CN113125582B - 一种检测过氧化氢异丙苯及其杂质的方法 - Google Patents

一种检测过氧化氢异丙苯及其杂质的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种检测过氧化氢异丙苯含量或及其有关物质的方法，本发明可以检测出包括2‑苯基‑2‑丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯在内的12种杂质，杂质分离度高，检测结果准确。本发明具有良好的专属性、线性关系、精密度、灵敏度和重复性，已知杂质回收率可达98.13％～103.29％，RSD低至0.85％～2.7％，检测结果准确、可靠，保障了终产品的安全性。

Description

一种检测过氧化氢异丙苯及其杂质的方法
技术领域
本发明涉及检测方法领域，特别是涉及一种过氧化氢异丙苯及其有关物质的检测方法。
背景技术
艾司奥美拉唑是一种质子泵抑制剂，通过抑制胃壁细胞的H+/K+-ATP酶来降低胃酸的分泌，防止胃酸的形成，用于胃食管反流性疾病，包括侵蚀性反流性食管炎的起始和长期治疗。艾司奥美拉唑钠与艾司奥美拉唑镁由阿斯利康制药有限公司开发，药品名分别为注射用艾司奥美拉唑钠和艾司奥美拉唑镁肠溶片。阿斯特拉公司在CN1110477中表示钠盐和镁盐是效能最好的艾司美拉唑盐，在临床已广泛适用于治疗十二指肠溃疡、胃溃疡、急性内黏膜病变、复合性溃疡等引起的急性上消化道出血，市场需求量较大，年用金额高达100多亿。
过氧化氢异丙苯作为注射用艾司奥美拉唑钠与艾司奥美拉唑镁肠溶片原料药合成工艺中常用的氧化剂，其质量的好坏直接影响拉唑类药物的疗效与安全性。过氧化氢异丙苯主要通过以下路线合成：
Figure RE-GDA0002686053440000011
其中，式I所示的化合物为异丙苯，是合成过氧化氢异丙苯的起始物料。式 II为过氧化氢异丙苯，即为合成拉唑类药物的常用氧化剂。
在合成过程中，发明人发现过氧化氢异丙苯厂家报告纯度要求为不低于 80％，同时经过多家过氧化氢异丙苯生产商调查，其对过氧化氢异丙苯纯度的要求也均为不得低于85％。根据相关文献报道，过氧化氢异丙苯在合成过程中容易产生如下副产物：
Figure RE-GDA0002686053440000021
其中，式III所示的化合物为2-苯基-2-丙醇，式IV所示的化合物为苯乙酮，式V所示的化合物为过氧化二异丙苯，均为合成过氧化氢异丙苯的副产物。
根据艾司奥美拉唑钠与艾司奥美拉唑镁的合成工艺，过氧化氢异丙苯主要用于中间体至粗品这一步骤，距原料药艾司奥美拉唑钠和艾司奥美拉唑镁仅差一步精制，因此过氧化氢异丙苯中20％的副产物很有可能会带入原料药中，进一步进入制剂成品。为了进一步有效的控制注射用艾司奥美拉唑钠与艾司奥美拉唑镁肠溶片的质量，保证其用药的安全性，急需一种能准确检测过氧化氢异丙苯及其有关物质的检测方法，明确其副产物的种类及是否工艺中已被清除。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够准确定量检测过氧化氢异丙苯及其杂质的方法。该方法能够同时检测过氧化氢异丙苯及至少包括2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯等多种杂质，检测分离度高，效果好。
本发明提供了一种检测过氧化氢异丙苯及其杂质的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)制备待测样品溶液及对照品溶液：采用溶剂将待测样品、对照品溶解为待测样品溶液及对照品溶液；所述溶剂为有机溶剂或有机溶剂与水的混合液；
(2)检测分析：采用高效液相色谱法对待测样品进行检测；所述色谱检测条件如下：以五氟苯基硅烷键合相为固定相；以有机相与水相混合作为流动相进行梯度洗脱；检测波长为190nm～230nm；进样体积为0～100μl。
所述洗脱条件包括：按体积比计算，在0～15分钟，水相∶有机相＝70-90:30-10；在25分钟，水相∶有机相＝30-50:50-70；在30分钟，水相∶有机相＝30-50:50-70；在35分钟，水相∶有机相＝20-40:60-80，在40分钟，水相∶有机相＝20-40:60-80，在41分钟，水相∶有机相＝70-90:30-10。
优选的是所述步骤(2)中洗脱条件包括：所述步骤(2)中洗脱条件包括：按体积比计算，在0～15分钟，水相∶有机相＝80∶20，在25分钟，水相∶有机相＝40∶60，在30分钟，水相∶有机相＝40∶60，在31分钟，水相∶有机相＝80∶ 20，在40分钟，水相∶有机相＝80∶20。
更加优选的是，所述步骤(2)洗脱条件包括：按体积比计算，在0～15分钟，水相∶有机相＝80∶20，在25分钟，水相∶有机相＝40∶60，在30分钟，水相∶有机相＝40∶60，在35分钟，水相∶有机相＝30∶70，在40分钟，水相∶有机相＝30∶70，在41分钟，水相∶有机相＝80∶20，在50分钟，水相∶有机相＝80∶ 20。
优选的是所述步骤(1)中有机溶剂选自甲醇；步骤(2)中有机相选自乙腈。
优选的是，所述步骤(2)中，固定相的长度为50mm～250mm，内径为 2.1～4.6mm，填料的粒径为1.7～5μm。
优选的是，固定相的长度为150mm，内径为4.6mm，粒径为5μm。
优选的是，所述步骤(2)中，流动相的流速为0.8～1.2ml/min；优选的是，流速为0.9～1.1ml/min；进一步优选的是，流速为1.0ml/min。
优选的是，所述步骤(2)中，固定相的温度为20℃～40℃；优选的是，温度为25℃～35℃；进一步优选的是，温度为35℃。
优选的是，所述步骤(1)中溶剂为甲醇与水的混合液，按体积比计算，甲醇∶水＝70:30～100:0；进一步优选的是，甲醇∶水＝90:10。
优选的是，所述步骤(2)中固定相为Agilent pussuit PFP，进样体积为20μl。
优选的是，本发明所提供的检测方法中所述杂质至少包括2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯及过氧化二异丙苯。
本发明中定性检测，可以使用常规方法进行，例如选用对照品通过外标法进行对应分析，又或者通过HPLC将各成分分开以后，通过常规鉴定手段进行定性分析，如质谱、薄层、紫外等等。
本发明中定量检测，可以使用外标法、面积归一化法等常规方法进行含量计算。在定量分析时，若使用外标法，采用常规手段制作标准曲线进行计算即可；但在定性分析时，则无需制作标准曲线，可通过保留时间来判定。
有益效果
本发明提供一种检测过氧化氢异丙苯含量或及其有关物质的方法，本发明可以检测出包括2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯在内的12种杂质，杂质分离度高，检测结果准确。
本发明具有良好的专属性、线性关系、精密度、灵敏度和重复性，已知杂质回收率可达98.13％～103.29％，RSD低至0.85％～2.7％，检测结果准确、可靠，保障了终产品的安全性。
附图说明
图1为试验例1供试品溶液的GC图。
图2为试验例2色谱条件下供试品溶液的HPLC图。
图3为试验例3色谱条件下供试品溶液的HPLC图。
图4为试验例4色谱条件下供试品溶液的HPLC图。
图5为试验例5色谱条件下供试品溶液的HPLC图。
图6为试验例6色谱条件下对照品溶液的HPLC图。
图7为试验例6色谱条件下供试品溶液的HPLC图。
图8为试验例7色谱条件下对照品溶液的HPLC图。
图9为试验例7色谱条件下供试品溶液的HPLC图。
图10为试验例7色谱条件下供试品溶液的主峰纯度图。
图11为实施例1色谱条件下供试品溶液的HPLC图。
图12为实施例2色谱条件下对照品溶液的HPLC图。
图13为实施例2色谱条件下供试品溶液的HPLC图
图14为实施例2色谱条件下供试品溶液的主峰纯度图。
图15为实施例3中波长208nm色谱条件下对照品溶液的HPLC图。
图16为实施例3中波长208nm色谱条件下供试品溶液的HPLC图。
图17为实施例3中波长210m色谱条件下对照品溶液的HPLC图。
图18为实施例3中波长210nm色谱条件下供试品溶液的HPLC图。
图19为实施例3中波长212m色谱条件下对照品溶液的HPLC图。
图20为实施例3中波长212m色谱条件下供试品溶液的HPLC图图。
图21为实施例4中流速0.8ml/min色谱条件下对照品溶液的HPLC图。
图22为实施例4中流速0.8ml/min色谱条件下供试品溶液的HPLC图。
图23为实施例4中流速1.2ml/min下对照品溶液的HPLC图。
图24为实施例4中流速1.2ml/min下供试品溶液的HPLC图。
图25为实施例5中在柱温30℃下对照品溶液的HPLC图。
图26为实施例5中在柱温30℃下供试品溶液的HPLC图。
图27为实施例5中在柱温40℃下对照品溶液的HPLC图。
图28为实施例5中在柱温40℃下供试品溶液的HPLC图。
图29为2-苯基-2-丙醇的紫外吸收波长。
图30为苯乙酮的紫外光谱图。
图31为异丙苯的紫外光谱图。
图32为过氧化二异丙苯的紫外光谱图。
图33为过氧化氢异丙苯的紫外光谱图。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
杂质2-苯基-2-丙醇批号为P1395365，含量为99.00％，来源于Adamas公司。
杂质苯乙酮批号为C1919088，含量为99.90％，来源于阿拉丁公司。
杂质异丙苯批号为L380335，含量为99.95％，来源于百灵威公司。
杂质过氧化二异丙苯批号为K1702157，含量为99.46，来源于阿拉丁公司。
过氧化氢异丙苯批号为C71909090，纯度大于80％，来源于阿拉丁公司。
XP6百万分之一天平可购自梅特勒公司；AUW220D十万分之一天平可购自梅特勒公司；XSE205DU十万分之一天平可购自梅特勒公司；pHSJ-5酸度计可购自上海精科；Waterse2695高效液相色谱仪可购自沃特世公司；岛津 LC-2030C高效液相色谱仪可购自岛津公司；安捷伦1260高效液相色谱仪可购自安捷伦公司；Empower3网络工作站可购沃特世科技(上海)有限公司；Agilent pussuit 5PFP，150mm＊4.6mm，5μm可购自安捷伦公司；AgilentDB-1，30m＊ 0.630mm＊3μm可购自安捷伦公司；XBridge Shi RP C18，150mm＊4.6mm，3.5μm，可购自沃特世公司；Inertsil ODS-3，250mm＊4.6mm，5μm，可购自岛津公司。
试验例1
色谱柱：Agilent DB-1，30m＊0.630mm＊3μm
溶剂：甲醇升温程序：初始柱温60℃，以每分钟10℃速率升温至130℃，维持3min，再以每分钟20℃速率升温至240℃，维持5min；
进样口温度：200℃；
检测器温度：250℃；
流速：1ml/min；
分流比：10:1；
进样量：1ul；
运行时间：30min
取本品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为100mg的溶液，作为供试品溶液。
测定法：取溶剂与供试品溶液各1μl注入液相色谱仪，记录测定结果，供试品色谱图见图1。
测定结果显示，容积在该色谱条件下不干扰杂质与主峰的检出。
图1为供试品溶液的GC图，主峰保留时间为9.457min，与相邻峰分离度良好，但杂质较多，主峰纯度仅为45.429％，与本品厂家报告纯度大于80％的结果相差较大。结果表明，该方法不适用于过氧化氢异丙苯中杂质的定性或/和定量的检出。
试验例2
色谱柱：Agilent Pur suit 5PFP，150mm×4.6mm，5μm；
流动相：水-乙腈(50:50)；
溶剂：水-乙腈(50:50)；
柱温：35℃；
流速：1.0ml/min；
波长：210nm；
运行时间：30min；
进样体积：20μl；
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯适量，精密称定，分别加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为9.50μg，苯乙酮为9.15μg，异丙苯为8.36μg、过氧化二异丙苯9.24μg的溶液，作为杂质定位溶液。
取本品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为1mg的溶液，作为供试品溶液。
测定法：取溶剂、杂质定位溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，并记录结果；供试品色谱图见图2。
测定结果表示：
1.溶剂在本色谱条件下不干扰杂质与主峰的检出；2.杂质2-苯基-2-丙醇保留时间为2.851min；3.苯乙酮保留时间为3.151min；4.异丙苯定位溶液的HPLC图，保留时间为6.784min；5.过氧化氢二异丙未出峰。
图2为供试品溶液的HPLC图，结果表示2-苯基-2-丙醇的保留时间为2.852min；苯乙酮的保留时间3.165min；异丙苯保留时间6.787min；过氧化二异丙苯未出峰；主峰保留时间3.165min。
结果表明，本发明色谱条件下，各杂与主峰出峰均较快，主峰与苯乙酮重合，过氧化二异丙苯未出峰；该方法不可用于过氧化氢异丙苯中杂质的定性或/和定量的检出。
试验例3
色谱柱：Agilent Pursuit 5PFP，150mm×4.6mm，5μm；
流动相：水-乙腈(80:20)；
溶剂：水-乙腈(80:20)；
柱温：35℃；
流速：1.0ml/min；
波长：210nm；
运行时间：40min；
进样体积：20μl。
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯适量，精密称定，分别加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为9.50μg，苯乙酮为9.15μg，异丙苯为8.36μg、过氧化二异丙苯9.24μg的溶液，作为杂质定位溶液。
取本品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为0.4mg的溶液，作为供试品溶液。
测定法：取溶剂、杂质定位溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，并记录结果；供试品色谱图见图3。
测定结果表示：
1.溶剂在本色谱条件下不干扰杂质与主峰的检出；2.杂质2-苯基-2-丙醇保留时间为8.610min；3.苯乙酮保留时间为10.039min；4.异丙苯未出峰；5.过氧化二异丙苯未出峰。
图3为供试品溶液的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为8.627min；苯乙酮的保留时间10.055min；异丙苯未出峰，过氧化二异丙苯未出峰。
结果表明，本发明色谱条件下，各杂与主峰出峰均较慢，且异丙苯、过氧化二异丙苯未出峰，该方法不可用于过氧化氢异丙苯中杂质的定性或/和定量的检出。
试验例4
色谱柱：Agilent Pursuit 5PFP，150mm×4.6mm，5μm；
流动相：水-乙腈(70:30)；
溶剂：水-乙腈(70:30)；柱温：35℃；
流速：1.0ml/min；
波长：210nm；
运行时间：40min。
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯适量，精密称定，分别加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为9.50μg，苯乙酮为9.16μg，异丙苯为8.36μg，过氧化二异丙苯9.24μg的溶液，作为杂质定位溶液。
取本品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为0.4mg的溶液，作为供试品溶液。
测定法：取溶剂、杂质定位溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，并记录结果；供试品色谱图见图4。
测定结果表示：
1.溶剂在本色谱条件下不干扰杂质与主峰的检出；2.杂质2-苯基-2-丙醇保留时间为4.796min；3.苯乙酮保留时间为5.598min；4.异丙苯31.555min；5.过氧化二异丙苯未出峰。
图4为供试品溶液的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为4.801min；苯乙酮的保留时间5.608min；异丙苯保留时间为31.640min，主峰保留时间为 6.294min，过氧化二异丙苯未出峰。
结果表明，本发明色谱条件下，2-苯基-2-丙醇、苯乙酮与主峰出峰均较早，但异丙苯出峰较晚，峰形矮胖，过氧化二异丙苯未出峰，该方法不可用于过氧化氢异丙苯中杂质的定性或/和定量的检出。
试验例5
色谱柱：Agilent Pursuit 5PFP，150mm×4.6mm，5μm；
流动相：水-乙腈(40:60)；
溶剂：水-乙腈(60:40)；
柱温：35℃；
流速：1.0ml/min；
波长：210nm；
运行时间：40min。
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯适量，精密称定，分别加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为9.50μg，苯乙酮为9.16μg，异丙苯为8.36μg、过氧化二异丙苯9.24μg的杂质定位溶液。
取本品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为0.4mg的溶液，作为供试品溶液。
测定法：取溶剂、杂质定位溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，并记录结果；供试品色谱图见图5。
测定结果表示：
1.溶剂在本色谱条件下不干扰杂质与主峰的检出；2.杂质2-苯基-2-丙醇保留时间为2.851min；3.苯乙酮保留时间为3.151min；4.异丙苯6.784min；5.过氧化二异丙苯未出峰。
测定法：取溶剂、杂质定位溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图5。
图5为供试品溶液的HPLC图，共检出7个杂质，其中4个为未知杂质，3 个为已知杂质，2-苯基-2-丙醇的保留时间为2.852min；苯乙酮的保留时间 3.165min；主峰的保留时间为3.165min；异丙苯保留时间为6.787min；过氧化二异丙苯未出峰。
结果表明，此色谱条件下，检出的未知杂质少于实施例，主峰及各已知杂质峰出峰均较快，主峰与苯乙酮重合，且包裹未知杂质。故该方法不可用于过氧化氢异丙苯中杂质的定性或/和定量的检出。
试验例6
色谱柱：XBridge Shi RP C18，150mm×4.6mm，3.5μm；
流动相：以水为A相；乙腈为B相；
溶剂：水-乙腈(60:40)；，溶剂在本色谱条件下不干扰杂质与主峰的检出
柱温：25℃；
流速：1.2ml/min；
检测波长：210nm；
进样体积：100μl；
运行时间：11min；
洗脱梯度
T(min) 0 4 6.5 8.5 9.0 11.0
A 60 60 5 5 60 60
B 40 40 95 95 40 40
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯适量，精密称定，分别加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为0.5μg，苯乙酮为0.5μg，异丙苯为0.5μg、过氧化二异丙苯0.5μg与过氧化氢异丙苯0.5μg 的溶液的混合溶液，作为对照品溶液。
取本品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为0.3mg的溶液，作为供试品溶液。
测定法：取溶剂、对照品溶液、供试品溶液各取20μl注入液相色谱仪，记录测定结果，对照品溶液色谱图、供试品溶液色谱图结果见图6、图7。
测定结果表示：溶剂在本色谱条件下不干扰杂质与主峰的检出。
图6为对照品溶液的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为3.220min，苯乙酮的保留时间3.594min，异丙苯保留时间8.515min，过氧化二异丙苯保留时间9.199min，主峰保留时间3.594min，各峰之间分离度良好。
图7为供试品溶液的HPLC图，共10个杂质，其中6个为未知杂质，4个为已知杂质，2-苯基-2-丙醇保留时间为3.252min，苯乙酮保留时间为3.630min，异丙苯保留时间为8.532min，过氧化二异丙苯保留时间为9.209min；过氧化氢异丙苯保留时间为4.337min。
结果表明：此色谱条件下，检出的未知杂质少于实施例，主峰包裹杂质，且严重拖尾，异丙苯与未知杂质无法分离，故该方法不可用于过氧化氢异丙苯中杂质的定性或/和定量的检出。
试验例7
色谱柱：Inertsil ODS-3，250mm×4.6mm，5μm；
流动相：以水为A相；甲醇为B相；
溶剂：水-甲醇(10:90)；溶剂在本色谱条件下不干扰杂质与主峰的检出；
柱温：35℃；
流速：0.8ml/min；
检测波长：210nm；
进样体积：20μl；
运行时间：45min
洗脱梯度
T(min) 0 12 24 32 33 45
A 60 36 0 0 60 60
B 40 64 100 100 40 40
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯适量，精密称定，分别加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为0.5μg，苯乙酮为0.5μg，异丙苯为0.5μg、过氧化二异丙苯0.5μg与过氧化氢异丙苯 0.5μg的溶液的混合溶液，作为对照品溶液。
取本品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为0.3mg的溶液，作为供试品溶液。
测定法：取溶剂与供试品溶液各取20μl注入液相色谱仪，记录测定结果及对照品溶液、供试品溶液色谱图。
测定结果表示：溶剂在本色谱条件下不干扰杂质与主峰的检出。
图8为对照品溶液的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为14.218min，苯乙酮的保留时间15.176min，异丙苯保留时间26.747min，过氧化二异丙苯保留时间29.163min，主峰保留时间15.786min，各峰之间分离度良好。
图9为供试品溶液的HPLC图，共7个杂质，其中3个为未知杂质，4个为已知杂质，2-苯基-2-丙醇保留时间为14.231min，苯乙酮保留时间为15.194min，异丙苯保留时间为26.760min，过氧化二异丙苯保留时间为29.179min；过氧化氢异丙苯保留时间为15.796min。
图10为供试品溶液主峰纯度图，纯度角(PA)为1.906，纯度阈值(TH) 为0.756，PA＞TH，主峰纯度不符合规定。
结果表明：此色谱条件下，检出的未知杂质少于实施例，主峰包裹杂质，纯度不符合规定，故该方法不可用于过氧化氢异丙苯中杂质的定性或/和定量的检出。
实施例1
色谱柱：Agilent Pursuit 5PFP，150mm×4.6mm，5μm；
流动相：以水为A相；乙腈为B相；
溶剂：甲醇；
柱温：35℃；
流速：1.0ml/min；
检测波长：210nm；
进样体积：20μl；
洗脱梯度
T(min) 0 15 25 30 31 40
A 80 80 40 30 80 80
B 20 20 60 70 20 20
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯适量，精密称定，分别加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为6μg，苯乙酮为5μg，异丙苯为5.5μg、过氧化二异丙苯5μg的溶液，作为杂质定位溶液。
测定法：取溶剂、杂质定位溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录测定结果，供试品溶液色谱图见图11。
测定结果：1.溶剂在本色谱条件下不干扰杂质与主峰的检出；2.杂质2-苯基 -2-丙醇保留时间为8.100min；3.苯乙酮保留时间为9.464min；4.异丙苯26.889min； 5.过氧化二异丙苯保留时间为30.510min。
图11为供试品溶液的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为8.129min，苯乙酮的保留时间9.472min，异丙苯保留时间26.886min，过氧化二异丙苯保留时间30.538min，主峰保留时间11.763min，各杂质与相邻峰之间，主峰与相邻峰之间分离度良好。
实施例2
色谱柱：Agilent Pursuit 5PFP，150mm×4.6mm，5μm；
流动相：以水为A相；乙腈为B相；
溶剂：水-甲醇(10:90)；
柱温：35℃；
流速：1.0ml/min；
检测波长：210nm；
进样体积：20μl；
运行时间：50min
洗脱梯度
T(min) 0 15 25 30 35 40 41 50
A 80 80 40 40 30 30 80 80
B 20 20 60 60 70 70 20 20
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为30μg，苯乙酮为5μg，异丙苯为9μg、过氧化二异丙苯3μg与过氧化氢异丙苯3μg的溶液的混合溶液，作为对照品溶液。
取本品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为0.3mg的溶液，作为供试品溶液。
测定法：取溶剂、对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录测定结果，对照品溶液色谱图、供试品溶液色谱图、主峰纯度图见图12-14。
测定结果：溶剂在本色谱条件下不干扰杂质与主峰的检出。
图12为对照溶液的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为8.464min，苯乙酮的保留时间9.836min，异丙苯保留时间26.980min，过氧化二异丙苯保留时间 31.123min，主峰保留时间12.259min，各峰之间分离度良好。
图13为供试品溶液的HPLC图，共检出12个杂质，其中7个为未知杂质， 4个为已知杂质，2-苯基-2-丙醇的保留时间为8.443min，苯乙酮的保留时间 9.819min，异丙苯保留时间26.890min，过氧化二异丙苯保留时间31.133min，主峰保留时间12.208min。
图14为主峰的纯度图，主峰纯度角(PA)为0.474，纯度阈值(TH)为1.271， PA＜TH，主峰纯度符合规定。
结果表明，本发明色谱条件下，各杂与相邻峰之间，主峰与相邻峰之间的分离度符合规定，主峰纯度符合规定，且溶剂不干扰杂质与主峰的检出，方法可用于过氧化氢异丙苯中杂质的定性或/和定量的检出。
实施例3
色谱柱：Agilent Pursuit 5PFP，150mm×4.6mm，5μm；
流动相：以水为A相；乙腈为B相；
溶剂：水-甲醇(10:90)；
柱温：35℃；
流速：1.0ml/min；
检测波长：208nm、210nm、212nm；
进样体积：20μl；
洗脱梯度
T(min) 0 15 25 30 35 40 41 50
A 80 80 40 40 30 30 80 80
B 20 20 60 60 70 70 20 20
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为30μg，苯乙酮为5μg，异丙苯为9μg、过氧化二异丙苯3μg与过氧化氢异丙苯3μg的溶液的混合溶液，作为对照品溶液。
取本品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为0.3mg的溶液，作为供试品溶液。
测定法：取溶剂、对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录测定结果及各对照品溶液图谱、供试品溶液图谱。
测定结果：溶剂在各色谱条件下均不干扰杂质与主峰的检出。
图15为对照溶液在208nm下的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为 8.458min，苯乙酮的保留时间9.831min，异丙苯保留时间26.894min，过氧化二异丙苯保留时间31.128min，主峰保留时间12.252min，各峰之间分离度良好。
图16为供试品溶液在208nm的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为 8.463min，苯乙酮的保留时间9.836min，异丙苯保留时间26.890min，过氧化二异丙苯保留时间31.128min，主峰保留时间12.242min，各杂质与相邻峰之间，主峰与相邻峰之间分离度良好。
图17为对照溶液在210nm下的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为 8.458min，苯乙酮的保留时间9.831min，异丙苯保留时间26.894min，过氧化二异丙苯保留时间31.128min，主峰保留时间12.252min，各峰之间分离度良好。
图18为供试品溶液在210nm的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为 8.463min，苯乙酮的保留时间9.836min，异丙苯保留时间26.890min，过氧化二异丙苯保留时间31.128min，主峰保留时间12.242min，各杂质与相邻峰之间，主峰与相邻峰之间分离度良好。
图19为对照溶液在212nm下的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为 8.458min，苯乙酮的保留时间9.831min，异丙苯保留时间26.894min，过氧化二异丙苯保留时间31.128min，主峰保留时间12.251min，各峰之间分离度良好。
图20为供试品溶液在212nm的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为 8.463min，苯乙酮的保留时间9.836min，异丙苯保留时间26.890min，过氧化二异丙苯保留时间31.128min，主峰保留时间12.242min，各杂质与相邻峰之间，主峰与相邻峰之间分离度良好。
结果表明，该色谱条件的三个波长下，供试品检出的已知杂质含量、总杂含量与杂质个数一致。该方法在波长208～212nm范围内耐用性良好。
实施例4：
色谱柱：Agilent Pursuit 5PFP，150mm×4.6mm，5μm；
流动相：以水为A相；乙腈为B相；
溶剂：水-甲醇(10:90)；
柱温：35℃；
流速：0.8ml/min、1.2ml/min；
检测波长：210nm；
进样体积：20μl；
洗脱梯度
Figure RE-GDA0002686053440000151
Figure RE-GDA0002686053440000161
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为30μg，苯乙酮为5μg，异丙苯为9μg、过氧化二异丙苯3μg与过氧化氢异丙苯3μg的溶液的混合溶液，作为对照品溶液。
取本品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为0.3mg的溶液，作为供试品溶液。
测定法：取溶剂、对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录测定结果及各对照品溶液色谱图、供试品溶液色谱图。
测定结果：溶剂在各个色谱条件下均不干扰杂质与主峰的检出。
图21为对照溶液在流速0.8ml/min下的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为9.798min，苯乙酮的保留时间11.252min，异丙苯保留时间26.955min，过氧化二异丙苯保留时间31.153min，主峰保留时间13.759min，各峰之间分离度良好。
图22为供试品溶液在流速0.8ml/min的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为9.838min，苯乙酮的保留时间11.296min，异丙苯保留时间26.979min，过氧化二异丙苯保留时间31.184min，主峰保留时间13.802min，各杂质与相邻峰之间，主峰与相邻峰之间分离度良好。
图23为对照溶液在流速1.2ml/min下的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为7.347min，苯乙酮的保留时间8.607min，异丙苯保留时间26.847min，过氧化二异丙苯保留时间31.138min，主峰保留时间10.870min，各峰之间分离度良好。
图24为供试品溶液在流速1.2ml/min的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为7.334min，苯乙酮的保留时间8.593min，异丙苯保留时间26.834min，过氧化二异丙苯保留时间31.117min，主峰保留时间10.838min，各杂质与相邻峰之间，主峰与相邻峰之间分离度良好。
结果表明，该色谱条件在流速0.8ml/min～1.2ml/min范围内，供试品检出的已知杂质含量、总杂含量与杂质个数一致。该方法在流速0.8ml/min～1.2ml/min 范围内耐用性良好。
实施例5：
色谱柱：Agilent Pursuit 5PFP，150mm×4.6mm，5μm；
流动相：以水为A相；乙腈为B相；
溶剂：水-甲醇(10:90)；柱温：30℃、40℃；
流速：1.0ml/min；
检测波长：210nm；
进样体积：20μl；
洗脱梯度
T(min) 0 15 25 30 35 40 41 50
A 80 80 40 40 30 30 80 80
B 20 20 60 60 70 70 20 20
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为30μg，苯乙酮为5μg，异丙苯为9μg、过氧化二异丙苯3μg与过氧化氢异丙苯3μg的溶液的混合溶液，作为对照品溶液。
取本品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为0.3mg的溶液，作为供试品溶液。
测定法：取溶剂、对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录测定结果及对照品溶液色谱图、供试品溶液色谱图。
测定结果：溶剂在本色谱条件下均不干扰杂质与主峰的检出。
图25为对照溶液在柱温30℃下的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为8.700min，苯乙酮的保留时间10.385min，异丙苯保留时间27.153min，过氧化二异丙苯保留时间31.441min，主峰保留时间12.951min，各峰之间分离度良好。
图26为供试品溶液在柱温30℃的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为8.703min，苯乙酮的保留时间10.388min，异丙苯保留时间27.146min，过氧化二异丙苯保留时间31.428min，主峰保留时间12.933min，各杂质与相邻峰之间，主峰与相邻峰之间分离度良好。
图27为对照溶液在柱温40℃下的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为8.211min，苯乙酮的保留时间9.316min，异丙苯保留时间26.628min，过氧化二异丙苯保留时间30.834min，主峰保留时间11.587min，各峰之间分离度良好。
图28为供试品溶液在柱温40℃的HPLC图，2-苯基-2-丙醇的保留时间为8.210min，苯乙酮的保留时间9.316min，异丙苯保留时间26.625min，过氧化二异丙苯保留时间30.836min，主峰保留时间11.572min，各杂质与相邻峰之间，主峰与相邻峰之间分离度良好。
结果表明，该色谱条件在流速30℃～40℃ml/min范围内，供试品检出的已知杂质含量、总杂含量与杂质个数一致。该方法在流速30℃～40℃范围内耐用性良好。
本发明检测方法的方法学研究
本实施例中各种试验均采用如下条件：
色谱柱：Agilent Pursuit 5PFP，150mm×4.6mm，5μm；
流动相：以水为A相；乙腈为B相；
溶剂：水-甲醇(10:90)；
柱温：35℃；
流速：1.0ml/min；
检测波长：210nm；
进样体积：20μl；
洗脱梯度
T(min) 0 15 25 30 35 40 41 50
A 80 80 40 40 30 30 80 80
B 20 20 60 60 70 70 20 20
1、检测波长：
结合对比试验2与对比试验5，结果表明，过氧化氢异丙苯和4个杂质在 190nm～230nm均有吸收，但样品和杂质的最大吸收波长均在210nm附近，因此优选210nm作为过氧化氢异丙苯有关物质测定波长。结果见图29～33。
图29为2-苯基-2-丙醇的紫外吸收波长。
图30为苯乙酮的紫外光谱图。
图31为异丙苯的紫外光谱图。
图32为过氧化二异丙苯的紫外光谱图。
图33为过氧化氢异丙苯的紫外光谱图。
2、专属性
取2-苯基-2-丙醇对照品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为30μg的溶液，作为杂质2-苯基-2-丙醇的定位溶液。
取苯乙酮对照品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为5μg的溶液，作为苯乙酮的定位溶液。
取异丙苯对照品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为9μg的溶液，作为异丙苯的定位溶液。
取过氧化二异丙苯对照品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为3μg的溶液，作为过氧化二异丙苯的定位溶液。
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为30μg，苯乙酮为5μg，异丙苯为9μg、过氧化二异丙苯3μg与过氧化氢异丙苯3μg的溶液的混合溶液，作为对照品溶液。
取本品适量，加溶剂溶解并稀释制成每ml约为0.3mg的溶液，作为供试品溶液。
测定法：取溶剂、对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图12-14。
结果表明，本发明色谱条件下，各杂与相邻峰之间，主峰与相邻峰之间的分离度符合规定，且溶剂不干扰杂质与主峰的检出，该方法专属性良好。
3、标准曲线与范围
分别取2-苯基-2-丙醇，苯乙酮，异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯对照品各适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成一系列浓度的对照品溶液。分别精密量取不同浓度的对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标X，以峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，计算线性回归方程及相关系数r。结果见表1。
表1：标准曲线
Figure RE-GDA0002686053440000191
Figure RE-GDA0002686053440000201
结果表明，本发明检测方法中过氧化氢异丙苯的浓度在0.06μg/ml～6.42g/ml 范围内与峰面积呈良好的线性关系，线性方程：Y＝54320.9332X-1047.7077， r＝1.0000；2-苯基-2-丙醇的浓度在0.04μg/ml～60.73g/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，线性方程：Y＝56345.8875X+6742.0340，r＝1.0000；苯乙酮的浓度在 0.03μg/ml～8.86g/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，线性方程： Y＝82164.4125X+683.8505，r＝1.0000；异丙苯的浓度在0.0007μg/ml～18.38g/ml 范围内与峰面积呈良好的线性关系，线性方程：Y＝66172.9268X+5308.3736， r＝0.9999；过氧化二异丙苯的浓度在0.02μg/ml～18.38g/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，线性方程：Y＝66097.3943X+956.2762，r＝1.0000，证明本发明方法线性范围广，准确度高。
4、进样紧密度试验
取实施例1项下的对照品溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，连续进样 6次，记录色谱图，结果见表2、3。
表2进样精密-峰面积考察结果
Figure RE-GDA0002686053440000202
Figure RE-GDA0002686053440000211
表3进样精密-保留时间考察结果
Figure RE-GDA0002686053440000212
结果表明，各杂质的峰面积与保留时间的RSD均小于2.0％，证明本发明的检测方法精密度优异。
5、定量限与检测限
分别取2-苯基-2-丙醇，苯乙酮，异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯对照品线性低浓度溶液，以3倍信噪比作为检测限。结果见表4。
表4定量限试验结果
杂质名称 浓度(μg/ml) 最低检测限(ng) 相当于主成分百分比(％)
过氧化氢异丙苯 0.018 0.36 0.006
2-苯基-2-丙醇 0.01 0.2 0.003
苯乙酮 0.01 0.2 0.003
异丙苯 0.00001 0.0002 0.000
过氧化二异丙苯 0.006 0.12 0.002
分别取2-苯基-2-丙醇，苯乙酮，异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯对照品线性低浓度溶液，以10倍信噪比作为定量限。结果见表5。
表5检测限试验结果
杂质名称 浓度(μg/ml) 最低定量限(ng) 相当于主成分百分比(％)
过氧化氢异丙苯 0.06 1.2 0.020
2-苯基-2-丙醇 0.04 0.8 0.013
苯乙酮 0.03 0.6 0.010
异丙苯 0.0007 0.014 0.000
过氧化二异丙苯 0.02 0.4 0.007
以上结果表明，本发明方法的检测灵敏度高，可以充分满足含量测定要求。
6、精密度试验
(1)重复性
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为30μg，苯乙酮为4.6μg，异丙苯为9μg、过氧化二异丙苯3μg与过氧化氢异丙苯3μg的溶液的混合溶液，作为对照品溶液。
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为964.4μg，苯乙酮为109.2μg，异丙苯为311.4μg与过氧化二异丙苯61.23μg的溶液的混合溶液，作为对照品贮备溶液。
精密称取过氧化氢异丙苯约30mg，置于100ml量瓶中，加入对照品贮备液 1ml，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为重复性样品，平行6份。
精密量取20μl，按本发明的检测方法进行检测，已知杂质按外标法以峰面积计算杂质的含量，未知杂质按主成分对照品外标法以峰面积计算含量，结果见表 6。
表6重复性试验结果
样品编号 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD
2-苯基-2-丙醇(％) 9.98 10.03 10.05 9.88 9.94 9.89 9.96 0.71
苯乙酮(％) 1.48 1.49 1.49 1.46 1.47 1.47 1.48 0.82
异丙苯(％) 2.98 3.01 3.01 2.93 2.94 2.94 2.97 1.23
过氧化二异丙苯(％) 0.97 0.98 0.98 0.97 0.97 0.97 0.97 0.53
其它单个杂质(％) 0.23 0.21 0.21 0.22 0.21 0.21 0.22 3.8
总杂(％) 15.97 16.06 16.08 15.80 15.85 15.81 15.93 0.79
由以上结果可知，本发明检测方法重复性良好。
(2)中间精密度
由不同操作人员，于不同时间在不同仪器上，取同一批过氧化氢异丙苯，按照重复性方法平行配制样品6份，验证方法的中间精密度(n＝6)，结果见表7。
表7中间精密度试验结果
样品编号 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD
2-苯基-2-丙醇(％) 9.68 9.77 9.48 9.56 9.48 9.71 9.613 1.29
苯乙酮(％) 1.46 1.47 1.43 1.44 1.43 1.47 1.45 1.31
异丙苯(％) 3.03 3.04 2.94 2.93 2.89 2.95 2.963 2.00
过氧化二异丙苯(％) 0.98 0.99 0.97 0.97 0.97 0.99 0.978 1.01
其它单个杂质(％) 0.20 0.17 0.16 0.17 0.17 0.17 0.17 8.04
总杂(％) 15.68 15.76 15.27 15.39 15.26 15.60 15.49 1.39
由以上结果可知，本发明检测方法中间精密度良好。
结合重复性与中间精密度12份样品数据，验证方法的精密度，结果见表8。
表8精密度试验结果
Figure RE-GDA0002686053440000232
由以上结果可知，中间精密度与重复性结果基本一致，本发明检测方法精密度良好。
7、溶液稳定性
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为30μg，苯乙酮为4.6μg，异丙苯为9μg、过氧化二异丙苯3μg与过氧化氢异丙苯3μg的溶液的混合溶液，作为对照品溶液。
精密称取过氧化氢异丙苯约30mg，置于100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
取对照品溶液与供试品溶液分别于配制后进样20μl，记录色谱图，考察对照品溶液于供试品溶液的稳定性。结果见表9、10、11。
表9溶液稳定性试验-对照品溶液峰面积考察
Figure RE-GDA0002686053440000231
表10溶液稳定性试验-对照品溶液保留时间考察
Figure RE-GDA0002686053440000241
表11溶液稳定性试验-供试品溶液稳定性考察
Figure RE-GDA0002686053440000242
由以上结果可知，对照品配溶液配制12小时内较稳定；供试品溶液在配制 6.5小时内稳定，6.5小时后最大未知单杂略有增加，证明本发明检查方法供试品溶液6.5小时内稳定。
8、准确度试验
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为30μg，苯乙酮为4.6μg，异丙苯为9μg、过氧化二异丙苯3μg与过氧化氢异丙苯3μg的溶液的混合溶液，作为对照品溶液。
取2-苯基-2-丙醇、苯乙酮、异丙苯、过氧化二异丙苯与过氧化氢异丙苯适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每ml约含2-苯基-2-丙醇为964.4μg，苯乙酮为109.2μg，异丙苯为311.4μg与过氧化二异丙苯61.23μg的溶液的混合溶液，作为对照品贮备溶液。
精密称取过氧化氢异丙苯约30mg，置于100ml量瓶中，加入对照品贮备液 1ml，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为重复性样品，平行6份，作为回收供试品溶液。
精密量取20μl，按本发明的检测方法进行检测，记录图谱，计算各杂质的测得量、对照品加入量及回收率。结果见表12、13、14、15。
计算公式：
Figure RE-GDA0002686053440000251
式中：a为供试品中所含杂质的量，μg；
b为杂质对照品加入量，μg；
c为杂质测得量，μg。
表12 2-苯基-2-丙醇回收率结果
Figure RE-GDA0002686053440000252
表13苯乙酮回收率结果
Figure RE-GDA0002686053440000253
表14异丙苯回收率结果
Figure RE-GDA0002686053440000254
Figure RE-GDA0002686053440000261
表15过氧化二异丙苯回收率结果
Figure RE-GDA0002686053440000262
结果表明，本发明检测方法测定过氧化氢异丙苯中的杂质，2-苯基-2-丙醇回收率在98.94％～100.67％之间，相对标准偏差为0.85％；苯乙酮回收率 96.78％～101.20％，相对标准偏差为1.61％；异丙苯回收率96.05％～100.25％，相对标准偏差为1.88％；过氧化二异丙苯回收率97.94％～105.97％，相对标准偏差为2.70％，证明本发明的检测方法回收率，准确度高。
综上所述，本发明提供了一种过氧化氢异丙苯中杂质检测及含量测定的高效液相色谱方法，过氧化氢异丙苯与杂质之间的分离高，溶剂不干扰杂质的检测；同时，本发明方法具有良好的专属性、线性关系、精密度、灵敏度和重复性，加样回收率高，检测结果准确、可靠，为监控拉唑类药物催化剂的杂质提供了一种行之有效的检测方法，进一步保证了终产品如奥美拉唑、艾司奥美拉唑钠、艾司奥美拉唑镁等药物的安全性。

Claims (11)

1.一种检测过氧化氢异丙苯及其杂质的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)制备待测样品溶液及对照品溶液：采用溶剂将待测样品、对照品溶解为待测样品溶液及对照品溶液；所述溶剂为甲醇；
(2)检测分析：采用高效液相色谱法对待测样品进行检测；所述液相色谱检测条件如下：以五氟苯基硅烷键合相为固定相；以乙腈与水相混合作为流动相进行梯度洗脱；检测波长为190nm～230nm；进样体积为0～100μl；
所述洗脱条件包括：按体积比计算，在0～15分钟，水相∶乙腈＝80∶20，在25分钟，水相∶乙腈＝40∶60，在30分钟，水相∶乙腈＝30∶70，在31分钟，水相∶乙腈＝80∶20，在40分钟，水相∶乙腈＝80∶20；
并且，所述杂质至少包括2-苯基- 2-丙醇、苯乙酮、异丙苯及过氧化二异丙苯。
2.一种检测过氧化氢异丙苯及其杂质的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)制备待测样品溶液及对照品溶液：采用溶剂将待测样品、对照品溶解为待测样品溶液及对照品溶液；所述溶剂为甲醇与水体积比为90:10的混合液；
(2)检测分析：采用高效液相色谱法对待测样品进行检测；所述液相色谱检测条件如下：以五氟苯基硅烷键合相为固定相；以乙腈与水相混合作为流动相进行梯度洗脱；检测波长为190nm～230nm；进样体积为0～100μl；
所述洗脱条件包括：按体积比计算，在0～15分钟，水相∶乙腈＝80∶20，在25分钟，水相∶乙腈＝40∶60，在30分钟，水相∶乙腈＝40∶60，在35分钟，水相∶乙腈＝30∶70，在40分钟，水相∶乙腈＝30∶70，在41分钟，水相∶乙腈＝80∶20，在50分钟，水相∶乙腈＝80∶20；
并且，所述杂质至少包括2-苯基- 2-丙醇、苯乙酮、异丙苯及过氧化二异丙苯。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，固定相的长度为50mm～250mm，内径为2 .1～4 .6mm，填料的粒径为1 .7～5μm。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，固定相的长度为150mm，内径为4.6mm，粒径为5μm。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，流动相的流速为0 .8～1 .2ml/min。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，流动相的流速为0 .9～1 .1ml/min。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，流动相的流速为1.0ml/min。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，固定相的温度为20℃～40℃。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，固定相的温度为25℃～35℃。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，固定相的温度为35℃。
11.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤 (2)中固定相为AgilentPursuit 5PFP，进样体积为20μl。
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Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007129418A1 (en) * 2006-05-05 2007-11-15 Japan Science And Technology Agency Novel copolymer of methacrylic ester, composition, optical element and electric member
CN103224489A (zh) * 2013-05-20 2013-07-31 青岛正大海尔制药有限公司 一种提高埃索美拉唑生产收率和速率的方法
CN103837617A (zh) * 2014-03-16 2014-06-04 国家烟草质量监督检验中心 基于lc-ms/ms技术分析印刷包装纸中光引发剂向mppo迁移量的方法
CN104535675A (zh) * 2014-12-17 2015-04-22 中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司 测定过氧化氢异丙苯杂质的方法
CN104592276A (zh) * 2014-12-31 2015-05-06 中国科学院化学研究所 三芳基硼类荧光化合物及其制备方法和用途
CN104744188A (zh) * 2015-01-29 2015-07-01 北京大学 一种多氟芳烃烷基化方法
CN105181853A (zh) * 2015-10-13 2015-12-23 中国石油化工股份有限公司 空气和废气中乙醇和异丙苯含量的测定方法
CN108088930A (zh) * 2017-12-29 2018-05-29 成都百裕制药股份有限公司 一种喹啉羧酸乙酯或/和其有关物质的检测方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060121622A1 (en) * 2004-12-02 2006-06-08 Crippen Robert B Method for determination of organic hydroperoxides
US7566392B2 (en) * 2006-04-12 2009-07-28 Dionex Corporation Pulsed electrochemical detection method
CN107271600B (zh) * 2017-07-28 2019-01-25 成都百裕制药股份有限公司 一种4-(3-氟苄氧基)苯甲醛中异构体杂质含量的检测方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007129418A1 (en) * 2006-05-05 2007-11-15 Japan Science And Technology Agency Novel copolymer of methacrylic ester, composition, optical element and electric member
CN103224489A (zh) * 2013-05-20 2013-07-31 青岛正大海尔制药有限公司 一种提高埃索美拉唑生产收率和速率的方法
CN103837617A (zh) * 2014-03-16 2014-06-04 国家烟草质量监督检验中心 基于lc-ms/ms技术分析印刷包装纸中光引发剂向mppo迁移量的方法
CN104535675A (zh) * 2014-12-17 2015-04-22 中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司 测定过氧化氢异丙苯杂质的方法
CN104592276A (zh) * 2014-12-31 2015-05-06 中国科学院化学研究所 三芳基硼类荧光化合物及其制备方法和用途
CN104744188A (zh) * 2015-01-29 2015-07-01 北京大学 一种多氟芳烃烷基化方法
CN105181853A (zh) * 2015-10-13 2015-12-23 中国石油化工股份有限公司 空气和废气中乙醇和异丙苯含量的测定方法
CN108088930A (zh) * 2017-12-29 2018-05-29 成都百裕制药股份有限公司 一种喹啉羧酸乙酯或/和其有关物质的检测方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Evaluation of the Triphenylphosphine Assay for Quantitating Hydroperoxides in Oxidized Lipids;ZACKARY SAUL YEAGER;《The State University of New Jersey - degree of Master of Science》;20190531;第1-89页 *
Kinetic and chemical characterization of thermal decomposition of dicumylperoxide in cumene;Ilaria Di Somma 等;《Journal of Hazardous Materials》;20110113;第187卷;第157-163页 *
Mechanism of Acid-Catalyzed Decomposition of Dicumyl Peroxide in Dodecane: Intermediacy of Cumene Hydroperoxide;Mark L. Conley 等;《Industrial & Engineering Chemistry Research》;20160502;第55卷;第5865-5873页 *
Thermal decomposition of cumene hydroperoxide with three incompatible substances by isothermal microcalorimetry and high performance liquid chromatography;Y.-P. Chou 等;《J Therm Anal Calorim》;20090609;第96卷;第771-775页 *
基于HPLC的异丙基苯中的杂质检测研究;贾江飞 等;《广州化工》;20190331;第47卷(第5期);第99-103页 *

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