CN104535675A

CN104535675A - 测定过氧化氢异丙苯杂质的方法

Info

Publication number: CN104535675A
Application number: CN201410790722.1A
Authority: CN
Inventors: 胡名龙; 徐先英; 崔健; 钱丽娜
Original assignee: Waterstone Pharmaceuticals Wuhan Co Ltd
Current assignee: Sino Us Huashitong Biomedical Technology Wuhan Co ltd
Priority date: 2014-12-17
Filing date: 2014-12-17
Publication date: 2015-04-22
Anticipated expiration: 2034-12-17
Also published as: CN104535675B

Abstract

本发明公开了一种测定过氧化氢异丙苯杂质的方法，选择硅氧烷键合硅胶为固定相，以有机溶液与碱性水溶液的第一混合溶剂作为流动相梯度洗脱。该检测方法专属性强、精密度高、准确性强、操作简便快速，可有效控制药品质量。且该方法的适用性广，可用于右旋兰索拉唑等原料药中过氧化氢异丙苯化合物的检测。

Description

测定过氧化氢异丙苯杂质的方法

技术领域

本发明涉及化学分析领域，具体而言，本发明涉及一种测定过氧化氢异丙苯杂质的方法。

背景技术

过氧化氢异丙苯(Cumene Hydroperoxide，CHP)为无色或淡黄色液体，可溶于醇、酮、酯类、烃类，微溶于水，沸点153℃。CHP已经广泛用于精细化工、高分子材料和有机合成等领域，可作为链式自动氧化反应和聚合反应的引发剂，橡胶硫化的促进剂，有机化合物的氧化剂，还常用于生产苯酚等。

药物合成中，常将过氧化氢异丙苯作为不对称氧化剂，可用作右旋兰索拉唑、埃索美拉唑、左旋泮托拉唑钠等多种原料药(API，Active Pharmaceutical Ingredient)合成的关键物料，但由于其存在的基因毒性，ECHA(欧洲化学品管理局)已将过氧化氢异丙苯化合物公布为基因毒性物质，并规定在原料药中必须进行有关物质的严格控制。欧盟规定过氧化氢异丙苯的限度为最大日服量为1.5μg。

过氧化氢异丙苯的结构式如下：

以下对几个代表性药物及其API中的过氧化氢异丙苯进行说明：

以右旋兰索拉唑为代表右兰索拉唑为质子泵抑制剂。中国专利00809063.7中采用过氧化氢异丙苯作为氧化剂在溶剂中进行不对称氧化，所得产品有关物质纯度好，手性纯度高。其药品标准中要求将过氧化氢异丙苯的残留量控制在25ppm。

埃索美拉唑是一种质子泵抑制剂，通过抑制胃壁细胞的H+/K+-ATP酶来降低胃酸分泌，防止胃酸的形成。中国专利CN95194956中采用过氧化氢异丙苯作为氧化剂在溶剂中进行不对称氧化，所得产品有关物质纯度好，手性纯度高。其药品标准中要求将过氧化氢异丙苯的残留量控制在37.5ppm。

左旋泮托拉唑钠，是用于治疗消化性溃疡出血，非甾体类抗炎药引起的急性胃黏膜损伤和应激状态下溃疡大出血的发生，全身麻醉或大手术后以及衰弱昏迷患者防止胃酸反流合并吸入性肺炎。中国专利CN201410163282.7中采用过氧化氢异丙苯作为氧化剂在溶剂中进行不对称氧化，所得产品有关物质纯度好，手性纯度高。其药品标准中要求将过氧化氢异丙苯的残留量控制在37.5ppm。

目前，尚未见有关过氧化氢异丙苯限度的检测方法。而实现右旋兰索拉唑等原料药中过氧化氢异丙苯杂质的快速分离和含量分析，对于合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种快速分析分离过氧化氢异丙苯的高效液相色谱法，从而实现了右旋兰索拉唑等原料药中的基因毒性杂质在同一色谱条件下的分离及含量测定。

本发明提供了一种测定过氧化氢异丙苯杂质的方法，该方法的测定条件包括：(1)色谱条件：以硅氧烷键合硅胶为固定相，以有机溶剂和碱性水溶液的第一混合溶剂作为流动相进行梯度洗脱；(2)待测样品溶液的配制：采用有机溶剂和碱性水溶液的第二混合溶剂将待检测样品配制成样品溶液；(3)检测分析：采用高效液相色谱仪对所述待测样品溶液进行检测，以便得到所述待测样品溶液中过氧化氢异丙苯杂质的含量。

采用该方法可以将原料药中的过氧化氢异丙苯基因毒性杂质进行快速高效的分离和含量测定，有效控制原料药及制剂的质量。该检测方法专属性强、精密度高、准确性强、操作方便，可有效控制药品的质量。

根据本发明实施例的测定过氧化氢异丙苯杂质的方法，还可以具有以下附加技术特征：

根据本发明实施例，所述待测样品为选自右旋兰索拉唑、埃索美拉唑、左旋泮托拉唑钠中的至少一种。

根据本发明的实施例，所述碱性水溶液选自氨水溶液、三乙胺水溶液，二乙胺水溶液中的至少一种，优选为三乙胺水溶液。由此得到的分离效果最佳。

根据本发明的具体实施例，所述第一混合溶液中的所述碱性水溶液用磷酸调节pH为5.5～7.0，优选为6.2。由此，可以进一步提高主药与有关物质的分离度，得到的峰形和分离效果最佳。

根据本发明的具体实施例，所述有机溶剂为选自甲醇、乙腈中的至少一种，优选为乙腈。由此得到的峰形最好。

根据本发明的实施例，所述梯度洗脱条件为：

时间/min	流动相A/％	流动相B/％
			0	85	15
3	85	15

35	45	55
			36	85	15
45	85	15

其中，所述流动相A为第一混合溶液中的有机溶剂，所述流动相B为第一混合溶液中的碱性水溶液。

由此，可以进一步提高分离度。

根据本发明的具体实施例，样品溶液的配制中采用的溶剂为乙腈和三乙胺水溶液(用磷酸调节pH至10～11)的混合液，混合比例优选为40:60(v/v)。

根据本发明的实施例，检测条件为：所述梯度洗脱的流速0.8ml/min～1.2ml/min，优选为1.0ml/min。

根据本发明的实施例，检测波长为200nm～220nm，优选为210nm。由此，可以显著提高检测灵敏度。

根据本发明的实施例，柱温为20℃～40℃，优选为30℃。由此，可以进一步提高各组分的分离度。

根据本发明的实施例，所述待测样品溶液进样体积为2～20μL，优选为10μL。

根据本发明的实施例，所述色谱柱中填料的粒径为1.8－5μm。由此，可以进一步提高杂质的分离度。

本发明所述的测定方法，可以依照以下方法实现：

(1)取待测样品适量，用乙腈-三乙胺水溶液(用磷酸调节pH至10～11)(体积比40:60)的混合液溶解，配制成每1ml含100mg的待测样品溶液。

(2)设置梯度洗脱的流速为1.0ml/min；检测波长210nm；色谱柱温度为30℃。

(3)取步骤(1)中的所述待测样品溶液2～20μl，优选10μl，注入高效液相色谱仪，完成过氧化氢异丙苯基因毒性杂质的含量的测定。

本发明方法的洗脱分离效果较好，能使样品中过氧化氢异丙苯杂质和主药成分在同一色谱条件下分开，能使样品中各色谱峰有效分离。检测时间仅需45min。可以快速、准确、可靠的分离右旋兰索拉唑等原料药中基因毒性杂质。本发明的技术效果：通过利用HPLC，对原料药中基因毒性杂质过氧化氢异丙苯化合物进行微量检测分析，限度可达25ppm。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

图1：按照实施例1条件检测的痕量过氧化氢异丙苯的HPLC图；

图2：按照实施例1条件检测的自制原料药右旋兰索拉唑中过氧化氢异丙苯残留量的HPLC图；

图3：按照实施例1条件检测的右旋兰索拉唑100％过氧化氢异丙苯加样回收溶液的HPLC图；

图4：按照实施例2条件检测的痕量过氧化氢异丙苯的HPLC图；

图5：按照实施例2条件检测的原料药埃索美拉唑100％过氧化氢异丙苯加样回收溶液的HPLC图；

图6：按照实施例3条件检测的痕量过氧化氢异丙苯的HPLC图；

图7：按照实施例3条件检测的原料药左旋泮托拉唑钠100％过氧化氢异丙苯加样回收溶液的HPLC图。

图8：按照对比实施例1条件检测的痕量过氧化氢异丙苯的HPLC图；

图9：按照对比实施例1条件检测的自制原料药右旋兰索拉唑中过氧化氢异丙苯残留量的HPLC图；

图10：按照对比实施例1条件检测的右旋兰索拉唑100％过氧化氢异丙苯加样回收溶液的HPLC图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

埃索美拉唑和左旋泮托拉唑钠购于武汉水石伟业有限公司。

本发明实施例中所用的右旋兰索拉唑原料药为发明人自制。

右旋兰索拉唑的制备：以兰索拉唑氯化物和2-巯基苯并咪唑在氢氧化钠的水溶液中进行亲核反应，生成兰索拉唑硫醚；兰索拉唑硫醚再经以钛酸四异丙酯和L-酒石酸二乙酯形成手性配合物、以过氧化氢异丙苯为氧化剂，进行不对称氧化生成右旋兰索拉唑。

实施例1

仪器：Agilent1260高效液相色谱仪，1210紫外检测器

色谱柱：硅氧烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(150×4.6mm,5μm)；

流动相A：三乙胺水溶液(用磷酸调节pH至6.2)

流动相B：乙腈

梯度洗脱：

时间/min	流动相A/％	流动相B/％
			0	85	15
3	85	15
			35	45	55
36	85	15
			45	85	15

流速：1.0ml/min

检测波长：210nm

柱温：30℃

进样体积：10μl

稀释剂：乙腈：三乙胺水溶液(用磷酸调节pH至10～11)＝40:60(v/v)

运行时间：45分钟

实验步骤：

供试品溶液：称取右旋兰索拉唑原料药1.0014g置10mL量瓶，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

过氧化氢异丙苯对照贮备液：用稀释剂配制过氧化氢异丙苯对照品浓度约1mg/ml的溶液。

过氧化氢异丙苯对照液：精密量取过氧化氢异丙苯对照贮备液5ml，置于同一个100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液5ml，置100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得(2.5μg/ml)溶液。

加样回收溶液：称取右旋兰索拉唑原料1.0036g置10mL量瓶，用对照品溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。

分别取过氧化氢异丙苯对照溶液、供试品溶液和加样回收溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1、附图2和附图3。

结论：图1表明25ppm的过氧化氢异丙苯在此色谱条件下可检测；图2表明自制的右旋兰索拉唑中过氧化氢异丙苯残留量在25ppm以下；图3表明25ppm的过氧化氢异丙苯在此色谱条件下与右旋兰索拉唑分离良好。

实施例2

仪器：Agilent1260高效液相色谱仪，1210紫外检测器

色谱柱：硅氧烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(150×4.6mm,5μm)；

流动相A：三乙胺水溶液(用磷酸调节pH至5.5)

流动相B：乙腈

梯度洗脱：

流速：1.2ml/min

检测波长：210nm

柱温：30℃

进样体积：10μl

运行时间：45分钟

实验步骤：

过氧化氢异丙苯对照液：精密量取过氧化氢异丙苯对照贮备液5ml，置于同一个100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液5ml，置100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得(2.5μg/ml)。

加样回收溶液：称取埃索美拉唑原料1.0024g置10mL量瓶，用对照品溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。

取过氧化氢异丙苯对照液和加样回收溶液在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图4和附图5。

结论：图4表明25ppm的过氧化氢异丙苯在此色谱条件下可检测；图5表明25ppm的过氧化氢异丙苯在此色谱条件下与埃索美拉唑分离良好。

实施例3

仪器：Agilent1260高效液相色谱仪，1210紫外检测器

色谱柱：硅氧烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(150×4.6mm,5μm)；

流动相A：三乙胺水溶液(用磷酸调节pH至7.0)

流动相B：甲醇

梯度洗脱：

流速：0.8ml/min

检测波长：210nm

柱温：30℃

进样体积：10μl

运行时间：45分钟

实验步骤：

过氧化氢异丙苯对照液：精密量取过氧化氢异丙苯对照贮备液对照贮备液5ml，置于同一个100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液5ml，置100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。(2.5μg/ml)

加样回收溶液：称取左旋泮托拉唑钠原料1.0017g置10mL量瓶，用对照品溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。

取过氧化氢异丙苯对照液和加样回收溶液在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图6和附图7。

结论：图6表明25ppm的过氧化氢异丙苯在此色谱条件下可检测；图7表明25ppm的过氧化氢异丙苯在此色谱条件下与左旋泮托拉唑钠分离良好。

对比实施例1

仪器：Agilent1260高效液相色谱仪，1210紫外检测器

色谱柱：硅氧烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(150×4.6mm,5μm)；

流动相A：三乙胺水溶液(用磷酸调节pH至5.0)

流动相B：乙腈

梯度洗脱：

流速：1.0ml/min

检测波长：210nm

柱温：30℃

进样体积：10μl

运行时间：45分钟

实验步骤：

供试品溶液：称取右旋兰索拉唑原料药1.0010g置10mL量瓶，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

过氧化氢异丙苯对照液：精密量取过氧化氢异丙苯对照贮备液5ml，置于同一个100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液5ml，置100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。(2.5μg/ml)

加样回收溶液：称取右旋兰索拉唑原料1.0031g置10mL量瓶，用对照品溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。

分别取过氧化氢异丙苯对照溶液、供试品溶液和加样回收溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，见附图8、附图9和附图10。

结论：图8表明25ppm的过氧化氢异丙苯在此色谱条件下可检测；图9与图2进行比较可发现右旋兰索拉唑在此色谱条件下会降解产生出峰时间为18.913min的杂质；图10表明右旋兰索拉唑在此色谱条件下降解产生的杂质会干扰过氧化氢异丙苯的检测。

在本发明的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims

1.一种测定过氧化氢异丙苯杂质的方法，其特征在于，测定条件包括：

(1)色谱条件：以硅氧烷键合硅胶为固定相，以有机溶剂和碱性水溶液的第一混合溶液作为流动相进行梯度洗脱；

(2)待测样品溶液的配制：采用有机溶剂和碱性水溶液的第二混合溶液将待检测样品配制待测样品溶液；

(3)检测分析：采用高效液相色谱仪对所述待测样品溶液进行检测，以便得到所述待测样品溶液中过氧化氢异丙苯杂质的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品为选自右旋兰索拉唑、埃索美拉唑、左旋泮托拉唑钠中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述碱性水溶液选自氨水溶液、三乙胺水溶液，二乙胺水溶液中的至少一种，优选为三乙胺水溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一混合溶液中的所述碱性水溶液采用磷酸调节pH值为5.5～7.0，优选为6.2。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂为选自甲醇、乙腈中的至少一种，优选为乙腈。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件为：

时间/min 流动相A/％流动相B/％ 0 85 15 3 85 15 35 45 55 36 85 15 45 85 15

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的流速为0.8～1.2ml/min，优选为1.0ml/min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，柱温为20℃～40℃，优选为30℃。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测波长为200nm～220nm，优选为210nm。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品溶液进样体积为2～20μL，优选为10μL。