CN113063864B - 一种水溶剂提取测定固态环境样品中磺胺类抗生素的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于抗生素检测领域，更具体地，涉及一种水溶剂提取测定固态环境样品中磺胺类抗生素的方法。该测定方法包括样品提取步骤，其中，所述样品提取步骤包括如下子步骤：采用纯水作为提取剂，在温度大于或等于80℃、压力大于或等于1个大气压的条件下进行磺胺类抗生素的提取。在高温高压下进行提取，提取完毕后无需对提取液进行换相，不仅节省了时间，而且还避免了换相过程不可避免的目标测定物的损失而影响测量准确性。本发明提出的测定方法为一种绿色提取方法，提取过程中不涉及任何有机溶剂，不会对环境造成污染，而且整体操作时间也大大缩短，在10min内即可完成对至少10种磺胺类抗生素的快速分离检测。

Description

一种水溶剂提取测定固态环境样品中磺胺类抗生素的方法

技术领域

本发明属于抗生素检测领域，更具体地，涉及一种水溶剂提取测定固态环境样品中磺胺类抗生素的方法。

背景技术

抗生素是指由生物作用产生具有抗病原体或其他类型的次级生物代谢产物及其他人工合成和半合成能对生物活细胞产生作用的化学物质。2016年我国年消耗量达到18万吨，其作用的领域涉及到农牧业、医疗、养殖产业等。随着抗生素的滥用，使其环境问题日益严重，环境介质中抗生素残留造成的危害问题已经是21世纪的热点。其抗生素残留检测方法的建立对于抗生素在环境介质的迁移转化、生态毒理效应、生态风险评估及生态环境污染的防治等方面具有重要的现实意义。

现有技术都是以缓冲盐-有机溶剂的溶剂体系超声或者震荡的方式提取，其前处理过程较为繁琐，大量有机试剂的使用容易导致二次污染。比如中国专利CN102998405A公开的一种测定土壤、污泥及动物粪便中磺胺类及四环素类抗生素的方法，其采用的提取剂是体积比为1:1组成的甲醇和EDTA-Mcllvaine缓冲液，且含有氯化钙，需要在进入HLB固相萃取小柱进行分离富集之前对提取液进行溶剂换相，以避免提取液中的有机溶剂浓度过高影响目标抗生素成分的分离富集，而换相步骤往往比较繁琐，而且还可能使痕量的目标抗生素成分损失，导致较大的测量误差。另一方面，现有方法中提取剂成分比较复杂，不仅含有有机溶剂，而且一般还需要缓冲溶液以维持提取过程中的pH，提取剂成分的复杂性也会或多或少影响后续的分离富集过程，最终影响测定方法的准确性。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种方法简单绿色且测定结果准确的固态环境样品中磺胺类抗生素的测定方法，其利用磺胺类抗生素本身具有一定极性的特点，采用纯水作为提取剂，在高温高压下进行提取，旨在解决现有磺胺类抗生素测定方法中提取剂含有有机溶剂及其他复杂成分，导致后续分离富集步骤繁琐，且影响检测准确度的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种固态环境样品中磺胺类抗生素的测定方法，包括样品提取步骤，其中，所述样品提取步骤包括如下子步骤：采用纯水作为提取剂，在温度大于或等于80℃、压力大于或等于1个大气压的条件下进行磺胺类抗生素的提取。

优选地，所述样品提取步骤中提取温度为80-150℃，压力为1000-2000psi。

优选地，所述的测定方法，包括如下子步骤：

(1)以纯水作为提取剂，将预处理后的待测样品在温度大于或等于80℃、压力大于或等于1个大气压的条件下进行提取，提取时间不短于5min，其中预处理后的待测样品与采用的提取剂纯水的质量比为1:8-1:80；固液分离得到提取液；

(2)将步骤(1)获得的提取液通过HLB固相萃取小柱分离富集，收集浓缩洗脱液，过滤后待用；其中固相萃取洗脱液为甲醇；

(3)使用超高效液相色谱串联质谱联用仪检测步骤(2)收集的滤液中磺胺类抗生素含量。

优选地，步骤(1)将待测样品与硅藻土按照质量比1:2-2:1混合后充分研磨得到散粒状的预处理后的待测样品。

优选地，所述预处理后的待测样品的粒度为20-60目。

优选地，步骤(1)所述提取过程完成一次后，再使用新鲜的纯水进行重复提取，重复提取次数不少于一次。

优选地，所述样品提取在快速溶剂萃取仪中进行。

优选地，在快速溶剂萃取仪中进行提取时，提取溶剂为超纯水，萃取温度为80-150℃，萃取压力为1000-2000psi；静态萃取时间为5-10min；淋洗体积为60％-100％池体积；氮气吹扫时间为60s-180s；静态萃取次数为2-4次，待测样品质量为1-5g。

优选地，所述快速溶剂萃取仪的萃取池底部滤膜表面铺设有石英砂，待装入待测样品后，样品表面再铺设一层石英砂。

优选地，在所述快速溶剂萃取仪的萃取池内装样完毕后，样品上方保留一定的空间，该空间在竖直方向上的高度为萃取池总高度的2％-4％。

优选地，步骤(1)获得提取液后，无需进行溶剂置换，直接将步骤(1)获得的提取液通过HLB固相萃取小柱分离富集，收集浓缩洗脱液。

优选地，步骤(2)包括如下子步骤：将步骤(1)获得的提取液通过依次采用甲醇和超纯水活化后的HLB固相萃取小柱中，流速为0.5-1.0mL/min；用超纯水淋洗该萃取柱，然后在真空下抽干该萃取柱；再用甲醇洗脱，收集洗脱液转移至氮吹管中；于35-55℃、7-10psi的条件下浓缩后加入内标溶液，混匀过滤膜后上机测试。

优选地，所述磺胺类抗生素为磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲异噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪和磺胺间二甲氧嘧啶中的一种或多种。

优选地，所述固态环境样品为土壤或污泥。

总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：

(1)本发明提供的一种土壤中磺胺类抗生素的测定方法，其提取剂仅采用纯水，在高温高压下进行提取，提取完毕后无需对提取液进行换相，不仅节省了时间，而且还避免了换相过程不可避免的目标测定物的损失而影响测量准确性。本发明提出的测定方法为一种绿色提取方法，提取过程中不涉及任何有机溶剂，不会对环境造成污染，而且整体操作时间也大大缩短，在10min内即可完成对至少10种磺胺类抗生素的快速分离检测。

(2)本发明提出的土壤中磺胺类抗生素的测定方法可以在现成的商品化仪器快速溶剂萃取仪中进行提取，只需简单地设置好提取温度、压力等条件，即可快速完成提取过程。

(3)本发明提出的土壤中磺胺类抗生素的测定方法采用纯水作为提取试剂，由于纯水本身pH接近中性，恰好为有利于磺胺类抗生素提取的pH范围，因此无需如传统方法那样在提取剂中加入缓冲溶液，简化了提取剂成分，避免复杂的提取环境影响后续的分离富集过程，进而影响测试准确性。

(4)本发明鉴于磺胺类抗生素成分本身具有一定的极性，在水中有一定的溶解度，实验发现采用纯水在高温高压条件下进行提取，提取率都在60％以上，能够满足该分析测试方法磺胺类抗生素的提取要求，如此简化了提取工艺，并且为此也省略了后续繁琐复杂的换相步骤，避免了换相步骤导致的目标成分损失影响测试准确度。

(5)采用纯水作为提取剂，提取土壤样品中的抗生素时，提取过程中会同时提取出大量的杂质，降低提取过程的稳定性。本发明优选实施例中通过对提取过程参数，比如控制初始待测样品的粒度在合适的范围，在快速溶剂萃取池样品上下设置特定的过滤介质，并配合采取合适的提取剂用量等，最终能够获得较高的抗生素提取率，且实验稳定性和重复性较好。

(6)磺胺类抗生素本身使用较普遍，本发明提出的磺胺类抗生素测定方法能够满足绝大多数环境土壤样品中磺胺类抗生素的检测要求，适用范围大。

(7)本发明提出采用超纯水作为提取溶剂在高温高压下提取环境固态样品中的磺胺类抗生素，采用超高效液相色谱串联质谱仪测定土壤中磺胺类抗生素，优化了超高效液相色谱的分离条件，缩短了分析时间，而且优化了串联质谱多反应监测条件，加标回收实验结果表明本发明提出的检测方法对实际土壤样品中磺胺类抗生素的回收率为63.1％-112％，相对标准偏差为0.70％-14.7％(n＝3)，测定结果较为准确。

附图说明

图1是实施例1测定方法的流程图；

图2是10种目标磺胺类抗生素的离子色谱图；

图3是实施例1中的环境土壤样品的超高效液相色谱-串联质谱联用仪色谱离子流图(未加标的实际样品以及加标浓度分别为0.10μg/kg、0.50μg/kg、5.0μg/kg的土样)。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明提供的一种固态环境样品中磺胺类抗生素的测定方法，如图1所示，包括样品提取步骤，其中，所述样品提取步骤包括如下子步骤：采用纯水作为提取剂，在温度大于或等于80℃、压力大于或等于1个大气压的条件下进行磺胺类抗生素的提取。

一些实施例中，所述样品提取步骤中提取温度为80-150℃，压力为1000-2000psi。

一些实施例中，该测定方法具体包括如下子步骤：

(1)以纯水作为提取剂，将预处理后的待测样品在温度大于或等于80℃、压力大于或等于1个大气压的条件下进行提取，提取时间不短于5min，其中预处理后的待测样品与采用的提取剂纯水的质量比为1:8-1:80；固液分离得到提取液；

(2)将步骤(1)获得的提取液通过HLB固相萃取小柱分离富集，收集浓缩洗脱液，过滤后待用；其中固相萃取洗脱液为甲醇；

(3)使用超高效液相色谱串联质谱联用仪检测步骤(2)收集的滤液中磺胺类抗生素含量。

一些实施例中，步骤(1)提取之前还包括对预处理后的待测样品进行预热的步骤；且提取完毕后采用氮气吹扫，以将样品或容器壁上残留的目标成分吹扫下来进行收集。

一些实施例中，步骤(1)所述提取过程完成一次后，再使用新鲜的纯水进行重复提取，重复提取次数不少于一次。

一些实施例中，步骤(1)提取完毕之后采用离心分离得到提取液。

本发明采用纯水作为提取剂在上述温度和压力条件下进行提取能够获得满足磺胺类抗生素测定要求的提取率；实验过程中也曾尝试在纯水提取剂中加入少量比如体积比为1-5％的有机溶剂甲醇或乙腈，以提高样品中磺胺类抗生素的提取率，但是实验发现得到的提取液出现分层现象，不利于后续的分离富集步骤。

一些实施例中，步骤(1)将待测样品与硅藻土按照质量比1:2-2:1(其中待测土壤样品的质量以干重计)混合后充分研磨得到散粒状的预处理后的待测样品。

一些实施例中，所述预处理后的待测样品的粒度为20-60目。

一些实施例中，本发明所述样品提取在快速溶剂萃取仪中进行。快速溶剂萃取仪，也称全自动快速溶剂萃取仪，快速溶剂萃取技术是一种在高温(室温～200℃)、高压(大气压～20MPa)条件下快速提取固体或半固体样品的前处理方法，本发明采用快速溶剂萃取技术提取土壤中的磺胺类抗生素，与常用的索氏提取、超声提取、微波萃取技术等方法相比，可大大缩短萃取时间，提高萃取效率，减少萃取溶剂用量，显著降低了单个样品的提取费用，具有节省溶剂、快速、健康环保、自动化程度高等优点。该仪器通常用于农药类分子的提取，对于抗生素提取使用较少。本发明将该仪器配合纯水作为提取过程中的溶剂，用于提取固态环境样品比如土壤或污泥中的磺胺类抗生素，取得了很好的提取效果。可能的原因是磺胺类抗生素本身具有一定的极性，虽然磺胺类抗生素在常温水溶液中的溶解度较小，但是在高温高压条件下能够促进其溶解，提高其溶解度。而本身固体环境样品中磺胺类抗生素含量较低，因此本发明采用水在高温高压下提取其中的磺胺类抗生素，可获得较高的提取率。

本发明采用纯水作为溶剂，借助于快速溶剂萃取仪进行磺胺类抗生素的提取时，最初实验稳定性较差，表现在收集瓶中很难顺利获得提取液，或者获得的提取液体积波动范围大，或者提取液比较浑浊，其中含有较多土壤颗粒物。分析原因，可能是由于土壤样品成分复杂，其中含有大量能够溶解于水或遇水形成胶体状物质的成分，比如盐类、氧化物等，采用纯水作为溶剂，相比较现有技术采用有机溶剂作为提取溶剂，土壤样品中溶解下来的杂质成分很多，这些杂质成分在水溶剂中的溶解实际上不利于磺胺类抗生素的溶解提取。因此，在实验初期，发明人尝试在纯水提取剂中加入少量有机溶剂，或者如现有技术采用有机溶剂作为提取剂那样，在提取剂纯水中加入EDTA或柠檬酸等能够与金属离子配位的盐类物质，试图通过这类物质将土壤样品中与金属离子发生配位的抗生素成分从金属离子中释放出来，然而实验证明，加入这类物质并不能改善纯水提取的实验稳定性和提取效果。此外，第一步采用硅藻土与土壤样品混合研磨分散时，实验发现二者混合研磨后的粉末粒度太小时，提取液浑浊且容易堵塞滤膜，硅藻土与土壤样品混合研磨后的粒度控制在20-60目范围内，能够避免提取液浑浊或堵塞滤膜。

实验中还发现，土壤样品遇水溶解形成的小颗粒状胶体物质容易堵塞滤膜，实验过程中在萃取池底部滤膜以上、土壤样品以下设置一层石英砂，石英砂的设置能够避免滤膜的堵塞和凹陷变形现象。优选实施例中，萃取池内样品顶部再铺设一层石英砂，能够避免土壤样品在萃取以及氮吹过程中粘附在萃取池顶盖内表面上。

优选实施例中，在萃取池内装样完毕后，样品上方保留一定的空间，该空间在竖直方向上的高度为萃取池总高度的2％-4％，能够避免消耗的萃取溶剂过多或过少，过多导致土壤中共萃物增多，过少不利于目标抗生素的提取，从而提高实验的稳定性。

本发明通过实际空白土壤样品加标实验，优化了快速溶剂萃取仪的萃取温度、循环次数等参数，使萃取方法的萃取效率高、方法的稳定性好。一些具体实施例中，在快速溶剂萃取仪中进行提取时，提取溶剂为超纯水，萃取温度为80-150℃，萃取压力为1000-2000psi；静态萃取时间5-10min；淋洗体积为60％-100％池体积；氮气吹扫时间为60s-180s；静态萃取次数2-4次，每次使用的超纯水的体积为20mL，待测样品质量为1-5g。

一些实施例中，所述快速溶剂萃取仪的萃取池底部滤膜表面铺设有石英砂，待装入待测样品后，样品表面再铺设一层石英砂。

一些具体实施例中，取洗净的萃取池，在其底部放置专用滤膜，盖好底盖并拧紧，然后将萃取池垂直放在水平台面，顶部放上专用漏斗，加入适量的石英砂，铺至在底部薄薄一层，并将制备好的样品全部转移至萃取池(样品不应该粘在萃取池螺纹或洒落在其它处)，顶部再铺一层薄薄石英砂，移去漏斗，再盖好顶盖并拧紧(萃取池中填制样品后，剩下空间高度最好为0.8-1.5cm，不宜填制太满或者太少)。将萃取池垂直放在快速溶剂萃取仪盘上，下面放置60mL接收管。萃取条件：提取溶剂超纯水；载气压力0.8MPa；加热温度100℃；压力1500psi；预加热时间5min，静态萃取时间5min；淋洗体积60％池体积；氮气吹扫时间60s；静态萃取次数2次。

本发明步骤(1)获得提取液后，无需进行溶剂置换，直接将步骤(1)获得的提取液通过HLB固相萃取小柱分离富集，收集洗脱液。

一些实施例中，步骤(2)包括如下子步骤：控制步骤(1)获得的提取液在合适的pH范围，将其通过依次采用甲醇和超纯水活化后的HLB固相萃取小柱中，流速为0.5-1.0mL/min；然后用超纯水淋洗该萃取柱，并在真空下抽干该萃取柱；再用甲醇洗脱，收集洗脱液转移至氮吹管中；于35-55℃、7-10psi的条件浓缩后加入内标溶液，混匀过滤膜后上机测试。

若不需要测定磺胺嘧啶含量，提取液pH可为2-11；如需要测定磺胺嘧啶，可采用盐酸溶液调节其pH为2-7(磺胺类中磺胺嘧啶在碱性环境下，不易富集)。本发明采用纯水作为提取剂进行提取，提取液pH为6左右，一般不需要调节pH。

本发明优化超高效液相色谱串联质谱联用仪的色谱方法和质谱方法，包括色谱进样溶剂、流动相组成及梯度洗脱程序等，质谱离子化模式、毛细管电压、多反应监测条件等，使其检测土壤中目标物的基质影响更小，分析目标物灵敏度和准确度更高，分析速度更快。

色谱检测条件为：色谱柱为C18液相色谱柱，规格为1.7μm×2.1mm×100mm；流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇；流速为0.3mL/min；柱温为30℃；进样量为10μL；

质谱检测条件为：离子源为电喷雾离子源ESI；扫描方式为正离子模式；离子源温度为150℃；毛细管电压为3.00kV；脱溶剂气温度为500℃；脱溶剂气流速为1000L/h；喷雾气压力为7bar；监测方式为多反应监测。

本发明提出的测定方法，经实验证明能够适用于绝大多数磺胺类抗生素的提取和准确测定，本测定方法适用的磺胺类抗生素包括磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲异噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪和磺胺间二甲氧嘧啶中的一种或多种。

本发明所述的测定方法，能够适用于磺胺类抗生素含量在不高于10μg/kg范围内的任意固态环境样品，比如土壤或污泥中的磺胺类抗生素测定均适用。

本发明一些实施例中提供的土壤中磺胺类抗生素的测定方法，包括如下步骤：

(1)样品提取步骤：称取一定量m1(以干重记)样品，加入一定量m2的硅藻土(m1/m2约为5：3)脱水后研磨，充分拌匀直到散粒状；取洗净的萃取池，在其底部放置专用滤膜，盖好底盖并拧紧，然后将萃取池垂直放在水平台面，顶部放上专用漏斗，加入适量的石英砂，铺至在底部薄薄一层，并将制备好的样品全部转移至萃取池(样品不应该粘在萃取池螺纹或洒落在其它处)，顶部再铺一层薄薄石英砂，移去漏斗，再盖好顶盖并拧紧(萃取池中填制样品后，剩下空间高度最好为0.8-1.5cm，不宜填制太满或者太少)。将萃取池垂直放在快速溶剂萃取仪盘上，下面放置60mL接收管。萃取条件：提取溶剂超纯水；载气压力0.8MPa；加热温度100℃；压力1500psi；预加热时间5min，静态萃取时间5min；淋洗体积60％池体积；氮气吹扫时间60s；静态萃取次数2次。

(2)富集净化步骤：将上述提取液(40mL左右)转移于50mLPP离心管中，用pH试纸测定其pH值，用盐酸溶液调节其pH为2-7(磺胺类中磺胺嘧啶在碱性环境下，不易富集)，若不测试磺胺嘧啶，提取液pH可为2-11，一般不需要调节pH值；将离心管于8000r/min，离心2min；准备HLB柱子(6mL/500mg)依次用6mL甲醇和6mL超纯水活化平衡5min，转移提取液于小柱中开始富集，调节流速为0.5-1.0mL/min；随后用10mL的超纯水淋洗小柱后，并在真空下抽干小柱；再用10mL甲醇洗脱小柱，收集洗脱液转移至氮吹管中；于平行氮吹仪上40℃、7-10psi的条件浓缩至1mL左右，加入100μL的100μg/L内标溶液，超纯水定容至2mL，混匀过滤膜后上机测试。

(3)分析检测步骤：采用超高效液相色谱串联质谱联用仪，使用质谱检测中多反应监测模式对所述净化样品进行分析测定，得出对所述净化试样中10种磺胺类的测定结果。上述检测的色谱条件：色谱柱ACQUITY UPLCBEH C18,1.7μm×2.1mm×100mm；流动相：A(0.1％甲酸水溶液)，B(甲醇)；流速：0.3mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL。

表1梯度洗脱条件

(4)上述检测方法的质谱条件：离子源：电喷雾离子源(ESI)；扫描方式:正离子模式；离子源温度：150℃；毛细管电压：3.00kV；脱溶剂气温度：500℃；脱溶剂气流速：1000L/h；喷雾气压力：7bar；监测方式：多反应监测。

以下为具体实施例：

实施例1

(1)样品前处理

采集新鲜的土壤样品经冷冻干燥后研磨混匀，转移至密闭棕色玻璃瓶中4℃避光保存备用。

准确称取5g样品于玛瑙研钵中，添加3g硅藻土研磨混匀后转入22mL萃取池中，萃取池底部和上部分别填有石英砂，控制顶部空间剩余高度0.8-1.5cm。转移萃取池至快速溶剂萃取仪中，以超纯水为提取溶剂，系统压力1500psi，温度100℃，加热时间5min，静态时间5min，循环2次，润洗体积60％池体积，吹扫时间60s。提取液转移至50mL PP离心管中8000r/min离心2min，上清液待过柱净化。依次用6mL甲醇和6mL超纯水活化小柱，待上述上清液上样，再用10mL超纯水淋洗，真空抽干10min后，用10mL甲醇洗脱，收集洗脱液在40℃水浴中氮气压力7-10psi条件下浓缩至1mL左右，加入100μL的100μg/L内标溶液，超纯水定容至2mL，混匀过滤膜后上机测试。

(2)测试条件

色谱条件：ACQUITY UPLCBEH C18，1.7μm×2.1mm×100mm；流动相：A(0.1％甲酸水溶液)，B(甲醇)；柱温：30℃；进样量：10μL；梯度洗脱参数设置如表1所示。

表2目标化合物质谱参数

质谱条件：离子源：电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：正离子模式(ESI⁺)；源温度：150℃；毛细管电压：3.00kV；脱溶剂气温度：500℃；脱溶剂气流速：1000L/h；喷雾气压力：7bar；监测方式：多反应监测；目标化合物的质谱参数设置如表2所示，监测所得离子色谱如图2所示。在图2中：1，磺胺嘧啶；2，磺胺噻唑；3，磺胺吡啶；4，磺胺甲基嘧啶；5，磺胺二甲嘧啶；6，磺胺甲氧哒嗪；7，磺胺氯哒嗪；8，磺胺甲基异噁唑；9，磺胺二甲异噁唑；10，磺胺间二甲氧嘧啶。

以浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100μg/L的10种磺胺类抗生素混合标准溶液绘制工作曲线，内标法定量。10种磺胺类抗生素的工作曲线以及检出限和定量限见表3。

表3 10种磺胺类抗生素的工作曲线、检出限和定量限

(3)实际样品分析

为了验证方法的有效性，对采集的实际土壤样品进行了加标回收分析，结果如图3所示，图3中：1，磺胺嘧啶；2，磺胺噻唑；3，磺胺吡啶；4，磺胺甲基嘧啶；5，磺胺二甲嘧啶；6，磺胺甲氧哒嗪；7，磺胺氯哒嗪；8，磺胺甲基异噁唑；9，磺胺二甲异噁唑；10，磺胺间二甲氧嘧啶。对于采集的实际土壤样品，其中均未发现10种目标磺胺类抗生素；然后对空白的实际土壤样品配制0.10μg/kg、0.50μg/kg、5.0μg/kg三个浓度水平进行回收率试验。加标土样的回收率和相对标准偏差值如表4所示。图3是本实施例1环境土壤样品的超高效液相色谱-串联质谱联用仪色谱离子流图(三个加标浓度分别为0.10μg/kg、0.50μg/kg、5.0μg/kg，实际样品即为本实施例的未加标土样)，结果表明该方法对实际土壤样品的回收率为63.1-112％，相对标准偏差为0.70-14.7％(n＝3)，测定结果较为准确。

表4 10种磺胺类抗生素实际土壤加标回收率(n＝3)

本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种固态环境样品中磺胺类抗生素的测定方法，其特征在于，所述固态环境样品为土壤或污泥，该测定方法包括如下子步骤：

（1）以纯水作为提取剂，将预处理后的待测样品在温度为80-150℃、压力为1000-2000psi的条件下进行提取，其中预处理后的待测样品与采用的提取剂纯水的质量比为1:8-1:80；固液分离得到提取液；所述提取在快速溶剂萃取仪中进行；静态萃取时间为5-10min；淋洗体积为60%-100%池体积；氮气吹扫时间为60s-180s；静态萃取次数为2-4次；所述快速溶剂萃取仪的萃取池底部滤膜表面铺设有石英砂，待装入预处理后的待测样品后，样品表面再铺设一层石英砂；在所述萃取池内装样完毕后，样品上方保留一定的空间，该空间在竖直方向上的高度为萃取池总高度的2%-4%；所述预处理后的待测样品按照如下方法获得：将待测样品与硅藻土按照质量比1:2-2:1混合后充分研磨得到散粒状的预处理后的待测样品；所述预处理后的待测样品的粒度为20-60目；

（2）将步骤（1）获得的提取液通过HLB 固相萃取小柱分离富集，收集浓缩洗脱液，过滤后待用；其中固相萃取洗脱液为甲醇；

（3）使用超高效液相色谱串联质谱联用仪检测步骤（2）收集的滤液中磺胺类抗生素含量。

2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤（1）所述提取过程完成一次后，再使用新鲜的纯水进行重复提取，重复提取次数不少于一次。

3.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，在快速溶剂萃取仪中进行提取时，提取溶剂为超纯水，待测样品质量为1-5g。

4.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤（1）获得提取液后，无需进行溶剂置换，直接将步骤（1）获得的提取液通过HLB 固相萃取小柱分离富集，收集浓缩洗脱液。

5.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤（2）包括如下子步骤：将步骤（1）获得的提取液通过依次采用甲醇和超纯水活化后的HLB 固相萃取小柱中，流速为0.5-1.0mL/min；用超纯水淋洗该固相萃取小柱，然后在真空下抽干该萃取柱；再用甲醇洗脱，收集洗脱液转移至氮吹管中；于35-55℃、7-10 psi的条件下浓缩后加入内标溶液，混匀过滤膜后上机测试。

6.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述磺胺类抗生素为磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲异噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪和磺胺间二甲氧嘧啶中的一种或多种。

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