CN102207495A

CN102207495A - 一种高效液相色谱法对土壤中草甘膦含量的测定方法

Info

Publication number: CN102207495A
Application number: CN201110072961XA
Authority: CN
Inventors: 宋薇
Original assignee: SHENZHEN PONY TEST TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: SHENZHEN PONY TEST TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2011-03-24
Filing date: 2011-03-24
Publication date: 2011-10-05

Abstract

本发明涉及一种高效液相色谱法对土壤中草甘膦含量的测定方法。即试样经水涡旋、超声提取，上清液过滤得粗提液，经三氯甲烷液液萃取去除杂质后，水相液过C₁₈萃取小柱净化。透过液中加入四硼酸钠水溶液和氯甲酸-9-芴甲酯(FMOC)甲醇溶液，室温衍生后过0.45μm滤膜。称取草甘膦标准品，用10％甲醇水溶液溶解作为储备液，然后进一步稀释为具有浓度梯度的标准使用液；利用配备荧光检测器的高效液相色谱仪进行检测，外标法定量。采用本发明的方法检测土壤中草甘膦的含量，快速准确，相对平均偏差小于5.0％，由此可见，本发明的方法为土壤中草甘膦含量的检测，提供了一种可靠的便于实施的方法，能够满足生产和环境监测的需要。

Description

一种高效液相色谱法对土壤中草甘膦含量的测定方法

技术领域

本发明涉及一种土壤中草甘膦的含量的测定方法，特别是涉及一种通过高效液相色谱仪对土壤中草甘膦的含量进行检测的方法。

背景技术

草甘膦(glyphosate)也叫镇草宁、膦甘酸，商品名称为草甘膦(glyphosate)，是广谱、非选择性的内吸传导性茎叶处理有机磷酸类除草剂，20世纪70年代初由美国孟山都公司开发。主要通过抑制植物体内烯醇丙酮基莽草素磷酸合成酶，从而抑制莽草素向苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸的转化，使蛋白质的合成受到干扰导致植物死亡。按我国农药毒性分级标准，草甘膦属低毒除草剂。已经报道的检测方法有采用高效液相法检测食品和水质中的草甘膦，但是目前还没有制定土壤中草甘膦含量的标准测定方法，因此建立一种快速、准确、方便和经济的检测方法，有利于检测土壤中草甘膦残留量，从而保障环境安全。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，克服草甘膦不溶于大多数极性溶剂、从样品中提取及测定其残留量困难的缺陷，通过摸索溶解液比例、提取液最佳配比，最佳的提取方式和最佳色谱条件而提供一种土壤中草甘膦的含量测定方法。

为实现上述目的，本发明采取以下设计方案：

本发明的一种高效液相色谱法对土壤中草甘膦含量的测定方法包括如下步骤：

充分混匀待测试样10.0g加入水50.0ml，充分涡动，超声提取20min，5000r/min离心5min，取上清液双层滤纸过滤，得样品粗提液。

样品粗提液中加入等体积三氯甲烷，剧烈震荡，静置分层，取2mL水相待用。

取C18固相萃取小柱，先用1mL甲醇和1mL水冲洗，弃去透过液。缓慢加入2mL上述提取液，收集透过液，用洗耳球吹出柱中残余提取液，合并透过液。

取1mL上述透过液于带塞试管中，加0.05mol/L四硼酸钠水溶液0.5mL，再加入0.02％FMOC甲醇溶液0.5mL，塞紧，充分振荡，室温下反应1h，滤膜过滤后获得试样处理液。

称取草甘膦标准品，用10％的甲醇溶液溶解并作为标准储备液，然后进一步用10％的甲醇溶液稀释为具有浓度梯度的标准使用液；

利用高效液相色谱仪对标准使用液和试样处理液进行检测；

计算结果，试样中草甘膦的计算公式为：

X = \frac{c \times V \times 1000}{m \times 1000}

式中：

X-试样中草甘膦的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；

c-试样处理液浓度(mg/kg)；

V-试样总稀释体积，单位为毫升(mL)；

m-试样质量，单位为克(g)。

优选地，所述标样溶解溶剂为10％的甲醇水溶液。

优选地，所述提取溶剂为二次水。

优选地，所述提取方式为溶剂超声提取和固相萃取相结合的方法。

优选地，所述萃取后的透过液用0.02％的氯甲酸-9-芴甲酯(FMOC)甲醇溶液作为衍生剂在室温下进行柱前衍生。

所述利用高效液相色谱仪对试样处理液进行检测的条件为：

色谱柱：Venusil SAX 10μm，4.6×300mm

流动相：0.1mol/L pH＝6柠檬酸缓冲溶液：乙腈(70：30)

流速：1.0ml/min；

进样量：10μl；

温度：40℃；

荧光检测器激发波长：254nm，发射波长：315nm

根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

本发明的优点是：采用本发明的方法检测土壤中草甘膦含量的测定方法，快速有效，采用通用型的液相色谱柱和荧光检测器即可对草甘膦进行高效液相色谱测定，线性范围是2.5-500μg/mL，线性相关系数r＝0.9992，相对标准偏差RSD小于5％，检出限为10μg/kg。由此可见，本发明的方法，为检测土壤中草甘膦的含量，提供了一种可靠的便于实施的方法，能够满足研究和生产中的需要。

具体实施方式

实施例1，土壤中草甘膦含量

称取充分混匀的待测试样10.0033g，(精确称量至0.0001克)，置于50ml的离心管中，加入水50ml，充分涡动振荡混匀，超声提取20min，5000r/min离心5min，取上清液双层滤纸过滤，得样品粗提液。

取C₁₈固相萃取小柱，先用1mL甲醇和1mL水冲洗，弃去透过液。缓慢加入2mL上述提取液，收集透过液，用洗耳球吹出柱中残余提取液，合并透过液。

称取草甘膦标准品10.00mg(纯度98.0％，Alfa Aesar公司)，用10％的甲醇溶液溶解定容至10mL制成1000μg/mL并作为标准储备液，然后进一步用10％的甲醇溶液稀释为500μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、2.5μg/mL的标准使用液。

检测仪器为现有的岛津-20AT高效液相色谱仪：

检测条件为：

色谱柱：Venusil SAX 10μm，4.6×300mm

流动相：0.1mol/L pH＝6柠檬酸缓冲溶液∶乙腈(70∶30)

流速：1.0mL/min；

进样量：10μL

温度：40℃；

荧光检测器激发波长：254nm，发射波长：315nm

根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

计算结果，试样中草甘膦的计算公式为：

X = \frac{c \times V \times 1000}{m \times 1000} - - - (1)

式中：

X-试样中草甘膦的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；

c-试样处理液浓度(mg/kg)；

V-试样总稀释体积，单位为毫升(mL)；

m-试样质量，单位为克(g)。

经过计算，结果为：

试样中草甘膦的含量按公式(1)进行计算，结果如下：

显而易见，本领域的普通技术人员，可以用发明的一种高效液相色谱法对土壤中草甘膦含量的测定。

上述实施例仅供说明本发明之用，而并非是对本发明的限制，有关技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明范围的情况下，还可以作出各种变化和变型，因此所有等同的技术方案也应属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由各权利要求限定。

Claims

1.一种高效液相色谱法对土壤中草甘膦含量的测定方法，其特征是取待测样品预处理后，加入有机溶剂提取。再向提取液中加入反应溶剂及衍生化试剂进行衍生化反应，然后用高效液相色谱法测定草甘膦衍生物的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法对土壤中草甘膦含量的测定方法，其特征是所述的样品的预处理为：称取待测试样，加入二次水涡旋振荡，超声提取、离心后，取上清液用双层滤纸过滤，得样品粗提液。用三氯甲烷萃取粗提液，将得到的水相过C18固相萃取小柱，得到样品提取液。

3.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法对土壤中草甘膦含量的测定方法，其特征是所述的衍生化试剂为0.02％氯甲酸-9-芴甲酯(FMOC)的甲醇溶液。

4.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法对土壤中草甘膦含量的测定方法，其特征在于：在衍生化反应中加入了四硼酸钠水溶液作为缓冲溶液。

5.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法对土壤中草甘膦含量的测定方法，其特征是采用高效液相色谱荧光检测器测定草甘膦衍生物的峰面积，用标准曲线校正方程换算成草甘膦的浓度。

6.根据权利要求1和5所述的一种高效液相色谱法对土壤中草甘膦含量的测定方法，其特征是所述的高效液相色谱法采用通用型的强碱性阴离子交换色谱柱。