CN104585732B - 一种灵芝孢子保健食品及其制备方法与缓解体力疲劳应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种灵芝孢子保健食品及其制备方法与缓解体力疲劳应用，本发明的灵芝孢子保健食品按重量百分比计包括如下组分：灵芝孢子提取物20-30%、西洋参66-78%和二十八烷醇2-4%组成。制备灵芝孢子保健食品的方法：（1）将灵芝孢子超微粉碎，脱油，水提，滤过，a.滤液浓缩干燥粉碎成灵芝孢子提取物细粉，或b.滤液浓缩、醇沉，取沉淀干燥粉碎成灵芝孢子提取物细粉；（2）西洋参洗净、干燥、灭菌，粉碎成细粉；（3）二十八烷醇粉碎成细粉；（4）把以上各细粉混合制成颗粒，分装，质检合格，即得。本发明的灵芝孢子保健食品不仅具有较好的缓解体力疲劳作用，而且安全稳定无毒副作用；且本发明的制备方法工艺简单、适于工业化生产。

Description

一种灵芝孢子保健食品及其制备方法与缓解体力疲劳应用

技术领域

本发明涉及保健食品，尤其涉及一种具有缓解体力疲劳功能的灵芝孢子保健食品及其制备方法。

背景技术

灵芝的发现与应用，在中国已有5000多年的历史，我国最早的药学专著《神农本草经》将灵芝列为上品，称之为：“上上之药，方中妙品”。现代医学药理研究和临床上都已证明：灵芝具有抗疲劳、提高机体血红蛋白含量，提高免疫力，抗肿瘤，延缓衰老,保肝护肝等功效。灵芝孢子更是灵芝的精华，含有灵芝的全部遗传活性物质。

西洋参(PanaxquinquefoliumL.或Americaginseng)又名西洋人参、洋参、花旗参、广东人参，为五加科多年生草本植物西洋参的干燥根，性寒，味苦、微甘，归心、肺、肾经，具有滋补强壮，养血养阴，健脾益气之功效，对肺虚久渴，失血，咽干口渴，虚热烦倦等有良好的疗效，其化学成分主要为皂甙、蛋白质、酶类、有机酸、氨基酸和微量元素等,其中西洋参皂甙(PQS)为其主要有效成分,具有显著的生理活性。国内外学者对西洋参进行了大量的研究，证明西洋参皂甙具有抗疲劳、增强机体耐缺氧能力，提高机体免疫能力，延缓衰老，降血压，降血脂等作用。由于西洋参可以发挥多种对人体的保健作用，故作为保健食品的配方之一也越来越受到人们的重视，长期以来被人们广泛地使用。

二十八烷醇(Octacosanol)是天然存在的高级醇，为白色粉末或鳞片状晶体，可溶于热乙醇、乙醚、苯、甲苯、氯仿等有机溶剂，不溶于水，对酸、碱、还原剂稳定，对光、热稳定，不吸潮，无毒。二十八烷醇是美国科学家LeviMontalcini发现的人体活性细胞生长因子，并获得诺贝尔生物学奖，是国际公认的抗疲劳物质，广泛存在于蔗蜡、蜂蜡、糠蜡、虫蜡，小麦胚芽油等天然产物中，对人体和动物具有明显的生物活性，可以提高人体耐力、精力和体力，强化心脏机能，提高耐缺氧能力，促进心肌及骨骼肌能量代谢，也是降血钙素形成促进剂，对血钙过多的骨质疏松、高胆固醇和高脂蛋白血型等有良好的疗效，还可以刺激动物及人类的性行为，是一种极为理想的天然保健食品。

经文献检索，未见与本发明完全相同的公开文献报道，也未见有二十八烷醇与灵芝孢子或西洋参的组合物。二十八烷醇多与氨基酸等能量物质组合，应用于耐缺氧性运动疲劳，如：中国专利CN103750143A公开了一种含二十八烷醇的耐缺氧性抗疲劳能量组合物，中国专利CN103766736A公开了一种含二十八烷醇的抗疲劳能量组合物，中国专利CN103907919A公开了一种具有减轻运动疲劳和快速补充体能的组合物。灵芝孢子和西洋参多与铁皮石斛或银杏叶等其他原料组合，应用于药物治疗或增强免疫力、抗老年痴呆等领域。与本发明最相似的中国专利CN102228494A公开了一种扶正固本、增强人体免疫力、抗疲劳、抗肿瘤、延缓衰老的中药组合物，该组合物原料药组成为蝙蝠蛾拟青霉菌丝体、灵芝、西洋参等。本发明与这些组合物相比，更突出之处在于：本发明以灵芝孢子、西洋参和二十八烷醇三种原料进行科学配伍，配方相辅相成，产生协同效果，极大地提高了三者的生物利用度，使得缓解疲劳作用增强，同时还具有良好的增强免疫力功效和抗癌活性。

发明内容

本发明的主要目的之一在于提供一种具有缓解体力疲劳功能的灵芝孢子保健食品。为实现上述发明目的，本发明的灵芝孢子保健品，由下列成分按重量比组成：灵芝孢子提取物20-30％、西洋参66-78％和二十八烷醇2-4％。

进一步，由下列成分按重量比组成：灵芝孢子提取物25.71％、西洋参71.43％和二十八烷醇2.86％。

本发明的另一目的在于提供一种制备上述灵芝孢子保健食品的方法，包括以下步骤：

(1)制备灵芝孢子提取物

取灵芝孢子，超微粉碎、脱油后，置提取罐中，加8-30倍水，在100℃下煎煮1-2次，每次2-4小时，滤过，合并滤液，将滤液浓缩至相对密度1.10-1.20(60-70℃)，a.将浓缩液干燥得灵芝孢子提取物；或b.往浓缩液中加入乙醇至含醇量80％以上，搅拌均匀后，静置，滤过，干燥粉碎，过60-80目筛，得灵芝孢子提取物细粉；

(2)西洋参前处理

取西洋参药材，经纯净水冲洗后70-80℃干燥，粉碎，过60-80目筛，得西洋参细粉，灭菌，备用；

(3)取二十八烷醇，粉碎过60-80目筛，得二十八烷醇细粉；

(4)取上述细粉，按灵芝孢子提取物20-30％、西洋参66-78％和二十八烷醇2-4％配料，混匀得到总混粉，以纯净水或乙醇为润湿剂，制成软材，再过筛制成湿颗粒；

(5)以上制得的湿颗粒干燥至含水量5％以下，干燥温度为50-60℃；

(6)将烘干后的颗粒按需要进行分装，并质检后，制得合格灵芝孢子保健食品。

本发明的灵芝孢子保健食品由于采用天然的植物及其提取物组方，人长期食用后，无任何不良影响，并经功能性试验证明，长期食用具有缓解体力疲劳的功能，使用方便；而且本发明的制备工艺简单，且能产业化生产。

具体实施方式

实施例1：

(1)制备灵芝孢子提取物

取灵芝孢子440kg，超微粉碎，脱油得破壁脱油孢子粉320kg，先加30倍水至提取罐中，煮至70℃，取破壁脱油孢子粉，边搅拌边投料，再煮至100℃，保温回流搅拌提取3小时，静置18小时，抽取上清液置储液罐中，滤渣再加25倍水煮至100℃，保温回流搅拌提取3小时，静置18小时，抽取上清液置另一储液罐中，分别将料液离心，用5μm滤袋滤过，再经板框过滤，得澄清滤液，滤液浓缩成浸膏(1.10，60℃)，往浓缩液中加入18倍重量95％乙醇，搅拌均匀，静置24小时，抽出上清液，并回收乙醇，剩余溶液置10μ滤袋离心，沉淀置70℃真空干燥，收得灵芝孢子提取物10kg，粉碎过80目筛，得灵芝孢子提取物细粉9.36kg。

(2)西洋参前处理

取西洋参药材28kg，经纯净水冲洗后置75℃干燥，粉碎，过80目筛，得西洋参细粉26kg，灭菌，备用。

(3)取二十八烷醇1.05kg，粉碎过80目筛，得二十八烷醇细粉1.0kg。

(4)取上述灵芝孢子提取物细粉、西洋参细粉和二十八烷醇细粉，按灵芝孢子提取物25.71％(w/w)、西洋参71.43％(w/w)和二十八烷醇2.86％(w/w)配料，混匀得到总混粉，以乙醇为润湿剂，制成软材，再过20目筛制成湿颗粒。

(5)以上制得的湿颗粒干燥至含水量4％以下，干燥温度为60℃。

(6)将烘干后的颗粒，分装成0号硬胶囊，每粒装0.35g，并质检后，制得合格灵芝孢子保健食品胶囊10万粒。

所述步骤(4)～(6)在卫生洁净度为10万级的洁净车间内进行。

使用方法：取灵芝孢子保健食品胶囊，口服，每日3次，每次1粒。

实施例2：将灵芝孢子提取物细粉、西洋参细粉和二十八烷醇细粉，按灵芝孢子提取物细粉20％、西洋参细粉78％和二十八烷醇细粉2％的重量配料，其他与实施例1相同。

实施例3：将灵芝孢子提取物细粉、西洋参细粉和二十八烷醇细粉，按灵芝孢子提取物细粉30％、西洋参细粉66％和二十八烷醇细粉4％的重量配料，其他与实施例1相同。

实验结果：

安全性实验

检验样品：实施例1制备的灵芝孢子保健食品200g

检验单位：广东省疾病预防控制中心

检验依据：《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)

1、小鼠急性毒性试验

NIH种小白鼠40只，18-22g，雌雄各半，采用Horn’s法，随机分为4个剂量组，禁食不禁水16小时候，灌胃两次，间隔3小时，灌胃量0.20ml/10g.BW，观察一周，结果见表1。

表1灵芝孢子保健食品急性毒性试验结果

结果：未观察到动物有任何不良反应，得雌雄小鼠LD₅₀＞21.50g/kg.BW，相当于受试物推荐量的1229倍，受试物灵芝孢子保健食品属无毒级物质。

2、小鼠骨髓微核试验

NIH种小鼠50只，体重25-30g，分别将鼠分为5组，按表2剂量，用30小时给受试物方法试验：分两次灌胃，灌胃量0.20ml/10g.BW(环磷酰胺阳性组作经口染毒)，于第二次灌胃6小时后，处死小鼠取胸骨骨髓材料制片、染色、镜检，求出各组微核率，结果按泊松分布方法统计，见表2。

表2灵芝孢子保健食品小鼠骨髓微核试验

^**与阴性对照组比较p﹤0.01。

结果：灵芝孢子保健食品各剂量组的微核率与阴性对照组比较，差异在统计学上均无显著性意义，试验结果为阴性，受试物对体细胞无诱变作用。

3、小鼠精子畸形试验

NIH种雄小鼠25只，体重25-35g，随机分成5组，按表3剂量连续灌胃5天，灌胃量0.20ml/10g.BW(环磷酰胺阳性组作经口染毒)，经35天后处死动物取双侧副睾按常规制片、染色，油镜下每组检查完整精子5000条，求出精子畸形率，按wilcoson秩和方法检验，结果见表3。

表3灵芝孢子保健食品小鼠精子畸形分析结果

^**与阴性对照组比较p﹤0.01。

结果：灵芝孢子保健食品各剂量组的精子畸形率与阴性对照组比较，差异在统计学上无显著意义，试验结果为阴性，受试物对生殖细胞无诱变作用。

4、Ames试验

采用经过鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102试验菌株，进行加与不加S9的平板掺入法试验。样品用蒸馏水配制和稀释，设5000、1000、200、40、8μg/皿五个剂量组，同时设自发回变、溶剂对照、阳性诱变剂对照，在37℃下培养48小时，记录各试验组每皿回变菌落数。如受试物回变菌落数的增加超过溶剂对照2倍以上，并有剂量-反应关系者，判定为致突变阳性，结果见表4、5。

表4灵芝孢子保健食品对鼠伤寒沙门氏菌的回变结果(第1次)

表5灵芝孢子保健食品对鼠伤寒沙门氏菌的回变结果(第2次)

结果：灵芝孢子保健食品对鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102试验菌株，在加与不加S9时，5000、1000、200、40、8μg/皿五个剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照菌落数2倍，亦无剂量-反应关系，表明Ames试验结果阴性。

5、大鼠30天喂养试验

剂量设计：本实验设计低、中、高三个剂量组，剂量分别为0.438、0.875、1.75g/kgBW，为人体推荐量的25、50、100倍，另设空白对照组。

样品处理：根据大鼠饲料摄入量10g/100gBW折算，将样品均匀掺入饲料中，分别制成含0.438％、0.875％和1.75％样品的颗粒饲料，给予低、中、高剂量组动物摄食。

试验方法：80只大鼠在实验室条件下检疫一周后，随机分成受试物低、中、高三个剂量和空白对照四个组，每组20只，雌雄各半，分笼饲养。将已加入受试物的颗粒饲料给予低、中、高三个剂量组，空白对照给予正常颗粒饲料，连续30天自由饮食，每鼠保证有充足饮水和饲料供应，每周称量并记录动物体重和两次饲料加入及剩余量。

观察指标：(1)大鼠一般生理体征、外观、行为、大小便、皮毛等；(2)体重、脏器重量、脏/体比值和食物利用率；(3)血液常规和生化指标：血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数、血小板计数、谷丙转胺酶、谷草转胺酶、血糖、总蛋白、白蛋白、A/G、总胆固醇、甘油三酯、肌酐和尿素氮；(4)病理检查：各组大鼠心、肝、脾、肾、胃、小肠和性腺等器官的大体解剖学检查；对照组及高剂量组大鼠肝、脾、肾、胃、小肠和性腺的组织病理学检查。

结果:

(1)一般情况：各组大鼠生理体征、外观、行为、大小便、皮毛等均未见异常。

(2)体重和食物利用率变化：各剂量组体重和食物利用率与空白对照组比较，差异均无显著性意义，本受试物对大鼠生长和食物利用率无明显影响。

(3)血常规指标：雌雄各剂量组血常规指标与空白对照组比较，差异均无显著性意义，结果显示受试样品30天喂养实验血常规指标无异常。

(4)血生化指标：雌雄各剂量组与空白对照组比较，差异无显著性意义，结果显示受试样品30天喂养试验生化指标无异常。

(5)脏器重量与脏/体比值：各剂量组脏器重量和脏/体比值与空白对照组比较，差异均无显

著性意义，结果显示该受试样品30天喂养试验脏器重量和脏/体比值指标正常。

(6)病理学检查：

大体检查：

各种大鼠心、肝脏、肾脏、胃及小肠、脾脏和性腺等器官的大体检查，未见异常。

组织病理学检查：

对各剂量组动物作大体检查未发现明显病变和生化指标未发现异常改变的前提下，选择对照组和高剂量组大鼠的肝脏、肾脏、胃、小肠、脾脏和性腺标本进行组织病理学检查。结果如下：

肝脏：雄性对照组、高剂量组各2例，雌性对照组3例，雌性高剂量组1例动物肝组织内可见肝细胞小灶性坏死伴炎细胞浸润。其余动物肝脏被膜完整，未见增厚，肝小叶结构完整。未见肝细胞明显水样变性、脂肪变性或坏死等病理改变。肝细胞内及胆管内未见胆汁淤积。门管区无扩大，无渗出等异常表现。

肾脏：皮髓质结构清晰，肾小球未见明显肿胀或萎缩、纤维化，也未见变性、坏死等病理改变。肾小球上皮细胞未见变性、坏死，集合管未见各类管型。间质未见炎症细胞浸润。

胃及小肠：镜下可见各层结构清晰，粘膜上皮完整，未见糜烂、出血、坏死或溃疡形成，腺体排列整齐，未见萎缩或增生；肌层未见肥厚或萎缩。

脾脏：脾脏被膜完整，未见增厚，脾红、白髓结构清晰。未见脾小体萎缩、分离或消失、坏死，未见脾窦扩张充血、脾梗塞等病理改变。

性腺：雄性大鼠睾丸白膜完整，未见增厚，曲细精管结构正常，未见基底膜增厚、变性等改变；各级生精细胞依次排列有序，未见生精上皮细胞减少、变性、或坏死等病理改变；未见间质水肿、出血。雌性大鼠卵巢表面上皮完整，各级卵泡结构正常，未见卵泡囊肿；未见卵巢黄素囊肿及纤维化等病理改变。

综上，对照组与高剂量组大鼠的肝脏、肾脏、胃、小肠、脾脏和性腺组织病理学观察结果大致相同，未见与受试物有关的特殊病理改变。

表6灵芝孢子保健食品30天喂养试验大鼠体重变化情况

表7灵芝孢子保健食品30天喂养试验大鼠每周食物利用率变化情况

表8灵芝孢子保健食品30天喂养试验大鼠总食物利用率变化情况

表9灵芝孢子保健食品30天喂养试验终期血常规指标

表10灵芝孢子保健食品30天喂养试验终期白细胞分类指标

表11灵芝孢子保健食品30天喂养试验终期血清生化指标

表12灵芝孢子保健食品30天喂养试验终期血清生化指标

表13灵芝孢子保健食品30天喂养试验大鼠脏器重量结果

表14灵芝孢子保健食品30天喂养试验大鼠脏/体比值结果

表15灵芝孢子保健食品30天喂养试验大鼠肝脏组织病理学检查结果

缓解体力疲劳功能试验：

检验样品：实施例1制备的灵芝孢子保健食品2000g

检验单位：广东省疾病预防控制中心

检验依据：《保健食品功能学评价程序和检验方法》(2003版)

1、负重游泳试验

各剂量组经口连续30天分别给予灵芝孢子保健食品，末次给予受试物30min后，将尾根部负荷5％体重铅皮的小鼠置于水深30cm、水温25±0.5℃的游泳箱中游泳，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，即小鼠负重游泳时间。

2、尿素氮、血乳酸及肝糖原测定

尿素氮测定：各剂量组经口连续30天分别给予广药牌活力泰胶囊，末次给予受试物30min后，各剂量组无负重的小鼠分别在水温30℃水中游泳90min，休息60min后采眼球血，4℃冰箱放置3小时后分离血清，用酶法试剂盒测定尿素氮。

肝糖原测定：采用蒽酮法，各剂量组经口连续30天分别给予灵芝孢子保健食品，末次给予受试物30min后，准确称取100mg肝，加入8mlTCA液，每管匀浆1min，以3000转/min离心15min，取上清液1ml，加入95％乙醇4ml，充分混匀，37℃水浴3h。用2ml蒸馏水溶解糖原，振荡至糖原完全溶解后将10ml蒽酮试剂加入各管，浸入沸水15min，冷却后用721分光光度计，波长620nm比色测定，按公式计算肝糖原含量。

血乳酸含量测定：各剂量组经口连续30天分别给予灵芝孢子保健食品，第30天给受试物30min后，第一次采眼球血后即放于水温30℃游泳10min，第二次采眼球血，然后停止安静20min，第三次采眼球血，按法国生产LACTATE～PAP试剂盒分别测定游泳前乳酸和游泳后0min、20min的乳酸，根据公式计算三时点乳酸曲线下面积。

血乳酸曲线下面积计算公式：

血乳酸曲线下面积＝5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后休息20min的血乳酸值)

统计：所有数据用SPSS11.0软件包进行方差分析统计。

3、试验结果

灵芝孢子保健食品对小鼠负重游泳时间的影响：由表16可见，高剂量组与纯水对照组比较，小鼠负重游泳时间明显延长，差异有显著性意义(P＜0.05)，试验结果阳性。

表16灵芝孢子保健食品对小鼠负重游泳时间的影响

注：*表示剂量组与纯水对照组比较P＜0.05(q检验)。

灵芝孢子保健食品对小鼠运动后血清尿素氮含量的影响：由表17可见，各剂量组与纯水对照组比较，小鼠运动后血清尿素氮含量降低，其中低剂量组与纯水对照组比较，差异有非常显著性意义(P＜0.01)；高剂量组与纯水对照组比较，差异有显著性意义(P＜0.05)，试验结果阳性。

表17灵芝孢子保健食品对小鼠运动后血清尿素氮含量的影响

注：*表示剂量组与纯水对照组比较P＜0.05(q检验)，**表示剂量组与纯水对照组比较P＜0.01(q检验)。

灵芝孢子保健食品对小鼠运动前、后血乳酸含量的影响：由表18、19可见，各剂量组与纯水对照组比较，血乳酸曲线下面积无显著性差异(P＞0.05)，试验结果阴性。

表18小鼠运动前、后血乳酸含量

表19灵芝孢子保健食品对小鼠运动前、后血乳酸含量的影响

灵芝孢子保健食品对小鼠肝糖原含量的影响：由表20可见，中剂量组与纯水对照组比较，小鼠肝糖原含量明显增加，差异有非常显著性意义(P＜0.01)，试验结果阳性。

表20灵芝孢子保健食品对小鼠肝糖原含量的影响

注：**表示剂量组与纯水对照组比较P＜0.01(q检验)。

灵芝孢子保健食品对小鼠体重的影响：由表16、17、19、20可见，各剂量组与纯水对照组比较，始重、终重的差异均无显著性意义(P＞0.05)。

Claims (2)

1.一种灵芝孢子保健食品，其特征在于由以下步骤制成：

（1）制备灵芝孢子提取物：

取灵芝孢子，超微粉碎、脱油后，置提取罐中，加8-30倍水，在100℃下煎煮1-2次，每次2-4小时，滤过，合并滤液，将滤液浓缩至相对密度在60-70℃下为1.10-1.20，a.将浓缩液干燥得灵芝孢子提取物；或b.往浓缩液中加入乙醇至含醇量80%以上，搅拌均匀后，静置，滤过，干燥粉碎，过60-80目筛，得灵芝孢子提取物细粉；

（2）西洋参前处理：

取西洋参药材，经纯净水冲洗后70-80℃干燥，粉碎，过60-80目筛，得西洋参细粉，灭菌，备用；

（3）取二十八烷醇，粉碎过60-80目筛，得二十八烷醇细粉；

（4）取上述细粉，按灵芝孢子提取物20-30%、西洋参66-78%和二十八烷醇2-4%配料，混匀得到总混粉，以纯净水或乙醇为润湿剂，制成软材，再过筛制成湿颗粒；

（5）以上制得的湿颗粒干燥至含水量5%以下，干燥温度为50-60℃；

（6）将烘干后的颗粒按需要进行分装，并质检后，制得合格灵芝孢子保健食品。

2.根据权利要求1所述的灵芝孢子保健食品，其特征在于由下列成分按重量比制成：灵芝孢子提取物25.71%、西洋参71.43%和二十八烷醇2.86%。