CN107543865A

CN107543865A - 分离并检测米诺膦酸的方法

Info

Publication number: CN107543865A
Application number: CN201610460467.3A
Authority: CN
Inventors: 严洁; 王志凤
Original assignee: Tianjin Hankang Pharmaceutical Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Tianjin Hankang Pharmaceutical Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2016-06-23
Filing date: 2016-06-23
Publication date: 2018-01-05

Abstract

本申请涉及分离并检测米诺膦酸的方法，该方法通过高效液相色谱法，采用反相色谱柱，以含有烷基磺酸钠的pH=2‑7.5的缓冲液为流动相A，以甲醇或乙腈为流动相B，检测波长为215nm，采用线性梯度洗脱方式进行分离及检测。

Description

分离并检测米诺膦酸的方法

技术领域

本申请涉及药物的分离及检测方法，特别是涉及分离并检测米诺膦酸方法。

背景技术

米诺膦酸片由日本小野药品工业株式会社和日本Astellas制药株式会社共同研发，2009年1月在日本厚生省上市，可作为治疗骨质疏松症的一线用药，相比第三代二磷酸盐阿仑膦酸，米诺膦酸具有相似的疗效，但是使用剂量则明显下降(阿仑膦酸为10mg/day，米诺膦酸为1mg/day)，提高了患者的顺从性和减少了二磷酸盐常见胃肠不良反应。

现有技术中针对米诺膦酸的检测条件存在杂质分离度不好，杂质峰数量检测出较少，理论板数低，不能准确评估米诺膦酸的质量，数据缺乏真实性、准确性。

发明内容

本申请的一方面涉及分离并检测米诺膦酸的方法，所述方法通过高效液相色谱法采用线性梯度洗脱方式对米诺膦酸进行分离并检测，其中实施高效液相色谱法的条件为：高效液相色谱仪所用的色谱柱为反相色谱柱，流动相A为含有烷基磺酸钠的pH=2~7.5 的缓冲液，流动相B为甲醇或乙腈，检测波长为215nm。

在本申请的分离并检测米诺膦酸的方法中，可以通过下列步骤制备待测样品：将米诺膦酸溶于甲醇或乙腈中以制成待测样品的混合溶液，在实施分离与检测时，可以将2~50μl的待测样品的混合溶液注入高效液相色谱仪中，以实施对米诺膦酸分离与检测。

在本申请中所述反相色谱柱中使用的填充剂为烷基硅烷的化学键合硅胶，其中烷基的链长可以是C2、C4、C6、C8、C16、 C18和C22等。所述烷基硅烷的化学键合硅胶优选为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶，更优选为十八烷基硅烷键合硅胶。

本申请中所述的烷基磺酸盐，例如，甲烷磺酸盐、戊烷磺酸盐、己烷磺酸盐、庚烷磺酸盐、辛烷磺酸盐、癸烷磺酸盐、十二烷基磺酸盐和樟脑磺酸盐等，优选烷基磺酸的钠盐（R-SO₃Na），更优选C5-C10烷基磺酸的钠盐，甚至更优选庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠和癸烷磺酸钠，最优选癸烷磺酸钠。

在本申请的分离并检测米诺膦酸的方法中使用的流动相A的pH值在2.0-7.5之间，优选为2.0-6.0，更优选为2.0-3.0，最优选为2.5。

在本申请中所述流动相A中所述烷基磺酸盐的浓度为1000ml水含0.2g-4.0g烷基磺酸盐。

在本申请中所述流动相A中，所用的缓冲液为磷酸盐缓冲液优选磷酸二氢钠。

在本申请的某些实施方案中，通过如下方法配制所述烷基磺酸钠的缓冲液：将0.8g～8.0g缓冲盐与0.2g～4.0g烷基磺酸钠混合，加水 1000ml溶解，并调节pH值为2.0-7.5。优选地，将0.8g～4.0g缓冲盐与0.6g～ 2.0g烷基磺酸钠混合，加水1000ml溶解，并调节pH值为2.0-6.0来配制本文所述方法中使用的缓冲液。更优选地，将1.6g缓冲盐与烷基磺酸钠1.2g混合，加水1000ml溶解，并调节pH值为2.5来配制本文所述方法中使用的缓冲液。

在本申请中，采用A、B两相进行所述线性梯度洗脱，按体积百分比计算，A%+B%=100%，所述线性梯度洗脱方式为0~8min， A%由60~80%变为35~40%，8~25min，A%保持35~40%，25.01min，A% 由35~40%变为60~80%，25.01~40min，A%保持60~80%。

优选地，采用A、B两相进行所述线性梯度洗脱，按体积百分比计算，A%+B%=100%，所述线性梯度洗脱方式优选为 0~8min，A%由80%变为40%，8~25min，A%保持40%，25.01min，A%由 40%变为80%，25.01~40min，A%保持80%。

在本申请的某些实施方案中，所述流动相B为甲醇和乙腈，优选甲醇。

在本申请的某些实施方案中，所述方法中使用的高效液相色谱柱的柱温为20℃-35℃，优选为25℃-35℃，更优选为30℃。

在本申请的某些实施方案中，所述方法中使用的高效液相色谱柱的流速为0.6~1.2ml/min，优选为0.8~1.2ml/min，更优选为1.0ml/min。

此外，本领域所属技术人员能够理解，所述柱温和流速不必局限于上述温度和流速，可以根据实践的需要选择合适的柱温和流速，只要其能够有效地分离并检测出米诺膦酸。

本申请的另一方面涉及本申请的分离并检测米诺膦酸的方法在含有米诺膦酸的药品的质量控制和质量检测中的用途。

在本文所述的分离并检测米诺膦酸的方法中，通过在缓冲液中加入烷基磺酸钠，使极性高的物质极性降低，从而增加了其在色谱柱上的保留时间，避免其出峰过快而无法定量分析。同时，通过采用线性梯度洗脱方式使得能够同时分离并检测出米诺膦酸，而且各成分峰与相邻峰之间的分离度高，符合液相色谱的分离度要求。

附图说明

图1米诺膦酸的分离度考察的HPLC图。

具体实施方式

在某些实施方案中，本申请的采用高效液相色谱法分离并检测米诺膦酸的更具体的测定方法如下：

1）样品制备

取米诺膦酸片剂，研磨成细粉，加甲醇或乙腈溶解并稀释以制成待测样品的混合溶液，所述待测样品的混合溶液中每1ml混合溶液含有上述米诺膦酸0.1~1.0mg；

2）色谱条件

高效液相色谱仪所用的色谱柱为反相色谱柱；填充剂为烷基硅烷的化学键合硅胶；以含有离子对试剂的pH值为2.0~6.0的缓冲液为流动相A、甲醇为流动相B，采用线性梯度洗脱方式；柱温为20℃～35℃；流速为 0.6~1.2ml/min；检测波长为215nm；

3）测定

取2~50μl待测样品的混合溶液注入高效液相色谱仪中，以完成对米诺膦酸的分离与检测。

实施例1

1）仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津LC-2010AHT；填充剂：C18（150mm×4.6mm， 5μm）；流动相A：取磷酸二氢钠1.6g、癸烷磺酸钠1.2g，加水1000ml溶解，并用磷酸调节pH值至2.5，流动相B：甲醇；采用线性梯度洗脱方式；梯度洗脱方式如下：

柱温为30℃；流速为1.0ml/min；检测波长为215nm；进样量为10μl。

2）实验步骤

取米诺膦酸细粉25mg，精密称定，置同一50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合溶液。按照上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1。在图1中，溶剂峰及片剂中各辅料峰均不干扰本品有关物质的测定，供试品及原料中主峰与相邻杂质峰的分离度良好。

Claims

1.分离并检测米诺膦酸的方法，所述方法通过高效液相色谱法采用线性梯度洗脱方式对米诺膦酸进行分离并检测，其中实施高效液相色谱法的条件为：色谱柱为反相色谱柱，流动相A为含有烷基硫酸钠的pH=2.0-7.5的缓冲液，流动相B为甲醇或乙腈，检测波长为215nm。

2.如权利要求1中所述的方法，其中所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述反相色谱柱中使用的填充剂为烷基硅烷的化学键合硅胶，所述烷基硅烷的化学键合硅胶优选为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶，更优选为十八烷基硅烷键合硅胶。

4.如权利要求1-3任一项权利要求所述的方法，其中采用A、B两相进行所述线性梯度洗脱，按体积百分比计算，A%+B%=100%，所述线性梯度洗脱方式为0~8min，A%由60~80%变为35~40%，8~25min，A%保持 35~40%，25.01min，A%由35~40%变为60~80%，25.01~40min，A%保持60~80%；所述线性梯度洗脱方式优选为0~8min，A%由80%变为40%， 8~25min，A%保持40%，25.01min，A%由40%变为80%，25.01~40min， A%保持80%。

5.如权利要求1-4中任一权利要求所述的方法，其中所述色谱柱的柱温为20℃-35℃，优选为25℃-35℃，更优选为30℃。

6.如权利要求1-5中任一权利要求所述的方法，其中所述色谱柱的流速为0.6-1.2ml/min，优选为0.8-1.2ml/min，更优选为1.0ml/min。

7.如权利要求1-6中任一权利要求所述的方法，其中通过如下方法配制所述含烷基磺酸钠的缓冲液：将0.8g～8.0g缓冲盐与0.2g～4.0g烷基磺酸钠混合，加水1000ml溶解，并调节pH值为2.0-7.5。