CN107664670B - 玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法 - Google Patents

玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱‑串联质谱检测方法。本发明首先以乙腈作为提取溶剂，采用优化后的QuEChERS法(萃取和净化步骤中的净化剂为PSA、C18和GCB共3种)提取玉米中的种菌唑，取得较高的加标回收率；然后采用超高效液相色谱‑串联质谱法(UPLC‑ESI+‑MS/MS)测定玉米中种菌唑，方法简便、灵敏、选择性高，可为农产品安全监测和环境行为评价提供科学的技术手段。

Description

玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法
技术领域
本发明涉及一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，属于农药残留检测技术领域。
背景技术
种菌唑为日本吴羽化学公司于20世纪90年代初开发的新款三唑类杀菌剂，其杀菌谱较广，兼具内吸、保护及治疗作用，广泛用于控制水稻、玉米和其他作物的种子病害，对水稻恶苗病、胡麻斑病和稻瘟病具有较好的防治效果。种菌唑是角甾醇生物合成抑制剂，广谱系统杀菌剂，具有内吸传导和触杀保护活性的效果。其用量低、活性高，对单子叶和双子叶植物使用安全、高效，因此被大量的应用于玉米耕种中。虽然种菌唑在玉米收获前大部分被分解，但是仍有少量杀菌剂残留。我国未制定它的最大残留限量，欧盟规定种菌唑在玉米、棉花中的最大允许限量(MRL)值为0.01mg/kg。
目前国内外报道的种菌唑分析方法不多，主要的分析方法有关于酒、牛奶等的高效液相色谱法(李岩,史娜,王胜翔.种菌唑原药的高效液相色谱分析方法研究[J].农药科学与管理,2010,31:37-39)和气相色谱-质谱联用法(Lazartigues et al.Multiresiduemethod for the determination of 13pesticides in three environmental matrices：water,sediments and fish muscle[J].Talanta,2011,85(3):1500-7)，液相色谱-飞行时间质谱法(Amelin et al.Identification and Determination of 492Contaminants ofDifferent Classes in Food and Feed by High-Resolution Mass Spectrometry Usingthe Standard Addition Method[J].Journal of AOAC International 2016，99:1600-1618)。但是至今有关于在玉米中进行种菌唑分析的方法未进行报道。
玉米中种菌唑检测，首先要考虑的是怎么从玉米中提取种菌唑。在提取杀菌剂时既要考虑选择性，又要考虑灵敏性。近来，QuEChERS(快速，简易，净化，高效，安全)前处理方法在2003年已经被广泛应用到农药残留分析方法中，特别是蔬菜，水果、牛奶和水等的复杂基质中。QuEChERS方法用乙腈提取，用固相分散剂净化(乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)是常用的固相分散剂)，主要用来除去极性有机酸、极性颜料、糖类和脂肪酸。由于玉米中含有甘油三酯，还有糖类、纤维、氨基酸、无机盐、酸、脂溶性成分等复杂成分。它与蔬菜、水果的不同之处在于它含有油脂，而大部分的杀菌剂是脂溶性的，在去除油基质的同时也会将大部分的杀菌剂除掉，使得提取率大大降低。尽管在农药分析中高效的色谱仪器发展迅速，但是前处理仍然很重要。由于少量的杂质也能污染仪器，所以提取完后还要进行净化。如何对玉米中种菌唑进行有效的提取净化是当前要解决的问题。
发明内容
本发明克服了上述现有技术的不足，提供了一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。本发明首先采用优化后的QuEChERS法(萃取和净化步骤中的净化剂为PSA、C18和GCB共3种)提取玉米中的种菌唑，取得较高的加标回收率；然后采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-ESI+-MS/MS)测定玉米中种菌唑，方法简便、灵敏、选择性高，可为农产品安全监测和环境行为评价提供科学的技术手段。
本发明的技术方案为：一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征是，包括以下步骤：
1)样品前处理
以乙腈作为提取溶剂，采用QuEChERS法，以乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)、石墨化炭黑(GCB)、C18粉末作为净化剂进行净化；
具体步骤如下：将鲜玉米粒粉碎、匀浆后，准确称取1.00g样品置于离心管中，加入5ml乙腈溶解样品；离心，取上清液加入PSA、GCB和C18充分混合；离心，取上清液过微孔滤膜，待测；PSA、C18和GCB的用量分别优选0.025、0.020和0.020g/mL。
2)定性检测
得到的待测液采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪进行定性和/或定量分析；
所述超高效液相色谱仪器参数条件如下：
色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(50mm×2.1mm，1.8μm)；柱温：35℃，样品室温度20℃；进样体积：1.0μL；
流动相A：0.2％甲酸水，流动相B：甲醇；流速：0.3mL/min，梯度洗脱，梯度洗脱程序如下表1所示：
表1梯度洗脱
质谱条件如下：
电喷雾电离正离子模式，ESI+；毛细管电压：4KV；离子源温度：110℃；脱溶剂气温度：375℃；锥孔反吹氮气流量：8L/min；脱溶剂气流量：11L/min。扫描模式为多反应监测扫描(MRM)，其定性离子对、定量离子对及其他反应条件见表2。
表2种菌唑的ESI--MS/MS条件参数
优选的，所述步骤1)为：将样品进行粉碎、匀浆机匀浆后，准确称取1.00g样品，置于50mL离心管中，加入5mL乙腈，涡旋振荡2min；于4 000r/min条件下离心5min；取上清液3mL转移至10mL离心管中，加入0.075g PSA和0.060g GCB，0.060g C18涡旋振荡2min；于4000r/min下离心5min，取上清液1mL过0.22μm微孔滤膜，待测。
进一步的，本发明采用基质匹配的标准曲线Y＝1388X+3604对玉米中种菌唑进行定量。
本发明的有益效果是：
(1)为了解种菌唑在玉米中的最终残留，合理评估其持效期，本发明比较了液液萃取、固相萃取以及QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、safe)3种样品前处理方法对玉米中吡种菌唑添加回收率的影响。结果表明：采用QuEChERS法提取时回收率较高，所需有机溶剂少，时间短，重复性好，具有一定优势；净化步骤中添加的PSA、C18和GCB主要用于去除萃取物中的杂质，但对检测目标成分也有吸附作用，因而其具体用量需根据实际样品的性质确定。本发明进一步通过实验证明：当PSA、C18和GCB的用量分别为0.025、0.020和0.020g/mL时，样品萃取与净化效果较好。
(2)本发明采用安捷伦Technologies 1290超高效液相色谱系统以及AgilentZORBAX Eclipse Plus C18超高压色谱柱，同时对超高效液相色谱-质谱检测参数(如流动相、定性离子对、定量离子对)进行优化，提高了分离效率，缩短了样品分析周期(目标峰保留时间4.8min，单个样品检测时间6.0min)，适合于玉米中种菌唑的快速分析。该方法的添加回收率不低于87％，线性范围为1～100μg/L，定量限为0.01mg/kg；方法简便、灵敏度高、选择性好。
附图说明
图1为种菌唑解离示意图；
图2为种菌唑一级质谱图；
图3为种菌唑二级质谱图；
图4为不同流动相下种菌唑的离子峰色谱图；
图5为10μg/L种菌唑基质配标总离子峰和选择性离子峰色谱图；
图6为QuEChERS(QuE)、液液萃取(LLE)和固相萃取(SPE)对玉米中种菌唑添加回收率的影响柱形图；
图7为种菌唑空白样品的总离子峰和选择性离子峰色谱图。
具体实施方式
实施例1：
1实验部分
1.1仪器与试剂
Agilent 6460三重四级杆液相色谱质谱联用仪。AgilentTechnologies 1290液相色谱系统(Palo Alto,CA)配备有真空脱气机，自动进样器(G4226A)，柱温箱(G1316C)和二元泵(G4220A)。G6460三重四级杆串联质谱仪。T25Basic高速分散匀浆机(德国IKA公司)；Laborata 4000型旋转蒸发仪(德国Heidolph公司)；JNC N-EVAPTM112型氮吹仪(美国Organomation公司)；超声波提取器：昆山市超声仪器有限公司。
种菌唑(德国Dr.Ehrenstorfer公司)、氯化钠、氨水(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)、甲酸(色谱纯，Merck(Darmstadt,Germany)、甲醇、乙腈(色谱纯，美国赛默飞世尔科技公司)。乙二胺-N-丙基甲硅烷(PSA)、石墨化碳黑(GCB)和Cleanert PestiCarb/NH2固相萃取柱(体积6mL，由等量的石墨化碳和氨基装填而成，填料量为0.50g，平均粒径38～120μm，比表面积100m2/g)，购于中国Agela公司；甲醇和乙腈为色谱纯；氨水、甲酸、二氯甲烷、甲苯、正己烷和丙酮为分析纯；超纯水由Millipore公司(Bedford，美国)的超纯水系统制备。
1.2色谱质谱条件
色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(50mm×2.1mm，1.8μm)；柱温：35℃，样品室温度20℃；进样体积：1.0μL。
流动相A：0.2％甲酸水，流动相B：甲醇；流速：0.3mL/min，梯度洗脱。梯度洗脱程序具体如上面的表1所示。
电喷雾电离正离子模式，ESI+；多反应监测扫描(MRM)；毛细管电压：4KV；离子源温度：110℃；脱溶剂气温度：375℃；锥孔反吹氮气流量：8L/min；脱溶剂气流量：11L/min。其它条件参数见表2。
1.3标准溶液配制与标准曲线
称取0.0100g种菌唑标准品，用乙腈溶解并转移至10mL容量瓶中，定容，配制成1000μg/mL标准储备液，-20℃避光保存。将种菌唑储备液用乙腈依次稀释成1、10、25、50、75、100μg/L，作为标准工作液；同时，采用玉米空白基质配制成相应浓度的基质标准溶液。UPLC-MS/MS进样1μL测定，获得种菌唑溶剂和基质的标准曲线、线性相关系数。
1.4玉米样品的采集与预处理
试验于2015年6-9月在中国山东省济南市历城区董家镇科技示范园进行。选取品种为先玉335玉米进行实验，用4.35％种菌唑微乳悬浮剂在玉米田作为防治玉米丝黑穗病药剂，进行拌种。推荐使用制剂量(有效成分)：27克/100千克种子(制剂用量638.3克/100千克种子)。选取小区面积30m2，重复3次，随机排列，小区间设保护带。另设空白对照小区。
采集收获前20天青玉米籽粒以及收获期玉米籽粒进行检测。玉米样本的采集：在试验小区内，小区边行和每行距离两端0.5m内不采样。其余地方多点采样，采集6个～12个玉米、青玉米，除去苞叶及花丝，留样500g，装入塑料袋包扎，加挂标签，贮存于-20℃冰柜中保存。待前处理。
1.5萃取方法的比较与选择
将空白玉米粒对照样品进行粉碎、T25Basic高速分散匀浆机匀浆后，称取1.00g(精确到0.01g)空白对照样品12份，分成3组，每组4份，置于50mL离心管中，分别添加0.01、0.1和1mg/L的种菌唑标准溶液1ml和乙腈各1mL，超声后，经氮气吹干，得到种菌唑添加量分别为0.01、0.1和1mg/kg的玉米样品。以未添加药剂的玉米样品为空白对照。比较QuEChERS、液液萃取和固相萃取3种方法对玉米中种菌唑回收率的影响。试验重复3次。
1.5.1QuEChERS法
取第1组标准添加样品，分别加入5mL乙腈、1.00g无水硫酸镁和0.50g氯化钠，涡旋2min；于4 000r/min下离心5min；取上清液3mL转移至10mL离心管中，加入1.50g无水硫酸镁、0.30g氯化钠、0.075g PSA、0.060g GCB和0.060g C18，涡旋振荡2min；于4 000r/min下离心5min；取上清液1mL，过0.22μm微孔滤膜，待测。
1.5.2液液萃取
取第2组标准添加样品，加入10mL丙酮和10mL正己烷，超声提取15min，提取液经脱脂棉过滤至125mL分液漏斗中。用10mL正己烷清洗三角瓶及脱脂棉，清洗液合并于分液漏斗中。在分液漏斗中加入20mL 20g/L的硫酸钠水溶液，摇匀，静置分层，将下层溶液移至另一125mL分液漏斗中，用2×10mL的正己烷萃取，合并正己烷层，过无水硫酸钠层，于旋转蒸发仪上浓缩近干。将浓缩近干的样品用5mL正己烷分多次洗至125mL分液漏斗中，加入10mL正己烷饱和的乙腈，振荡5min，静置分层，收集下层乙腈层。向剩余正己烷层再次加入10mL正己烷饱和的乙腈，振荡5min，静置分层，收集下层乙腈层，合并两次乙腈，浓缩，用乙腈定容至1mL。过0.22μm微孔滤膜，待测。
1.5.3固相萃取
取第3组标准添加样品，加入5mL乙腈，涡旋2min；分别添加1.00g无水硫酸镁、0.20g氯化钠，涡旋振荡2min；于4000r/min下离心5min；将固相萃取柱用4mL V(乙腈):V(甲苯)＝3:1的混合溶液活化后，取3mL上清液淋洗，再用20mL上清液洗脱，流速1mL/min；收集全部淋洗液，氮吹浓缩至1mL，过0.22μm滤膜，待测。分别加入5mL乙腈、1.00g无水硫酸镁和0.20g氯化钠，涡旋2min；于4 000r/min下离心5min；取上清液3mL转移至10mL离心管中，加入1.50g无水硫酸镁、0.30g氯化钠、0.075g PSA和0.06g GCB，0.06g C18涡旋振荡2min；于4000r/min下离心5min；取上清液1mL，过0.22μm微孔滤膜，待测。
1.6QuEChERS净化剂配方的优化
为了提高萃取效率，减少玉米中杂质对分析结果及仪器的影响，对QuEChERS净化剂配方进行了优化。以样品的添加回收率和萃取液颜色为指标，评估净化剂配方对萃取结果的影响。试验设9个处理，每处理重复3次，各处理净化剂及用量见表2。种菌唑添加水平为0.10mg/kg，检测样品的回收率，并进行分析。
1.7基质效应
以TIC峰面积为仪器响应值，采用相对响应值法研究玉米的基质效应(Dams etal.2003；Matuszewski et al.2003)。在玉米空白基质溶液和乙腈溶剂中，种菌唑的添加水平分别为0.01和0.10mg/kg。根据公式ME＝Am/Ac×100％计算基质效应。式中，ME表示基质效应，Am表示基质匹配标准溶液的TIC峰面积，Ac表示乙腈溶剂标准溶液的TIC峰面积。当ME值小于100％时，表示基质有抑制效应；当ME值大于100％时，为增强效应；当M E值为90％～110％时，则认为基质效应不明显。
2结果与讨论
2.1质谱条件的优化
种菌唑是三唑类化合物，分子量为333.8557，不含酸性基团，三唑环中的三个N的碱性都比较弱，尤其是双键的C＝N，只有叔胺碱稍强些，容易结合一个质子生成正离子化合物，其电离位置见图1。因此这种化合物可采用ESI+模式扫描测定。通过母离子扫描(MSScan)，可获得一级质谱图，见图2，这种化合物的软电离均以准分子离子峰[M+H]+形式存在。在MS Scan条件优化过程中，发现脱溶剂气温度对种菌唑影响较大，在温度＞400℃，在MS SCAN质谱图中，未发现种菌唑的[M+H]+峰，这可能是高温裂解导致。本实验选择脱溶剂气温度375℃，此时种菌唑的[M+H]+正离子丰度最大，可保证其高灵敏度。最终选定种菌唑的母离子是334.1。选定母离子，进行子离子扫描(MS Sim)，可获得二级质谱图，见图3，种菌唑主要的特征碎片离子为m/z 70.2、125.0，分别代表着三氮唑环、氯苄基正离子，对锥孔电压和碰撞能量等质谱各条件参数进行优化，获得最高灵敏度的种菌唑的最佳仪器参数和特征碎片离子，见表1。
2.2液相色谱条件的选择
种菌唑是一种碱性化合物，本实验采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18柱，该柱具有无与伦比的性能。即使对于非常难分离的碱性化合物，也可获得出色的峰形，从而改善了这些类型的样品的柱效和分离度。流动相采用不同比例的甲醇-水对种菌唑标样进行分离，发现种菌唑峰型不好，是两个峰(如图4A)，这可能是因为固定相上硅醇基与胺发生反应，在流动相中加入0.1％甲酸水，尽管目标化合物峰型变好，但又影响其离子化效率，造成谱图中有前延峰(图4B)，质谱灵敏度下降。本实验在流动相中分别加入了0.1％甲酸水、0.2％甲酸水、0.3％甲酸水和水，发现质谱灵敏度0.2％甲酸水＞0.3％甲酸水＞0.1％甲酸水＞水，流动相pH值降低，能够促进化合物离子化，但是有最佳pH值，并且能改善峰形，本实验选择了0.2％甲酸水-甲醇和作为流动相，既提高化合物在色谱柱保留性能，又提高了其离子化效率，获得最佳的质谱灵敏度(图4C)。
2.3萃取方法的比较和选择
3种萃取方法中，QuEChERS法对不同添加水平种菌唑的回收率均较高，3个添加水平的平均回收率为97.8％，标准差(SD)为1.0；液液萃取回收率较低，3个添加水平的平均回收率仅为48.5％。由于玉米里含有油，不同于QuEChERS法，GCB具有吸油的作用。液液萃取需要先用正己烷或者石油醚进行去油，再进行提取，提取效果很好，但是回收率低大大降低，这可能是种菌唑有一部分溶解在正己烷或石油醚里了；如果不进行除油，直接提取后进液相，在出峰的位置出了个很大的峰，正己烷或者石油醚除油之后就没有了。固相萃取的回收率较QuEChERS法低一些，但是比液液萃取高的多，在高添加水平下回收率高，而在低添加水平下回收率低，不同水平及同一水平不同重复间变异大(图6)。此外，液液萃取时间较长，有机溶剂用量较大；固相萃取中萃取柱多为一次性耗材，成本较高；相比而言，QuEChERS法操作简便，有机溶剂用量较少，耗时较短，适合大批量样品的前处理。因此，将QuEChERS法作为玉米中种菌唑残留检测的前处理方法。
2.4QuEChERS净化剂配方的优化
种菌唑在乙腈、甲醇、二氯甲烷中均有良好的溶解度，本实验采用了乙腈作为提取剂，选择常用的PSA、石墨化炭黑(GCB)、C18粉末进行净化。PSA具有弱阴离子交换功能，主要用来除去极性有机酸、极性颜料和糖类，石墨化炭黑(GCB)主要用来去除固醇和色素，C18主要用来去除脂肪和非极性的物质。不同净化剂(MgSO4/NaCl、C18、GCB、PSA)配比对玉米中种菌唑添加回收率的影响结果见表3。
表3QuEChERS方法中不同净化剂配比对玉米中种菌唑添加回收率的影响(n＝3)
结果(表3)表明：当无水硫酸镁和氯化钠的添加量分别由0.500g/mL和0.100g/mL减少为0时，种菌唑的回收率变化不明显，表明无水硫酸镁和氯化钠对玉米中种菌唑的回收率无显著影响。添加无水硫酸镁及氯化钠主要用于去除含水量较高样品中的水分，而玉米的含水量相对较低，为防止两种盐类可能对质谱系统的损害，玉米样品前处理时可不必添加无水硫酸镁和氯化钠。当其他条件不变时，随PSA、C18和GCB用量的增加，回收率降低；当PSA、C18和GCB的用量同时增加至0.030g/mL时，回收率降至74％；当C18用量由0.020g/mL减少至0.010g/mL时，回收率变化不明显；当0.20g/mL增加至0.030g/mL时，回收率下降较大，这可能C18量的增加，会吸附样品，致使回收率下降。当GCB用量由0.020g/mL减少至0.010g/mL时，回收率虽无显著变化，但样品萃取液颜色较深，表明GCB和PSA用量可显著影响添加回收率和萃取液的净化度。综合考虑回收率和净化度，最终选择在QuEChERS处理中，不添加无水硫酸镁和氯化钠，而PSA、C18和GCB的添加量分别为0.025g/mL、0.020g/mL和0.020g/mL。
根据上述优化选择结果，最终的前处理方法为：将样品进行粉碎、匀浆机匀浆后，准确称取1.00g样品，置于50mL离心管中，加入5mL乙腈，涡旋振荡2min；于4 000r/min条件下离心5min；取上清液3mL转移至10mL离心管中，加入0.075g PSA和0.060g GCB，0.060gC18涡旋振荡2min；于4 000r/min下离心5min，取上清液1mL过0.22μm微孔滤膜，待测。
2.5线性方程及基质效应
按1.3配制的1～100μg/L系列标准溶液，以进样浓度(μg/L)为横坐标，定量离子对的色谱峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，获得的相关线性方程见表4，相关系数均大于0.99。从线性方程及上述1.7的ME计算公式可知，种菌唑添加量为0.01和0.10mg/kg时，ME值分别为105％和90％，说明存在着微弱的基质效应，使用溶剂配制的标准曲线测定的结果与实际结果之间具有一定的偏差，因此，应采用基质加标方法进行定量分析，基质标准图谱见图5。在实际样品检测过程中，为了最大限度的降低基质效应的影响，提高定量分析的准确度，采用基质匹配的标准曲线进行定量。
表4不同基质中种菌唑的UPLC-MS/MS测定线性方程、相关系数
2.6方法的灵敏度、准确度和精密度
对空白玉米样品(玉米空白离子色谱图见图7)在0.01、0.1、1mg/kg三个浓度水平上进行添加，每个平行重复5次，按照2.4方法进行提取净化，基质配标校正曲线定量。添加量、平均回收率和精密度见表5。结果表明，在0.01～1mg/kg添加范围内，在玉米中平均回收率为87.1％～101.1％，相对标准偏差RSD为0.9％～4.2％，该方法种菌唑定量限为0.01mg/kg(S/N＝10)。
表5种菌唑在玉米中的回收率和标准偏差
2.7实际样品测定结果
2.7.1前处理方法
根据上述优化选择结果，将样品进行粉碎、匀浆机匀浆后，准确称取1.00g样品，置于50mL离心管中，加入5mL乙腈，涡旋振荡2min；于4 000r/min条件下离心5min；取上清液3mL转移至10mL离心管中，加入0.075g PSA和0.060g GCB，0.060g C18涡旋振荡2min；于4000r/min下离心5min，取上清液1mL过0.22μm微孔滤膜，待测。
2.72检测
采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪(实验仪器如1.1所示，色谱质谱条件如1.2所示)，采用基质匹配的标准曲线Y＝1388X+3604对玉米中种菌唑进行定量。
2.73检测结果
采用本研究建立的方法，对施药后收获前20天的青玉米和收获期的玉米中的种菌唑的残留量进行了检测，在青玉米和收获期的玉米都未检出种菌唑，这说明按照正常的种菌唑使用方法施药(4.35％种菌唑微乳悬浮剂拌种)，收获的玉米可以满足欧盟规定的MRL值的要求。

Claims (3)

1.一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征是，包括以下步骤：
1）样品前处理
将鲜玉米粒粉碎、匀浆后，准确称取1.00g样品置于离心管中，加入5ml乙腈溶解样品；离心，取上清液加入PSA、GCB和 C18充分混合；离心，取上清液过微孔滤膜，待测；所述PSA、C18和 GCB 的用量分别为0.025、0.020和 0.020 g/mL；
其中PSA为乙二胺-N-丙基硅烷，GCB为石墨化炭黑；
2）检测
得到的待测液采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪进行定量分析；
所述超高效液相色谱仪器参数条件如下：
色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱，50mm×2.1mm，1.8µm；柱温：35℃，样品室温度20 ℃；进样体积：1.0 μL；
流动相A：0.2 %甲酸水，流动相B：甲醇；流速：0.3 mL/min，梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：
所述三重四级杆串联质谱仪条件如下：
电喷雾电离正离子模式，ESI+；毛细管电压：4 KV；离子源温度：110 ℃；脱溶剂气温度：375 ℃；锥孔反吹氮气流量：8 L/min；脱溶剂气流量：11 L/min；扫描模式为多反应监测扫描MRM，其定性离子对、定量离子对及其他反应条件见下表
。
2.如权利要求1所述的一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征是，所述步骤1）具体为：将样品进行粉碎、匀浆机匀浆后，准确称取 1.00 g 样品，置于离心管中，加入5 mL 乙腈，涡旋振荡 2 min；于 4 000 r/min 条件下离心 5 min；取上清液 3 mL 转移至另一离心管中，加入 0.075 g PSA 和 0.060 g GCB，0.060g C18涡旋振荡 2 min；于4 000 r/min 下离心 5 min，取上清液1 mL 过 0.22 μm 微孔滤膜，待测。
3.如权利要求1所述的一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，采用基质匹配的标准曲线Y=1388X+3604对玉米中种菌唑进行定量。
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