CN105445405A

CN105445405A - 一种格列吡嗪胶囊的质量检测方法

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Publication number: CN105445405A
Application number: CN201510866631.6A
Authority: CN
Inventors: 徐波; 屈万新
Original assignee: YICHANG HEC CHANGJIANG PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: YICHANG HEC CHANGJIANG PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2015-11-30
Filing date: 2015-11-30
Publication date: 2016-03-30
Anticipated expiration: 2035-11-30
Also published as: CN105445405B

Abstract

本发明涉及药品分析领域，特别是一种格列吡嗪胶囊的质量检测方法。所述方法采用高效液相色谱；填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；色谱柱为？C18，规格为150mm×4.6mm，3μm；流动相：0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（pH=6.00±0.05）：甲醇体积比为55：45；检测波长225nm；进样量为20μl；柱温30℃；流动相的流速为1.2mL/min，采用本发明条件，格列吡嗪出峰时间约为12min，方法运行约18min即可，该方法能够减少运行时间、提高检测效率、节省资源运行，科学、合理。

Description

一种格列吡嗪胶囊的质量检测方法

技术领域

本发明涉及药品分析领域，特别是一种格列吡嗪胶囊的质量检测方法。

背景技术

格列吡嗪胶囊的含量/含量均匀度/溶出度分析方法,原采用的是中国药典方法，该方法具体内容如下：

取格列吡嗪标准品与4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基)乙基)苯磺酰胺(杂质Ⅰ)标准品，加甲醇溶解并稀释制成每ml中各0.5mg与2.5ug的混合溶液作为系统适用性溶液(SYS溶液)。取格列吡嗪胶囊20粒，精密称定内容物混合适量(约相当于格列吡嗪5mg)，置100ml量瓶中，加甲醇50ml超声15min使溶解，用0.1mol/L磷酸二氢钠溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。另取格列吡嗪标准品，同法制得标准品溶液，精密量取各溶液20ul注入液相色谱仪，按外标法以面积计算，即得。该方法中，由于格列吡嗪的出峰时间约为24min，所以方法的运行时间需要约36min，运行方法应为主成分峰保留时间的1.5倍，其运行时间过长，制约了对该品种的检测效率，加大了实验室的试剂的消耗，及仪器的折旧。

发明内容

本发明的主要目的在于提高一种格列吡嗪胶囊的质量检测方法，缩短检测时间。

一种格列吡嗪胶囊的质量检测方法，包括：

1)高效液相色谱；

2)填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；

3)色谱柱：色谱柱为C18；

4)流动相：0.1mol/L磷酸二氢铵溶液：甲醇体积比为55：45；所述0.1mol/L磷酸二氢铵溶液pH＝6.00±0.05；

5)检测波长：225nm；

6)柱温：20-30℃；

7)系统适应性试验：系统适用性溶液制作方法为取格列吡嗪标准品与4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基)乙基)苯磺酰胺标准品，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含取格列吡嗪0.5mg与4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基)乙基)苯磺酰胺2.5ug的混合溶液，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱，理论塔板数按格列吡嗪计算≥2000，格列吡嗪峰与杂质I峰的分离度≥1.5；

8)格列吡嗪胶囊的质量检测：取格列吡嗪胶囊，进行样品前处理配制得到供试液，另取格列吡嗪标准品，制定标准品溶液，分别吸取供试品溶液与标准品溶液各15-25μl，注入色谱仪，记录色谱，按外标法以峰面积计算，即得格列吡嗪胶囊含量。

所述7)系统适应性溶液制作方法为取格列吡嗪标准品与4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基)乙基)苯磺酰胺标准品，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含取格列吡嗪0.5mg与4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基)乙基)苯磺酰胺2.5ug的混合溶液作为系统适用性溶液。

所述8)格列吡嗪胶囊的质量检测中样品前处理方法为：

格列吡嗪胶囊含量的样品前处理：取格列吡嗪胶囊20粒，精密称取胶囊内容物适量，约相当于格列吡嗪5mg，置100ml量瓶中，加甲醇50ml，超声15min使格列吡嗪溶解，用0.1mol/L磷酸二氢钠溶液稀释至刻度，摇匀，过滤，作为供试液；另取格列吡嗪标准品，同法制定标准品溶液；

格列吡嗪胶囊含量均匀度的样品前处理：取格列吡嗪胶囊10粒，分别将内容物倾倒入10个100ml量瓶中，胶囊壳用甲醇50ml洗净，洗液并入量瓶中，超声15min使格列吡嗪溶解，用0.1mol/L磷酸二氢钠溶液稀释至刻度，摇匀，过滤，作为供试液；标准品溶液与列吡嗪胶囊含量项下标准品溶液同法制备；

格列吡嗪胶囊溶出度的样品前处理：取格列吡嗪胶囊，以磷酸盐缓冲液500ml为溶出介质，所述磷酸盐缓冲液pH值为7.8-8.0，转速为每分钟75转，经30min时，取溶液适量，过滤，取续滤液作为供试液；另取格列吡嗪标准品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇10ml溶解，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液。

所述4)流动相的流速为1.2mL/min。

所述0.1mol/L磷酸二氢铵溶液pH值采用2.0mol/L氢氧化钠溶液调节。

所述3)色谱柱C18色谱柱规格为150mm×4.6mm，3μm。

所述8)格列吡嗪胶囊的质量检测中色谱分析时进样量为20μl。

所述6)柱温30℃。

本发明有益效果如下：采用本发明条件，格列吡嗪出峰时间约为12min，方法运行约18min即可(见图6)，该方法能够减少运行时间、提高检测效率、节省资源运行。而且，该方法已经经过与药典方法的对比测试(见图1)以及分析方法学的确认，结果显示该方法试科学、合理的，具有快速、简便、灵敏度高、专属性强、覆盖面广等优点。

附图说明

图1：药典方法色谱图；

图2：试验1)方法色谱图；

图3：试验2)方法色谱图；

图4：试验3)方法色谱图；

图5：试验4)方法色谱图；

图6：本发明专利方法的色谱图；

具体实施方式

下面结合实施例来进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。

实施例1

格列吡嗪胶囊的含量与溶出度分析方法药典方法色谱条件：色谱柱AgilentZorbaxSB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；检测波长225nm；柱温26℃；流速1.0mL/min；进样量20μl；流动相0.1mol/L磷酸二氢钠溶液(pH＝6.00)：甲醇＝55:45。运行时间38min，见图1。

取格列吡嗪标准品与4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基)乙基)苯磺酰胺(杂质Ⅰ)标准品，加甲醇溶解并稀释制成每ml中各0.5mg与2.5ug的混合溶液作为系统适用性溶液(SYS溶液)。

由图1可知，4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基)乙基)苯磺酰胺(简称杂质I)与格列吡嗪峰之间的分离度为17.78(不得小于1.5)，理论塔板数按格列吡嗪峰计为3343(应不得小于2000)，均符合规定。但是由于格列吡嗪峰的RT＝24.088min，故当时运行时间为33min。格列吡嗪胶囊的检测项目含量、含量均匀度与溶出度均采用该方法，而有关物质分析方法的运行时间为60min，所以一批成品的分析时间需要约31h。因此希望能够通过对含量与溶出度分析方法的优化，使该品种的分析效率能够得到提升。

以下是探索的实验过程：

试验1)：减小色谱柱的柱长，提高流速。将色谱柱的规格：250mm×4.6mm，5μm变更为：150mm×4.6mm，5μm，流速由1.0mL/min提升至1.2mL/min。其他条件均未变动，待系统平衡后进一针含量SYS溶液，图谱如2所示(注：色谱柱AgilentC18150mm×4.6mm，5μm，流速为1.2mL/min)

由图2可知，杂质I与格列吡嗪峰之间的分离度为10.02(应不得小于1.5)，理论塔板数按格列吡嗪峰计为1071(应不得小于2000)，不符合规定。

试验2)：变更色谱柱的厂家为Waters，其他色谱条件与试验1)一致，待系统平衡后进一针含量SYS溶液，图谱如图3所示(注：色谱柱Waters150mm×4.6mm，5μm，流速1.2mL/min)。

由图3可知，杂质I与格列吡嗪峰之间的分离度为10.34(应不得小于1.5)，理论塔板数按格列吡嗪峰计为1504(应不得小于2000)，不符合规定。

试验3)：变更其柱温为30℃，其他色谱条件保持试验2)不变，待系统平衡后进一针含量SYS溶液，图谱如4：(注：色谱柱Waters150mm×4.6mm，5μm，流速1.2mL/min，柱温30℃)

由图4可知，杂质I与格列吡嗪峰之间的分离度为9.57(应不得小于1.5)，理论塔板数按格列吡嗪峰计为1354(应不得小于2000)，不符合规定。

试验4)：变更色谱柱为月旭150mm×4.6mm，3μm，流速1.0mL/min，其他色谱条件保持试验2)不变，柱温30℃待系统平衡后进一针含量SYS溶液，图谱如5所示：

由图5可知，杂质I与格列吡嗪峰之间的分离度为15.09(应不得小于1.5)，理论塔板数按格列吡嗪峰计为2875(应不得小于2000)，均符合规定。格列吡嗪峰RT＝15.071min。

试验5)：在试验4)的基础上，将流速变更为1.2mL/min，待系统平衡后进一针含量SYS溶液，图谱如6所述：(注：色谱柱为月旭150mm×4.6mm，3μm，流速1.2mL/min，柱温30℃)

由图6可知，杂质I与格列吡嗪峰之间的分离度为15.19(应不得小于1.5)，理论塔板数按格列吡嗪峰计为3004(应不得小于2000)，均符合规定。格列吡嗪峰RT＝12.879min。

综合上述5次试验结果，可以得出试验5)是最合理的，其运行时间为16min即可，以此来统计一批格列吡嗪胶囊成品的分析时间约为16h。

在整个方法试验过程中，制约色谱条件的最大因素就是“系统适用性溶液中，理论塔板数按格列比嗪计算不低于2000”。在试验中，方案1)、2)与3)均失败。出现这种情况的主要原因，除了色谱条件的因素外，还有个因素就是系统适用性溶液中(取格列吡嗪标准品与格列吡嗪杂质I标准品，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中格0.5mg与2.5ug的混合溶液)，格列比嗪成分的浓度为0.5mg/ml，而含量与含量均匀度项下，供试液均为0.05mg/ml。故可以明显看出系统适用性溶液中，格列吡嗪浓度偏高。

由此可以通过降低系统适用性溶液中的格列吡嗪的浓度，具体可以变更为“取格列吡嗪标准品与格列吡嗪杂质I标准品，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中格0.05mg与2.5ug的混合溶液，这样对于色谱柱的选择空间更大，试验条件也就更容易达到。用甲醇稀释至这个混合物中含格列吡嗪标准品0.05mg/ml和格列吡嗪杂质I标准品为2.5ug/ml

与药典方法分析对比：

表1格列吡嗪胶囊含量/含量均匀度/溶出度分析方法对比实验结果

由表1可知，采用本发明方法检测的结果准确，采用本发明方法检测值与药典方法检测值没有差异。

上述的实施例仅为本发明的优选技术方案，而不应视为对于本发明的限制，本申请中的实施例及实施例中的特征在不冲突的情况下，可以相互任意组合。本发明的保护范围应以权利要求记载的技术方案，包括权利要求记载的技术方案中技术特征的等同替换方案为保护范围。即在此范围内的等同替换改进，也在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种格列吡嗪胶囊的质量检测方法，其特征在于，包括：

1）高效液相色谱；

2）填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；

3）色谱柱：色谱柱为C18；

4）流动相：0.1mol/L磷酸二氢铵溶液：甲醇体积比为55：45；所述0.1mol/L磷酸二氢铵溶液pH=6.00±0.05；

5）检测波长：225nm；

6）柱温：20-30℃；

7）系统适应性试验：系统适用性溶液制作方法为取格列吡嗪标准品与4-（2-（5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基）乙基）苯磺酰胺标准品，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含取格列吡嗪0.5mg与4-（2-（5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基）乙基）苯磺酰胺2.5ug的混合溶液，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱，理论塔板数按格列吡嗪计算≥2000，格列吡嗪峰与杂质I峰的分离度≥1.5；

8）格列吡嗪胶囊的质量检测：取格列吡嗪胶囊，进行样品前处理配制得到供试液，另取格列吡嗪标准品，制定标准品溶液，分别吸取供试品溶液与标准品溶液各15-25μl，注入色谱仪，记录色谱，按外标法以峰面积计算，即得格列吡嗪胶囊含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述7）系统适应性溶液制作方法为取格列吡嗪标准品与4-（2-（5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基）乙基）苯磺酰胺标准品，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含取格列吡嗪0.5mg与4-（2-（5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基）乙基）苯磺酰胺2.5ug的混合溶液作为系统适用性溶液。

3.根据权利要求1述的方法，其特征在于：所述8）格列吡嗪胶囊的质量检测中样品前处理方法为：

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述4）流动相的流速为1.2mL/min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述0.1mol/L磷酸二氢铵溶液pH值采用2.0mol/L氢氧化钠溶液调节。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述3）色谱柱C18色谱柱规格为150mm×4.6mm，3μm。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述8）格列吡嗪胶囊的质量检测中色谱分析时进样量为20μl。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述6）柱温30℃。