CN103175905B - 一种用高效液相色谱法测定非布索坦及其制剂中杂质的方法 - Google Patents
一种用高效液相色谱法测定非布索坦及其制剂中杂质的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103175905B CN103175905B CN201110429357.8A CN201110429357A CN103175905B CN 103175905 B CN103175905 B CN 103175905B CN 201110429357 A CN201110429357 A CN 201110429357A CN 103175905 B CN103175905 B CN 103175905B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mobile phase
- febuxostat
- solution
- isobutoxy
- impurity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种药物的分析方法，特别是用高效液相色谱测定非布索坦及其制剂中的杂质的方法。本发明以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以三乙胺缓冲溶液及甲醇的混合溶液为流动相，建立起一种灵敏、专属、全面的非布索坦杂质检测分析方法。采用该方法可以有效检测非布索坦在生产和储存过程中杂质的变化，对该药的质量控制具有重要的现实意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物的分析方法，特别是用高效液相色谱测定非布索坦及其制剂中的杂质的方法。
背景技术
非布索坦，化学名称：2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸，是新一代非嘌呤类黄嘌呤氧化酶抑制剂，能明显降低血内尿酸浓度。2004年10月份美国风湿病学学会发布的III期临床试验数据显示，非布索坦的疗效要优于目前抗痛风的黄金标准治疗药别嘌呤醇。2008年5月5日由IPSEN公司获欧盟上市许可(商品名：ADENURIC，片剂，规格：80mg和120mg)，于2009年2月16日由日本武田制药北美公司获美国FDA批准在美国上市(商品名：ULORIC，片剂，规格：40mg和80mg)，用于治疗慢性高尿酸血症(包括曾经或现在出现痛风和/或痛风性关节炎)。该药是继别嘌呤醇之后的唯一一个新的抑制尿酸生成的药物，其更加安全有效，该药的上市将为众多有症状的高尿酸血症患者带来福音。目前，非布索坦在我国尚未上市。
非布索坦分子结构式为：
由于一种药品从合成原料药到制备有关的制剂，再经贮藏、运输、使用，要经历一段较为复杂和漫长的过程，在此期间每一过程都可能产生有关的杂质，如生产中可能带入起始原料、试剂、中间体、副产物和异构体等；在贮藏和运输过程中可能产生降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质。药品中的杂质泛指在药品的生产与储运过程中产生的工艺杂质或降解产物等。药品在临床使用中产生的不良反应除了与主成分的药理活性有关外，与药品中存在的杂质也有很大关系，药品中杂质的控制是药品研发的一个重要方面，也是临床使用安全性的保障。因此，为了保证药物的安全有效，同时也要考虑到生产实际情况，国内外在药物的研究过程中均将杂质检测作为控制药品质量的重要指标。药品杂质检测研究是目前我国药品研发中的薄弱点之一。要全面提升我国药品研发的水平、切实保证公众用药的安全性，必须重视并加强药品中有关杂质的研究。
本发明人对非布索坦的合成、制剂及其质量进行了一系列研究，其中的杂质研究是非布索坦药物质量控制研究的重要项目。本发明人基于非布索坦原料药的合成工艺分析确定了其中可能存在的工艺杂质，同时基于非布索坦的分子结构分析其可能的降解途径及降解产物。经分析研究发现，本发明人采用的合成工艺制备的非布索坦可能含有的工艺杂质和降解杂质有六个之多，见表1：
表1杂质列表
现有技术中关于非布索坦及其制剂中杂质的检测分析方法较多，但是均不适合检测本发明人采用的合成工艺制备的非布索坦中存在的工艺杂质及降解杂质(见表1杂质列表)。例如，专利200910087796.8提供了一种用高效液相色谱法测定非布索坦有关物质的方法，但是没有具体指出采用该方法能够分析何种杂质，也没有指出该色谱方法的专属性及灵敏性问题；专利200910031295.8提供了一种通过高效液相色谱法分离和分析非布索坦的方法，虽然该方法指出了能够分离分析何种工艺杂质，但是由于药品生产工艺不同具有不同的工艺杂质，该方法并不能适用于分析采用其他合成工艺制备的非布索坦的杂质的缺陷等；《中国当代医药》2011年2月第18卷第4期44～46页的“非布索坦的有关物质测定方法研究”给出的方法，未具体明确能检测何种杂质；《海峡药学》2011年第23卷第8期76～78页的“HPLC法测定非布索坦的有关物质”给出的方法只能检测其指定的四种中间体杂质，是否能检测其他工艺杂质及降解杂质尚需进行进一步研究；《沈阳药科大学学报》2010年第27卷第8期648～651页的《HPLC法测定非布司他的含量及有关物质》给出的方法，也未明确能检测何种杂质。
本发明则是针对上述缺陷，建立起一种灵敏、专属、全面的非布索坦杂质检测分析方法。采用该方法可以有效检测非布索坦在生产和储存过程中杂质的变化，对该药的质量控制具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种非布索坦及其制剂中杂质的高效液相色谱分析方法，从而实现对非布索坦及其制剂的质量控制。
本发明的技术方案如下：
一种用高效液相色谱法测定非布索坦及其制剂中杂质的方法，其特征在于以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.01％～0.10％三乙胺缓冲溶液为A流动相，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围10∶90～40∶60。
其中，本发明0.01％～0.10％三乙胺缓冲溶液(A流动相)的pH值优选1～5，更优选2.5。
本发明采用磷酸、乙酸、甲酸或三氟乙酸调节A流动相的pH值。
本发明三乙胺缓冲溶液的浓度优选0.05％。
本发明优选采用梯度洗脱的方式分析非布索坦及其制剂中的杂质，其梯度洗脱程序为：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 35 | 65 |
| 60 | 15 | 85 |
(一)色谱检测条件的确定
1.检测波长的初步选择
本发明人通过二极管阵列检测器检测，得到各杂质及非布索坦的紫外吸收结果见表2：
表2非布索坦及其杂质紫外吸收结果
结论：非布索坦及其杂质在220nm及310nm左右有最大吸收。
2.流动相的选择与优化
本发明人以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂进行流动相的选择，以自制非布索坦为样品，结果见表3：
表3非布索坦流动相的选择结果
| 流动相 | 结果 |
| 水-甲醇(40∶60) | 主峰峰形较差 |
| pH3.0磷酸溶液-甲醇(10∶90) | 主峰保留时间适宜，主峰峰形较差 |
| pH3.0磷酸溶液-甲醇(20∶80) | 主峰保留时间适宜，但峰型较差，与杂质峰分离度较好 |
| pH3.0磷酸溶液-甲醇(30∶70) | 主峰保留时间较长，主峰峰形较差 |
| pH2.5磷酸溶液-甲醇(20∶80) | 主峰保留时间适宜，但峰型较差，与杂质峰分离度较好 |
| 0.01％三乙胺溶液-甲醇(10∶90) | 主峰峰形较好，与杂质分离度较好 |
| 0.10％三乙胺溶液-甲醇(40∶60) | 主峰峰形较好，与杂质分离度较好 |
结论：由表3可知，非布索坦与其杂质在以0.01％～0.10％三乙胺缓冲溶液为A流动相，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围10∶90～40∶60内的条件下进行检测，主峰峰形较好，与杂质分离度较好。但是各杂质之间的分离度较差，且出峰时间也尚需进一步调整，因此需要在此基础上对流动相进一步优化。
本发明人在保持流动相其他参数不变的情况下，采用磷酸、乙酸、甲酸或三氟乙酸对0.01％～0.10％三乙胺缓冲溶液pH值进行了调整，经研究发现当0.01％～0.10％三乙胺缓冲溶液pH值调至1～5(A流动相)的范围内时，非布索坦、及表1所述各杂质的之间的分离度较好，出峰时间在2～70分钟之间。研究结果见表4
表4流动相A优化结果
结论：非布索坦与其杂质在以0.01％～0.10％三乙胺缓冲溶液(pH值调至1～5)(A流动相)∶甲醇(B流动相)的比例范围为10∶90～40∶60内时，非布索坦，及各杂质峰型较好，主峰与各杂质之间的分离度也较好，但是仍存在出峰时间不太理想的缺陷。
为了提高非布索坦及其杂质分析检测效率，本发明人对流动相进一步优化，结果见表5。
表5流动相再次优化结果
结论：非布索坦与其杂质在以0.05％三乙胺缓冲溶液为A流动相，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围15∶85～35∶65内，且流动相A的pH值调至2.5时，主峰与杂质峰的峰型较好，各峰之间的分离度较好，出峰时间适宜。
为了在同一色谱条件下实现同时分离分析非布索坦及其如表1所述杂质的目的，本发明人考虑采用梯度色谱条件对其进行研究，在进行了一系列研究后最终确立了同时分析分离非布索坦及其杂质的色谱条件。具体梯度色谱条件的摸索如下：以三乙胺溶液(0.05％三乙胺溶液，调节pH值至2.5)为流动相A相，以甲醇为流动相B相，洗脱程序及其结果见表6
表6梯度色谱条件研究结果
表6梯度色谱条件研究结果(续表)
结论：实验结果表明，采用编号为4的梯度色谱条件对非布索坦及其杂质进行检测可以较好的实验效果。
最后，为了提高非布索坦及其杂质色谱分析的重现性和分析精度，本发明还可以在样品检测结束后，继续后续的梯度洗脱程序对色谱柱进行洗脱。例如，后续洗脱程序中可以在样品检测结束后的5～15分钟，色谱系统流动相(A∶B)从15∶85逐渐过渡到35∶65，然后再在35∶65的比例条件下继续洗脱色谱柱10～30分钟。后续洗脱程序举例如表7：
表7样品检测完毕的后续洗脱程序
结论：样品检测完毕后，采用后续洗脱不采用突然切换梯度有利于色谱柱的平衡，经过平衡的色谱柱，使得样品采集的精密度与重现性提高。
3.辅料干扰性实验
发明人还采用本发明技术方案对市场上常用的制备非布索坦制剂的药用辅料进行了研究，经研究发现常用的药用辅料对本技术方案没有干扰。
(二)特殊杂质检测方法学研究
1.色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为220nm或317nm，流速为每分钟1.0ml，柱温30℃，以0.05％三乙胺溶液(用磷酸调pH值至2.5)为流动相A相，以甲醇为流动相B相，A、B流动相的比例为25∶75，等度洗脱。
(1)对硝基苯腈方法学研究
按上述色谱条件对对硝基苯腈对照品溶液进行测定，以各对硝基苯腈的峰面积对进样量进行线性回归。在该色谱系统下，对硝基苯腈在182.24ng/ml～1141.1ng/ml浓度范围内线性关系良好，对硝基苯腈的定量限为3.6ng，检测限为1.82ng。
(2)4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈
按上述色谱条件对4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈对照品溶液进行测定，以各4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈的峰面积对进样量进行线性回归。在该色谱系统下，4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈在80.45ng/ml～512.8ng/ml浓度范围内线性关系良好，4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈的定量限为1.61ng，检测限为0.80ng。
(3)3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺
按上述色谱条件对3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺对照品溶液进行测定，以各3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺的峰面积对进样量进行线性回归。在该色谱系统下，3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺在165.77ng/ml～904.12ng/ml浓度范围内线性关系良好，3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺的定量限为3.32ng，检测限为1.66ng。
(4)2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯
按上述色谱条件对2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯对照品溶液进行测定，以各2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯的峰面积对进样量进行线性回归。在该色谱系统下，2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯在96.25ng/ml～1011ng/ml浓度范围内线性关系良好，2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯的定量限为1.93ng，检测限为0.96ng。
(5)4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯
按上述色谱条件对4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯对照品溶液进行测定，以各4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯的峰面积对进样量进行线性回归。在该色谱系统下，4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯在108.42ng/ml～968.1ng/ml浓度范围内线性关系良好，4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯的定量限为2.17ng，检测限为1.08ng。
(6)2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑
按上述色谱条件对2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑对照品溶液进行测定，以各2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑的峰面积对进样量进行线性回归。在该色谱系统下，2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑在221.2ng/ml～4028ng/ml浓度范围内线性关系良好，2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑的定量限为4.42ng，检测限为2.21ng。
2.色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为220nm或317nm，流速为每分钟1.0ml，柱温30℃，以0.05％三乙胺溶液(用磷酸调pH值至2.5)为流动相A相，以甲醇为流动相B相，按以下程序进行梯度洗脱：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 35 | 65 |
| 60 | 15 | 85 |
(1)对硝基苯腈方法学研究
按上述色谱条件对对硝基苯腈对照品溶液进行测定，以各对硝基苯腈的峰面积对进样量进行线性回归，所得线性回归方程为：y＝9976.4x+275.6；相关系数为0.9999。在该色谱系统下，对硝基苯腈在62.64ng/ml～1252.8ng/ml浓度范围内线性关系良好，对硝基苯腈的定量限为1.25ng，检测限为0.63ng。
(2)4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈
按上述色谱条件对4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈对照品溶液进行测定，以各4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈的峰面积对进样量进行线性回归，所得线性回归方程为：y＝65977x-379.61；相关系数为0.9998。在该色谱系统下，4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈在30.62ng/ml～612.4ng/ml浓度范围内线性关系良好，4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈的定量限为0.61ng，检测限为0.18ng。
(3)3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺
按上述色谱条件对3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺对照品溶液进行测定，以各3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺的峰面积对进样量进行线性回归，所得线性回归方程为：y＝33694x-619.02；相关系数为0.9999。在该色谱系统下，3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺在55.68ng/ml～1114ng/ml浓度范围内线性关系良好，3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺的定量限为1.11ng，检测限为0.56ng。
(4)2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯
按上述色谱条件对2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯对照品溶液进行测定，以各2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯的峰面积对进样量进行线性回归，所得线性回归方程为：y＝29272x+875.75；相关系数为0.9999。在该色谱系统下，2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯在60.96ng/ml～1219ng/ml浓度范围内线性关系良好，2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯的定量限为1.22ng，检测限为0.61ng。
(5)4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯
按上述色谱条件对4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯对照品溶液进行测定，以各4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯的峰面积对进样量进行线性回归，所得线性回归方程为：y＝24132x+33.856；相关系数为0.9998。在该色谱系统下，4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯在58.92ng/ml～1178ng/ml浓度范围内线性关系良好，4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯的定量限为1.18ng，检测限为0.59ng。
(6)2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑
按上述色谱条件对2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑对照品溶液进行测定，以各2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑的峰面积对进样量进行线性回归，所得线性回归方程为：y＝77.226x-1809.5；相关系数为0.9998。在该色谱系统下，2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑在151.2ng/ml～3024ng/ml浓度范围内线性关系良好，2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑的定量限为3.02ng，检测限为1.21ng。
附图说明
图1为非布索坦在0.05％三乙胺溶液(pH值2.5)∶甲醇为25∶75液相条件下的色谱图；
图2为杂质对硝基苯腈在0.05％三乙胺溶液(pH值2.5)∶甲醇为35∶65液相条件下的色谱图；
图3为杂质4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈在0.05％三乙胺溶液(pH值2.5)∶甲醇为35∶65液相条件下的色谱图；
图4为杂质3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺在0.05％三乙胺溶液(pH值2.5)∶甲醇为35∶65液相条件下的色谱图；
图5为杂质2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯在0.05％三乙胺溶液(pH值2.5)∶甲醇为15∶85液相条件下的色谱图；
图6为杂质4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯在0.05％三乙胺溶液(pH值2.5)∶甲醇为25∶75液相条件下的色谱图；
图7为杂质2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑在0.05％三乙胺溶液(pH值2.5)∶甲醇为25∶75液相条件下的色谱图；
图8为自制非布索坦粗品在梯度洗脱程序下的供试品色谱图；
图9为自制非布索坦片在梯度洗脱程序下的供试品色谱图；
图10为原研厂家非布索坦片在梯度洗脱程序下的供试品色谱图；
图11为自制非布索坦片在稳定性研究加速试验中第6个月的样品在梯度洗脱程序下的色谱图；
图12为自制非布索坦片在稳定性研究长期试验中第24月末样品在梯度洗脱程序下的色谱图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步说明，但实施例并不限制本发明的保护范围。
实施例1
以自制非布索坦粗品为原料
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.01％三乙胺缓冲溶液为A流动相，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围10∶90；检测波长220nm；柱温30℃。
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：精密称取非布索坦粗品适量置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明非布索坦峰型较好，与杂质分离度较好，但各杂质之间的分离度较差，个别杂质出峰时间也不理想。
实施例2
以自制非布索坦粗品为原料
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.05％三乙胺缓冲溶液为A流动相，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围25∶75；检测波长317nm；柱温30℃。
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：精密称取非布索坦粗品适量置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明非布索坦峰型较好，与杂质分离度较好，但各杂质之间的分离度较差，个别杂质出峰时间也不理想。
实施例3
以自制非布索坦粗品为原料
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.10％三乙胺缓冲溶液为A流动相，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围40∶60；检测波长310nm；柱温30℃。
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：精密称取非布索坦粗品适量置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明非布索坦峰型较好，与杂质分离度较好，但各杂质之间的分离度较差，个别杂质出峰时间也不理想。
实施例4
以自制非布索坦粗品为原料
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.01％三乙胺缓冲溶液为A流动相，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围40∶60；检测波长220nm；柱温30℃。
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：精密称取非布索坦粗品适量置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明非布索坦峰型较好，与杂质分离度较好，但各杂质之间的分离度较差，个别杂质出峰时间也不理想。
实施例5
以自制非布索坦粗品为原料
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.1％三乙胺缓冲溶液为A流动相，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围10∶90；检测波长220nm；柱温30℃。
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：精密称取非布索坦粗品适量置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明非布索坦峰型较好，与杂质分离度较好，但各杂质之间的分离度较差，个别杂质出峰时间也不理想。
实施例6
以自制非布索坦粗品为原料
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.01％三乙胺缓冲溶液为A流动相(用磷酸调pH值至1)，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围40∶60；检测波长220nm；柱温30℃。
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：精密称取非布索坦粗品适量置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明非布索坦峰型较好，与杂质分离度较好，主峰及各杂质之间的分离度较好，但个别杂质出峰时间仍较长。
实施例7
以自制非布索坦粗品为原料
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.05％三乙胺缓冲溶液为A流动相(用三氟乙酸调pH值至2.5)，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围25∶75；检测波长317nm；柱温30℃。
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：精密称取非布索坦粗品适量置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明非布索坦峰型较好，与杂质分离度较好，主峰及各杂质之间的分离度较好，但杂质2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯的出峰时间仍较长。
实施例8
以自制非布索坦粗品为原料
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.10％三乙胺缓冲溶液为A流动相(用甲酸调pH值至5)，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围40∶60；检测波长317nm；柱温30℃。
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：精密称取非布索坦粗品适量置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明非布索坦峰型较好，与杂质分离度较好，主峰及各杂质之间的分离度较好，但主峰及个别杂质出峰时间较长。
实施例9
以自制非布索坦粗品为原料
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.10％三乙胺缓冲溶液为A流动相(用甲酸调pH值至5)，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围10∶90；检测波长317nm；柱温30℃。
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：精密称取非布索坦粗品适量置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明非布索坦峰型较好，与杂质分离度较好，主峰及各杂质之间的分离度较好，但主峰及个别杂质出峰时间较长。
实施例10
以自制非布索坦粗品为原料
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.01％三乙胺缓冲溶液为A流动相(用乙酸调pH值至5)，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围10∶90；检测波长317nm；柱温30℃。
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：精密称取非布索坦粗品适量置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明非布索坦峰型较好，与杂质分离度较好，主峰及各杂质之间的分离度较好，但主峰及个别杂质出峰时间较长。
实施例11
以市购对硝基苯腈为待测品。
色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.05％三乙胺缓冲溶液为A流动相(用甲酸调pH值至2.5)，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围35∶65；检测波长220nm；柱温30℃。
精密称取对硝基苯腈置容量瓶中，加甲醇使溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取供试品注入液相色谱仪，记录色谱图(见附图2)。
结论：由谱图可知，保留时间4.599分钟，峰型较好。
实施例12
以市购4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈为待测品。
色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.05％三乙胺缓冲溶液为A流动相(用磷酸调pH值至2.5)，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围35∶65；检测波长220nm；柱温30℃。
精密称取4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈置容量瓶中，加甲醇使溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取供试品注入液相色谱仪，记录色谱图(见附图3)。
结论：由谱图可知，保留时间8.763分钟，峰型较好。
实施例13
以市购3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺为待测品。
色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.05％三乙胺缓冲溶液为A流动相(用磷酸调pH值至2.5)，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围35∶65；检测波长317nm；柱温30℃。
精密称取3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺置容量瓶中，加甲醇使溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取供试品注入液相色谱仪，记录色谱图(见附图4)。
结论：由谱图可知，保留时间8.069分钟，峰型较好。
实施例14
以市购2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯为待测品。
色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.05％三乙胺缓冲溶液为A流动相(用三氟乙酸调pH值至2.5)，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围15∶85；检测波长220nm；柱温30℃。
精密称取2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯置容量瓶中，加甲醇溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取供试品注入液相色谱仪，记录色谱图(见附图5)。
结论：由谱图可知，保留时间11.053分钟，峰型较好。
实施例15
以市购4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯为待测品。
色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.05％三乙胺缓冲溶液为A流动相(用甲酸调pH值至2.5)，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围25∶75；检测波长220nm；柱温30℃。
精密称取4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯置容量瓶中，加甲醇使溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取供试品注入液相色谱仪，记录色谱图(见附图6)。
结论：由谱图可知，保留时间23.260分钟，峰型较好。
实施例16
以市购2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑为待测品。
色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；0.05％三乙胺缓冲溶液为A流动相(用磷酸调pH值至2.5)，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围25∶75；检测波长220nm；柱温30℃。
精密称取2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑置容量瓶中，加甲醇使溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取供试品注入液相色谱仪，记录色谱图(见附图7)。
结论：由谱图可知，保留时间14.601分钟，峰型较好。
实施例17
以自制非布索坦粗品为原料
色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为220nm，流速为每分钟1.0ml，柱温30℃，以0.05％三乙胺溶液(用磷酸调pH值至2.5)为流动相A相，以甲醇为流动相B相，按以下程序进行梯度洗脱：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 35 | 65 |
| 60 | 15 | 85 |
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：精密称取非布索坦粗品适量置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。
检测结果表明各杂质对照品保留时间合适，峰形较好；粗品中非布索坦，峰形较好与各杂质分离度较好。
实施例18
以自制非布索坦粗品为原料
色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为317nm，流速为每分钟1.0ml，柱温30℃，以0.05％三乙胺溶液(用磷酸调pH值至2.5)为流动相A相，以甲醇为流动相B相，按以下程序进行梯度洗脱：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 35 | 65 |
| 60 | 15 | 85 |
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：精密称取非布索坦粗品适量置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图(供试品图谱见附图8)。
检测结果表明各杂质对照品保留时间合适，峰形较好；粗品中非布索坦，峰形较好与各杂质分离度较好，系统平衡性好。
实施例19
以自制非布索坦片为原料
色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为220nm或317nm，流速为每分钟1.0ml，柱温30℃，以0.05％三乙胺溶液(用磷酸调pH值至2.5)为流动相A相，以甲醇为流动相B相，按以下程序进行梯度洗脱：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 35 | 65 |
| 60 | 15 | 85 |
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：取非布索坦片装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图(供试品图谱见附图9)。
检测结果表明各杂质对照品保留时间合适，峰形较好；粗品中非布索坦，峰形较好与各杂质分离度较好，系统平衡性好。
实施例20
以原研非布索坦片为原料
色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为317nm，流速为每分钟1.0ml，柱温30℃，以0.05％三乙胺溶液(用磷酸调pH值至2.5)为流动相A相，以甲醇为流动相B相，按以下程序进行梯度洗脱：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 35 | 65 |
| 60 | 15 | 85 |
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：取非布索坦片装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图(供试品图谱见附图10)。
检测结果表明各杂质对照品保留时间合适，峰形较好；粗品中非布索坦，峰形较好与各杂质分离度较好，系统平衡性好。
实施例21非布索坦稳定性研究加速试验
以本发明人以自制非布索坦片为待测样品，按市售包装，置温度40℃±2℃、相对湿度RH75％±5％条件下，放置6个月，于第1、2、3、6月末取样一次，按稳定性重点考察项目要求进行检测，与0月比较。
色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为317nm，流速为每分钟1.0ml，柱温30℃，以0.05％三乙胺溶液(用磷酸调pH值至2.5)为流动相A相，以甲醇为流动相B相，按以下程序进行梯度洗脱：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 35 | 65 |
| 60 | 15 | 85 |
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：取第1、2、3、6月末的非布索坦片装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图(第6个月的样品色谱图见图11)
实验结果表明，本品加速试验条件下放置6月个月稳定。
实施例22非布索坦稳定性研究长期试验
以本发明人以自制非布索坦片为待测样品，按市售包装，置25℃±2℃、相对湿度RH60％±10％条件下，放置36个月，于第3、6、9、12、18、24、36月末取样一次，取样，按稳定性重点考察项目要求进行检测。
色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为220nm，流速为每分钟1.0ml，柱温30℃，以0.05％三乙胺溶液(用磷酸调pH值至2.5)为流动相A相，以甲醇为流动相B相，按以下程序进行梯度洗脱：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 35 | 65 |
| 60 | 15 | 85 |
杂质对照品溶液的制备：分别取对硝基苯腈、4-异丁氧基-1，3-苯二甲腈、3-氰基-4-异丁氧基硫代苯甲酰胺、2-[3-氰基-4-异丁氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯、4-异丁氧基-1，3-二(4-甲基噻唑-5-羧酸-2-基)苯、2-[3氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑、2-[3-甲酰胺基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-羧酸对照品到量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为杂质对照溶液。
供试品溶液的配制：取第3、6、9、12、18、24、36月末的非布索坦片装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加甲醇溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
测定法：分别取杂质对照品溶液、供试品溶液、对照溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图(第24月末样品图见附图12)。
实验结果表明，本品长期试验条件下放置24月个月稳定。
Claims (4)
1.一种用高效液相色谱法测定非布索坦及其制剂中杂质的方法，其特征在于以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05％三乙胺缓冲溶液为A流动相，以甲醇为B流动相，其中A流动相与B流动相的比例范围10：90～40：60,按以下程序进行梯度洗脱：
。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于A流动相的pH值在1～5。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于A流动相的pH值为2.5。
4.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于采用磷酸、乙酸、甲酸或三氟乙酸调节A流动相的pH值。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110429357.8A CN103175905B (zh) | 2011-12-20 | 2011-12-20 | 一种用高效液相色谱法测定非布索坦及其制剂中杂质的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110429357.8A CN103175905B (zh) | 2011-12-20 | 2011-12-20 | 一种用高效液相色谱法测定非布索坦及其制剂中杂质的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103175905A CN103175905A (zh) | 2013-06-26 |
| CN103175905B true CN103175905B (zh) | 2015-07-15 |
Family
ID=48635904
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201110429357.8A Active CN103175905B (zh) | 2011-12-20 | 2011-12-20 | 一种用高效液相色谱法测定非布索坦及其制剂中杂质的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103175905B (zh) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103389346B (zh) * | 2013-07-18 | 2014-08-06 | 湖北华世通潜龙药业有限公司 | 利用hplc测定非布司他及口服制剂中有关物质的方法 |
| CN103467412B (zh) * | 2013-09-30 | 2015-05-13 | 杭州朱养心药业有限公司 | 用于痛风的药物化合物 |
| CN106124662A (zh) * | 2016-07-15 | 2016-11-16 | 江苏悦兴医药技术有限公司 | 一种2‑氰基‑4‑吡啶羧酸甲酯与其主要杂质完全分离的高效液相色谱纯度检测方法 |
| CN106324136A (zh) * | 2016-08-23 | 2017-01-11 | 孙桂菊 | 一种非布司他合成中成醚工序的液相色谱中控分析方法 |
| CN106442806A (zh) * | 2016-11-28 | 2017-02-22 | 魏成功 | 一种非布司他中间体氰基物的纯度及相关物质的分析方法 |
| CN109444304B (zh) * | 2018-12-29 | 2021-12-14 | 湖南新领航检测技术有限公司 | 一种非布司他及其相关杂质的hplc检测方法 |
| CN111303071A (zh) * | 2020-01-08 | 2020-06-19 | 武汉伯睿科医药科技有限公司 | 一种非布司他杂质的合成方法 |
| CN112129878A (zh) * | 2020-10-16 | 2020-12-25 | 苏州新药篮生物医药科技有限公司 | 一种医药有机中间体杂质的分析方法 |
| CN114646705A (zh) * | 2022-03-22 | 2022-06-21 | 武汉绿合医药科技有限公司 | 一种地夸磷索钠滴眼液有关物质含量检测方法 |
| CN115785018A (zh) * | 2022-12-26 | 2023-03-14 | 湖北广济药业股份有限公司 | 一种非布司他脱羧杂质的制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101881756A (zh) * | 2009-05-04 | 2010-11-10 | 南京海辰药业有限公司 | 高效液相色谱法分析分离非布司他及其中间体的方法 |
-
2011
- 2011-12-20 CN CN201110429357.8A patent/CN103175905B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101881756A (zh) * | 2009-05-04 | 2010-11-10 | 南京海辰药业有限公司 | 高效液相色谱法分析分离非布司他及其中间体的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 周颖等.非布司他在健康受试者体内的尿药排泄特征.《中国药学杂志》.2011,第46 卷(第19 期),1513-1516. * |
| 张静等.非布索坦的有关物质测定方法研究.《药品鉴定》.2011,第18 卷(第4 期),44-46. * |
| 林升.HPLC法测定非布索坦的有关物质.《海峡药学》.2011,第23 卷(第8 期),76-78. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103175905A (zh) | 2013-06-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103175905B (zh) | 一种用高效液相色谱法测定非布索坦及其制剂中杂质的方法 | |
| CN114062554B (zh) | 一种同时测定对乙酰氨基酚布洛芬有关物质的分析方法 | |
| CN110596293B (zh) | 一种高哌嗪的高效液相检测方法 | |
| CN104965041A (zh) | 一种帕瑞昔布钠异构体的高效液相色谱检测方法 | |
| CN102565225A (zh) | 一种非布司他合成过程中利用高效液相色谱法测定相关物质的方法 | |
| CN114216987B (zh) | 高效液相色谱分析头孢克肟片的方法 | |
| CN107991415B (zh) | 用液相色谱法同时分离测定复方氨基酸注射液18aa中焦谷氨酸和蛋氨酸亚砜杂质的方法 | |
| CN113740446A (zh) | 一种头孢克肟及制剂含量降解质量守衡的有关物质分析方法 | |
| CN103336067B (zh) | 一种检测替诺福韦二乙酯含量的高效液相检测方法 | |
| CN113030285B (zh) | 一种多索茶碱中残留2-溴甲基-1,3-二氧戊烷的检测方法 | |
| Palomeque et al. | New automatized method with amperometric detection for the determination of azithromycin | |
| CN114965754B (zh) | 对乙酰氨基酚片中有关物质及抑菌剂的检测方法 | |
| CN108645925B (zh) | 一种通过高效液相检测桂美辛相关产品中有关物质的方法 | |
| CN108072710A (zh) | 一种依达拉奉氯化钠注射液有关物质检测方法 | |
| CN103163232B (zh) | 一种来那度胺及其制剂的含量测定和杂质测定的方法 | |
| CN103063794B (zh) | 一种依帕司他片的含量检测控制方法 | |
| CN105606741A (zh) | 一种替格瑞洛的有关物质的含量检测方法 | |
| CN107422055A (zh) | 一种利培酮原料或制剂中杂质的检测方法 | |
| CN111721855B (zh) | 一种含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和琥珀酸多西拉敏的药物制剂有关物质的测定方法 | |
| CN108037221B (zh) | 用液相色谱法同时分离测定复方氨基酸注射液18aa中蛋氨酸亚砜和蛋氨酸砜杂质的方法 | |
| CN111351867B (zh) | 一种测定鲁比前列酮供试品有关物质的分析方法 | |
| CN106855542B (zh) | 高效液相色谱检测美他多辛有关物质的方法 | |
| CN112379006A (zh) | 一种托吡司特片中杂质c、杂质d和杂质e的检测方法 | |
| CN114544842A (zh) | 一种伏立康唑中n-溴代丁二酰亚胺的检验方法 | |
| CN112067709A (zh) | 注射用头孢地嗪钠有关物质的测定方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |