CN107064329A - 一种血栓心脉宁片中五种人参皂苷类成分的含量测定方法 - Google Patents
一种血栓心脉宁片中五种人参皂苷类成分的含量测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107064329A CN107064329A CN201611215163.7A CN201611215163A CN107064329A CN 107064329 A CN107064329 A CN 107064329A CN 201611215163 A CN201611215163 A CN 201611215163A CN 107064329 A CN107064329 A CN 107064329A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ginsenoside
- solution
- settled
- weighed
- mobile phase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 45
- 229930182494 ginsenoside Natural products 0.000 title claims abstract description 29
- PWAOOJDMFUQOKB-WCZZMFLVSA-N ginsenoside Re Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2[C@H]3C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]3(C)[C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@H]([C@H]4[C@H](O)C3)[C@](C)(CCC=C(C)C)O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C)(C)C2)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O PWAOOJDMFUQOKB-WCZZMFLVSA-N 0.000 claims abstract description 23
- AOGZLQUEBLOQCI-UHFFFAOYSA-N ginsenoside-Re Natural products CC1OC(OCC2OC(OC3CC4(C)C(CC(O)C5C(CCC45C)C(C)(CCC=C(C)C)OC6OC(CO)C(O)C(O)C6O)C7(C)CCC(O)C(C)(C)C37)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O AOGZLQUEBLOQCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- FBFMBWCLBGQEBU-RXMALORBSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[[(3s,5r,6s,8r,9r,10r,12r,13r,14r,17s)-3,12-dihydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-17-[(2s)-6-methyl-2-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyhept-5-en-2-yl]-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecah Chemical compound O([C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(C[C@@H]([C@H]4C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)C)(C)CC1)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O FBFMBWCLBGQEBU-RXMALORBSA-N 0.000 claims abstract description 22
- FBFMBWCLBGQEBU-GYMUUCMZSA-N 20-gluco-ginsenoside-Rf Natural products O([C@](CC/C=C(\C)/C)(C)[C@@H]1[C@H]2[C@H](O)C[C@H]3[C@](C)([C@]2(C)CC1)C[C@H](O[C@@H]1[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@H]1C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]31C)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 FBFMBWCLBGQEBU-GYMUUCMZSA-N 0.000 claims abstract description 22
- HYPFYJBWSTXDAS-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Rd Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O)C2CCC3(C)C4CCC5C(C)(C)C(CCC5(C)C4CC(O)C23C)OC6OC(CO)C(O)C(O)C6OC7OC(CO)C(O)C(O)C7O)C HYPFYJBWSTXDAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 229940089161 ginsenoside Drugs 0.000 claims abstract description 22
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims abstract description 22
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims abstract description 22
- UOJAEODBOCLNBU-UHFFFAOYSA-N vinaginsenoside R4 Natural products C1CC(C2(CC(O)C3C(C)(C)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O UOJAEODBOCLNBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims abstract description 20
- GZYPWOGIYAIIPV-JBDTYSNRSA-N ginsenoside Rb1 Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GZYPWOGIYAIIPV-JBDTYSNRSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 75
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 69
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 47
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 32
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 30
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 25
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 24
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 22
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 19
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- YURJSTAIMNSZAE-HHNZYBFYSA-N ginsenoside Rg1 Chemical compound O([C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(C[C@@H]([C@H]4C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)C)(C)CC1)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O YURJSTAIMNSZAE-HHNZYBFYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 11
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000004807 desolvation Methods 0.000 claims description 8
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 8
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 claims description 8
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 8
- 238000002552 multiple reaction monitoring Methods 0.000 claims description 8
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 8
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 claims description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 7
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 7
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 7
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 2
- 230000005611 electricity Effects 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 4
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010019468 Hemiplegia Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010033557 Palpitations Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 abstract description 2
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 abstract 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 4
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 3
- UFNDONGOJKNAES-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Rb1 Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(COC2OC(CO)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CC(O)C45C)C UFNDONGOJKNAES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- TXEWRVNOAJOINC-UHFFFAOYSA-N ginsenoside Rb2 Natural products CC(=CCCC(OC1OC(COC2OCC(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CCC45C)C TXEWRVNOAJOINC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N (+)-borneol Chemical compound C1C[C@@]2(C)[C@@H](O)C[C@@H]1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- REPVLJRCJUVQFA-UHFFFAOYSA-N (-)-isopinocampheol Natural products C1C(O)C(C)C2C(C)(C)C1C2 REPVLJRCJUVQFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- REFMTLIXGKZVDF-ZEBDFXRSSA-N (2R)-2-[(1R,2R,6S,7S)-3,5-dioxo-4-azatricyclo[5.2.1.02,6]decan-4-yl]propanoic acid Chemical compound C([C@H]1C2)C[C@H]2[C@@H]2[C@H]1C(=O)N([C@H](C)C(O)=O)C2=O REFMTLIXGKZVDF-ZEBDFXRSSA-N 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 241000269420 Bufonidae Species 0.000 description 1
- 244000153234 Hibiscus abelmoschus Species 0.000 description 1
- 241000545744 Hirudinea Species 0.000 description 1
- 235000003365 Ilex pubescens Nutrition 0.000 description 1
- 241001100932 Ilex pubescens Species 0.000 description 1
- 241000112528 Ligusticum striatum Species 0.000 description 1
- 244000131316 Panax pseudoginseng Species 0.000 description 1
- 235000003181 Panax pseudoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 240000005373 Panax quinquefolius Species 0.000 description 1
- 240000007164 Salvia officinalis Species 0.000 description 1
- 241000219784 Sophora Species 0.000 description 1
- YURJSTAIMNSZAE-UHFFFAOYSA-N UNPD89172 Natural products C1CC(C2(CC(C3C(C)(C)C(O)CCC3(C)C2CC2O)OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O YURJSTAIMNSZAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010811 Ultra-Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry Methods 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 229940116229 borneol Drugs 0.000 description 1
- CKDOCTFBFTVPSN-UHFFFAOYSA-N borneol Natural products C1CC2(C)C(C)CC1C2(C)C CKDOCTFBFTVPSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- DTGKSKDOIYIVQL-UHFFFAOYSA-N dl-isoborneol Natural products C1CC2(C)C(O)CC1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- CBEHEBUBNAGGKC-UHFFFAOYSA-N ginsenoside Rg1 Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O)C2CCC3(C)C2C(O)CC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CC(OC6OC(CO)C(O)C(O)C6O)C34C)C CBEHEBUBNAGGKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000001616 ion spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000005412 red sage Nutrition 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了一种血栓心脉宁片中人参皂苷类成分的含量测定方法。血栓心脉宁片是一种中药制剂，在临床上多用于气虚血瘀所致的中风、胸痹症见头晕目眩，半身不遂，胸闷心痛，心悸气短。血栓心脉宁片中含有人参茎叶皂苷，本发明采用超高效液相色谱‑质谱联用法同时测定血栓心脉宁片中人参茎叶的特征性成分20(S)‑人参皂苷F1及人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd五种皂苷类成分，方法灵敏度高，准确，可用于血栓心脉宁片的质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及到一种血栓心脉宁片中人参皂苷类成分的含量测定方法，属中药技术领域，具体的，涉及一种血栓心脉宁片中人参类皂苷成分为人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、20(S)-人参皂苷F1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd五种成分同时测定的含量测定方法。
背景技术
血栓心脉宁片收载于《中国药典》2015年版一部，由川芎、丹参、水蛭、毛冬青、牛黄、麝香、槐花、人参茎叶皂苷、冰片、蟾酥制成，具有益气活血，开窍止痛的功能，用于用于气虚血瘀所致的中风、胸痹症见头晕目眩，半身不遂，胸闷心痛，心悸气短；缺血性中风恢复期、冠心病心绞痛见上述证候者。《中国药典》2015年版中血栓心脉宁片片的标准中仅对人参皂苷Re和人参皂苷Rg1进行了含量测定，众所周知，人参皂苷Re和人参皂苷Rg1为人参、西洋参、三七等五加科植物的共有成分，专属性差，为提高血栓心脉宁片的质量控制水平，有必要增加血栓心脉宁片中人参茎叶皂苷的特有成分(如20(S)-人参皂苷F1)及其他皂苷类成分的测定，有利于控制产品质量，保障药品的安全有效，质量可控。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种血栓心脉宁片中五种人参皂苷类成分的含量测定方法，五种人参类皂苷成分为20(S)-人参皂苷F1及人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd。
本发明测定方法采用超高效液相色谱法-质谱联用法，其色谱条件及测定法如下：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为水，进行梯度洗脱，洗脱梯度为：0-2分钟，流动相A由20％线性变化到50％，2.01分钟，流动相A变为80％，保持3分钟；流速：0.5ml/min；质谱条件，离子源：电喷雾离子源(ESI源)；监测模式：负离子多反应监测模式；脱溶剂气温度：500℃；毛细管电压：3.00kV；锥孔电压：20V；监测离子对及相关电压参数设定如下表：
标准储备溶液：分别称取人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、20(S)-人参皂苷F1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd标准品各10mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.1g/L的标准储备溶液；
系列标准溶液：按照人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1系列标准溶液浓度为0.01μg/ml-1.00μg/ml，20(S)-人参皂苷F1系列标准溶液浓度为0.05μg/ml-1.00μg/ml，精密吸取标准储备溶液，置10mL量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，得不同浓度的系列标准溶液。
供试品溶液的制备：取血栓心脉宁片，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25mL，密塞，称定重量，置水浴中加热回流60-90分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；再精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，0.2μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测液，备用；
测定法：分别精密吸取对照品系列溶液与供试品溶液各2-5μl，注入液相色谱仪，测定，以标准曲线法计算含量，即得。
本发明含量测定方法中，供试品溶液制备中水浴回流提取时间优选为75分钟；测定法中分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液的量优选为5μl，注入液相色谱仪。
本发明含量测定方法最优的技术方案为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为水，进行梯度洗脱，洗脱梯度为：0-2分钟，流动相A由20％线性变化到50％，2.01分钟，流动相A变为80％，保持3分钟；流速：0.5ml/min；质谱条件，离子源：电喷雾离子源(ESI源)；监测模式：负离子多反应监测模式；脱溶剂气温度：500℃；毛细管电压：3.00kV；锥孔电压：20V；监测离子对及相关电压参数设定如下表：
标准储备溶液：分别称取人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、20(S)-人参皂苷F1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd标准品各10mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.1g/L的标准储备溶液。
系列标准溶液：按照人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1系列标准溶液浓度为0.01μg/ml-1.00μg/ml，20(S)-人参皂苷F1系列标准溶液浓度为0.05μg/ml-1.00μg/ml，精密吸取标准储备溶液，置10mL量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，得不同浓度的系列标准溶液；
供试品溶液的制备：取血栓心脉宁片，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25mL，密塞，称定重量，置水浴中加热回流75分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；再精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，0.2μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测液，备用；
测定法：分别精密吸取对照品系列溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，以标准曲线法计算含量，即得。
为了验证测定含量方法的稳定性、准确性、专属性及系统适应性，对方法进行了以下方法学验证实验，以确保该含量测定方法可以用于血栓心脉宁片的质量控制。
1仪器与试药
1.1仪器：Waters Acquity UPLC/XEVO TQ-S超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪；分析天平：Mettler AE240(感量0.0001g)；精密移液器；超纯水仪：Integral 10(MILLIPORE)；色谱柱：Waters BEHC18(1.7μm，2.1×100mm)。
1.2试药与试剂
对照品：人参皂苷Re(中检院提供，批号：110754-201525，标示量92.3％)
人参皂苷Rg1(中检院提供，批号：110703-201530，标示量91.7％)
人参皂苷Rb1(中检院提供，批号：110704-201424，标示量93.7％)
人参皂苷Rd(中检院提供，批号：111818-201302，标示量94.2％)
20(S)-人参皂苷F1(南通飞宇生物科技有限公司，批号：FY15401226)
试剂：甲醇、乙腈均为为色谱纯，水为超纯水。
2方法确定
2.1色谱条件
色谱柱：Waters BEH C18(1.7μm，2.1×100mm)
色谱条件：流动相A为乙腈，流动相B为水，梯度洗脱程序(见表1)。
柱温：40℃；进样量：5μL。
表1 梯度洗脱程序
2.2质谱参考条件
离子源：电喷雾离子源(ESI源)；
监测模式：负离子多反应监测模式；监测离子对及相关电压参数设定(见表2)；
脱溶剂气温度：500℃；
毛细管电压：3.00kV；
锥孔电压：20V；
表2 5种成分定性和定量离子及质谱条件
2.3流动相的优化
经反复试验，最终选定正文的方法，能够在5分钟内完成测定，建立的方法能够快速、准确、高效的完成目标成分的检测。
2.4对照品溶液的配制：
标准储备溶液：分别称取人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、20(S)-人参皂苷F1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd标准品各10.0mg(精确到0.1mg)置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.1g/L的标准储备溶液。
系列标准溶液：分别精密量取一定体积的标准储备溶液置10mL量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，得不同浓度的系列标准溶液。
2.5供试品的制备
取血栓心脉宁片，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25mL，密塞，称定重量，置水浴中加热回流75分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；再精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，0.2μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测液，备用。
3方法学考察
3.1专属性考察
分别取混合对照品溶液、血栓心脉宁片片样品，按“2.5”方法项下处理，进样分析。五种成分峰形良好，无干扰物质，色谱峰依次为人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、20(S)-人参皂苷F1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd，见图1-2。
3.2标准曲线
将质量浓度约为0.005，0.01，0.05，0.5，1.0μg/ml的标准系列溶液5μl分别注入超高效液相串联质谱仪，进行分析，以各成分进样浓度(μg/ml)为横坐标，各成分峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，其线性相关系数r＞0.999。标准曲线见表3。结果表明，各成分均在0.005～1.0μg/ml内线性关系良好。
表3 各成分线性关系考察结果
3.4重复性
同一批血栓心脉宁片，研细，取样量分别0.2、0.5、0.8g，各3份，按“2.5”方法项下处理，进样分析，计算含量与相对标准偏差。结果9份供试品RSD值均小于7％，表明方法重复性良好。
3.5回收率
取重复性项下样品粉末，取样量为0.25g，共9份，每3份为1组，分别加入用80％甲醇溶液配制的低、中、高3个浓度的混合对照品溶液25ml，按“2.4”方法项下处理，进样分析。结果3个浓度水平的9份溶液平均回收率在90-110％，RSD均小于6％。表明方法回收率良好，结果见表4。
表4 各组分方法学实验结果
3.6稳定性
取同一份供试品溶液，于0小时开始测定，在0、0.5、2、4、6、8、24小时进样测定，记录峰面积。结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷F1峰面积RSD分别为4.6％、5.3％、3.6％、5.8％、4.9％，表明供试品溶液在24小时内稳定。
4样品测定
用超高效液相色谱-串联质谱法对样品进行测定，结果见表5。
表5 样品测定结果(单位：mg·g-1)
附图说明
图1混合对照色谱图；
图2血栓心脉宁片样品色谱图；
具体实施方式
实施例1
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为水，进行梯度洗脱，洗脱梯度为：0-2分钟，流动相A由20％线性变化到50％，2.01分钟，流动相A变为80％，保持3分钟；流速：0.5ml/min；质谱条件，离子源：电喷雾离子源(ESI源)；监测模式：负离子多反应监测模式；脱溶剂气温度：500℃；毛细管电压：3.00kV；锥孔电压：20V；监测离子对及相关电压参数设定如下表：
标准储备溶液：分别称取人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、20(S)-人参皂苷F1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd标准品各10mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.1g/L的标准储备溶液；
系列标准溶液：按照人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1系列标准溶液浓度为0.01μg/ml-1.00μg/ml，20(S)-人参皂苷F1系列标准溶液浓度为0.05μg/ml-1.00μg/ml，精密吸取标准储备溶液，置10mL量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，得不同浓度的系列标准溶液。
供试品溶液的制备：取血栓心脉宁片，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25mL，密塞，称定重量，置水浴中加热回流75分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；再精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，0.2μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测液，备用；
测定法：分别精密吸取对照品系列溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，以标准曲线法计算含量，即得。
实施例2
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为水，进行梯度洗脱，洗脱梯度为：0-2分钟，流动相A由20％线性变化到50％，2.01分钟，流动相A变为80％，保持3分钟；流速：0.5ml/min；质谱条件，离子源：电喷雾离子源(ESI源)；监测模式：负离子多反应监测模式；脱溶剂气温度：500℃；毛细管电压：3.00kV；锥孔电压：20V；监测离子对及相关电压参数设定如下表：
标准储备溶液：分别称取人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、20(S)-人参皂苷F1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd标准品各10mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.1g/L的标准储备溶液；
系列标准溶液：按照人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1系列标准溶液浓度为0.01μg/ml-1.00μg/ml，20(S)-人参皂苷F1系列标准溶液浓度为0.05μg/ml-1.00μg/ml，精密吸取标准储备溶液，置10mL量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，得不同浓度的系列标准溶液。
供试品溶液的制备：取血栓心脉宁片，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25mL，密塞，称定重量，置水浴中加热回流90分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；再精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，0.2μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测液，备用；
测定法：分别精密吸取对照品系列溶液与供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定，以标准曲线法计算含量，即得。
实施例3
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为水，进行梯度洗脱，洗脱梯度为：0-2分钟，流动相A由20％线性变化到50％，2.01分钟，流动相A变为80％，保持3分钟；流速：0.5ml/min；质谱条件，离子源：电喷雾离子源(ESI源)；监测模式：负离子多反应监测模式；脱溶剂气温度：500℃；毛细管电压：3.00kV；锥孔电压：20V；监测离子对及相关电压参数设定如下表：
标准储备溶液：分别称取人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、20(S)-人参皂苷F1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd标准品各10mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.1g/L的标准储备溶液；
系列标准溶液：按照人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1系列标准溶液浓度为0.01μg/ml-1.00μg/ml，20(S)-人参皂苷F1系列标准溶液浓度为0.05μg/ml-1.00μg/ml，精密吸取标准储备溶液，置10mL量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，得不同浓度的系列标准溶液。
供试品溶液的制备：取血栓心脉宁片，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25mL，密塞，称定重量，置水浴中加热回流60分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；再精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，0.2μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测液，备用；
测定法：分别精密吸取对照品系列溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，以标准曲线法计算含量，即得。
上述实施例均按照药典进行方法学验证，结果显示方法准确可靠、灵敏、专属，各项指标均符合质量控制的要求。
Claims (3)
1.一种血栓心脉宁片中五种人参皂苷类成分的含量测定方法，五种人参皂苷类成分为20(S)-人参皂苷F1及人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd；该方法采用超高效液相色谱-质谱联用法，其特征在于该含量测定方法如下：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为水，进行梯度洗脱，洗脱梯度为：0-2分钟，流动相A由20％线性变化到50％，2.01分钟，流动相A变为80％，保持3分钟；流速：0.5ml/min；质谱条件，离子源：电喷雾离子源(ESI源)；监测模式：负离子多反应监测模式；脱溶剂气温度：500℃；毛细管电压：3.00kV；锥孔电压：20V；监测离子对及相关电压参数设定如下表：
标准储备溶液：分别称取人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、20(S)-人参皂苷F1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd标准品各10mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.1g/L的标准储备溶液；
系列标准溶液：按照人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1系列标准溶液浓度为0.01μg/ml-1.00μg/ml，20(S)-人参皂苷F1系列标准溶液浓度为0.05μg/ml-1.00μg/ml，精密吸取标准储备溶液，置10mL量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，得不同浓度的系列标准溶液；
供试品溶液的制备：取血栓心脉宁片，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25mL，密塞，称定重量，置水浴中加热回流60-90分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；再精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，0.2μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测液，备用；
测定法：分别精密吸取对照品系列溶液与供试品溶液各2-5μl，注入液相色谱仪，测定，以标准曲线法计算含量，即得。
2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述供试液制备中加热回流时间为75min。
3.根据权利要求1-2任一项所述的含量测定方法，其特征在于该含量测定方法如下：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为水，进行梯度洗脱，洗脱梯度为：0-2分钟，流动相A由20％线性变化到50％，2.01分钟，流动相A变为80％，保持3分钟；流速：0.5ml/min；质谱条件，离子源：电喷雾离子源(ESI源)；监测模式：负离子多反应监测模式；脱溶剂气温度：500℃；毛细管电压：3.00kV；锥孔电压：20V；监测离子对及相关参数设定如下表：
标准储备溶液：分别称取人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、20(S)-人参皂苷F1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd标准品各10.0mg标准品各10mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.1g/L的标准储备溶液；
系列标准溶液：按照人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1系列标准溶液浓度为0.01μg/ml-1.00μg/ml，20(S)-人参皂苷F1系列标准溶液浓度为0.05μg/ml-1.00μg/ml，精密吸取标准储备溶液，置10mL量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，得不同浓度的系列标准溶液；
供试品溶液的制备：取血栓心脉宁片，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25mL，密塞，称定重量，置水浴中加热回流75分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；再精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，0.2μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测液，备用；
测定法：分别精密吸取对照品系列溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，以标准曲线法计算含量，即得。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201611215163.7A CN107064329B (zh) | 2016-12-26 | 2016-12-26 | 一种血栓心脉宁片中五种人参皂苷类成分的含量测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201611215163.7A CN107064329B (zh) | 2016-12-26 | 2016-12-26 | 一种血栓心脉宁片中五种人参皂苷类成分的含量测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107064329A true CN107064329A (zh) | 2017-08-18 |
| CN107064329B CN107064329B (zh) | 2018-09-25 |
Family
ID=59624250
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201611215163.7A Active CN107064329B (zh) | 2016-12-26 | 2016-12-26 | 一种血栓心脉宁片中五种人参皂苷类成分的含量测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107064329B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114487181A (zh) * | 2022-01-20 | 2022-05-13 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 天王补心制剂中酸枣仁皂苷a和皂苷b含量的测定方法 |
| CN114646691A (zh) * | 2020-12-18 | 2022-06-21 | 中国科学院上海药物研究所 | 一种同时定量大鼠血浆中丹七通脉片15种人参皂苷类成分的分析方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101685089A (zh) * | 2009-06-23 | 2010-03-31 | 天津海世达检测技术有限公司 | 一种快速检测西洋参人参及其制剂质量真伪的方法 |
| CN103235050A (zh) * | 2013-04-12 | 2013-08-07 | 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 | 三七总皂苷注射剂的质量控制方法 |
| CN104914199A (zh) * | 2014-03-10 | 2015-09-16 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种中药组合物制剂中十二种成分的含量测定方法 |
-
2016
- 2016-12-26 CN CN201611215163.7A patent/CN107064329B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101685089A (zh) * | 2009-06-23 | 2010-03-31 | 天津海世达检测技术有限公司 | 一种快速检测西洋参人参及其制剂质量真伪的方法 |
| CN103235050A (zh) * | 2013-04-12 | 2013-08-07 | 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 | 三七总皂苷注射剂的质量控制方法 |
| CN104914199A (zh) * | 2014-03-10 | 2015-09-16 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种中药组合物制剂中十二种成分的含量测定方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 张晓旭 等: "超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法快速鉴别生晒参中的皂苷类成分", 《中国医药导报》 * |
| 钟薇 等: "超高效液相色谱－四极杆－静电场轨道阱质谱法分析不同炮制红参的化学成分差异", 《质谱学报》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114646691A (zh) * | 2020-12-18 | 2022-06-21 | 中国科学院上海药物研究所 | 一种同时定量大鼠血浆中丹七通脉片15种人参皂苷类成分的分析方法 |
| CN114487181A (zh) * | 2022-01-20 | 2022-05-13 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 天王补心制剂中酸枣仁皂苷a和皂苷b含量的测定方法 |
| CN114487181B (zh) * | 2022-01-20 | 2024-03-19 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 天王补心制剂中酸枣仁皂苷a和皂苷b含量的测定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107064329B (zh) | 2018-09-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103235050B (zh) | 一种三七总皂苷注射剂的液相色谱检测方法 | |
| Li et al. | Studies on quantitative determination of total alkaloids and berberine in five origins of crude medicine “Sankezhen” | |
| CN104777249B (zh) | 测定止咳枇杷糖浆中有效成分苦杏仁苷含量的方法 | |
| CN103969346B (zh) | 一种三七皂苷类成分的分析方法 | |
| CN104914199A (zh) | 一种中药组合物制剂中十二种成分的含量测定方法 | |
| CN104062374B (zh) | 益气补肾的中药组合物的检测方法 | |
| CN111879887A (zh) | 黄芪药材及其制剂中成分的检测方法和应用 | |
| CN103808835B (zh) | Hplc-dad法同时测定四物汤煎剂中10种化学成分含量的方法 | |
| CN107998177A (zh) | 儿童开喉剑喷雾剂及其制备和质量标准检验方法 | |
| CN106706786A (zh) | 一种人参叶中六种人参皂苷类成分的含量测定方法 | |
| CN107991399A (zh) | 一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法 | |
| CN104764820A (zh) | 测定半夏糖浆中活性成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法 | |
| Kuang et al. | Systematic study on QAMS method for simultaneous determination of triterpenoid saponins in Ilex pubescens by HPLC and UPLC | |
| CN107064328B (zh) | 一种人参健脾丸中五种人参皂苷类成分的含量测定方法 | |
| CN110231412A (zh) | 绞股蓝中皂苷含量的检测方法 | |
| CN107064329B (zh) | 一种血栓心脉宁片中五种人参皂苷类成分的含量测定方法 | |
| CN112798724B (zh) | 一种适用于人参属中药材及药材提取物的皂苷类成分色谱指纹图谱的建立方法 | |
| CN105699510B (zh) | 一种绵马贯众药材中山柰苷的含量测定方法 | |
| CN107807190A (zh) | 一种测定雪胆中3种活性成分的hplc方法 | |
| CN107167535A (zh) | 一种反相液相色谱法检测雷替曲塞对映异构体的方法 | |
| CN104849381B (zh) | 基于高效液相色谱-电雾式检测器法同时测定7种黄芪皂苷类成分的方法 | |
| CN105823830B (zh) | 一测多评法测定益心复脉颗粒中丹酚酸b和五味子醇甲含量的方法 | |
| CN107247106A (zh) | 一种同时测定止咳宁嗽胶囊中三种活性成分的方法 | |
| CN109425671A (zh) | 一种人参皂苷Rg1，Re，Rb1的双内标高效液相色谱检测方法 | |
| CN104807914B (zh) | 同时测定固体保健食品中非法添加的多种化学药物的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200628 Address after: No.219 Yuquan Road, Luquan District, Shijiazhuang City, Hebei Province Patentee after: Hebei Institute of drug and medical device inspection Address before: 050011, 16 prosperous prosperous street, Yuhua District, Hebei, Shijiazhuang Patentee before: HEBEI DRUG INSPECTION Research Institute |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 050200 219 Yuquan Road, Luquan District, Shijiazhuang City, Hebei Province Patentee after: Hebei Institute for drug and medical device inspection (Hebei cosmetic inspection and Research Center) Address before: 050200 219 Yuquan Road, Luquan District, Shijiazhuang City, Hebei Province Patentee before: Hebei Institute of drug and medical device inspection |
|
| OL01 | Intention to license declared | ||
| OL01 | Intention to license declared |