CN110702805B - 基于c18的ase法建立养殖鱼中19种磺胺类残留的uplc-msms检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种基于C18的ASE法建立养殖鱼中19种磺胺类残留的UPLC‑MSMS检测方法，属于兽药残留检测技术领域，通过在萃取池中分层加入样品、硅藻土和C18填料，实现ASE法能同步提取净化工作，简化实验方法；在此样品前处理技术的基础上，引入低温冷冻技术辅助ASE法对样品的净化效果，可有效去除复杂的生物基质(如极性脂肪)，显著减少基质效应，提高方法的灵敏度；结合UPLC‑MSMS，成功应用养殖鱼中多种磺胺类药物残留的检测，建立的方法检出限比现有标准方法显著减少至2～10倍。本发明检测方法简便、高效、灵敏度高、自动化程度高，适合大批量兽药检测样品的准确定性和定量分析检测。

Description

基于C18的ASE法建立养殖鱼中19种磺胺类残留的UPLC-MSMS 检测方法

技术领域

本发明属于兽药残留检测技术领域，具体涉及一种基于C18的ASE法建立养殖鱼中19种磺胺类残留的UPLC-MSMS检测方法。

背景技术

目前磺胺类残留是水产品中兽药残留的主要药物之一，因磺胺类抗生素可用于预防和治疗细菌感染性疾病，可有效干扰细菌酶系统对氨基苯甲酸的利用，进而影响细胞核蛋白质合成，起到抑制细菌的繁殖。目前关于磺胺类兽药残留的检测方法的报道有多种，且各自存在不同的优缺点。①根据磺胺结构中具有氨基的特性，药物可以采用荧光试剂进行衍生化，进而用荧光检测器(FLD)进行检测分析。②根据磺胺类兽药具有两性特性，可使用电化学检测器对目标物进行检测分析。Gonzalez等用乙酸乙酯-缓冲溶液混合液提取，硅胶柱净化后，用HPLC-电化学检测器测定了鲤鱼和鳟鱼不同部位中磺胺类残留量；2009年李存等建立了同时检测动物肌肉组织中7种磺胺类抗生素和甲氧苄啶的HPLC方法，动物组织样品经磷酸盐缓冲液提取后用HLB固相萃取柱净化处理，建立方法检出限可达5μg/Kg；但电化学检测稳定性差，因为电化学检测器中电极需要稳定时间较长，且样品基质复杂性也极易污染电极，限定了该方法的应用范围。③气相色谱串联质谱方法GC-MS是目前作为磺胺类兽药残留分析常用的确证方法，质谱检测一般采用电子轰击源EI进行检测分析，该方法能提供残留物的结构信息，且检测灵敏度高。2007年Lu等采用GC-MS方法测定了猪和牛的肌肉组织样品中的多种磺胺类药物残留，检测的离子为m/z 471，477；m/z 170，471，m/z 176，477。但在磺胺类检测分析中，样品需经过衍生化处理，去掉分子中的极性基团如氨基等，才可获得相应的测定结果，由此增加了检测方法难度，易使GC-MS法检测结果不稳定性。④目前利用大型精密度仪器如超高效液相色谱串联质谱仪已开始用于检测分析多种兽药残留物质。Huang等报道了经索氏萃取法提取牛奶中的磺胺类抗生素后再经超高液相色谱UPLC测定；胡海燕等利用UPLC法建立了猪肉和牛奶中10种磺胺类药物残留检测方法；2009年郭伟等先将采用改良的QuEChERS技术对样品进行提取和净化处理后，建立了UPLC-ESI-MS/MS检测分析牛乳中24种磺胺类药物多残留，其样品的平均回收率在64.25-110.9％之间，但该方法操作耗时长，不适合推广位日常残留监控。

快速溶剂萃取ASE技术已逐渐在环境、药物、食品和农业等领域内得到了广泛应用。2004年Yang等利用ASE技术检测磺胺和四环素残留物；2009年Lillenberg等先用磷酸盐和乙腈作为ASE提取溶剂，并加入柠檬酸作为改性剂，建立了污水中环丙沙星、诺氯沙星欧诺个氧氟沙星的检测方法；Draisci等利用ASE萃取牛肝中类固醇类药物，可提高其回收率(＞70％)；Pecorelli等用ASE方法提取了饲料中13种氟喹诺酮类药物，获得了较高的回收率。2007年Font等利用ASE，结合LC-MS建立了肌肉组织中几种磺胺类抗生素的检测方法；Carretero等将结合ASE和LC-MS/MS方法，建立了β-内酰胺类、林可胺类、大环内酯类、四环素类，硝基咪唑类和甲氧苄啶在肌肉残留的定量确证方法。由此可以看出ASE技术在应用兽药残留方面具有良好的应用前景，且ASE技术是结合提取、萃取和净化一体化性和自动化性，可有效提高兽药残检测分析效率。

尽管ASE已在多种兽药残留分析，但是对于ASE应用于磺胺类残留检测研究的较少，尤其对于水产品中磺胺类残留药物分析未有报道。磺胺类种类繁多，应用广泛，现有关于其检测方法已有报道，且现有主要采用荧光检测器对磺胺类多残留进行定量方法，需要衍生化处理，使得样品前处理过程比较繁琐。但是关于结合ASE和UPLC-MS/MS方法应用于磺胺类药物残留分析则未见报道。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种实现了ASE技术能同步提取净化工作，可有效去除样品中复杂基质，净化效果良好的基于C18的ASE法建立养殖鱼中19种磺胺类残留的UPLC-MSMS检测方法，简便、高效、灵敏度高、自动化程度高，适合大批量样品的准确定性和定量分析检测。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

基于C18的ASE法建立养殖鱼中19种磺胺类残留的UPLC-MSMS检测方法，通过ASE法对养殖鱼样品进行萃取，萃取液冷冻后经氮吹复溶，采取UPLC-MS/MS法进行检测；其中，ASE萃取用萃取池中含有C18填料。

本发明检测方法采用在ASE萃取池中同时加入样品、硅藻土和C18填料，实现了ASE技术能同步提取净化工作，建立了一种高效简便、自动化高等水产品中多种磺胺类药物残留的UPLC-MS/MS的精准定性定量检测方法。本发明检测方法建立的ASE萃取样品前处理技术，结合冷冻除脂技术，以及C18填料的高吸附特性，可有效去除样品中复杂基质，净化效果良好，具有快速、简便、高效、回收率高、自动化程度高、有机溶剂接触少、省时等优点。本发明检测方法建立的ASE方法结合超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)技术，简便、高效、灵敏度高、自动化程度高，适合大批量样品的准确定性和定量分析检测，可应用水产样品中多种磺胺类药物残留的检测，具有较好的适用性和应用性。

优选地，萃取池中在装样前放置1-2张过滤片，过滤片铺上C18填料。

优选地，萃取溶剂为含1％甲酸乙腈溶液。

优选地，萃取温度为60-80℃，萃取压力为1000-2000psi，加热时间为3-6min，静态萃取时间为1-3min，氮气吹扫时间为50-150s，循环次数为1-3次，冲洗溶剂体积为池容积的50-70％。

优选地，冷冻温度为-15至-25℃，时间为30-60min。

优选地，19种磺胺类残留包括磺胺醋酰(SA)、磺胺吡啶(SPD)、磺胺嘧啶(SDZ)、磺胺噻唑(ST)、磺胺甲基嘧啶(SMZ)、磺胺二甲唑(SFA)、磺胺甲噻二唑(SMI)、苯甲酰磺胺(SB)、磺胺二甲嘧啶(SM2)、磺胺甲氧哒嗪(SMP)、磺胺喹恶啉(SQX)、磺胺间甲恶唑(SMX)、磺胺二甲异唑(SIZ)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺对甲氧嘧啶(SM)、磺胺二甲基嘧啶(SCP)、磺胺二甲氧嗪(SDX)、磺胺邻二甲氧嘧啶(SD)、磺胺苯吡唑(SPZ)。

优选地，19种磺胺类残留在5、10、15ug/kg加标浓度下，加标回收率为80.3-108.6％，相对标准偏差为3.2-10.5％。

优选地，UPLC参数为：色谱柱：ACQUITY UPLC^TM BEH C18柱(2.1mm×100mm，1.7um)；柱温：30-40℃；进样量：5-10μL；流速：0.2-0.5mL/min；初始流动相：95％A(含0.1％甲酸、5mM乙酸铵水溶液)+5％B(乙腈)，梯度洗脱条件：2.0-8.0min，95％A-20％A，8.1min-10min，20％A-5％A。

优选地，MS/MS条件为：离子源：ESI+、正离子扫描；采集方式：动态多反应监测(MRM)模式；毛细管电压：1.70-1.75V；离子源温度：140-160℃；脱溶剂气温度：340-360℃；喷雾电压：3500-4500V；锥孔气流速：140-160L/h；脱溶剂气流速：600-700L/Hr。

优选地，检测方法还包括19种磺胺类残留混合标准溶液的配制，具体步骤为：

S1：将各磺胺类抗生素标准品用甲醇配制成质量浓度为1mg/mL的单标准储备液；

S2：将所述各单标准储备液混合，用甲醇稀释成质量浓度为1μg/L的混合标准储备液；

S3：将所述混合标准储备液用初始流动相稀释，即得到19种磺胺类残留混合标准溶液。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明检测方法建立的ASE萃取样品前处理技术，结合冷冻除脂技术，以及C18填料的高吸附特性，可有有效去除样品中复杂基质，净化效果良好，实现了ASE技术能同步提取净化工作，具有快速、简便、高效、回收率高、自动化程度高、有机溶剂接触少、省时等优点。本发明检测方法建立的ASE方法结合UPLC-MS/MS技术，简便、高效、灵敏度高、自动化程度高，适合大批量样品的准确定性和定量分析检测，可应用水产样品中多种磺胺类药物残留的检测，具有较好的适用性和应用性。

本发明采用了上述技术方案提供一种基于C18的ASE法建立养殖鱼中19种磺胺类残留的UPLC-MSMS检测方法，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。

附图说明

图1是本发明试验例1中萃取剂对19种磺胺类药物残留的回收率；

图2是本发明试验例1中萃取温度对19种磺胺类药物残留的回收率影响；

图3是本发明试验例1中萃取压力对19种磺胺类药物残留回收率的影响；

图4是本发明试验例1中循环次数对19种磺胺类药物残留回收率的影响；

图5是本发明试验例1中净化剂对19种磺胺类药物残留回收率的影响；

图6是本发明试验例1中冷冻时间对19种磺胺类药物残留的回收率；

图7是本发明试验例2中19种磺胺类药物残留的回收率；

图8是本发明试验例3中19种磺胺类药物残留的液质色谱图；

图9是本发明试验例3中19种磺胺类药物残留的液质色谱图；

图10是本发明试验例3中19种磺胺类药物残留的液质色谱图；

图11是本发明试验例3中19种磺胺类药物残留的液质色谱图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。

下面，结合具体实施例对本发明实施方式作进一步说明。

实施例1：

基于C18的ASE法建立养殖鱼中19种磺胺类残留的UPLC-MSMS检测方法

1.配制混合标准品工作液

精确称取19种磺胺类药物残留标准品(包括磺胺醋酰(SA)、磺胺吡啶(SPD)、磺胺嘧啶(SDZ)、磺胺噻唑(ST)、磺胺甲基嘧啶(SMZ)、磺胺二甲唑(SFA)、磺胺甲噻二唑(SMI)、苯甲酰磺胺(SB)、磺胺二甲嘧啶(SM2)、磺胺甲氧哒嗪(SMP)、磺胺喹恶啉(SQX)、磺胺间甲恶唑(SMX)、磺胺二甲异唑(SIZ)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺对甲氧嘧啶(SM)、磺胺二甲基嘧啶(SCP)、磺胺二甲氧嗪(SDX)、磺胺邻二甲氧嘧啶(SD)、磺胺苯吡唑(SPZ))各0.01g(精确至0.0001g)于10mL容量瓶中，甲醇定容至，配制成质量浓度为1mg/mL的单标准储备液，储存于-20℃环境下；用移液器准确吸取适量的各单标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为1μg/L的19种混合标准储备液，于避光4℃下保存；分别移取一定量上述混合标准储备液液于10mL容量瓶中，用初始流动相定容即得到混合标准工作液。

2.样品制备

所需要的样品购买于超市或市场，以多种养殖鱼为代表水产品作为研究对象。样品鱼经去鳞去腮后，清洗干净后取可食肌肉部位，放入组织捣碎机中捣碎，分装入洁净的容器密封，-20℃保存待检测。

3.样品前处理

称取鱼肉样品2.00g(准确到0.01g)，加入适量硅藻土，研磨混匀；装样前放置一张过滤片于11mL的萃取池中，并在滤片铺上4g C18填料，将混匀好的样品填入萃取池。设置最优萃取条件：萃取剂为含1％甲酸乙腈溶液，萃取池温度70℃，压力1500psi，加热时间5min，静态萃取时间2min，氮气吹扫时间100s，循环次数为2次，冲洗溶剂体积为池容积的60％。萃取结束后，将萃取液转移至离心管中，-20℃冷冻静置1h，在-4℃、10000r/min条件下离心10min，取上清液并在40℃水浴下氮吹至近干，加入1mL0.1％甲酸乙腈溶液复溶，过0.22μm滤膜，待UPLC-MS/MS检测。

S4：采取UPLC-MS/MS法对前处理后样品进行检测

UPLC条件：色谱柱：ACQUITY UPLCTM BEH C18柱(2.1mm×100mm，1.7um)；柱温：30-40℃；进样量：5-10μL；流速：0.2-0.5mL/min；初始流动相：95％A(含0.1％甲酸、5mM乙酸铵水溶液)+5％B(乙腈)，梯度洗脱条件：2.0-8.0min，95％A-20％A，8.1min-10min，20％A-5％A；

MS/MS条件：离子源：ESI+；动态多反应监测(MRM)模式；毛细管电压：1.72kv；离子源温度：150℃；脱溶剂温度：350℃；喷雾电压：4000V；锥孔气流量：150L/h；脱溶剂气流量：650L/h；19种磺胺类的色谱质谱参数详见表1。

表1 19种磺胺类的色谱质谱参数

(注：*为定量离子)

实施例2：

水产品含有蛋白质、糖、脂肪、维生素等有机物、铁、钙等矿物质无机元素及生产或运输等过程带入的各种污染物等，这些成分通过不同形式的作用力结合或络合在一起。所以，为了确保筛查结果的准确性和可靠性，需将磺胺类药物残留与其它非检测物质分离，减少对筛查结果的干扰。采用加速溶剂萃取对样品进行前处理，而加速溶剂萃取中溶剂的选择是至关重要的。为了进一步提高对磺胺类药物残留的提取效果和其稳定性。ASE萃取用萃取剂为含有5-20mg/L酒石酸铵的1％甲酸乙腈溶液，萃取剂中酒石酸铵的添加与C18发挥增益作用，显著降低萃取剂对非极性蛋白质、糖、脂肪、维生素、盐等杂质的溶解性，减少对筛查结果的干扰。本实施例用萃取剂中酒石酸铵的添加还能协助提高萃取剂在样品中的扩散速率，快速进入样品内部并降低磺胺类药物残留和样品中其它非检测物质之间的相互作用力，利于磺胺类药物残留的提取；且使得萃取剂的极性与磺胺类药物残留相同，对磺胺类药物残留的回收效果比较好，且稳定性好。所以，本实施例采取的技术方案为：

与实施例1相比，本实施例ASE萃取用萃取剂为含有8mg/L酒石酸铵的1％甲酸乙腈溶液。

试验例1：

1.萃取剂对19种磺胺类药物残留回收率的影响

查阅相关文献报道可知，磺胺类药物残留最常用的提取溶剂是乙腈，但研究发现纯乙腈提取时，待测目标物平均回收率比较低，而乙腈中加入适量的甲酸时，研究发现不同浓度甲酸乙腈溶液对磺胺类化合物的提取影响较显著。因此，本试验例考察了0.1％、1％、3％、5％和7％甲酸乙腈溶液对水产品中磺胺类药物提取效率研究。图1为萃取剂对19种磺胺类药物残留回收率的影响，有机溶剂如乙腈、甲醇具有良好的沉淀蛋白质及提取目标化合物的能力，但研究发现甲醇提取时带入更多的极性基质干扰物。纯乙腈提取时，待测物质平均回收率比较低；当乙腈中加入适量的甲酸时，发现不同浓度甲酸乙腈溶液对磺胺类化合物的提取影响较显著，当0.1％甲酸提取时，酸度较低，磺胺类兽药在溶液中的解离程度较低，使其提取回收率偏低；酸度为3％时，SPZ、ST、SQX等少数化合物回收率减少，当酸度大于5％时，大部分磺胺类目标物会发生一定程度的降解。当选择1％的甲酸乙腈溶液作为萃取溶剂时，19种磺胺类药物残留的回收率在85％-105％之间，平均回收率最高(92.2％)，得到最优回收率。

2.萃取温度对19种磺胺类药物残留回收率的影响

图2为不同萃取温度(40-90℃)对19种磺胺类药物残留的回收率影响，可以看出，随着萃取温度的提高，各目标物的回收率也逐渐增加，当萃取温度达到70℃时，19种目标物的回收率效果最好(回收率在81-102％之间，RSD＜8％)。

3.萃取压力对19种磺胺类药物残留回收率的影响

萃取压力影响着萃取溶剂对样品基质的渗透程度的影响，图3为不同萃取压力(500-2500psi)对19种磺胺类药物残留的回收率影响，可以看出，当萃取压力设置为1500psi时，回收率最佳(回收率在82-105％之间，RSD＜7％)。

4.循环次数对19种磺胺类药物残留回收率的影响

图4为不同循环次数(1-3次)对19种磺胺类药物残留的加标回收率影响，可以看出，萃取3次后，各目标物的回收率很低(在0.5-10％之间)，因此综合考虑了回收率和提取效率的两大因素，确定萃取循环次数为2次。

5.净化剂对19种磺胺类药物残留回收率的影响

净化剂包括了C18、PSA、石墨化碳黑和无水硫酸镁，其中C18主要吸附样品中的脂肪和蛋白质，PSA主要吸附样品中的脂肪酸和糖类杂质，GCB主要去除植物中的叶绿素等杂质，无水硫酸镁除去水分。由于本试验主要考察是鱼肉样品，是富含脂肪和蛋白质的样品特性。而在ASE提取过程中采用硅藻土有吸附水的作用，因此，本试验主要考察了C18和PSA对目标物的净化效果。图5为不同净化剂对19种磺胺类药物残留回收率的影响，PSA作为净化剂时，SA、SB、SM2、SDX等磺胺类残留回收率较低，分析可能原因是PSA在吸附杂质的同时对某些目标物也有一定吸附作用。C18填料提供了令人满意的回收率，回收率在82.7-103.1％之间，RSD＜10％，

6.冷冻条件对19种磺胺类药物残留回收率的影响

本试验例通过ASE提取净化过程已经去除了样品中大部分的蛋白质和脂肪，尤其是C18填料在萃取过程中能除去大部分非极性脂肪杂质，使得共萃取出溶剂中含有极性脂肪含量偏高。为了进一步对萃取剂的净化作用，本课题采用冷冻技术对样品萃取液进行纯化研究分析，通过低温冷却沉淀后离心分离杂质，采用回收率和RSD作为评价指标进行比较研究了不同冷冻时间(0h，1h，2h)对去除杂质能力的影响。图6为不同冷冻条件对19种磺胺类药物残留回收率的影响，经过冷冻处理后，各目标物抗生素的回收率高于未经冷冻净化处理，且延长冷冻时间，回收率结果基本不变。所以，冷冻时间1h为最适合冷冻时间。

试验例2：

实施例1和实施例2中19种磺胺类药物残留回收率

测定结果如图7所示，可以看出，实施例2各目标磺胺类抗生素的回收率均高于对比例1，这表明本发明实施例1用萃取剂在较低温度下即能协助提高萃取剂在样品中的扩散速率，快速进入样品内部并降低磺胺类抗生素和样品中其它非检测物质之间的相互作用力，利于磺胺类抗生素的提取；且萃取剂的极性与磺胺类抗生素相同，对磺胺类抗生素的提取效果比较好，且稳定性好。

试验例3：

本试验例采用乙腈作为有机相，考察了在水相中添加0.1％甲酸、5mM乙酸铵和含0.1％甲酸的5mM乙酸铵溶液对色谱分离和质谱灵敏度的影响。研究结果表明，含有0.1％甲酸的水相时磺胺类化合物离子化效率更高，各化合物的响应信号更强，分离度及重复性更好，且基线噪音降低。反而加了乙酸铵后部分磺胺类化合物峰型会出现变差的情况，且出现部分目标物的信号减弱现象。因此，本试验例采用0.1％甲酸水溶液-乙腈作为流动相，进一步优化梯度洗脱条件，从而达到最适分离效果以及良好的质谱灵敏度。19种磺胺类药物残留的液质色谱图见图8-图11所示，19种磺胺类药物残留具有较好的分离效果，且峰型尖锐对称。

试验例4：

检测方法的方法验证

ASE-UPLC-MS/MS法检测磺胺类药物的定量检测方法学验证包括以下参数：线性、准确性、精密度、检出限(LOD)和定量限(LOQ)。标准曲线的线性是通过相关系数(R²)体现。精密度的判定通过使用基质加标实验测定回收率和相对标准偏差(RSD)来判断。

1.方法的线性和检测限

对0.1～20ng/mL浓度范围内建立了19种磺胺类的标准曲线，称取7份空白鱼肉，按照实施例1方法经加速溶剂萃取、固相萃取净化、浓缩至干后，分别加入1mL不同浓度的混合标准工作液，振荡溶解后经0.22μm尼龙滤膜过滤，得到相应浓度的基质匹配标准工作液，然后进行UPLC-MS/MS检测，以色谱峰面积为纵坐标、以磺胺类标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，即得19种磺胺类的标准曲线。其中，标准曲线方程、线性范围、相关系数(R²)的结果见表2所示，可以看出，19种磺胺类残留化合物在相应的浓度范围内线性关系良好，相关系数R²均大于0.99，表明SAs在相应的浓度范围内线性关系良好。

检出限(LOD)和定量限(LOQ)通过基质加标液上样检测，信噪比(S/N)为3:1时，作为定量限(LOQ)；继续稀释至信噪比(S/N)为3:1时，作为方法检出限(LOD)。相应的目标物的检出限LOD在0.1-0.5μg/kg之间(如表2)，远远小于标准方法规定的LOD值，表明方法具有较高的灵敏度。

表2 19种磺胺类残留的线性方程、线性范围、相关系数和检出限

2.方法的准确度和精密度

选取鱼肉进行方法的加标回收实验，按照实施例1样品前处理方法对样品进行加标回收实验，加标水平分别为5μg/kg、10μg/kg、15μg/kg，每个浓度水平平行测定3次。结果见表3可知，19种化合物的平均回收率在80.3％～108.6％之间，相对标准偏差(RSD)在之间3.2％～10.5％，表明本方法具有较好的准确度与精密度，满足水产品中多种磺胺类药物残留检测分析的要求。

表3 19种磺胺类药物残留的平均回收率和相对偏差

试验例5：

实际样品测定

运用实施例1建立的方法来检测购自市场和超市的多种水产样品，结果见表4所示。SDZ、SMZ、SM2和SIZ在水产样品中有所检出，浓度范围在3.4-34.2μg/kg，其他磺胺类药物残留均低于检出限，表明所建立的方法能满足日常检测需求。

表4水产样品中磺胺类药物残留含量

上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。

以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。

Claims (2)

1.基于C18的ASE法建立养殖鱼中19种磺胺类残留的UPLC-MSMS检测方法，通过ASE法对养殖鱼样品进行萃取，萃取液冷冻后经氮吹复溶，采取UPLC-MS/MS法进行检测；

其中，所述19种磺胺类残留包括磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲唑、磺胺甲噻二唑、苯甲酰磺胺、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺喹恶啉、磺胺间甲恶唑、磺胺二甲异唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺二甲氧嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑；

所述ASE法的步骤为：将养殖鱼样品填入萃取池，设置萃取条件，萃取液在-15至-25℃冷冻30-60min，离心，上清液经氮吹扫50-150s，利用0.1%甲酸乙腈溶液复溶，过0.22μm滤膜，待UPLC-MS/MS检测；所述萃取池中在装样前放置1-2张过滤片，过滤片铺上C18填料；所述萃取条件为：萃取剂为含有5-20mg/L酒石酸铵的1%甲酸乙腈溶液，萃取剂体积为池容积的50-70%，萃取温度为60-80℃，萃取压力为1000-2000psi，加热时间为3-6min，静态萃取时间为1-3min，循环次数为1-3次；所述19种磺胺类残留在5、10、15μg/kg加标浓度下，加标回收率为80.3-108.6%，相对标准偏差为3.2-10.5%；

所述UPLC参数为：色谱柱：ACQUITY UPLC^TM BEH C18柱，2.1mm×100mm，1.7um；柱温：30-40℃；进样量：5-10μL；流速：0.2-0.5mL/min；初始流动相：95%A+5%B，梯度洗脱条件：2.0-8.0min，95%A-20%A，8.1min-10min，20%A-5%A；所述A为含0.1%甲酸5mM乙酸铵水溶液或含0.1%甲酸水溶液，所述B为乙腈；

所述MS/MS条件为：离子源：ESI+、正离子扫描；采集方式：动态多反应监测模式；毛细管电压：1.70-1.75V；离子源温度：140-160℃；脱溶剂气温度：340-360℃；喷雾电压：3500-4500V；锥孔气流速：140-160L/h；脱溶剂气流速：600-700L/Hr。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述检测方法还包括19种磺胺类残留混合标准溶液的配制，具体步骤为：

S1：将各磺胺类抗生素标准品用甲醇配制成质量浓度为1mg/mL的单标准储备液；

S2：将所述各单标准储备液混合，用甲醇稀释成质量浓度为1μg/L的混合标准储备液；

S3：将所述混合标准储备液用初始流动相稀释，即得到19种磺胺类残留混合标准溶液。

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