CN106153795A - 测定鹅去氧胆酸原料药含量及其有关物质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定鹅去氧胆酸原料药含量及其有关物质的方法,所述方法的分析条件为:色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱;以第一有机溶剂与缓冲液的混合溶剂作为流动相等度洗脱;样品采用蒸发光散射检测器进行检测;其中,所述第一有机溶剂为甲醇和/或乙腈。该检测方法克服了鹅去氧胆酸结构比较稳定,在紫外区没有吸收难以进行有效检测的缺点,并且采用该方法可以快速准确的将鹅去氧胆酸与其杂质熊去氧胆酸进行分离测定,从而准确测定出鹅去氧胆酸原料药的含量及其有关物质。本发明的检测方法灵敏度高、专属性强、精密度高、准确性强、操作方便,可有效控制原料药的质量。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域,具体而言,本发明涉及测定鹅去氧胆酸原料药含量及其有关物质的方法。
背景技术
鹅去氧胆酸(CDCA,式1所示化合物)主要作用是降低胆汁内胆固醇的饱和度,绝大多数患者服用CDCA后(当CDCA占胆汁中胆盐的70%时),脂类恢复微胶粒状态,胆固醇就处于不饱和状态,从而使结石中的胆固醇溶解、脱落。大剂量的CDCA(每日10~15mg/kg)可以抑制胆固醇的合成,并增加胆石症患者胆汁的分泌,但其中的胆盐和磷脂分泌量维持不变。
鹅去氧胆酸是天然提取产物,主要杂质为熊去氧胆酸(式2所示化合物),熊去氧胆酸的结构与鹅去氧胆酸类似,均含有一个羧基,药典BP、EP及JP中测定鹅去氧胆酸的含量均是采用氢氧化钠滴定液滴定羧基的方法,而滴定过程中是无法排除熊去氧胆酸这个杂质的干扰的,即,酸碱滴定计算过程中会将把杂质熊去氧胆酸当做鹅去氧胆酸一并计算成鹅去氧胆酸的含量,从而造成较大误差。另一方面,鹅去氧胆酸本身没有紫外吸收,通用的高效液相色谱法中的紫外检测器无法测得鹅去氧胆酸的色谱峰。而BP、EP及JP中测定鹅去氧胆酸有关物质采用的方法是薄层色谱法,也仅能限度分析测定鹅去氧胆酸中熊去氧胆酸杂质,无法确定杂质熊去氧胆酸的具体含量。由此也不具备杂质监控的实际意义。
因此,目前测定鹅去氧胆酸原料药含量及其有关物质的方法仍有待改进。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此,本发明的一个目的在于提出一种测定鹅去氧胆酸原料药含量及其有关物质的方法,采用该方法可同时实现鹅去氧胆酸与其杂质熊去氧胆酸的有效分离,并且能够进行定量分析,从而为有效控制杂质熊去氧胆酸在原料药中残留量提供有效的检测和监控方法。
本发明提供了一种测定鹅去氧胆酸原料药含量及其有关物质的方法。根据本发明的实施例,该方法的分析条件为:
色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱;
以第一有机溶剂与缓冲液的混合溶剂作为流动相等度洗脱;
样品采用蒸发光散射检测器进行检测;
其中,所述第一有机溶剂为甲醇和/或乙腈。
采用该方法可以将鹅去氧胆酸中的熊去氧胆酸杂质进行快速高效的分离和含量测定,有效控制原料药及制剂的质量。该检测方法灵敏度高、专属性强、精密度高、准确性强、操作方便,可有效控制原料药的质量。
根据本发明实施例的测定鹅去氧胆酸含量及其有关物质的方法,还可以具有以下附加技术特征:
根据本发明的实施例,所述缓冲液为选自三氟乙酸溶液和甲酸溶液中的至少一种,优选为三氟乙酸溶液。由此可以改善峰形,避免拖尾,且可增加分离度。准确性强、操作方便,可有效控制产品质量。
根据本发明的实施例,所述缓冲液浓度为0.01质量%~0.10质量%,优选为0.05质量%。由此,可以进一步改善峰形。
根据本发明的实施例,所述缓冲液与有机相的体积比为(50%~70%):(30%~50%)。,优选为60%:40%。由此得到的分离效果最佳。
根据本发明的实施例,所述蒸发光散射检测器蒸发管温度范围为30℃~50℃,优选为35℃;雾化管温度为30℃~50℃,优选为40℃;载气流速为1.0SLM~3.0SLM,优选为2.0SLM,进一步的,所述载气优选为氮气。由此,可以显著提高检测灵敏度。
根据本发明的实施例,所述色谱柱柱温为25℃~35℃,优选为30℃。由此,可以进一步提高熊去氧胆酸杂质的分离度。
根据本发明的实施例,所述流动相的流速为0.8~1.2ml/min,优选为1.0ml/min。由此得到的分离效果最佳,峰形最好。
根据本发明的实施例,所述样品采用第二有机溶剂和水的混合液进行配制,任选的,所述第二有机溶剂为乙腈和/或甲醇,优选为乙腈,任选的,所述混合液的比例为70:30(v/v)。
根据本发明的具体实施例,本发明所述的测定方法,可以依照以下方法实现:
(1)取待检测样品适量,用乙腈:水(体积比70:30)的混合液溶解,配制成每1ml含10mg及0.5mg的样品溶液,作为有关物质供试品溶液及含量供试品溶液。
(2)设置流动相流速为0.8~1.2ml/min,流动相的流速优选为1.0ml/min;蒸发管温度为30℃~50℃,优选为35℃;雾化管温度为30℃~50℃,优选为40℃;载气流速为1.0SLM~3.0SLM,优选为2.0SLM;色谱柱温度为25℃~35℃,优选为30℃。
(3)取(1)的样品溶液2~20μl,优选10μl,注入高效液相色谱仪,完成鹅去氧胆酸的含量及其杂质的测定。
本发明鹅去氧胆酸有关物质检测方法中,有关物质供试品溶液的制备:为满足供试品溶液检测浓度的需要,取鹅去氧胆酸适量,用稀释液配制成浓度为每1ml含10mg的溶液,作为供试品溶液。再分别用稀释液稀释成一系列不同浓度的溶液,分别进样10ul,使之产生主峰为基线噪音3倍的信号。经试验,最小检测量为1μg(S/N≥3),若以有关物质检查时的浓度10mg/ml计算,其检出限度为0.1%。
本发明与现有技术相比的积极效果在于:
1、使用蒸发光散射检测器对鹅去氧胆酸进行含量检测,克服了鹅去氧胆酸原料药结构稳定,没有发色基团,用紫外检测器难以检测的缺点。传统方法常用酸碱滴定,但却无法排除杂质熊去氧胆酸的干扰,本发明采用蒸发光散射检测器,将鹅去氧胆酸与熊去氧胆酸进行分离分析,通过鹅去氧胆酸对照品峰面积与浓度的比值,计算出供试品中鹅去氧胆酸的含量。
2、使用蒸发光散射检测器对本品进行有关物质检测。传统方法采用薄层色谱法,只能有关物质进行限度分析,而该方法却可对熊去氧胆酸进行定量分析,而且还可将其他胆酸类杂质(如胆酸或去氧胆酸等)进行有效分离及测定。
3、本发明检测方法准确,操作简单,重现性好,灵敏度高(熊去氧胆酸的最低检测限度可达到1μg/mL),可以充分满足有关物质检查的要求,较好的控制样品中的杂质,保证产品质量,实用性强。
4、本发明方法的洗脱分离效果较好,能使原料药样品中鹅去氧胆酸与熊去氧胆酸有效分离。检测时间仅需20min。可以快速、准确、可靠的分离鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出,部分将从下面的描述中变得明显,或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1显示了根据本发明的实施例1,所得原料药鹅去氧胆酸有关物质测定的高效液相色谱图;
图2显示了根据本发明的实施例1,所得鹅去氧胆酸对照品与熊去氧胆酸对照品的分离度高效液相色谱图;
图3显示了根据本发明的实施例2,所得原料药鹅去氧胆酸有关物质测定的高效液相色谱图;
图4显示了根据本发明的实施例2,所得鹅去氧胆酸对照品与熊去氧胆酸对照品的分离度高效液相色谱图;
图5显示了根据本发明的实施例3,所得原料药鹅去氧胆酸含量测定的高效液相色谱图;
图6显示了根据本发明的实施例3,所得鹅去氧胆酸对照品含量测定的高效液相色谱图;
图7显示了根据本发明的实施例4,所得鹅去氧胆酸对照品与熊去氧胆酸对照品的分离度高效液相色谱图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的,仅用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
1、样品:
鹅去氧胆酸原料药:生产厂家为成都元成生物科技有限公司,批号为CDCA-141201,其杂质主要为熊去氧胆酸;
鹅去氧胆酸对照品:来源于中国食品药品检定研究院,批号为110806-201406;
熊去氧胆酸对照品:来源于中国食品药品检定研究院,批号为110755-9003。
供试品溶液配制:精密称取鹅去氧胆酸原料药100mg,置于10ml容量瓶中,加稀释液溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为10mg/ml的供试品溶液;
对照品溶液配制:精密称取熊去氧胆酸对照品25mg,置于25ml容量瓶中,加稀释液溶解并稀释至刻度,摇匀;精密量取1ml置100ml容量瓶中,加稀释液稀释至刻度,摇匀;再精密量取1ml置10ml容量瓶中,同时精密称取鹅去氧胆酸对照品10mg置于该10ml容量瓶中,加稀释液稀释至刻度,摇匀,得到熊去氧胆酸浓度为1μg/mL、鹅去氧胆酸浓度为1mg/mL的对照品溶液。
2、测定条件:
仪器:Agilent1260高效液相色谱仪,380-ELSD检测器
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250×4.6mm,5μm);
流动相A:0.10体积%三氟乙酸
流动相B:乙腈
A:B=50:50(体积比%),等度洗脱
流速:1.0ml/min
雾化管温度:30℃
蒸发管温度:35℃
柱温:30℃
进样体积:10μl
稀释剂:乙腈:水=70:30(v/v)
运行时间:20分钟
载气:氮气,流速为2.0SLM
3、样品检测:
采用上述测定条件,分别对配制的供试品溶液和对照品溶液进行测定,分别记录色谱图记作图1、图2。
结论:首先,通过图2可以清楚地看到,通过采用上述测定分析条件可以有效地将熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸进行分离,且熊去氧胆酸的检测限度可以达到1μg/mL。
其次,通过将图1与图2进行比较,可以将图1中保留时间6.790min和12.660min的色谱峰分别定性为熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸。由此,通过采用上述测定分析条件可以有效地对鹅去氧胆酸原料药中的杂质熊去氧胆酸进行分离测定。同时还可以对其含量进行检测分析。
实施例2
1、样品:供试品溶液和对照品溶液分别同实施例1。
2、测定条件:
仪器:Agilent1260高效液相色谱仪,ELSD检测器
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250×4.6mm,5μm);
流动相A:0.01体积%三氟乙酸
流动相B:甲醇
A:B=70:30(体积比%),等度洗脱
流速:0.8ml/min
雾化管温度:40℃
蒸发管温度:50℃
柱温:25℃
进样体积:5μl
稀释剂:甲醇:水=40:60(v/v)
运行时间:20分钟
载气:氮气,流速为2.0SLM
3、样品检测:
采用上述测定条件,分别对配制的供试品溶液和对照品溶液进行测定,分别记录色谱图记作图3、图4。
结论:首先,通过图4可以清楚地看到,通过采用上述测定分析条件可以有效地将熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸进行分离,且熊去氧胆酸的检测限度可以达到1μg/mL。
其次,通过将图3与图4进行比较,可以将图3中保留时间9.009min和12.720min的色谱峰分别定性为熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸。由此,通过采用上述测定分析条件可以有效地对鹅去氧胆酸原料药中的杂质熊去氧胆酸进行分离测定。同时还可以对其含量进行检测分析。结果也表明该方法可用于鹅去氧胆酸原料药的质量检测。
实施例3
1、样品:精密称取鹅去氧胆酸原料药25mg,置于50ml容量瓶中,加稀释液溶解并稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液。另取鹅去氧胆酸对照品同法配制得对照品溶液。
2、测定条件:
仪器:Agilent1260高效液相色谱仪,380-ELSD检测器
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250×4.6mm,5μm);
流动相A:0.05体积%甲酸
流动相B:乙腈
A:B=60:40(体积比%),等度洗脱
流速:0.9ml/min
雾化管温度:40℃
蒸发管温度:45℃
柱温:30℃
进样体积:10μl
稀释剂:乙腈:水=40:60(v/v)
运行时间:20分钟
载气:氮气,流速为2.0SLM
3、样品检测:
采用上述测定条件,分别对配制的供试品溶液和对照品溶液进行测定,分别记录色谱图记作图5、图6。
结论:由于含量测定的样品浓度低于有关物质测定的样品浓度,故供试品色谱图中看不到熊去氧胆酸的峰。由图6可知保留时间14.594min的色谱峰可定性为鹅去氧胆酸。由此,通过采用已知含量的对照品峰面积可计算得到供试品的含量,从而有效地对鹅去氧胆酸原料药进行含量测定。结果也表明该方法可用于鹅去氧胆酸原料药的质量检测。
对比例
1、样品:供试品溶液和对照品溶液分别同实施例1。
2、测定条件:
仪器:Agilent1260高效液相色谱仪,380-ELSD检测器
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250×4.6mm,5μm);
流动相A:0.15体积%甲酸
流动相B:乙腈
A:B=50:50(体积比%),等度洗脱
流速:1.0ml/min
雾化管温度:30℃
蒸发管温度:35℃
柱温:30℃
进样体积:10μl
稀释剂:乙腈:水=70:30(v/v)
运行时间:20分钟
载气:氮气,流速为2.0SLM
3、样品检测:
采用上述测定条件,对配制对照品溶液进行测定,分别记录色谱图记作图7。
结论:首先,通过图7可以清楚地看到,通过采用上述测定分析条件鹅去氧胆酸与熊去氧胆酸的分离效果不好,熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸分不开。由此可知,采用0.15体积%甲酸作为流动相A,并不能达到良好的分离效果。
在本发明的描述中,需要理解的是,术语“第一”、“第二”仅用于描述目的,而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此,限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中,“多个”的含义是两个或两个以上,除非另有明确具体的限定。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外,在不相互矛盾的情况下,本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例,可以理解的是,上述实施例是示例性的,不能理解为对本发明的限制,本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (10)
1.一种测定鹅去氧胆酸原料药含量及其有关物质的方法,其特征在于,所述方法的分析条件为:
色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱;
以第一有机溶剂与缓冲液的混合溶剂作为流动相等度洗脱;
样品采用蒸发光散射检测器进行检测;
其中,所述第一有机溶剂为甲醇和/或乙腈。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述缓冲液为选自三氟乙酸溶液和甲酸溶液中的至少一种,优选为三氟乙酸溶液。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述缓冲液浓度为0.01体积%~0.10体积%,优选为0.05体积%。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述缓冲液与有机相的体积比为(50%~70%):(30%~50%),优选为60%:40%。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述蒸发光散射检测器蒸发管温度范围为30℃~50℃,优选为35℃;雾化管温度为30℃~50℃,优选为40℃;载气流速为1.0SLM~3.0SLM,优选为2.0SLM,进一步的,载气优选为氮气。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述色谱柱柱温为25℃~35℃,优选为30℃。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流动相的流速为0.8~1.2ml/min,优选为1.0ml/min。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述样品采用第二有机溶剂和水的混合液进行配制,
任选的,所述第二有机溶剂为乙腈和/或甲醇,优选为乙腈。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述混合液的比例为70:30(v/v)。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述样品的进样体积为2~20μl,优选为10μl。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108254461A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-07-06 | 中山百灵生物技术有限公司 | 一种新的牛磺胆酸含量以及有关物质的检测方法 |
CN108614038A (zh) * | 2016-12-13 | 2018-10-02 | 亚宝药业集团股份有限公司 | 一种测定奥贝胆酸原料药有关物质的方法 |
CN108717084A (zh) * | 2018-03-12 | 2018-10-30 | 天津量信检验认证技术有限公司 | 熊胆粉中熊去氧胆酸含量的液相色谱-质谱检测方法 |
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2015
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Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
张玲 等: "HPLC法鸡胆汁分散片质量标准的研究", 《中国社区医师》 * |
李丽敏 等: "熊胆粉提取物中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸的HPLC-ELSD测定", 《中国医药工业杂志》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108614038A (zh) * | 2016-12-13 | 2018-10-02 | 亚宝药业集团股份有限公司 | 一种测定奥贝胆酸原料药有关物质的方法 |
CN108614038B (zh) * | 2016-12-13 | 2022-05-17 | 亚宝药业集团股份有限公司 | 一种测定奥贝胆酸原料药有关物质的方法 |
CN108254461A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-07-06 | 中山百灵生物技术有限公司 | 一种新的牛磺胆酸含量以及有关物质的检测方法 |
CN108254461B (zh) * | 2017-12-29 | 2020-12-22 | 中山百灵生物技术有限公司 | 一种新的牛磺胆酸含量以及有关物质的检测方法 |
CN108717084A (zh) * | 2018-03-12 | 2018-10-30 | 天津量信检验认证技术有限公司 | 熊胆粉中熊去氧胆酸含量的液相色谱-质谱检测方法 |
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