CN115469029B - 一种动物肌肉中多种兽药残留的检测方法及其应用 - Google Patents
一种动物肌肉中多种兽药残留的检测方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种动物肌肉中多种兽药残留的检测方法及其应用，所述检测方法操作简便、快捷、溶剂用量少，本发明首次将该方法应用于动物源性食品兽药残留的检测中，能够同时对动物源性食品中固醇激素类、磺脲类、糖皮质激素类、非甾体类抗炎药、磺胺类等高达15大类55种兽药进行快速的定性、定量分析，尤其能够兼顾强极性的头孢类(如头孢克洛、头孢克肟)、四环素类抗生素(如四环素、土霉素)和弱极性的固醇激素类药物(如苯丙酸诺龙)药物的同时检测，检出限完全能够满足检测需求，且检测效率大大提升，可在动物源性食品兽药残留的日常监督检测领域获得广泛的应用。
Description
技术领域
本发明属于兽药残留检测技术领域，具体涉及一种动物肌肉中多种兽药残留的检测方法及其应用。
背景技术
畜禽肉是人类主要的食物之一，畜禽肉质量安全对人类的健康十分重要。兽药残留是指用药后蓄积或存留于畜禽体内或产品中的原型药物或其代谢产物。兽药残留严重影响动物性食品安全、畜牧业的可持续发展，更严重的是直接危害人体健康和生命安全，对人类健康危害极大。因此，必须对动物性食品进行兽药残留含量的检测，防止问题畜禽产品流入市场各环节，保证人们的“餐桌安全”。目前，兽药残留检测技术主要有免疫分析、分子印迹、微生物生化检测以及色谱-质谱联用等，其中，液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)兼具高分离能力、高灵敏度和高特异性，应用最为广泛。由于肉基质复杂，兽药种类繁多、理化性质差异大，现有LC-MS/MS法的缺点在于检测项目和应用范围以兽药分类检测为主。今年初农业农村部与国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局联合发布了36项食品中兽药残留检测国家标准，其中只有1项为同时检测动物性食品中3类兽药残留(GB31658.17-2021《食品安全国家标准-动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》)，其余均为单种或单类兽药残留检测，且样品前处理方法复杂耗时。
随着人们生活水平的日益提高，对于畜禽肉的需求越来越高，因此，对于畜禽肉中药物残留检测的要求也越来越高。目前，现有的兽药残留检测技术应用范围以分类检测为主，特别是难以兼顾一些强极性的头孢类(如头孢克洛、头孢克肟)、四环素类抗生素(如四环素、土霉素)和弱极性的固醇激素类药物(如苯丙酸诺龙)的同时检测，不能满足当前的畜禽肉中多种兽药残留的同时快速检测的需求。本发明为了解决上述技术问题，首次建立了一套覆盖兽药种类广的动物肌肉中兽药高效筛查检测方法，该方法能够同时对动物源性食品中高达15大类(55种)兽药(固醇激素类、磺脲类、糖皮质激素类、非甾体类抗炎药、磺胺类、苯二氮卓类、硝基咪唑类、β-受体激动剂类、喹诺酮类、大环内酯类抗生素、林可酰胺类抗生素、氯霉素类抗生素、四环素类抗生素、头孢类抗生素、金刚烷胺类)进行高灵敏度、快速准确检测。首先，本发明采用0.1mol/L Na2EDTA溶液浸润粉碎后的肉样品，再加入乙腈(与Na2EDTA溶液体积比为7:3)进行提取并同时起到使肉基质中的蛋白质变性沉淀的作用，振荡、超声、离心后取上清液进行通过式固相萃取净化，再用一定量甲醇进一步洗脱与柱填料吸附较强的固醇激素类化合物，经上述简单的操作，包括强极性的头孢类、四环素类抗生素和弱极性的固醇激素类药物在内的15大类兽药回收率均在70％以上。该检测方法具有简便快捷、覆盖兽药范围广、灵敏度高和准确可靠的优点，适用于动物肌肉中多种兽药残留的快速筛查与确证分析。
发明内容
为了克服上述现有技术中存在的技术问题，本发明提供了一种动物肌肉中多种兽药残留的检测方法及其应用。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
本发明的第一方面提供了一种动物肌肉中多种兽药残留的检测方法。
进一步，所述检测方法包括如下步骤：
(1)样品溶液制备：取动物肌肉样品，绞碎，称取2.00±0.02g样品，加入3mL 0.1MEDTA溶液涡旋振荡均质得到均质样品；向均质样品中加入7mL乙腈涡旋振荡、超声、离心得到上清液；采用Oasis PRiME HLB固相萃取柱和2mL甲醇和对上清液进行净化洗脱，得到的流出液涡旋混匀、旋转蒸发至干，用100μL 50％甲醇-水溶液复溶得到待测样品溶液；
(2)标准工作溶液配制：分别移取100μL 100mg/L的55种兽药标准品溶液于10mL容量瓶，加入50％甲醇-水溶液定容，得到浓度为1mg/L的混合标准溶液；称取2.00±0.02g不含55种兽药的空白动物肌肉样品，进行提取和净化后，得到空白基质溶液；用空白基质溶液将混合标准溶液逐级稀释得到质量浓度为0.5、1、5、10、20、50、100μg/L的系列基质混合标准工作溶液，用于标准工作曲线的绘制，即基质匹配校准曲线；
(3)超高效液相色谱-串联质谱检测：采用超高效液相色谱-串联质谱仪对步骤(1)中得到的样品溶液进行检测，所述超高效液相色谱-串联质谱仪的参数如下：
色谱条件：Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱，柱温35℃，进样量5μL，流速0.4mL/min，流动相A为含0.1％甲酸和1mM甲酸铵的水溶液，流动相B为含0.1％甲酸和1mM甲酸铵的乙腈，洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0-0.5min 5％B，0.6-2min 20％-40％B，2-5min 40％-55％B，5-5.5min 55％-99％B，5.5-8.5min 99％B，8.6min 5％B，8.6-10min 5％B；
质谱条件：电喷雾离子源(ESI+/ESI-)，离子源喷雾电压：正离子模式5500V，负离子模式-4500V；离子源温度(TEM)350℃，气帘气(Curtain gas)35psi，雾化气(Gas 1)65psi，辅助加热气(Gas 2)55psi，质谱扫描方法为多时间段的多反应检测扫描方法，即确定每个化合物的保留时间后，在其保留时间前后60s对它的离子对进行监测，手动调谐优化55种兽药母离子和子离子，选取两组灵敏度最佳的离子对作为定量离子对和定性离子对，获得最佳的去簇电压(DP)和碰撞能量(CE)，最终得到优化的质谱采集参数；
所述55种兽药包括甲睾酮、苯丙酸诺龙、醋酸甲羟孕酮、格列美脲、格列本脲、可的松、氢化可的松、醋酸氢化可的松、哈西奈德、地塞米松、醋酸地塞米松、倍他米松戊酸酯、吲哚布洛芬、卡洛芬、双氯芬酸、吲哚美辛、氟芬那酸、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、咪哒唑仑、阿普唑仑、地西泮、甲硝唑、阿苯达唑、替硝唑、莱克多巴胺盐酸盐、沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、西马特罗、氯丙那林、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、红霉素、罗红霉素、林可霉素、克林霉素、四环素、土霉素、金霉素、头孢氨苄、头孢克洛、头孢克肟、头孢喹肟、头孢拉定、金刚烷胺、金刚乙胺、甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素。
进一步，步骤(1)中所述涡旋振荡的条件为2500rpm/min转速下涡旋振荡5min。
进一步，步骤(1)中所述超声、离心的条件为超声5min，以10000rpm/min转速离心5min。
进一步，步骤(1)中所述净化洗脱具体包括如下步骤：取1mL上述上清液，流过Oasis PRiME HLB固相萃取柱将其润湿并弃去流出液，然后取4mL上清液以1滴/s流速通过Oasis PRiME HLB固相萃取柱，再以2mL甲醇通过Oasis PRiME HLB固相萃取柱进一步洗脱，将全部流出液涡旋混匀并取600μL旋转蒸发至干，用100μL 50％甲醇-水溶液复溶，以15000rpm/min转速离心5min得到待测样品溶液。
进一步，步骤(1)中所述Oasis PRiME HLB固相萃取柱的参数规格为6cc、200mg。
进一步，步骤(3)中所述Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱的参数规格为2.1mm×100mm，1.7μm。
进一步，步骤(3)中所述手动调谐优化的过程包括如下步骤：将55种兽药的0.1mg/L标准溶液分别通过针泵进样方式进行质谱方法调谐，在ESI+和ESI-模式下进行扫描，手动调谐优化55种兽药母离子和子离子，选取两组灵敏度最佳的离子对作为定量离子对和定性离子对，获得最佳的去簇电压和碰撞能量，在优化的质谱参数和液相条件下，多反应监测扫描模式采集55种兽药混标溶液的质谱信号，确认每一种兽药的保留时间，最终采用多时间段的多反应检测扫描方法对55种兽药进行检测。
进一步，所述检测方法还包括数据处理与分析，所述数据处理与分析包括如下步骤：Analyst 1.7采集样品数据后，在Sciex OS 1.7.0中对数据进行处理，自动计算化合物定性离子对与定量离子对峰面积比值(相对离子丰度，Ion Ratio)，根据预先设置的相对离子丰度规则和化合物保留时间定性判定化合物的检出，积分所得定量离子对峰面积自动代入基质匹配标准曲线对样品中55种兽药残留进行定量检测。
进一步，步骤(2)中配制得到的空白基质溶液和混合标准工作溶液于-20℃冰箱中保存备用。
在本发明的具体实施方案中，由于动物肌肉基质含有大量蛋白质、脂肪、磷脂、氨基酸等，即使通过样品前处理也不可能完全去除，在质谱检测过程中会产生基质效应，严重干扰目标物的检测，因此，本发明采用空白基质配制标准曲线进行定量分析以减弱基质效应的影响，提高定量结果的准确性。
在本发明的具体实施方案中，本发明经实验验证发现，当不使用甲醇洗脱样品时，苯丙酸诺龙回收率仅为4.1％；当仅使用1mL甲醇洗脱时，苯丙酸诺龙回收率为61.8％；当使用2mL甲醇进一步洗脱，其回收率提高至101.2％；当使用3mL甲醇洗脱时其回收率与2mL基本相同，但四环素类抗生素(四环素、土霉素)的回收率由89.6％-95.6％降低到72.3％-74.1％。因此，2mL甲醇为最优洗脱体积，这一结果属于本领域技术人员在未经实验验证之前所预料不到的技术效果。
本发明的第二方面提供了一种动物肌肉中多种兽药残留检测的处理方法。
进一步，所述处理方法包括如下步骤：
(a)绞碎与均质：取动物肌肉样品，绞碎，称取2.00±0.02g样品，加入3mL0.1MEDTA溶液涡旋振荡均质得到均质样品；
(b)样品中兽药的提取：向均质样品中加入7mL乙腈涡旋振荡、超声、离心得到上清液；
(c)净化洗脱：采用Oasis PRiME HLB固相萃取柱和2mL甲醇对上清液进行净化洗脱，得到的流出液涡旋混匀、旋转蒸发至干，用100μL 50％甲醇-水溶液复溶得到待测样品溶液；
优选地，步骤(a)中所述涡旋振荡的条件为2500rpm/min转速下涡旋振荡5min；
优选地，步骤(b)中所述涡旋振荡的条件为2500rpm/min转速下涡旋振荡5min；
优选地，步骤(b)中所述超声、离心的条件为超声5min，以10000rpm/min转速离心5min；
优选地，步骤(c)中所述净化洗脱具体包括如下步骤：取1mL上述上清液，流过Oasis PRiME HLB固相萃取柱将其润湿并弃去流出液，然后取4mL上清液以1滴/s流速通过Oasis PRiME HLB固相萃取柱，再以2mL甲醇通过Oasis PRiME HLB固相萃取柱进一步洗脱，将全部流出液涡旋混匀并取600μL旋转蒸发至干，用100μL 50％甲醇-水溶液复溶，以15000rpm/min转速离心5min得到待测样品溶液；
优选地，步骤(c)中所述Oasis PRiME HLB固相萃取柱的参数规格为6mL、200mg。
在本发明的具体实施方案中，本发明通过对比实验验证首次发现，只有乙腈：EDTA＝7:3对动物肌肉样品中的目标物(15大类55种兽药)同时提取具有较高的回收率(所有兽药回收率均在70％-120％之间)，且显著优于甲醇：水、乙腈：水、乙腈：EDTA：PBS，取得了预料不到的技术效果。
本发明的第三方面提供了如下任一方面的应用：
(1)本发明第一方面所述的检测方法在检测动物肌肉中固醇激素类药物、磺脲类药物、糖皮质激素类药物、非甾体类抗炎药物、磺胺类药物、苯二氮卓类药物、硝基咪唑类药物、β-受体激动剂类药物、喹诺酮类药物、大环内酯类抗生素药物、林可酰胺类抗生素药物、氯霉素类抗生素药物、四环素类抗生素药物、头孢类抗生素药物、金刚烷胺类药物残留中的应用；
(2)本发明第二方面所述的处理方法在检测动物肌肉中固醇激素类药物、磺脲类药物、糖皮质激素类药物、非甾体类抗炎药物、磺胺类药物、苯二氮卓类药物、硝基咪唑类药物、β-受体激动剂类药物、喹诺酮类药物、大环内酯类抗生素药物、林可酰胺类抗生素药物、氯霉素类抗生素药物、四环素类抗生素药物、头孢类抗生素药物、金刚烷胺类药物残留中的应用。
在本发明的具体实施方案中，本发明所提供的检测方法和/或处理方法能够用于动物肌肉组织中15大类55种兽药的快速准确定量检测，尤其同时能够兼顾检测强极性的头孢类、四环素类抗生素和弱极性的固醇激素类药物。目前，现有技术中尚未见能够同时兼顾检测强极性的头孢类(特别地，头孢克洛、头孢克肟)、四环素类抗生素(特别地，四环素、金霉素)和弱极性的固醇激素类(特别地，苯丙酸诺龙)药物的技术方案的相关报道，本发明为首次公开报道。
其中，所述15大类兽药包括固醇激素类药物、磺脲类药物、糖皮质激素类药物、非甾体类抗炎药物、磺胺类药物、苯二氮卓类药物、硝基咪唑类药物、β-受体激动剂类药物、喹诺酮类药物、大环内酯类抗生素药物、林可酰胺类抗生素药物、氯霉素类抗生素药物、四环素类抗生素药物、头孢类抗生素药物、金刚烷胺类药物。
其中，所述55种兽药包括甲睾酮、苯丙酸诺龙、醋酸甲羟孕酮、格列美脲、格列本脲、可的松、氢化可的松、醋酸氢化可的松、哈西奈德、地塞米松、醋酸地塞米松、倍他米松戊酸酯、吲哚布洛芬、卡洛芬、双氯芬酸、吲哚美辛、氟芬那酸、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、咪哒唑仑、阿普唑仑、地西泮、甲硝唑、阿苯达唑、替硝唑、莱克多巴胺盐酸盐、沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、西马特罗、氯丙那林、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、红霉素、罗红霉素、林可霉素、克林霉素、四环素、土霉素、金霉素、头孢氨苄、头孢克洛、头孢克肟、头孢喹肟、头孢拉定、金刚烷胺、金刚乙胺、甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素。
相对于现有技术，本发明具有的优点和有益效果如下：
(1)本发明提供了一种动物肌肉中55种兽药残留的快速检测方法及其应用，所述检测方法能够检测的兽药种类丰富，可同时对15大类55种兽药残留进行快速的定性、定量分析，相对于现有技术，检测效率大大提高，此外，所述方法能同时兼顾检测强极性的头孢类、四环素类抗生素和弱极性的固醇激素类药物，操作简便，灵敏度高，准确性好，可在动物食品兽药残留的日常监督检测领域获得广泛的应用，并为本领域兽药残留检测研究提供了新思路、新手段和技术支持；
(2)相对于现有技术，本发明检测的兽药化合物的种类更加全面，更加符合实际应用需求。本发明在采用改良的Oasis PRiME HLB通过式固相萃取样品前处理技术基础上，结合超高效液相色谱-串联质谱高灵敏度、高通量、定量准确的优势，建立了一种同时快速检测动物肌肉中55种兽药残留的方法，适用于大批量动物肌肉中痕量多种类兽药残留的快速筛查与确证分析，能够实现对不同性质的兽药残留进行准确和快速的检测，满足多种兽药残留的筛查和定量的需求，应用前景广阔；
(3)在本发明提供的样品净化方法中，将提取液通过Oasis PRiME HLB固相萃取柱可吸附脂肪、磷脂等杂质，而待测目标物不被固相萃取填料保留，从而快速实现目标物的分离和杂质净化。与传统固相萃取相比省去了较为繁琐的活化、平衡和淋洗杂质等步骤，操作简便且溶剂用量少。此外，使用优化体积的甲醇进行洗脱，大幅提高了弱极性药物苯丙酸诺龙的回收率，当不使用甲醇洗脱时其回收率仅为4.1％；当仅使用1mL甲醇洗脱时，苯丙酸诺龙回收率为61.8％；当使用2mL甲醇进一步洗脱，其回收率提高至101.2％；当使用3mL甲醇洗脱时回收率与2mL基本相同，但四环素类抗生素的回收率降低，因此，2mL甲醇为本发明提供的检测方法中最优的洗脱体积；
(4)本发明优化了一系列反相色谱柱，最终选用了55种兽药峰形最佳的WatersAcquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1mm×100mm，1.7μm)，此外，本发明对流动相A相、B相成分酸度、含盐浓度进行了优化，最终得到最优的色谱条件和质谱条件，在该最优条件下，55种兽药提取离子流峰形良好，互相之间无干扰，峰响应强度最高，能够用于动物肌肉中多种兽药残留的快速筛查与确证分析，具有较好的适用性和应用性；
(5)本发明经对比实验验证，首次发现了只有乙腈：EDTA(乙腈：EDTA＝7:3)对动物肌肉样品中的目标物(15大类兽药)同时提取具有较高的回收率(对所有兽药回收率均在70％-120％之间)，且显著优于甲醇：水、乙腈：水、乙腈：EDTA：PBS，取得了预料不到的技术效果。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1为提取液(乙腈：EDTA)中不同乙腈比例对代表性兽药回收率影响的结果统计图(不使用甲醇洗脱)；
图2为不同用量的甲醇洗脱对药物残留回收率影响的结果统计图；
图3为不同种类的提取剂对动物肌肉中15大类兽药回收率影响的结果统计图；
图4为4类动物肌肉中各兽药的基质效应图，其中，A图：猪肉基质效应，B图：牛肉基质效应，C图：羊肉基质效应，D图：鸡肉基质效应；
图5为本发明的猪肉阴性样品添加55种兽药(50μg/kg)的总离子流色谱图；
图6为兽药阳性实际样品中检出兽药提取离子流色谱图，其中，A图：猪肉-3，土霉素，B图，猪肉-1，金霉素，C图：牛肉-1，阿苯达唑，D图：猪肉-4，环丙沙星。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解为：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。下述实施例中所用的试剂、材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1样品溶液制备
1、实验材料
猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉购于当地市场，破壁粉碎机购于中国天喜公司，Na2EDTA购于Sigma公司，超纯水购于Merck公司，乙腈购于Merck公司，甲醇购于Merck公司，OasisPrime HLB固相萃取柱(6cc，200mg)购于美国Waters公司。
2、实验方法
(1)绞碎与均质：将新鲜或解冻的空白动物肌肉组织于破壁粉碎机中绞碎，准确称取2g(精确至0.02g)样品于50mL聚丙烯离心管中，加入3mL 0.1M EDTA溶液，于2500rpm/min转速下涡旋振荡5min均质。本发明在乙腈提取前增加EDTA水溶液均质步骤，一是解决了直接加入乙腈易使蛋白含量高、水分含量低的肌肉聚集成团状，不利于分散和提取待测物的问题，二是EDTA可以与金属离子形成稳定的配合物，从而大大降低了四环素类药物与金属离子络合，提高四环素类药物的提取效率。现有常规技术通常或使用水进行均质后再加入提取液提取，或直接加入提取液进行提取，不能同时起到在提取前均质样品和降低四环素类药物与金属离子络合的作用。
(2)样品中兽药提取：向均质样品中加入7mL乙腈，于2500rpm/min转速下涡旋振荡5min，超声5min，以10000rpm/min转速离心5min，上清液备用。
(3)净化：取1mL上述上清液，流过Oasis PRiME HLB固相萃取柱(6mL，200mg)将其润湿并弃去流出液，然后取4mL上清液以1滴/s流速通过Oasis PRiME HLB固相萃取柱，再以2mL甲醇通过Oasis PRiME HLB固相萃取柱进一步洗脱，将全部流出液涡旋混匀并取600μL旋转蒸发至干，用100μL 50％甲醇-水溶液复溶，以15000rpm/min转速离心5min，上清液用于UPLC-MS/MS检测。
3、实验结果
使用水均质四环素类抗生素的回收率为23-39％，使用EDTA水溶液均质四环素类抗生素的回收率为72-85％，相比于纯水均质大幅提升。
本发明中乙腈与EDTA溶液的配比对15大类不同极性兽药的同时高效提取起到非常关键的作用。本实施例考察了提取液中乙腈与EDTA溶液配比(50％、60％、70％、80％、90％)对不同极性兽药回收率的影响，即提取液通过小柱后不进一步洗脱，发现所有兽药中极性最弱的苯丙酸诺龙的回收率在每一个乙腈配比条件下均低于50％，除此之外，只有在乙腈与EDTA溶液配比为70％时能兼顾其它所有强极性和弱极性兽药的高效提取，回收率均能达到70％-120％。低乙腈配比(50％、60％)使弱极性兽药回收率偏低，高乙腈配比(80％、90％)使强极性兽药回收率偏低(见图1)。
在净化时，当4mL上清液通过小柱时，由于其中有机相乙腈比例较高，待测目标物几乎不被反相固相萃取填料保留，而肉基质中共提取的磷脂、脂肪等干扰物易被吸附于填料，从而快速实现目标物的分离和杂质净化。本发明进一步使用2mL甲醇洗脱是为了提高弱极性药物苯丙酸诺龙的回收率，结果如图2所示，结果显示，当提取液通过净化柱后，若不使用甲醇洗脱时其回收率仅为4.1％；当仅使用1mL甲醇洗脱时，苯丙酸诺龙回收率为61.8％；当使用2mL甲醇进一步洗脱，其回收率提高至101.2％；当使用3mL甲醇洗脱时回收率与2mL基本相同，但极性较强的土霉素、四环素和头孢喹肟的回收率大幅降低，这是因为更大体积的甲醇洗脱出更多的杂质，对这几种药物的检测产生了干扰。因此2mL甲醇为最优洗脱体积，在该条件下，既能够保证受影响最大的苯丙酸诺龙回收率达到近100％，也能保证不明显干扰其它药物的检测。
实施例2标准工作溶液配制
1、实验材料
55种兽药标准品溶液(100mg/L)购于天津阿尔塔科技有限公司，所述55种兽药包括甲睾酮、苯丙酸诺龙、醋酸甲羟孕酮、格列美脲、格列本脲、可的松、氢化可的松、醋酸氢化可的松、哈西奈德、地塞米松、醋酸地塞米松、倍他米松戊酸酯、吲哚布洛芬、卡洛芬、双氯芬酸、吲哚美辛、氟芬那酸、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、咪哒唑仑、阿普唑仑、地西泮、甲硝唑、阿苯达唑、替硝唑、莱克多巴胺盐酸盐、沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、西马特罗、氯丙那林、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、红霉素、罗红霉素、林可霉素、克林霉素、四环素、土霉素、金霉素、头孢氨苄、头孢克洛、头孢克肟、头孢喹肟、头孢拉定、金刚烷胺、金刚乙胺、甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素。甲醇购于德国Merck公司。
混合标准溶液：取55种兽药标准品溶液(100mg/L)各100μL于10mL容量瓶，加入50％甲醇-水定容，得到浓度为1mg/L的混合标准溶液，于-20℃冰箱保存。
2、实验方法
空白基质溶液：称取2g(精确至0.02g)不含15类55种兽药的空白动物肌肉样品，进行提取和净化后，得到相应的空白基质溶液，将该溶液置于-20℃冰箱中保存，备用。
基质匹配校准曲线：用空白基质溶液将混合标准溶液逐级稀释得到质量浓度为0.5，1，5，10，20，50，100μg/L的系列基质混合标准工作溶液，用于做标准工作曲线，即基质匹配校准曲线。由于动物肌肉基质含有大量蛋白质、脂肪、磷脂、氨基酸等，即使通过样品前处理也不可能完全去除，在质谱检测过程中会产生基质效应，本发明采用空白基质配制标准曲线进行定量分析以减弱基质效应的影响，提高定量结果的准确性。
实施例3超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测
1、实验材料
Q-Trap 6500质谱仪购于美国AB Sciex公司，LC-30AD液相色谱仪购于日本SHIMADZU公司，Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1mm×100mm，1.7μm)购于美国Waters公司，甲酸、甲酸铵购于美国Sigma公司，乙腈、超纯水购于德国Merck公司。
2、实验方法
色谱条件：Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1mm×100mm，1.7μm)，柱温35℃，进样量5μL，流速0.4mL/min，流动相A为含0.1％甲酸和1mM甲酸铵的水溶液，流动相B为含0.1％甲酸和1mM甲酸铵的乙腈，洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0-0.5min 5％B，0.6-2min 20％-40％B，2-5min40％-55％B，5-5.5min 55％-99％B，5.5-8.5min 99％B，8.6min 5％B，8.6-10min5％B。
质谱条件：电喷雾离子源(ESI+/ESI-)，离子源喷雾电压：正离子模式5500V，负离子模式-4500V；离子源温度(TEM)350℃，气帘气(Curtain gas)35psi，雾化气(Gas 1)65psi，辅助加热气(Gas 2)55psi，质谱扫描方法为多时间段的多反应检测扫描方法(Scheduled MRM)，即确定每个化合物的保留时间后，在其保留时间前后60s对它的离子对进行监测。手动调谐优化55种兽药母离子和子离子，选取两组灵敏度最佳的离子对作为定量离子对和定性离子对，获得最佳的去簇电压(DP)和碰撞能量(CE)，最终得到优化的质谱采集参数。
其中，将55种兽药的0.1mg/L标准溶液分别通过针泵进样方式进行质谱方法调谐，在ESI+和ESI-模式下进行扫描。手动调谐优化55种兽药母离子和子离子，选取两组灵敏度最佳的离子对作为定量离子对和定性离子对，获得最佳的去簇电压和碰撞能量。在优化的质谱参数和液相条件下，MRM模式采集55种兽药混标溶液的质谱信号，确认每一种兽药的保留时间。最终采用多时间段的多反应检测扫描方法(Scheduled MRM)对55种兽药进行检测，即只在某一药物保留时间的前后1min内采集其母子离子对，提高检测灵敏度。55种兽药优化的质谱参数和保留时间结果见表1。
表1 55种兽药优化的质谱参数和保留时间
*定量离子对(m/z)
实施例4数据处理与分析
1、实验材料
质谱仪配套的Analyst 1.7和Sciex OS 1.7.0分别为质谱数据采集软件和质谱数据处理软件。
2、实验方法
Analyst 1.7采集样品数据后，在Sciex OS 1.7.0中对数据进行处理，自动计算化合物定性离子对与定量离子对峰面积比值(相对离子丰度，Ion Ratio)，根据预先设置的相对离子丰度规则和化合物保留时间定性判定化合物的检出，积分所得定量离子对峰面积自动代入基质匹配标准曲线对样品中兽药残留进行定量检测。其中，Sciex OS 1.7.0定性确证时相对离子丰度的设置规则见表2。
表2 Sciex OS 1.7.0定性确证时相对离子丰度的设置规则
| 相对离子丰度 | ﹥50％ | 20％～50％ | 10％～20％ | ≤10％ |
| 允许的最大偏差 | ±20％ | ±25％ | ±30％ | ±50％ |
实施例5方法学验证
1、实验材料
空白猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉购于当地市场，Centrifuge 5810R低温高速离心机购于德国Eppendorf公司，QL-901涡旋仪购于美国KYLIN-BELL LAB公司。
2、实验方法
(1)基质效应
动物肌肉基质复杂，难以通过净化全部去除而对目标分析物的离子化效率产生影响，故进行基质效应评价。本发明将15类55种兽药标准品分别通过猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉4类动物肌肉空白基质溶液以及50％甲醇-水溶剂制备为标准溶液，通过溶剂和基质溶液中同一物质的质谱响应峰面积之比，对各化合物的基质效应进行评价，结果见图4其中，图4A为猪肉基质效应，图4B为牛肉基质效应，图4C为羊肉基质效应，图4D为鸡肉基质效应，结果显示，在4类动物肌肉中均存在一定程度的基质效应。为了提高定量结果的准确性，本发明在定量环节通过基质匹配标准曲线来消除或减弱基质效应的影响。
(2)线性关系、检出限、定量限
按照实施例2中描述配制质量浓度为0.5、1、5、10、20、50、100μg/L的系列基质混合标准工作液，进行UPLC-MS/MS检测，以各个兽药的峰面积为纵坐标，相应的浓度为横坐标，考察15类55种兽药的线性关系。55种兽药在相应的线性范围内线性关系良好，相关系数R2>0.99。分别向空白猪肉中添加15类55种兽药标准溶液，室温静置10min，按照如前所述的已建立的前处理方法和仪器分析方法以信噪比(S/N)为3和10时对应的空白样品添加浓度为检出限(Limit of detection,LOD)和定量限(Limit of quantification,LOQ)。
(3)准确性和精密度
分别向空白猪肉中添加15类55种兽药标准溶液，室温静置10min，制成模拟阳性样品。按照如前所述的已建立的前处理方法和仪器分析方法，在1倍LOQ、3倍或5倍LOQ和10倍LOQ下各重复实验6次，计算得到每个浓度水平各兽药的回收率和精密度。
3、实验结果
(1)线性关系、检出限、定量限
采用空白动物肌肉经相同的提取、净化步骤得到的基质溶液配制标准溶液，绘制基质匹配标准曲线进行定量分析。分别向空白猪肉中添加15类55种兽药标准溶液，室温静置10min，按照本发明如前所述的前处理和检测方法以信噪比(S/N)为3和10时对应的空白样品添加浓度为检出限(Limit of detection,LOD)和定量限(Limit of quantification,LOQ)，本发明的猪肉阴性样品添加55种兽药(50μg/kg)的总离子流色谱图见图5，55种兽药的检出限、定量限、线性方程、相关系数的相关结果见表3，结果显示，55种兽药LOD在0.02-0.5μg/kg之间，LOQ为0.2-3μg/kg。
表3 55种兽药的检出限、定量限、线性范围、相关系数
(2)准确性和精密度
分别向空白猪肉中添加15类55种兽药标准溶液，室温静置10min，制成模拟阳性样品。按照已建立的前处理方法和仪器分析方法，在1倍LOQ、3或5倍LOQ和10倍LOQ下各重复实验6次，计算得到每个浓度水平各兽药的回收5率和日内、日间相对标准偏差。55种兽药在猪肉中的加标回收率、日内精密度(n＝6)和日间精密度的相关结果见表4，结果显示，在3个加标水平下，55种兽药回收率为70.16％-117.96％，日内精密度为0.83％-11.62％，日间精密度为2.48％-12.56％。说明本发明提供的检测方法对猪肉中55种兽药残留检测的准确度和精密度良好，能够满足多兽药残留准确、稳定的分析要求。
表4 55种兽药在猪肉中的加标回收率、日内精密度(n＝6)和日间精密度(n＝18)
实施例6实际样品检测
1、实验材料
猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉等22批次动物肌肉样品采集于当地市场。
2、实验方法
将实际样品绞碎，准确称取2g(精确至0.02g)样品于50mL聚丙烯离心管中，加入3mL 0.1M Na2EDTA溶液，于2500rpm/min转速下涡旋振荡5min使其分散均质，向均质样品中加入7mL乙腈，于2500rpm/min转速下涡旋振荡5min，超声5min，以10000rpm/min转速离心5min，取1mL上清液流过Oasis PRiME HLB固相萃取柱使其润湿并弃去流出液，然后取4mL上清液以1滴/s流速通过固相萃取柱，再以2mL甲醇通过固相萃取柱进一步洗脱，将全部流出液涡旋混匀并取600μL旋转蒸发至干，用100μL 50％甲醇-水溶液复溶，以15000rpm/min转速离心5min，上清液用于UPLC-MS/MS检测。
参照GB31658.17-2021，判定样品中某一种兽药检出的条件为样品保留时间与基质匹配标准溶液中相应55种兽药的保留时间偏差在±2.5％以内，且检测到的相对离子丰度与浓度相当的基质匹配标准溶液相对离子丰度一致，其允许偏差应符合下表的要求。积分所得定量离子对峰面积代入基质匹配标准曲线对样品中兽药残留进行定量检测。其中，定性确证时相对离子丰度的允许偏差见表5。
表5定性确证时相对离子丰度的允许偏差
| 相对离子丰度 | ﹥50％ | 20％～50％ | 10％～20％ | ≤10％ |
| 允许的最大偏差 | ±20％ | ±25％ | ±30％ | ±50％ |
3、实验结果
检测完成后，统计猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉等22批次动物肌肉样品检出兽药情况，兽药阳性实际样品中检出兽药提取离子流色谱图见图6A-6D，具体检出的阳性样本及其检测结果见表6，结果显示，22份样本共计检出兽药样本6份，检出兽药残留频次7次。
表6阳性样本中兽药检出浓度
对比例不同种类和配比的均质液和有机溶剂对15大类兽药同时提取的对比研究
1、实验方法
在样品中目标化合物提取这一步，均质液和有机溶剂的种类和配比对15大类兽药的同时高效率提取非常重要。本发明对比了优化的净化条件下，如下六组不同种类和配比的均质液和有机溶剂对目标物(15大类兽药)同时提取回收率的影响：
(1)甲醇：水＝8:2；
(2)乙腈：水＝8:2；
(3)乙腈：EDTA＝8:2；
(4)乙腈：EDTA＝7:3；
(5)乙腈：EDTA＝6:4；
(6)乙腈：EDTA：PBS＝6:2:2。
2、实验结果
结果如图3所示，结果显示，使用(1)甲醇：水＝8:2时，三种极性较弱的固醇激素类回收率平均为6.9％，大大低于(2)乙腈：水＝8:2，表明有机溶剂的极性(乙腈＜甲醇)对固醇激素类的提取非常关键。使用(2)乙腈：水＝8:2时，四环素类的回收率30.1％明显低于(3)乙腈：EDTA＝8:2(70.9％)，表明金属螯合剂EDTA的加入能改善四环素类药物的提取效率。进一步考察了(3)乙腈：EDTA＝8:2(4)乙腈：EDTA＝7:3(5)乙腈：EDTA＝6:4的效果，使用(3)时极性较强的头孢类抗生素(头孢克洛、头孢克肟)回收率较低(＜60％)，使用(5)时极性较弱的固醇类激素苯丙酸诺龙回收率(65.5％)和极性较强的头孢克洛回收率(59.2％)明显低于(4)(分别为105.1％和77.0％)，只有(4)能兼顾强极性和弱极性兽药的提取，所有兽药回收率均在70％-120％。另外，由(5)乙腈：EDTA＝6:4和(6)乙腈：EDTA：PBS＝6:2:2的对比可知，添加PBS与否(主要成分为磷酸盐和氯化钠)对所有种类的兽药回收率均没有明显区别，表明磷酸盐和氯化钠不是影响兽药提取的关键因素。本发明首次发现只有乙腈：EDTA(乙腈：EDTA＝7:3)时对目标物(15大类兽药)同时提取具有较高的回收率(对所有兽药回收率均在70％-120％之间)，且显著优于甲醇：水、乙腈：水、乙腈：EDTA：PBS，取得了预料不到的技术效果。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
Claims (16)
1.一种动物肌肉中多种兽药残留的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：
(1) 样品溶液制备：取动物肌肉样品，绞碎，称取2.00±0.02 g 样品，加入3 mL 0.1 MEDTA溶液涡旋振荡均质得到均质样品；向均质样品中加入7 mL乙腈涡旋振荡、超声、离心得到上清液；采用Oasis PRiME HLB固相萃取柱和2 mL甲醇对上清液进行净化洗脱，得到的流出液涡旋混匀、旋转蒸发至干，用100 μL 50%甲醇-水溶液复溶得到待测样品溶液；
(2) 标准工作溶液配制：分别移取100 μL 100 mg/L的55种兽药标准品溶液于10 mL容量瓶，加入50%甲醇-水溶液定容，得到浓度为1 mg/L的混合标准溶液；称取2.00±0.02 g不含55种兽药的空白动物肌肉样品，进行提取和净化后，得到空白基质溶液；用空白基质溶液将混合标准溶液逐级稀释得到质量浓度为0.5、1、5、10、20、50、100 μg/L的系列基质混合标准工作溶液，用于标准工作曲线的绘制，即基质匹配校准曲线；
(3) 超高效液相色谱-串联质谱检测：采用超高效液相色谱-串联质谱仪对步骤(1)中得到的样品溶液进行检测，所述超高效液相色谱-串联质谱仪的参数如下：
色谱条件：Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱，柱温35°C，进样量5 μL，流速0.4 mL/min，流动相A为含0.1%甲酸和1 mM甲酸铵的水溶液，流动相B为含0.1%甲酸和1 mM甲酸铵的乙腈，洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0-0.5 min 5%B，0.6-2 min 20%-40%B，2-5min 40%-55%B，5-5.5 min 55%-99%B，5.5-8.5 min 99%B，8.6 min 5%B，8.6-10 min 5%B；
质谱条件：电喷雾离子源，离子源喷雾电压：正离子模式5500 V，负离子模式-4500 V；离子源温度（TEM）350°C，气帘气（Curtain gas）35 psi，雾化气65 psi，辅助加热气55 psi，质谱扫描方法为多时间段的多反应检测扫描方法，即确定每个化合物的保留时间后，在其保留时间前后60 s对它的离子对进行监测，手动调谐优化55种兽药母离子和子离子，选取两组灵敏度最佳的离子对作为定量离子对和定性离子对，获得最佳的去簇电压（DP）和碰撞能量（CE），最终得到优化的质谱采集参数；
所述55种兽药包括甲睾酮、苯丙酸诺龙、醋酸甲羟孕酮、格列美脲、格列本脲、可的松、氢化可的松、醋酸氢化可的松、哈西奈德、地塞米松、醋酸地塞米松、倍他米松戊酸酯、吲哚布洛芬、卡洛芬、双氯芬酸、吲哚美辛、氟芬那酸、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、咪哒唑仑、阿普唑仑、地西泮、甲硝唑、阿苯达唑、替硝唑、莱克多巴胺盐酸盐、沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、西马特罗、氯丙那林、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、红霉素、罗红霉素、林可霉素、克林霉素、四环素、土霉素、金霉素、头孢氨苄、头孢克洛、头孢克肟、头孢喹肟、头孢拉定、金刚烷胺、金刚乙胺、甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述涡旋振荡的条件为2500 rpm/min转速下涡旋振荡5 min。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述超声、离心的条件为超声5 min，以10000 rpm/min转速离心5 min。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述净化洗脱具体包括如下步骤：取1 mL上述上清液，流过Oasis PRiME HLB固相萃取柱将其润湿并弃去流出液，然后取4 mL上清液以1滴/s流速通过Oasis PRiME HLB固相萃取柱，再以2 mL甲醇通过OasisPRiME HLB固相萃取柱进一步洗脱，将全部流出液涡旋混匀并取600 μL旋转蒸发至干，用100 μL 50%甲醇-水溶液复溶，以15000 rpm/min转速离心5 min得到待测样品溶液。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述Oasis PRiME HLB固相萃取柱的参数规格为6 mL、200 mg。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中所述Waters Acquity UPLCHSS T3色谱柱的参数规格为2.1 mm×100 mm，1.7 μm。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中所述手动调谐优化的过程包括如下步骤：将55种兽药的0.1 mg/L标准溶液分别通过针泵进样方式进行质谱方法调谐，在ESI+和ESI−模式下进行扫描，手动调谐优化55种兽药母离子和子离子，选取两组灵敏度最佳的离子对作为定量离子对和定性离子对，获得最佳的去簇电压和碰撞能量，在优化的质谱参数和液相条件下，多反应监测扫描模式采集55种兽药混合标准溶液的质谱信号，确认每一种兽药的保留时间，最终采用多时间段的多反应检测扫描方法对55种兽药进行检测。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括数据处理与分析，所述数据处理与分析包括如下步骤：Analyst 1.7采集样品数据后，在Sciex OS 1.7.0中对数据进行处理，自动计算化合物定性离子对与定量离子对峰面积比值，根据预先设置的相对离子丰度规则和化合物保留时间定性判定化合物的检出，积分所得定量离子对峰面积自动代入基质匹配标准曲线对样品中55种兽药残留进行定量检测。
9.一种动物肌肉中多种兽药残留检测的处理方法，其特征在于，所述处理方法包括如下步骤：
(a) 绞碎与均质：取动物肌肉样品，绞碎，称取2.00±0.02 g 样品，加入3 mL 0.1 MEDTA溶液涡旋振荡均质得到均质样品；
(b) 样品中兽药的提取：向均质样品中加入7 mL乙腈涡旋振荡、超声、离心得到上清液；
(c) 净化洗脱：采用Oasis PRiME HLB固相萃取柱和2 mL甲醇对上清液进行净化洗脱，得到的流出液涡旋混匀、旋转蒸发至干，用100 μL 50%甲醇-水溶液复溶得到待测样品溶液。
10.根据权利要求9所述的处理方法，其特征在于，步骤(a)中所述涡旋振荡的条件为2500 rpm/min转速下涡旋振荡5 min。
11.根据权利要求9所述的处理方法，其特征在于，步骤(b)中所述涡旋振荡的条件为2500 rpm/min转速下涡旋振荡5 min。
12.根据权利要求9所述的处理方法，其特征在于，步骤(b)中所述超声、离心的条件为超声5 min，以10000 rpm/min转速离心5 min。
13.根据权利要求9所述的处理方法，其特征在于，步骤(c)中所述净化洗脱具体包括如下步骤：取1 mL上述上清液，流过Oasis PRiME HLB固相萃取柱将其润湿并弃去流出液，然后取4 mL上清液以1滴/s流速通过Oasis PRiME HLB固相萃取柱，再以2 mL甲醇通过OasisPRiME HLB固相萃取柱进一步洗脱，将全部流出液涡旋混匀并取600 μL旋转蒸发至干，用100 μL 50%甲醇-水溶液复溶，以15000 rpm/min转速离心5 min得到待测样品溶液。
14.根据权利要求9所述的处理方法，其特征在于，步骤(c)中所述Oasis PRiME HLB固相萃取柱的参数规格为6 mL、200 mg。
15.权利要求1-8中任一项所述的检测方法在检测动物肌肉中固醇激素类药物、磺脲类药物、糖皮质激素类药物、非甾体类抗炎药物、磺胺类药物、苯二氮卓类药物、硝基咪唑类药物、β-受体激动剂类药物、喹诺酮类药物、大环内酯类抗生素药物、林可酰胺类抗生素药物、氯霉素类抗生素药物、四环素类抗生素药物、头孢类抗生素药物、金刚烷胺类药物残留中的应用。
16.权利要求9-14中任一项所述的处理方法在检测动物肌肉中固醇激素类药物、磺脲类药物、糖皮质激素类药物、非甾体类抗炎药物、磺胺类药物、苯二氮卓类药物、硝基咪唑类药物、β-受体激动剂类药物、喹诺酮类药物、大环内酯类抗生素药物、林可酰胺类抗生素药物、氯霉素类抗生素药物、四环素类抗生素药物、头孢类抗生素药物、金刚烷胺类药物残留中的应用。
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Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117805289A (zh) * | 2024-02-27 | 2024-04-02 | 中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所 | 一种同时检测人体尿液中72种抗生素的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA3133946A1 (en) * | 2019-03-22 | 2020-10-01 | Great Engineering Technology Corporation | Kit for extracting drug residues from livestock or poultry aquatic products and method of obtaining primary test liquid from livestock or poultry aquatic products using the same |
| CN112067716A (zh) * | 2020-09-04 | 2020-12-11 | 福建省水产研究所（福建水产病害防治中心） | 一种养殖沉积物中农兽药残留量同时测定的检测方法 |
| CN112345665A (zh) * | 2020-10-29 | 2021-02-09 | 郑州轻工业大学 | 用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法、基质吸附材料及兽药残留检测方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106770759A (zh) * | 2016-12-17 | 2017-05-31 | 黑龙江省兽药饲料监察所 | 一种禽蛋中四环素类药物及其代谢物残留量的检测方法 |
| CN106770758A (zh) * | 2016-12-17 | 2017-05-31 | 黑龙江省兽药饲料监察所 | 一种饲料中四环素类药物及其异构体的检测方法 |
| CN108490088A (zh) * | 2018-03-14 | 2018-09-04 | 汕头出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 一种检测动物源性产品兽药残留的检测方法 |
| CN111060638B (zh) * | 2019-08-31 | 2022-06-03 | 河南省兽药饲料监察所(河南省畜产品质量监测检验中心) | 一种动物性食品中207种兽药及添加物的筛查与确证方法 |
| CN113295790A (zh) * | 2021-05-20 | 2021-08-24 | 中国科学院成都生物研究所 | 一种畜禽肉及其副产品中兽药化合物残留的检测方法 |
| CN113390989A (zh) * | 2021-06-10 | 2021-09-14 | 成都市食品药品检验研究院 | 一种鱼肉中兽药残留的检测方法 |
-
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA3133946A1 (en) * | 2019-03-22 | 2020-10-01 | Great Engineering Technology Corporation | Kit for extracting drug residues from livestock or poultry aquatic products and method of obtaining primary test liquid from livestock or poultry aquatic products using the same |
| CN112067716A (zh) * | 2020-09-04 | 2020-12-11 | 福建省水产研究所（福建水产病害防治中心） | 一种养殖沉积物中农兽药残留量同时测定的检测方法 |
| CN112345665A (zh) * | 2020-10-29 | 2021-02-09 | 郑州轻工业大学 | 用于动物源食品兽药多残留检测的样品前处理方法、基质吸附材料及兽药残留检测方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| Analysis of 140 veterinary drugs and other contaminants in poultry muscule by ultrahigh-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry;Guozhou Cao;《Chromatographia》;全文 * |
| Development of a multi-class method for the quantification of veterinary drug residues in feedingstuffs by liquid chromatography-tandem mass spectrometry;Aurore boscher et al;《Journal of chromatography A》;全文 * |
| Simultaneous extraction of four classes of antibiotics in soil，manure and sewage sludge and analysis by liquid chromatography-tandem mass spectrometry with the isotope-labelled internal standard method;Yujuan Huang et al;《Analytical Methods》;全文 * |
| 基于PRIME HLB快速前处理技术的鸡蛋中38种药物残留快速检测方法研究及其在风险监测中的应用;尹伶灵;杨修镇;李有志;牛华星;刘少宁;陈玲;;中国兽药杂志(05);全文 * |
| 超高效液相色谱/串联质谱法同时测定水、土壤及粪便中25 种抗生素;郭欣妍;《分析化学研究报告》;全文 * |
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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