CN107576744A - 一种检测动物源性食品中兽药残留的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，采用改进的QuEChERS试剂盒方法进行样品前处理，具有简单快速、高效省力、重现性好而且低试剂消耗、低劳动强度、低成本、环境友好等优点，同时配合UPLC‑MS/MS‑Qtrap检测方法可实现十四类82种兽药的同时筛查、确证分析，进而实现了多种类兽药的高通量分析检测。

Description

一种检测动物源性食品中兽药残留的方法

技术领域

本发明公开涉及兽药残留检测的技术领域，尤其涉及一种检测动物源性食品中兽药残留的方法。

背景技术

随着生活水平的提高，动物源性食品在我国人民的饮食结构中比例越来越大，已经成为百姓餐桌上不可或缺的一部分。而人们对食品的安全意识及对食品质量的要求也越来越高。

为了治疗动物的各种疾病以及作为食物添加剂饲喂动物，以促进动物的生长，兽药在动物的养殖过程中应用非常广泛。兽药的使用在一定程度上的确起到了治疗动物疾病、促进其生长的作用，但另一方面兽药的滥用导致在动物组织以及在动物产品中存在兽药残留超标，而超标的兽药残留将对消费者的身体健康产生危害，比如一些中毒反应、过敏反应、致畸反应等等，从长远看还会对养殖业的发展和市场的正常秩序产生影响。因此，采取有效的措施，对兽药残留进行积极的检测和监控，防止残留超标的动物源性食品流入市场，成为当务之急。

开展兽药残留分析研究和开发相关的检测方法，是加强兽药残留监控中非常重要的一步。随着残留检测技术的不断发展，残留限量要求的不断降低，目前兽药残留样品处理和检测技术正朝着“绿色检测”的方向发展。随着食品安全问题日益被重视，食品检验机构面临大量的检测工作，而目前检测方法仍以单类兽药的检测为主，因此样品需要重复处理，分别检测，耗时费力。

因此，如何研发一种可实现多类兽药同时检测，特别是样品中多种兽药的筛查、确证是许多兽药残留分析工作者亟待解决的问题。

发明内容

鉴于此，本发明公开提供了一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，以至少解决以往的检测方法每次只能检测一种兽药，导致被检测样品需要重复处理，分别检测，耗时费力，检测效率低等问题。

本发明提供的技术方案，具体为，一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，该方法包括如下步骤：

1)样品前处理：称取样品放置于萃取管中，并加入体积浓度为1％的甲酸乙腈水溶液涡旋振荡，加入盐包后均质提取，离心；

取上清液置于净化管中进行净化、浓缩、定容后，备用；

2)定性分析：运用UPLC-MS/MS-Qtrap法对经过样品前处理的待检测动物源性食品样品进行筛查，采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的增强子离子扫描功能，建立MRM-IDA-EPI筛查方法，获得待检测动物源性食品样品中各目标兽药母离子的MS²谱图，用已知数据库中各兽药的标准MS²谱图与获得待检测动物源性食品样品中各目标兽药母离子的MS²谱图分别进行对比后，获得相似度值，并且匹配两者的特征碎片离子，进而判断待检测动物源性食品样品中是否含有目标兽药；

3)定量分析：分别称取各兽药标准品，依据相似相溶原理选择溶剂分别配制1mg/mL的标准储备液，备用；

按照步骤1)中的样品前处理方法对空白样品进行处理后，用空白样品基质溶液稀释标准储备液，制成混合标准储备溶液；

将混合标准储备溶液定容后，得到空白样品基质溶液，配制浓度为0.5ng/mL～80ng/mL的系列匹配标准工作溶液；

采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪对系列匹配标准工作溶液和经过样品前处理的待检测动物源性食品样品分别进行测定，获得以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标的绘制标准曲线，以此标准曲线来计算待检测动物源性食品样品中目标兽药的残留量。

优选，所述兽药为阿苯哒唑、苯硫氨酯、左旋咪唑、芬苯哒唑、地昔尼尔、盐霉素、莫能菌素、氯羟吡啶、三氯苯哒唑、吡喹酮、丙氧苯咪唑、依诺沙星、洛美沙星、麻保沙星、司帕沙星、奥比沙星、氟罗沙星、吡哌酸、西诺沙星、米洛沙星、恩诺沙星、氟甲喹、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、二氟沙星、噁喹酸、沙拉沙星、达氟沙星、培氟沙星、磺胺甲噻二唑、苯酰磺胺、磺胺吡唑、磺胺索嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺噻唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺多辛、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺醋酰、林可霉素、替米考星、克林霉素、罗红霉素、红霉素、泰乐菌素、螺旋霉素、交沙霉素、北里霉素、土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑、氯丙嗪、甲基睾丸酮、醋酸甲孕酮、地塞米松、克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、西马特罗、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、乙烯雌酚、孔雀石绿、隐色孔雀石绿以及金刚烷胺中的一种或多种。

进一步优选，所述步骤1)中样品前处理具体为：

称取样品5.00g放置于盛装有硫酸铵的50mL萃取管中，并加入20mL体积浓度为1％的甲酸乙腈水溶液，于漩涡混合器上涡旋振荡3min，将盐包中的盐全部加入萃取管中，均质提取1min，以5000r/min离心5min；

用针筒净化器抽取上清液于净化管中，插入堵头，涡旋混匀1min，以5000r/min离心3min，取5mL上清液，40℃条件下浓缩至干，加入1.0mL体积浓度为20％的甲醇水溶液溶解残渣，过0.2μm滤膜，备用。

进一步优选，所述步骤2)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的质谱条件为：

离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正/负离子扫描；采集模式：多反应监测；信息关联扫描：强度阈值100cps；增强子离子扫描：质量数采集范围m/z 50～1000Da；电喷雾电压：5500V；雾化气压力：50psi；气帘气压力：30psi；辅助气压力：60psi；离子源温度：550℃；去簇电压：80V；入口电压：10V；碰撞气能量：20、35、50V；扩展碰撞能量：15V。

进一步优选，所述步骤3)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的色谱条件为：

色谱柱：Waters BEH C₁₈反相色谱柱；柱温：40℃；进样体积：10μL；流速：0.3mL/min；

流动相：流动相A：体积浓度为0.2％的甲酸水溶液，B：体积浓度为0.2％的甲酸乙腈溶液，梯度洗脱程序：0min，95％A；1min，95％A；10min，60％A；15min，5％A；18min，5％A；18.1min，95％A；23min，95％A；

所述步骤3)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的质谱条件为：

离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正/负离子扫描；采集模式：多反应监测；电喷雾电压：5500V；雾化气压力：50psi；气帘气压力：30psi；辅助气压力：60psi；离子源温度：550℃；去簇电压：80V；入口电压：10V。

进一步优选，所述待检测动物源性食品样品为经组织匀浆机匀浆好的猪肉、牛肉、鱼肉、鸡肉或鸡肝。

本发明提供的检测动物源性食品中兽药残留的方法，采用改进的QuEChERS试剂盒方法进行样品前处理，具有简单快速、高效省力、重现性好而且低试剂消耗、低劳动强度、低成本、环境友好等优势，同时配合UPLC-MS/MS-Qtrap检测方法可实现十四类82种兽药的同时筛查、确证分析，进而实现了多种类兽药的高通量分析检测。

本发明提供的检测动物源性食品中兽药残留的方法，解决了十四类82种兽药同时提取、净化的难题，简化了样品处理步骤，具有高效、快速、成本低、操作简便、环境友好等优点，净化效果好，灵敏度高，准确度和精密度均符合多残留分析方法的要求。

附图说明

此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本发明的实施例，并与说明书一起用于解释本发明的原理。

图1为本发明公开实施例提供的一种待检测动物源性食品中可疑峰的MS²谱图；

图2为本发明公开实施例提供的一种兽药-恩诺沙星的标准MS²谱图。

具体实施方式

这里将详细地对示例性实施例进行说明，其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时，除非另有表示，不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下示例性实施例中所描述的实施方式并不代表与本发明相一致的所有实施方式。相反，它们仅是与如所附权利要求书中所详述的、本发明的一些方面相一致的方法的例子。

本实施方案通过以下技术方案来实现在动物源性食品中同时检测喹诺酮类药、磺胺类药、大环内酯类、四环素类、氯霉素类等抗生素药和激素类、抗球虫药等十四类共82种兽药残留的方法，具体包括以下步骤：

样品前处理：

1、样品提取：

准确称取样品5.00g(精确至0.01g)放置于盛装有硫酸铵的50mL萃取管中，加入20mL体积浓度为1％的甲酸乙腈水溶液(80％乙腈，20％水)，于漩涡混合器上涡旋振荡3min，将QuEChERS试剂盒中的盐包打开全部加入萃取管中，均质提取1min，以5000r/min离心5min；

2、样品净化：

用针筒净化器抽取上清液于净化管中，插入堵头，涡旋混匀1min，以5000r/min离心3min，取5mL上清液，40℃条件下浓缩至干，加入1.0mL甲醇水溶液(体积比甲醇：水＝1：4)溶解残渣，过0.2μm滤膜，备用。

定性分析：

UPLC-MS/MS-Qtrap法定性测定：采用MRM-IDA-EPI筛查确证方法，可实现定性定量一次性完成，可应用于复杂基质样品的分析。

先采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪经过样品前处理的待检测动物源性食品样品进行探测扫描，系统自动判断探测扫描采集的信号强度是否超过IDA条件设置中的各项设置值，即判断是否出现色谱峰。当满足预设置值时，系统快速(<1ms)自动切换为线性离子阱模式，进行增强子离子扫描(EPI)，并获得探测扫描所得母离子的高质量MS²谱图，用已知数据库中各兽药的标准MS²谱图与获得待检测动物源性食品样品中各目标兽药母离子的MS²谱图分别进行对比后，获得相似度值，并且匹配两者的特征碎片离子，进而判断待检测动物源性食品样品中是否含有目标兽药。

定量分析：

对基质匹配标准工作溶液和待检测样品进行测定，以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，以此标准曲线来计算供试样品中目标兽药的残留量。

其中，定量分析中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪采用的色谱条件为：Acquity Waters BEH C₁₈柱(2.1×100mm，1.7μm)，流动相A：体积浓度为0.2％的甲酸水溶液；B：体积浓度为0.2％的甲酸乙腈溶液，采用梯度洗脱，梯度洗脱条件见表1，流速0.3mL/min，柱温40℃，进样体积10μL。

表1.液相色谱梯度洗脱程序

时间(min)	流速(mL/min)	流动相A％	流动相B％
				0	0.3	95	5
1	0.3	95	5
				10	0.3	60	40
15	0.3	5	95
				18	0.3	5	95
18.1	0.3	95	5
				23	0.3	95	5

其中，液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪采用的质谱条件为：电离模式：电喷雾正离子ESI(+)/电喷雾负离子ESI(-)；检测方式：多反应监测扫描(MRM)；电喷雾电压(IS)：5500V；雾化气压力(GS1)：50psi；气帘气压力(CUR)：30psi；辅助气压力(GS2)：60psi；离子源温度(TEM)：550℃；去簇电压(DP)：80V；入口电压(EP)：10V。

82种兽药的保留时间及质谱采集参数见表2。

表2.待测兽药的质谱参数

*定量离子。

本实施方案提供的检测动物源性食品中兽药残留的方法与现有技术相比，具有以下优良效果：

(1)本实施方案建立了一种分析动物源性食品中十四类82种兽药残留的UPLC-MS/MS-Qtrap筛查测定方法，实现了不同种类兽药的同时检测。

(2)本实施方案采用改进的QuEChERS方法处理样品，实现了十四类82种兽药同时提取、净化，具有简便、高效、快速、环境友好等优点。

(3)本实施方案采用改进的QuEChERS试剂盒方法，其中，改进的QuEChERS试剂盒方法，在萃取管中本身就添加有硫酸铵，而且还设置有用于在提取步骤中加入的单独包装的盐包以及在净化步骤中采用针筒式滤膜过滤器。与传统的QuEChERS方法相比，萃取管中硫酸铵可以保证溶液的PH值与原方法中的醋酸-醋酸钠缓冲体系结果一样，只需加入乙腈一种常用溶液即可。专有盐包，避免直接称量、导入时洒出，操作方便。避免了在提取过程中先加入无水硫酸镁与无机盐，硫酸镁结块且发热量过大，容易引起易挥发待测物的挥发损失。针筒式滤膜过滤器净化方式，无需离心，即可上样分析，操作简便，成本低，净化效果好。

(4)本实施方案采用选择性好，抗干扰能力强的UPLC-MSMS-Qtrap方法检测，稳定性好，灵敏度高，准确度和精密度均符合多残留分析方法的要求，同时具有筛查、确证功能，可避免假阳性样品的检出。选择MRM-IDA-EPI功能，在IDA中设置相关的判定标准，连接液相，输入液相的采集条件，进行数据采集，一旦MRM采集的信号强度超过判定标准值，就会触发EPI进行增强子离子扫描采集MS²图，对采集的图谱打开其可疑峰(通过保留时间、峰形等判断)的MS²图，进行已知谱库搜索等操作，同谱库的质谱数据进行对比，得到相应的匹配数据，用以进行判断残留的检出，进而实现快速筛查和确证的目的。

(5)本实施方案的检出限和定量限低，方法灵敏度高，回收率稳定，重现行好，符合多残留分析的要求。

具体实施例

下面以具体的实施例对本发明进行更进一步的解释说明，但并不用于限制本发明的保护范围。

下面采用上述方法对猪肉、牛肉、鱼肉、鸡肉、鸡肝五种动物组织分别进行82种兽药残留量的测定及可疑峰筛查。

1.仪器和试剂

主要仪器：ACQUITY^TM超高效液相色谱仪(美国Waters公司)；AB Sciex QTrap 5500四极杆-离子阱质谱仪(美国AB公司)；QuEChERS试剂盒(中国山东青成仪器有限公司)。

主要试剂：82种标准品的纯度均≥98.0％，购自Dr.Ehrenstorfer GmbH公司、农业部环境保护科研监测所(天津)、国家标准物质中心等标准品生产厂商及研究机构。

2.标准溶液配制：

准备标准储备液：分别称取各标准品适量，依据相似相溶原理选择适宜的溶剂(甲醇、乙腈、丙酮、氨水等)配制为约1mg/mL的标准储备液，置于棕色瓶中-20℃或4℃下保存备用。

准备基质匹配标准工作溶液：为了消除基质效应对定量测定的影响，用空白样品溶液稀释混合标准储备溶液。对空白样品按下述相同前处理方式处理，用空白样品基质溶液稀释混合标准储备溶液，定容得到空白样品基质溶液，配制浓度为0.5ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、40ng/mL、80ng/mL的系列匹配标准工作溶液。

3.色谱质谱分析条件：

色谱分析条件：

Waters BEH C₁₈反相色谱柱；流动相A：体积浓度为0.2％的甲酸水溶液，B：体积浓度为0.2％的甲酸乙腈溶液；采用梯度洗脱，流速0.3mL/min，梯度洗脱程序：0min，95％A；1min，95％A；10min，60％A；15min，5％A；18min，5％A；18.1min，95％A；23min，95％A；柱温40℃；进样体积10μL。

质谱分析条件：

离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正/负离子扫描；采集模式：多反应监测(MRM)；电喷雾电压(IS)：5500V；雾化气压力(GS1)：50psi；气帘气压力(CUR)：30psi；辅助气压力(GS2)：60psi；离子源温度(TEM)：550℃；去簇电压(DP)：80V；入口电压(EP)：10V。其中，82种兽药的保留时间及质谱采集参数见表2。

4.样品前处理方法：

样品提取：准确称取均质的样品5.00g(精确至0.01g)放置于盛装有硫酸铵的50mL萃取管中，加入20mL体积浓度为1％的甲酸乙腈水溶液(80％乙腈，20％水)，于漩涡混合器上涡旋振荡3min，将QuEChERS试剂盒中的盐包打开全部加入萃取管中，均质提取1min，以5000r/min离心5min。

样品净化：用针筒净化器抽取上清液于净化管中，插入堵头，涡旋混匀1min，以5000r/min离心3min，取5mL上清液，40℃快速浓缩至干，加入1.0mL甲醇水溶液(体积比甲醇：水＝1：4)溶解残渣，过0.2μm滤膜，备用。

5.定量分析及方法的有效性评价：

线性、检出限和定量限：对系列浓度的基质匹配标准溶液进行测定，以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。然后对供试样品进行测定，得到各种兽药的定量离子的峰面积，代入标准曲线，计算得82种兽药的残留量。向空白样品中添加不同质量的标准溶液，以3倍信噪比和10倍信噪比分别计算出方法的检出限和定量限。82种兽药的检出限在0.01～1.71μg/kg之间，定量限在0.12～5.71μg/kg之间，各化合物的线性回归方程、检出限、定量限见表3。

表3.兽药的线性回归方程、相关系数r、检出限、定量限

准确度和精密度：在5、10、50μg/kg三个浓度水平做加标回收实验，每个浓度水平做6个平行样品，分别进行样品前处理和仪器分析，并按照加标量和测定值计算回收率。动物组织中82种兽药的平均回收率和相对标准差(RSD)见表4。由表4可以看出，82种兽药在猪肉、牛肉、鱼肉、鸡肉、鸡肝五种动物组织中的平均回收率在60.0％～110.4％之间，相对标准差在1.9％～22.3％之间，符合多残留分析的要求。

表4.动物源性样品中不同添加水平下的回收率和相对标准偏差(n＝6)

6.可疑峰定性筛查分析举例

采用Analyst软件进行高通量的未知物快速筛查。检测实际样品，在MRM扫描模式下发现疑似目标物，通过比对实际样品检测结果和数据库中三种能量下的碎片、丰度比、保留时间等信息进行化合物确证。

质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正/负离子扫描；采集模式：多反应监测(MRM)；信息关联扫描(IDA)：强度阈值100cps；增强子离子扫描(EPI)，质量数采集范围m/z 50～1000Da；电喷雾电压(IS)：5500V；雾化气压力(GS1)：50psi；气帘气压力(CUR)：30psi；辅助气压力(GS2)：60psi；离子源温度(TEM)：550℃；去簇电压(DP)：80V；入口电压(EP)：10V；碰撞气能量(CE)：20、35、50V；扩展碰撞能量(CES)：15V。

选择MS²谱图并且使图形最大化，右击鼠标，点击Search Library软件会自动给出筛查的结果。Fit值(匹配值)是用标准物质谱图与可疑样品谱图进行对比后获得的相似度值，满分为100，Fit值越大可信度越高说明化合物的可能性越大；Revfit值(反相匹配值)是用可疑样品谱图与标准物质谱图进行对比后获得的相似度值；Purity值(纯度值)是综合前两种结果得到的数值。图1为样品中可疑峰的MS²谱图，图2为恩诺沙星标准品的MS²谱图，从表5可明显看出，库中恩诺沙星(Enrofloxacin)得分高，排列最靠前，并且特征碎片离子都与样品中匹配，由此可判断此样品中含有恩诺沙星，进一步提高了对结果确证的信心，避免了假阳性结果的产生。

表5.

	Name	Formula	Molecularweight(Da)	Fit	RevFit	Purity	CE
								1	Enrofloxacin	C19H22FN3O3	359.1000	90.407	87.943	83.023	35.000
2	Enrofloxacin	C19H22FN3O3	359.1000	92.636	40.194	38.336	20.000
								3	Pefloxacin	C17H20FN3O3	333.1000	50.420	20.772	13.908	50.000
4	Enrofloxacin	C19H22FN3O3	359.1000	65.049	16.889	11.839	50.000
								5	Enrofloxacin	C19H22FN3O3	359.1000	41.740	20.522	11.286	35.000
6	Oxfendazole	C15H13N3O3S	315.0000	94.169	10.313	10.107	20.000
								7	Dichlofentihion	C10H13Cl2O3PS	313.9000	98.504	10.068	9.918	20.000
8	Sarafloxacin	C20H17F2N3O3	385.1000	33.036	27.801	9.780	35.000
								…

本领域技术人员在考虑说明书及实践这里公开的发明后，将容易想到本发明的其它实施方案。本申请旨在涵盖本发明的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本发明的一般性原理并包括本发明未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的，本发明的真正范围和精神由下面的权利要求指出。

应当理解的是，本发明并不局限于上面已经描述并在附图中示出的精确结构，并且可以在不脱离其范围进行各种修改和改变。本发明的范围仅由所附的权利要求来限制。

Claims (6)

1.一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)样品前处理：

称取样品放置于萃取管中，并加入体积浓度为1％的甲酸乙腈水溶液涡旋振荡，加入盐包后均质提取，离心；

取上清液置于净化管中进行净化、浓缩、定容后，备用；

2)定性分析：

运用UPLC-MS/MS-Qtrap法对经过样品前处理的待检测动物源性食品样品进行筛查，采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的增强子离子扫描功能，建立MRM-IDA-EPI筛查方法，获得待检测动物源性食品样品中各目标兽药母离子的MS²谱图，用已知数据库中各兽药的标准MS²谱图与获得待检测动物源性食品样品中各目标兽药母离子的MS²谱图分别进行对比后，获得相似度值，并且匹配两者的特征碎片离子，进而判断待检测动物源性食品样品中是否含有目标兽药；

3)定量分析：

分别称取各兽药标准品，依据相似相溶原理选择溶剂分别配制1mg/mL的标准储备液，备用；

按照步骤1)中的样品前处理方法对空白样品进行处理后，用空白样品基质溶液稀释标准储备液，制成混合标准储备溶液；

将混合标准储备溶液定容后，得到空白样品基质溶液，配制浓度为0.5ng/mL～80ng/mL的系列匹配标准工作溶液；

采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪对系列匹配标准工作溶液和经过样品前处理的待检测动物源性食品样品分别进行测定，获得以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标的绘制标准曲线，以此标准曲线来计算待检测动物源性食品样品中目标兽药的残留量。

2.根据权利要求1所述检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，所述兽药为阿苯哒唑、苯硫氨酯、左旋咪唑、芬苯哒唑、地昔尼尔、盐霉素、莫能菌素、氯羟吡啶、三氯苯哒唑、吡喹酮、丙氧苯咪唑、依诺沙星、洛美沙星、麻保沙星、司帕沙星、奥比沙星、氟罗沙星、吡哌酸、西诺沙星、米洛沙星、恩诺沙星、氟甲喹、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、二氟沙星、噁喹酸、沙拉沙星、达氟沙星、培氟沙星、磺胺甲噻二唑、苯酰磺胺、磺胺吡唑、磺胺索嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺噻唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺多辛、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺醋酰、林可霉素、替米考星、克林霉素、罗红霉素、红霉素、泰乐菌素、螺旋霉素、交沙霉素、北里霉素、土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑、氯丙嗪、甲基睾丸酮、醋酸甲孕酮、地塞米松、克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、西马特罗、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、乙烯雌酚、孔雀石绿、隐色孔雀石绿以及金刚烷胺中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，所述步骤1)样品前处理具体为：

称取样品5.00g放置于盛装有硫酸铵的50mL萃取管中，并加入20mL体积浓度为1％的甲酸乙腈水溶液，于漩涡混合器上涡旋振荡3min，将盐包中的盐全部加入萃取管中，均质提取1min，以5000r/min离心5min；

用针筒净化器抽取上清液于净化管中，插入堵头，涡旋混匀1min，以5000r/min离心3min，取5mL上清液，40℃条件下浓缩至干，加入1.0mL体积浓度为20％的甲醇水溶液溶解残渣，过0.2μm滤膜，备用。

4.根据权利要求1所述检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，所述步骤2)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的质谱条件为：

离子源：电喷雾离子源；

扫描模式：正/负离子扫描；

采集模式：多反应监测；

信息关联扫描：强度阈值100cps；

增强子离子扫描：质量数采集范围m/z 50～1000Da；

电喷雾电压：5500V；

雾化气压力：50psi；

气帘气压力：30psi；

辅助气压力：60psi；

离子源温度：550℃；

去簇电压：80V；

入口电压：10V；

碰撞气能量：20、35、50V；

扩展碰撞能量：15V。

5.根据权利要求1所述检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，所述步骤3)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的色谱条件为：

色谱柱：Waters BEH C₁₈反相色谱柱；

柱温：40℃；

进样体积：10μL；

流速：0.3mL/min；

流动相：流动相A：体积浓度为0.2％的甲酸水溶液，B：体积浓度为0.2％的甲酸乙腈溶液，梯度洗脱程序：0min，95％A；1min，95％A；10min，60％A；15min，5％A；18min，5％A；18.1min，95％A；23min，95％A；

所述步骤3)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的质谱条件为：

离子源：电喷雾离子源；

扫描模式：正/负离子扫描；

采集模式：多反应监测；

电喷雾电压：5500V；

雾化气压力：50psi；

气帘气压力：30psi；

辅助气压力：60psi；

离子源温度：550℃；

去簇电压：80V；

入口电压：10V。

6.根据权利要求1所述检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，所述待检测动物源性食品样品为经组织匀浆机匀浆好的猪肉、牛肉、鱼肉、鸡肉或鸡肝。