CN108760931A - 一种酪胺的高效液相色谱检测方法 - Google Patents

一种酪胺的高效液相色谱检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108760931A
CN108760931A CN201810639692.2A CN201810639692A CN108760931A CN 108760931 A CN108760931 A CN 108760931A CN 201810639692 A CN201810639692 A CN 201810639692A CN 108760931 A CN108760931 A CN 108760931A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tyrasamine
detecting
liquid chromatography
chromatography method
efficiency liquid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810639692.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108760931B (zh
Inventor
张思雨
何连顺
李斌水
米造吉
马静
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
JING JING PHARMACEUTICAL Co Ltd
Original Assignee
JING JING PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by JING JING PHARMACEUTICAL Co Ltd filed Critical JING JING PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority to CN201810639692.2A priority Critical patent/CN108760931B/zh
Publication of CN108760931A publication Critical patent/CN108760931A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108760931B publication Critical patent/CN108760931B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02Column chromatography
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02Column chromatography
    • G01N30/04Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06Preparation

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种酪胺的高效液相色谱检测方法,涉及柱色谱法技术领域。色谱条件为:色谱柱:氨基键合硅胶柱;流动相:0.05mol/L磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为35:65;其中,磷酸盐缓冲液的pH值为2.5‑6.0;流速:0.7‑1.0mL/min;检测波长:205‑225nm;色谱柱柱温:25‑40℃;进行高效液相色谱分析,测定转化液中酪胺含量。本发明方法可快速,准确测定出酪胺的含量,确保其质量可控,减小误差,节约成本,操作简单,出峰时间快,缩短生产过程中的检测时间,准确度高,大大提高了生产效率。

Description

一种酪胺的高效液相色谱检测方法
技术领域
本发明涉及柱色谱法技术领域,尤其涉及一种酪胺的高效液相色谱检测方法。
背景技术
酪胺是自然界中存在于一些檞寄生树,腐败的动物组织,裂开的干酪以及麦角菌中。它对子宫和血压的作用同肾上腺素相似,虽毒性和活性都比较小,但作用时间长为他的特点。
现有的文献中,测定酪胺转化液中酪胺的含量为柱前衍生后,用C8柱进行液相检测,此方法需预先处理样品,步骤较为复杂。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种酪胺的高效液相色谱检测方法,该方法可快速,准确测定出酪胺的含量,确保其质量可控,减小误差,节约成本,操作简单,出峰时间快,缩短生产过程中的检测时间,准确度高,大大提高了生产效率。
为解决上述技术问题,本发明所采取的技术方案是:一种酪胺的高效液相色谱检测方法:
色谱条件为:
色谱柱:氨基键合硅胶柱;
流动相:0.05mol/L磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为35:65;其中,磷酸盐缓冲液的pH值为2.5-6.0;
流动相流速:0.7-1.0mL/min;
检测波长:205-225nm;
色谱柱柱温:25-40℃;
检测步骤为:
(1)配制流动相,过滤,脱气;
(2)调节高效液相色谱仪条件,平衡色谱柱;
(3)对照品溶液和供试品溶液的配制:称取酪胺对照品和酪胺供试品,分别用流动相溶解定容,即得;
(4)将对照品溶液、供试品溶液过滤后注入高效液相色谱仪,记录色谱图及峰面积,采用外标法计算酪胺的含量。
优选的,磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾缓冲液。
优选的,流动相流速为0.7mL/min。
优选的,检测波长为215nm。
优选的,色谱柱柱温为30℃。
优选的,磷酸盐缓冲液的pH值为4.0。
优选的,步骤(3)中,对照品溶液的浓度为0.02mg/mL。
优选的,步骤(3)中,供试品溶液的配制为:将含有酪胺的生物转化液0.5ml,用流动相稀释至25ml,再将摇匀后的溶液稀释50倍体积。
优选的,色谱柱长度为250mm,内径为4.6mm,其填料粒径为5μm。
优选的,步骤(4)中,对照品溶液和供试品溶液的色谱柱进样体积均为20μl。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于:
(1)本发明方法可快速,准确测定出酪胺的含量,确保其质量可控,减小误差,节约成本,操作简单,出峰时间快,缩短生产过程中的检测时间,准确度高,大大提高了生产效率。
(2)本发明方法可通过一次高效液相检测,准确测定出转化液中酪胺的含量,且与其他杂质峰达到很好的分离效果,节省了人工、时间和溶剂等成本。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例中酪胺对照品溶液的色谱图;
图2是本发明实施例2中酪胺供试品溶液的色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
本发明实施例提供一种酪胺的高效液相色谱检测方法,步骤如下:
步骤1、酪胺对照品溶于流动相中,按比例稀释,分别相当于每1ml中含18.9776μg、21.3498μg、23.722μg、26.0942μg、28.4664μg的标准溶液;
步骤2、采用液相色谱仪分别对不同浓度的标准溶液进行液相色谱分析,记录分析得到的峰面积,并采用外标法绘制酪胺含量-峰面积的标准曲线,得出标准曲线回归方程为y=72264965.0114x+41605.4,R2=0.9999;
步骤3、将含有酪胺的生物转化液0.5ml,用流动相稀释至25ml,再将摇匀后的溶液稀释50倍体积,利用液相色谱仪进行液相色谱分析,采用与标准溶液完全相同的测定条件,并记录峰面积,根据步骤2的标准曲线回归方程y=72264965.0114x+41605.4,R2=0.9999计算得出所述酪胺的含量为60.06g/L(外标法测得含量为59.91g/L)。
检测方法的检测参数为:
色谱柱:氨基键合硅胶柱;
流动相:0.05mol/L磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为35:65;其中,磷酸盐缓冲液的pH值为2.5-6.0;
流动相流速:0.7-1.0mL/min;
检测波长:205-225nm;
色谱柱柱温:25-40℃。
本发明实施例提供的一种酪胺的高效液相检测方法,可通过一次高效液相检测,准确测定出转化液中酪胺的含量,且与其他杂质峰达到很好的分离效果,节省了人工、时间和溶剂等成本。
以下实施例中,采用的高效液相色谱仪为日本岛津:LC-15C;色谱柱为安捷伦氨基键合硅胶柱5μm 4.6*250mm;进样体积为20μl(定量环)。也可以采用其他厂家和型号的高效液相色谱仪、其他粒径和长度的氨基键合硅胶柱以及其他进样体积,都能达到本发明的目的。
实施例1-3
1.色谱条件:
流动相:0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH4.0):乙腈=35:65;(其中,磷酸二氢钾缓冲液的配制为:磷酸二氢钾4.76g溶于700ml超纯水中,用50%磷酸调pH值为4.0);
流动相流速:0.7ml/min;
检测波长:215nm;
色谱柱柱温:30℃。
2.实验步骤
(1)配制流动相,过滤,脱气;
(2)调节高效液相色谱仪,平衡色谱柱;
(3)对照品溶液和供试品溶液的配制,称取酪胺对照品51.93mg于25ml容量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度摇匀后再稀释100倍;实施例1-3分别吸取不同生产批次含有酪胺的生物转化液0.5ml,用流动相稀释至25ml,再将摇匀后的溶液稀释50倍体积。
(4)将对照品溶液、供试品溶液过滤后注入高效液相色谱仪,记录色谱图及峰面积,采用外标法计算结果。
外标法计算酪胺生物转化液中酪胺的含量:
X=C供试品×对照品的稀释倍数=(C对照品×A供试品/A对照品)×待测样品的稀释倍数;
式中:C对照品为对照品溶液中酪胺的浓度,单位为mg/ml;
A对照品为对照品溶液色谱图的峰面积或峰高;
A供试品为供试品溶液色谱图的峰面积或峰高;
C供试品为供试品溶液中酪胺的浓度,单位为mg/ml。
具体数值见下表所示,
3.实施例2供试品溶液色谱图见图2所示:5.572min为酪胺的峰,其余的为杂峰,主峰的出峰时间适宜、理论塔板数大于5000,且与杂峰分离度良好。对照品溶液色谱图见图1所示,5.564min为酪胺的峰。
4.本发明的方法学考察
(1)线性关系实验
标准溶液的稀释步骤、浓度、峰面积见下表:
由标准浓度及其对应的峰面积得出标准曲线回归方程为:y=72264965.0114x+41605.4,R2=0.9999。
(2)重复性试验
取标准溶液20μl注入高效液相色谱仪,重复6针,峰面积分别为1555197、1541136、1542358、1547220、1545632、1544277,平均值为1545970,RSD为0.32%。
(3)转化液稳定性试验
取一份酪胺转化液,于配制后6h、12h、24h进样,其峰面积分别为1939191、1961352、1951460,平均值为1950668,RSD为0.57%。

Claims (10)

1.一种酪胺的高效液相色谱检测方法,其特征在于:
色谱条件为:
色谱柱:氨基键合硅胶柱;
流动相:0.05mol/L磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为35:65;其中,磷酸盐缓冲液的pH值为2.5-6.0;
流动相流速:0.7-1.0mL/min;
检测波长:205-225nm;
色谱柱柱温:25-40℃;
检测步骤为:
(1)配制流动相,过滤,脱气;
(2)调节高效液相色谱仪条件,平衡色谱柱;
(3)对照品溶液和供试品溶液的配制:称取酪胺对照品和酪胺供试品,分别用流动相溶解定容,即得;
(4)将对照品溶液、供试品溶液过滤后注入高效液相色谱仪,记录色谱图及峰面积,采用外标法计算酪胺的含量。
2.根据权利要求1所述的一种酪胺的高效液相色谱检测方法,其特征在于:所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾缓冲液。
3.根据权利要求1所述的一种酪胺的高效液相色谱检测方法,其特征在于:流动相流速为0.7mL/min。
4.根据权利要求1所述的一种酪胺的高效液相色谱检测方法,其特征在于:检测波长为215nm。
5.根据权利要求1所述的一种酪胺的高效液相色谱检测方法,其特征在于:色谱柱柱温为30℃。
6.根据权利要求1所述的一种酪胺的高效液相色谱检测方法,其特征在于:磷酸盐缓冲液的pH值为4.0。
7.根据权利要求1所述的一种酪胺的高效液相色谱检测方法,其特征在于:步骤(3)中,对照品溶液的浓度为0.02mg/mL。
8.根据权利要求1所述的一种酪胺的高效液相色谱检测方法,其特征在于:步骤(3)中,供试品溶液的配制为:将含有酪胺的生物转化液0.5ml,用流动相稀释至25ml,再将摇匀后的溶液稀释50倍体积。
9.根据权利要求1所述的一种酪胺的高效液相色谱检测方法,其特征在于:色谱柱长度为250mm,内径为4.6mm,其填料粒径为5μm。
10.根据权利要求1所述的一种酪胺的高效液相色谱检测方法,其特征在于:步骤(4)中,对照品溶液和供试品溶液的色谱柱进样体积均为20μl。
CN201810639692.2A 2018-06-20 2018-06-20 一种酪胺的高效液相色谱检测方法 Active CN108760931B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810639692.2A CN108760931B (zh) 2018-06-20 2018-06-20 一种酪胺的高效液相色谱检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810639692.2A CN108760931B (zh) 2018-06-20 2018-06-20 一种酪胺的高效液相色谱检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108760931A true CN108760931A (zh) 2018-11-06
CN108760931B CN108760931B (zh) 2020-09-15

Family

ID=63979730

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810639692.2A Active CN108760931B (zh) 2018-06-20 2018-06-20 一种酪胺的高效液相色谱检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108760931B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109725099A (zh) * 2019-03-05 2019-05-07 内蒙古精晶生物科技有限公司 一种缬氨酸的高效液相检测方法
CN110412172A (zh) * 2019-08-15 2019-11-05 精晶药业股份有限公司 一种酪胺的高效液相检测方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101611321A (zh) * 2006-08-08 2009-12-23 阿普里拉股份有限公司 含甲状腺素化合物的分析方法
CN101726552A (zh) * 2009-12-14 2010-06-09 中国农业大学 一种氨基化合物高效液相色谱柱前衍生化试剂及其检测方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101611321A (zh) * 2006-08-08 2009-12-23 阿普里拉股份有限公司 含甲状腺素化合物的分析方法
CN101726552A (zh) * 2009-12-14 2010-06-09 中国农业大学 一种氨基化合物高效液相色谱柱前衍生化试剂及其检测方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GEORG SCHUSTER: "Development of polar chromatography sorbents and attempts to describe retention mechanisms of hydrophilic interaction chromatography systems", 《UNIVERSITÄT WIEN》 *
丁卓平 等: "高效液相色谱法同时测定水产品中10种生物胺的研究", 《分析测试学报》 *
唐英 等: "反相高效液相色谱法分离测定酪胺", 《色谱》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109725099A (zh) * 2019-03-05 2019-05-07 内蒙古精晶生物科技有限公司 一种缬氨酸的高效液相检测方法
CN110412172A (zh) * 2019-08-15 2019-11-05 精晶药业股份有限公司 一种酪胺的高效液相检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108760931B (zh) 2020-09-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104965041B (zh) 一种帕瑞昔布钠异构体的高效液相色谱检测方法
CN108760931A (zh) 一种酪胺的高效液相色谱检测方法
CN104977372B (zh) 高效液相色谱法测定塞来昔布原料药中对磺酰胺基苯肼盐酸盐含量的方法
CN110849980A (zh) 一种l-丙氨酸异丙酯中对映异构体含量的检测方法
CN102375033B (zh) 盐酸苯达莫司汀及其有关物质的高效液相色谱分析方法
CN106338561A (zh) 一种丙谷二肽中间体的定量检测方法
CN102288687A (zh) 一种门冬氨酸鸟氨酸杂质的分析检测方法
CN109725099A (zh) 一种缬氨酸的高效液相检测方法
CN106383185B (zh) 苄氧羰基-l-丙氨酸的高效液相色谱检测方法
CN106338564B (zh) 一种用于检测维格列汀中间体中对映异构体的方法
CN105301137A (zh) 采用高效液相色谱法分析烷基酰氯类化合物的方法
CN110849994B (zh) 一种利伐沙班中有关物质的分离方法
CN112213424A (zh) 一种阿托伐他汀钙中间体中共存杂质同时测定方法
CN104833740A (zh) 利伐沙班中间体的高效液相色谱检测方法
CN101929988B (zh) 一种用高效液相色谱法测定非布索坦有关物质的方法
CN109374782A (zh) 一种用hplc分离测定依帕列净原料药有关物质的方法
CN111220730A (zh) 一种厄贝沙坦氢氯噻嗪复方制剂中有关物质的分析方法
CN104535675A (zh) 测定过氧化氢异丙苯杂质的方法
CN104198418A (zh) 金霉素效价的高通量测定方法
CN102491926B (zh) 一种硫普罗宁二硫化物的制备和纯化方法
CN107655986B (zh) 一种维帕他韦有关物质的检测方法
CN105445405A (zh) 一种格列吡嗪胶囊的质量检测方法
CN102375036A (zh) 对粗品m有效成份含量的液相色谱分析方法
CN104749282A (zh) 测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法
CN110174482A (zh) 一种同时测定胞磷胆碱钠及九种有关物质的uplc分析方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant