净化：分别用5mL甲醇、5mL水预淋C₁₈固相萃取柱，然后将16mL步骤S20得到的衍生化后的样品转入C₁₈固相萃取柱中，用1mL乙腈洗脱，得到洗脱液，然后用0.22μm微膜过滤，得到待测液。

实施例1c待测液的制备

(1)提取：将5g待检测植物源食品粉碎后置于50mL离心管中，向其加入6mL水和11mL质量浓度为1％甲酸乙腈溶液，涡旋提取30min后，再超声提取20min，得到混合液，向所述混合液中加入5g氯化钠后，涡旋30s，然后在5000r/min下离心4min，收集得到第一上清液，取5mL第一上清液在70℃下氮吹至近干，得到中间液。

(2)衍生化：向步骤(1)得到的中间液中加入16mL含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液(其中，高锰酸钾的质量分数为4％，氢氧化钠的质量分数为0.5％)，涡旋30min后，超声40min，然后向其加入7g无水亚硫酸钠，涡旋1min，以将植物源食品中含有6-氯吡啶基部分的代谢物全部转化为6-氯烟酸，得到溶液A，将溶液A在5000r/min下离心4min，将上清全部倒出，再用盐酸调节上清的pH至2～3，最后加水定容至20mL，得到衍生化后的样品。

(3)净化：分别用5mL甲醇、5mL水预淋C₁₈固相萃取柱，然后取步骤S20得到的16mL衍生化后的样品转入C₁₈固相萃取柱中，用1mL乙腈洗脱，得到洗脱液，然后用0.22μm微膜过滤，得到待测液。

实施例2标准溶液的配制

用乙腈将6-氯烟酸标准品配制成1000mg/L的工作液，再用乙腈稀释配制成0.005、0.05、0.1、0.5、1.0mg/L的系列标准液。

实施例3定性、以及标准曲线的绘制

1、仪器条件

(1)液相色谱-质谱联用仪(即岛津三重四级杆液质联用仪)的色谱条件：色谱柱：Waters Acquity色谱柱(2.1mm×50mm，1.7μm)；柱温：40℃；流速：0.50mL/min；进样量：2μL；

梯度洗脱条件如下表1所示：

表1梯度洗脱条件

t/min	流速(mL/min)	甲醇(％)	0.1％甲酸水(％)
				0.50	0.5	10	90
2.00	0.5	90	10
				3.25	0.5	90	10
3.75	0.5	10	90
				5.00	0.5	10	90

(2)液相色谱-质谱联用仪(即岛津三重四级杆液质联用仪)的质谱条件：离子源为电喷雾离子源ESI；扫描方式为负离子模式；喷雾电压为3.5KV；DL Temperature：250℃；Heat Block Temperature：400℃；Nebulizing Gas Flow：3.0L/min；Drying Gas Flow：15L/min；检测方式为多重反应监测(MRM)，6-氯烟酸的参数如表2所示。

表2 6-氯烟酸的参数

2、定性

待仪器稳定后，在上述色谱条件下，待测液中化合物的保留时间、碎片离子对、色谱峰形等，与标准溶液中6-氯烟酸保持一致。

3、标准曲线的绘制

在上述液相色谱串联质谱条件下进行测定，以6-氯烟酸标准溶液浓度与对应的监测离子峰面积作标准曲线，重复测定3次，其测试结果如下表3和图1所示。采用外标法定量法测定，6-氯烟酸标准溶液定量，现配现用。

表3 6-氯烟酸标准溶液的测试结果

4、最小检出量

在上述液相色谱串联质谱条件下，6-氯烟酸的最小检出量为7.0×10^-3ng。

实施例4回收率和精密度测定

1、添加回收实验

按照0.005mg/kg(最小定量限)、0.05mg/kg(吡虫啉在小麦、糙米中最大残留限量，中国)、0.2mg/kg(吡虫啉在甘蔗、大白菜中最大残留限量，中国)、以及0.5mg/kg(吡虫啉在苹果、草莓、小白菜、棉籽中最大残留限量，中国)，设置0.005mg/kg和0.5mg/kg2个添加水平，在植物源食品(即空白基质，包括大白菜、小白菜、草莓、苹果、小麦、糙米、甘蔗和棉籽)中分别添加2档浓度的吡虫啉标准溶液，得到待检测植物源食品，每档重复5次，用上述分析方法测定回收率。

其中，上述植物源食品为市面购买所得，采用实施例1a的方式制得待测液。

2、结果计算

结果测定采用下式计算：

X＝C×n×V/m

式中：

X：植物源食品样本中被测组分残留量，单位为毫克每千克(mg/kg)；

C：被测组分溶液浓度，单位为毫克每升(mg/L)；

n：前处理过程中的稀释倍数；

V：定容体积，单位为毫升(mL)；

m：植物源食品样本称样量，单位为克(g)。

结果一般以三位有效数字表达(0.111，1.21和1.31×10^-2等)；当残留量低于0.1mg/kg时，相对标准偏差更大，此时的结果采用两位有效数字表达即可；当残留量低于0.01mg/kg时，采用1位有效数字表达。添加回收率和精密度(即相对标准偏差，RSD)均以百分数整数表示。

3、检验结果

(1)大白菜中吡虫啉的添加回收率(正确度)和精密度(RSD)

(2)小白菜中吡虫啉的添加回收率(正确度)和精密度(RSD)

(3)草莓中吡虫啉的添加回收率(正确度)和精密度(RSD)

(4)苹果中吡虫啉的添加回收率(正确度)和精密度(RSD)

(5)小麦中吡虫啉的添加回收率(正确度)和精密度(RSD)

(6)糙米中吡虫啉的添加回收率(正确度)和精密度(RSD)

(7)甘蔗中吡虫啉的添加回收率(正确度)和精密度(RSD)

(8)棉籽中吡虫啉的添加回收率(正确度)和精密度(RSD)

以最小添加水平作为分析方法最小定量限，吡虫啉在大白菜、小白菜、草莓、苹果、小麦、糙米、甘蔗、棉籽中的最小定量限均为0.005mg/kg，最小检出限为0.002mg/kg。

综上，通过线性曲线测定、三个添加水平，五个重复的添加回收试验，结果显示6-氯烟酸在0.005～1mg/L浓度范围内，在乙腈溶剂中6-氯烟酸标准溶液浓度与其仪器响应呈良好线性关系，相关系数R²为1.000。6-氯烟酸在8种基质中的平均添加回收率(正确度)和精密度分别为82～112％和3～14％，结果表明该残留分析方法符合农作物中农药残留实验准则要求。

也即，通过在水果、蔬菜、谷物、糖料和油料作物中的验证实验，得到回收率和RSD，确定本发明提供的植物源食品中吡虫啉代谢物的检测方法简单、可靠、精密、准确。复合国际上对吡虫啉残留定义的要求。

以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (7)

1.一种植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，所述吡虫啉代谢物为含有6-氯吡啶基部分的代谢物，其特征在于，包括以下步骤：

S10、将待检测植物源食品粉碎后，向其加入水和甲酸乙腈溶液，搅拌后超声提取，得到混合液，向所述混合液中加入氯化钠并搅拌，然后离心得到第一上清液，浓缩，得到中间液；

S20、向所述中间液中加入含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液并搅拌，然后超声，再向其加入无水亚硫酸钠并搅拌，以将所述植物源食品中吡虫啉及其代谢物全部转化为6-氯烟酸，得到溶液A，将所述溶液A离心留上清，并调节所述上清的pH为2～3，最后加水定容，得到衍生化后的样品；

S30、分别用甲醇、水预淋C18固相萃取柱，然后将所述衍生化后的样品转入所述C18固相萃取柱中，用乙腈洗脱，得洗脱液，然后过滤，得待测液；

S40、将所述待测液用液相色谱-质谱联用仪测试，得到所述待检测植物源食品中吡虫啉及其代谢物的含量；

其中，步骤S40中，所述液相色谱-质谱联用仪的色谱条件包括：

色谱柱为Waters Acquity色谱柱，色谱柱的规格为2.1mm×50mm，1.7μm；柱温为40℃；流速为0.50mL/min；进样量为2μL；

按下表进行梯度洗脱程序：

t/min 流速/mL/min 甲醇/％ 0.1％甲酸水/％ 0.50 0.5 10 90 2.00 0.5 90 10 3.25 0.5 90 10 3.75 0.5 10 90 5.00 0.5 10 90

。

2.如权利要求1所述的植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，其特征在于，步骤S10中：

每1g所述待检测植物源食品中加入的水、甲酸乙腈溶液和氯化钠对应为0.8～1.2mL、1.8～2.2mL和0.6～1g；和/或，

所述甲酸乙腈溶液的质量分数为1％。

3.如权利要求1所述的植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，其特征在于，所述植物源食品包括大白菜、小白菜、草莓、苹果、小麦、糙米、甘蔗和棉籽的至少一种。

4.如权利要求1所述的植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，其特征在于，步骤S20中：

所述第一上清液与所述含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液的体积比为5：14～16；和/或，

所述含有高锰酸钾和氢氧化钠的混合溶液中，所述高锰酸钾的质量分数为4％，所述氢氧化钠的质量分数为0.5％。

5.如权利要求1所述的植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，其特征在于，所述第一上清液的体积与所述无水亚硫酸钠的质量之比为5mL：(5～7)g。

6.如权利要求1所述的植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，其特征在于，步骤S40中，所述液相色谱-质谱联用仪的质谱条件包括：

离子源为电喷雾离子源ESI；扫描方式为负离子模式；喷雾电压为3.5KV；检测方式为多重反应监测。

7.如权利要求1所述的植物源食品中吡虫啉及其代谢物的检测方法，其特征在于，步骤S40包括：

S41、用乙腈将6-氯烟酸标准品配置成质量浓度为0.005～1.0mg/L的系列标准溶液，用液相色谱-质谱联用仪测试所述标准溶液，并根据测试结果绘制出标准曲线；

S42、将所述待测液用液相色谱-质谱联用仪测试，并根据所述待测液的液相色谱-质谱仪测定结果和标准曲线，得到所述植物源食品中吡虫啉及其代谢物的含量。

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