CN104330488B - 测定右旋兰索拉唑中疑似基因毒性杂质的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种测定右旋兰索拉唑原料药中疑似基因毒性杂质的方法，选择十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以有机相与缓冲液的混合溶剂作为流动相等度洗脱。采用该方法可以将右旋兰索拉唑原料药中存在的疑似基因毒性杂质在同一色谱条件下进行快速高效的分离，有效控制原料药及制剂的质量。该检测方法灵敏度高、专属性强、精密度高、准确性强、操作方便，可有效控制原料药质量。

Description

测定右旋兰索拉唑中疑似基因毒性杂质的方法

技术领域

本发明涉及化学分析领域，具体而言，本发明涉及一种测定右旋兰索拉唑中疑似基因毒性杂质的方法。

背景技术

右旋兰索拉唑(式1所示化合物)是质子泵抑制剂兰索拉唑的(R)-手性对映体，用于治疗与非糜烂性胃食管反流病相关的胃灼热及不同程度的糜烂性食道炎。上市剂型是缓释胶囊，内置两层肠溶包衣单位，可使药物在给药后1～2小时和4～5小时后分别出现两个血药浓度峰值，作用时间超过兰索拉唑，且给药时间不受食物和用餐时间的影响。临床Ⅲ期试验显示，该药能为在日间或夜间伴胃灼热症状的胃食管反流病患者提供长达24小时的抑酸作用和持续的症状缓解效果。

右旋兰索拉唑合成过程中可能产生的杂质，需要进行严格控制，以保证产品质量和安全。因此，实现右旋兰索拉唑中疑似基因毒性杂质的快速分离和含量分析在合成过程的质量控制方面具有重要的现实意义。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种快速分析分离右旋兰索拉唑中的降解产物、工艺副反应杂质和中间体的高效液相色谱法，从而实现了右旋兰索拉唑中的疑似基因毒性杂质在同一色谱条件下的分离及含量测定。

右旋兰索拉唑原料药合成采用路线：

右旋兰索拉唑中的疑似基因毒性杂质有以下三个来源：一为本品合成过程中原料引入的；二为合成反应中生成的副产物；三为贮存过程中由于环境的影响产生的分解产物。分别为：

1、兰索拉唑氮氧硫醚；

2、右旋兰索拉唑氮氧化物；

3、兰索拉唑氮氧砜。

这三个杂质都具有N-氧化吡啶结构，此类结构的化合物被ICH(人用药物注册技术要求国际协调会)以及FDA和欧洲药品审评署(EMEA)定义为疑似基因毒性杂质，按照ICH以及FDA和欧洲药品审评署(EMEA)规定，根据可接受的阀值量(TTC)，每天摄入1.5μg的基因毒性杂质，被认为对于大多数药品来说是可以接受的风险。而右旋兰索拉唑日最大摄入量为60mg，所以成品中三个杂质的相应限度为(1.5μg/day)/(60mg/day)＝25ppm。

本发明提供了一种测定右旋兰索拉唑原料药中疑似基因毒性杂质的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：

(1)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以有机相与缓冲液的混合溶剂作为流动相等度洗脱；

(2)样品溶液的配制：采用有机溶剂和水的混合液将待检测样品配制成样品溶液；

(3)分离分析：将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成右旋兰索拉唑中疑似基因毒性杂质的含量测定，

其中，所述疑似基因毒性杂质为兰索拉唑氮氧硫醚，右旋兰索拉唑氮氧化物，兰索拉唑氮氧砜，

所述有机相为甲醇或乙腈，所述缓冲液为三乙胺缓冲液。

采用该方法可以将右旋兰索拉唑中的三个疑似基因毒性杂质进行快速高效的分离和含量测定，有效控制原料药及制剂的质量。该检测方法灵敏度高、专属性强、精密度高、准确性强、操作方便，可有效控制原料药的质量。

根据本发明实施例的测定右旋兰索拉唑中疑似基因毒性杂质的含量的方法，还可以具有以下附加技术特征：

根据本发明的实施例，所述三乙胺缓冲液与有机相的体积比为(50％～70％):(30％～50％)。

根据本发明的具体实施例，所述缓冲液与有机相的体积比为(55％～65％):(35％～45％)，优选为60％:40％。由此得到的分离效果最佳。

根据本发明的具体实施例，所述的有机相优选为乙腈。由此得到的峰形最好。

根据本发明的实施例，所述三乙胺缓冲液pH值为6.5～7.5，优选为6.8。

根据本发明的具体实施例，样品溶液的配制中采用的溶剂为乙腈和水的混合液，混合比例优选为40:60(v/v)。

根据本发明的实施例，检测条件为：流动相流速0.8ml/min～1.2ml/min，优选为1.0ml/min。检测波长为260nm～290nm，优选为285nm。柱温为25℃～35℃，优选为30℃。

本发明所述的测定方法，可以依照以下方法实现：

(1)取待检测样品适量，用乙腈:水(体积比40:60)的混合液溶解，配制成每1ml含1mg的样品溶液。

(2)设置流动相流速为0.8～1.2ml/min，流动相的流速优选为1.0ml/min；检测波长285nm；色谱柱温度为25℃～35℃，优选为30℃。

(3)取(1)的混合样品溶液2～20μl，优选10μl，注入高效液相色谱仪，完成右旋兰索拉唑中疑似基因毒性杂质的含量的测定。

本发明方法的洗脱分离效果较好，能使原料药样品中三个疑似基因毒性杂质有效分离。检测时间仅需30min。可以快速、准确、可靠的分离兰索拉唑及相邻的疑似基因毒性杂质。

附图说明

图1显示了根据本发明的实施例1，所得三个疑似基因毒性杂质定位的高效液相色谱图；

图2显示了根据本发明的实施例2，所得分离右旋兰索拉唑原料药及疑似基因毒性杂质的高效液相色谱图；

图3显示了根据本发明的实施例3，所得分离右旋兰索拉唑原料药及疑似基因毒性杂质的高效液相色谱图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

本发明实施例中所用的右旋兰索拉唑原料药为申请人自制。

右旋兰索拉唑制备工艺：以兰索拉唑氯化物和2-巯基苯并咪唑在氢氧化钠的水溶液中进行亲核反应，生成兰索拉唑硫醚；兰索拉唑硫醚再经以钛酸四异丙酯和L-酒石酸二乙酯形成手性配合物、以过氧化氢异丙苯为氧化剂，进行不对称氧化生成右旋兰索拉唑。

实施例1

仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，1100紫外检测器

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250×4.6mm,5μm)；

流动相A：水:三乙胺(60:1，体积比，用磷酸调节pH至6.8)

流动相B：乙腈

A:B＝60:40(体积比％)，等度洗脱

流速：1.0ml/min

检测波长：285nm

柱温：30℃

进样体积：10μl

稀释剂：乙腈:水＝40:60(v/v)

运行时间：30分钟

实验步骤：

杂质定位溶液配制：精密称取右旋兰索拉唑氮氧化物、兰索拉唑氮氧砜、兰索拉唑氮氧硫醚对照品各25mg，置于同一个100ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，再精密量取1ml置100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得，即得25ppm浓度的溶液。

结论：此色谱条件下，三个疑似基因毒性杂质可以在同一色谱条件下达到良好的分离，图1中保留时间7.094min，8.387min，10.280min的色谱峰分别为右旋兰索拉唑氮氧化物、兰索拉唑氮氧砜、兰索拉唑氮氧硫醚的色谱峰。

色谱图表明三个杂质在含量为25ppm时，进行高效液相色谱分析是可以作定性分析的，定量限为25ppm。

实施例2

仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，1100紫外检测器

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250×4.6mm,5μm)；

流动相A：水:三乙胺(60:1，体积比，用磷酸调节pH至6.5)

流动相B：乙腈

A:B＝55:45(体积比％)，等度洗脱

流速：1.2ml/min

检测波长：290nm

柱温：30℃

进样体积：10μl

稀释剂：乙腈:水＝40:60(v/v)

运行时间：30分钟

实验步骤：精密称取右旋兰索拉唑原料药100mg，置同一个10ml容量瓶中，加实施例1配制的杂质定位溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得10mg/ml的溶液。

结论：此色谱条件下，图2中保留时间7.297min，8.605min，10.384min，13.903min的色谱峰分别为右旋兰索拉唑氮氧化物、兰索拉唑氮氧砜、兰索拉唑氮氧硫醚、右旋兰索拉唑的色谱峰。

色谱图表明原料药中三个疑似基因毒性杂质右旋兰索拉唑氮氧化物、兰索拉唑氮氧砜、兰索拉唑氮氧硫醚可以在同一色谱条件下达到良好的分离。结果也表明该方法可用于右旋兰索拉唑原料药的质量检测。

实施例3

仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，1100紫外检测器

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250×4.6mm,5μm)；

流动相A：水:三乙胺(60:1，体积比，用磷酸调节pH至7.5)

流动相B：乙腈

A:B＝65:35(体积比％)，等度洗脱

流速：1.0ml/min

检测波长：285nm

柱温：30℃

进样体积：10μl

稀释剂：乙腈:水＝40:60(v/v)

运行时间：30分钟

实验步骤：精密称取右旋兰索拉唑原料药100mg，置同一个10ml容量瓶中，加实施例1配制的杂质定位溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

结论：此色谱条件下，图3中保留时间分别为6.873min，8.140min，10.138min，13.462min的色谱峰分别为右旋兰索拉唑氮氧化物、兰索拉唑氮氧砜、兰索拉唑氮氧硫醚、右旋兰索拉唑的色谱峰。

色谱图表明原料药中三个疑似基因毒性杂质右旋兰索拉唑氮氧化物、兰索拉唑氮氧砜、兰索拉唑氮氧硫醚可以在同一色谱条件下达到良好的分离。结果也表明该方法可用于右旋兰索拉唑原料药的质量检测。

实施例4

仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，1100紫外检测器

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250×4.6mm,5μm)；

流动相A：水:三乙胺(60:1，体积比，用磷酸调节pH至6.0)

流动相B：乙腈

A:B＝45:55(体积比％)，等度洗脱

流速：1.0ml/min

检测波长：285nm

柱温：30℃

进样体积：10μl

稀释剂：乙腈:水＝40:60(v/v)

运行时间：30分钟

实验步骤：杂质定位溶液配制：精密称取右旋兰索拉唑氮氧化物、兰索拉唑氮氧砜、兰索拉唑氮氧硫醚对照品各25mg，置于同一个100ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，再精密量取1ml置100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得25ppm浓度的溶液。

结论：三个疑似基因毒性杂质右旋兰索拉唑氮氧化物、兰索拉唑氮氧砜、兰索拉唑氮氧硫醚在该色谱条件下分离效果不好，右旋兰索拉唑氮氧化物和兰索拉唑氮氧砜分不开。

在本发明的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (13)

1.一种测定右旋兰索拉唑中疑似基因毒性杂质的方法，其特征在于：

(1)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以有机相与缓冲液的混合溶剂作为流动相等度洗脱；

(2)样品溶液的配制：采用乙腈和水的混合液将待检测样品配制成样品溶液，所述乙腈和水的体积比为40:60；

(3)分离分析：将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成右旋兰索拉唑中疑似基因毒性杂质的含量测定，

其中，所述疑似基因毒性杂质为兰索拉唑氮氧硫醚，右旋兰索拉唑氮氧化物，兰索拉唑氮氧砜，

所述有机相为甲醇或乙腈，所述缓冲液为三乙胺缓冲液，所述三乙胺缓冲液pH值为6.5～7.5。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述缓冲液与有机相的体积比为(50％～70％):(30％～50％)。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述缓冲液与有机相的体积比为(55％～65％):(35％～45％)。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述缓冲液与有机相的体积比为60％：40％。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的有机相为乙腈。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述三乙胺缓冲液pH值为6.8。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：流动相的流速为0.8～1.2ml/min。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述流动相的流速为1.0ml/min。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：柱温为25℃～35。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述柱温为30℃。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：检测波长为260nm～290nm，将样品溶液2～20μl，注入高效液相色谱仪检测。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述检测波长为285nm。

13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，将样品溶液10μl，注入高效液相色谱仪检测。