CN102081077A - 动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法涉及一种测定动物性食品中药物残留量的液相色谱法。其目的是为了提供一种操作简单,快速,自动化程度高,萃取效率高,回收率和重复性好的测定方法。本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法包括以下步骤:样品制备;样品前处理:称取样品,与硅藻土混和均匀,转移至萃取池中,将萃取池放置于快速溶剂萃取仪上进行萃取,所得到的提取液中加入正己烷去除脂类杂质,剧烈振荡后静止分层,弃去正己烷层,再加入正己烷重复操作两次,下层溶液转入浓缩瓶中,在旋转蒸发仪中减压旋蒸至干,以流动相溶解残渣,溶液经滤膜过滤供HPLC分析;标准溶液的配制;高效液相色谱测定。
Description
技术领域
本发明涉及一种动物性食品中兽药残留量的测定方法,特别是涉及一种测定动物性食品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧基嘧啶五种磺胺类药物残留量的液相色谱法。
背景技术
磺胺类药物在畜牧生产中的应用十分广泛,在降低动物发病率、死亡率方面的作用非常显著;还可以显著改善水产动物的品质。但如果长期食用含有磺胺类药物残留的动物性食品,残留的药物能造成中毒;破坏人的造血系统,造成溶血性贫血症、粒细胞缺乏症、血小板减少等症;甚至可影响中枢神经系统。磺胺类药物的残留不仅给人类的健康带来极大的危害,而且严重影响我国动物性食品的出口,造成巨大的经济损失,因此研究磺胺类药物在动物性食品中的残留量是十分必要的。中国发明专利CN 100376893C公布了一种测定鱼肉中磺胺甲恶唑的液相色谱法,在该方法的样品前处理时,样品先要与盐酸混合静置1小时、然后用3∶1比例的二氯甲烷/丙酮混合液作为提取液提取,加入提取液后,仍需要在4℃冰箱内静置8-12小时,还需用高速均质器均质并多次离心,步骤繁杂,耗时,不能自动化。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单,快速,自动化程度高,萃取效率高,回收率和重复性好的动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法。
本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法,包括以下步骤:
a、样品制备:将样品绞碎,冷冻保存;
b、样品前处理:准确称取样品,与硅藻土混和均匀至样品没有结块,转移至底部放一层纤维滤纸的萃取池中,将萃取池放置于快速溶剂萃取仪上进行萃取,所得到的提取液中加入正己烷去除脂类杂质,剧烈振荡后静止分层,弃去正己烷层,再加入正己烷重复操作两次,下层溶液转入浓缩瓶中,在水浴40℃的旋转蒸发仪中减压旋蒸至干,以流动相溶解残渣,溶液经滤膜过滤供HPLC分析;
c、标准溶液的配制:分别准确称取磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧基嘧啶标准品,溶于乙腈中,配制成同时含有上述四种标准品且其浓度均为200mg/L的混合标准储备液,冷冻保存;临用前,准确量取上述混合标准储备液,用流动相稀释成系列梯度的标准工作液,低温条件下避光保存,当天使用;
d、高效液相色谱测定:吸取配制好的不同浓度的标准工作液,注入配有UV检测器的高效液相色谱仪;
e、残留量测定结果的计算:以保留时间进行磺胺类药物的定性分析,以峰面积进行磺胺类药物的定量分析,用外标法计算结果;
所述流动相的配制:取乙腈、乙酸、水按体积比25∶2∶73配制流动相。
本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法,其中所述步骤a与步骤c中的冷冻保存条件是-18℃。
本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法,其中所述步骤b中的样品前处理,硅藻土与样品的质量比例是(1~3)∶1;正己烷浓度为每克样品中加入5~10ml正己烷;快速溶剂萃取仪参数设置为:萃取溶剂:乙腈,温度:120℃,压力:10.0MPa,加热时间:5min,静态时间:5min,冲洗体积:萃取池体积的40%,氮气吹扫时间:60s,静态循环次数:1次;减压旋蒸时真空度为-0.096Mpa;滤膜孔径为0.45μm。
本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法,其中所述步骤c中系列梯度的标准工作液为0.05、0.1、0.2、0.5、1和5mg/L。
本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法,其中所述步骤d中采用的高效液相色谱条件为:基质为B型超高纯球形硅胶的C18液相色谱柱,规格为4.6mm×250mm×5μm,硅胶纯度>99.999%,柱温:30℃;流动相流速为1.0mL/min,进样量为10μL,紫外检测波长为268nm。
本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法,其中所述快速溶剂萃取仪选用北京吉天仪器有限公司APLE2000快速溶剂萃取仪。
本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法利用快速溶剂萃取仪在高温高压下萃取动物性食品中磺胺类药物,萃取液经净化进高效液相色谱进行分析测定。快速溶剂萃取法萃取溶剂用量少,操作简单,自动化程度高,萃取效率高,回收率和重复性好。
附图说明
图1是五种磺胺类药物的标准色谱图。
其中(1)代表磺胺嘧啶,(2)代表磺胺甲基嘧啶,(3)代表磺胺二甲基嘧啶,(4)代表磺胺甲恶唑,(5)代表磺胺二甲氧基嘧啶。
具体实施方式
本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法包括以下步骤:
标准溶液的配制:分别准确称取磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧基嘧啶标准品,溶于乙腈中,配制成同时含有上述四种标准品且其浓度均为200mg/L的混合标准储备液,-18℃条件下保存(有效期为1个月);临用前,准确量取上述混合标准储备液,用流动相稀释成0.05、0.1、0.2、0.5、1和5mg/L系列梯度的标准工作液,4℃条件下避光保存,当天使用;流动相的配制:取乙腈、乙酸、水按体积比25∶2∶73配制流动相。
高效液相色谱测定:吸取配制好的不同浓度的标准工作液,注入配有UV检测器的高效液相色谱仪,采用的高效液相色谱条件为:基质为B型超高纯球形硅胶的C18液相色谱柱,规格为4.6mm×250mm×5μm,硅胶纯度>99.999%,柱温:30℃;流动相流速为1.0mL/min,进样量为10μL,紫外检测波长为268nm。
残留量测定实施例1:
测定5个鸡肉样品,将样品绞碎,-18℃条件下冷冻保存;
样品前处理:准确称取1g样品,与2g硅藻土混和均匀至样品没有结块,转移至底部放一层纤维滤纸的萃取池中,将萃取池放置于快速溶剂萃取仪上进行萃取,萃取溶剂:乙腈,温度:120℃,压力:10.0MPa,加热时间:5min,静态时间:5min,冲洗体积:萃取池体积的40%,氮气吹扫时间:60s,静态循环次数:1次,用乙腈快速冲洗样品,氮气吹扫收集全部提取液。所得到的提取液中加入5ml正己烷去除脂类杂质,剧烈振荡后静止分层,弃去正己烷层,再加入5ml正己烷重复操作两次,下层溶液转入浓缩瓶中,在水浴40℃的旋转蒸发仪中减压旋蒸至干,减压旋蒸时真空度为-0.096Mpa。以流动相溶解残渣,并准确定容1mL,溶液经0.45μm滤膜过滤供HPLC分析;快速溶剂萃取仪选用北京吉天仪器有限公司APLE2000快速溶剂萃取仪。
残留量测定结果的计算:
以保留时间进行磺胺类药物的定性分析,以峰面积进行磺胺类药物的定量分析,用外标法计算结果,结果在三个鸡肉样品中检测到磺胺类药物,结果见表1。
表1实际样品中磺胺类兽药的含量
重复性和回收率测定:
采用阴性鸡肉样品(5中磺胺类药物均无检出)进行测定,以3倍信噪比确定分析物的检测限,以10倍信噪比确定分析物的定量限,结合回收率和样品量,方法的定量检出限为10-30μg/kg,采用样品中添加标准溶液的方法,在同样的样品处理条件下对5种磺胺类药物进行加标回收率实验,结果见表3。
表2液相色谱法检测五种磺胺类药物的线性范围、相关系数、检出限和定量限
磺眩 | 线性范围(μg/L) | 相关系数(r2) | 检出限(μg/kg) | 定量限(μg/kg) |
磺眩嘧啶 | 50-10000 | 0.9998 | 3 | 10 |
磺眩甲基嘧啶 | 50-10000 | 0.9996 | 3 | 10 |
磺眩二甲基嘧啶 | 50-10000 | 0.9999 | 4 | 13 |
磺眩甲恶唑 | 50-10000 | 0.9997 | 7 | 23 |
磺眩二甲氧基嘧啶 | 50-10000 | 0.9995 | 9 | 30 |
表3鸡肉中磺胺类药物的回收率及检出限(n=5)
残留量测定实施例2:
测定5个牛肉样品,将样品绞碎,-18℃条件下冷冻保存;
样品前处理:准确称取1g样品,与3g硅藻土混和均匀至样品没有结块,转移至底部放一层纤维滤纸的萃取池中,将萃取池放置于快速溶剂萃取仪上进行萃取,萃取溶剂:乙腈,温度:120℃,压力:10.0MPa,加热时间:5min,静态时间:5min,冲洗体积:萃取池体积的40%,氮气吹扫时间:60s,静态循环次数:1次,用乙腈快速冲洗样品,氮气吹扫收集全部提取液。所得到的提取液中加入5ml/g正己烷去除脂类杂质,剧烈振荡后静止分层,弃去正己烷层,再加入5ml正己烷重复操作两次,下层溶液转入浓缩瓶中,在水浴40℃的旋转蒸发仪中减压旋蒸至干,减压旋蒸时真空度为-0.096Mpa。以流动相溶解残渣,并准确定容1mL,溶液经0.45μm滤膜过滤供HPLC分析;快速溶剂萃取仪选用北京吉天仪器有限公司APLE2000快速溶剂萃取仪。
残留量测定结果的计算:
以保留时间进行磺胺类药物的定性分析,以峰面积进行磺胺类药物的定量分析,用外标法计算结果,结果在一个牛肉样品中检测到磺胺类药物。
表4实际样品中磺胺类兽药的含量
重复性和回收率测定:
采用阴性牛肉样品(5中磺胺类药物均无检出)进行测定,以3倍信噪比确定分析物的检测限,以10倍信噪比确定分析物的定量限,结合回收率和样品量,方法的定量检出限为10-30μg/kg,采用样品中添加标准溶液的方法,在同样的样品处理条件下对5种磺胺类药物进行加标回收率实验,结果见表5。
表5牛肉中磺胺类药物的回收率及检出限(n=5)
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述,并非对本发明的范围进行限定,在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进,均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (6)
1.一种动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法,包括以下步骤:
a、样品制备:将样品绞碎,冷冻保存;
b、样品前处理:准确称取样品,与硅藻土混和均匀至样品没有结块,转移至底部放一层纤维滤纸的萃取池中,将萃取池放置于快速溶剂萃取仪上进行萃取,所得到的提取液中加入正己烷去除脂类杂质,剧烈振荡后静止分层,弃去正己烷层,再加入正己烷重复操作两次,下层溶液转入浓缩瓶中,在水浴40℃的旋转蒸发仪中减压旋蒸至干,以流动相溶解残渣,溶液经滤膜过滤供HPLC分析;
c、标准溶液的配制:分别准确称取磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧基嘧啶标准品,溶于乙腈中,配制成同时含有上述四种标准品且其浓度均为200mg/L的混合标准储备液,冷冻保存;临用前,准确量取上述混合标准储备液,用流动相稀释成系列梯度的标准工作液,低温条件下避光保存,当天使用;
d、高效液相色谱测定:吸取配制好的不同浓度的标准工作液,注入配有UV检测器的高效液相色谱仪;
e、残留量测定结果的计算:以保留时间进行磺胺类药物的定性分析,以峰面积进行磺胺类药物的定量分析,用外标法计算结果;
所述流动相的配制:取乙腈、乙酸、水按体积比25∶2∶73配制流动相。
2.根据权利要求1所述的动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法,其特征在于:所述步骤a与步骤c中的冷冻保存条件是-18℃。
3.根据权利要求1所述的动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法,其特征在于:所述步骤b中的样品前处理,硅藻土与样品的质量比例是(1~3)∶1;正己烷浓度为每克样品中加入5~10ml正己烷;快速溶剂萃取仪参数设置为:萃取溶剂:乙腈,温度:120℃,压力:10.0MPa,加热时间:5min,静态时间:5min,冲洗体积:萃取池体积的40%,氮气吹扫时间:60s,静态循环次数:1次;减压旋蒸时真空度为-0.096Mpa;滤膜孔径为0.45μm。
4.根据权利要求1所述的动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法,其特征在于:所述步骤c中系列梯度的标准工作液为0.05、0.1、0.2、0.5、1和5mg/L。
5.根据权利要求1所述的动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法,其特征在于:所述步骤d中采用的高效液相色谱条件为:基质为B型超高纯球形硅胶的C18液相色谱柱,规格为4.6mm×250mm×5μm,硅胶纯度>99.999%,柱温:30℃;流动相流速为1.0mL/min,进样量为10μL,紫外检测波长为268nm。
6.根据权利要求1至5所述之一的动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法,其特征在于:所述快速溶剂萃取仪选用北京吉天仪器有限公司APLE2000快速溶剂萃取仪。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20110601 |