CN1332199C - 同时测定食品中残留的多种有机磷的gc/ms内标检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种同时测定食品中残留的多种有机磷的GC/MS内标检测方法，该方法在样品前处理过程开始即加入内标及回收率指示物，所述内标为氘代屈、氘代蓖和氘代菲中的一种或两种或三种，回收率指示物为1，3二甲基-2-硝基苯或氘代蓖，混合溶剂由环己烷、丙酮、异辛烷按一定比例混合而成；标准曲线配制过程中同时添加所述内标及回收率指示物，经GC/MS测定后，以标准系列浓度为横坐标，标准目标化合物定量离子与相应内标定量离子峰面积比值为纵坐标制作标准曲线，样品经GC/MS定性后，峰面积比值与标准比较定量。本发明对测定全过程进行质量控制，通过内标和回收率指示物进行结果定量、误差判断和校正，提高测量精度和准确度。

Description

同时测定食品中残留的多种有机磷的GC/MS内标检测方法

一.技术领域：本发明涉及一类农药残留的检测方法，特别是涉及一种同时测定食品中残留的多种有机磷的GC/MS内标检测方法。

二.背景技术：随着我国加入WTO，在国外，出口农产品受国外检测技术壁垒封锁的事件不断发生：如著名的菠菜出口日本被拒事件，茶叶出口欧盟受阻事件等；在国内，食品安全问题也日益受到广泛关注。为了接轨国际检测领域、打破国外技术壁垒封锁、保护食品安全、保障人民身体健康，国家以及各地区相继出台了一系列的质量技术标准，如何能快速、高效、准确地检测出食品安全相关产品中所含有的有毒物质是迫切需要解决的问题，高毒农药残留的检测更是当务之急。

有机磷农药是农药中很重要的一类，它具有高效、杀虫谱广等特性，在世界各国均得到了广泛而有效的应用，在农业生产防治病虫害方面起了很大的作用。然而，这类农药往往具有较高的潜在毒性，对人的健康威胁极大。随着有机磷农药使用量的逐年增加，对环境的污染问题也日趋严重。蔬菜、水果、粮食等食品是人们生活中的必需品，且恰恰正是这些必需品，一直被直接或间接地用到有机磷农药，如果食用了被有机磷农药污染并有过量残留的农产品，轻者会给人们的身体健康带来不良影响，重者可能导致急性中毒甚至危及生命。因吃有毒的蔬菜而引起的伤害之事时有所闻，有机磷类农药引起的食物中毒事件也是所有农药中毒事件中最多、后果最严重的一种，这也引起了社会的普遍关注。因此，对农产品中有机磷农药残留的检测一直是农业、环保、卫生、商检部门的重要任务，更是卫生、公安部门应急突发事件检测的首要任务。传统的检测方法大多采用酶抑制法和色谱分离技术，酶抑制法测定灵敏度相对较低、并且不能对各种有机磷进行分品种定性定量，只能作为筛选方法；色谱分离技术包括薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱等分析技术，其原理是利用特征吸收峰在色谱上的保留时间和相应的峰信号强度来判定农药种类及其含量，这类方法操作繁琐、耗时，因为仅依据保留时间定性，可能会将杂质峰误判为是待测组分，定性可靠性和定量准确度相对较差，而且不是国际公认确证方法，不利于实地操作。

近年气相色谱-质谱测定方法，又称GC/MS法开始在我国农残分析领域开发应用，资料显示，开发应用最广的是GC/MS外标法，它是一种简便、快速的绝对定量方法，具体作法是首先用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与欲测组分相同的色谱、质谱条件下，等体积准确量进样，利用质谱图解析分子结构对待测物进行定性，测量待测物峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线。在测定样品中的组分含量时，要用与绘制标准工作曲线完全相同的色谱、质谱条件作出色谱图，测量色谱峰的峰面积或峰高，然后根据峰面积和峰高在标准工作曲线上直接查出进入色谱柱中样品组分的浓度。其优点是：定性准确度高于普通色谱方法，在GC/MS仪器状态一直保持稳定、测定条件完全一致情况下，绘制好标准工作曲线，计算时可直接从标准工作曲线上读出样品中含量，这对大量样品分析十分合适。其缺点是：每次样品分析的色谱、质谱条件(检测器的响应性能，柱温度，流动相流速及组成，进样量，柱效、质谱离子源污染程度等)很难完全相同，因此容易出现较大误差；另外，标准工作曲线绘制时，一般使用欲测组分的标准样品，因此对样品前处理过程中欲测组分的变化无法进行补偿，难以控制测定质量和判断由此产生的误差大小。

针对这种情况，技术人员有时采用内标法检测农产品中的农药残留，如中国专利(授权公告号为CN1164941C，专利号为01127140.X)公开了一种“禽蛋中微量有机氯农药及多氯联苯残留量的测定方法”，它以PCB2和PCB209为内标，运用气相色谱法进行检测，但是它仅仅是在上机测定的溶液中加入内标，以获得相应的校正曲线，减少测量仪器状态变化带来的误差，它在样品前处理过程中没有加入内标物，无法补偿在样品的制备和处理过程中残留农药的损失，也就无法得到准确的残留物的含量；同时由于是气相色谱方法，同样存在常规气相色谱方法仅靠保留时间定性可能将杂质峰误判为待测物的缺陷。

三.发明内容：

本发明的目的：克服当前检测方法的不足，提供一种检测速度快、对多残留有机磷无测定歧视，结果准确度高、重现性好、灵敏度达到国家标准要求的、针对食品中多残留有机磷的、GC/MS内标同时测定方法，以适应卫生和公安应急检测，适应农业、卫生、商检、公安、技术监督、海关、环保、教育、科研的基层分析单位日常检测的需要。

本发明的技术方案是：一种同时测定食品中残留的多种有机磷的GC/MS内标检测方法，包括样品前处理过程、标准及曲线配制过程，以及气相色谱-质谱仪定性、定量测定过程，其中样品前处理过程时，先将样品混匀、细化，称取样品5-20g后，加入内标及回收率指示物，内标及回收率指示物加入量应保证最终上机测定有机相中浓度为2.5-5.0mg/L，混匀后加入20-30ml混合溶剂避光超声提取20-30分钟，滤渣用20-30ml混合溶剂振摇提取，剩余残渣再用20-30ml有机溶剂洗涤，所得全部滤液脱水后抽滤浓缩，后用混合溶剂定容至2.5-5ml，高速离心，取上清液进行测定，所述内标为氘代屈、氘代蓖和氘代菲中的一种或两种或三种，所述回收率指示物为1，3二甲基-2-硝基苯或氘代蓖，所述混合溶剂为环己烷∶丙酮∶异辛烷＝4～8∶0.3～0.7∶0.8～1.5；标准及曲线配制过程：配制各种浓度的标准溶液，配制过程中同时添加所述内标及回收率指示物，并保证所述内标及回收率指示物的添加量与样品最终上机测定的有机相中浓度一致，然后分别注入气相色谱-质谱仪中进行测定，以标准系列浓度为横坐标，标准目标化合物定量离子与相应内标定量离子峰面积比值为纵坐标制作标准曲线。

所述氘代屈对色谱保留时间在15分钟以前的有机磷类化合物进行测定质控或进行误差校正，氘代蓖对色谱保留时间在15-25分钟之间的有机磷类化合物进行测定质控或进行误差校正，氘代菲对色谱保留时间在25分钟以后的有机磷类化合物进行测定质控或进行误差校正。

所述回收率指示物1，3二甲基-2-硝基苯对物理性质和化学性质不稳定的有机磷的测定准确度进行质量控制，回收率指示物氘代蓖对物理性质和化学性质稳定的有机磷的测定准确度进行质量控制，两种回收率指示物同时对测定全过程进行质量控制。

所述的混合溶剂为环己烷∶丙酮∶异辛烷＝6∶0.5∶1.0，所述的有机溶剂为二氯甲烷。

所述的离心过程为：首先将浓缩后的有机相用混合溶剂定容至2.5-5ml，然后在3500r/min以上转速条件下离心3～10分钟，然后再取上清液在16000r/min条件下，高速离心2～4分钟。

所述气相色谱-质谱仪定性、定量测定过程中气相色谱-质谱仪的测定工作条件为：

a.色谱条件：色谱柱为DB5-MS柱或DB17-MS或DB-1柱，30m×0.32mm×0.25μm，载气为氦气，进样口温度为270℃，进样方式为不分流进样，进样时间1min，进样量2μl，柱流量为1.78ml/min，以压力控制模式，分流比为10∶1，升温程序为：60℃保持1.0min，以40℃/min升到110℃，以5.0℃/min升到190℃，以3℃/min升到210℃，以5.0℃/min升到220℃，以40℃/min升到265℃保持5min；

b.质谱条件：离子源温度200℃，接口温度250℃，电子轰击能70eV，检测器电压1.09Kv，溶剂切除时间3.0min，检测方式：全扫描，扫描时间段3.50-33.00min，扫描质量范围40-440，扫描间隔0.5sec。

所述的气相色谱-质谱仪的定性测定过程是采用全扫描检测方式进行的，是采用全扫描谱库检索与相应保留时间提取质量色谱图进行特征选择离子指纹图谱定性相结合的方法定性；进行特征选择离子指纹图谱定性时，要求相应保留时间下，特征鉴定离子中，至少3个特征离子的丰度比例变化不大于标准的相同离子丰度比例的±20％。

所述的气相色谱-质谱仪的定量测定过程为：选择各目标化合物特征离子中丰度高、噪声低的离子为定量离子，测定时，吸取添加有内标及回收率指示物的试剂空白溶液及样品溶液，分别注入气相色谱-质谱仪中，定性确证有机磷农药品种后，对定量离子进行峰积分，再配制对应的标准溶液，绘制内标法标准曲线，将样品测得比值与标准曲线比较定量；或者以内标法配制与待测目标化合物浓度接近的单点标准，将样品测得比值与单点标准比较定量。

本发明的有益效果是：

1.本发明克服了GC/MS外标标准曲线法中，每次样品分析时色谱、质谱条件很难完全相同而引起的误差：把内标和回收率指示物加到标准和样品中，使欲测组分、内标和回收率指示物在同一色谱条件下进行分析，通过进行误差校正，可使定量的准确度提高。

2.本发明克服了GC/MS外标标准曲线法中由于进样量不准确产生的误差：因为内标法测定中的欲测组分、内标和回收率指示物在同一检测条件下响应值之比与进样量多少无关，而内标法的定量依据是响应值之比。

3.本发明在一定程度上克服了GC/MS外标标准曲线法中样品前处理过程产生的误差：在样品前处理开始即加入内标和回收率指示物，这样可以对包括样品前处理过程在内的整个操作过程进行有效的质量控制，可以对操作失误和仪器状态异常变化带来的偶然误差进行正确判断，可以通过回收率指示物的回收率判断和校正测定误差。

4.本发明采用多内标分段质控法，克服了普通内标法采用单一内标对多种化合物同时进行测定质控时，由于难以兼顾造成质控效果不佳，甚至使部分化合物失控的问题：本发明内标法同时加入氘代屈，氘代蓖，氘代菲多个内标指示物，其中氘代屈对色谱保留时间在15分钟以前(色谱柱温度在130℃-150℃之间)的有机磷类化合物进行测定质控或进行误差校正，氘代蓖对色谱保留时间在15-20分钟之间(色谱柱温度在150℃-200℃之间)的有机磷类化合物进行测定质控或进行误差校正，氘代菲对色谱保留时间在25分钟以后(色谱柱温度在210℃-265℃之间)的有机磷类化合物进行测定质控或进行误差校正，即使一次同步测定有机磷的种类提高到30多种，也不会出现失控现象，对提高多成份同时定量分析的准确度和精度做出了贡献。

5.本发明采用添加回收率指示物的内标法，克服了普通内标法对样品操作失误和仪器状态偶然异常变化造成的偶然误差难以及时进行正确判断的缺点，提高了方法回收率的稳定性，解决了测定失控的判断问题：采用氘代蓖作为回收率指示物，对性质相对稳定的有机磷化合物测定准确度进行质量控制或进行误差校正，采用1，3二甲基-2硝基苯作为回收率指示物，对性质相对较不稳定的有机磷化合物测定准确度进行质量控制或进行误差校正，由于针对不同性质有机磷采用不同的回收率指示物，使测定误差直接反映在回收率指示物的测定结果上，不仅可使操作人员及时了解测定过程产生的误差大小、测定结果的准确度，并可根据回收率指示物的回收率在一定程度上对测定结果进行适当的误差校正，对提高多成份同时定量分析的准确度做出了贡献。

6.本发明研发了较大口径(30m×0.32mm×0.25μm)毛细管柱测定多种有机磷目标化合物的色谱-质谱技术。由于改用较大口径毛细管柱对目标化合物进行色谱分离，解决了多种有机磷目标化合物同时测定色谱分离难的问题，改善了含N化合物在常规毛细管柱上色谱峰拖尾带来的相近峰部分重叠现象，促进了有机磷化合物之间、有机磷化合物与样品基质之间的分离，使得简化、优化的前处理方法得以实施，可大大提高样品前处理速度，对应急有机磷毒检十分有利。

7.本发明研发的多种有机磷农残的GC/MS法SCAN\SIM检测方式的全面、详细的检测技术，适用于不同仪器状态、不同溶剂介质、常见样品基质中的多种有机磷目标化合物的同时测定。该发明SIM检测方式指纹图谱技术对定性确证提供了可靠质量保证，不仅解决了常量多残留有机磷同时准确定性测定中存在的问题，也解决了低浓度有机磷多残留的定性问题，为最大限度地减少复杂样品基质杂质带来的测定干扰，提高测定技术方法的灵敏度作出了贡献。

8.本发明的发明人通过大量试验确定了多种有机磷目标化合物和内标及回收率指示物的可靠定量离子，解决了复杂样品基质下多残留有机磷质谱准确定量问题。其技术原理是，保留时间内真正由残留农药裂解的特征离子碎片，是质谱仪定量的依据。

9.本发明研发了适用于普通实验室的混合溶剂、分步提取的快速前处理方法，并研发了适用于常规样品的简单优化的前处理净化过程，解决了基层应用单位在前处理设备落后情况下，因为前处理过程复杂、周期长而出现样品污染、样品损失，造成测定回收率不稳定、结果不准确，不能正常大量开展工作的问题，提高了测定效率、测定方法灵敏度和准确度。单样品前处理测定时间由原来的几个小时缩短为20-40分钟。其技术原理是，在样品前处理方面，只有处理样品的过程简单、处理速度快、引进的误差小、对欲测定组分的选择性高，样品回收率才会好，才能保证检测结果准确。

10.本发明具有广泛的社会应用价值。它不仅能满足卫生部门、公安部门应对与有机磷中毒有关的突发事件的应急检测的需要，也可应用于农药生产企业，为鉴定农药组分、定量农药纯度服务，可应用于环保等公用事业单位进行环境有机磷污染调查，应用于大专院校为有机磷生命科学的研究服务，还可应用于其他研究机构进行与有机磷分析有关的研究技术服务，是一种快速、准确、有效的定性、定量确证检验技术。

本发明有益效果的具体数据说明参见表一、表二、表三。表一和表二是用同一台仪器，在同样的实验条件下，对不同浓度的目标化合物混合标准系列进行测定的结果，分别以外标法和内标法进行结果比较。从表二外标法结果可以看出甲拌磷等十余种目标化合物标准系列线性很差，这是由于不同浓度混合标准放置时间不同、测定时仪器状态变化、不同人员进样差别等引起的测定误差带来的结果；由于同时进行了内标法测定，同样的实验结果以内标法进行校正后，上述外标法的缺点即得以克服，标准系列线性良好，见表一。表三是以回收率指示物氘代蓖为代表进行的方法精密度测定实验结果，对同一浓度水平的混合标准溶液和内标(5mg/L)，每天测定一次，连续25天的测定中，作为回收率指示物的氘代蓖峰面积与内标氘代屈峰面积比值范围0.497±0.0337，氘代蓖峰面积与内标氘代菲的峰面积比值范围2.230±0.056，氘代蓖峰面积与内标氘代屈、氘代菲的峰面积比值的RSD分别为7.05％和4.84％，证明该内标法具有良好的精密度；同样的标准若以外标法进行测定定量，氘代蓖峰面积绝对值范围为83383-3548244单位，同一标准不同时间测定定量结果最大误差达到55％，测定精度与内标法根本无法相比。

四.具体实施方式：

实施例一.试验仪器：岛津GCMS-QP2010气相色谱质谱仪，EI源；粉碎机；组织捣碎机；超声波提取器；电动振荡器；旋转蒸发仪；具塞锥形瓶，250mL；分液漏斗250mL。台式离心机(4000r/min以上)；GL--16高速台式离心机(16000r/min以上)；旋涡式振荡器；加样枪(100μl-1000μl；10μl---100μl；2μl-20μl；)枪头用前以二氯甲烷及混合溶剂处理。

标准化合物及试剂：内标指示物及回收率指示物为氘代屈、氘代蓖、氘代菲和1，3二甲基-2-硝基苯，有机溶剂为二氯甲烷，混合溶剂为环己烷∶丙酮∶异辛烷＝6∶0.5∶1。氘代屈、氘代蓖、氘代菲分别用D8、D10、D12表示。

小麦样品的制备方法：取1公斤有代表性的小麦样品经粉碎机粉碎，过40目筛后，备用。

提取和净化过程：称取上述试样20g，精确至0.001g，置于具塞锥形瓶中，分别加入内标氘代屈、氘代蓖、氘代菲及回收率指示物1，3二甲基-2-硝基苯，各25μg，混匀，加入30mL混合溶液，避光超声提取0.5h，抽滤，残渣用20mL混合溶剂振摇提取、洗涤一次，合并滤液，剩余残渣再用30mL二氯甲烷分数次洗涤，过滤，合并所有滤液，过无水硫酸钠，于旋转蒸发仪上浓缩，用混合溶剂定容至5mL，3500r/min以上离心10分钟；取上清液1mL转入1.5ml一次性离心试管中，16000r/min，高速离心2分钟；取澄清有机相2μl进样。

气相色谱--质谱仪测定条件及定性定量方法：

1.色谱条件：

色谱柱：DB5-MS柱(DB17-MS，DB-1)

30m×0.32mm(0.25mm)×0.25μm

载气：氦气；进样口温度：270℃；进样方式：不分流进样；进样时间：1min；进样量：2μl；柱流量：1.78(1.0)ml/min，压力控制模式；分流比：10∶1

升温程序：60℃保持1.0min，以40℃/min升到110℃，以5.0℃/min升到190℃，以3℃/min升到210℃，以5.0℃/min升到220℃，以40℃/min升到265℃保持5min。

2.质谱条件：离子源温度：200℃；接口温度：250℃；电子轰击能：70eV；检测器电压1.09Kv，溶剂切除时间：3.0min

检测方式：SCAN(全扫描)，扫描时间段3.50-33.00min；SIM(选择离子扫描)，扫描时间段、选择离子见表四；扫描质量范围：40-440；扫描间隔：0.5sec；

3.气相色谱--质谱仪定性定量方法：

全扫描检测模式定性标准：采用全扫描谱库检索与相应保留时间提取质量色谱图进行特征选择离子定性相结合的方法定性；

选择离子检测模式定性标准：按欧盟残留分析要求选确认鉴定点数，相应保留时间下，要求特征离子中，至少3个特征离子的丰度变化，不大于标准的相同离子丰度的±20％。

定量计算：选择丰度较高样品及溶剂基质中噪声相对较低的离子为定量离子。以标准系列浓度为横坐标，标准目标化合物定量离子与相应内标定量离子峰面积比值为纵坐标制作标准曲线；待测目标化合物定量离子峰面积与相应内标定量离子峰面积比值，扣除空白后，与相应目标化合物标准曲线或与待测目标化合物浓度接近的单点标准的比值比较定量。各待测目标化合物对应参照内标、对应回收率指示物见表五。

样品的测定及分析结果表述：

测定：吸取2.0μl添加有内标及回收率指示物的试剂空白溶液及样品溶液，分别注入GC/MS中，定性确证有机磷农药品种后，对定量离子进行峰积分；再分别配制各种浓度的对应标准溶液(配制同时添加内标及回收率指示物)，分别注入GC/MS中，绘制成标准曲线，将样品测得比值与标准曲线比较定量；或者以单点法定量。

分析结果的表述X＝A×V×1000/m

式中：X----样品中有机磷的含量，mg/kg；A----进样样液中有机磷的含量(由标准曲线查出)，μg；V----样品提取液浓缩定容体积，mL；m----样品质量，g。

上述小麦样品中测定结果为检出氧化乐果0.0411mg/kg，甲胺磷0.0052mg/kg，未检出其他有机磷农药。

实施例二：本实施例与实施例一基本相同，相同之处不重述，不同之处在于：取有代表性的大米为样品，加入内标氘代屈、氘代菲及回收率指示物氘代蓖，各25μg，混合溶剂为环己烷∶丙酮∶异辛烷＝7∶0.6∶1.5。

上述大米样品测定结果为检出氧化乐果0.0356mg/kg，未检出其他有机磷农药。

实施例三：本实施例与实施例一基本相同，相同之处不重述，不同之处在于：取有代表性的玉米为样品，分别加入内标氘代屈、氘代蓖及回收率指示物1，3二甲基-2-硝基苯，各25μg，混合溶剂为环己烷∶丙酮∶异辛烷＝5∶0.4∶0.8。

上述玉米样品测定结果为检出甲胺磷0.0032mg/kg，未检出其他有机磷农药。

实施例四：菜花样品中有机磷的测定。本实施例与实施例一基本相同，相同之处不重述，不同之处在于：取有代表性的菜花样品1公斤左右，丢掉非可食用部分后，剁碎或经组织粉碎制成试样，称取试样20g，精确至0.001g，置于具塞锥形瓶中，加入内标氘代屈、氘代蓖、氘代菲及回收率指示物1，3二甲基-2-硝基苯，各25μg，混匀，加无水硫酸钠吸水至混合样品干燥成散状，其余同实施例一。

上述菜花样品测定结果为检出甲基对硫磷0.0067mg/kg，未检出其他有机磷农药。

实施例五：西红柿样品中有机磷的测定。本实施例与实施例四基本相同，相同之处不重述，不同之处在于：加入内标氘代屈、氘代菲及回收率指示物氘代蓖，各25μg，混合溶剂为环己烷∶丙酮∶异辛烷＝4∶0.3∶1.5。上述西红柿样品测定结果为检出二嗪农0.0581mg/kg，未检出其他有机磷农药。

实施例六：青菜样品中有机磷的测定。本实施例与实施例四基本相同，相同之处不重述，不同之处在于：加入内标氘代屈及回收率指示物氘代蓖，各25μg，混合溶剂为环己烷∶丙酮∶异辛烷＝8∶0.8∶1.5。上述青菜样品测定结果为检出杀扑磷0.1491mg/kg，未检出其他有机磷农药。

实施例七：食物中毒样品中有机磷的测定。本实施例与实施例一基本相同，相同之处不重述，不同之处在于：取中毒患者的呕吐物5克，所有滤液过无水硫酸钠及硅藻土柱净化。其测定结果为检出甲胺磷10.5491mg/kg，未检出其他有机磷农药。

表一内标、回收率指示物和目标化合物内标法测定曲线
												中文名称	色谱保留	定量离子	Ai/A	Ai/A	Ai/A	Ai/A	Ai/A	Ai/A	r	a	b
标准系列浓			0.2μg/ml	0.5μg/ml	1.0μg/ml	1.5μg/ml	2.0μg/m1	5.0μg/ml
												内标	5.180	136
甲胺磷	5.578	94		0.02438	0.041474	0.068216	0.076911	0.22566	0.99703	-0.0030	0.04519
												敌百虫	5.847	109	0.005179	0.00925	0.019940		0.041200		0.99842	0.00002	0.02040
敌敌畏	5.850	109		0.04817	0.093839	0.146251	0.186518	0.47167	0.99988	0.00116	0.09406
												速灭磷	8.992	127		0.03805	0.066119	0.103979	0.131935	0.34397	0.99958	-0.0002	0.06854
乙酰甲胺磷	9.075	136		0.00693	0.010003	0.014940	0.021815	0.09518	0.98509	-0.0114	0.02061
												氧化乐果	12.43	110	0.006648	0.01205	0.019564		0.040828		0.99732	0.00223	0.01896
甲基内吸磷	13.13	88	0.008028	0.02159	0.054587		0.130102		0.99442	-0.0103	0.06914
												久效磷	14.53	127		0.023730	0.034524	0.051967	0.071145	0.23106	0.99363	-0.0130	0.04777
甲拌磷	14.70	75	0.014680	0.0377840	0.0789391		0.167674		0.99926	0.00422	0.08539
												乐果	15.34	87		0.037812	0.054108	0.097089	0.111653	0.29589	0.99774	0.00278	0.05826
内吸磷	15.45	88	0.000498	0.001143	0.003688		0.007516		0.99669	-0.0005	0.00402
												己胺磷	16.59	138		0.016942	0.027113	0.044899	0.052661	0.12138	0.99837	0.00633	0.02313
二嗪农	16.90	179		0.011768	0.016413	0.025860	0.031109	0.07553	0.99465	0.00500	0.01384
												乙拌磷	17.17	88	0.013064	0.036870	0.103240		0.207974		0.99680	-0.0118	0.11040
乙嘧硫磷	17.52	181		0.007246	0.011842	0.015485	0.023374	0.05560	0.99852	0.00089	0.01091
												稻瘟净	17.80	91		0.046681	0.064634	0.138902	0.158609	0.464230	0.99625	-0.0155	0.09507
甲基对硫磷	18.86	109		0.016041	0.023640	0.049486	0.050577	0.164050	0.99350	-0.0063	0.03358
												马拉氧磷	18.98	127		0.011942	0.016322	0.029594	0.036822	0.095350	0.99824	0.00008	0.01896
甲基嘧硫磷	19.99	290		0.008336	0.014060	0.021218	0.028630	0.068320	0.99982	0.00126	0.01342
												杀幎硫磷	20.00	125		0.018160	0.026732	0.051998	0.057296	0.146010	0.99662	0.00275	0.02864
马拉硫磷	20.55	93		0.084073		0.211405	0.265590	0.670880	0.99966	0.01341	0.13092
												倍硫磷	20.91	278	0.015880	0.042515	0.102406		0.211968		0.99901	0.00882	0.11029
对硫磷	21.07	97		0.038064	0.072140	0.111523	0.139453	0.391640	0.99888	-0.0078	0.07919
												水胺硫磷	21.26	136		0.046471	0.089710	0.106141	0.144807	0.359210	0.99840	0.01084	0.06921
异硫磷	22.76	58		0.199177	0.446160	0.654299	0.759956	1.812620	0.99792	0.07591	0.34926
												奎硫磷	23.02	146		0.051282	0.095508	0.153354	0.176126	0.456740	0.99877	0.00722	0.08968
稻丰散	23.60	274		0.030825	0.047260		0.076293	0.228040	0.99449	0.00096	0.04454
												杀扑磷	23.84	85		0.135001	0.259307	0.360428	0.448944	1.230840	0.99861	-0.0011	0.24404
克线磷	27.50	303		0.004706	0.005154	0.017157		0.059070	0.99436	-0.0035	0.01251
												乙硫磷	28.56	231		0.039796	0.074971	0.117356	0.139819	0.357210	0.99934	0.00530	0.07026
亚胺硫磷	29.85	160		0.102267	0.186907	0.257145	0.329951	0.926340	0.99805	-0.0091	0.18481
												内标	29.86	240

Ai：有机磷的定量离子的色谱峰面积；A：对有机磷进行测定质控的内标的定量离子的色谱峰面积；

r：有机磷标准曲线的线性相关系数；a：有机磷标准曲线的截距；b：有机磷标准曲线的斜率。

表二与内标方法对应的外标方法曲线
												中文名称	色谱保留时间	定量离子	标准浓度						r	a	b
			0.2ppm	0.5PPM	1ppm	1.5ppm	2ppm	5ppm
												甲胺磷	5.578	94	30127	98971	183611	147729	311977	628541	0.9681	27060	121431
敌百虫	5.847	109	17991	45849	89680		169896		0.9991	3171.4	83981
												敌敌畏	5.850	109	1E+05	195549	415443	316721	756583	1313743	0.9432	89853	251210
速灭磷	8.992	127	63677	154447	292719	225177	535176	958054	0.9487	59352	183641
												乙酰甲胺磷	9.075	136	5263	28159	44284	32354	88491	265114	0.9646	-14687	54097
氧化乐果	12.433	110	23095	52812	92640		170075		0.9983	10066	80637
												甲基内吸磷	13.165	88	28207	86332	203535		529836		0.9940	-117770	670109
久效磷	14.533	127	22674	96314	152846	112539	288589	643566	0.9645	3425.5	127056
												甲拌磷	14.700	75	23825	144651	275463	32340	98227	59817	0.048	126047	-11957
乐果	15.346	87	51761	153471	239547	210256	452903	824134	0.9587	55384	15684
												内吸磷	15.450	88	1729	5659	16558		20461		0.8741	1404.1	10484
己胺磷	16.592	138	28766	68763	72664	56003	126191	210363	0.9467	38432.2	34182.3
												二嗪农	16.902	179	20221	47763	36299	2035	2289	2678	0.3626	30172	-6838.1
乙拌磷	17.175	88		3386	52427	33535	94815	154877	0.8788	5350.8	31229
												乙嘧硫磷	17.524	181	15371	29408	286149	300805	643373	1293035	0.9726	-35139	272448
稻瘟净	17.808	91	37089	189467	104658	107166	205157	456924	0.8592	50127	78407
												甲基对硫磷	18.864	109	22659	65106	72261	64089	149365	265580	0.9415	23109	49060
马拉氧磷	18.988	127	14568	48470	62245	45950	116134	190280	0.9141	20333	34868
												甲基嘧硫磷	19.999	290	16199	33834	118347	112607	232413	406685	0.953	14493	81679
杀幎硫磷	20.000	125	27477	73708	446304	104750	242129	398360	0.3622	112090	60803
												马拉硫磷	20.554	93	37538	66551	91157	16965	42538	27452	0.1766	58220	-6580.1
倍硫磷	20.910	278	9717	48966	62203	55259	127135	232551	0.9498	13518	44581
												对硫磷	21.074	97	13401	30131	77353	52592	132016	213294	0.9138	16837	40957
水胺硫磷	21.263	136	16009	36786	384704	324201	692826	1076304	0.8982	46311	220879
												异硫磷	22.768	58	99557	157666	82352	75986	160568	271206	0.6891	81748	34985
奎硫磷	23.025	146	21842	40594	40750	20398	69554	135405	0.8767	15207	23265
												稻丰散	23.608	274	13395	24401	223589	178590	409287	730849	0.9395	6899.7	150854
杀扑磷	23.844	85	52538	106865	2E+06	1E+06	2E+06	1326079	0.1471	828815	200321
												克线磷	27.503	303	1067	3725	64644	58149	127468	212108	0.9247	2339.3	44424
乙硫磷	28.560	231	15489	31502	161162	127414	300805	550042	0.9485	6927.7	112240
												亚胺硫磷	29.858	160	36188	80953	862256	495494	911666	593783	0.1787	342506	90716

r：有机磷标准曲线的线性相关系数；a：有机磷标准曲线的截距；b：有机磷标准曲线的斜率。

表三精密度实验(回收率指示物D10为代表)
											第1天	第2天	第3天	第4天	第6天	第7天	第8天	第9天	第10天
D8峰面积	1981540	1010681	2785310	4056356	5994548	6763289	6213277	6287091	7559413
										D10峰面积	83383	505646	1326079	2077274	2610556	3180045	3082339	2435346	3548244
D12峰面积	33641	293545	593783	911666	1177594	1538725	1323224	1031232	1697670
										D10/D8	0.429	0.500	0.476	0.512	0.435	0.470	0.496	0.387	0.469
D10/D12	2.479	1.723	2.233	2.279	2.217	2.067	2.329	2.362	2.090
											第11天	第12天	第13天	第14天	第16天	第17天	第18天	第19天	第20天
D8峰面积	4985284	4952298	4497439	4123645	4489835	2722402	4735225	4965653	4251049
										D10峰面积	255850	2452495	2327224	2089009	2558576	1869782	2654596	2292671	68118
D12峰面积	1136016	1061756	1071805	971703	1135901	780986	1155844	1019176	603293
										D10/D8	0.513	0.495	0.517	0.507	0.570	0.687	0.561	0.462	0.016
D10/D12	2..252	2.310	2.171	2.150	2.252	2.394	2.297	2.250	0.113
											第21天	第22天	第23天	第24天	第26天	第27天	相对标准偏差
D8峰面积	3474035	4952298	4489835	2722402	4123645	4735225	3.39％	RT(色谱保留时间)	定量离子
										D10峰面积	2327224	2558576	2452495	1869782	2089009	2654596	37.28％	5.18	1    3    6
D12峰面积	971703	1135901	1061756	780986	1036016	1155844	28.31％	24.942	2    1    2
										D10/D8	0.670	0.517	0.546	0.687	0.507	0.561	4.84％	29.861	2    4    0
D10/D12	2.395	2.252	2.310	2.394	2.016	2.297	7.05％

表四选择离子扫描时间通带及选择离子

扫描时间段(min)	扫描间隔	扫描峰号	扫描选择离子
				4.50-6.50	0.30sec	1；2；3；4；5	106  151  91  63  94  141  111  64  79  109  185220  136  108  137  134  135
8.00-9.50	0.30sec	6；7	127  192  164  224  67  136  94  47
				12.00-16.00	0.30sec	8；9；10；11；12；13	110  156  79  126  87  88  142  109  89112  127  192  97
58  223  75  260  2多  121  125  93  60114  170
	16.01-18.20	0.30sec	14；15；16；17；18				138  194  236  222  122  179  137  199  304152  88  274
186  142  181  292  153  168 56  91  204288  246  123
				18.21-22.20	0.30sec	19；20；21；22	109  125  263  93  127  99  55  290  276305  233  180
260  277  173  278  169  97  291  136  121110  289
	22.30-25.00	0.30sec	23；24；25；26；27				58  213  185  255  146  157  118  129  102274  121  93  246
28；29；30；31				85  145  125 212  106 211
			25.01-多.00		0.30sec	32；33；34；35	303  217  288  195  2多  129  153  384  16077  93
104  133  240  236  120  106

表五内标、回收率指示物和目标化合物定性、定量离子表
							中文名称	色谱保留时间	定量用离子	基峰离 子	鉴定用离子	参考内 标	回收率指示物
1、3二甲基二硝基苯	5.159	106	79	151  134  106  91  63	D    8
							内标D8	5.180	136	136	136 108  137  134  135		1、3二甲基-2-硝基苯、D10
甲胺磷	5.578	94	94	94  141  111  64  79	D    8	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							敌百虫	5.847	109	109	109    185    220	D    8	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
敌敌畏	5.850	109	109	109    185    220	D    8	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							速灭磷	8.992	127	127	127  192  67  164  224	D    8	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
乙酰甲胺磷	9.075	136	136	94    136    47	D    8	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							氧化乐果	12.433	110	110	110  156  79  126  87	D    8	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
甲基内吸磷	13.133	88	88	88  142  109  79  89  112	D    8	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							久效磷	14.533	127	127	127  192  97  58  223	D    8	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
甲拌磷	14.700	75	75	75  260  231  121	D    8	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							乐果	15.346	87	87	87    125    93	氘代蓖	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
内吸磷	15.450	88	88	88  60  114  170	氘代蓖	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							己胺磷	16.592	138	138	138  194  236  222  122	氘代蓖	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
二嗪农	16.902	179	137 179	179  137  199  304  152	氘代蓖	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							乙拌磷	17.175	88	88	88  274  186  142	氘代蓖	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
乙嘧硫磷	17.524	181	181	181  292  153  168  56	氘代蓖	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							稻瘟净	17.808	91	91	91  204  288  246  123	氘代蓖	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
甲基对硫磷	18.864	109	109	109  125  263  93	氘代蓖	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							马拉氧磷	18.988	127	127	127  99  125  55	氘代蓖	1、3二甲基-2-硝基苯，D10
甲基嘧硫磷	19.999	290	290	290  276  305  233  180	氘代蓖	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							杀螟硫磷	20.000	125	125	125  109  260  277	氘代蓖	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
马拉硫磷	20.554	93	93	93  125  173  99	氘代蓖、D12	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							倍硫磷	20.910	278	278	278    169    125	氘代蓖、D12	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
对硫磷	21.074	97	97	109    97    291	氘代蓖、D12	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							水胺硫磷	21.263	136	136	136  121  110  289	氘代蓖、D12	1、3二甲基-2-硝基苯、010
异硫磷	22.768	58	58	58   213  185  255	氘代蓖、D12	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							奎硫磷	23.025	146	146	146  118  129  102  298	氘代蓖、D12	1、3二甲基-2-硝基苯、010
稻丰散	23.608	274	274	274  121  246  107	氘代蓖、D12	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							杀扑磷	23.844	85	85	85  145  125  93  58	氘代蓖、D12	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
内标氘代蓖	24.942	212	212	212  106  211  213	D8、D12
							克线磷	27.503	303	303	303  217  288  195	D    1    2	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
乙硫磷	28.560	231	231	231  129  153  384	D    1    2	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
							亚胺硫磷	29.858	160	160	160  77  93  104  133	D    1    2	1、3二甲基-2-硝基苯、D10
内标D12	29.861	240	240	240  236  120  106

Claims (8)

1.一种同时测定食品中残留的多种有机磷的GC/MS内标检测方法，包括样品前处理过程、标准及曲线配制过程，以及气相色谱-质谱仪定性、定量测定过程，其特征是：样品前处理过程时，先将样品混匀、细化，称取样品5-20g后，加入内标及回收率指示物，内标及回收率指示物加入量应保证最终上机测定有机相中浓度为2.5-5.0mg/L，混匀后加入20-30ml混合溶剂避光超声提取20-30分钟，滤渣用20-30ml混合溶剂振摇提取，剩余残渣再用20-30ml有机溶剂洗涤，所得全部滤液脱水后抽滤浓缩，后用混合溶剂定容至2.5-5ml，高速离心，取上清液进行测定，所述内标为氘代屈、氘代蓖和氘代菲中的一种或两种或三种，所述回收率指示物为1，3二甲基-2-硝基苯或氘代蓖，所述混合溶剂为环己烷∶丙酮∶异辛烷＝4～8∶0.3～0.7∶0.8～1.5；标准及曲线配制过程：配制各种浓度的标准溶液，配制过程中同时添加所述内标及回收率指示物，并保证所述内标及回收率指示物的添加量与样品最终上机测定的有机相中浓度一致，然后分别注入气相色谱-质谱仪中进行测定，以标准系列浓度为横坐标，标准目标化合物定量离子与相应内标定量离子峰面积比值为纵坐标制作标准曲线。

2.根据权利要求1所述的同时测定食品中残留的多种有机磷的GC/MS内标检测方法，其特征是：所述氘代屈对色谱保留时间在15分钟以前的有机磷类化合物进行测定质控或进行误差校正，氘代蓖对色谱保留时间在15-25分钟之间的有机磷类化合物进行测定质控或进行误差校正，氘代菲对色谱保留时间在25分钟以后的有机磷类化合物进行测定质控或进行误差校正。

3.根据权利要求1所述的同时测定食品中残留的多种有机磷的GC/MS内标检测方法，其特征是：所述回收率指示物1，3二甲基-2-硝基苯对物理性质和化学性质不稳定的有机磷的测定准确度进行质量控制，回收率指示物氘代蓖对物理性质和化学性质稳定的有机磷的测定准确度进行质量控制，两种回收率指示物同时对测定全过程进行质量控制。

4、根据权利要求1所述的同时测定食品中残留的多种有机磷的GC/MS内标检测方法，其特征是：所述的混合溶剂为环己烷∶丙酮∶异辛烷＝6∶0.5∶1.0，所述的有机溶剂为二氯甲烷。

5.根据权利要求1所述的同时测定食品中残留的多种有机磷的GC/MS内标检测方法，其特征是，所述的离心过程为：首先将浓缩后的有机相用混合溶剂定容至2.5-5ml，然后在3500r/min以上转速条件下离心3～10分钟，然后再取上清液在16000r/min条件下，高速离心2～4分钟。

6.根据权利要求1所述的同时测定食品中残留的多种有机磷的GC/MS内标检测方法，其特征是：所述气相色谱-质谱仪定性、定量测定过程中气相色谱-质谱仪的测定工作条件为：

a.色谱条件：色谱柱为DB5-MS柱或DB17-MS或DB-1柱，30m×0.32mm×0.25μm，载气为氦气，进样口温度为270℃，进样方式为不分流进样，进样时间1min，进样量2μl，柱流量为1.78ml/min，以压力控制模式，分流比为10∶1，升温程序为：60℃保持1.0min，以40℃/min升到110℃，以5.0℃/min升到190℃，以3℃/min升到210℃，以5.0℃/min升到220℃，以40℃/min升到265℃保持5min；

b.质谱条件：离子源温度200℃，接口温度250℃，电子轰击能70eV，检测器电压1.09Kv，溶剂切除时间3.0min，检测方式：全扫描，扫描时间段3.50-33.00min，扫描质量范围40-440，扫描间隔0.5sec。

7.根据权利要求6所述的同时测定食品中残留的多种有机磷的GC/MS内标检测方法，其特征是：所述的气相色谱-质谱仪的定性测定过程是采用全扫描检测方式进行，是采用全扫描谱库检索与相应保留时间提取质量色谱图进行特征选择离子指纹图谱定性相结合的方法定性；进行特征选择离子指纹图谱定性时，要求相应保留时间下，特征鉴定离子中，至少3个特征离子的丰度比例变化不大于标准的相同离子丰度比例的±20％。

8.根据权利要求1所述的同时测定食品中残留的多种有机磷的GC/MS内标检测方法，其特征是：所述的气相色谱-质谱仪的定量测定过程为：选择各目标化合物特征离子中丰度高、噪声低的离子为定量离子，测定时，吸取添加有内标及回收率指示物的试剂空白溶液及样品溶液，分别注入气相色谱-质谱仪中，定性确证有机磷农药品种后，对定量离子进行峰积分，再配制对应的标准溶液，绘制内标法标准曲线，将样品测得比值与标准曲线比较定量；或者以内标法配制与待测目标化合物浓度接近的单点标准，将样品测得比值与单点标准比较定量。