CN102349941A

CN102349941A - 一种缓解疲劳和提高缺氧耐受力的中药组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN102349941A
Application number: CN2011103188470A
Authority: CN
Inventors: 王智森; 高飞
Original assignee: SHIJIAZHUANG ZANGNUO BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: SHIJIAZHUANG ZANGNUO BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2011-10-19
Filing date: 2011-10-19
Publication date: 2012-02-15

Abstract

本发明涉及一种缓解疲劳和提高缺氧耐受力的中药组合物及其制备方法，该中药组合物由红景天、黄芪、红花制成。本发明提供的缓解疲劳和提高缺氧耐受力的中药组合物通过益气、活血、固表来调节人体气血虚弱以及脏腑功能失调，从而达到缓解体力疲劳和提高缺氧耐受力的功效，本发明提供的中药组合物无遗传毒性，具有较好的预防和治疗效果。

Description

一种缓解疲劳和提高缺氧耐受力的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药制剂领域，具体涉及一种缓解疲劳和提高缺氧耐受力的中药组合物及其制备方法。

背景技术

随着人们生活节奏的不断加快，体力疲劳和缺氧的问题困扰着大多数人，中老年人尤为突出。而社会老龄化现象日趋明显也就更加凸显出这个问题的重要性。

疲劳虽然看不到、摸不着，但我们每个人都能感受到它的存在。当人体长期处于疲劳状态下，可产生未老先衰和疲劳综合症。2003年国内著名的市场调查机构-零点研究集团对公司白领进行了一次工作压力调查。结果显示，41.1％的白领正面临着较大的工作压力，61.4％的白领正经历着不同程度的心理疲劳和体力疲劳，白领们的健康状况令人担忧。其他那些从事较大体力劳动者和工作环境较差者以及广大的中老年朋友则更是无时无刻的感到疲劳的存在。

疲劳常常伴随着缺氧现象，机体所有组织中，神经系统特别是大脑皮层对缺氧最为敏感。每克脑组织在1min内需氧约0.09-0.10ml，几乎是肌肉组织需要量的20倍。进入机体的氧，约有1/4被大约占体重2.5％的大脑所利用，大脑的能量主要来自于葡萄糖的氧化分解，糖在大脑能量代谢中起主要作用，脑的耗糖量约占全身耗糖量的1/4，在无氧酵解中所产生的乳酸，极易导致大脑细胞疲劳，引起脑组织严重缺氧。因此，长时间、高强度的脑力劳动者，耗氧量会成倍增加。

中药中：红景天味甘、苦、平。归肺、心经；益气活血，通脉平喘，用于气虚血瘀等症。红景天的化学成分主要有多糖类、皂甙类、黄酮类等，其潜在药用价值很大。具有缓解体力疲劳、抗缺氧等广泛的药理药效作用。红景天通过预防毛细血管的收缩从而加快血液循环，提高对低含氧环境的适应性。通过提高机体ATP含量，减少血乳酸形成，增加激酸磷酸激酶含量和改善血清总蛋白含量，从而使大量运动形成的疲劳得到改善。红景天能够提高机体的ATP含量，减少血乳酸形成，增加肌酸磷酸激酶含量和改善血清总蛋白含量，从而使大量运动形成的疲劳得到改善。通过对小鼠血乳酸浓度、血清乳酸脱氢酶(LDH)活力、肝糖原、肌糖原含量的影响研究发现，红景天抗疲劳作用与其增强血清LDH活力，降低血乳酸含量，增加肝糖原、肌糖原的储备有关。小鼠每日喂含有红景天的混合饲料。20天后测定结果表明，给药组小鼠游泳时间、血红蛋白含量明显高于对照组。采用常压耐缺氧、转棒、游泳法和耐低温方法测定，结果表明红景天可延长小鼠缺氧存活时间，延长小鼠转棒耐力时间和游泳持续时间。能延长密闭缺氧条件下动物出现惊厥的时间，使生存时间延长1倍，对减压缺氧下的动物可提高其耐受力。提高体循环NOS合成能力或显著增强NOS活性，增加NO含量，可能是红景天抗缺氧机制之一。通过对缺氧小鼠膈肌重量和膈肌细胞超微结构的研究表明，红景天对缺氧所致膈肌细胞损伤具有显著保护作用。

黄芪味甘、温，归肺、脾经；有补气固表之功能，富含黄芪多糖、皂甙、氨基酸及微量元素等多种有效成分。黄芪多糖有明显的抗疲劳作用，能显著延长氢化可的松耗竭小鼠的游泳时间和增加肾上腺素重量，对小鼠多种缺氧模型均具有显著的耐受能力，可明显减少全身性耗氧以及增加组织耐缺氧能力。众所周知，参芪合剂具有显著的抗疲劳作用，而黄芪独立使用时，也具有明显的抗疲劳效应。大量的实验证实，黄芪多糖(APS)能显著延长氢化可的松耗竭小鼠游泳时间和增加肾上腺重量，能增加肾上腺皮质激素的合成和分泌，延长小鼠游泳时间。王弋博等的研究认为，黄芪具明显的抗疲劳效应，可能是由于黄芪使小白鼠血红蛋白升高，提高小白鼠携带氧气的能力，使小白鼠有了充足的氧气，以供生命之需，加强了其代谢和运动能力，因此抗疲劳能力也得以增强。李卫平等采用6个实验性缺氧模型，观察其抗缺氧作用。结果：APS即可延长常压、减压小鼠的存活时间；又可延长氰化钾中毒小鼠(细胞内缺氧)及亚硝酸钠中毒小鼠(细胞外液缺氧)的存活时间；还可延长断头小鼠张口动作(脑缺氧)的持续时间及双侧颈动脉结扎小鼠的存活时间。从而证实APS具有明显减少全身耗氧及增加组织耐缺氧两方面的作用。

红花味辛、温，归心、肝经；具活血通经，散瘀止痛功能。红花的主要成分为红花苷、红花黄色素、红花醌等。此外还含有少量的油酸、亚油酸、亚麻酸等脂肪酸以及黄酮类化合物、氨基酸和多糖。研究表明，红花提取液可显著消除小鼠运动引起的肌肉疲劳程度，增强小鼠的体力、耐力、耐缺氧能力和非特异性抵抗力。鞠国泉用红花提取液经小鼠实验表明红花具有显著减少小鼠运动引起的血乳酸升高、消除运动引起的肌肉疲劳、增强耐力和抗缺氧的功效。张华[13]用以红花为原料的中药经典名方——桃红四物汤研究小鼠耐缺氧和抗疲劳作用，试验结果证明桃红四物汤具有明显的耐缺氧和抗疲劳作用。从而也论证了通过活血化瘀调节机体整体宏观状态，使机体有效缓解重负荷状态下的不良状态。

但是以上药物单独使用抗疲劳能力和耐缺氧能力效果较弱，因此，需要提供一种可以增加抗疲劳能力和耐缺氧能力的组合物。

发明内容

本发明的目的是提供一种缓解疲劳和提高缺氧耐受力的中药组合物及其制备方法。

本发明提供的一种缓解疲劳和提高缺氧耐受力的中药组合物，由以下重量份的中药制成：红景天13-150份，黄芪30-180份，红花5-60份。

优选地，该中药组合物由以下重量份的中药制成：红景天13-118份，黄芪30-95份，红花5-37份。

进一步优选，本发明提供的中药组合物，由以下重量份的中药制成：红景天30份，黄芪50份，红花25份。

所述中药组合物为固体制剂或液体制剂，所述固体制剂为为片剂、丸剂、胶囊剂或颗粒剂，所述液体制剂为口服液或注射剂。

所述中药组合物优选胶囊剂。

本发明还提供了具有缓解体力疲劳和提高缺氧耐受力的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：

将红景天、黄芪粉碎过80目筛，红花粉碎过100目筛，加入药学上可接受的载体或稀释剂，按照等量递加法混合均匀，制备成各种剂型。

本发明还提供了具有缓解体力疲劳和提高缺氧耐受力的中药组合物的另一种制备方法，包括以下步骤：

1)对红景天和黄芪进行提取，其提取方法如下：

取红景天、黄芪加75％乙醇回流提取两次，每次2h，第一次溶剂用量为8倍量，第二次用量为6倍量，合并醇提液，用120目不锈钢筛过滤，将醇提液减压浓缩回收乙醇并浓缩至相对密度为1.20-1.25(50℃测定)的浸膏(真空度73.3-86.6KPa，温度60-70℃)，将浸膏真空干燥，真空度0.06-0.1MPa，温度50-60℃，将干膏粉碎成80目的细粉，得醇提浸膏粉(得膏率约为7.9％)；

2)药渣用水煎煮提取2次，每次2小时，第一次用8倍量水煎煮提取，第二次用6倍量水煎煮提取，合并煎煮液，用120目不锈钢筛过滤，滤液减压浓缩至相对密度1.15-1.20(50℃测定)，真空度73.3-86.6KPa，温度60-70℃的浸膏；

浸膏真空干燥，真空度0.06-0.1MPa，温度50-60℃。将干膏粉碎成80目的细粉，得水提浸膏粉(得膏率为10.9％)；

3)然后将步骤1)得到的醇提浸膏粉和水提浸膏粉分别粉碎过80目筛，与粉碎过100目筛的红花混合均匀，加入药学上可接受的载体或稀释剂，按照等量递加法混合均匀，制备成各种剂型。

所述药学上可接受的载体或稀释剂选自乳糖、蔗糖、淀粉、糊精、微晶纤维素、聚乙二醇、低取代羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基纤维素中的一种或几种。

本发明还提供了上述中药组合物在制备治疗抗疲劳和提高缺氧耐受力的药物或保健品中的应用，主要适用于用脑过度、心肌衰竭、脑中风和体力劳动者。

本发明提供的景天红花复方具有以下优点：

1、本发明提供的缓解疲劳和提高缺氧耐受力的中药组合物通过益气、活血、固表来调节人体气血虚弱以及脏腑功能失调，从而达到缓解体力疲劳和提高缺氧耐受力的功效。

2、本发明提供的中药组合物无遗传毒性。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1：红景天胶囊

1、组成：红景天100g，黄芪30g，红花15g。

2、制备方法：

1)将上述重量配比的各种药物分别筛选、挑拣、整理；

2)然后将药物粉碎至40-80目，填充入胶囊，即得。

3、用法用量：每日2次，每次4粒。

实施例2：红景天胶囊

1、组成：红景天75g，黄芪55g，红花8g。

2、制备方法：

1)将上述重量配比的各种药物分别筛选、挑拣、整理；

2)提取：红景天和黄芪的提取方法如下；

①取处方量的红景天、黄芪加95％乙醇回流提取两次，每次2h，两次溶剂用量分别为10倍量。

②合并醇提液，用120目不锈钢筛过滤，将醇提液减压浓缩回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25(50℃测定)的浸膏(真空度75KPa，温度65℃)。

③将浸膏真空干燥，真空度0.1MPa，温度55℃，将干膏粉碎成80目的细粉，得醇提浸膏粉(收膏率约为6％)。

④药渣用水煎煮提取2次，每次2小时，第一次用10倍量水煎煮提取，第二次用6倍量水煎煮提取。

⑤合并煎煮液，用120目不锈钢筛过滤，滤液减压浓缩至相对密度1.20(50℃测定)，真空度75KPa，温度65℃的浸膏。

⑥浸膏真空干燥，真空度0.1MPa，温度55℃。将干膏粉碎成80目的细粉，得水提浸膏粉(收膏率为8％)。

3)然后将步骤2)得到的浸膏粉粉碎过80目筛，与粉碎过100目筛的红花混合均匀，装胶囊。

3、用法用量：每日2次，每次3粒。

实施例3：红景天胶囊

1、组成：红景天30g，黄芪50g，红花25g

2、制备方法：

1)将上述重量配比的各种药物分别筛选、挑拣、整理；

2)对红景天和黄芪进行提取，其提取方法如下：

①取处方量的红景天、黄芪加75％乙醇回流提取两次，每次2h，第一次溶剂用量为8倍量，第二次用量为6倍量。

③将浸膏真空干燥，真空度0.1MPa，温度55℃。将干膏粉碎成80目的细粉，得醇提浸膏粉(收膏率约为7.8％)。

④药渣用水煎煮提取2次，每次2小时，第一次用8倍量水煎煮提取，第二次用6倍量水煎煮提取。

⑥浸膏真空干燥，真空度0.1MPa，温度55℃。将干膏粉碎成80目的细粉，得水提浸膏粉(得膏率为10.9％)。

3)然后将步骤2)得到的醇提取浸膏粉、水提取浸膏粉分别粉碎过80目筛，与粉碎过100目筛的红花混合均匀，装胶囊。

3、用法用量：每日2次，每次3粒。

实验例1：景天红花胶囊安全性毒理学评价试验

1、实验药物：红景天胶囊(按照实施例3的方法制备)，由石家庄藏诺生物科技有限公司提供，其中内容物外观为砖红色粉状物，推荐量为2.4g/60kg/日。

2、实验动物：清洁级昆明种小鼠及SD大鼠，购自河北省实验动物中心；饲养环境：室温：22-25℃，相对湿度：60-70％。

3、实验方法：

3.1小鼠急性经口毒性试验：选用清洁级昆明种小鼠20只，体重18-22克，雌雄各半，按MTD法(最大耐受量)进行试验。称取受试物60g加去离子水至160ml混匀，采用等体积灌胃法(0.2ml/10g·bw)24小时内二次灌胃，剂量为15000mg/kg·bw。连续观察两周，记录中毒表现及死亡情况。

3.2大鼠急性经口毒性试验：选用清洁级SD大鼠20只，体重180-220克，雌雄各半，按MTD法进行试验。称取受试物120g加去离子水至320ml混匀，采用等体积灌胃法(2ml/100g·bw)24小时内二次灌胃，剂量为15000mg/kg·bw。连续观察两周，记录中毒表现及死亡情况。

4、结果

4.1小鼠急性经口毒性试验：见表1

表1：红景天胶囊对小鼠的急性经口毒性试验

表1结果显示：红景天胶囊15000mg/kg·bw的剂量条件下，雌雄小鼠均未见中毒症状及死亡。该产品对雌雄小鼠的MTD均大于15000mg/kg·bw，由此推断其急性经口毒性试验LD₅₀大于15000mg/kg·bw。

4.2大鼠急性经口毒性试验：见表2。

表2：红景天胶囊对大鼠的急性经口毒性试验

表2结果显示：红景天胶囊15000mg/kg·bw的剂量条件下，两种性别的大鼠均未见中毒症状及死亡。该产品对雌雄大鼠的MTD均大于15000mg/kg·bw，其急性经口毒性试验LD₅₀大于15000mg/kg·bw。

同样，对实施例1、2及本发明的配方进行相同的实验，结果与实施例3的相同，未见到中毒症状及死亡。

5、结论：根据急性毒性分级，本发明的红景天胶囊属无毒物。

实验例2：红景天胶囊Ames实验报告

1、实验药物：受试物为红景天胶囊(按照实施例1的方法制备)，由石家庄藏诺生物科技有限公司提供，推荐量为2.4g/60kg/日。

2、实验方法：

采用平板掺入法，分加与不加S-9混合液两种。剂量分别为0.008、0.040、0.200、1.000、5.000mg/皿，另设空白对照组、溶剂对照组(去离子水)和阳性对照组。

受试物配制方法为，称取受试物2.5g溶于50ml去离子水中，0.103Mpa20分钟灭菌为原液；取原液1ml加灭菌去离子水4ml为1.000mg/皿剂量；依次5倍稀释成其它剂量。取各剂量组液体100μl加入顶层培养基中。阳性对照组使用2-AF20μg/皿、2，4，7-TNFone 0.5μg/皿、NaN₃ 2.5μg/皿、丝裂霉素C4.0μg/皿、1，8二羟基蒽醌50μg/皿，每个剂量组做三个平行皿，重复做两次。菌株为TA97(a)、TA98、TA100、和TA102四株菌，S-9用量为每皿0.5mlS-9混合液(含S-950μl)。菌株购自天津市卫生防病中心，S-9购自中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所，试剂购自于北京化学试剂公司。

3、实验结果：

由表3可见，红景天胶囊对TA97(a)、TA98、TA100、和TA102四株试验菌株，在加与不加S-9的情况下，均未呈现致突变作用。

实验例3：红景天胶囊小鼠骨髓嗜多染红细胞微核(MNPCE)试验

1、实验药品：红景天胶囊(按照实施例3的方法制备)，由石家庄藏诺生物科技有限公司提供，推荐量为2.4g/60kg/日。

2、实验动物：清洁级昆明种小鼠，体重25-30克，购自河北省实验动物中心。饲养环境：室温：22-25℃，相对湿度：60-70％。

3、实验方法：

选用清洁级昆明种小鼠50只，随机分为五组，每组10只，雌雄各半；设三个剂量组：1900mg/kg·bw、3750mg/kg·bw、7500mg/kg·bw。

受试物配制方法为：称取受试物7.5g、15g、30g分别加去离子水至80ml混匀；同时设阴性对照组(去离子水)和阳性对照组(环磷酰胺200mg加生理盐水至100ml，剂量为40mg/kg·bw)。采用等体积灌胃法(0.2ml/10g·bw)，各组均间隔24小时两次给养，第二次给养后6小时取胸骨骨髓制片，每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PCE)，计算其微核发生率；计数200个嗜多染红细胞视野内的成熟红细胞(RBC)，计算PCE/RBC比值。

4、实验结果：(见表4)

表4：红景天胶囊小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果

表4结果显示：红景天胶囊的三个剂量组的微核发生率均在正常范围内，与阴性对照组比较无显著差异(P＞0.05)，阴性对照组与阳性对照组相比较差异显著(P＜0.01)，该产品微核试验阴性。

同样，对实施例1、2及本发明的其他配方进行相同的实验，结果与实施例3的相同，微核试验阴性。

实验例4：红景天胶囊小鼠精子畸形试验报告

1、实验药品：红景天胶囊(参考实施例2的方法制备)，由石家庄藏诺生物科技有限公司提供，推荐量为2.4g/60kg/日。

2、实验动物：清洁级昆明种雄性小鼠，体重30-35克，购自河北省实验动物中心。饲养环境：室温：22-25℃，相对湿度：60-70％。

3、试验方法：

选用清洁级昆明种性小鼠25只，随机分为五组，每组五只；设三个剂量组：1900、3750、7500mg/kg·bw。

受试物配制方法为：称取受试物15、30、60g分别加去离子水至160ml混匀；同时设阴性对照组(去离子水)和阳性对照组(环磷酰胺200mg加生理盐水至100ml，剂量为40mg/kg·bw)。采用等体积灌胃法(0.2ml/10g·bw)，连续经口给养5天，从首次给养计第35天处死动物，取双侧附睾制片，每只动物计数1000个精子，计算畸形率。

4、实验结果：(见表5)

表5：小鼠精子畸形试验结果

表5结果显示：红景天胶囊的三个剂量组的精子畸形率均在正常范围内，与阴性对照组比较无明显差异(P＞0.05)，阴性对照与阳性对照组比较差异显著(P＜0.01)，该产品小鼠精子畸形试验阴性。

同样，对实施例1、3及本发明的其他配方进行相同的实验，结果与实施例3的相同，小鼠精子畸形试验阴性。

实验例5：30天喂养试验报告

1、实验药物：红景天胶囊(实施例3的方法制备)，由石家庄藏诺生物科技有限公司提供，推荐量为2.4g/60kg/日。

2、实验动物：清洁级SD大鼠，雄性大鼠体重66.5±7.5克，雌性大鼠体重66.8±6.8克，购自河北省实验动物中心。饲养环境：室温：22-25℃，相对湿度：60-70％。

3、试验方法：选用清洁级SD大鼠80只，雌雄各半，随机分为四组，每组20只，单笼饲养。红景天胶囊样品推荐量为2.4g/60kg/日，受试物设三个剂量，分别为1.0g/kg·bw、2.0g/kg·bw、4.0g/kg·bw(相当于推荐量的100倍)，大鼠的日进食量按体重的10％计算，受试物掺入饲料的比例分别为1.0％、2.0％、4.0％；设一个阴性对照组，阴性对照组喂养基础饲料。各剂量组连续喂养30天，喂养期间各组动物均自由进食和饮水，每周称一次鼠体重并记录二次饲料消耗量，计算每周食物利用率。试验末期采尾血进行血液学和生化学检查。

4、检测指标：

实验过程中，观察生长发育、食物利用率、血液学检查(采用MEK-6318K血细胞分析仪测定)、生化学检查(分离血清后采用相应试剂盒及德国Human公司F1型全自动生化分析仪测定)；

试验末期处死大鼠，解剖取肝、脾、肾、睾丸称重，计算脏器系数，然后对肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸、卵巢进行组织病理学检查(石蜡切片)。

5、实验统计：采用SPSS11.5 for Windows进行统计分析。当P＜0.05时，用LSD法进行多个试验组与对照组间均数的两两比较。

6、实验结果：见表6

6.1一般状况：经过30天喂养，各组发育良好，未见异常体征，大鼠全部存活。

6.2对大鼠体重的影响：见表6

表6：对大鼠体重的影响

表6结果显示：组间比较无显著性差异。

6.3对大鼠食物利用率的影响：结果见表7-1、表7-2、表7-3。

表7-1：大鼠30天喂养试验周进食量(g)

表7-2：对大鼠周食物利用率的影响

表7-3：对大鼠总食物利用率的影响

表7-1、7-2、7-3结果显示：各组大鼠的周进食量、周食物利用率及总食物利用率经方差分析，组间比较无显著性差异。

6.4血液学检查：(见表8)

表8：30天喂养血液学检查结果

与对照组比较：*P＜0.05，**＜0.01

表8结果显示：试验结束时，各组动物红细胞、血红蛋白、白细胞及分类均在本实验室历史对照范围内波动。个别受试物组与对照组白细胞分类出现的统计学差异，不具有生物学意义。6.5末期生化检验结果：(结果见表9-1、9-2、9-3)。

表9-1：末期生化检验结果

表9-2：末期生化检验结果

表9-3：末期生化检验结果

表9-1、9-2、9-3结果显示：试验结束时，各组动物谷丙转氨酶(速率法)、谷草转氨酶(速率法)、血糖(己糖激酶法)、尿素氮(酶法)、甘油三酯(酶法)、肌酐(苦味酸两点法)、总蛋白(双缩脲法)、白蛋白(溴甲酚氯法)等指标均在正常范围内波动，各实验组血清生化值均无显著性差异。

6.6红景天胶囊对大鼠脏器重量和脏/体比值的影响：

见表10-1、10-2。

表10-1：各组动物脏器重量和脏/体比值

表10-2：各组动物脏器重量和脏/体比值

表10-1、10-2结果显示：各实验组脏器重量和脏/体比值均无显著差异。

同样，对实施例1、2及本发明的其他配方进行30天喂养实验，结果与实施例3的相同。

6.7红景天胶囊30天喂养试验病例报告：

6.7.1大体检查：试验结束时，处死动物共80只，剖检后进行肉眼观察心脏、肺、肝脏、脾脏、胃、十二指肠、睾丸、卵巢等脏器形态、颜色、质地未见异常。

6.7.2对肝、肾、胃、十二指肠、睾丸、卵巢肠固定进行组织病理学检查，共检查高剂量实验组和对照组大鼠共40只，雌雄各半。

肝脏：40只大鼠的肝脏结构清晰辨识，肝小叶排列整齐，肝细胞以中央静脉为轴心呈大致辐射状走向。对照组1例(雄)肝细胞胞浆中偶见少量小气泡，高剂量组1例(雄)偶见单个肝细胞坏死，未见其他明显病理改变。对照组与测试组个别标本肝细胞改变，考虑由实验动物质量所致。

肾脏：40只大鼠肾脏结构清晰辨识，肾单位呈均匀分布。肾小球类圆形，血管球可见丰富的毛细血管断面，肾球囊围在血管球周围由上皮细胞环绕形成半月型腔隙。肾小管由曲管和集合管等部分组成。肾单位间分布着较稀疏的纤维结缔组织及血管等。肾孟粘膜由菲薄的移行上皮被覆。均可见少量肾小管上皮细胞胞浆呈嗜酸性改变、核浓缩。未见肾间质炎细胞浸润和纤维组织增生。少数肾小管上皮细胞的改变，考虑为动物本身因素所致。

胃、十二指肠：40只大鼠胃壁结构易于识别。前胃部分粘膜上皮为复层鳞状上皮，近胃窦部分粘膜上皮为单层柱状上皮。固有膜内分布着大量腺体，多数腺细胞为壁细胞，其间散布者少量粘液细胞，腺体较下部分则多见主细胞。胃腺之间有结缔组织及血管等。肌层较厚，呈环、纵不同走向。最外层为浆膜层。无出血、坏死及炎性渗出，也无腺细胞组成的变化。40只大鼠十二指肠粘膜、粘膜下层、肌层、浆膜各层均可清晰辨识，粘膜表面可见指状突起的绒毛，覆以单层柱状上皮。粘膜内有肠腺、毛细血管、结缔组织。肌层外为浆膜层。各层未见出血、坏死及炎细胞浸润。

脾脏：40例大鼠脾脏结构易于辨认。血管穿行于结缔组织的小梁状间隔，团块状分布的白髓中包含脾小体及小动脉，淋巴细胞呈弥散分布于动脉周围。红随广阔分布在白髓与脾小梁之间，组成网状的淋巴细胞条索和丰富的血窦，可见血窦稍有扩张，窦内聚集大量的红细胞、白细胞及一些网状细胞和吞噬细胞等。

睾丸：20例大鼠睾丸正常组分易于识别，最外层为致密结缔组织形成的白膜，下方有大量的曲精小管的断面散布其中。小管界膜清晰，由外向内可见由精原细胞分裂增殖形成的各阶段细胞和精子。未见出血、坏死及精细胞发育异常。

卵巢：20例大鼠正常卵巢结构易于识别，被膜下方皮质内可见不同发育阶段的卵泡。成熟卵泡具有卵丘、放射冠、颗粒层及卵泡腔等组份。可见排卵后的黄体。卵泡周围由纤维结缔组织和血管包绕。未见卵泡的发育异常及组织内出血、炎症等病理变化。

以上结果表明，对照组和高剂量组雌、雄大鼠的肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸、卵巢均未见与受试物有关的组织病理学改变。

7、小结：

本实验表明，红景天胶囊对雌雄大、小鼠急性经口毒性试验LD50均大于15000mg/kg·bw，说明该产品属无毒物；三项致突变试验结果阴性；大鼠30天喂养试验各项指标均未见异常。

实验例6：红景天胶囊耐缺氧作用试验报告

1、实验药物：红景天胶囊(实施例3制备的药物)，由石家庄藏诺生物科技有限公司提供。人体推荐量为2.4g/日/60kg体重，试验时按所需剂量用去离子水配制。

2、实验动物：雌性昆明种小鼠，体重18-22g，购自河北省实验动物中心。饲养环境：室温：22-25℃，相对湿度：60-70％。

3、实验分组：

对照组(去离子水0.2ml/10g)、红景天胶囊高(1.2g/kg)、中(0.8g/kg)、低剂量组(0.4g/kg)。

红景天胶囊人体推荐量为2.4g/日/60kg体重，小鼠的等效剂量相当于人体推荐量的10倍，即每日服用0.4g/kg体重为低剂量，再按低剂量的2倍和3倍各设一个剂量组，即0.8g/日/kg体重(中剂量)和1.2g/日/kg体重(高剂量)。

4、实验方法：

4.1小鼠常压耐缺氧试验：

末次给予受试物后1小时，将各组小鼠粉分别放入盛有5g钠石灰(别名为碱石灰)的250ml磨口广口瓶内，每瓶一只小鼠，用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。

4.2小鼠亚硝酸钠中毒存活时间

末次给予受试物后1小时，各组动物腹腔注射(0.1ml/10kg)亚硝酸钠水溶液，剂量为240mg/kg·bw，立即计时，记录动物存活时间。

4.3急性脑缺血性缺氧试验

末次给予受试物后1小时，各组动物自颈部遂只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止的时间。

5、统计方法：验数据应用SPSS11.5进行统计，采用方差分析进行组间比较，当P＜0.05时，选用LSD进行多个实验组和一个对照组的两两比较。

6、结果

6.1红景天胶囊对小鼠体重的影响：(见表11-13)

表11：各组小鼠初始体重

剂量(g/kg BW)	动物数(只)	一组体重(g)	二组体重(g)	三组体重(g)
					0.0	12	19.0±1.0	19.2±1.5	19.0±1.1
0.4	12	18.9±1.1	19.3±1.2	19.1±1.2
					0.8	12	19.2±1.3	19.0±1.2	19.6±1.3
1.2	12	18.7±0.7	18.7±0.7	19.1±1.2
					P值		0.617	0.725	0.580
F值		0.608	0.542	0.631

表12：各组小鼠中期体重

剂量(g/kg BW)	动物数(只)	一组体重(g)	二组体重(g)	三组体重(g)
					0.0	12	30.8±1.7	30.8±2.0	30.8±1.7
0.4	12	30.3±2.6	30.3±1.6	30.3±2.0
					0.8	12	30.9±2.4	30.3±1.6	30.2±1.8
1.2	12	30.4±1.9	30.5±1.5	30.0±1.7
					P值		0.195	0.164	0.398
F值		0.899	0.920	0.755

表13：各组小鼠末期体重

剂量(g/kg BW)	动物数(只)	一组体重(g)	二组体重(g)	三组体重(g)
					0.0	12	33.3±1.7	32.9±1.9	32.8±2.1
0.4	12	33.0±2.1	33.7±1.8	33.3±2.3
					0.8	12	32.8±2.4	33.3±1.9	33.4±1.2
1.2	12	33.3±2.2	32.8±2.1	33.1±1.9
					P值		0.169	0.571	0.223
F值		0.917	0.637	0.880

表11-13结果显示：经口给予小鼠不同剂量的红景天胶囊30天，各剂量组小鼠的体重变化均无显著性差异(P＞0.05)。

6.2红景天胶囊对小鼠常压耐缺氧时间的影响：(见表14)

表14：对小鼠常压耐缺氧时间的影响

剂量(g/kg BW)	动物数(只)	耐缺氧时间(s)	F值	P值	与对照组比较P值
						0.0	12	1279±126
0.4	12	1433±300			0.148
						0.8	12	1463±200	3.155	0.034	0.013
1.2	12	1469±139			0.010

由表14可见，经口给予小鼠不同剂量的红景天胶囊30天，中、高剂量组常压耐缺氧时间明显长于对照组，差异有显著性(P＜0.05)。

6.3红景天胶囊对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响：见表15：

表15：对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响

剂量(g/kg BW)	动物数(只)	存活时间(s)	F值	P值
					0.0	12	825±87
0.4	12	860±151	1.689	0.183
					0.8	12	940±152
1.2	12	859±95

由表15可知：经口给予小鼠不同剂显著性量的红景天胶囊30天，受试物组小鼠的亚硝酸钠中毒存活时间与对照组比较差异无显著性。

6.4红景天胶囊对小鼠急性脑缺血性缺氧时间的影响：见表16：

表16：对小鼠急性脑缺血性缺氧时间的影响

由表16可知：经口给予小鼠不同剂量的红景天胶囊30天，中、高剂量组小鼠脑缺血性缺氧时间长于对照组，差异有显著性(P＜0.05、P＜0.01)。

同样，对实施例1、2及本发明的其他配方进行相同的实验，结果与实施例3的相同，体重无明显影响、常压耐缺氧时间增加、亚硝酸钠中毒存活时间无差异、脑缺血性缺氧时间延长。

7、小结：

经口给予小鼠不同剂量的红景天胶囊30天，能明显延长小鼠常压耐缺氧时间，延长小鼠急性脑缺血耐缺氧时间，根据《保健食品功能学评价程序和检验方法》(2003年)的规定，可以确定红景天胶囊具有提高缺氧耐受力功能。

实验例7：红景天胶囊缓解体力疲劳功能试验报告

1、实验药物：红景天胶囊(实施例3的方法制备)，由石家庄藏诺生物科技生物有限公司提供，人体推荐量为每日6粒，每粒0.4g。试验时直接将胶囊内容物用去离子水配制成所需计量。

2、实验动物：清洁级雄性昆明种小鼠，体重18-22g，购自河北省实验动物中心。饲养环境：室温22-25℃，相对湿度60-70％。

3、实验分组：

红景天胶囊人体推荐量为2.4g/日/60kg体重，小鼠的等效剂量相当于人体推荐量的10倍，即每日服用0.4k/kg体重为低剂量，再按低剂量的2倍和3倍各设一个剂量组，即0.8g/日/kg体重(中剂量)和1.2g/日/kg体重(高剂量)，对照组给去离子水，连续等体积灌胃受试物30天后，测定各项指标。

4、实验方法

4.1游泳试验：末次给予30分钟后，小鼠尾根部负体重5％的铅皮，放入水温为25℃，水深35cm的游泳箱中。每一批小鼠下水之前均将水温调至25℃，并将室温恒定在25℃。每只水箱一次放入6只小鼠。用秒表记录自游泳开始至死亡的时间，改时间为小鼠的游泳时间。

4.2血清尿素氮测定(紫外法)

末次给予受试物30分钟后，将小鼠放于温度30℃的水中游泳90分钟，休息60分钟，摘眼球采血，分离血清用全自动生化分析仪测定。

4.3肝糖原测定(蒽酮法)

末次给予小鼠受试物30分钟后，立即处死。取肝脏经生理盐水漂水后用滤纸吸干，精确称取肝脏100mg，加入8mlTCA，每管匀浆1分钟，将匀浆液倒入离心管，3000转/分离心15分钟，将上清液转移至另一试管内。取1ml上清液放入10ml离心管中，每管加入95％的乙醇4ml，充分混匀至两种液体间不留界面。用干净塞子赛上，室温下竖直放置过夜。沉淀完全后，将试管于3000转/分离心15分钟。小心倒掉上清液并使试管倒立放置10分钟。用2ml去离子水溶解糖原，加水时将管壁的糖原洗下，使之完全溶解。试剂空白：吸2mL去离子水到干净离心管。标准管：吸0.5mL葡萄糖标准液(含100mg/dl葡萄糖)和1.5ml去离子水放入同样的离心管。测定：将10ml蒽酮试剂用力加入各管，液流直接进入管子中央，保证充分混合好。从管子中注入蒽酮试剂时起，将管子放入冷水中，达到冷水温度后，将其浸入沸水浴15分钟，然后移到冷水浴，冷却到室温。将管内液体移入比色皿，620nm波长，用试剂空白调零后测定样品管和标准管的吸光度。根据肝脏重量换算成肝糖原含量(以mg/g肝表示)。

4.4血乳糖测定

末次给予小鼠受试物30分钟后，小鼠不负重放入水温为30℃、水深35cm的游泳箱中游泳10分钟后取出，即刻采尾血20ul，加入盛有40ul溶血剂的试管中混匀，用生物传感分析仪测定血乳酸值。此外，采用同样的方法测定游泳前和游泳后休息20分钟时的血乳酸水平。

5、统计方法：实验数据用应用SPSS11.5进行统计分析，采用方差进行组间比较，当P＜0.05时，选用LSD进行多个实验组和一个对照组的两两比较。

6、实验结果

6.1红景天胶囊对小鼠体重的影响(见表17-19)

表17：各组小鼠初始体重

剂量(g/kg BW)	动物数(只)	一组体重(g)	二组体重(g)	三组体重(g)	四组体重(g)
						0.0	12	19.1±1.1	19.3±1.1	20.1±1.4	19.6±1.3
0.4	12	19.5±1.5	19.8±1.1	19.5±1.2	19.6±1.2
						0.8	12	19.7±1.2	19.6±1.7	19.8±1.3	19.2±1.5
1.2	12	19.8±1.6	19.8±1.3	19.8±1.4	19.7±1.4
						P值		0.649	0.269	0.393	0.327
F值		0.588	0.947	0.759	0.806

表18：各组小鼠中期体重

剂量(g/kg BW)	动物数(只)	一组体重(g)	二组体重(g)	三组体重(g)	四组体重(g)
						0.0	12	35.4±2.1	36.0±2.7	35.8±2.8	36.1±2.3
0.4	12	36.9±3.4	35.6±2.2	35.5±1.8	36.0±2.9
						0.8	12	35.4±2.8	35.5±2.3	34.6±2.4	35.3±1.9
1.2	12	34.6±2.8	34.9±2.9	35.2±1.4	35.3±3.6
						P值		1.468	0.369	0.434	0.298
F值		0.236	0.776	0.730	0.826

表19：各组小鼠末期体重

剂量(g/kg BW)	动物数(只)	一组体重(g)	二组体重(g)	三组体重(g)	四组体重(g)
						0.0	12	41.5±4.5	42.1±3.7	41.3±4.2	42.2±2.4
0.4	12	40.9±4.1	41.1±2.7	40.6±3.1	41.3±4.3
						0.8	12	40.4±3.8	41.4±3.8	39.3±2.8	41.1±3.8
1.2	12	40.3±4.3	41.3±3.1	39.8±4.4	41.3±3.6
						P值		0.200	0.204	0.669	0.229
F值		0.896	0.893	0.575	0.876

由表17-19可见，经口给予小鼠不同剂量的红景天胶囊30天，各剂量组小鼠的体重变化与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。

6.2红景天胶囊对小鼠游泳时间的影响(见表20)

表20：对小鼠游泳时间的影响

剂量(g/kg BW)	动物数(只)	游泳时间(s)	F值	P值	与对照组比较P值
						0.0	12	370.8±111.6
0.4	12	439.1±93.1			0.121
						0.8	12	477.4±98.9	2.936	0.044	0.017
1.2	12	485.3±117.4			0.011

表20结果显示：经多个实验组与对照组的两两比较，中、高剂量组的游泳时间明显延长且有显著性差异(P＜0.05)。

6.3红景天胶囊对小鼠血清尿素氮的影响(见表21)

表21：对小鼠血清尿素氮的影响

剂量(g/kg BW)	动物数(只)	尿素氮含量(mmol/L)	F值	P值	与对照组比较P值
						0.0	12	2.71±0.30
0.4	12	2.44±0.33			0.030
						0.8	12	2.27±0.29	8.020	0.000	0.001
1.2	12	2.16±0.22			0.000

表21结果显示：经方差分析P＞0.05，经多个实验组与对照组的两两比较，低、中、高剂量组小鼠运动后血清尿素氮水平，均较对照组降低，差异有显著性(P＜0.05、P＜0.01)

6.4红景天胶囊对小鼠肝糖原的影响：(见表22)

表22：红景天胶囊对小鼠肝糖原的影响

剂量(g/kg BW)	动物数(只)	肝糖原含量(mg/100g肝)	F值	P值	与对照组比较P值
						0.0	12	3610±306
0.4	12	3991±469			0.037
						0.8	12	4222±493	4.665	0.006	0.001
1.2	12	4139±445			0.005

表22结果显示：经方差分析P＜0.05，经多个实验组与对照组的两两比较，低、中、高剂量组小鼠的肝糖原含量与对照组比较有明显提高，差异均有显著性(P＜0.05、P＜0.01)

6.5红景天胶囊对小鼠血乳酸曲线下面积的影响(见表23)

表23：红景天胶囊对小鼠血乳酸曲线下面积的影响

剂(g/kg BW)	动物数(只)	乳酸曲线下面积	F值	P值	与对照组比较P值
						0.0	12	207.6±32.8
0.4	12	188.5±30.0			0.261
						0.8	12	199.8±66.5	0.464	0.709	0.641
1.2	12	194.8±19.1			0.447

表23结果显示：低、中、高剂量组小鼠的血乳酸曲线下面积与对照组比较，差异无显著性。

同样，对实施例1、3及本发明的其他配方进行相同的实验，结果与实施例3的相同，体重无明显影响、游泳时间明显延长、小鼠运动后血清尿素氮水平、肝糖原含量明显增加。

7、小结：经口给予小鼠不同剂量的红景天胶囊30天后，能明显延长小鼠的游泳时间；显著降低小鼠运动后血清尿素氮水平；提高小鼠肝糖原含量。

根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)的规定，可判定红景天胶囊具有缓解体力疲劳功能。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种缓解疲劳和提高缺氧耐受力的中药组合物，其特征在于，该中药组合物由以下重量份的中药制成：红景天13-150份，黄芪30-180份，红花5-60份。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，该中药组合物由以下重量份的中药制成：红景天13-118份，黄芪30-95份，红花5-37份。

3.根据权利要求2所述的中药组合物，其特征在于，该中药组合物由以下重量份的中药制成：红景天30份，黄芪50份，红花25份。

4.根据权利要求1-3任一项所述的中药组合物，其特征在于所述中药组合物为液体或固体制剂。

5.根据权利要求4所述的中药组合物，其特征在于，所述固体制剂为胶囊、颗粒或片；所述液体制剂为口服液或注射液。

6.一种制备权利要求1-5任一项所述的中药组合物的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

7.一种制备权利要求1-5任一项所述的中药组合物的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)对红景天和黄芪进行提取，其提取方法如下：

取红景天、黄芪用75％乙醇回流提取两次，每次2h，第一次溶剂用量为8倍量，第二次用量为6倍量，药渣备用，合并醇提液，用120目不锈钢筛过滤，将醇提液减压浓缩回收乙醇并浓缩至相对密度为1.20-1.25的浸膏，将浸膏真空干燥，真空度0.06-0.1MPa，温度50-60℃，将干膏粉碎成80目的细粉，得醇提浸膏粉；

药渣用水煎煮提取2次，每次2小时，第一次用8倍量水煎煮提取，第二次用6倍量水煎煮提取，合并煎煮液，用120目不锈钢筛过滤，滤液减压浓缩至相对密度1.15-1.20，真空度73.3-86.6KPa，温度60-70℃的浸膏，浸膏真空干燥，真空度0.06-0.1MPa，温度50-60℃，将干膏粉碎成80目的细粉，得水提浸膏粉，将醇提浸膏粉和水提浸膏粉混合均匀，得到醇提和水提浸膏粉混合物，备用；

2)然后将步骤1)得到的醇提浸膏粉和水提浸膏粉分别粉碎过80目筛，与红花混合均匀，加入药学上可接受的载体或稀释剂，按照等量递加法混合均匀，制备成各种剂型。

8.根据权利要求6或7所述的中药组合物，其特征在于，所述药学上可接受的载体或稀释剂选自乳糖、蔗糖、淀粉、糊精、微晶纤维素、聚乙二醇、低取代羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基纤维素中的一种或几种。

9.权利要求1-5任一项所述的中药组合物在制备治疗抗疲劳和提高缺氧耐受力的药物或保健品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，适用对象为用脑过度、心肌衰竭、脑中风和体力劳动者。