CN108445133A - 一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法 - Google Patents
一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108445133A CN108445133A CN201810281233.1A CN201810281233A CN108445133A CN 108445133 A CN108445133 A CN 108445133A CN 201810281233 A CN201810281233 A CN 201810281233A CN 108445133 A CN108445133 A CN 108445133A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- ammonium
- glufosinate
- solution
- glyphosate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明公开了一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法，主要由提取、净化、衍生和定量定性分析四个步骤组成；选用氢氧化钠作为提取溶液；HCl调节酸度，经PSA净化，氯甲酸（9‑芴甲基）酯(FMOC‑Cl)衍生化，选择5 mmol/L甲酸铵/甲醇+5 mmo/L甲酸铵水溶液（V:V）梯度洗脱，正离子多反应监测（MRM）测定，外标法定量。本发明能同时测定茶叶中草铵膦和草甘膦药物除草剂残留量，简化样品净化步骤、节省前处理时间和耗材成本，适用于大批量的样品分析，高效、准确、重复性好、灵敏度高。
Description
技术领域
本发明属于检测技术领域，具体来说涉及一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法。
草甘膦（Glyphosate，GLY）是世界上应用最广、生产量最大的除草剂，其作为无选择类除草剂，以其高效、低毒、廉价等特性被广泛运用于全球各个农业和非农业领域。草铵膦(Glufosinate ammonium，GLUF)可以有效去除绝大部分耐草甘膦杂草，且具有环保易降解等特点而受到各界青睐。在我国被广泛用于农田、茶园、果园等农业生产中杂草防治。草甘膦、草铵膦具有内吸性，可被植物茎叶吸收向下输导，能杀死多年生杂草的地下根茎，其主要影响植物的莽草酸途径，近年来由草甘膦引起的水体污染、植被破坏、牲畜中毒等案件持续增加。随着其在茶叶上的运用日益加剧，其残留问题也越来越受关注，为此，世界各国均对茶叶中草甘膦和草铵膦的最大残留限量（MRL）制定了严格的规定。欧盟规定茶叶中草甘膦和草铵膦的最大残留限量分别为2.0mg/kg和0.1mg/kg，日本肯定列表制度对茶叶中草甘膦和草铵膦的最大残留限量为1.0mg/kg和0.3mg/kg，我国食品安全国家标准GB2763-2016规定茶叶中草甘膦和草铵膦的最大残留限量分别为1.0mg/kg和0.5mg/kg。
草甘膦和草铵膦的结构类似，具有强极性、难溶于各种有机溶剂的特点，这也就决定了对其残留量进行准确定量分析难度较大，目前主要的检测方法有气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（LC）、离子色谱法、毛细管电泳法、气质联用法（GC-MS）、高效液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS）等，但大部分方法存在灵敏度低、操作程序繁琐、有机试剂污染严重等缺点，也难以直接运用于茶叶农残检测领域。目前国内对草甘膦的检测标准有SN/T 1923 《进出口食品中草甘膦残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》、GB/T 23750《植物性产品中草甘膦残留量的测定 气相色谱-质谱法》、以及NY/T 1096《食品中草甘膦残留量测定》。针对茶叶中的草甘膦检测方法仅有SN/T 1923 《进出口食品中草甘膦残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法》，此法也为GB2763-2016标准中所推荐的唯一茶叶中草甘膦的检测标准，但是该法操作步骤多，繁琐，试剂消耗量大，尤其是采用阳离子交换柱（CAX）洗脱剂洗脱，加压旋蒸干过程易造成草甘膦回收率不稳定,定量限较高，此外，此法pH值不易控制，整个操作耗时长，不适用与大批量样品检测。而草铵膦则目前尚未相关指定检测标准，也未见同时检测草甘膦和草铵膦两个指标的方法或标准。因而亟待建立一种实用且快速检测草甘膦和草铵膦的分析方法。
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种能同时测定茶叶中草铵膦和草甘膦药物除草剂残留量，简化样品净化步骤、节省前处理时间和耗材成本，适用于大批量的样品分析，高效、准确、重复性好、灵敏度高的检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法。
本发明目的及解决其主要技术问题是采用以下技术方案来实现的：
一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法，包括以下步骤：
（1）茶叶按GB/T8303经粉碎过筛,制得待测茶样；
（2）样品的提取
精密称取1±0.01g茶叶样品，置于50 mL离心管中，加入10 mL 0.02 mol/L-0.07 mol/LNaOH溶液，涡旋混匀1 min；室温水浴振荡提取20 min，经10000 r/min离心5 min，上清液用滤纸过滤至10 mL离心管中，得提取液Ⅰ；
（3）样品的净化
取2mL提取液Ⅰ加入0.5 mol/L -2mol/L HCl溶液20μL，涡旋混匀后10000r/min离心5min取上清液得提取液Ⅱ，将取液Ⅱ倒入预先称好0.2gPSA的10mL离心管中，并立即涡旋混匀，10000r/min离心5min取上清液得提取液Ⅲ；
（4）待测液制备
取提取液Ⅲ1mL置于10mL离心管中，加入0.2mL的40g/L-60g/L硼酸钠缓冲溶液，摇匀后再加入0.2mL 10g/L-30g/L的氯甲酸（9-芴甲基）酯衍生试剂，涡旋混匀振摇后37℃静置过夜10h-16h，衍生后的样品经10000r/min离心5min后，过水系0.22μm滤膜，得待测液；
(5)配制基质匹配标准衍生混标溶液
将空白样品经步骤（1）至步骤（3）处理，用该空白样品提取液在质量浓度为0.005μg/mL-0.50μg/mL范围内，配制至少五个浓度的草铵膦和草甘膦系列基质匹配标准混标溶液，采用与步骤（4）相同的方法对各浓度混标溶液进行衍生，制得系列基质匹配标准衍生混标溶液；
（6）液相色谱-串联质谱法测定
a)仪器参数
①色谱参数： 采用2.1mm×100 mm、1.8 μm的超高效液相 HSS T3色谱柱；柱温40 ℃；样品温度20℃；进样量1 μL；梯度洗脱程序为：流速保持0.4 mL/min不变,在0-0.5min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例从10%变为20%， 流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例从90%变为80%；在0.5-2.5min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例从20%变为95%， 流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例从80%变为5%；在2.5-4.0min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例为95%，流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例为5%，且二者均保持不变；在4.0-4.1min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例从95%变为10%，流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例从5%变为90%；在4.1-5.0min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例为10%，流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例为90%,且二者均保持不变；
②质谱参数：采用电喷雾离子源；正离子扫描，多反应监测，脱溶剂氮气温度500 ℃、流速1000 L/Hr，离子源温度150 ℃，锥孔气流量50 L/Hr，毛细管电压3.0kV，碰撞气为氩气；草铵膦衍生物的母离子为404，子离子分别为136、179和208，锥孔电压V为25，碰撞能量eV为25、10和10，其中m/z 404>136为定量离子对；草甘膦衍生物的母离子为392，子离子为88、179和214，锥孔电压V为25，碰撞能量eV为20、10和10，其中m/z 392>88为定量离子对；
b)定性分析
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的衍生后待测液中目标化合物色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定性离子必须出现至少应包括一个母离子和两个子离子，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其相对偏差不超过30%，则可判断该样品中存在该目标化合物，若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种目标化合物；
c）定量分析
采用步骤（5）中的系列基质匹配标准衍生混标溶液进行三重四级杆超高效液相色谱串联质谱仪测定，以溶液质量浓度为横坐标，其峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；在相同检测条件下，将步骤（4）的待测液经三重四级杆超高效液相色谱串联质谱仪扫描检测，测得待测液中草铵膦、草甘膦衍生物的峰面积，代入标准曲线，得到待测液中草铵膦和草甘膦残的质量体积浓度（μg/mL），然后采用下述算式计算茶叶中草甘膦、草铵膦的的残留量：
式中：
X —— 样品中待测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
C ——进样溶液中待测组分的色谱峰由标准曲线所获得的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
V—— 用于衍生化反应的提取溶液体积，单位为毫升（mL）。
f ——样液稀释因子，为10；
1000 ——换算系数；
m ——试样的称样量，单位为克（g）。
上述的检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法，其中：步骤（6）c）计算结果时，计结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字，当结果大于1 mg/kg时保留三位有效数字。
上述的检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法，其中：还包括加标回收和空白试验步骤，加标回收为采用不含目标化合物的空白样品进行加标，添加浓度为0.08 、0.1、1 、2和4mg/kg 五个水平，对加标后的样品按照步骤（1）-步骤（6）进行处理；空白试验则是取不含目标化合物的样品按照（1）-步骤（6）进行处理。
本发明同现有技术相比，具有明显的优点和有益效果，由以上技术方案可知，本发明以氢氧化钠溶液提取，PSA净化，硼酸钠作缓冲盐的条件下，经氯甲酸（9-芴甲基）酯衍生，得到较为纯净草铵膦和草甘膦与衍生产物，采用液质串联仪检测，灵敏度高、线性好、检出限低（0.5mg/kg）、定量结果准确、稳定、重复性好、实验操作简单、步骤少、耗时短、分析速度快、检测效率高、节省了实验室的成本，提高了工作效率，样品前处理简单快速、并可同时测定茶叶中草铵膦和草甘膦药物除草剂残留量，适用于大批量的样品分析。
具体实施方式
本发明的主要使用场所是具备所需仪器设备及实验环境条件的实验室。所用试剂均为商购。本发明所使用的试剂均可以从市场上购得。除另有说明外,本发明所述的试剂均是分析纯的试剂。
实施例中使用的仪器与试剂如下：
仪器：UPLC H-Class/TQ-S Micro 超高效液相色谱/三重四级杆质谱联用仪（美国Waters公司）；氮气发生器（英国Peak公司）；H2050R高速冷冻离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；SCQ-151104E超声波清洗器（上海声彦超声波仪器有限公司）；SHA-C水浴恒温振荡箱（江苏科析仪器有限公司）；DH500BⅡ电热恒温培养箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；VORTEX2涡旋振荡仪（IKA）。
试剂：氯甲酸（9-芴甲基）酯（FMOC-Cl，纯度≥99%，北京百灵威科技有限公司）；甲醇、乙腈（色谱纯，美国TEDIA公司）；甲酸铵（质谱纯，Fisher Scientific公司）；N-丙基乙二胺（Primary secondary amine，PSA，粒度40μm，Supelco Analytical）；氢氧化钠（分析纯,成都金山化学试剂有限公司）；盐酸（36%-38%，优级纯，西陇科学股份有限公司）；硼酸钠（Na2B4O7•10H2O，纯度≥99.5%，天津市永大化学试剂有限公司）；水（超纯水，威立雅水处理技术（上海）有限公司）。
标准物质：草甘膦（C5H18N3O4P，CAS号：77182-82-2，纯度≥99.3%，TMstandard）、草铵膦（C5H18N3O4P，CAS号：1071-83-6，纯度≥99.3%，TMstandard）；
实施例中标准溶液配制如下：
草铵膦标准储备溶液（1.0 mg/mL）：精确称取草铵膦标准品（C5H18N3O4P，CAS号：77182-82-2），纯度≥98.0%）10.0 mg于10 mL容量瓶中,用水溶解后定容10mL。草甘膦标准储备溶液（1.0 mg/mL）：分别吸取0.1mL草甘膦（C3H8NO5P，CAS号：1071-83-6，纯度≥99.0%）于10 mL容量瓶中，用水定容至10mL。
混标：移取草铵膦、草甘膦标准储备溶液（1.0 mg/mL）各0.1mL于10 mL容量瓶中,用水溶解后定容10mL，得草铵膦、草甘膦混合标准中间工作溶液（10.0 μg/mL）；吸取1.0mL草铵膦、草甘膦混合标准中间工作溶液于10 mL容量瓶中，用水定容至10mL，得草铵膦、草甘膦混合标准工作溶液（1.0μg/mL）。
实施例1：
一种茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的检测，包括以下步骤：
（1）样品制备
茶叶按GB/T8303经粉碎机中粉碎，样品全部过425μm的标准网筛，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记，于-18℃保存；发酵茶应先低温去除水分，使样品易于磨碎。
（2）样品的提取
准确称取茶叶样（精确到0.01g），置于50 mL离心管中，加入10 mL 0.05mol/LNaOH溶液，涡旋混匀1min；室温水浴振荡提取20min，经10000 r/min离心5 min，上清液用滤纸过滤至10mL离心管中得提取液Ⅰ；
（3）样品的净化
取提取液Ⅰ2mL加入1mol/L HCl溶液20μL，涡旋混匀后10000r/min离心5min得提取液Ⅱ，将取液Ⅱ倒入预先称好0.2gPSA的10mL离心管中，并立即涡旋混匀，10000r/min离心5min得提取液Ⅲ；
（4）待测液制备
取提取液Ⅲ1mL置于10mL离心管中，加入0.2mL的50g/L硼酸钠缓冲溶液，摇匀后再加入0.2mL 20g/L的氯甲酸（9-芴甲基）酯衍生试剂，涡旋混匀振摇后37℃静置过夜12h，衍生后的样品经10000r/min离心5min后，过水系0.22μm滤膜，得待测液
（5）配制基质匹配标准衍生混标溶液
采用不含目标化合物的茶叶样品作为空白样品，将空白样品经步骤（1）至步骤（3）处理制得空白基质溶液，将草铵膦、草甘膦混合标准工作溶液（1.0μg/mL）用空白基质溶液稀释成质量浓度为0.005 μg/mL、0.01 0μg/mL、0.050 μg/mL、0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.30 μg/mL、0.40 μg/mL、0.50 μg/mL系列基质匹配标准溶液。依次取系列基质匹配标准溶液1mL，采用与步骤（4）相同的方法对各浓度混标溶液进行衍生，制得系列基质匹配标准衍生混标溶液；
（6）液相色谱-串联质谱法测定
a)仪器参数
①色谱参数： 采用2.1mm×100 mm、1.8 μm的超高效液相 HSS T3色谱柱；柱温40 ℃；样品温度20℃；进样量1 μL；梯度洗脱程序为：流速保持0.4 mL/min不变,在0-0.5min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例从10%变为20%，流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例从90%变为80%；在0.5-2.5min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例从20%变为95%， 流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例从80%变为5%；在2.5-4.0min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例为95%，流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例为5%，且二者均保持不变；在4.0-4.1min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例从95%变为10%，流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例从5%变为90%；在4.1-5.0min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例为10%，流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例为90%,且二者均保持不变；
②质谱参数：采用电喷雾离子源；正离子扫描，多反应监测，脱溶剂氮气温度500 ℃、流速1000 L/Hr，离子源温度150 ℃，锥孔气流量50 L/Hr，毛细管电压3.0kV，碰撞气为氩气；草铵膦衍生物的母离子为404，子离子分别为136、179和208，锥孔电压V为25，碰撞能量eV为25、10和10，其中m/z 404>136为定量离子对；草甘膦衍生物的母离子为392，子离子为88、179和214，锥孔电压V为25，碰撞能量eV为20、10和10，其中m/z 392>88为定量离子对；
b)定性分析
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的衍生后待测液中目标化合物色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定性离子必须出现至少应包括一个母离子和两个子离子，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其相对偏差不超过30%，则可判断该样品中存在该目标化合物，若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种目标化合物；
c）定量分析
采用步骤（5）中的系列基质匹配标准衍生混标溶液进行三重四级杆超高效液相色谱串联质谱仪测定，以溶液质量浓度为横坐标，其峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；在相同检测条件下，将步骤（4）的待测液经三重四级杆超高效液相色谱串联质谱仪扫描检测，测得待测液中草铵膦、草甘膦衍生物的峰面积，代入标准曲线，得到待测液中草铵膦和草甘膦残的质量体积浓度（μg/mL），然后采用下述算式计算茶叶中草甘膦、草铵膦的的残留量：
式中：
X —— 样品中待测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
C ——进样溶液中待测组分的色谱峰由标准曲线所获得的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
V—— 用于衍生化反应的提取溶液体积，单位为毫升（mL）。
f ——样液稀释因子，为10；
1000 ——换算系数；
m ——试样的称样量，单位为克（g）。
（6）b) 在相同实验条件下进行样品测定时，待测液中目标化合物色谱峰的保留时间与标准样品相一致,草甘膦衍生物保留时间为2.86min,草铵膦衍生物保留时间为2.99min；并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定性离子均包括一个母离子和两个子离子，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其相对偏差不超过30%，可初步判断该样品中存在该目标化合物；
（6）c)中实测草甘嶙质量体积浓度c为0.0653μg/mL ,草按嶙的质量体积浓度c为0.0454μg/mL；计算得到茶叶中草甘嶙残留量X为0.653mg/kg,草按嶙残留量X为0.454mg/kg。
实施例2：
一种茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的检测，包括以下步骤：
本实施例中步骤（1）、（5）-（6）与实施例1相同。检测部分操作如下：
（1）样品制备
茶叶按GB/T8303经粉碎机中粉碎，样品全部过425μm的标准网筛，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记，于-18℃保存；发酵茶应先低温去除水分，使样品易于磨碎。
（2）样品的提取
精密称取1±0.01g茶叶样品，置于50 mL离心管中，加入10 mL 0.02 mol/L NaOH溶液，涡旋混匀1 min；室温水浴振荡提取20 min，经10000 r/min离心5 min，上清液用滤纸过滤至10 mL离心管中，得提取液Ⅰ；
（3）样品的净化
取2mL提取液Ⅰ加入0.5 mol/L HCl溶液20μL，涡旋混匀后10000r/min离心5min取上清液得提取液Ⅱ，将取液Ⅱ倒入预先称好0.2gPSA的10mL离心管中，并立即涡旋混匀，10000r/min离心5min取上清液得提取液Ⅲ；
（4）待测液制备
取提取液Ⅲ1mL置于10mL离心管中，加入0.2mL的40g/L硼酸钠缓冲溶液，摇匀后再加入0.2mL 10g/L的氯甲酸（9-芴甲基）酯衍生试剂，涡旋混匀振摇后37℃静置过夜10h，衍生后的样品经10000r/min离心5min后，过水系0.22μm滤膜，得待测液
（5）配制基质匹配标准衍生混标溶液
采用不含目标化合物的茶叶样品作为空白样品，将空白样品经步骤（1）至步骤（3）处理制得空白基质溶液，将草铵膦、草甘膦混合标准工作溶液（1.0μg/mL）用空白基质溶液稀释成质量浓度为0.005 μg/mL、0.01 0μg/mL、0.050 μg/mL、0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.30 μg/mL、0.40 μg/mL、0.50 μg/mL系列基质匹配标准溶液。依次取系列基质匹配标准溶液1mL，采用与步骤（4）相同的方法对各浓度混标溶液进行衍生，制得系列基质匹配标准衍生混标溶液；
将步骤（4）所得的待测液和步骤（5）所得的系列基质匹配混标标准衍生溶液按照实施例1中步骤（6）的仪器参数进行扫描，并按照（6）b）和c)进行定性定量分析，草甘嶙质量体积浓度c为0.0821μg/mL ,草按嶙的质量体积浓度c为0.0882μg/mL；并计算得到茶叶中草甘嶙残留量X为0.821mg/kg,草按嶙残留量X为0.882mg/kg。此数据茶叶检测样品中草甘膦和草铵膦农药残留量与混标添加量（0.90mg/kg）吻合。
实施例3：
一种茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的检测，包括以下步骤：
本实施例中步骤（1）、（5）-（6）与实施例1相同。检测部分操作如下：
（1）样品制备
茶叶按GB/T8303经粉碎机中粉碎，样品全部过425μm的标准网筛，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记，于-18℃保存；发酵茶应先低温去除水分，使样品易于磨碎
（2）样品的提取
精密称取1±0.01g茶叶样品，置于50 mL离心管中，加入10 mL 0.07 mol/L NaOH溶液，涡旋混匀1 min；室温水浴振荡提取20 min，经10000 r/min离心5 min，上清液用滤纸过滤至10 mL离心管中，得提取液Ⅰ；
（3）样品的净化
取2mL提取液Ⅰ加入2 mol/L HCl溶液20μL，涡旋混匀后10000r/min离心5min取上清液得提取液Ⅱ，将取液Ⅱ倒入预先称好0.2gPSA的10mL离心管中，并立即涡旋混匀，10000r/min离心5min取上清液得提取液Ⅲ；
（4）待测液制备
取提取液Ⅲ1mL置于10mL离心管中，加入0.2mL的60g/L硼酸钠缓冲溶液，摇匀后再加入0.2mL 30g/L的氯甲酸（9-芴甲基）酯衍生试剂，涡旋混匀振摇后37℃静置过夜16h，衍生后的样品经10000r/min离心5min后，过水系0.22μm滤膜，得待测液；
(5)配制基质匹配标准衍生混标溶液
采用不含目标化合物的茶叶样品作为空白样品，将空白样品经步骤（1）至步骤（3）处理制得空白基质溶液，将草铵膦、草甘膦混合标准工作溶液（1.0μg/mL）用空白基质溶液稀释成质量浓度为0.005 μg/mL、0.01 0μg/mL、0.050 μg/mL、0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.30 μg/mL、0.40 μg/mL、0.50 μg/mL系列基质匹配标准溶液。依次取系列基质匹配标准溶液1mL，采用与步骤（4）相同的方法对各浓度混标溶液进行衍生，制得系列基质匹配标准衍生混标溶液；
将步骤（4）所得的待测液和步骤（5）所得的系列基质匹配混标标准衍生溶液按照实施例1中步骤（6）的仪器参数进行扫描，并按照（6）b）和c)进行定性定量分析，草甘嶙质量体积浓度c为0.0952μg/mL ,草按嶙的质量体积浓度c为0.0962μg/mL；并计算得到茶叶中草甘嶙残留量X为0.952mg/kg,草按嶙残留量X为0961mg/kg。此数据茶叶检测样品中草甘膦和草铵膦农药残留量与混标添加量（1.0mg/kg）吻合。
试验例1 回收率试验
草铵膦标准储备溶液（1.0 mg/mL）：精确称取草铵膦标准品（C5H18N3O4P，CAS号：77182-82-2），纯度≥98.0%）10.0 mg于10 mL容量瓶中,用水溶解后定容10mL。草甘膦标准储备溶液（1.0 mg/mL）：分别吸取0.1mL草甘膦（C3H8NO5P，CAS号：1071-83-6，纯度≥99.0%）于10 mL容量瓶中，用水定容至10mL。
混标：移取草铵膦、草甘膦标准储备溶液（1.0 mg/mL）各0.1mL于10 mL容量瓶中,用水溶解后定容10mL，得草铵膦、草甘膦混合标准中间工作溶液（10.0 μg/mL）；吸取1.0mL草铵膦、草甘膦混合标准中间工作溶液于10 mL容量瓶中，用水定容至10mL，得草铵膦、草甘膦混合标准工作溶液（1.0μg/mL）。
基质匹配标准衍生混标溶液：采用不含目标化合物的茶叶样品作为空白样品，将空白样品经实施例1中步骤（1）至步骤（3）处理制得空白基质溶液，将草铵膦、草甘膦混合标准工作溶液（1.0μg/mL）用空白基质溶液稀释成质量浓度为0.005 μg/mL、0.01 0μg/mL、0.050 μg/mL、0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.30 μg/mL、0.40 μg/mL、0.50 μg/mL系列基质匹配标准溶液。依次取系列基质匹配标准溶液1mL，采用与实施例1中步骤（4）相同的方法对各浓度混标溶液进行衍生，制得系列基质匹配标准衍生混标溶液；
加标样品：以不含目标化合物的茶叶为空白基质样品 (1±0.01 g)，分别置于50mL聚丙烯离心管中，添加5个不同浓度的草甘膦和草铵膦混标溶液，制成草甘膦和草铵膦含量为0.08 、0.1、1 、2和4mg/kg的基体空白加标样品，按照实施例1进行操作，每个浓度水平进行6次重复实验。
参照实施例1（6）中的检测方法，对加标样品和基质匹配标准衍生混标溶液进行检测并进行定性分析，以系列基质匹配标准衍生混标溶液质量浓度为横坐标，其峰面积为纵坐标，得基质匹配标准曲线，对样品待测液进行基质匹配标准曲线-外标法定量，计算回收率和相对标准偏差，结果见表1。
实验结果表明，本发明提供的测定茶叶中草甘膦的回收率在75.6%~95.5%之间，相对标准偏差(RSD) 为3.24%~8.38%（n=6）；草铵膦的回收率在76.0%~96.6%，RSD 为3.05%~7.85%（n=6）。本发明以信噪比S/N=3确定2种药物的检出限，以信噪比S/N≥10确定其定量限。选择符合一定的准确度和精密度要求的最低浓度，采用加标回收进行验证。试验结果见表3。2种药物的检出限为0.05mg/kg；定量限为0.08mg/kg。
试验例2：草甘膦、草铵膦残留量检测的基质效应试验
基质效应（Matrix effect，ME）指样品中的其他成分对待测物测定值的影响，即基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰。根据基质对检测信号响应值的不同影响，基质效应可分为基质增强效应和减弱效应。由于草甘膦和草铵膦的极性很大，试验采取碱溶液进行提取，提取过程中被提取出来的有机或无极分子（如无机盐、酚类、色素和脂类），还有前处理过程中引入的缓冲盐、衍生剂和溶解液等。采用提取后添加法，通过比较以水为溶剂和以空白提取液为溶剂分别配制0.005、0.010、0.050、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50μg/mL的配制系列标准溶液，按照样品提取方式处理，以标准溶液质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。比较基质标曲与空白溶剂标曲的斜率，从而评估二者的基质效应。由表4可知，2种药物的浓度在0.005~0. 50μg/mL 范围内时，各标准曲线相关系数(R2)均大于0.995。
基质效应ME＝(空白基质标曲的斜率-溶剂标曲的斜率)/溶剂标曲的斜率*100％。如 果绝ME值<0意味着基质的存在抑制了目标化合物的响应值；ME＝0,表明基质的存在对该 目标化合物的响应无影响；ME>0,说明基质的存在增强了目标化合物的响应。基质效应按绝 姑值大小可分为三个等级，│ME│>50％称为强基质效应；20％<│ME│≤50％，称为中等强度基质效应；0％<│ME│≤20％，称为弱基质效应。基质标与溶剂标的响应相差很大， 基质效应比较明显。从表4可以看出，草甘膦、草铵膦的ME值<0，意味着基质的存在抑制 了目标化合物的响应值；当添加水平为1mg/kg时，采用溶剂标曲计算该方法提取2种化合 物回收率在中为51.2％～70.7％，而基质匹配标曲计算该方法提取2种化合物的回收率为 88.2％～96.6％，可知草甘膦、草铵膦均为中等强度基质效应，因此采用基质匹配标准曲线 进行定量测定。
表2草甘膦、草铵膦残留量基质效应
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (3)
1.一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法，包括以下步骤：
（1）茶叶按GB/T8303经粉碎过筛,制得待测茶样；
（2）样品的提取
精密称取1±0.01g茶叶样品，置于50 mL离心管中，加入10 mL 0.02 mol/L-0.07 mol/L NaOH溶液，涡旋混匀1 min；室温水浴振荡提取20 min，经10000 r/min离心5 min，上清液用滤纸过滤至10 mL离心管中，得提取液Ⅰ；
（3）样品的净化
取2mL提取液Ⅰ加入0.5 mol/L -2mol/L HCl溶液20μL，涡旋混匀后10000r/min离心5min取上清液得提取液Ⅱ，将取液Ⅱ倒入预先称好0.2gPSA的10mL离心管中，并立即涡旋混匀，10000r/min离心5min取上清液得提取液Ⅲ；
（4）待测液制备
取提取液Ⅲ1mL置于10mL离心管中，加入0.2mL的40g/L-60g/L硼酸钠缓冲溶液，摇匀后再加入0.2mL 10g/L-30g/L的氯甲酸（9-芴甲基）酯衍生试剂，涡旋混匀振摇后37℃静置过夜10h-16h，衍生后的样品经10000r/min离心5min后，过水系0.22μm滤膜，得待测液；
(5)配制基质匹配标准衍生混标溶液
将空白样品经步骤（1）至步骤（3）处理，用该空白样品提取液在质量浓度为0.005μg/mL-0.50μg/mL范围内，配制至少五个浓度的草铵膦和草甘膦系列基质匹配标准混标溶液，采用与步骤（4）相同的方法对各浓度混标溶液进行衍生，制得系列基质匹配标准衍生混标溶液；
（6）液相色谱-串联质谱法测定
a)仪器参数
①色谱参数： 采用2.1mm×100 mm、1.8 μm的超高效液相 HSS T3色谱柱；柱温40 ℃；样品温度20℃；进样量1 μL；梯度洗脱程序为：流速保持0.4 mL/min不变,在0-0.5min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例从10%变为20%， 流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例从90%变为80%；在0.5-2.5min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例从20%变为95%， 流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例从80%变为5%；在2.5-4.0min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例为95%，流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例为5%，且二者均保持不变；在4.0-4.1min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例从95%变为10%，流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例从5%变为90%；在4.1-5.0min时，流动相5 mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例为10%，流动相5 mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例为90%,且二者均保持不变；
②质谱参数：采用电喷雾离子源；正离子扫描，多反应监测，脱溶剂氮气温度500 ℃、流速1000 L/Hr，离子源温度150 ℃，锥孔气流量50 L/Hr，毛细管电压3.0kV，碰撞气为氩气；草铵膦衍生物的母离子为404，子离子分别为136、179和208，锥孔电压V为25，碰撞能量eV为25、10和10，其中m/z 404>136为定量离子对；草甘膦衍生物的母离子为392，子离子为88、179和214，锥孔电压V为25，碰撞能量eV为20、10和10，其中m/z 392>88为定量离子对；
b)定性分析
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的衍生后待测液中目标化合物色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定性离子必须出现至少应包括一个母离子和两个子离子，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其相对偏差不超过30%，则可判断该样品中存在该目标化合物，若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种目标化合物；
c）定量分析
采用步骤（5）中的系列基质匹配标准衍生混标溶液进行三重四级杆超高效液相色谱串联质谱仪测定，以溶液质量浓度为横坐标，其峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；在相同检测条件下，将步骤（4）的待测液经三重四级杆超高效液相色谱串联质谱仪扫描检测，测得待测液中草铵膦、草甘膦衍生物的峰面积，代入标准曲线，得到待测液中草铵膦和草甘膦残的质量体积浓度（μg/mL），然后采用下述算式计算茶叶中草甘膦、草铵膦的的残留量：
式中：
X —— 样品中待测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
C ——进样溶液中待测组分的色谱峰由标准曲线所获得的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
V—— 用于衍生化反应的提取溶液体积，单位为毫升（mL）；
f ——样液稀释因子，为10；
1000 ——换算系数；
m ——试样的称样量，单位为克（g）。
2.如权利要求1所述的检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法，其中：步骤（6）c）计算结果时，计结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字，当结果大于1 mg/kg时保留三位有效数字。
3.如权利要求1或2所述的检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法，其中：还包括加标回收和空白试验步骤，加标回收为采用不含目标化合物的空白样品进行加标，添加浓度为0.08 、0.1、1 、2和4mg/kg 五个水平，对加标后的样品按照步骤（1）-步骤（6）进行处理；空白试验则是取不含目标化合物的样品按照（1）-步骤（6）进行处理。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810281233.1A CN108445133A (zh) | 2018-04-02 | 2018-04-02 | 一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810281233.1A CN108445133A (zh) | 2018-04-02 | 2018-04-02 | 一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108445133A true CN108445133A (zh) | 2018-08-24 |
Family
ID=63197993
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810281233.1A Pending CN108445133A (zh) | 2018-04-02 | 2018-04-02 | 一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108445133A (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109212075A (zh) * | 2018-09-26 | 2019-01-15 | 胡贝贞 | 茶叶中草铵膦的离子色谱-串联质谱联用检测方法 |
| CN110568092A (zh) * | 2019-08-21 | 2019-12-13 | 兰州市食品药品检验所 | 一种同时检测水中调节膦、乙烯利、草铵膦和草甘膦的方法 |
| CN111896660A (zh) * | 2020-08-10 | 2020-11-06 | 福建省中孚检测技术有限公司 | 一种植物性食品中草甘膦和草铵膦的检测方法 |
| CN113030339A (zh) * | 2021-04-02 | 2021-06-25 | 厦门大学 | 一种适用于不同盐度水体中常见膦酸酯的检测方法 |
| CN114910594A (zh) * | 2022-05-31 | 2022-08-16 | 湖北省地质实验测试中心(国土资源部武汉矿产资源监督检测中心) | 一种提取和衍生同步进行的草甘膦快速测定方法 |
| CN115267018A (zh) * | 2022-06-30 | 2022-11-01 | 锦州怡嘉科技有限公司 | 一种草铵膦的检测方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101646348A (zh) * | 2007-03-27 | 2010-02-10 | 纳幕尔杜邦公司 | 检测草甘膦及其代谢物的方法和组合物 |
| US20110230342A1 (en) * | 2010-03-17 | 2011-09-22 | Basf Se | Composition Comprising a Pesticide and an Alkoxylate of Iso-nonylamine |
| CN103529148A (zh) * | 2013-10-21 | 2014-01-22 | 福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 食品中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸残留量的检测方法 |
| CN103822995A (zh) * | 2014-03-16 | 2014-05-28 | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 食品中草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸残留量的测定方法 |
| CN103869028A (zh) * | 2014-03-31 | 2014-06-18 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 一种测定茶叶中草甘膦和草胺膦农药的前处理方法 |
| CN104090058A (zh) * | 2014-07-16 | 2014-10-08 | 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 适用于棉花中11种脱叶剂残留的检测方法 |
| CN104730186A (zh) * | 2013-12-19 | 2015-06-24 | 勐海茶业有限责任公司 | 茶叶中草甘膦和草铵膦农药残留量的柱前衍生-uplc-esi+-ms/ms检测方法 |
-
2018
- 2018-04-02 CN CN201810281233.1A patent/CN108445133A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101646348A (zh) * | 2007-03-27 | 2010-02-10 | 纳幕尔杜邦公司 | 检测草甘膦及其代谢物的方法和组合物 |
| US20110230342A1 (en) * | 2010-03-17 | 2011-09-22 | Basf Se | Composition Comprising a Pesticide and an Alkoxylate of Iso-nonylamine |
| CN103529148A (zh) * | 2013-10-21 | 2014-01-22 | 福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 食品中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸残留量的检测方法 |
| CN104730186A (zh) * | 2013-12-19 | 2015-06-24 | 勐海茶业有限责任公司 | 茶叶中草甘膦和草铵膦农药残留量的柱前衍生-uplc-esi+-ms/ms检测方法 |
| CN103822995A (zh) * | 2014-03-16 | 2014-05-28 | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 食品中草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸残留量的测定方法 |
| CN103869028A (zh) * | 2014-03-31 | 2014-06-18 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 一种测定茶叶中草甘膦和草胺膦农药的前处理方法 |
| CN104090058A (zh) * | 2014-07-16 | 2014-10-08 | 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 适用于棉花中11种脱叶剂残留的检测方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 冯月超 等: "多壁碳纳米管分散固相萃取-液质联用技术测定茶叶中草甘膦、草铵膦、氨甲基膦酸残留量", 《食品安全质量检测学报》 * |
| 诸力等: "超高效液相色谱_串联质谱法测定不同茶叶中草甘膦、氨甲基膦酸及草铵膦的残留", 《分析化学研究报告》 * |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109212075A (zh) * | 2018-09-26 | 2019-01-15 | 胡贝贞 | 茶叶中草铵膦的离子色谱-串联质谱联用检测方法 |
| CN110568092A (zh) * | 2019-08-21 | 2019-12-13 | 兰州市食品药品检验所 | 一种同时检测水中调节膦、乙烯利、草铵膦和草甘膦的方法 |
| CN110568092B (zh) * | 2019-08-21 | 2022-04-01 | 兰州市食品药品检验所 | 一种同时检测水中调节膦、乙烯利、草铵膦和草甘膦的方法 |
| CN111896660A (zh) * | 2020-08-10 | 2020-11-06 | 福建省中孚检测技术有限公司 | 一种植物性食品中草甘膦和草铵膦的检测方法 |
| CN111896660B (zh) * | 2020-08-10 | 2023-09-26 | 福建省中孚检测技术有限公司 | 一种植物性食品中草甘膦和草铵膦的检测方法 |
| CN113030339A (zh) * | 2021-04-02 | 2021-06-25 | 厦门大学 | 一种适用于不同盐度水体中常见膦酸酯的检测方法 |
| CN113030339B (zh) * | 2021-04-02 | 2022-05-03 | 厦门大学 | 一种适用于不同盐度水体中常见膦酸酯的检测方法 |
| CN114910594A (zh) * | 2022-05-31 | 2022-08-16 | 湖北省地质实验测试中心(国土资源部武汉矿产资源监督检测中心) | 一种提取和衍生同步进行的草甘膦快速测定方法 |
| CN114910594B (zh) * | 2022-05-31 | 2024-05-14 | 湖北省地质实验测试中心(国土资源部武汉矿产资源监督检测中心) | 一种提取和衍生同步进行的草甘膦快速测定方法 |
| CN115267018A (zh) * | 2022-06-30 | 2022-11-01 | 锦州怡嘉科技有限公司 | 一种草铵膦的检测方法 |
| CN115267018B (zh) * | 2022-06-30 | 2024-02-23 | 锦州怡嘉科技有限公司 | 一种草铵膦的检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108445133A (zh) | 一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法 | |
| CN104730186B (zh) | 茶叶中草甘膦和草铵膦农药残留量的柱前衍生-uplc-esi+-ms/ms检测方法 | |
| CN105758947B (zh) | 一种同时测定食品中草铵膦及其代谢物残留量的方法 | |
| Emteborg et al. | Speciation of organic and inorganic selenium in a biological certified reference material based on microbore ion-exchange chromatography coupled to inductively coupled plasma atomic emission spectrometry via a direct injection nebulizer or coupled to electrothermal atomic absorption spectrometry | |
| CN106053703B (zh) | 一种同时检测食品中多种植物生长调节剂的方法 | |
| CN107247105B (zh) | 一种固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法检测茶叶中高氯酸盐的方法 | |
| CN107664670B (zh) | 玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法 | |
| CN102207495A (zh) | 一种高效液相色谱法对土壤中草甘膦含量的测定方法 | |
| CN103869028A (zh) | 一种测定茶叶中草甘膦和草胺膦农药的前处理方法 | |
| CN102854271A (zh) | 烟草及烟草制品中三种苯氧羧酸类农药残留量的测定方法 | |
| CN109738565A (zh) | 一种测定保健食品中非法添加化合物的方法 | |
| Yu et al. | An improved method for analyzing chlormequat and mepiquat in source waters by solid-phase extraction and liquid chromatography–mass spectrometry | |
| Schuette et al. | Solid-phase extraction of herbicides from well water for determination by gas chromatography-mass spectrometry | |
| CN107907606A (zh) | 一种同时快速检测土壤中多种除草剂的方法 | |
| CN108020627B (zh) | 一种超高效合相色谱-串联质谱法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法 | |
| CN110174470A (zh) | 一种水产品中海洋生物毒素的高通量检测方法 | |
| CN106645451A (zh) | 一种谷物中赭曲霉毒素a的检测方法 | |
| Zhang et al. | Extraction of acetanilide herbicides in naked oat (Avena nuda L.) by using ionic‐liquid‐based matrix solid‐phase dispersion‐foam flotation solid‐phase extraction | |
| CN101865887B (zh) | 高效液相色谱串联质谱测蜂王浆中硝基咪唑类残留的方法 | |
| CN108760920A (zh) | 一种基于hplc-msms法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法 | |
| CN108732293A (zh) | 茚嗪氟草胺及其代谢物的高效液相色谱串联质谱分析方法 | |
| CN108181394A (zh) | 一种提取-净化同步法测定烟草中三种苯氧羧酸类农药残留量的方法 | |
| CN102944635B (zh) | 一种测定水中磷酸三(2,3-二溴丙基)酯含量的方法 | |
| CN113533548A (zh) | 一种化工产品中1-乙烯基咪唑的检测方法 | |
| CN111366659A (zh) | 粉末状含氟聚合物产品中痕量pfoa的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180824 |