CN112345665B - 用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法、基质吸附材料及兽药残留检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法、基质吸附材料及兽药残留检测方法，属于食品安全检测领域。该样品前处理方法包括：将待测动物源食品的匀浆样品与EDTA盐溶液以及酸化乙腈混合后，再与无机盐混合，离心后，得到样品提取液；再用硅烷化试剂处理后的改性三聚氰胺海绵吸附所述样品提取液中的干扰基质，挤压所述改性三聚氰胺海绵，得到动物源样品净化液，稀释一倍后过滤上机检测。通过该方法，能够有效提升动物源食品基质净化过程的便捷度，也有助于显著缩短和降低动物源食品中兽药多残留检测前处理的时间和成本。

Description

用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法、基质吸 附材料及兽药残留检测方法

技术领域

本发明涉及动物源食品中兽药残留检测技术领域，具体涉及一种用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法、基质吸附材料及兽药残留检测方法。

背景技术

液相色谱质谱联用技术以其高灵敏和高通量特征而被广泛应用于动物源食品兽药多残留分析。动物源食品中基质成分较为复杂，良好的样品前处理方法不但能够显著提高检测准确性、精密度和灵敏度，而且能够有效保护色谱柱及质谱系统不受基质污染损害，延长其使用寿命。目前动物源食品中兽药残留检测常用的样品前处理方法主要包括固相萃取(SPE)技术、基质固相分散萃取(MSPD)技术、凝胶渗透色谱(GPC)技术、加速溶剂萃取(ASE)技术和QuEChERS技术等。

SPE技术基于待测物、干扰基质与固相萃取填料三者间的相互作用力差异实现待测物与干扰基质的分离，基质净化过程主要包括活化、平衡、上样、清洗和洗脱等步骤。虽然SPE技术具有高回收率和重现性，但其样品净化过程复杂，耗时长，检测成本高。MSPD技术由固相萃取技术发展而来，是将样品与C18等固相萃取材料一起研磨后填柱，通过优选淋洗溶剂将各种待测物选择性洗脱下来。该技术融合了传统样品前处理中的样品均质、提取、净化等过程，但其研磨及装柱条件的差异性对实验结果的稳定性具有显著影响。GPC方法采用多孔性凝胶为分离介质，主要基于目标物与干扰物分子体积差异，利用不同淋洗液可将其按分子质量大小依次洗出，多用于分离不同相对分子质量的高聚物分子，而对于与目标物分子尺寸相当的干扰基质净化能力较弱。ASE可同时采用多种有机溶剂在50～200℃范围温度和10.3～20.6MPa范围压力条件下进行萃取。相较于传统萃取方法，加速溶剂萃取具有提取快速、萃取效率高、待测组分回收率高等优点。但该方法设备昂贵，方法开发也较为复杂。QuEChERS技术是美国农业部Anastassiades教授等于2003年开发的一种用于农产品检测的快速样品前处理技术，其采用单一溶剂涡流提取后，经无机盐脱水、离心后得到上清液，即为样品提取液；于上清液中加入基质固相吸附剂，继续涡流、离心后，所得上清液即为样品净化液，可用于直接上机检测。与传统前处理方法相比，QuEChERS方法操作相对简单、实验技能要求较低，但其样品制备过程高度依赖多步涡流与离心过程，仍会限制其样品前处理的速度和便捷度。因此，亟需一种处理效率高，操作简便的基质净化材料及其相应样品前处理方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于动物源食品兽药多残留检测时样品前处理的净化吸附材料，能够提高样品前处理的速率。

本发明的目的在于提供一种动物源食品兽药残留检测样品前处理的方法，通过该方法，可快速、便捷化的实现动物源食品的基质净化，净化效果好，有助于显著提高动物源食品样品进行农残检测时的准确度和灵敏度，且检测成本低。相对于现有的应用极为广泛的QuECHERS方法，本方法可减少40％的处理时间和节约80％的净化材料成本。

本发明提供了一种动物源食品兽药多残留的检测方法，包括以下步骤：以前述技术方案所述的方法处理待测试样，得到待测样品；将所述样品进行LC-MS/MS检测。

本发明的发明思路如下：

三聚氰胺海绵是一种低密度、高开孔率、高比面积、高弹性的泡沫材料，作为一种良好的多孔材料，被广泛应用于油水分离、电化学和催化等领域。此外，三聚氰胺海绵本身具有良好的弹性，将其应用于液体净化时仅通过简单的物理挤压便可实现液体的快速回收，而无需离心、蒸馏等高能耗处理过程。然而，还未有研究报道将其应用于食品基质净化研究中。虽然三聚氰胺海绵本身已有一定的吸附与净化能力，然而三聚氰胺海绵基质净化效果较弱，且没有针对性。

鉴于此，发明人在此提供一种用硅烷化试剂处理后的改性三聚氰胺海绵，通过在三聚氰胺海绵表面键合疏水长链烷基、芳香平面结构、极性氨基等基团，可有效吸附待测动物源食品中的甾醇、挥发油、脂肪酸、色素、糖类、有机酸、蛋白质等干扰基质，极大地提高基质净化效果，降低干扰物质对检测的影响。此外，将改性三聚氰胺海绵用于动物源食品前处理的基质净化过程中，无需耗时冗长的高速涡流与离心等基质吸附与分离过程，仅通过数秒的浸渍-挤压的方式，即可快速、便捷、高效地去除动物源食品提取液中的干扰基质，从而有效简化基质净化流程，显著缩短样品前处理的时间。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法，其包括：

将待测动物源食品的均质样品与EDTA盐溶液以及酸化乙腈混合后，再加入氯化钠和硫酸钠继续混合，离心后所得上清液即为动物源食品提取液；

再用硅烷化试剂处理后的改性三聚氰胺海绵吸附所述动物源食品提取液，随后挤压所述改性三聚氰胺海绵，得到动物源食品净化液；稀释后，过滤，上机检测。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述改性三聚氰胺海绵的制备方法包括：

(1)将硅烷化试剂与非极性溶剂混合，得到改性溶液；

(2)将三聚氰胺海绵在所述改性溶液中浸渍1～60min后，挤压所述三聚氰胺海绵，洗涤后于90～150℃下干燥。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述硅烷化试剂为十八烷基三氯硅烷、十八烷基三甲氧基硅烷、苯基三氯硅烷、苯基三甲氧基硅烷、N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺等中的至少一种。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述硅烷化试剂为十八烷基三氯硅烷、苯基三氯硅烷、N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺，所述改性溶液中所述十八烷基三氯硅烷、所述苯基三氯硅烷以及所述N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺的质量浓度均为0.1～3.0％。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，用所述改性溶液对所述三聚氰胺海绵进行浸渍处理时，反应温度为5～50℃，在震荡条件下进行。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述改性三聚氰胺海绵与所述动物源食品提取液之间的料液比为0.5～3cm3/mL。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述动物源食品包括肉类、蛋类和奶类，所述动物源食品提取液的制备方法包括：

将匀质后的动物源样品与0.05～0.30mM的Na₂EDTA溶液、以及0～2％乙酸-乙腈溶液混合后，加入质量比为3～5:1的硫酸钠和氯化钠，于8000～10000rpm下离心5～15min。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述动物源样品的质量为1～10g，以所述动物源样品的质量为基准，所述Na₂EDTA溶液的体积为1～10mL，所述1％乙酸-乙腈溶液的体积为10～25mL。

一种用于动物源产品药物残留检测的快速基质吸附材料，其包括：

(1)将硅烷化试剂与非极性溶剂混合，得到改性溶液；

(2)将三聚氰胺海绵在所述改性溶液中浸渍1～60min后，挤压所述三聚氰胺海绵，洗涤后于90～150℃下干燥。

一种动物源食品兽药多残留的检测方法，其包括：按照上述的样品前处理方法处理待测试样，得到待测样品；将所述样品进行LC-MS/MS检测。

本发明的效果如下：

1.本发明提供了一种用于动物源食品兽药多残留检测时样品前处理的净化吸附材料，即硅烷化三聚氰胺海绵(Melamine Sponge，MS)，其可通过将三聚氰胺海绵浸润在含有疏水长链烷基、芳香平面、极性氨基等不同吸附功能团的硅烷化试剂溶液中，经简单清洗、干燥后制备得到，制备过程简单，材料均一性良好。

2.优选地，通过调节硅烷化试剂溶液中基质吸附功能团的种类、浓度以及浸泡时间等，可制备得到适宜于不同动食品源基质净化的改性三聚氰胺海绵材料，用于降低不同干扰物质的基质效应，从而提高检测准确度。

3.本发明所述硅烷化三聚氰胺海绵用于样品前处理的基质净化过程中，无需数分钟的高速涡流与离心等基质吸附与分离过程，仅通过数秒的浸渍-挤压的方式，即可快速、便捷、高效地去除动物源食品提取液中的干扰基质，从而有效简化基质净化流程，显著缩短样品前处理的时间。

4.本发明所述硅烷化三聚氰胺海绵用于样品前处理的基质净化过程中，可用于多种多类兽药的同时净化与分析，如磺胺类、喹诺酮类、内酰胺类、硝基咪唑类、氯霉素类、四环素类等，具有回收率高、基质效应低的特征。

5.本发明还提供了一种利用上述净化吸附材料进行动物源食品兽药多残留检测的前处理方法，试验表明，相对于现有的前处理方法QuEChERS消耗时间降低了40％，仅需要150min即可同时完成50个样品的前处理工作。回收率对比试验还表明通过本发明提供的前处理方法测定的结果还能够提高检测的准确率。采用改性三聚氰胺海绵吸附剂制备方法简单易行，原材料成本低廉易得。因而本发明提供的动物源食品兽药多残留检测前处理的方法能够缩短处理时间、提高检测的准确率，降低检测成本。

附图说明

图1为本发明改性与未改性三聚氰胺海绵扫描电镜微观结构。

图2为改性与未改性三聚氰胺海绵以及QuECHERS法用于鸡蛋兽药多残留回收率对比图。

具体实施方式

本发明提供了一种用于动物源食品兽药多残留检测时样品前处理的快速基质净化材料，即改性三聚氰胺海绵材料，该种材料的制备方法包括：

将硅烷化试剂与反应溶剂混合，得到改性溶液；

将三聚氰胺海绵浸渍在所述改性溶液中，挤压所述海绵，用反应溶剂洗涤数次；

将清洗后的三聚氰胺海绵材料置于高温条件干燥，即可得到所述改性三聚氰胺材料。

优选地，硅烷化试剂为十八烷基三氯硅烷、十八烷基三甲氧基硅烷、苯基三氯硅烷、苯基三甲氧基硅烷、N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺等中的至少一种。

更为优选地，所述改性溶液中十八烷基三氯硅烷、苯基三氯硅烷以及N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺的质量浓度均为0.5～3.0％。

优选地，反应溶剂为甲苯、苯、环己烷、正己烷。

优选地，用所述改性溶液对所述三聚氰胺海绵进行浸渍处理时，反应温度为5～50℃。

优选地，用所述改性溶液对所述三聚氰胺海绵进行浸渍处理时，浸渍时间为1～60min。

优选地，用所述改性溶液对所述三聚氰胺海绵进行浸渍处理时，在震荡条件下进行,振荡转速范围100～350rpm。

优选地，用所述改性溶液对所述三聚氰胺海绵进行浸渍处理后，用反应溶剂清洗2-5次。

优选地，将清洗后的三聚氰胺海绵材料置于高温条件干燥处理时，干燥温度为100～150℃。

优选地，将清洗后的三聚氰胺海绵材料置于高温条件干燥处理时，干燥时间为0.5～2h。

本发明提供一种用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法，其中本发明所述的动物源食品包括原料肉及其制品、禽蛋及其制品、奶及其制品等，主要用于该类食品在进行液质联用检测时的样品前处理，以有效去除提取液中的干扰基质，提高兽药多残留检测的准确度。

该样品前处理方法主要包括如下步骤：

步骤S1，制备动物源食品提取液：

将待测动物源食品的均质样品与EDTA盐溶液以及酸化乙腈混合后，得到第一混合物；

将所述第一混合物再与氯化钠和硫酸钠混合，得到第二混合物；

将所述第二混合物经高速离心后，得到动物源食品提取液。

优选地，所述动物源食品均质样本质量为1-10g。

优选地，EDTA盐溶液为含有0.05～0.30mM Na₂EDTA的水溶液，其作为竞争性螯合剂，能够有效降低匀浆样品中的金属离子与待检药物之间螯合作用。

优选地，所述酸化乙腈为含有0～4％乙酸的乙腈溶剂系统。

优选地，所述动物源食品质量、EDTA溶液体积与酸化乙腈溶剂体积比为(1-10)g：(1-10)mL:(10～25)mL。

优选地，动物源食品均质样品与EDTA盐溶液以及酸化乙腈混合后，涡流混合0.5-2min,得到第一混合物；所述涡流混合时间更优选为1min。

优选地，所述氯化钠和所述硫酸钠之间的质量比为1：3～5，更优选为1:4，其目的是增加水相的界面张力促进有机溶剂与水相分离,使待测兽药更充分地进入乙腈层。

优选地，所述动物源食品均质样品与EDTA盐溶液以及酸化乙腈混合后，涡流混合0.5-2min，得到第一混合物；所述涡流混合时间更优选为1min。

优选地，所述第一混合物再与氯化钠以及硫酸钠混合，涡流混合0.5-2min，得到第二混合物；所述涡流混合时间更优选为1min。

优选地，所述第二混合物经高速离心后，得到动物源食品提取液，离心转速为6000-10000rpm，离心时间为5-15min。

步骤S2，改性三聚氰胺海绵净化：

采用硅烷化三聚氰胺海绵吸附所述动物源食品提取液后，挤压所述改性三聚氰胺海绵，依次吸附-挤压循环数次，得到动物源食品净化液，稀释一倍后，过滤，上机检测。

优选地，所述改性三聚氰胺海绵与待测动物源食品均质样品之间的料液比为0.3～3cm³/mL。

优选地，所述改性三聚氰胺海绵与待测动物源食品均质样品用量分别为1cm³和1mL。

优选地，所述改性三聚氰胺海绵用于待测动物源食品提取液净化时，吸附与挤压循环次数为1-10次。

优选地，所述改性三聚氰胺海绵用于待测动物源食品提取液净化时，吸附与挤压时间均大于1秒。

优选地，所述动物源食品净化液采用甲醇-水溶剂(v/v，50/50)稀释一倍后，过滤，上机检测。

优选地，所述净化液稀释一倍后采用的过滤滤膜为0.22～0.45μm。

本发明提供了一种动物源食品兽药多残留的检测方法，包括以下步骤：以前述技术方案记载的前处理方法处理待测试样，得到待测样品；将所述待测样品进行LC-MS/MS检测。

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1：

本实施例提供一种用于鸡蛋兽药多残留检测的样品前处理方法，其包括：

精确称取5.0g不同加标水平的鸡蛋匀质样品于50mL离心管中，加入5mL 0.1mMNa₂EDTA溶液和20mL 1％乙酸-乙腈溶液后，涡旋混合1min；然后加入4.0g Na₂SO₄和1.0gNaCl，涡旋1min后，在9000rpm下离心10min，吸取上清液备用，即鸡蛋提取液；

将改性三聚氰胺海绵(1cm³)置于含有1mL加标鸡蛋提取液(100μg/kg)的净化管内，提取液被吸入其内部后，挤压改性海绵，得到鸡蛋净化液，用甲醇-水溶剂(v/v，50/50)稀释一倍，过滤后上机检测。

其中，改性三聚氰胺海绵制备过程如下：

将甲苯与十八烷基三氯硅烷(C₁₈H₃₇SiC_l3)按照质量比100：1混合，将三聚氰胺海绵剪裁成边长为1cm的立方体，浸渍于所述混合溶液中进行反应30min，随后用甲苯清洗3次，120℃烘干1h，即得改性三聚氰胺海绵(C18@MS-1％)。采用扫描电镜对该改性三聚氰胺海绵进行表征，结果如图1中c-d所示：

经LC-MS/MS测试方法对该样品前处理方法进行评价，如表1所示，所考察40种兽药基质效应均处于0.97～1.09，加标回收率均处于70.6％～109.6％。

表1.实施例1～5中各种动物源食品中40种兽药回收率与基质效应

实施例2

本实施例提供一种用于鸭蛋兽药多残留检测的样品前处理方法，其包括：

精确称取5.0g不同加标水平的鸭蛋匀质样品于50mL离心管中后，加入5mL 0.1mMNa₂EDTA溶液和20mL 1％乙酸-乙腈溶液后涡旋混合1min；然后加入4.0g Na₂SO₄和1.0gNaCl，涡旋1min后，在9000rpm下离心10min，吸取上清液备用，即鸭蛋提取液；

将改性三聚氰胺海绵(1cm³)置于含有1mL加标鸭蛋提取液(100μg/kg)的净化管内，提取液被吸入其内部后，挤压改性海绵，得到鸭蛋净化液，用甲醇-水溶剂(v/v，50/50)稀释一倍，过滤后上机检测。

其中，改性三聚氰胺海绵是通过如下步骤制备的：

将正己烷与N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺(NH₂(CH₂)₂NH₂(CH₂)₃Si(OCH₃)₃)按照质量比100：1混合，将三聚氰胺海绵剪裁成边长为1cm的立方体，浸渍于所述混合溶液中进行反应45min，用正己烷清洗3次，120℃烘干1.5h，即得改性三聚氰胺海绵(NH₂@MS-1％)，其扫描电镜结果如图1中e-f所示。

经LC-MS/MS测试方法对该样品前处理方法进行评价，如表1所示，所考察40种兽药基质效应处于0.94～1.10，低中高三水平加标回收率均处于72.6％～104.6％。

实施例3

本实施例提供一种用于猪肉兽药多残留检测的样品前处理方法，其包括：

精确称取2.0g不同加标水平的猪肉匀质样品于50mL离心管中后，加入8mL 0.1mMNa₂EDTA溶液和20mL 1％乙酸-乙腈溶液后涡旋混合1min；然后加入4.0g Na₂SO₄和1.0gNaCl，涡旋1min后，在9000rpm下离心10min，吸取上清液备用，即猪肉提取液；

将改性三聚氰胺海绵(1cm³)置于含有1mL加标猪肉提取液(100μg/kg)的净化管内，提取液被吸入其内部后，挤压改性海绵，得到猪肉净化液，用甲醇-水溶剂(v/v，50/50)稀释一倍，过滤后上机检测。

其中，改性三聚氰胺海绵是通过如下步骤制备的：

将甲苯、十八烷基三氯硅烷(C₁₈H₃₇SiC_l3)和N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺(NH₂(CH₂)₂NH₂(CH₂)₃Si(OCH₃)₃)按照质量比100：1：1混合，将三聚氰胺海绵剪裁成边长为1cm的立方体，浸渍于所述混溶溶液中进行反应15min，随用甲苯清洗3次，120℃烘干0.5h，即得改性三聚氰胺海绵(C18/NH₂@MS-1％)，其扫描电镜结果如图1中g-h所示。

经LC-MS/MS测试方法对该样品前处理方法进行评价，如表1所示，所考察40种兽药基质效应处于0.96～1.08，加标回收率均处于72.1％～97.6％。

实施例4

本实施例提供一种用于鸡肉兽药多残留检测的样品前处理方法，其包括：

精确称取2.0g不同加标水平的鸡肉匀质样品于50mL离心管中，加入8mL 0.1mMNa₂EDTA溶液和20mL 1％乙酸-乙腈溶液后涡旋混合1min；然后加入4.0g Na₂SO₄和1.0gNaCl，涡旋1min后，在9000rpm下离心10min，吸取上清液备用，即鸡肉提取液；

将改性三聚氰胺海绵(1cm³)置于含有1mL加标鸡肉提取液(100μg/kg)的净化管内，提取液被吸入其内部后，挤压改性海绵，得到鸡肉净化液，用甲醇-水溶剂(v/v，50/50)稀释一倍，过滤后上机检测。

其中，改性三聚氰胺海绵制备过程如下：

将甲苯、十八烷基三氯硅烷(C₁₈H₃₇SiCl₃)、N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺(NH₂(CH₂)₂NH₂(CH₂)₃Si(OCH₃)₃)与苯基三氯硅烷(PheSiCl₃)按照质量比100：1.5：1.5：1.5混合，将三聚氰胺海绵剪裁成边长为1cm的立方体，浸渍于所述混溶溶液中进行反应15min，随后用甲苯清洗3次，120℃烘干0.5h，即得改性三聚氰胺海绵(C18/NH₂/Phe@MS-1.5％)，其扫描电镜结果如图1中i-j所示。

经LC-MS/MS测试方法对该样品前处理方法进行评价，如表1所示，所考察40种兽药基质效应处于0.92～1.09，加标回收率均处于71.1％～103.8％。

实施例5

本实施例提供一种用于牛奶兽药多残留检测的样品前处理方法，其包括：

精确称取4.0g的牛奶样品于50mL离心管中，加入2mL 0.25mM Na₂EDTA溶液和20mL1％乙酸-乙腈溶液后，涡旋混合1min；然后加入4.0g Na₂SO₄和1.0g NaCl，涡旋1min后，在9000rpm下离心10min，吸取上清液备用，即牛奶提取液；

将改性三聚氰胺海绵(1cm³)置于含有1mL加标牛奶提取液(100μg/kg)的净化管内，提取液被完全吸入三聚氰胺海绵内部后，缓慢挤压三聚氰胺海绵，得到牛奶净化液，用甲醇-水溶剂(v/v，50/50)稀释一倍，过滤后上机检测。

其中，改性三聚氰胺海绵制备过程如下：

将甲苯、十八烷基三氯硅烷(C₁₈H₃₇SiCl₃)、N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺(NH₂(CH₂)₂NH₂(CH₂)₃Si(OCH₃)₃)与苯基三氯硅烷(PheSiCl₃)按照质量比100：1：1：1混溶制得混溶溶液，将三聚氰胺海绵剪裁成边长为1cm的立方体，浸渍于所述混溶溶液中进行反应15min，随后用甲苯清洗3次，120℃烘干0.5h，即得改性三聚氰胺海绵(C18/NH₂/Phe@MS-1％)，其扫描电镜结果如图1中k-l所示。

经LC-MS/MS测试方法对该样品前处理方法进行评价，如表1所示，所考察40种兽药基质效应处于0.87～1.13，加标回收率均处于70.3％～102.4％。

实施例1～5的实验结果显示，本发明提供的检测方法在多种动物源食品中兽药多残留检测中均具有良好的基质净化效果和准确度，基质效应满足0.8～1.2，回收率满足70％～120％。利用本发明提供的净化材料以及基于该吸附材料的动物源食品兽药多残留检测样品前处理方法能够使待测样品中的兽药多残留检测结果具有较高的准确度。

对比例1

本实施例提供一种将未改性三聚氰胺海绵用于鸡蛋兽药多残留检测的样品前处理方法，其包括：

精确称取5.0g鸡蛋匀质样品(加标水平100μg/kg)于50mL离心管中，加入5mL0.1mM Na₂EDTA溶液和20mL 1％乙酸-乙腈溶液后，涡旋混合1min；然后加入4.0g Na₂SO₄和1.0g NaCl，涡旋1min后，在9000rpm下离心10min，吸取上清液备用，即鸡蛋提取液；

将未改性三聚氰胺海绵(1cm³)置于含有1mL加标鸡蛋提取液(100μg/kg)的净化管内，提取液被吸入其内部后，挤压改性海绵，得到鸡蛋净化液，用甲醇-水溶剂(v/v，50/50)稀释一倍，过滤后上机检测。

经LC-MS/MS测试方法对该样品前处理方法进行评价，如图2和表2所示，所考察40种兽药加标回收率均处于62.0％～87.4％。

对比例2

本对比例采用目前应用极为广泛的QuECHERS方法进行样品前处理，步骤包括：

精确称取5.0g匀质的鸡蛋加标样品(100μg/kg)于50mL离心管中后加入5mL 0.1mMNa₂EDTA溶液和20mL 1％乙酸-乙腈溶液后涡旋混合1min，然后加入4.0g Na₂SO4和1.0gNaCl，涡旋1min后，在9000rpm下离心10min，吸取上清液备用，即鸡蛋提取液；

取2mL鸡蛋提取液于含有50mg PSA和50mg C18的离心管中，涡旋1min后，在8000rpm下离心10min。取离心后的上清净化液，用甲醇-水溶剂(v/v，50/50)稀释一倍，过滤后上机检测。

经LC-MS/MS测试方法对该样品前处理方法进行评价，如图2和表2所示，所考察40种兽药加标回收率均处于48.0％～93.8％。

表2.不同净化材料应用于鸡蛋中兽药多残留检测的回收率、消耗时间、净化材料成本对比

统计和分析实施例1、对比例1以及对比例2前处理方法中兽药多残留回收率及其分布、以及不同方法所需消耗时间、基质称重减少占比等对比结果分别见图2和表2。从各兽药回收率分布的范围上比较，本发明提供的兽药多残留检测方法与目前应用极为广泛的QuECHERS方法测定的样品加标回收率主要集中于80％～90％，明显优于未改性三聚氰胺海绵(70％～80％)，而QuECHERS方法中仍有部分化合物低于60％。相比之下，本发明提供的检测方法各兽药残留回收率满足均70％-120％，说明本发明提供的前处理方法能够满足动物源食品兽药多残留分析的要求。此外，在样品前处理速度上，以50个样品为一组同时处理，本专利提供的方法需要150min，而QuECHERS方法需要250min，因此采用本方法可减少40％的处理时间。因此，本方法前处理速度更快。更大地优势体现在的样品净化材料成本上，以50个样品为一组，本专利提供的方法基质净化材料成本为30元，而QuECHERS方法基质净化材料成本为150元，采用本方法可减少80％的净化材料成本。因此，本方法经济性更佳。

综上，本发明提供的动物源食品兽药残留检测样品前处理方法通过物理吸附与挤压即可完成对待测样品中的基质净化，避免了在基质净化过程中的涡旋和离心等基质吸附与分离过程，有效地提高了样品前处理的处理速度；本发明利用的三聚氰胺海绵原材料试剂与化学品等皆廉价易得，改性过程简单，所得改性三聚氰胺海绵材料耗费低，显著降低了本方法的处理成本。同时，回收率结果也验证本方法可以提供与目前应用广泛的QuECHERS方法相当或更佳的准确度。因此，本方法在快捷性、实用性、经济方面均表现出极佳的应用前景。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (7)

1.一种用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法，其特征在于，其包括：

将待测动物源食品的均质样品与Na₂EDTA溶液以及酸化乙腈混合后，再加入氯化钠和硫酸钠继续混合，离心后所得上清液即为动物源食品提取液，其中所述动物源食品包括肉类、蛋类和奶类；

再用硅烷化试剂处理后的改性三聚氰胺海绵吸附所述动物源食品提取液，随后挤压所述改性三聚氰胺海绵，得到动物源食品净化液；稀释后，过滤，上机检测；

所述改性三聚氰胺海绵的制备方法包括：

（1）将硅烷化试剂与非极性溶剂混合，得到改性溶液，其中非极性溶剂为甲苯、苯、环己烷、正己烷中的一种；

（2）将三聚氰胺海绵在所述改性溶液中浸渍1~60 min后，挤压所述三聚氰胺海绵，洗涤后于90~150℃下干燥；

所述硅烷化试剂为十八烷基三氯硅烷、十八烷基三甲氧基硅烷、苯基三氯硅烷、苯基三甲氧基硅烷、N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法，其特征在于，所述硅烷化试剂为十八烷基三氯硅烷、苯基三氯硅烷和N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺，所述改性溶液中所述十八烷基三氯硅烷、所述苯基三氯硅烷以及所述N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺的质量浓度均为0.1~3.0%。

3.根据权利要求1所述的用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法，其特征在于，用所述改性溶液对所述三聚氰胺海绵进行浸渍处理时，反应温度为5~50℃，在震荡条件下进行。

4.根据权利要求1所述的用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法，其特征在于，所述改性三聚氰胺海绵与所述动物源食品提取液之间的料液比为0.5~3 cm³/mL。

5.根据权利要求1所述的用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法，其特征在于，所述动物源食品提取液的制备方法包括：

将匀质后的动物源样品与0.05~0.30 mM 的Na₂EDTA溶液、以及1%乙酸-乙腈溶液混合后，加入质量比为3~5:1的硫酸钠和氯化钠，于8000~10000 rpm下离心5~15 min。

6.根据权利要求5所述的用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法，其特征在于，所述动物源样品的质量为1~10 g，以所述动物源样品的质量为基准，所述Na₂EDTA溶液的体积为1~10 mL，所述乙酸-乙腈溶液的体积为10~25 mL。

7.一种动物源食品兽药多残留的检测方法，其特征在于，其包括：按照权利要求1~6任一项所述的样品前处理方法处理待测试样，得到待测样品；将所述待测样品进行LC-MS/MS检测。

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