CN108020627B - 一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法 - Google Patents

一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108020627B
CN108020627B CN201711442910.5A CN201711442910A CN108020627B CN 108020627 B CN108020627 B CN 108020627B CN 201711442910 A CN201711442910 A CN 201711442910A CN 108020627 B CN108020627 B CN 108020627B
Authority
CN
China
Prior art keywords
sample
tobacco
standard
methanol
tandem mass
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201711442910.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108020627A (zh
Inventor
杨飞
唐纲岭
刘珊珊
边照阳
邓惠敏
李中皓
范子彦
王颖
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
National Tobacco Quality Supervision and Inspection Center
Original Assignee
National Tobacco Quality Supervision and Inspection Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by National Tobacco Quality Supervision and Inspection Center filed Critical National Tobacco Quality Supervision and Inspection Center
Priority to CN201711442910.5A priority Critical patent/CN108020627B/zh
Publication of CN108020627A publication Critical patent/CN108020627A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108020627B publication Critical patent/CN108020627B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

一种超高效合相色谱‑串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法，其特征在于：用0.5mol/L的盐酸水溶液对样品进行提取，并用二氯甲烷反萃取，以超高效合相色谱‑串联质谱法测定烟草中2,4‑滴，2,4,5‑涕和麦草畏农药残留量。本发明的方法克服了现有技术样品处理方法的不足，针对烟草样品优化了样品前处理方法和仪器检测条件，与现有技术相比本发明方法具有如下优良效果：本发明方法样品前处理过程简单快速，无需衍生化，绿色环保，并具有操作准确、灵敏度高及重复性好的优点。

Description

一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸 类农药残留量的方法
技术领域
本发明属于烟草及烟草制品中农药残留的理化检验技术领域，主要涉及烟草及烟草制品中2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏等三种氯苯氧羧酸类农药残留量的测定方法。
背景技术
苯氧羧酸类除草剂对作物的安全性受环境条件、作物生育期的影响较大，应用不当可能会产生较重的药害。在使用过程中，发现对人、畜有一定的内分泌扰乱作用，随着该类除草剂使用量及使用范围的日益增大，其在作物中的残留及对人类健康和环境造成的危害也越来越为人们所关注。我国和其他各国都制定了严格的残留限量,如日本规定 2, 4,5-涕不得检出, 国际食品法典委员会，日本等制定的2, 4-滴在大多农产品中的限量为0.05 mg/kg。关于对于土壤、水、大米、水稻和纺织品中苯氧羧酸类残留测定的报道较多，而且苯氧羧酸类除草剂多残留分析的报道多采用气相色谱或气质联用测定。由于此类化合物极性较大、稳定性差、不易气化，需用重氮甲烷或三氟化硼丁醇衍生后才能用气相色谱或气质联用法进行测定【分析化学，2006，34(12),1733-1736; 色谱，2008，26(1),116-118; 分析科学学报，2010，26(1),47-50】。衍生化试剂重氮甲烷和三氟化硼丁醇毒性较强，且整个操作步骤较繁琐、分析成本较高、单个样品的检测周期较长。
由于LC-MS/MS法的选择性极大提高，具有很好的抗基质干扰能力，且具备较为丰富的定性和定量信息，灵敏度较高，使得样品前处理过程大大简化。由于基质中某些干扰组分的存在会使待测组分离子生成的速度同标准样品相比有显著不同，使得信号响应值产生较大变异，从而影响检出限、定量限、准确度和精密度等。在样品分析中通常采用优化色谱‒质谱分析条件、空白基质匹配标准校正法及内标法对可能的基质效应进行消除或补偿。本发明采用同位素内标法进行定量，一方面可以减少前处理所引入的误差，另一方面也能够补偿基质效应对定量分析结果的影响。
超高效合相色谱以超临界流体为流动相，既可以分析气相色谱难以气化的高沸点、低挥发性样品，又具有比高效液相色谱更高的选择性和更快的分析速度。由于其所使用的色谱柱的填料粒径小于常规的超临界色谱柱填料粒径，其分离效率和分离度优于常规超临界色谱，同时流动相以无毒的CO2为主，节约了有机溶剂。超高效合相色谱与串联质谱联用大大提高了分析的灵敏度和分离效率。尚未见到报道用超高效合相色谱-串联质谱法（UPC2-MS/MS）测定烟草中的苯氧乙酸类除草剂。
发明内容：
本发明的目的旨在克服现有技术缺陷，提供一种快速、高效、绿色、无需衍生化等繁琐过程，直接以超高效合相色谱-串联质谱测定烟草及烟草制品中2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏等三种苯氧羧酸类农药残留量的测定方法，该方法能快速、准确检测烟草及烟草制品中三种苯氧羧酸类农药残留量，方法简便、快速、净化效果较好, 各项技术指标均符合残留检测的要求，测定结果准确、测定干扰少、有机溶剂消耗少。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的测定方法，用盐酸水溶液对样品进行浸提，并用CH2Cl2进行反萃取，以合相色谱-串联质谱直接测定烟草及烟草制品中2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏农药残留量。具体步骤如下：
a、样品的提取：称取1.0 g样品，置于50 mL具塞离心管中，加入10 mL 0.5 moL/L的盐酸水溶液和10 mL的CH2Cl2，并加入100 μL混合内标工作液，涡旋振荡15 min。移取1 mL下层有机相，氮吹近干用甲醇复溶，进UPC2-MS/MS检测；
b、混合内标工作溶液：分别称取三种苯氧羧酸类农药的氘代内标标准品各0.01g到10 mL容量瓶中，用甲醇稀释得到浓度为10.0 μg/mL的混合内标工作溶液；
c、标准工作溶液制备：分别称取0.01g三种农药(2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏)标准品，用甲醇稀释并最终配制成具有浓度梯度的各种农药的混合标准工作溶液； 配制方式如下：分别称取0.01 g 2,4-滴、2,4,5-涕和麦草畏三种农药标准品至不同的10 mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，制得1000 μg/mL的标准储备液；分别移取以上三种农药单一标准储备液100 μL于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释定容至刻度，配得混合标准储备液（10.0 μg/mL）；分别移取混合标准储备液25 μL, 50 μL, 100 μL, 250 μL , 500 μL 及1000 μL到6个10 mL容量瓶中并加入100 μL的混合内标工作溶液，用甲醇定容；各标准工作溶液的浓度分别为0.025 μg/mL, 0.05 μg/mL, 0.1μg/mL, 0.25 μg/mL, 0.5 μg/mL, 1.0 μg/mL。
d、合相色谱-串联质谱测定：吸取以上配制好的不同浓度的农药标准工作溶液，注入合相色谱-串联质谱仪，合相色谱条件为：色谱柱：ACQUITY UPC2 HSS C18柱(100 mm×3.0 mm, 1.8 μm)；背压：15.2 MPa; 柱温：40 ℃；进样量：2 μL；补偿溶剂：0.1%甲酸甲醇溶液，流速为0.2 mL/min; 流动相分别为超临界CO2（A相）和甲醇（助溶剂）（B相）；流动相流速：2.0 mL/min; 梯度洗脱程序：0.0～0.4 min, 99% A; 0.4～2.0 min, 99%A～96%A;2.0～3.0 min, 96%A～94%A; 3.0～4 min, 94%A～85%A; 4.0～5.5 min, 85%A～99%A；5.5～7.0 min, 99%A。
质谱扫描方式：负离子扫描；离子源：电喷雾电离源(ESI)；离子源温度：150 ℃；脱溶剂气温度：350 ℃；脱溶剂气流量：800 L/h；停留时间：30 ms；毛细管电压：2.4 kV；采集模式: MRM。MRM参数见表1。
Figure DEST_PATH_IMAGE002
e、农药残留量测定结果的计算
以内标法进行农药残留量的定量分析，即以目标物及其对应的同位素内标的定量离子对峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，相关系数大于等于0.995,对提取后的样品进行测定，测得检出分析物和内标的定量离子对农药的色谱峰面积，代入标准曲线，求得样品中的2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏等农药的残留量。
本发明的方法克服了现有技术样品处理方法的不足，针对烟草样品优化了样品前处理方法和仪器检测条件，与现有技术相比具有如下优良效果：
（1）发明方法样品前处理过程简单，大大缩短了每个烟草样品的萃取前处理时间。行业标准《YC/T 181-2004烟草及烟草制品 有机氯除草剂农药残留量的测定 气相色谱法》，该标准方法采用60 mL二氯甲烷萃取，以三甲基亲氧化硫溶液甲酯衍生化，气相色谱-质谱测定，其前处理过程复杂费时，不利于高通量样品快速检测，且衍生化过程不确定性很大，结果重复性较差。
本发明方法将烟末用10mL的盐酸水溶液提取后用少量的CH2Cl2萃取，避免了样品浓缩、净化、衍生等过程造成的待测农药组分损失，又使实验操作更加简单、快捷，减少了大量有机溶剂的使用。
（2）行业标准《YC/T 181-2004烟草及烟草制品 有机氯除草剂农药残留量的测定气相色谱法》使用的衍生化试剂对人体健康有害，从而限制了它们的使用；本发明无需衍生化从而使前处理过程变得比较简单。
（3）本发明采用超高效合相色谱和串联质谱联用，与液相色谱-串联质谱法相比，定量更加准确、同时也提高了灵敏度及重复性。采用CO2为流动相绿色、环保。
①本发明方法的检测限：
将不同浓度的2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏农药标准工作溶液注入UPC2-MS/MS，以3倍信噪比（S/N = 3）计算检测限（LOD），检测限在0.005 μg/g-0.025μg/g之间。
②本发明方法的重复性和加标回收率：
在烟草样品中加入2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏农药的标准溶液，然后进行前处理和UPC2－MS/MS分析，并按照加标量和测定值计算其回收率，结果见表2。由表2可以看出，三种农药的回收率在92.5％－100.4％之间，平均相对标准偏差（RSD）小于5%，说明本发明方法的回收率高，重复性好。
Figure DEST_PATH_IMAGE004
附图说明
图1为本发明的测定方法流程图（该图作为摘要附图）。
具体实施方式
本发明以下结合实例做进一步描述，但并不是限制本发明。
实例1：
1．仪器与试剂：
农药：2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏，及其对应的氘代内标均为标准品(纯度大于98%)；甲醇、二氯甲烷均为农残级，盐酸为分析纯。
Waters 合相色谱-串联四极杆质谱仪；涡旋振荡仪(美国Labnet公司)； AE 163电子天平（感量：0.0001g）（瑞士Mettler公司）。
2．样品处理：
称取1.0 g样品，置于50 mL具塞离心管中，加入10 mL 0.5moL/L的盐酸水溶液和10 mL的CH2Cl2，并加入100 μL混合内标工作液，涡旋振荡15min。移取1 mL下层有机相，氮吹近干用甲醇复溶，进UPC2-MS/MS检测；
3.准备标准工作溶液：分别称取0.01 g 2,4-滴、2,4,5-涕和麦草畏三种农药标准品至不同的10 mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，制得1000 μg/mL的标准储备液；分别移取以上三种农药单一标准储备液100 μL于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释定容至刻度，配得混合标准储备液（10.0 μg/mL）；分别移取混合标准储备液25 μL, 50μL, 100μL, 250 μL , 500 μL 及1000 μL到6个10 mL容量瓶中并加入100 μL的混合内标工作溶液，用甲醇定容；各标准工作溶液的浓度分别为0.025 μg/mL, 0.05 μg/mL, 0.1μg/mL, 0.25 μg/mL, 0.5 μg/mL,1.0 μg/mL；
4.测定方法: 以内标法进行农药残留量的定量分析，即以目标物及其对应的同位素内标的定量离子对峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，相关系数大于等于0.995,对提取后的样品进行测定，测得检出分析物和内标的定量离子对农药的色谱峰面积，代入标准曲线，求得样品中的2,4-滴，2,4,5-涕含量量分别为0.42 mg/kg和0.08 mg/kg。
采用的合相色谱条件为：色谱柱：ACQUITY UPC2 HSS C18柱(100 mm×3.0 mm,1.8μm)；背压：15.2 MPa; 柱温：40 ℃；进样量：2μL；补偿溶剂：0.1%甲酸甲醇溶液，流速为0.2 mL/min; 流动相分别为超临界CO2（A相）和甲醇（助溶剂）（B相）；流动相流速：2.0 mL/min; 梯度洗脱程序：0.0～0.5 min, 99% A; 0.5～2.5 min, 99%A～96%A; 2.5～3.2min, 96%A～95%A; 3.2～4 min, 95%A～80%A; 4.0～5 min, 80%A～99%A；5.0～7.0 min,99%A。质谱扫描方式：负离子扫描；离子源：电喷雾电离源(ESI)；离子源温度：150 ℃；脱溶剂气温度：350 ℃；脱溶剂气流量：800 L/h；停留时间：30 ms；毛细管电压：2.4 kV；采集模式: MRM。
为判断方法的准确性，在此样品中加入0.5 mg/kg的2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏标准溶液，进行同上的样品前处理，以UPC2‒MS/MS测得2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏选择离子峰面积，代入标准曲线，求得此时样品中2,4-滴和2,4,5-涕含量分别为0.90 mg/kg和0.55mg/kg即2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏的加标回收率为97.8％，94.8%，说明此方法是准确的。
实例2： 按照实例1所述方法，选择另一烟叶样品，样品中麦草畏检出量为0.12mg/kg。

Claims (2)

1.一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法，其特征在于：用盐酸水溶液对样品进行浸提，并用CH2Cl2进行反萃取，以合相色谱-串联质谱直接测定烟草中2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏残留量，具体步骤如下：
a、样品的提取：称取1.0 g样品，置于50 mL具塞离心管中，加入10 mL 0.5 mol/L的盐酸水溶液和10 mL的CH2Cl2，并加入100 μL混合内标工作液，涡旋振荡15 min，移取1 mL下层有机相，氮吹近干用1 mL甲醇复溶，进UPC2-MS/MS检测；
b、混合内标工作溶液：分别称取0.01g三种苯氧羧酸类农药的氘代内标标准品到10 mL容量瓶中，用甲醇稀释得到浓度为10.0 μg/mL的混合内标工作溶液；
c、标准工作溶液制备：分别称取0.01g2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏三种标准品，用甲醇稀释并最终配制成具有浓度梯度的含三种农药的混合标准工作溶液；
d、合相色谱-串联质谱测定：吸取以上配制好的不同浓度的农药标准工作溶液，注入合相色谱-串联质谱仪；
合相色谱条件为：色谱柱：ACQUITY UPC2 HSS C18柱，规格100 mm×3.0 mm, 1.8 μm；背压：15.2 MPa; 柱温：40 ℃；进样量：2 μL；补偿溶剂：0.1%甲酸甲醇溶液，流速为0.2 mL/min；流动相分别为A相：超临界CO2，B相：甲醇；流动相流速：2.0 mL/min；梯度洗脱程序如下：0.0～0.5 min， 99% A；0.5～2.5 min，99%A～96%A；2.5～3.2 min，96%A～95%A；3.2～4min，95%A～80%A；4.0～5 min，80%A～99%；5.0～7.0 min，99%A；质谱扫描方式：负离子扫描；离子源：电喷雾电离源(ESI)；离子源温度：150 ℃；脱溶剂气温度：350 ℃；脱溶剂气流量：800 L/h；停留时间：30 ms；毛细管电压：2.4 kV；采集模式：MRM；
e、农药残留量测定结果的计算
以内标法进行农药残留量的定量分析，即以目标物及其对应的同位素内标的定量离子对峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，相关系数大于等于0.995，对提取后的样品进行测定，测得检出分析物和内标的定量离子对农药的色谱峰面积，代入标准曲线，求得样品中的2,4-滴，2,4,5-涕和麦草畏农药的残留量。
2.根据权利要求1所述的超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法，其特征在于：标准工作溶液制备的具体配制过程如下：分别称取0.01 g2,4-滴、2,4,5-涕和麦草畏三种农药标准品至不同的10 mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，制得1000 μg/mL的标准储备液；分别移取以上三种农药单一标准储备液100μL于同一个10 mL容量瓶中，用甲醇稀释定容至刻度，配得浓度为10.0 μg/mL的混合标准储备液；分别移取混合标准储备液25 μL, 50μL, 100μL, 250 μL , 500 μL 及1000 μL到6个10 mL容量瓶中并加入100 μL的混合内标工作溶液，用甲醇定容；各标准工作溶液的浓度分别为0.025 μg/mL, 0.05 μg/mL, 0.1μg/mL, 0.25 μg/mL, 0.5 μg/mL, 1.0 μg/mL。
CN201711442910.5A 2017-12-27 2017-12-27 一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法 Active CN108020627B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711442910.5A CN108020627B (zh) 2017-12-27 2017-12-27 一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711442910.5A CN108020627B (zh) 2017-12-27 2017-12-27 一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108020627A CN108020627A (zh) 2018-05-11
CN108020627B true CN108020627B (zh) 2020-01-17

Family

ID=62071758

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711442910.5A Active CN108020627B (zh) 2017-12-27 2017-12-27 一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108020627B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108426972B (zh) * 2018-06-15 2020-01-17 国家烟草质量监督检验中心 一种超高效合相色谱-串联质谱技术拆分、测定手性农药苯霜灵对映体的方法
CN110646535B (zh) * 2019-09-26 2022-12-27 上海烟草集团有限责任公司 一种烟草中多农残非靶向筛查及定量的检测方法
CN112881569A (zh) * 2021-01-19 2021-06-01 陕西中烟工业有限责任公司 烟草及烟草制品中挥发性、半挥发性有机酸的测定方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108020627A (zh) 2018-05-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106053703B (zh) 一种同时检测食品中多种植物生长调节剂的方法
CN103983725B (zh) 一种香精香料中香豆素和黄樟素的快速测定方法
CN108020627B (zh) 一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法
CN103869028B (zh) 一种测定茶叶中草甘膦和草胺膦农药的前处理方法
CN106053638A (zh) 一种动物源食品中氨基糖苷类抗生素残留量的检测方法
CN104730186A (zh) 茶叶中草甘膦和草铵膦农药残留量的柱前衍生-uplc-esi+-ms/ms检测方法
CN106855545A (zh) 同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法
CN102854271A (zh) 烟草及烟草制品中三种苯氧羧酸类农药残留量的测定方法
CN106053620A (zh) 基于hs‑gc/ms技术分析烟用水基胶中挥发性有机化合物含量的方法
CN104614466A (zh) 电子烟烟液中防腐剂的测定方法
CN108445133A (zh) 一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法
Ma et al. Determination of trace amounts of chlorobenzenes in water using membrane-supported headspace single-drop microextraction and gas chromatography–mass spectrometry
CN109212109B (zh) 一种烟草及烟草制品中异菌脲的高效液相色谱-质谱的测定方法
CN107688062A (zh) 一种测定电子烟烟液中痕量烟碱的方法
CN108760920B (zh) 一种基于hplc-msms法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法
CN108181394A (zh) 一种提取-净化同步法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法
CN115728408B (zh) 一种同时测定黄花蒿中七种青蒿素类相关化合物的方法
CN111366659A (zh) 粉末状含氟聚合物产品中痕量pfoa的检测方法
CN101718764A (zh) 气相色谱-质谱测定化妆品中多氯联苯残留的检测方法
CN110082450A (zh) 一种减肥类中成药及保健食品中胡椒碱的检测方法
CN115541789A (zh) 烟草及烟草制品中烟碱盐含量的测定方法
CN114354323B (zh) 基于亲水和疏水低共熔溶剂的分散液液微萃取结合数字图像比色法测定粮食中对硫磷的方法
CN111458434B (zh) 一种衍生化方式测试肼及烷基胺化合物的方法
CN108132309A (zh) 一种测定铁皮石斛中噻菌铜残留量的分析方法
CN111044640B (zh) 一种利用GC法测定饲料添加剂中γ-氨基丁酸含量的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant